АНТИТЕЛА К C10ORF54 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК C07K16/28 A61K39/395 A61P35/00 G01N33/53 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Эта заявка утверждает приоритет по предварительной заявке Соединенных Штатов Америки №62/090880, поданной 11 декабря 2014 года, содержание которой включено в данное описание посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение в целом касается антител к C10orf54, в том числе конъюгатов антитело-лекарственное средство, содержащих данные антитела, и способов их применения.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

C10orf54 (белок, кодируемый геном из открытой рамки считывания 54 на хромосоме 10) представляет собой один раз пересекающий мембрану трансмембранный белок I типа, который состоит из 311 аминокислот и включает в себя сигнальную последовательность и один IgV-подобный домен в своей располагающейся внутри клетки области. Он является потенциальным представителем В7 семейства белков и имеет приблизительно 24% идентичности последовательности с B7-H1/PD-L1 (Flajnik et al., Immunogenetic, 64: 571-590 (2012)). Мышиный ортолог C10orf54 известен как супрессор активации Т-клеток, содержащий V-область иммуноглобулинов (VISTA; также известный как PD-L3). VISTA клонировали из библиотеки CD4-положительных регуляторных Т-клеток (T_reg) (Wang et al., JEM, 208(3): 577-592 (2011)). VISTA экспрессируется главным образом на гематопоэтических клетках, и экспрессия VISTA в высокой степени регулируется на миелоидных антигенпредставляющих клетках (АРС) и Т-клетках (Wang и др., выше).

По всей видимости, VISTA обладает функциональными активностями, которые не дублируются другими представителями Ig суперсемейства, и может играть роль в развитии аутоиммунной реакции и иммунного надзора при раке. Например, показано, что экспрессия слитого белка VISTA-Ig ингибирует пролиферацию Т-клеток и выработку цитокинов in vitro, а сверхэкспрессия VISTA на опухолевых клетках МСА105 препятствует защитному противоопухолевому иммунитету хозяина (Wang и др., выше). Кроме того, введение VISTA-специфичного моноклонального антитела (mAb) способствовало усилению CD4-положительного Т-клеточного ответа in vivo и развитию аутоиммунной реакции (Wang и др., выше). Также показано, что монокпональные антитела к C10orf54 предотвращают развитие острой формы болезни "трансплантат-против-хозяина" у мышей (Flies et al., J. Immunology, 187(4): 1537-1541 (2011)).

Цитирование или обсуждение ссылки в данном описании не следует трактовать как признание того, что это есть предшествующий уровень для настоящего изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно настоящему изобретению предложены антитела, которые связываются с C10orf54, в том числе гуманизированные антитела и конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие данные гуманизированные антитела, и способы применения антител и конъюгатов антитело-лекарственное средство, в том числе для диагностики и лечения злокачественных новообразований. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены белки, которые связываются с C10orf54, включая связывающие белки, такие как антитела, которые связываются с одним или более белками C10orf54 или химерными белками. Такими связывающими белками, включая антитела, могут быть антагонисты (например, которые ингибируют одну или более биологических активностей C10orf54).

Согласно первому аспекту в данной заявке предложены антитела, которые связываются с C10orf54, в том числе с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54, совместно обозначаемые в данном описании как антитела к C10orf54. Кроме того, в данной заявке предложены антитела к C10orf54, которые конъюгированы с лекарственными средствами в виде конъюгатов антитело-лекарственное средство (ADC), включая ADC формулы A-L-СТХ, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, а СТХ представляет собой цитотоксин. В некоторых воплощениях антитела к C10orf54 представляют собой гуманизированные антитела, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. В определенных воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH-домен (вариабельный домен тяжелой цепи), VL-домен (вариабельный домен легкой цепи), VH CDR1 (определяющий комплементарность участок 1), VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), или его гуманизированного варианта. В определенных воплощениях антитело к C10orf54 может дополнительно содержать VH FR1 (каркасная область 1), VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из аминокислотной последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека или его варианта.

В определенных воплощениях данное антитело содержит меньше шести CDR. В некоторых воплощениях данное антитело содержит один, два, три, четыре или пять либо состоит из одного, двух, трех, четырех или пяти CDR, выбранных из группы, состоящей из VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3. В конкретных воплощениях данное антитело содержит один, два, три, четыре или пять либо состоит из одного, двух, трех, четырех или пяти CDR, выбранных из группы, состоящей из VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), или его гуманизированного варианта. В конкретных воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из аминокислотной последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека или его варианта.

В конкретных воплощениях антитело представляет собой гуманизированное антитело, монокпональное антитело, рекомбинантное антитело, антигенсвязывающий фрагмент или любую их комбинацию. В конкретных воплощениях антитело представляет собой гуманизированное монокпональное антитело, которое описано в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с полипептидом C10orf54 (например, экспрессируемым на клеточной поверхности или растворимым C10orf54), фрагментом C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Согласно второму аспекту в данной заявке предложены антитела, в том числе гуманизированные антитела, (1) которые конкурентно блокируют (например, дозозависимым образом) связывание антитела к C10orf54, предложенного в данной заявке, с полипептидом C10orf54 (например, экспрессируемым на клеточной поверхности или растворимым C10orf54), фрагментом C10orf54 или эпитопом C10orf54, и/или (2) которые связываются с эпитопом C10orf54, который связывается с антителом к C10orf54 (например, с гуманизированными антителами к C10orf54), предложенным в данной заявке. В других воплощениях данное антитело конкурентно блокирует связывание (например, дозозависимым образом) монокпонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), или его гуманизированного варианта с полипептидом C10orf54 (например, экспрессируемым на клеточной поверхности или растворимым C10orf54), фрагментом C10orf54 или эпитопом C10orf54. В других воплощениях данное антитело связывается с эпитопом C10orf54, который связывается с (например, распознается) моноклональным антителом 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанным в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), или его гуманизированным вариантом (например, с гуманизированными антителами к C10orf54).

В определенных воплощениях антитела к C10orf54 (например, гуманизированные антитела к C10orf54), предложенные в данной заявке (например, антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), конъюгированы или слиты рекомбинантным методом с диагностическим агентом, детектируемым агентом или терапевтическим агентом. Согласно некоторым аспектам, терапевтическим агентом является химиотерапевтический агент (например, цитотоксический агент, такой как цитотоксин). Согласно некоторым аспектам, детектируемым агентом является радиоактивный изотоп, фермент, флуоресцентное соединение, биолюминесцентное соединение или хемилюминесцентное соединение. В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), конъюгированы с лекарственными средствами в виде конъюгатов антитело-лекарственное средство (ADC). Согласно некоторым аспектам, конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC) имеет формулу A-L-СТХ, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, а СТХ представляет собой цитотоксин.

В определенных воплощениях предложены композиции, содержащие антитело к C10orf54 (например, гуманизированные антитела к C10orf54), описанное в данной заявке. В некоторых воплощениях данные композиции содержат конъюгат антитело-лекарственное средство, причем данное антитело представляет собой антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3). Кроме того, в данной заявке предложены фармацевтические композиции, содержащие антитело к C10orf54, включая гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3).

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC10 (SEQ ID NO: 1251), и не связывается со второй группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) и CC9 (SEQ ID NO: 1250).

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246) и CC8 (SEQ ID NO: 1249), и не связывается со второй группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). В некоторых аспектах такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109 и 1115.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245) и CCS (SEQ ID NO: 1246), и не связывается со второй группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC8 (SEQ ID NO: 1249), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091 и 1097.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC9 (SEQ ID NO: 1250), и не связывается со второй группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных какСС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127 и 1133.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC9 (SEQ ID NO: 1250), и не связывается со второй группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) и CC10 (SEQ ID NO: 1251).

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC10 (SEQ ID NO: 1251), и не связывается со второй группой белков C10orf54 или химерных белков, обозначенных какСС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251).

Согласно третьему аспекту в данной заявке предложены молекулы выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующие VH-цепь, VL-цепь, VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 антител к C10orf54, которые описаны в данной заявке (например, антител 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанных в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащих VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), в том числе гуманизированных антител к C10orf54, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. В определенных воплощениях молекула нуклеиновой кислоты кодирует VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 монокпонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33) или его гуманизированного варианта. В определенных воплощениях молекула нуклеиновой кислоты дополнительно кодирует VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из аминокислотной последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека или его варианта. Кроме того, в данной заявке предложены векторы и клетки хозяина, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитело к C10orf54 (например, гуманизированные антитела к C10orf54), а также способы получения антитела к C10orf54 путем культивирования клеток хозяина, предложенных в данной заявке, в условиях, которые способствуют продуцированию антитела к C10orf54.

Согласно четвертому аспекту в данной заявке предложены способы лечения, предупреждения или облегчения заболевания, расстройства или состояния, в том числе одного или более симптомов заболевания, расстройства или состояния, включающие введение терапевтически эффективного количества антитела к C10orf54, которое описано в данной заявке (например, антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащего VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), в том числе конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), содержащего антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), субъекту, в результате чего осуществляется лечение, предупреждение или облегчение заболевания, расстройства или состояния, в том числе одного или более симптомов заболевания, расстройства или состояния. В некоторых воплощениях антитела к C10orf54 представляют собой гуманизированные антитела, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. В одном из воплощений заболевание, расстройство или состояние вызывается или иным образом ассоциируется с C10orf54, в том числе вызывается или ассоциируется с C10orf54-экспрессирующими клетками (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)). В определенных воплощениях заболевание представляет собой рак, такой как лейкоз, рак мочевого пузыря, рак кожи, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак печени, рак почки, рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак пищевода или фибросаркому. В одном из воплощений лейкоз представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML). В других воплощениях заболевание представляет собой болезнь "трансплантат-против-хозяина" (GVHD). Дополнительные предложенные способы включают применение антитела к C10orf54, обладающего C10orf54-связывающей активностью, в случае C10orf54-экспрессирующих клеток, предложенного в данной заявке (например, антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащего VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), например, в виде неконъюгированного антитела или конъюгированного антитела (ADC), в том числе для ингибирования и/или уничтожения C10orf54-экспрессирующих клеток (например, с противоопухолевой активностью для опосредования противоопухолевого эффекта). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, в том числе ADC, содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3) ингибируют C10orf54-опосредуемую супрессорную активность в отношении Т-клеток (например, позволяя осуществлять эффективный противоопухолевый иммунный ответ). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки (например, C10orf54-несущие опухолевые клетки, миелоидные супрессорные клетки (MDSC), обладающие супрессивным действием дендритные клетки (обладающие супрессивным действием DC) и/или регуляторные Т-клетки (T_reg)), например, посредством проявления антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). В определенных воплощениях конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC), содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки, в том числе путем связывания с клетками, экспрессирующими C10orf54 (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)), например, позволяя осуществлять интернализацию цитотоксического лекарственного средства. В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, или конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC), содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, используют в способах лечения раковых заболеваний (например, рака мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, соединительной ткани, ректального рака, рака желудка, пищевода, легкого, гортани, почки, полости рта, яичников или предстательной железы либо саркомы, меланомы, глиомы, лимфомы или лейкоза) или опухолей, ассоциированных с миелоидными супрессорными клетками (MDSC) (например, рака толстой кишки, карциномы молочной железы, фибросаркомы, тимомы, рака легкого, почечноклеточной карциномы, мезотелиомы, глиомы, лимфомы, саркомы, карциномы предстательной железы, саркомы или карциномы головы и шеи). В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Согласно пятому аспекту в данной заявке предложены способы ингибирования роста клеток и/или уничтожения клеток, экспрессирующих C10orf54 на своей поверхности, включающие приведение в контакт клеток с эффективным количеством антитела к C10orf54 или конъюгатов антитело-лекарственное средство, содержащих антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3). В одном из воплощений клетка представляет собой регуляторную Т-клетку (например, CD4⁺ Foxp3⁺ регуляторную Т-клетку). В определенных воплощениях согласно данному изобретению предложен способ ингибирования роста опухоли с воспалением у субъекта, включающий введение эффективного количества антител к C10orf54, в том числе ADC, содержащих антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3). В других воплощениях клетка представляет собой миелоидную супрессорную клетку (например, CD11b⁺ или CD11b^high миелоидную супрессорную клетку) или обладающую супрессивным действием дендритную клетку (например, CD11b⁺ или CD11b^high дендритную клетку). В других воплощениях клетка представляет собой раковую или предраковую клетку. Дополнительные предложенные способы включают применение антитела к C10orf54, обладающего C10orf54-связывающей активностью, в случае C10orf54-экспрессирующих клеток, предложенного в данной заявке (например, антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащего VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), например, в виде неконъюгированного антитела или конъюгированного антитела (ADC), в том числе для ингибирования и/или уничтожения C10orf54-экспрессирующих клеток (например, с противоопухолевой активностью для опосредования противоопухолевого эффекта). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, в том числе ADC, содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), ингибируют C10orf54-опосредуемую супрессорную активность в отношении Т-клеток (например, позволяя осуществлять эффективный противоопухолевый иммунный ответ). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки (например, C10orf54-несущие опухолевые клетки, миелоидные супрессорные клетки (MDSC), обладающие супрессивным действием дендритные клетки (обладающие супрессивным действием DC) и/или регуляторные Т-клетки (T_reg)), например, посредством проявления антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). В определенных воплощениях конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC), содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанные в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки, в том числе путем связывания с клетками, экспрессирующими C10orf54 (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)), например, позволяя осуществлять интернализацию цитотоксического лекарственного средства. В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Согласно шестому аспекту в данной заявке предложены способы модулирования иммунного ответа у субъекта, включающие введение эффективного количества антитела к C10orf54 (например, гуманизированного антитела к C10orf54), предложенного в данной заявке (например, антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащего VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), субъекту. В одном из воплощений модулирование включает в себя усиление активации Т-клеток. В другом воплощении модулирование включает в себя усиление пролиферации Т-клеток. В другом воплощении модулирование включает в себя усиление продуцирования цитокинов.

Согласно седьмому аспекту в данной заявке предложены способы детекции C10orf54 в образце, включающие приведение в контакт данного образца с антителом к C10orf54 (например, гуманизированным антителом к C10orf54), предложенным в данной заявке (например, антителом 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанным в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащим VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), таким как антитело, которое содержит детектируемый агент. В определенных воплощениях образец содержит клетку, экспрессирующую C10orf54 на своей поверхности.

Согласно восьмому аспекту в данной заявке предложены способы лечения раковых заболеваний, включающие введение субъекту антитела к C10orf54 (например, гуманизированного антитела к C10orf54) или конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), содержащего антитело к C10orf54 (например, ADC формулы A-L-CTX, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, и СТХ представляет собой цитотоксический агент), предложенного в данной заявке (например, антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащего VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), в терапевтически эффективном количестве, в том числе в количестве, эффективном для уничтожения C10orf54-экспрессирующей клетки (например, опухолевой клетки, миелоидной супрессорной клетки (MDSC), обладающей супрессивным действием дендритной клетки (обладающей супрессивным действием DC) и/или регуляторной Т-клетки (T_reg)). В некоторых воплощениях рак представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML). В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Согласно девятому аспекту в данной заявке предложены способы уничтожения C10orf54-экспрессирующих клеток (например, опухолевых клеток, миелоидных супрессорных клеток (MDSC), обладающих супрессивным действием дендритных клеток (обладающих супрессивным действием DC) и/или регуляторных Т-клеток (T_reg)), включающие приведение в контакт С10огт54-экспрессирующей клетки (например, опухолевой клетки, миелоидной супрессорной клетки (MDSC), обладающей супрессивным действием дендритной клетки (обладающей супрессивным действием DC) и/или регуляторной Т-клетки (T_reg)) с антителом к C10orf54 или конъюгатом антитело-лекарственное средство (ADC), содержащим антитело к C10orf54 (например, ADC формулы A-L-CTX, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, и СТХ представляет собой цитотоксический агент), предложенным в данной заявке (например, антителом 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанным в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащим VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), в количестве, эффективном для уничтожения данной клетки (например, опухолевой клетки, миелоидной супрессорной клетки (MDSC), обладающей супрессивным действием дендритной клетки (обладающей супрессивным действием DC) и/или регуляторной Т-клетки (T_reg)). В некоторых воплощениях опухолевая клетка представляет собой AML-клетку. В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3), которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Согласно десятому аспекту в данной заявке предложен набор, содержащий антитело к C10orf54 (например, гуманизированное антитело к C10orf54), которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54, предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3). В некоторых воплощениях наборы содержат конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), при этом антитело представляет собой антитело к C10orf54 (например, гуманизированное антитело к C10orf54), предложенное в данной заявке (например, 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанное в данной заявке (например, в Таблицах 12-33), содержащее VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3).

ТЕРМИНОЛОГИЯ

Если не определено иное, то все технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют то же значение, которое обычно понимается средним специалистом в данной области техники. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае, когда существует множество определений для применяемого в данном описании термина, преимущественную силу имеют те, которые приведены в этом разделе, если не указано иное.

Термин "примерно" или "приблизительно" означает нахождение в пределах 20%, например, в пределах 10% или в пределах 5% (или 1% или меньше) от данной величины или диапазона.

Использованный в данном описании термин "вводить" или "введение" относится к акту инъекции или иной физической доставки вещества, которое находится вне организма (например, предложенного в данном изобретении антитела к C10orf54), пациенту, такой как мукозальная, интрадермальная, внутривенная, внутримышечная доставка, и/или любому другому методу физической доставки, изложенному в данном описании или известному в данной области техники. Когда заболевание или его симптом подвергают лечению, введение вещества обычно осуществляют после начала заболевания или начала проявления его симптомов. При предупреждении заболевания или его симптомов введение вещества обычно осуществляют перед началом заболевания или началом проявления его симптомов.

Использованный в данном описании термин "агонист" C10orf54 относится к молекуле, которая способна активировать или иным образом усиливать одну или более биологических активностей C10orf54, например, в клетке, экспрессирующей C10orf54, или в клетке, экспрессирующей лиганд C10orf54, такой как рецептор C10orf54. В некоторых воплощениях агонист C10orf54 (например, агонистическое антитело, предложенное в данной заявке) может действовать, например, активируя или иным образом усиливая активацию и/или клеточные сигнальные пути клетки, экспрессирующей C10orf54 или рецептор C10orf54, тем самым усиливая C10orf54-опосредуемую биологическую активность данной клетки по сравнению с C10orf54-опосредуемой биологической активностью в отсутствие агониста. В определенных воплощениях,антитела, предложенные в данной заявке, представляют собой агонистические антитела к C10orf54.

Термин "алкил", использованный в данном описании, означает прямой, разветвленный или циклический (в этом случае он также будет известен как "циклоалкил") углеводород, содержащий 1-10 атомов углерода. Примеры алкила включают, но не ограничиваются этим, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, 3-метилгексил, 2,2-диметилпентил, 2,3-диметилгексил, н-гептил, н-октил, н-нонил и н-децил. В определенных воплощениях алкильные группы возможно замещены.

Термин "С₁-₆алкил", использованный в данном описании, означает прямой, разветвленный или циклический (в этом случае он также будет известен как "циклоалкил") углеводород, содержащий 1-6 атомов углерода.

Термин "С₁-₃алкил", использованный в данном описании, означает прямой или разветвленный углеводород, содержащий 1-3 атома углерода.

Термин "алкенил", использованный в данном описании, означает прямой, разветвленный или циклический (в этом случае он также будет известен как "циклоалкенил") углеводород, содержащий 2-10 атомов углерода и содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, образуемую в результате удаления двух атомов водорода. В некоторых воплощениях, в зависимости от структуры, алкенильная группа представляет собой монорадикал или дирадикал (например, алкениленовую группу). В некоторых воплощениях алкенильные группы возможно замещены. Примеры алкенила включают, но не ограничиваются этим, этенил, 2-пропенил, 2-метил-2-пропенил, 3-бутенил, 4-пентенил, 5-гексенил, 2-гептенил и 2-метил-1-гептенил. В определенных воплощениях алкенильные группы возможно замещены.

Термин "С₂-₆алкенил", использованный в данном описании, означает прямой, разветвленный или циклический (в этом случае он также будет известен как "циклоалкил") углеводород, содержащий 2-6 атомов углерода и по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, образуемую в результате удаления двух атомов водорода.

Термин "алкокси", использованный в данном описании, означает алкильную группу, которая определена в данном описании, присоединенную к основной молекулярной группировке через атом кислорода. Примеры алкокси включают, но не ограничиваются этим, метокси, этокси, пропокси, 2-пропокси, бутокси, трет-бутокси, пентилокси и гексилокси.

"Аминокислота" (или АА) или аминокислотный остаток включает, но не ограничивается этим, 20 природных аминокислот, обычно обозначаемых трехбуквенными символами, а также включает 4-гидроксипролин, гидроксилизин, десмозин, изодесмозин, 3-метилгистидин, норвалин, бета-аланин, гамма-аминомасляную кислоту, гомоцистеин, гомосерин, орнитин и метионинсульфон. "Аминокислотный остаток", согласно настоящей заявке, также включает соответствующие N-метиламинокислоты, такие как -N(CH₃)CH₂C(O)O-, -NHC(O)CH₂CH₂CH(NHCH₃)C(O)O- и т.д. Аминокислоты, дипептиды, трипептиды, олигомеры и полипептиды, обозначаемые согласно настоящей заявке как -(АА)_r-, могут включать соответствующие не-N-алкилированные аминокислоты и пептиды (как например, не-N-метилированные аминокислоты в пептидах), а также смесь не-N-алкилированных аминокислот и N-алкилированных аминокислот пептидов.

"Конъюгат, антитело-лекарственное средство" или "ADC" представляет собой антитело, которое конъюгировано с одним или более цитотоксинами через один или более линкеров. Конъюгат, антитело-лекарственное средство (ADC) может иметь формулу A-L-CTX, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, а СТХ представляет собой цитотоксин.

В контексте полипептида термин "аналог", использованный в данном описании, относится к полипептиду, который обладает функцией, аналогичной или идентичной функции полипептида C10orf54, фрагмента полипептида C10orf54 или антитела к C10orf54, но не обязательно содержит последовательность, аналогичную или идентичную аминокислотной последовательности полипептида C10orf54, фрагмента полипептида C10orf54 или антитела к C10orf54, либо не обязательно обладает структурой, аналогичной или идентичной структуре полипептида C10orf54, фрагмента полипептида C10orf54 или антитела к C10orf54. Полипептид, имеющий аналогичную аминокислотную последовательность, относится к полипептиду, который удовлетворяет по меньшей мере одному из приведенного ниже: (а) полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности полипептида C10orf54 (например, SEQ ID NO: 1079), фрагмента полипептида C10orf54 или антитела к C10orf54, описанного в данной заявке; (b) полипептиду, кодируемому нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью, кодирующей полипептид C10orf54, фрагмент полипептида C10orf54 или антитело к C10orf54 (или его VH-или VL-область), описанные в данной заявке и состоящие по меньшей мере из 5 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 10 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 15 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 20 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 25 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 40 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 50 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 60 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 70 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 80 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 90 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 100 аминокислотных остатков, по меньшей мере из 125 аминокислотных остатков или по меньшей мере из 150 аминокислотных остатков (см., например Sambrook et al, (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Maniatis et al, (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY); и (с) полипептиду, кодируемому нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентична нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид C10orf54, фрагмент полипептида C10orf54 или антитело к C10orf54 (или его VH- или VL-область), описанные в данной заявке. Полипептид со структурой, аналогичной структуре полипептида C10orf54, фрагмента полипептида C10orf54 или антитела к C10orf54, описанного в данной заявке, относится к полипептиду, который имеет вторичную, третичную или четвертичную структуру, аналогичную таковой полипептида C10orf54, фрагмента C10orf54 или антитела к C10orf54, описанного в данной заявке. Структура полипептида может быть определена методами, известными специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь этим, рентгеноструктурную кристаллографию, ядерный магнитный резонанс иэлектронную микроскопию кристаллографических образцов.

Использованный в данном описании термин "антагонист" или "ингибитор" C10orf54 относится к молекуле, которая способна ингибировать или иным образом уменьшать одну или более биологических активностей C10orf54, например, в клетке, экспрессирующей C10orf54, или в клетке, экспрессирующей лиганд C10orf54, такой как рецептор C10orf54. В некоторых воплощениях антагонист C10orf54 (например, антагонистическое антитело, предложенное в данной заявке) может действовать, например, ингибируя или иным образом ослабляя активацию и/или клеточные сигнальные пути в клетке, экспрессирующей C10orf54 или рецептор C10orf54, тем самым ингибируя C10orf54-опосредуемую биологическую активность клетки по сравнению с C10orf54-опосредуемой биологической активностью в отсутствие антагониста. В определенных воплощениях, антитела, предложенные в данной заявке, представляют собой антагонистические антитела к C10orf54.

Термины "антитело" и "иммуноглобулин" или "Ig" в данном описании используются взаимозаменяемо, и подразумевается, что они включают в себя полипептидный продукт В-клеток, принадлежащий к полипептидам класса иммуноглобулинов, который способен связываться со специфическим молекулярным антигеном и состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, при этом каждая пара имеет одну тяжелую цепь (примерно 50-70 килодальтон (кДа)) и одну легкую цепь (примерно 25 кДа), и каждая амино-концевая часть каждой цепи включает вариабельную область, содержащую от примерно 100 до примерно 130 или более аминокислот, а каждая карбокси-концевая часть каждой цепи включает константную область (см. Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering. Second Ed., Oxford University Press.; Kuby (1997) Immunology. Third Ed., W.H. Freeman and Company, New York). В конкретных воплощениях специфический молекулярный антиген, который может связываться с антителом, предложенным в данной заявке, включает целевой полипептид, фрагмент или эпитоп C10orf54.

Антитела также включают, но не ограничиваются этим, синтетические антитела, моноклональные антитела, полученные рекомбинантным путем антитела, мультиспецифичные антитела (включая биспецифичные антитела), человеческие антитела, гуманизированные антитела, верблюжьи антитела, химерные антитела, интраантитела, антиидиотипические (anti-Id) антитела и функциональные фрагменты любого из перечисленного выше, которые относятся к части полипептида тяжелой или легкой цепи антитела, сохраняющей некоторую долю связывающей активности или всю связывающую активность антитела, из которого данный фрагмент был получен. Неограничивающие примеры функциональных фрагментов включают одноцепочечные Fv (scFv) (в том числе, например, моноспецифичные, биспецифичные и т.д.), Fab фрагменты, F(ab') фрагменты, F(ab)₂ фрагменты, F(ab')₂ фрагменты, соединенные дисульфидными связями Fv (sdFv), Fd фрагменты, Fv фрагменты, диатело, триотело, тетратело и миниантитело. В частности, антитела, предложенные в данной заявке, включают молекулы иммуноглобулинов и иммунологически активные части молекул иммуноглобулинов, например, антигенсвязывающие домены, или молекулы, содержащие антигенсвязывающий сайт, который связывается с антигеном C10orf54 (например, содержащие один или более определяющих комплементарность участков (CDR) антитела к C10orf54). Описание таких фрагментов антител можно найти, например, в Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (ed.), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178: 497-515 (1989) и в Day E.D., Advanced Immunochemistrv, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990). Антитела, предложенные в данной заявке, могут представлять собой молекулы иммуноглобулина любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и IgY), любого класса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или любого подкласса (например, IgG2a и IgG2b). Антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, могут представлять собой агонистические антитела или антагонистические антитела.

Термины "антитела, которые специфически связываются с C10orf54", "антитела, которые специфически связываются с эпитопом C10orf54", "антитела к C10orf54" и аналогичные термины также используются взаимозаменяемо в данном описании и относятся к антителам, которые специфически связываются с полипептидом C10orf54, например, антигеном или эпитопом C10orf54. Такие антитела включают гуманизированные антитела. Антитело, которое специфически связывается с антигеном C10orf54, может перекрестно взаимодействовать с родственными антигенами. В определенных воплощениях антитело, которое специфически связывается с антигеном C10orf54, не взаимодействует перекрестно с другими антигенами. Антитело, которое специфически связывается с антигеном C10orf54, может быть идентифицировано, например, с применением иммуноанализов, BIAcore или других методов, известных специалистам в данной области техники. Антитело связывается специфически с антигеном C10orf54 в том случае, когда оно связывается с антигеном C10orf54 с более высокой аффинностью, чем с любым перекрестно взаимодействующим антигеном, как определено с использованием экспериментальных методов, таких как радиоиммуноанализы (RIA) и иммуноферментные твердофазные анализы (ELISA). Обычно, сигнал при специфическом или избирательном взаимодействии будет по меньшей мере в два раза превышать фоновый сигнал или шум, а в более типичном случае превышать фон более чем в 10 раз. См., например, Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology, Second Edition, Raven Press, New York, на страницах 332-336 в качестве обсуждения, касающегося специфичности антител. В определенных воплощениях антителом, "которое связывается с" представляющим интерес антигеном, является антитело, которое связывается с антигеном с аффинностью, достаточной для того, чтобы данное антитело было полезным в качестве диагностического и/или терапевтического агента для направленного воздействия на клетку или ткань, экспрессирующую данный антиген, и не взаимодействовало перекрестно в значительной степени с другими белками. В таких воплощениях степень связывания антитела с "не являющимся мишенью" белком будет составлять менее чем примерно 10% от связывания данного антитела со своим особым белком-мишенью, как определено в анализе с применением сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS) или радиоиммунопреципитации (RIA). Что касается связывания антитела с молекулой-мишенью, то термин "специфическое связывание", или "специфически связывается с" конкретным полипептидом или эпитопом либо является "специфичным к" конкретному полипептиду или эпитопу на конкретном полипептиде-мишени означает связывание, которое при измерении отличается от неспецифического взаимодействия. Специфическое связывание может быть измерено, например, посредством определения связывания молекулы в сравнении со связыванием контрольной молекулы, которая, как правило, представляет собой молекулу аналогичной структуры, не обладающую связывающей активностью. Например, специфическое связывание может быть определено с использованием конкуренции с контрольной молекулой, которая аналогична мишени, например, в присутствии избытка немеченой мишени. В этом случае указанием на специфическое связывание служит тот факт, что связывание меченой мишени с зондом конкурентно ингибируется избытком немеченой мишени. Термин "специфическое связывание" или "специфически связывается с" конкретным полипептидом или эпитопом либо является "специфичным к" конкретному полипептиду или эпитопу на конкретном полипептиде-мишени, использованный в данном описании, может быть применен, например, к молекуле, имеющей Kd в отношении мишени, составляющую по меньшей мере примерно 10^-4 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-5 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-6 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-7 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-8 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-9 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-10 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-11 М, альтернативно, по меньшей мере примерно 10^-12 М или меньше. В одном из воплощений термин "специфическое связывание" относится к связыванию, когда молекула связывается с конкретным полипептидом или эпитопом конкретного полипептида по существу без связывания с каким-либо другим полипептидом или эпитопом полипептида. В определенных воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54, имеет константу диссоциации (Kd), составляющую не более 1 мкМ, не более 100 нМ, не более 10 нМ, не более 1 нМ или не более 0,1 нМ. В определенных воплощениях антитело к C10orf54 связывается с эпитопом C10orf54, который является консервативным среди C10orf54 из разных видов.

Термин "антитело к C10orf54" или "антитело, которое связывается с C10orf54", относится к антителу, способному связываться с C10orf54, включая, например, антитело с аффинностью, достаточной для того, чтобы данное антитело было полезным в качестве диагностического и/или терапевтического агента при направленном воздействии на C10orf54. Такие антитела включают гуманизированные антитела. Предпочтительно, степень связывания антитела к C10orf54 с неродственным, не являющимся C10orf54 белком, составляет менее чем примерно 10% от связывания антитела с C10orf54 по результатам измерений, например, в анализе с применением сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS) или посредством радиоиммуноанализа (RIA). Определение антитела, которое "специфически связывается с" или является "специфичным к" C10orf54, приведено выше. В определенных воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54, имеет константу диссоциации (Kd), составляющую меньше 1 мкМ, меньше 100 нМ, меньше 10 нМ, меньше 1 нМ или меньше 0,1 нМ. В определенных воплощениях антитело к C10orf54 связывается с эпитопом C10orf54, который является консервативным среди C10orf54 из разных видов.

Термин "антиген" относится к предварительно определенному антигену, с которым может избирательно связываться антитело. Антигеном-мишенью может быть полипептид, углевод, нуклеиновая кислота, липид, гаптен или другое природное или синтетическое соединение. В конкретных воплощениях антигеном-мишенью является полипептид.

Термин "антигенсвязывающий фрагмент", "антигенсвязывающий домен", "антигенсвязывающий участок" и аналогичные термины относит(ят)ся к той части антитела, которая содержит аминокислотные остатки, взаимодействующие с антигеном и придающие связывающемуся агенту свойственную ему специфичность и аффинность к данному антигену (например, к определяющим комплементарность участкам (CDR)).

Термины "связывается" или "связывание", использованные в данном описании, относятся к взаимодействию между молекулами с образованием комплекса. Взаимодействиями могут быть, например, нековалентные взаимодействия, включая водородные связи, ионные связи, гидрофобные взаимодействия и/или ван-дер-Ваальсовы взаимодействия. Комплекс также может образовываться в результате связывания двух или более молекул, удерживаемых вместе ковалентными или не ко валентны ми связями, взаимодействиями или силами. Прочность всех нековалентных взаимодействий между одним антигенсвязывающим сайтом на антителе и одним эпитопом на молекуле-мишени, такой как C10orf54, представляет собой аффинность антитела или функционального фрагмента к этому эпитопу. Отношение константы скорости ассоциации (k₁) к константе скорости диссоциации (k_-1) антитела с одновалентным антигеном (k₁/k_-1) представляет собой константу ассоциации K, которая является мерой аффинности. Значение K варьирует для разных комплексов антитела и антигена и зависит от обеих констант k₁ и k_-1. Константу ассоциации K для антитела, предложенного в данной заявке, можно определить, используя любой метод, приведенный в данном описании, или любой другой метод, хорошо известный специалистам в данной области техники. Аффинность по одному сайту связывания не всегда отражает истинную силу взаимодействия между антителом и антигеном. Когда сложные антигены, содержащие множественные, повторяющиеся антигенные детерминанты, как например, поливалентный C10orf54, приходят в контакт с антителами, содержащими множественные сайты связывания, взаимодействие антитела с антигеном в одном сайте будет увеличивать вероятность взаимодействия во втором сайте. Сила таких множественных взаимодействий между мультивалентным антителом и антигеном называется авидностью. Авидность антитела может представлять собой более подходящую меру его связывающей способности, чем аффинность его отдельных сайтов связывания. Например, высокая авидность может компенсировать низкую аффинность, как это иногда наблюдается для пентамерных антител IgM, которые могут иметь более низкую аффинность, чем IgG, но более высокая авидность IgM, являющаяся результатом их мультивалентности, позволяет им эффективно связываться с антигеном.

Термин "C10orf54" или "полипептид C10orf54" и аналогичные термины относятся к полипептиду ("полипептид", "пептид" и "белок" используются в данном описании взаимозаменяемо), кодируемому геном из открытой рамки считывания 54 на хромосоме 10 человека (C10orf54), который также известен в данной области техники как В7-Н5, тромбоцитарный рецептор Gi24, GI24, стресс-индуцируемый секретируемый белок 1, SISP1, и РР2135, содержащий аминокислотную последовательность:

и родственным полипептидам, включая их SNP(однонуклеотидный полиморфизм)-варианты. Показано или предполагается, что полипептид C10orf54 содержит несколько различных областей в пределах аминокислотной последовательности, включая: сигнальную последовательность (остатки 1-32; см. Zhang et al., Protein Sci., 13: 2819-2824 (2004)); иммуноглобулиновый домен - IgV-подобный (остатки 33-162); и трансмембранный участок (остатки 195-215). Зрелый белок C10orf54 включает аминокислотные остатки 33-311 из SEQ ID NO: 1079. Внеклеточный домен белка C10orf54 включает аминокислотные остатки 33-194 из SEQ ID NO: 1079. Родственные полипептиды включают аллельные варианты (например, SNP-варианты); сплайс-варианты; фрагменты; производные; варианты с заменами, делециями и вставками; слитые полипептиды (например, химерные белки); и межвидовые гомологи, предпочтительно те, которые сохраняют активность C10orf54 и/или являются достаточными для генерации иммунного ответа на C10orf54. Как будет очевидно специалистам в данной области техники, антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, может связываться с полипептидом, фрагментом полипептида, антигеном и/или эпитопом C10orf54, поскольку эпитоп представляет собой часть антигена большего размера, являющегося частью полипептидного фрагмента большего размера, который, в свою очередь, представляет собой часть полипептида большего размера. C10orf54 может находиться в нативной или денатурированной форме. Полипептиды C10orf54, описанные в данной заявке, могут быть выделены из различных источников, например, из человеческих тканей разных типов или из другого источника, либо получены рекомбинантными методами или методами синтеза. "Полипептид C10orf54 с нативной последовательностью" представляет собой полипептид, имеющий ту же аминокислотную последовательность, что и соответствующий полипептид C10orf54 природного происхождения. Такие полипептиды C10orf54 с нативной последовательностью могут быть выделены из природных источников или могут быть получены рекомбинантными методами или методами синтеза. Термин "полипептид C10orf54 с нативной последовательностью", в частности, охватывает природные укороченные или секретируемые формы конкретного полипептида C10orf54 (например, последовательность внеклеточного домена), формы природных вариантов (например, формы, образовавшиеся в результате альтернативного сплайсинга) и природные аллельные варианты данного полипептида.

Нуклеиновокислотная последовательность кДНК, кодирующая полипептид C10orf54, содержит:

Ортологи полипептида C10orf54 также хорошо известны в данной области техники. Например, мышиный ортолог полипептида C10orf54 представляет собой супрессор активации Т-клеток, содержащий V-область иммуноглобулинов (VISTA) (также известный как PD-L3, PD-1H, PD-XL, Pro1412 и UNQ730), последовательность которого приблизительно на 70% идентична последовательности данного полипептида у человека. Ортологи C10orf54 также можно найти среди других организмов, включая шимпанзе, корову, крысу и данио.

Выражение "C10orf54-экспрессирующая клетка", "клетка, обладающая экспрессией C10orf54" или его грамматический эквивалент относится к клетке, которая экспрессирует эндогенный или трансфицированный C10orf54 на клеточной поверхности. C10orf54-экспрессирующие клетки включают C10orf54-несущие опухолевые клетки, регуляторные опухолевые клетки (например, CD4⁺ Foxp3⁺ регуляторные Т-клетки), миелоидные супрессорные клетки (например, CD11b⁺ или CD11b^high миелоидные супрессорные клетки) и/или обладающие супрессивным действием дендритные клетки (например, CD11b⁺ или CD11b^high дендритные клетки). Клетка, экспрессирующая C10orf54, продуцирует на своей поверхности C10orf54 со значительными уровнями, благодаря чему антитело к C10orf54 может с ним связываться. Согласно некоторому аспекту такое связывание может оказывать терапевтический эффект в отношении рака. Клетка, которая "сверхэкспрессирует" C10orf54, представляет собой клетку, имеющую значительно более высокие уровни C10orf54 на своей клеточной поверхности по сравнению с клеткой ткани того же типа, которая, как известно, экспрессирует C10orf54. Такая сверхэкспрессия может быть обусловлена амплификацией гена или усиленной транскрипцией или трансляцией. Сверхэкспрессию C10orf54 можно определить в диагностическом или прогностическом анализе, оценивая повышенные уровни белка C10orf54, присутствующего на поверхности клетки (например, с использованием иммуногистохимического анализа; FACS анализа). Альтернативно или помимо этого, можно измерить уровни кодирующей C10orf54 нуклеиновой кислоты или матричной рибонуклеиновой кислоты (мРНК) в клетке, например, с использованием методик флуоресцентной гибридизации in situ (FISH; см. заявку W098/45479, опубликованную в октябре 1998 года), саузерн-блоттинга, нозерн-блоттинга или полимеразной цепной реакции (ПЦР), такой как количественная ПЦР в режиме реального времени (РВ-ПЦР). Помимо описанных выше анализов квалифицированным практикам доступны различные анализы in vivo. Например, клетки организма пациента можно подвергнуть воздействию антитела, которое может быть помечено детектируемым агентом, и связывание антитела с клетками пациента можно оценить, например, путем внешнего сканирования по радиоактивности или путем анализа биоптата, взятого у пациента, предварительно подвергнутого воздействию антитела. C10orf54-экспрессирующая опухолевая клетка включает, но не ограничивается этим, опухолевые клетки острого миелоидного лейкоза (AML).

Термины "C10orf54-опосредуемое заболевание", "C10orf54-опосредуемое расстройство" и "C10orf54-опосредуемое состояние" используются взаимозаменяемо и относятся к любому заболеванию, расстройству или состоянию, которое полностью или частично вызывается или которое является результатом присутствия C10orf54. Такие заболевания, расстройства или состояния включают таковые, которые вызваны или иным образом ассоциированы с C10orf54, в том числе вызваны C10orf54-экспрессирующими клетками или ассоциированы с ними (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)). В определенных воплощениях C10orf54 аберрантно (например, в высокой степени) экспрессирован на поверхности клетки. В некоторых воплощениях C10orf54 может быть аберрантно активирован на клетках конкретного типа. В других воплощениях нормальная, аберрантная или избыточная передача сигнала в клетках обусловлена связыванием C10orf54 с лигандом C10orf54, который может связываться или иным образом взаимодействовать с C10orf54.

Термины "нарушение клеточной пролиферации" и "пролиферативное расстройство" относятся к расстройствам, которые ассоциированы с некоторым уровнем аномальной пролиферации клеток. В одном из воплощений нарушением клеточной пролиферации является опухоль или рак. Термин "опухоль", использованный в данном описании, относится к любому неопластическому клеточному росту и любой пролиферации, как злокачественной, так и доброкачественной, и любым предраковым и раковым клеткам и тканям. Термины "рак", "раковый", "нарушение клеточной пролиферации", "пролиферативное расстройство" и "опухоль" не являются взаимоисключающими, что указано в данном описании. Термины "рак" и "раковый" относятся к физиологическому состоянию или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым клеточным ростом. Примеры рака включают, но не ограничиваются этим, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфолейкозы. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак (например, плоско клеточный рак эпителиального происхождения), рак легкого, в том числе мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, гепатоклеточный рак, гастрический рак или рак желудка, в том числе рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак полости рта, рак печени, рак мочевого пузыря, рак мочевыводящих путей, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, рак эндометрия или рак матки, рак слюнных желез, рак почки или почечно-клеточный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, печеночную карциному, анальный рак, рак пениса, меланому, множественную миелому и В-кпеточную лимфому, рак головного мозга, рак кожи, рак пищевода, а также рак головы и шеи и связанные с этими видами рака метастазы.

Термин "носитель" относится к разбавителю, адъюванту (например, адъюванту Фрейнда (полному и неполному)), эксципиенту или наполнителю, вместе с которым вводят терапевтическое средство. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, как например, воду и масла, в том числе получаемые из углеводородов жидкости, жидкости животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и тому подобное. Вода представляет собой типичный носитель в случае, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. В качестве жидких носителей также можно использовать солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина, в частности, для инъекционных растворов. Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и тому подобное. При желании, композиция также может содержать незначительные количества увлажняющих или эмульгирующих агентов или поддерживающих рН агентов. Эти композиции могут принимать форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, композиций с длительным высвобождением и тому подобное. Пероральная композиция может включать в себя стандартные носители, такие как маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, натриевая соль сахарина, целлюлоза, карбонат магния и т.д. фармацевтической степени чистоты. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA. Такие композиции будут содержать профилактически или терапевтически эффективное количество антитела, например, в выделенной или очищенной форме, вместе с подходящим количеством носителя с тем, чтобы обеспечить получение формы для надлежащего введения пациенту. Композиция должна соответствовать способу введения.

Термин "химическая группа", использованный в данном описании, относится к двум или более атомам, связанным вместе как единое целое и образующим часть молекулы.

"Химиотерапевтический агент" представляет собой химический агент (например, соединение или лекарственное средство), применимый для лечения рака, независимо от механизма действия. Химиотерапевтические агенты включают соединения, используемые в терапии направленного действия и традиционной химиотерапии. Примеры химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются этим, алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид CYTOXAN®; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метилмеламины, в том числе алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметиломеламин; ацетогенины (в частности, буллатацин и буллатацинон); дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL®); бета-лапахон; лапахол; колхицины; бетулиновую кислоту; камптотецин (в том числе синтетический аналог топотекан (HYCAMTIN®), СРТ-11 (иринотекан, САМ PTOS AR®), ацетил камптотецин, скополектин и 9-аминокамптотецин); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (в том числе его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); подофиллотоксин; подофиллиновую кислоту; тенипозид; криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, в частности, калихеамицин-гамма II и калихеамицин-омега II (см., например, Angew. Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); динемицин, в том числе динемицин А; эсперамицин; а также хромофор неокарциностатина и родственные хромофоры хромопротеинов - энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, ADRIAMYCIN®, доксорубицин (в том числе морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловую кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; средства, подавляющие функции надпочечников, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой какфолиновая кислота; ацеглатон; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновую кислоту; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевину; лентинан; лонидамин; майтанзиноиды, такие как майтанзин, и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK® (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновую кислоту; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трихотецены (в частности, токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин (ELDISINE®, FILDESIN®); дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ara-С"); тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел TAXOL® (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), препарат паклитаксела в форме связанных с альбумином наночастиц, не содержащий кремофора, ABRAXANE™ (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, IL.) и доцетаксел TAXOTERE® (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); хлорамбуцил; гемцитабин (GEMZAR®); 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин (VELBAN®); платину; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин (ONCOVIN®); оксалиплатин; лейковорин; винорелбин (NAVELBINE®); новантрон; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; ибандронат; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин (XELODA®); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанных выше соединений, а также комбинации двух или более указанных выше соединений, такие как CHOP, сокращенное название для комбинированной терапии с применением циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизолона, и FOLFOX, сокращенное название для схемы лечения оксалиплатином (ELOXATIN™) в комбинации с 5-FU и лейковорином. Дополнительные химиотерапевтические агенты включают цитотоксические агенты, полезные в составе конъюгатов антитело-лекарственное средство, такие как майтанзиноиды (DM1 и DM4, например) и ауристатины (ММАЕ и MMAF, например).

В определение химиотерапевтического агента также включены: (1) антигормональные агенты, действие которых заключается в регулировании или ингибировании эффектов гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогенов (SERM), в том числе, например, тамоксифен (включая NOLVADEX®; тамоксифена цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон и FARESTON® (торемифена цитрат); (2) ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, регулирующую выработку эстрогенов в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, MEGASE® (мегестрола ацетат), AROMASIN® (экземестан; Pfizer), форместан, фадрозол, RIVISOR® (ворозол), FEMARA® (летрозол; Novartis) и RIMIDEX® (анастрозол; AstraZeneca); (3) антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолановый нуклеозидный аналог цитозина); (4) ингибиторы протеинкиназ, такие как ингибиторы MEK (WO 2007/044515); (5) ингибиторы липидной киназы; (6) антисмысловые олигонуклеотиды, в частности, олигонуклеотиды, которые подавляют экспрессию генов в сигнальных путях, вовлеченных в аберрантную пролиферацию клеток, например, генов PKC-альфа (протеинкиназа С), киназ Raf и H-Ras, такие как облимерсен (GENASENSE®, Genta Inc.); (7) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) (например, ANGIOZYME®) и ингибиторы экспрессии HER2 (человеческий рецептор эпидермального фактора роста 2 типа); (8) вакцины, такие как вакцины для генной терапии, например, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® и VAXID®; рекомбинантный интерлейкин-2 (rIL-2) PROLEUKIN®; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как LURTOTECAN®; rmRH ABARELIX®; (9) антиангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанных выше соединений.

Антитела, предложенные в данной заявке, могут включать "химерные" антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности в антителах, происходящих из определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующей последовательности в антителах, происходящих из другого вида или принадлежащих другому классу или подклассу антител, а также фрагменты таких антител, при условии, что они демонстрируют желаемую биологическую активность (см. патент США №4816567 и Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)).

Подразумевается, что использованный в данном описании термин "композиция" охватывает продукт, содержащий конкретные ингредиенты (например, антитело, предложенное в данной заявке) в возможно конкретных количествах, а также любой продукт, который получается, непосредственно или опосредованно, в результате сочетания конкретных ингредиентов в возможно конкретных количествах.

"CDR" относится к одному из трех гипервариабельных участков (Н1, Н2 или Н3) в пределах не каркасной области структуры β-листа VH иммуноглобулина (Ig или антитела) или к одному из трех гипервариабельных участков (L1, L2 или L3) в пределах некаркасной области структуры β-листа VL антитела. Соответственно, CDR представляют собой последовательности вариабельных участков, чередующиеся внутри последовательностей каркасной области. Участки CDR хорошо известны специалистам в данной области техники и определены, например, Kabat, как участки наибольшей гипервариабельности в пределах вариабельных (V) доменов антитела (Kabat et al., J. Biol. Chem,, 252: 6609-6616 (1977); Kabat, Adv. Prot. Chem., 32: 1-75 (1978)). Кроме того, последовательности участков CDR были структурно определены Chothia как такие остатки, которые не являются частью консервативной структуры β-листа и вследствие этого способны принимать разные конформации (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)). Обе номенклатуры являются общепризнанными номенклатурами в данной области техники. Последовательности участков CDR также были определены согласно базам данных AbM, методу "контакта" и IMGT. Последовательности участков CDR проиллюстрированы на ФИГ. 16А и 16В. Положения участков CDR в пределах канонического вариабельного домена антитела были определены путем сравнения многочисленных структур (Al-Lazikani et al., J, Mol. Biol., 273: 927-948 (1997); Morea et al., Methods, 20: 267-279 (2000)). Поскольку количество остатков в гипервариабельном участке в разных антителах разное, то дополнительные остатки по сравнению с остатками в канонических положениях традиционно нумеруют буквами а, b, с и так далее вслед за номером остатков в канонической схеме нумерации вариабельного домена (Al-Lazikani et al., выше (1997)). Такая номенклатура также хорошо известна специалистам в данной области техники.

Термин "гипервариабельный участок", "HVR" или "HV", при использовании в данном описании относится к участкам вариабельного домена антитела, которые имеют гипервариабельность в последовательности и/или образуют петли с определенной структурой. Как правило, антитела содержат шесть гипервариабельных участков: три в VH (Н1, Н2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). Применяется ряд методов определений границ гипервариабельных участков, и они включены в данное описание. Определение CDR по Kabat основано на вариабельности последовательностей и используется чаще всего (Kabat et. al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Chothia, альтернативно, ссылается на расположение структурных петель (Chothia and Lesk, J. Mol. Bioi., 196: 901-917 (1987)). Окончание петли CDR-H1 no Chothia, при определении номера с использованием правила нумерации по Kabat, варьирует между положениями Н32 и Н34 в зависимости от длины петли (это происходит потому, что схема нумерации по Kabat допускает наличие вставок в положениях Н35А и Н35В; если ни в положении 35А, ни в положении 35В вставки нет, то петля заканчивается в положении 32; если вставка присутствует только в положении 35А, то петля заканчивается в положении 33; если присутствуют вставки в обоих положениях 35А и 35В, то петля заканчивается в положении 34). Гипервариабельные участки по AbM представляют собой компромисс между CDR по Kabat и структурными петлями по Chothia, и они используются программным обеспечением AbM от Oxford Molecular для моделирования структуры антител. Расположение гипервариабельных участков методом "контакта" основано на анализе доступных кристаллических структур комплексов. Остатки каждого из этих гипервариабельных участков указаны ниже.

Недавно была разработана и широко внедрена в практику универсальная система нумерации ImMunoGeneTics (IMGT) Information System® (Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol., 27(1): 55-77 (2003)). IMGT является объединенной информационной системой, специализирующейся на иммуноглобулинах (Ig), Т-кпеточных рецепторах (TR) и главном комплексе гистосовместимости (МНС) человека и других позвоночных. Здесь, CDR указываются как в терминах аминокислотной последовательности, так и расположения в легкой или тяжелой цепи. Поскольку в разных видах "расположение" CDR в структуре вариабельного домена иммуноглобулина сохраняется и присутствует в структурах, называемых петлями, то используя системы нумерации, в которых производится выравнивание последовательностей вариабельных доменов в соответствии со структурными признаками, легко идентифицировать остатки CDR и каркаса. Эту информацию можно использовать в случае привития и замены остатков CDR из иммуноглобулинов одного вида в акцепторный каркас, обычно, из человеческого антитела. Соответствие между нумерацией по Kabat и единой системой нумерации IMGT также хорошо известно специалисту в данной области техники (например, Lefranc и др., выше) и также проиллюстрировано на ФИГ. 16А и 16В. Типичная система, показанная в данном описании, объединяет системы Kabat и Chothia.

Гипервариабельные участки могут содержать "протяженные гипервариабельные участки", приведенные ниже: 24-36 или 24-34 (L1), 46-56 или 50-56 (L2) и 89-97 или 89-96 (L3) в VL и 26-35 или 26-35А (Н1), 50-65 или 49-65 (Н2) и 93-102, 94-102 или 95-102 (Н3) в VH. Число таких остатков вариабельного домена составляет 25 согласно Kabat и др., выше, для каждого из этих определений. Применяемые в данном описании термины "HVR" и "CDR" используются взаимозаменяемо.

Термин "константная область" или "константный домен" относится к карбокси-концевой части легкой и тяжелой цепи, которая непосредственно не вовлечена в связывание антитела с антигеном, но демонстрирует различные эффекторные функции, например, взаимодействие с Fc-рецептором. Эти термины относятся к той части молекулы иммуноглобулина, которая имеет более консервативную аминокислотную последовательность по сравнению с другой частью иммуноглобулина, вариабельным доменом, который содержит антигенсвязывающий сайт. Константный домен содержит константные СН1-, СН2- и СН3-домены тяжелой цепи и константный CL-домен легкой цепи.

Термин "цикпоалкил", использованный в данном описании, означает моноциклический или полициклический радикал, который содержит только атомы углерода и водорода, и включает в себя радикалы, которые являются насыщенными, частично ненасыщенными или полностью ненасыщенными. Циклоалкильные группы включают группы, имеющие от 3 до 10 атомов в кольце.

В контексте полипептида термин "производное", использованный в данном описании, относится к полипептиду, который содержит аминокислотную последовательность полипептида C10orf54, фрагмента полипептида C10orf54 или антитела, связывающегося с полипептидом C10orf54, которая была изменена путем замен, делеций или вставок аминокислотных остатков. Термин "производное", использованный в данном описании, также относится к полипептиду C10orf54, фрагменту полипептида C10orf54 или антителу, связывающемуся с полипептидом C10orf54, которые были химически модифицированы, например, в результате ковалентного присоединения молекулы любого типа к данному полипептиду. Например, но не в порядке ограничения, полипептид C10orf54, фрагмент полипептида C10orf54 или антитело к C10orf54 могут быть химически модифицированы, например, в результате гликозилирования, ацетилирования, ПЭГилирования, фосфорилирования, амидирования, путем получения производных с использованием известных защитных/блокирующих групп, в результате протеолитического расщепления, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Данные производные модифицированы таким образом, что они отличаются от природного или исходного пептида или полипептидов либо типом, либо расположением присоединенных молекул. Производные также включают делецию одной или более химических групп, которые в естественных условиях присутствуют в пептиде или полипептиде. Производное полипептида C10orf54, фрагмент полипептида C10orf54 или антитело к C10orf54 могут быть химически модифицированы путем химической модификации с использованием методов, известных специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь этим, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, режим обработки, использование метаболического синтеза туникамицина и т.д. Кроме того, производное полипептида C10orf54, фрагмент полипептида C10orf54 или антитело к C10orf54 могут содержать одну или более не классических аминокислот. Полипептидное производное обладает функцией, аналогичной или идентичной функции полипептида C10orf54, фрагмента полипептида C10orf54 или антитела к C10orf54, описанных в данной заявке.

Термин "цитотоксический агент", или "цитотоксин", или "СТХ", использованный в данном описании, относится к веществу, которое ингибирует функционирование или препятствует функционированию клеток и/или оказывает цитотоксический эффект на клетки (например, вызывает разрушение клеток). Подразумевается, что термин включает в себя алкилирующие агенты, антрациклины, вещества, вызывающие повреждения цитоскелета (таксаны), эпотилоны, ингибитор гистондеацетилазы (HDAC), ингибитор топоизомеразы I, ингибитор топоизомеразы II, ингибитор киназ, моноклональные антитела, нуклеотидный аналог, пептидный антибиотик, агент на основе платины, ретиноиды, алкалоид барвинка или его производное и радиоактивный изотоп. Также подразумевается, что данный термин включает в себя актиномицин, полностью транс-ретиноевую кислоту, азацитидин, азатиоприн, блеомицин, бортезомиб, карбоплатин, капецитабин, цисплатин, хлорамбуцил, циклофосфамид, цитарабин, даунорубицин, доцетаксел, доксифлуридин, доксорубицин, эпирубицин, эпотилон, этопозид, фторурацил, гемцитабин, гидроксимочевину, идарубицин, иматиниб, иринотекан, мехлорэтамин, меркаптопурин, метотрексат, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, пеметрексед, тенипозид, тиогуанин, топотекан, валрубицин, винбластин, винкристин, виндезин и винорелбин. Также подразумевается, что термин включает в себя стабилизатор тубулина, дестабилизатор тубулина, ДНК-алкилирующий агент, ДНК малобороздочный лиганд, ДНК-интеркалятор, ингибитор топоизомеразы I, ингибитор топоизомеразы II, ингибитор гиразы, ингибитор белкового синтеза, ингибитор протеасом и антиметаболит. Также подразумевается, что термин включает в себя актиномицин D, амонафид, ауристатин, бензофенон, бензотиазол, калихеамицин, камптотецин, СС-1065 (NSC 298223), цемадотин, колхицин, комбретастатин А4, доластатин, доксорубицин, элинафид, эмтанзин (DM1), этопозид, KF-12347 (лейнамицин), майтанзиноид, метотрексат, митоксантрон, нокодазол, ингибитор протеасом 1 (PSI 1), роридин А, токсин Т-2 (аналог трихотецена), таксол, тубулизин, Velcade® и винкристин. Предпочтительные цитотоксины включают ауристатин, калихеамицин, майтанзиноид и тубулизин. Другие предпочтительные цитотоксины включают монометилауристатин Е (ММАЕ), монометилауристатин F (MMAF), калихеамицин у, мертансин, тубулизин Т3 и тубулизин Т4. Следующие предпочтительные цитотоксины включают калихеамицин, доксорубицин, камптотецин, дуокармицин, DM1, DM4, майтанзиноид и тубулизин. Следующие предпочтительные цитотоксины включают ММАЕ, MMAF и пирролобензодиазепин (PBD).

Термин "MMAF" в общем случае относится к монометилауристатину F, химическим названием для которого считается (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-диметил-2-((S)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)бутанамидо)-3-метокси-5-метилгептаноил)пирролидин-2-ил)-3-метокси-2-метилпропанамидо)-3-фенилпропановая кислота. Среднему специалисту в данной области техники будет понятно, что MMAF также описывается в данной области как MeVal-Val-Dil-Dap-Phe, где "Dil" представляет собой долаизолейин, a "Dap" представляет собой долапроин.

Термин "ММАЕ" обычно относится к монометилауристатину Е, химическим названием для которого считается (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)-N,3-диметил-2-((3)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)бутанамид.

Термин "пирролобензодиазепин" или "пирролобензодиазепины" обычно относится к семейству димеров пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепина (PBD), которые являются синтетическими, селективными к последовательности, межцепочечными, перекрестно-сшивающими агентами в районе малой бороздки ДНК, разработанными на основе антрамицинов. Примеры пирролобензодиазепинов включают, но не ограничиваются этим, аббеймицин, чикамицин, DC-81, мазетрамицин, неотрамицины А и В, поротрамицин, протракарцин, сибаномицин (DC-102), сибиромицин и томамицин. Типичные пирролобензодиазепины включают описанные в патентах США №№7049311, 7741319, 8697688 (см., например, (26) в примере 5) и 8765740; международных заявках на патент с номерами WO 2011/130598 А1, WO 2012/112708 А1, WO 2013/055987 А1, WO 2013/165940 А1; и Jeffrey et al., Bioconjugate Спет., 2013, 24, 1256-1263 и Sutherland et al., Blood, 2013, 122(8), 1455-1463; при этом содержание каждого из них включено посредством ссылки во всей своей полноте.

Структуры для Т3 и Т4 приведены ниже:

Структура для MMAF приведена ниже:

(MMAF), химическое название для которого представляет собой "(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-диметил-2-((S)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)бутанамидо)-3-метокси-5-метилгептаноил)пирролидин-2-ил)-3-метокси-2-метилпропанамидо)-3-фенилпропановая кислота". Среднему специалисту в данной области техники будет понятно, что MMAF также описывается в данной области техники как MeVal-Val-Dil-Dap-Phe, где "Dil" представляет собой долаизолейин, a "Dap" представляет собой долапроин. Структура для ММАЕ приведена ниже:

(ММАЕ), химическое название для которого представляет собой "(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)-N,3-диметил-2-((3)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)бутанамид". Среднему специалисту в данной области техники будет понятно, что ММАЕ также описывается в данной области техники как MeVal-Val-Dil-Dap-норэфедрин, где "Dil" представляет собой долаизолейин, a "Dap" представляет собой долапроин.

Структуры для трех PBD приведены ниже:

при этом химическое название представляет собой "(S)-11-гидрокси-7-метокси-8-((5-(((S)-7-метокси-2-метил-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-ил)окси)пентил)окси)-2-метил-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-5(11аН)-он"; и

при этом химическое название представляет собой "(S)-2-(4-аминофенил)-8-(3-(((S)-2-циклопропил-7-метокси-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-ил)окси)пропокси)-7-метокси-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-5(11aH)-он" (см., например, соединение (26) в примере 5 патента США №8697688); и

при этом химическое название представляет собой "(S)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-8-(3-(((S)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-ил)окси)пропокси)-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-,4]диазепин-5(11аН)-он".

В данной области техники известны другие цитотоксические агенты, включая различные противоопухолевые или противораковые средства.

Термин "детектируемый зонд", использованный в данном описании, относится к соединению, которое обеспечивает получение детектируемого сигнала. Данный термин включает в себя, без ограничения, любой флуорофор, хромофор, радиоактивную метку, фермент, антитело или фрагмент антитела и тому подобное, которые обеспечивают получение детектируемого сигнала благодаря своей активности.

Термин "диагностический агент" относится к веществу, вводимому субъекту, которое помогает в диагностике заболевания. Такие вещества можно использовать для выявления, точного определения и/или установления локализации вызывающего заболевание процесса. В определенных воплощениях диагностический агент включает вещество, конъюгированное с антителом, предложенным в данной заявке, которое при введении субъекту или при контакте с образцом, полученным от субъекта, помогает в диагностике рака, опухолеобразования или любого другого C10orf54-опосредуемого заболевания.

Термин "детектируемый агент" относится к веществу, которое можно использовать для установления наличия или присутствия желаемой молекулы, такой как антитело, предложенное в данной заявке, в образце или организме субъекта. Детектируемым агентом может быть вещество, которое можно визуализировать, или вещество, содержание которого можно определить и/или измерить иным образом (например, путем количественного определения).

"Эффективное количество" представляет собой количество, достаточное для получения полезных или желаемых результатов. Эффективное количество может быть введено за одну или более чем одну процедуру введения, нанесения или дозирования. Такая доставка зависит от ряда изменяемых параметров, включая период времени, в течение которого следует использовать отдельную стандартную дозировку, биодоступность агента, путь введения и т.д. В некоторых воплощениях эффективное количество также относится к количеству антитела, предложенного в данном изобретении, необходимого для достижения предусмотренного результата (например, ингибирования C10orf54-ассоциированной биологической активности клетки, такой как модулирование активации и/или пролиферации Т-клеток). В некоторых воплощениях этот термин относится к терапевтической дозировке (например, антитела или фармацевтической композиции, предложенных в данной заявке), которой достаточно для снижения и/или ослабления тяжести и/или продолжительности определенного заболевания и/или связанного с ним симптома. Этот термин также охватывает количество, необходимое для снижения или ослабления развития или прогрессирования определенного заболевания, снижения или уменьшения вероятности рецидива, развития или начала определенного заболевания и/или улучшения или усиления профилактического(их) или терапевтического(их) эффекта(ов) другой терапии (например, терапии, отличающейся от применения антитела к C10orf54, предложенного в данной заявке). В некоторых воплощениях эффективное количество антитела составляет от примерно 0,1 мг/кг (мг антитела на кг массы тела субъекта) до примерно 100 мг/кг. В определенных воплощениях эффективное количество антитела, предложенного в данной заявке, составляет примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 1 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 15 мг/кг, примерно 20 мг/кг, примерно 25 мг/кг, примерно 30 мг/кг, примерно 35 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 45 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 70 мг/кг, примерно 80 мг/кг, примерно 90 мг/кг или примерно 100 мг/кг (или находится в этом диапазоне).

Термин "электрофильная уходящая группа", использованный в данном описании, относится к уходящей группе, которая является акцептором электронной пары при образовании ковалентной связи. В общем случае электрофилы восприимчивы к атаке сопряженными нуклеофилами, включая тиолы, которые получаются в результате восстановления дисульфид ной связи антитела.

Термин "электрофильная уходящая группа, которая избирательно взаимодействует с тиолами", использованный в данном описании, относится к электрофильной уходящей группе, которая избирательно взаимодействует с тиолами по сравнению с другими нуклеофилами. В определенных воплощениях электрофильная уходящая группа, которая избирательно взаимодействует с тиолами, избирательно взаимодействует с тиолами, которые получаются в результате восстановления дисульфид ной связи антитела.

Термин "кодировать" или его грамматические эквиваленты при использовании в применении к молекуле нуклеиновой кислоты, относится к молекуле нуклеиновой кислоты в ее нативном состоянии или в случае манипулирования с ней методами, хорошо известными специалистам в данной области техники, которая может быть транскрибирована с получением мРНК и которая затем транслируется в полипептид и/или его фрагмент. Антисмысловая цепь комплементарна такой молекуле нуклеиновой кислоты и на основании нее может быть получена кодирующая последовательность.

Термин "эпитоп", использованный в данном описании, относится к локализованному участку на поверхности антигена, такого как полипептид C10orf54 или фрагмент полипептида C10orf54, который способен связываться с одним или более антигенсвязывающими участками антитела и который у животного, такого как млекопитающее (например, человек) обладает антигенной или иммуногенной активностью, то есть способен вызывать иммунный ответ. Эпитоп, обладающий иммуногенной активностью, представляет собой часть полипептида, который вызывает антительный ответ у животного. Эпитоп, обладающий антигенной активностью, представляет собой часть полипептида, с которым антитело связывается, что определено любым способом, хорошо известным в данной области техники, например, с использованием иммуноанализа. Антигенные эпитопы не обязательно должны быть иммуногенными. Обычно эпитопы состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи Сахаров, и обладают специфическими трехмерными структурными характеристиками, а также специфическими характеристиками заряда. Участок полипептида, составляющий эпитоп, может представлять собой смежные аминокислоты полипептида, или эпитоп может состоять из из двух или более несмежных участков полипептида. Эпитоп может или не может представлять собой пространственный компонент поверхности антигена. В определенных воплощениях эпитоп C10orf54 представляет собой пространственный компонент поверхности полипептида C10orf54. В других воплощениях эпитоп C10orf54 представляет собой линейный компонент полипептида C10orf54. Как правило, антиген имеет несколько или много разных эпитопов и взаимодействует со многими разными антителами.

Термин "эксципиент", использованный в данном описании, относится к инертному веществу, которое обычно используется в качестве разбавителя, наполнителя, консерванта, связующего вещества или стабилизирующего агента, и включает, но не ограничивается этим, белки (например, сывороточный альбумин и т.д.), аминокислоты (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, аргинин, глицин, гистидин и т.д.), жирные кислоты и фосфолипиды (например, алкилсульфонаты, каприлат и т.д.), поверхностно-активные вещества (например, SDS (додецилсульфат натрия), полисорбат, неионное поверхностно-активное вещество и т.д.), сахариды (например, сахарозу, мальтозу, трегалозу и т.д.) и полиолы (например, маннит, сорбит и т.д.). Также см. книгу Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA, которая тем самым включена посредством ссылки во всей своей полноте.

Если речь идет о пептиде или полипептиде, то термин "фрагмент", использованный в данном описании, относится к пептиду или полипептиду, который содержит аминокислотную последовательность меньше полноразмерной. Такой фрагмент может возникать, например, в результате укорочения на амино-концевой части, укорочения на карбокси-конце вой части и/или делеции остатка(ов) внутри аминокислотной последовательности. Например, фрагменты могут быть образованы в результате альтернативного сплайсинга РНК или действия протеазной активности in vivo. В определенных воплощениях фрагменты C10orf54 включают полипептиды, содержащие аминокислотную последовательность, состоящую по меньшей мере из 5 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 10 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 15 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 20 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 25 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 40 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 50 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 60 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 70 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 80 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 90 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 100 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 125 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 150 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 175 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере из 200 смежных аминокислотных остатков или по меньшей мере из 250 смежных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности полипептида C10orf54 или антитела, которое связывается с полипептидом C10orf54. В конкретном воплощении фрагмент полипептида C10orf54 или антитело, которое связывается с антигеном C10orf54, сохраняет по меньшей мере 1, по меньшей мере 2 или по меньшей мере 3 функции данного полипептида или антитела.

Термин "каркасные" или "FR" остатки относится к остаткам вариабельных доменов, фланкирующим CDR. FR остатки присутствуют, например, в химерных, гуманизированных, человеческих, однодоменных антителах, диателах, линейных антителах и биспецифичных антителах. FR остатки представляют собой такие остатки вариабельных доменов, которые отличаются от остатков гипервариабельных участков, определенных в данном описании.

"Функциональный фрагмент" антитела будет проявлять по меньшей мере одну биологическую функцию, если не несколько или все биологические функции, присущие интактному антителу, причем эта функция представляет собой по меньшей мере специфическое связывание с антигеном-мишенью.

Термин "слитый белок", использованный в данном описании, относится к полипептиду, который содержит аминокислотную последовательность антитела и аминокислотную последовательность гетерологичного полипептида или белка (например, полипептида или белка, в норме не составляющего часть антитела (например, не являющегося антителом к антигену C10orf54)). Термин "слияние", когда он используется применительно к C10orf54 или антителу к C10orf54, относится к присоединению пептида или полипептида либо его фрагмента, варианта и/или производного к гетерологичному пептиду или полипептиду. В определенных воплощениях слитый белок сохраняет биологическую активность C10orf54 или антитела к C10orf54. В определенных воплощениях слитый белок содержит VH-домен, VL-домен, VH CDR (один, два или три VH CDR) и/или VL CDR (один, два или три VL CDR) антитела к C10orf54, при этом слитый белок связывается с эпитопом C10orf54.

Термин "тяжелая цепь", когда он использован применительно к антителу, относится к полипептидной цепи размером примерно 50-70 кДа, амино-концевая часть которой включает вариабельную область, состоящую из примерно 120-130 или более аминокислот, а карбокси-концевая часть которой включает константную область. Константная область может принадлежать к одному из пяти различных типов, называемых альфа (α), дельта (δ), эпсилон (ε), гамма (γ) и мю (μ), на основании аминокислотной последовательности константной области тяжелой цепи. Эти различные тяжелые цепи отличаются по размеру: α, δ и γ содержат приблизительно 450 аминокислот, в то время как μ и ε содержат приблизительно 550 аминокислот. В сочетании с легкой цепью эти различные типы тяжелых цепей дают начало пяти хорошо известным классам антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, соответственно, включая четыре подкласса IgG, а именно, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Тяжелая цепь может представлять собой тяжелую цепь иммуноглобулина человека.

Термин "хозяин", использованный в данном описании, относится к животному, такому как млекопитающее (например, человек).

Термин "клетка-хозяин", использованный в данном описании, относится к конкретной подвергаемой воздействию клетке, трансфицированной молекулой нуклеиновой кислоты, и потомству или возможному потомству такой клетки. Потомство такой клетки может быть не идентично родительской клетке, трансфицированной молекулой нуклеиновой кислоты, вследствие мутаций или влияния окружающей среды, что может проявляться в последующих поколениях, или вследствие встраивания молекулы нуклеиновой кислоты в геном клетки хозяина.

"Гуманизированными" формами нечеловеческих (например, мышиных) антител являются химерные антитела, включающие иммуноглобулины человека (реципиентное антитело), в которых нативные остатки CDR заменены на остатки из соответствующего CDR видов, не являющихся человеком (донорного антитела), таких как мышь, крыса, кролик или примат, не являющийся человеком, имеющих желаемую специфичность, аффинность и функциональную активность. В некоторых случаях, один или более остатков FR области иммуноглобулина человека заменяют на соответствующие остатки иммуноглобулина из вида, не являющегося человеком. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаруживаются в реципиентном антителе или в донорном антителе. Эти модификации делают для дальнейшего улучшения эффективности антител. Тяжелая или легкая цепь гуманизированного антитела может содержать по существу все из по меньшей мере одного или более вариабельных доменов, в которых все или по существу все CDR соответствуют таковым иммуноглобулина, не являющегося иммуноглобулином человека, и все или по существу все FR представляют собой FR из последовательности иммуноглобулина человека. В определенных воплощениях гуманизированное антитело будет содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), обычно, константной области иммуноглобулина человека. Для дальнейших подробностей см. Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992); Carter et al., Proc. Natl. Acd. Sci. USA, 89: 4285-4289 (1992); и патенты США №№6800738 (опубликован 5 октября 2004 г.), 6719971 (опубликован 27 сентября 2005 г.), 6639055 (опубликован 28 октября 2003 г.), 6407213 (опубликован 18 июня 2002 г.) и 6054297 (опубликован 25 апреля 2000 г.).

Антитело, которое "ингибирует рост клеток, экспрессирующих C10orf54, и/или уничтожает эти клетки", либо "ингибирующее рост" или "цитотоксическое" антитело, представляет собой антитело, результатом действия которого является значительное возрастание ингибирования и/или уничтожения клеток, экспрессирующих или сверхэкспрессирующих соответствующий полипептид C10orf54. В некоторых воплощениях такие антитела могут ингибировать рост клеток, экспрессирующих C10orf54, и/или уничтожать эти клетки. Такие клетки включают регуляторные Т-клетки (например, CD4⁺ Foxp3⁺ регуляторные Т-клетки), миелоидные супрессорные клетки (например, CD11b⁺ или CD11b^high миелоидные супрессорные клетки) и/или обладающие супрессивным действием дендритные клетки (например, CD11b⁺ или CD11b^high дендритные клетки). В конкретном воплощении антитела ингибируют рост раковой клетки, предраковой клетки или клетки опухоли, и/или уничтожают такие клетки. Некоторые ингибирующие рост антитела к C10orf54 ингибируют рост C10orf54-экспрессирующих клеток и/или уничтожают такие клетки более чем на 20%, как например, от приблизительно 20% до приблизительно 50% или более чем на 50% (например, от приблизительно 50% до приблизительно 100%) по сравнению с соответствующим контролем, при этом обычно в качестве контроля используют клетки, не обработанные тестируемым антителом. В одном из воплощений ингибирование роста и/или уничтожение можно измерить при концентрации антитела в клеточной культуре, составляющей примерно 0,1-30 г/мл или примерно от 0,5 нМ до 200 нМ, при этом ингибирование роста определяют через 1-10 суток после воздействия антитела на опухолевые клетки. Ингибирование роста и/или уничтожение клеток in vivo можно определить различными методами, например, описанными ниже. В контексте ингибирования раковой клетки или клетки опухоли антитело осуществляет ингибирование роста или уничтожение in vivo, если введение антитела к C10orf54 в количестве от примерно 1 г/кг до примерно 100 мг/кг массы тела приводит к уменьшению размера опухоли или уменьшению пролиферации опухолевых клеток в пределах от примерно 5 суток до 3 месяцев от начала первого введения антитела, например, в пределах от примерно 5 суток до 30 суток.

Использованный в данном описании термин "в комбинации" в контексте введения других терапевтических средств относится к применению более чем одной терапии. Использование термина "в комбинации" не ограничивает порядок, в котором терапевтические средства вводят субъекту, имеющему инфекцию. Первое терапевтическое средство можно вводить до введения (например, за 1 минуту, 45 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недель), одновременно с введением или после введения (например, через 1 минуту, 45 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недель) второго терапевтического средства субъекту, который имел, имеет C10orf54-опосредуемое заболевание или восприимчив к нему. Любое дополнительное терапевтическое средство можно вводить в любом порядке с другими дополнительными терапевтическими средствами. В определенных воплощениях антитела можно вводить в комбинации с одним или более чем одним терапевтическим средством (например, с терапевтическими средствами, не являющимися антителами, которые в настоящее время вводят для предупреждения, лечения, сдерживания развития и/или ослабления C10orf54-опосредуемого заболевания. Неограничивающие примеры терапевтических средств, которые можно вводить в комбинации с антителом, включают аналгезирующие агенты, анестетики, антибиотики или иммуномодулирующие агенты либо любой другой агент, приведенный в Фармакопее США и/или Настольном справочнике врача.

Антителом, которое "вызывает гибель клеток" является антитело, применение которого приводит к тому, что жизнеспособная клетка становится нежизнеспособной. Данная клетка относится к типу клеток, которые специфически экспрессируют или сверхэкспрессируют полипептид C10orf54. Данная клетка может быть раковой или нормальной клеткой конкретного клеточного типа, такой как регуляторная Т-клетка. Гибель клеток in vitro может быть определена в отсутствие комплемента и иммунных эффекторных клеток для того, чтобы отличить от гибели клеток, вызванной антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичностью (ADCC) или комплементзависимой цитотоксичностью (CDC). Таким образом, анализ гибели клеток может быть проведен с использованием инактивированной нагреванием сыворотки крови (например, в отсутствие комплемента) и в отсутствие иммунных эффекторных клеток. Чтобы определить, способно ли данное антитело вызывать гибель клеток, проводят оценку потери целостности мембраны по поглощению иодида пропидия (PI), трипанового синего (см. Moore et al., Cytotechnology, 17: 1-11 (1995)). В некоторых воплощениях антителами, вызывающими гибель клеток, являются антитела, которые индуцируют поглощение PI в анализе поглощения PI в C10orf54-экспрессирующих клетках.

"Выделенное" антитело по существу не содержит клеточного материала или других загрязняющих белков из клеточного или тканевого источника и/или других загрязняющих компонентов, из которых антитело получено, или по существу не содержит химических предшественников или других химических реагентов, использованных в ходе химического синтеза. Выражение "по существу не содержит клеточного материала" включает в себя препараты антитела, в которых антитело отделено от клеточных компонентов тех клеток, из которых его выделяют или получают рекомбинантным методом. Таким образом, антитело, которое по существу не содержит клеточного материала, включает препараты антитела, содержащие менее чем примерно 30%, 20%, 10% или 5% (по массе сухого вещества) гетерологичного белка (также обозначаемого в данном описании как "загрязняющий белок"). В определенных воплощениях, когда антитело получают рекомбинантным методом, оно по существу не содержит культуральной среды, например, культуральная среда составляет менее чем примерно 20%, 10% или 5% от объема белкового препарата. В определенных воплощениях, когда антитело получают путем химического синтеза, оно по существу не содержит химических предшественников или других химических реагентов, например, оно отделено от химических предшественников или других химических реагентов, вовлеченных в синтез белка. Соответственно, такие препараты антитела содержат менее чем примерно 30%, 20%, 10%, 5% (по массе сухого вещества) химических предшественников или соединений, отличающихся от представляющего интерес антитела. Загрязняющие компоненты также могут включать, но не ограничиваются этим, материалы, которые будут мешать терапевтическим применениям антитела, и могут включать ферменты, гормоны и другие растворенные вещества белковой или небелковой природы. В определенных воплощениях антитело будет очищено (1) до более чем 95% по массе антитела, как определено методом Лоури (Lowry et al., J. Bio. Chem., 193: 265-275, 1951), например, до 99% по массе, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков на N-концев или внутри аминокислотной последовательности с использованием секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до гомогенного состояния по данным SDS-PAGE (электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии SDS) в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием окрашивания кумасси синим или, предпочтительно, серебром. Выделенное антитело включает антитело, находящееся in situ внутри рекомбинантных клеток после того, как по меньшей мере один компонент природного окружения антитела не будет присутствовать. Обычно, однако, при получении выделенного антитела будет использована по меньшей мере одна стадия очистки. В конкретном воплощении, антитела, предложенные в данной заявке, являются выделенными или очищенными.

Молекула "выделенной" нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу, отделенную от молекул других нуклеиновых кислот, которые присутствуют в природном источнике молекул нуклеиновой кислоты. Кроме того, молекула "выделенной" нуклеиновой кислоты, как например, молекула кДНК, по существу может не содержать другого клеточного материала или культуральной среды при получении рекомбинантными методами, или по существу может не содержать химических предшественников или других химических реагентов в случае химического синтеза. В конкретном воплощении молекула(ы) нуклеиновой кислоты, кодирующая(ие) антитело, предложенное согласно данному изобретению, являет(ют)ся выделенной(ыми) или очищенной(ыми).

Термин "уходящая группа", использованный в данном описании, относится к любой группе, которая отделяется в ходе химической реакции с участием данной группы, описанной в данной заявке, и включает, но не ограничивается этим, например, атом галогена, сульфонаты (брозилат, мезилат, тозилат, трифлат и т.д.), п-нитробензоат и фосфонатные группы.

Термин "легкая цепь", при использовании с отсылкой к антителу, относится к полипептидной цепи размером примерно 25 кДа, где амино-концевая часть включает вариабельную область, состоящую из от примерно 100 до примерно 110 или более аминокислот, а карбокси-концевая часть включает константную область. Приблизительная длина легкой цепи составляет 211-217 аминокислот. На основании аминокислотной последовательности константных доменов существуют два различных типа цепей, называемых каппа (κ) или лямбда (λ). Аминокислотные последовательности легкой цепи хорошо известны в данной области техники. Легкая цепь может представлять собой легкую цепь иммуноглобулина человека.

"Линкер" (обозначенный как L или L¹, L² и L³) представляет собой молекулу, имеющую два реакционноспособных конца, один для конъюгирования с антителом или другим линкером, а другой для конъюгирования с цитотоксином. Реакционноспособный конец линкера для конъюгирования с антителом обычно представляет собой сайт, подходящий для конъюгирования с антителом через тиоловую группу цистеина или аминогруппу лизина антитела и, таким образом, обычно представляет собой реакционноспособную в отношении тиола группу, такую как двойная связь (как в малеимиде), или уходящую группу, такую как атом хлора, брома или йода, или R-сульфанильную группу, или сульфонильную группу, или реакционноспособную в отношении аминов группу, такую как карбоксильная группа, или такую, которая определена в данном описании; наряду с этим, реакционноспособный конец линкера для конъюгирования с антителом обычно представляет собой сайт, подходящий для конъюгирования с цитотоксином посредством образования амидной связи с основной аминогруппой или карбоксильной группой цитотоксина и, таким образом, обычно представляет собой карбоксильную группу или основную аминогруппу. В одном из воплощений, когда термин "линкер" используют при описании линкера в конъюгированной форме, один или оба реакционноспособных конца будут отсутствовать (например, будет отсутствовать уходящая группа в случае реакционноспособной в отношении тиола группы) или будут представлены не полностью (например, только карбонил карбоновой кислоты) ввиду образования связей между линкером и/или цитотоксином. Линкеры, описанные в данной заявке, могут быть расщепляемыми в обычных физиологических и/или внутриклеточных условиях или могут оставаться стабильными (например, нерасщепленными или нерасщепляемыми) в этих же самых условиях. Примерами расщепляемых линкеров являются линкеры, которые содержат дипептидные группировки, где пептидная связь, соединяющая данные два пептида, может быть избирательно расщеплена под действием лизосомальных протеаз (например, катепсина-В). Дипептидной группировкой, обычно используемой в расщепляемых линкерах, является валин-цитруллин (Val-Cit).

Использованные в данном описании термины "сдерживать развитие", "осуществление сдерживания развития" и "сдерживание развития" относятся к благоприятным эффектам, получаемым субъектом от терапии (например, в результате применения профилактического или терапевтического агента), которые не приводят к излечиванию заболевания. В определенных воплощениях субъекту вводят одно или более чем одно терапевтическое средство (например, профилактические или терапевтические агенты, такие как антитело, предложенное в данной заявке) для "сдерживания развития" C10orf54-опосредуемого заболевания, одного или более чем одного его симптома с тем, чтобы предотвратить прогрессирование или обострение заболевания.

Термин "моноклональное антитело" относится к антителу, полученному из популяции гомогенных или по существу гомогенных антител, и каждое моноклональное антитело обычно будет распознавать один эпитоп антигена. В конкретных воплощениях термин "монокпональное антитело", использованный в данном описании, означает антитело, продуцируемое одной гибридомой или другой клеткой, при этом антитело связывается только с эпитопом C10orf54, как определено, например, с использованием ELISA или другого анализа связывания с антигеном или конкурентного связывания, известного в данной области техники. Термин "монокпональное" не ограничивается каким-либо конкретным способом получения антитела. Например, моноклональные антитела, предложенные в данной заявке, могут быть получены гибридомным методом, как описано в Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975), или могут быть получены с использованием методов выделения из фаговых библиотек. Другие методы получения клональных клеточных линий и экспрессируемых ими мо но клональных антител хорошо известны в данной области техники (см., например, главу 11 в Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York). Другие типичные способы получения других моноклональных антител предложены в данном описании в разделе Примеры.

Термин "природный", когда он используется применительно к биологическим материалам, таким как молекулы нуклеиновой кислоты, полипептиды, клетки хозяина и тому подобное, относится к тем, которые встречаются в природе, а не получены в результате деятельности людей

Термин "фармацевтически приемлемый", использованный в данном описании, означает "одобренный к применению регулирующим агенством федерального или государственного управления" или перечисленный в Фармакопее США, Европейской Фармакопее или другой общепризнанной фармакопее для применения на животных и, более конкретно, на людях.

Термин "поликлональные антитела", использованный в данном описании, относится к популяции антител, образованных в результате иммуного ответа на белок, имеющий много эпитопов, и поэтому включающий в себя множество разных антител, направленных на одинаковые и разные эпитопы данного белка. Методы получения поликлональных антител известны в данной области техники (см., например, главу 11 в Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York).

Использованный в данном описании термин "полинуклеотид", "нуклеотид", "нуклеиновая кислота", "молекула нуклеиновой кислоты" и другие подобные термины используются взаимозаменяемо и включают ДНК, РНК, мРНК и тому подобное.

Термин "предраковая клетка" относится к клетке, которая имеет аномальный внешний вид, например, отличается размером или формой от клеток окружающей ткани или нормальных клеток ее типа, но не является инвазивной. Появление предраковых клеток может свидетельствовать о повышенном риске заболевания раком. Предраковые клетки, экспрессирующие C10orf54, могут быть идентифицированы с использованием методов, изложенных в данном описании, которые могут включать анализ образца клеток, выделенных из пациента.

Использованные в данном описании термины "предупреждают", "предупреждающий" и "предупреждение" относятся к полному или частичному ингибированию развития, рецидива, начала или распространения C10orf54-опосредуемого заболевания и/или связанного с ним симптома в результате введения терапевтического средства или комбинации терапевтических средств, предложенных в данной заявке (например, комбинации профилактических или терапевтических агентов, таких как антитело, предложенное в данной заявке).

Использованный в данном описании термин "профилактический агент" относится к любому агенту, который может полностью или частично ингибировать развитие, рецидив, начало или распространение C10orf54-опосредуемого заболевания и/или связанного с ним симптома у субъекта. В определенных воплощениях термин "профилактический агент" относится к антителу к C10orf54, предложенному в данной заявке. В некоторых других воплощениях термин "профилактический агент" относится к агенту, отличному от антитела к C10orf54, предложенного в данной заявке. В определенных воплощениях профилактическим агентом является агент, который, как известно, полезен или использовался либо используется в настоящее время для предупреждения C10orf54-опосредуемого заболевания и/или связанного с ним симптома или препятствует началу, развитию, прогрессированию и/или способствует ослаблению тяжести C10orf54-опосредуемого заболевания и/или связанного с ним симптома. В конкретных воплощениях профилактическим агентом является гуманизированное антитело к C10orf54, как например, гуманизированное монокпональное антитело к C10orf54.

В определенных воплощениях "профилактически эффективный титр сыворотки крови" представляет собой титр сыворотки крови у субъекта, предпочтительно человека, при котором полностью или частично ингибируется развитие, рецидив, начало или распространение C10orf54-опосредуемого заболевания и/или связанного с ним симптома у субъекта.

Термин "рекомбинантное антитело", относится к антителу, которое получают, экспрессируют, создают или выделяют с использованием рекомбинантных методов. Рекомбинантными антителами могут быть антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессирующего вектора, которым трансфицирована клетка хозяина, антитела, выделенные из комбинаторных библиотек рекомбинантных антител, антитела, выделенные из животного (например, мыши или коровы), которые являются трансгенными и/или трансхромосомными для генов иммуноглобулинов человека (см., например, Taylor L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res., 20: 6287-6295), или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные с использованием любого другого метода, который включает сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулинов с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные антитела могут иметь вариабельную и константную области, происходящие из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека (см. Kabat Е. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, пятое издание, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication №91-3242). Однако, в определенных воплощениях такие рекомбинантные антитела подвергают мутагенезу in vitro (или, в случае использования животного, трансгенного по последовательностям Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo) и, таким образом, аминокислотные последовательности VH- и VL-областей рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, будучи происходящими из последовательностей и родственными последовательностям VH и VL из антител зародышевой линии человека, не могут естественным образом существовать в репертуаре антител зародышевой линии человека in vivo.

Термин "титр сыворотки крови", использованный в данном описании, относится к среднему титру сыворотки крови в группе, состоящей по меньшей мере из 10, например, по меньшей мере 20 или по меньшей мере 40 субъектов, вплоть до примерно 100, 1000 или более.

Использованный в данном описании термин "побочные эффекты" охватывает нежелательные и неблагоприятные эффекты терапевтического средства (например, профилактического или терапевтического агента). Нежелательные эффекты необязательно являются неблагоприятными. Неблагоприятный эффект терапевтического средства (например, профилактического или терапевтического агента) может быть вредным или вызывающим неприятные ощущения либо может быть связан с риском. Примеры побочных эффектов включают, диарею, кашель, гастроэнтерит, стерторозное дыхание, тошноту, рвоту, анорексию, спазмы в животе, лихорадку, боль, снижение массы тела, гипогидратацию, алопецию, одышку, бессонницу, головокружение, воспаление слизистой оболочки, нервные и мышечные эффекты, усталость, сухость полости рта и снижение аппетита, высыпания или отеки в месте введения, симптомы гриппа, такие как лихорадочное состояние, озноб и утомляемость, проблемы с пищеварительным трактом и аллергические реакции. Дополнительные нежелательные эффекты, испытываемые пациентами, многочисленны и известны в данной области техники. Многие из них описаны в Настольном справочнике врача (67-ое изд., 2013).

Используемые в данном описании термины "субъект" и "пациент" примненяются взаимозаменяемо. Как использовано в данном описании в определенных воплощениях, субъект представляет собой млекопитающее, такое как не являющееся приматом млекопитающее (например, крупный рогатый скот, свиньи, лошади, кошки, собаки, крысы и т.д.) или примат (например, обезьяна и человек). В конкретных воплощениях субъектом является человек. В одном из воплощений субъектом является млекопитающее (например, человек), имеющее C10orf54-опосредуемое заболевание. В другом воплощении субъектом является млекопитающе (например, человек) с риском развития C10orf54-опосредуемого заболевания.

Использованное в данном описании выражение "по существу все" означает по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или примерно 100%.

Использованный в данном описании термин "терапевтический агент" относится к любому агенту, который можно использовать для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, расстройства или состояния, в том числе для лечения, предупреждения или облегчения одного или более симптомов C10orf54-опосредуемого заболевания, расстройства или состояния и/или связанного с ними симптома. В определенных воплощениях термин "терапевтический агент" относится к антителу, предложенному в данной заявке. В некоторых других воплощениях термин "терапевтический агент" относится к агенту, отличному от антитела, предложенного в данной заявке. В определенных воплощениях терапевтическим агентом является агент, который, как известно, полезен или использовался либо используется в настоящее время для лечения, предупреждения или облегчения одного или более симптомов C10orf54 опосредуемого заболевания, расстройства, состояния или связанного с ними симптома.

Эффект от комбинации терапевтических средств (например, применения терапевтических агентов) может быть большим, чем аддитивные эффекты любых двух или большего числа монотерапий. Например, синергический эффект комбинации терапевтических агентов позволяет применять более низкие дозировки одного или более агентов и/или использовать менее частое введение агентов субъекту с C10orf54-опосредуемым заболеванием. Возможность использования более низких дозировок при лечении терапевтическими средствами и/или менее частого введения терапевтических средств снижает токсичность, связанную с введением терапевтических средств субъекту без уменьшения эффективности терапевтических средств в отношении предупреждения, лечения или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания. Помимо этого, синергический эффект может приводить к улучшению эффективности терапевтических средств для предупреждения, лечения или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания. И наконец, синергический эффект комбинации терапевтических средств (например, терапевтических агентов) может предотвращать или уменьшать неблагоприятные или нежелательные побочные эффекты, связанные с применение любой монотерапии.

Термин "терапевтически эффективное количество", использованный в данном описании, относится к количеству терапевтического агента (например, антитела, предложенного в данной заявке, или любого другого терапевтического агента, предложенного в данной заявке), которого достаточно для снижения и/или ослабления тяжести и/или продолжительности определенного заболевания и/или связанного с ним симптома. Терапевтически эффективное количество терапевтического агента может представлять собой количество, необходимое для снижения или ослабления развития или прогрессирования определенного заболевания, снижения или уменьшения вероятности рецидива, развития или начала определенного заболевания и/или улучшения или усиления профилактического(их) или терапевтического(их) эффекта(ов) другой терапии (например, терапии, отличающейся от применения антитела, предложенного в данной заявке).

В определенных воплощениях "терапевтически эффективный титр сыворотки крови" представляет собой титр сыворотки крови у субъекта, предпочтительно человека, который снижает тяжесть, продолжительность и/или ослабляет симптомы, ассоциированные с C10orf54-опосредуемым заболеванием у субъекта.

Использованный в данном описании термин "терапия" относится к любому протоколу, способу и/или агенту, который можно использовать для предупреждения, сдерживания развития, лечения и/или ослабления C10orf54-опосредуемого заболевания. В определенных воплощениях термины "терапии" и "терапия" относятся к биологической терапии, поддерживающей терапии и/или другим терапиям, полезным для предупреждения, сдерживания развития, лечения и/или ослабления C10orf54-опосредуемого заболевания, известным специалисту в данной области техники, такому как представитель медицинского персонала.

Термин "тиол", использованный в данном описании, относится к радикалу -SH.

Использованные в данном описании термины "лечить", "лечение" и "подвергание лечению" относятся к снижению и/или ослаблению прогрессирования, тяжести и/или продолжительности C10orf54-опосредуемого заболевания в результате введения одного или более чем одного терапевтического средства (включая, но не ограничиваясь этим, введение одного или более терапевтических агентов, таких как антитело, предложенное в данной заявке). В конкретных воплощениях такие термины относятся к ослаблению или ингибированию рака или опухолеобразования. В других конкретных воплощениях такой термин относится к снижению и/или ослаблению прогрессирования, тяжести и/или продолжительности болезни "трансплантат-против-хозяина". В других конкретных воплощениях такие термины относятся к снижению и/или ослаблению прогрессирования, тяжести и/или продолжительности заболевания, которое восприимчиво к иммунному модулированию, такому как модулирование, возникающее в результате усиления активации Т-клеток, усиления пролиферации Т-клеток или усиления продуцирования цитокинов.

Термин "тубулизин" включает в себя как природные продукты, описанные как тубулизины, например, Sasse и др. и другими авторами, упомянутыми в сведениях о родственном уровне техники, так и аналоги тубулизина, описанные в опубликованной заявке на патент США № US 2011/0021568 А1. Тубулизины, раскрытые в настоящей заявке, отмечены в данном описании и могут включать тубулизины формул Т3 и Т4 и другие тубулизины, где концевой N-метилпиперидин заменен на незамещенный пиперидин, что позволяет образовывать амидную связь с линкером.

Термин "вариабельный домен" или "вариабельная область" относится к части легкой или тяжелой цепей антитела, которая в общем случае локализована в амино-концевой части легкой или тяжелой цепи, имеет длину примерно от 120 до 130 аминокислот в тяжелой цепи и примерно от 100 до 110 аминокислот в легкой цепи, используется для связывания каждого конкретного антитела с его конкретным антигеном и определяет специфичность каждого конкретного антитела к его конкретному антигену. Вариабельные домены сильно различаются по последовательности среди разных антител. Вариабельность в последовательности сконцентрирована в CDR, в то время как менее вариабельные части в вариабельном домене называются каркасными областями (FR). CDR легкой и тяжелой цепей в первую очередь отвечают за взаимодействие антитела с антигеном. В конкретных воплощениях вариабельная область представляет собой вариабельную область иммуноглобулина человека.

Термин "нумерация остатков в вариабельном домене по Kabat" или "нумерация аминокислотных положений по Kabat" и его вариации относятся к системе нумерации, используемой для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи при обобщении данных по антителам в работе Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991). При использовании этой системы нумерации фактическая линейная аминокислотная последовательность может содержать меньше аминокислот или содержать дополнительные аминокислоты в соответствии с укорачиванием FR или CDR вариабельного домена или вставкой в FR или CDR вариабельного домена. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать одну аминокислотную вставку (остаток 52а по Kabat) после остатка 52 в Н2 и встроенные остатки (например, остатки 82а, 82b и 82с и т.д. по Kabat) после остатка 82 в FR тяжелой цепи. Нумерация остатков по Kabat может быть определена для данного антитела посредством выравнивания участков гомологии последовательности антитела со "стандартной" последовательностью, пронумерованной по Kabat. Систему нумерации по Kabat, как правило, используют при ссылке на остаток в вариабельном домене (приблизительно остатки 1-107 легкой цепи и остатки 1-113 тяжелой цепи) (например, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). "Систему нумерации EU " или "EU-индекс", как правило, используют при ссылке на остаток в константной области тяжелой цепи иммуноглобулина (например, EU-индекс, приведенный в работе Kabat et al., выше). Термин "EU-индекс по Kabat" относится к нумерации остатков антитела EU, представляющего собой IgG1 человека. Если в данном описании не указано иное, то ссылки на номера остатков в вариабельном домене антител означают нумерацию остатков согласно системе нумерации по Kabat. Описаны и другие системы нумерации, в том числе, например, согласно базе данных AbM, Chothia, методу "контакта" и IMGT. Различные системы нумерации проиллюстрированы на ФИГ. 16А и 16В.

Термин "вариант", когда он используется в отношении C10orf54 или антитела к C10orf54, относится к пептиду или полипептиду, содержащему одну или более (например, от примерно 1 до примерно 25, от примерно 1 до примерно 20, от примерно 1 до примерно 15, от примерно 1 до примерно 10 или от примерно 1 до примерно 5) замен, делеций и/или вставок в аминокислотной последовательности по сравнению с нативной или немодифицированной последовательностью. Например, вариант C10orf54 может получаться в результате одного или более (например, от примерно 1 до примерно 25, от примерно 1 до примерно 20, от примерно 1 до примерно 15, от примерно 1 до примерно 10 или от примерно 1 до примерно 5) изменений в аминокислотной последовательности нативного C10orf54. Также в качестве примера, вариант антитела к C10orf54 может получаться в результате одного или более (например, от примерно 1 до примерно 25, от примерно 1 до примерно 20, от примерно 1 до примерно 15, от примерно 1 до примерно 10 или от примерно 1 до примерно 5) изменений в аминокислотной последовательности нативного или ранее не модифицированного антитела к C10orf54. Варианты могут иметь природное происхождение, как например аллельные или сплайс-варианты, или могут быть искусственно сконструированы. Полипептидные варианты могут быть получены на основе соответствующих молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих данные варианты. В конкретных воплощениях вариант C10orf54 или вариант антитела к C10orf54 по меньшей мере сохраняет функциональную активность C10orf54 или антитела к C10orf54, соответственно. В конкретных воплощениях вариант антитела к C10orf54 связывается с C10orf54 и/или проявляет антагонистическую активность в отношении C10orf54. В конкретных воплощениях вариант антитела к C10orf54 связывается с C10orf54 и/или проявляет агонистическую активность в отношении C10orf54. В определенных воплощениях данный вариант кодируется вариантом молекулы нуклеиновой кислоты с однонуклеотидным полиморфизмом (SNP), которая кодирует C10orf54 или VH- или VL-области или подобласти антитела к C10orf54.

Термин "вектор" относится к веществу, которое используют для введения молекулы нуклеиновой кислоты в клетку хозяина. Пригодные для использования векторы включают, например, экспрессирующие векторы, плазмиды, фаговые векторы, вирусные векторы, эписомы и искусственные хромосомы, которые могут включать в себя последовательности для отбора или селективные маркеры, пригодные для стабильной интеграции в хромосому клетки хозяина. Кроме того, векторы могут включать в себя один или более генов селектируемого маркера и соответствующие контролирующие экспрессию последовательности. Гены селектируемых маркеров, которые могут быть введены, обеспечивают, например, устойчивость к антибиотикам или токсинам, ауксотрофный дефицит комплемента или снабжение важнейшими питательными веществами, отсутствующими в культуральных средах. Контролирующие экспрессию последовательности могут включать конститутивный и индуцибельный промоторы, энхансеры транскрипции, терминаторы транскрипции и тому подобное, что хорошо известно в данной области техники. Когда две или более молекул нуклеиновой кислоты экспрессируются совместно (например, для обеих тяжелой и легкой цепей антитела), обе молекулы нуклеиновой кислоты могут быть встроены, например, в один экспрессирующий вектор или в разные экспрессирующие векторы. В случае одного экспрессирующего вектора, кодируемые нуклеиновые кислоты могут быть функционально связаны с одной общей контролирующей экспрессию последовательностью или могут быть связаны с разными контролирующими экспрессию последовательностями, такими как один индуцибельный промотор и один конститутивный промотор. Введение молекул нуклеиновой кислоты в клетку хозяина может быть подтверждено с использованием методов, хорошо известных в данной области техники. Такие методы включают, например, анализ нуклеиновых кислот, такой как нозерн-блоттинг, или амплификация мРНК с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), или иммуноблоттинг для анализа экспрессии генных продуктов, или другие подходящие аналитические методы тестирования экспрессии введенной нуклеиновокислотной последовательности или соответствующего ей генного продукта. Специалистам в данной области техники понятно, что молекула нуклеиновой кислоты экспрессируется в достаточном количестве для получения желаемого продукта (например, антитела к C10orf54, предложенного в данной заявке), и также понятно, что уровни экспрессии могут быть оптимизированы для получения достаточной экспрессии с использованием методов, хорошо известных в данной области техники.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На ФИГ. 1А и 1В показан уровень экспрессии белка C10orf54, который идентифицировали и количественно определяли с использованием анализа sTAg (профилирование поверхностных антигенов-мишеней) в образцах AML и ВММС (мононуклеарные клетки костного мозга) и в релевантном контроле.

На ФИГ. 2 показаны результаты FACS анализа 23 образцов первичных AML-BM-MNC (мононуклеарные клетки костного мозга) и 3 образцов нормальных ВМ-MNC с использованием антитела к C10orf54 76Е1.

На ФИГ. 3А и 3В показаны гуманизированные последовательности для VH-области мышиного моноклонального антитела 76Е1. Изображены SEQ ID NO: 1, 7, 8, 12-15 и 82.

На ФИГ. 4А и 4В показаны гуманизированные последовательности для VH-области мышиного моноклонального антитела 141А. Изображены SEQ ID NO: 2, 7, 8, 16-19 и 82.

На ФИГ. 5А и 5В показаны гуманизированные последовательности для VH-области мышиного моноклонального антитела 175А. Изображены SEQ ID NO: 3, 7, 8, 20-23 и 82.

На ФИГ. 6А и 6В показаны гуманизированные последовательности для VL-области мышиного моноклонального антитела 76Е1. Изображены SEQ ID NO: 4, 9, 10, 24, 25 и 94.

На ФИГ. 7А и 7В показаны гуманизированные последовательности для VL-области мышиного моноклонального антитела 141А. Изображены SEQ ID NO: 5, 10, 11, 26, 27 и 94.

На ФИГ. 8А и 8В показаны гуманизированные последовательности для VL-области мышиного моноклонального антитела 175А. Изображены SEQ ID NO: 6, 9, 10, 28, 29 и 94.

На ФИГ. 9 показаны псевдо-последовательности VH- и VL-доменов мышиных моноклональных антител 76Е1, 141А и 175А (SEQ ID NO: 1143-1148). CDR указаны жирным шрифтом.

На ФИГ. 10 показано, что обработка антителом к C10orf54 вызывает сильное ингибирование опухолевого роста в развившихся опухолях Kasumi-3.

На ФИГ. 11 показано, что обработка мышиным антителом к C10orf54 175А вызывает сильное ингибирование опухолевого роста в развившихся опухолях Kasumi-3.

На ФИГ. 12 показаны результаты анализа вторичных ADC с использованием антител к C10orf54 в анализе жизнеспособности клеток с использованием C10orf54-экспрессирующей линии саркомы.

На ФИГ. 13 и 14 показана активность неконъюгированных и конъюгированных с MMAF антител к C10orf54 в анализе жизнеспособности клеток с использованием C10orf54-экспрессирующих линий саркомы и исходной линии саркомы.

На Фиг. 15 показаны результаты обработки неконъюгированными и конъюгированными с MMAF антителами к C10orf54 в модели опухоли с использованием C10orf54-экспрессирующей линии саркомы и исходной линии саркомы.

На ФИГ. 16А и 16В показано выравнивание последовательностей вариабельных областей тяжелых цепей и вариабельных областей легких цепей мышиных антител к C10orf54, обозначенных как 76Е1, 141А и 175А (SEQ ID NO: 1-6). Границы CDR указаны согласно нумерации по Kabat, AbM, Chothia, методу "контакта" и IMGT.

На ФИГ. 17А и 17В показано выравнивание последовательностей вариабельных областей тяжелых цепей и вариабельных областей легких цепей типичных гуманизированных антител C10orf54, обозначенных как hu76E1, hu141A и hu175A (SEQ ID NO: 1135-1137 для тяжелых цепей; SEQ ID NO: 1139-1141 для легких цепей), и соответствующих консенсусных последовательностей между hu76E1 и hu175A(SEQ ID NO: 1138 для тяжелой цепи; SEQ ID NO: 1142 для легкой цепи). Остатки, указанные непосредственно ниже выравненных последовательностей, указывают на специфические остатки, которые могут варьировать выше в положениях "X" в консенсусной последовательности.

На ФИГ. 18A-18D показаны выравнивания VH- и VL-последовательностей антитела описанных в данной заявке по паратопной группе. Изображены SEQ ID NO: 1271-1280 для VH и VL. Также изображены SEQ ID NO: 1291, 1306, 1441, 1918, 1440, 1368, 1442, 1919, 1385, 1405, 1446, 1920, 1443, 1458, 1446, 1921, 1473, 1445, 1447, 1922, 1444, 1508, 1448 и 1923 для консенсусных CDR последовательностей в пределах паратопных групп.

На ФИГ. 19 показаны типичные последовательности антител зародышевой линии человека для гуманизации антител к C10orf54, описанных в данной заявке.

На ФИГ. 20А и 20В показаны выбранные VH- и VL-последовательности антител человека для гуманизации антител к C10orf54, описанных в данной заявке.

Изображены SEQ ID NO: 7, 1902-1904, 1907, 1905, 1906, 1912, 1910, 11, 1909, 1913 (в порядке сверху вниз) для VH- и VL-последовательностей.

На ФИГ. 21А показано графическое представление белка C10orf54 и конструкций химерных белков. Обозначение "человек" относится к конструкции СС1; "мышь" относится к конструкции СС2; "hsIGVmmSTALK" относится к конструкции СС5; "mmIGVhsSTALK" относится к конструкции СС6; "hsABCmmC10" относится к конструкции СС7; "mmabChsC10" относится к конструкции СС8; "hsC10mmLOOP" относится к конструкции СС9; и "mmC10hsLOOP" относится к конструкции СС10, как описано в примере 3. Также изображены результаты выравнивания аминокислотных последовательностей для C10orf54 человека (остатки 1-193 в SEQ ID NO: 1079) и C10orf54 мыши (остатки 1-190 в SEQ ID NO: 1243), в том числе эти остатки в консенсусной последовательности (SEQ ID NO: 1914).

На ФИГ. 21В показано филогенетическое древо для антител к C10orf54 для обоих генов VH и VL, включая распределение паратопов по подгруппам и поточный кластерный анализ (flow cluster analysis), как описано в примере 3. Обозначение "полноразмерный белок человека" относится к конструкции СС1; "крыса" относится к конструкции СС3; "полноразмерный белок яванского макака" относится к конструкции СС4; "hsIGVmmSTALK" относится к конструкции СС5; "hsABCmmC10" относится к конструкции СС7; "mmABChsC10" относится к конструкции СС8; "hsC10mmLOOP" относится к конструкции СС9; и "mmC10hsLOOP" относится к конструкции СС10, как описано в примере 3.

На ФИГ. 22А и 22В показаны гуманизированные последовательности для VH- и VL-областей мышиного моноклонального антитела 26А, соответственно. SEQ ID NO: 1902, 82, 1266 и 1529-1531 изображены на ФИГ. 22А, a SEQ ID NO: 1910, 94 и 1532-1534 изображены на ФИГ. 22В. Каждая из гуманизированной VH, обозначенной как h26AH1, и гуманизированной VL, обозначенной как h26AL1, представляет собой конструкции с "заменой CDR (CDR-swap)" без каких-либо изменений в каркасной области антитела человека. Следующие за этим последовательности содержат измененные аминокислотные остатки. # указывает на замену, препятствующую дезамидированию: Q/S/A/D.

На ФИГ. 23А и 23В показаны гуманизированные последовательности для VH- и VL-областей мышиного моноклонального антитела 128А, соответственно. SEQ ID NO: 1902, 82, 1258 и 1535-1537 изображены на ФИГ. 23А, a SEQ ID NO: 1907, 94, 1259 и 1538-1540 изображены на ФИГ. 23В. Каждая из гуманизированной VH, обозначенной как h128AH1, и гуманизированной VL, обозначенной как M28AL1, представляет собой конструкции с "заменой CDR" без каких-либо изменений в каркасной области антитела человека. Следующие за этим последовательности содержат измененные аминокислотные остатки. # указывает на замену, препятствующую дезамидированию: Q/S/A/D.

На ФИГ. 24А и 24В показаны гуманизированные последовательности для VH- и VL-областей мышиного моноклонального антитела 124А, соответственно. SEQ ID NO: 1902, 82, 1281, 1541 и 1542 изображены на ФИГ. 24А, a SEQ ID NO: 1911, 94, 1282, 1546 и 1547 изображены на ФИГ. 24В. Каждая из гуманизированной VH, обозначенной как h124AH1, и гуманизированной VL, обозначенной как h124AL1, представляет собой конструкции с "заменой CDR" без каких-либо изменений в каркасной области антитела человека. Следующие за этим последовательности содержат измененные аминокислотные остатки. # указывает на замену, препятствующую дезамидированию: Q/S/A/D.Q/S/A/D. @ указывает на замены, препятствующие образованию изоаспарагиновой кислоты: Q/S/A.

На ФИГ. 25А и 25В показаны гуманизированные последовательности для VH- и VL-областей мышиного моноклонального антитела 259А, соответственно. SEQ ID NO: 1902, 82, 1275 и 1543-1545 изображены на ФИГ. 25А, SEQ ID NO: 1905, 94, 1276, 1548 и 1549 изображены на ФИГ. 25В. Каждая из гуманизированной VH, обозначенной как h259AH1, и гуманизированной VL, обозначенной как h259AL1, представляет собой конструкции с "заменой CDR" без каких-либо изменений в каркасной области антитела человека. Следующие за этим последовательности содержат измененные аминокислотные остатки. # указывает на замену, препятствующую дезамидированию: Q/S/A/D. @ указывает на замены, препятствующие образованию изоаспарагиновой кислоты: E/S/A.

На ФИГ. 26А и 26В показана экспрессия C10orf54 в субпопуляциях MDSC. На ФИГ. 26А показано процентное содержание C10orf54 в субпопуляциях Lin^-/CD11b⁺MDSC. На ФИГ. 26В показано число копий C10orf54 для субпопуляций Lin^-/CD11b⁺MDSC. Популяции MDSC именуются как моноцитарные (CD14⁺/HLA^-DR^-), гранулоцитарные (CD15⁺/HLA^-DR^-) и незрелые миелоидные клетки (CD15^-/HLA^-DR^-).

На ФИГ. 27 показана диаграмма разброса данных для экспрессии C10orf54 в РВМС (мононуклеарные клетки периферической крови) для подгрупп пациентов с немелкоклеточным раком легкого (NSCLC).

На ФИГ. 28 показаны гистограммы пролиферации Т-клеток, ингибируемой под действием конструкции C10orf54-Fc. Показано встраивание ³Н-тимидина.

На ФИГ. 29 показаны гистограммы, демонстрирующие способность антител к C10orf54 ослаблять C10orf54-опосредуемую супрессию пролиферации наивных Т-клеток и секрецию цитокинов.

На ФИГ. 30А-30С показано сравнение популяций наивных и пан Т-клеток. Т-клетки из расчета 50000 клеток на одну лунку выращивали в планшетах, предварительно покрытых антителом к CD3 в концентрации 5 мкг/мл, и в присутствии C10orf54-Fc в различных концентрациях. Далее клетки подвергали совместной стимуляции, используя антитело к CD28 (αCD28) в различных концентрациях (в контрольные лунки антитело к CD3 не добавляли (концентрация αCD28 составляла 0 мкг/мл)). Величины представляют собой средние значения относительных единиц люминесценции (RLU)/лунка (n=4). На ФИГ. 30А показаны пан Т-клетки через 2 суток после стимуляции. На ФИГ. 30В показаны наивные Т-клетки через 2 суток после стимуляции. На ФИГ. 30С показаны наивные Т-клетки через 3 суток после стимуляции.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Согласно данному изобретению предложены антитела, которые связываются с C10orf54, в том числе с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. Такие антитела включают гуманизированные антитела к C10orf54. Также предложены антитела (например, гуманизированные антитела к C10orf54), которые конкурентно блокируют связывание антитела к C10orf54, предложенного в данной заявке, с полипептидом C10orf54. Антитела к C10orf54 (например, гуманизированные антитела к C10orf54), предложенные в данной заявке, также могут быть конъюгированы или слиты рекомбинантным путем с диагностическим агентом, детектируемым агентом или терапевтическим агентом (например, с получением конъюгата антитело-лекарственное средство). Кроме этого предложены композиции, содержащие антитело к C10orf54 (например, гуманизированное антитело к C10orf54). Например, детектируемый агент может представлять собой детектируемый зонд.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC10 (SEQ ID NO: 1251), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) и CC9 (SEQ ID NO: 1250).

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246) и CC8 (SEQ ID NO: 1249), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109 и 1115.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245) и CC5 (SEQ ID NO: 1246), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC8 (SEQ ID NO: 1249), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091 и 1097.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC9 (SEQ ID NO: 1250), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127 и 1133.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC9 (SEQ ID NO: 1250), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) и CC10 (SEQ ID NO: 1251).

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC10 (SEQ ID NO: 1251), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251).

Кроме того, в данной заявке предложены молекулы выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующие VH-цепь, VL-цепь, VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 антител к C10orf54, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. Кроме этого предложены векторы и клетки хозяина, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела к C10orf54, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. Также предложены способы получения антител, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Предложены способы применения антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54). Способы включают лечение, предупреждение или облегчение заболевания, расстройства или состояния, в том числе одного или более симптомов заболевания, расстройства или состояния, и заключаются во введении терапевтически эффективного количества антитела к C10orf54, в том числе конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), содержащего антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, субъекту, в результате чего осуществляется лечение, предупреждение или облегчение заболевания, расстройства или состояния, в том числе одного или более симптомов заболевания, расстройства или состояния. В некоторых воплощениях антитела к C10orf54 представляют собой гуманизированные антитела, которые связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. В одном из воплощений заболевание, расстройство или состояние вызывается или иным образом ассоциируется с C10orf54, в том числе вызывается или ассоциируется с C10orf54-экспрессирующими клетками (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)). В определенных воплощениях данное заболевание представляет собой рак, такой как лейкоз, рак мочевого пузыря, рак кожи, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак печени, рак почки, рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак пищевода или фибросаркому. В одном из воплощений лейкоз представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML). В других воплощениях данное заболевание представляет собой болезнь "трансплантат-против-хозяина" (GVHD). Дополнительные предложенные способы включают применение предложенного в данной заявке антитела к C10orf54, обладающего C10orf54-связывающей активностью, в случае C10orf54-экспрессирующих клеток, например, в виде неконъюгированного антитела или конъюгированного антитела (ADC), в том числе для ингибирования и/или уничтожения C10orf54-экспрессирующих клеток (например, антитела с противоопухолевой активностью для опосредования противоопухолевого эффекта). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, в том числе ADC, содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, ингибируют C10orf54-опосредуемую супрессорную активность в отношении Т-клеток (например, позволяя осуществлять эффективный противоопухолевый иммунный ответ). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки (например, C10orf54-несущие опухолевые клетки, миелоидные супрессорные клетки (MDSC), обладающие супрессивным действием дендритные клетки (обладающие супрессивным действием DC) и/или регуляторные Т-клетки (T_reg)), например, посредством проявления антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). В определенных воплощениях конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC), содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки, в том числе путем связывания с клетками, экспрессирующими C10orf54 (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)), например, позволяя осуществлять интернализацию цитотоксического лекарственного средства. В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Предложены дополнительные способы применения антитела к C10orf54.

Данные способы включают способы ингибирования роста клеток и/или уничтожения клеток, обладающих способностью экспрессировать C10orf54 на поверхности, включающие приведение в контакт клеток с эффективным количеством антитела к C10orf54 или конъюгатов антитело-лекарственное средство, предложенных в данной заявке. В одном из воплощений клетка представляет собой регуляторную Т-клетку (например, CD4⁺ Foxp3⁺ регуляторную Т-клетку). В других воплощениях клетка представляет собой миелоидную супрессорную клетку (например, CD11b⁺ или CD11b^high миелоидную супрессорную клетку) или обладающую супрессивным действием дендритную клетку (например, CD11b⁺ или CD11b^high дендритную клетку). В других воплощениях клетка представляет собой раковую или предраковую клетку. Дополнительные предложенные способы включают применение предложенного в данной заявке антитела к C10orf54, обладающего C10orf54-связывающей активностью, в случае C10orf54-экспрессирующих клеток, например, в виде неконъюгированного антитела или конъюгированного антитела (ADC), в том числе для ингибирования и/или уничтожения C10orf54-экспрессирующих клеток (например, антитела с противоопухолевой активностью для опосредования противоопухолевого эффекта). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, в том числе ADC, содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, ингибируют C10orf54-опосредуемую супрессорную активность в отношении Т-клеток (например, позволяя осуществлять эффективный противоопухолевый иммунный ответ). В определенных воплощениях, антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки (например, C10orf54-несущие опухолевые клетки, миелоидные супрессорные клетки (MDSC), обладающие супрессивным действием дендритные клетки (обладающие супрессивным действием DC) и/или регуляторные Т-клетки (T_reg)), например, посредством проявления антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). В определенных воплощениях конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC), содержащие антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, непосредственно уничтожают C10orf54-экспрессирующие клетки, в том числе путем связывания с клетками, экспрессирующими C10orf54 (например, опухолевыми клетками, миелоидными супрессорными клетками (MDSC), обладающими супрессивным действием дендритными клетками (обладающими супрессивным действием DC) и/или регуляторными Т-клетками (T_reg)), например, позволяя осуществлять интернализацию цитотоксического лекарственного средства. В любом из упомянутых выше воплощений, антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Данные способы включают способы модулирования иммунного ответа у субъекта, включающие введение эффективного количества антитела к C10orf54 (например, гуманизированного антитела к C10orf54), предложенного в данной заявке, субъекту. В одном из воплощений модулирование включает усиление активации Т-клеток. В другом воплощении модулирование включает усиление пролиферации Т-клеток. В другом воплощении модулирование включает усиление продуцирования цитокинов.

Данные способы включают способы детекции C10orf54 в образце, включающие приведение в контакт данного образца с антителом к C10orf54 (например, гуманизированным антителом к C10orf54), предложенным в данной заявке, таким как антитело, которое содержит детектируемый агент. В определенных воплощениях образец содержит клетку, экспрессирующую C10orf54 на своей поверхности.

Данные способы включают способы лечения раковых заболеваний, включающие введение субъекту антитела к C10orf54 или конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), содержащего антитело к C10orf54 (например, ADC формулы A-L-CTX, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, а СТХ представляет собой цитотоксический агент) в терапевтически эффективном количестве, в том числе в количестве, эффективном для уничтожения C10orf54-экспрессирующей клетки (например, опухолевой клетки, миелоидной супрессорной клетки (MDSC), обладающей супрессивным действием дендритной клетки (обладающей супрессивным действием DC) и/или регуляторной Т-клетки (T_reg)). В некоторых воплощениях рак представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML). В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

Данные способы включают способы уничтожения C10orf54-экспрессирующих клеток (например, опухолевых клеток, миелоидных супрессорных клеток (MDSC), обладающих супрессивным действием дендритных клеток (обладающих супрессивным действием DC) и/или регуляторных Т-клеток (T_reg)), включающие приведение в контакт C10orf54-экспрессирующей клетки (например, опухолевой клетки, миелоидной супрессорной клетки (MDSC), обладающей супрессивным действием дендритной клетки (обладающей супрессивным действием DC) и/или регуляторной Т-клетки (T_reg)) с антителом к C10orf54 или конъюгатом антитело-лекарственное средство (ADC), содержащим антитело к C10orf54 (например, ADC формулы A-L-CTX, где А представляет собой антитело, L представляет собой линкер, и СТХ представляет собой цитотоксический агент), в количестве, эффективном для уничтожения данной клетки (например, опухолевой клетки, миелоидной супрессорной клетки (MDSC), обладающей супрессивным действием дендритной клетки (обладающей супрессивным действием DC) и/или регуляторной Т-клетки (T_reg)). В некоторых воплощениях опухолевая клетка представляет собой AML клетку. В любом из упомянутых выше воплощений антитело к C10orf54 может представлять собой гуманизированное антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

В одном из воплощений в данной заявке предложен набор, содержащий антитело к C10orf54 (например, гуманизированное антитело к C10orf54), которое связывается с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54, предложенным в данной заявке. В некоторых воплощениях наборы содержат конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), где антитело представляет собой антитело к C10orf54 (например, гуманизированное антитело к C10orf54).

АНТИТЕЛА

В некоторых воплощениях в данной заявке предложены антитела, которые связываются с C10orf54, в том числе с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54. В некоторых воплощениях антителами к C10orf54 являются гуманизированные антитела, которые связываются с C10orf54, в том числе с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54 или эпитопом C10orf54.

В определенных воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 мышиного моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, как приведено в Таблице 2 и изображено на ФИГ. 3-8, 22А, 22В, 23А, 23В, 24А, 24В, 25А и 25В. Соответственно, согласно некоторым аспектам VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 3. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1252. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1254. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1256. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1258. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1260. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1262. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1266. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1268. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1271. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1273. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1375. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1277. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1279. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1281. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1283. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1285. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1287. В некоторых воплощениях VH-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1289. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 4. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 5. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1253. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1255. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1257. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1259. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1261. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1263. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1265. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1267. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1269. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1270. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1272. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1274. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1276. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1278. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1280. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1282. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1284. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1286. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1288. В некоторых воплощениях VL-домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1290.

В определенных воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из аминокислотной последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека или его варианта. Например, в некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3 и/или VH FR4, изображенные в последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, идентифицированные в Таблице 3. Соответственно, в некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3 и/или VH FR4 из зародышевой линии человека IGHV1-18 (SEQ ID NO: 7) и IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3 и/или VH FR4 из зародышевой линии человека IGHV3-48 (SEQ ID NO: 8) и IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3 и/или VH FR4 из зародышевой линии человека IGHV1-46*01 (SEQ ID NO: 1902) и IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3 и/или VH FR4 из зародышевой линии человека IGHV3-74*01 (SEQ ID NO: 1903) и IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VH FR1, VH FR2, VH FR3 и/или VH FR4 из зародышевой линии человека IGHV4-61*01 (SEQ ID NO: 1904) и IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV2-28 (SEQ ID NO: 9) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV1-39 (SEQ ID NO: 10) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV3-20 (SEQ ID NO: 10) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGHV1-46*01 (SEQ ID NO: 1920) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGHV3-74*01 (SEQ ID NO: 1903) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGHV4-61*01 (SEQ ID NO: 1904) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит V VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV2-28*01 (SEQ ID NO: 1905) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV2-29*02 (SEQ ID NO: 1906) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит V VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV1-39*01 (SEQ ID NO: 1907) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV3-20*01 (SEQ ID NO: 1908) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV3D-20*01 (SEQ ID NO: 1909) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV3-11*01 (SEQ ID NO: 1910) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV2-30*01 (SEQ ID NO: 1911) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV2-30*02 (SEQ ID NO: 1912) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94). В некоторых воплощениях антитело к C10orf54 содержит VL FR1, VL FR2, VL FR3 и/или VL FR4 из зародышевой линии человека IGKV4-1*01 (SEQ ID NO: 1913) и IGKJ2-1 (SEQ ID NO: 94).

В определенных воплощениях, антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержат VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность, идентифицированную в Таблице 4 или на ФИГ. 3-8, 22А, 22В, 23А, 23В, 24А, 24В, 25А или 25В, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность, идентифицированную в Таблице 4 или на ФИГ. 3-8, 22А, 22В, 23А, 23В, 24А, 24В, 25А или 25В.

Соответственно, в некоторых воплощениях антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержат VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 20, 21, 22, 23, 1529-1531, 1535-1537 или 1541-1545, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28, 29, 1532-1534, 1538-1540 или 1546-1549. В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 20, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 21, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 22, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 23, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 20, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 21, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 22, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 23, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29.

В некоторых воплощениях антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержат VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 12, 13, 14 или 15, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24 или 25. Соответственно, согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 12, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 13, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 14, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 15, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 12, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 13, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 14, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orF54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 15, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25.

В некоторых воплощениях антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orF54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержат VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 16, 17, 18 или 19, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26 или 27. Соответственно, согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 16, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 17, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 18, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 19, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 16, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 17, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 18, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27. Согласно одному из аспектов, антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 19, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27.

В некоторых воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, которые связываются с эпитопом C10orf54, содержат VH-область с VH CDR1, VH CDR2 и/или VH CDR3, которые имеют аминокислотную последовательность, идентифицированную в приведенных ниже Таблицах 5-11 или Таблицах 12-33; и/или VL-область с VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3, которые имеют аминокислотную последовательность, идентифицированную в приведенных ниже Таблицах 5-11 или Таблицах 12-33.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38. В определенных воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 6. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. В следующих воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29. В некоторых воплощениях данное антитело содержит (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. Подразумевается, что в той степени, в которой антитело, предложенное в данном изобретении, является антителом, которое "связывается с эпитопом C10orf54", такие антитела также связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида или их антигеном.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 50; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38. В определенных воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 6. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. В следующих воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29. В некоторых воплощениях антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 50; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 99; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38. В определенных воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 6. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28. В следующих воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 29. В некоторых воплощениях антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 99; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47.

В другом воплощении антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит: VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 20. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 21. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 22. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 23.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 31; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 31; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 321; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 321; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 835; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 24. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 25. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 835; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41.

В некоторых воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит: VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 12. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 13. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 14. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VH-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 15.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 34; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 34; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 49; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 49; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1070; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44. В других воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 26. В другом воплощении данное антитело дополнительно содержит VL-область, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 27. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1070; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44.

Как будет понятно специалисту в данной области техники, границы между CDR и каркасными последовательностями для любой из VH-областей и VL-областей, описанных в данной заявке, можно определить, используя любой из хорошо известных в данной области техники методов, включая IMGT, по Kabat, по Chothia, по методу "контакта", АЬМ или по Kabat плюс Chothia (например, согласно "Типичной системе", как изложено в данном описании). Соответственно, любое антитело к C10orf54, имеющее одну или более CDR или каркасных последовательностей, описанных в данной заявке, включает CDR или каркасную аминокислотную последовательность, определенную согласно IMGT, IMGT, по Kabat, по Chothia, по методу "контакта", АbМ или по Kabat плюс Chothia. Например, типичные CDR последовательности как для VH-, так и для VL-областей, которые могут быть включены в антитело к C10orf54 по изобретению, приведены в Таблицах 12-33 (также см., например., Таблицы 5-11).

В определенных воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит: VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30, 33, 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335 и 1717-1720; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 31, 34, 37, 849, 1082, 1088, 1092, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1118, 1124, 1129, 1134, 1161, 1336-1344, 1348-1384, 1556-1559, 1829-1847 и 1917; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32, 35, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 и 1385-1424.

В определенных воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит: VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 45, 253-271, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 и 1915; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 43, 46, 157, 843-846, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 и 1898-1900; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41, 44, 47, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 и 1493-1525.

В определенных воплощениях данное антитело содержит (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30, 33, 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335 и 1717-1720; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 31, 34, 37, 849, 1082, 1088, 1092, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1118, 1124, 1129, 1134, 1161, 1336-1344, 1348-1384, 1556-1559, 1829-1847 и 1917; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32, 35, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 и 1385-1424; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 45, 253-271, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 и 1915; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 43, 46, 157, 843-846, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 и 1898-1900; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41, 44, 47, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 и 1493-1525.

Подразумевается, что в той степени, в которой антитело, предложенное в данном изобретении, является антителом, которое "связывается с эпитопом C10orf54", такие антитела также связываются с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида или их антигеном.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC10 (SEQ ID NO: 1251), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO:1243), СС3 (SEQ ID NO:1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) и CC9 (SEQ ID NO: 1250). Согласно некоторым аспектам, данное антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 1291-1305, 1311-1315 и 1321-1325; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37, 849, 1082, 1088, 1093, 1098, 1336-1344, 1348-1367, 1373, 1374 и 1556-1559; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 38, 1083, 1089, 1094, 1385-1404 и 1409-1412; и/или (b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 45, 1102, 1108, 1113, 1425-1430, 1432-1457, 1681-1684 и 1915; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 157, 1103, 1114, 1473-1481, 1526-1528, 1630-1633 и 1685-1688; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1493-1507, 1511-1516 и 1523-1525. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 или 1295; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1336, 1337, 1338, 1339 или 1340; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1385, 1386,1387 или 1388; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1425, 1426, 1427 или 1428; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1473, 1474 или 1475; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1493, 1494 или 1495. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 или 1295; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1341, 1342, 1338, 1343 или 1344; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1389, 1390, 1391 или 1392; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1425, 1426, 1427 или 1428; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1473, 1474 или 1475; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1496, 1497 или 1498. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 или 1295; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1348, 1337, 1338, 1349 или 1350; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 или 1388; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1429, 1426, 1427, 1430, 1681, 1682, 1683 или 1684; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1473, 1474, 1475, 1685, 1686, 1687 или 1688; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1493, 1494 или 1495. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 или 1295; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1348, 1337, 1338, 1349 или 1350; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 или 1388; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1429, 1426, 1427 или 1430; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1473, 1474 или 1475; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1493, 1494 или 1495. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 или 1295; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1351, 1337, 1338, 1352 или 1353; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 или 1388; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1425, 1426, 1427 или 1428; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1473, 1474 или 1475; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1493, 1494 или 1495. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30, 1099, 1104, 1105 или 1110; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1359, 1360, 1361, 1362 или 1363; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1397, 1398, 1399 или 1400; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1437, 1451, 1438, 1452, 1451, 1439, 1453, 1450 или 1915; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1526, 1479, 1527, 1480, 157, 1528 или 1481; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1523, 1502, 1524, 1503, 1525 или 1504. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1301, 1302, 1303, 1304 или 1305; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1364, 1365, 1361, 1366 или 1367; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1401, 1402, 1403 или 1404; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1454, 1455, 1456 или 1457; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40, 1103 или 1114; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1505, 1506 или 1507. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1311, 1312, 1313, 1314 или 1315; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1093 или 1098; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1409, 1410, 1411 или 1412; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45, 1102, 1108 или 1113; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40, 1103 или 1114; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1511, 1512 или 1513. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1321, 1322, 1323, 1324 или 1325; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 849, 1082, 1088, 1373 или 1374; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38, 1083, 1089 или 1094; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45, 1102, 1108 или 1113; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40, 1103 или 1114; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1514, 1515 или 1516.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CCS (SEQ ID NO: 1246) и CC8 (SEQ ID NO: 1249), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109 и 1115. Согласно некоторым аспектам, данное антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30, 1099, 1110, 1104, 1105, 1296-1300, 1306-1310, 1316-1320 и 1717-1720; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 31, 37, 1082, 1088, 1092, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1354-1358, 1368-1372, 1829-1847 и 1917; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1393-1396, 1405-1408, 1413, 1414; и/или (b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 45, 253-271, 1102, 1108, 1113, 1431-1434, 1458-1465, 1744-1822, 1878-1896; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 843-846, 1103, 1114, 1476-1478, 1482-1487, 1898-1900; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41, 1109, 1115, 1499-1501, 1508-1513. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1296, 1297, 1298, 1299 или 1300; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1354, 1355, 1356, 1357 или 1358; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1393, 1394, 1395 или 1396; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1431, 1432, 1433 или 1434; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1476, 1477 или 1478; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1499, 1500 или 1501. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1306, 1307, 1308, 1309 или 1310; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1368, 1369, 1370, 1371 или 1372; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1405, 1406, 1407 или 1408; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1458, 1459, 1460 или 1461; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1482, 1483 или 1484; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1508, 1509 или 1510. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1306, 1307, 1308, 1309 или 1310; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1368, 1369, 1370, 1371, 1372, 1829, 1830, 1831, 1832, 1833, 1834, 1835, 1836, 1837, 1838, 1839, 1840, 1841, 1842, 1843, 1844, 1845, 1846 или 1847; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1405, 1406,1407 или 1408; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1458, 1459, 1460, 1461, 1878, 1879, 1880, 1881, 1882, 1883, 1884, 1885, 1886, 1887, 1888, 1889, 1890, 1891, 1892, 1893, 1894, 1895 или 1896; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1485, 1486, 1487, 1897, 1898, 1899 или 1900; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1508, 1509 или 1510. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1316, 1317, 1318, 1319 или 1320; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1092 или 1098; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38, 1083, 1089 или 1094; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1462, 1463, 1464 или 1465; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40, 1103 или 1114; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1511, 1512 или 1513. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1316, 1317, 1318, 1319, 1320, 1717, 1718, 1719 или 1720; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1917 или 1098; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1413, 1414, 1089 или 1094; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1462, 1463, 1464, 1465, 1744, 45, 1745, 1746, 1747, 1748, 1749, 1750, 1751, 1752, 1753, 1754, 1755, 1756, 1757, 1758, 1759, 1760, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 1761, 1762, 1763, 1764, 1765, 1766, 1767, 1768, 1769, 1770, 1771, 1772, 1773, 1774, 1775, 1776, 1777, 1778, 1779, 1780, 1781, 1782, 1783, 1784, 1785, 1786, 1787, 260, 1788, 1789, 1790, 1791, 264, 268, 1792, 1793, 1794, 1795, 1796, 261, 1797, 1798, 1799, 1800, 265, 269, 1801, 1802, 1803, 1804, 1805, 262, 1806, 1807, 1808, 1809, 266, 270, 1810, 1811, 1812, 1813, 1814, 263, 1815, 1816, 1817, 1818, 267, 271, 1819, 1820, 1821 или 1822; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40, 1103, 1114, 843, 844, 846 или 845; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1511, 1512 или 1513.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245) и CC5 (SEQ ID NO: 1246), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC8 (SEQ ID NO: 1249), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091 и 1097.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC9 (SEQ ID NO: 1250), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС3 (SEQ ID NO:1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, такое антитело не содержит одну или более последовательностей CDR, выбранных из группы, состоящей из 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127 и 1133. Согласно некоторым аспектам, данное антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 33, 1117, 1122, 1123 и 1128; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34, 1082, 1088, 1118, 1124, 1129 и 1134; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 35, 1119, 1125, 1130, 1415 и 1416; и/или (b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 1120, 1126 и 1131; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43, 1121 и 1132; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44, 1127 и 1133. Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33, 1117, 1122, 1123 или 1128; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 34, 1082, 1088, 1129 или 1134; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35, 1415, 1125 или 1416; и/или (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42, 1120, 1126 или 1131; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43, 1121 или 1132; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44, 1127 или 1133.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС3 (SEQ ID NO: 1244), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC9 (SEQ ID NO: 1250), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO: 1243), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1326, 1327, 1328, 1329 или 1330; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1375, 1376, 1377, 1378 или 1379; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1417, 1418, 1419 или 1420; и/или (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1466, 1467 или 1468; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1488, 1489 или 1490; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1517, 1518 или 1519.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, связывается с первой группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС1 (SEQ ID NO: 1079), СС4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) и CC10 (SEQ ID NO: 1251), и не связывается со второй группой белков или химерных белков C10orf54, обозначенных как СС2 (SEQ ID NO:1243), СС3 (SEQ ID NO:1244), СС6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) и CC10 (SEQ ID NO: 1251). Согласно некоторым аспектам, данное антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1331, 1332, 1333, 1334 или 1335; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1380, 1381, 1382, 1383 или 1384; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1421, 1422, 1423 или 1424; и/или (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1469, 1470, 1471 или 1472; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1491, 1488 или 1492; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1520, 1521 или 1522.

Согласно аминокислотным последовательностям, описанным в Таблицах 12-33, в некоторых воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 33, 1117, 1122, 1123, 1128 или 1291-1335; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 34, 1118, 1124, 1129, 1134 или 1336-1384; и/или (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38, 1083, 1089, 1094, 32, 1101, 1107, 1112, 35, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424. В определенных воплощениях антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 42, 1120, 1126, 1131 или 1425-1472; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46, 1085, 1096, 40, 1103, 1114, 43, 1121 и 1132; и/или (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47, 1091, 1097, 41, 1109, 1115, 44, 1127, 1133 или 1493-1525. В некоторых воплощениях антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 33, 1117, 1122, 1123, 1128 или 1291-1335; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 34, 1118, 1124, 1129, 1134 или 1336-1384; и/или (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38, 1083, 1089, 1094, 32, 1101, 1107, 1112, 35, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 42, 1120, 1126, 1131 или 1425-1472; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46, 1085, 1096, 40, 1103, 1114, 43, 1121, 1132, 1473-1492 или 1526-1528; и/или (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47, 1091, 1097, 41, 1109, 1115, 44, 1127, 1133 или 1493-1525.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1081; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1082; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1083. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1084; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1085; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1081; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1082; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1083; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1084; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1085; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1086; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1086; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1087; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1088; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1089. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1090; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1085; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1091. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1087; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1088; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1089; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1090; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1085; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1091.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1092; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1093; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1094. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1095; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1096; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1097. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1092; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1093; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1094; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1095; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1096; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1097.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1098; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1098; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 38; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 46; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 47.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1099; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1100; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1101. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1102; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1103; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1099; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1100; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1101; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1102; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1103; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1104; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 31; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1104; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 31; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1105; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1106; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1107. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1108; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1103; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1109. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1105; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1106; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1107; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1108; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1103; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1109.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1110; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1111; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1112. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1113; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1114; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1115. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1110; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1111; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1112; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1113; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1114; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1115.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1116; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 30; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1116; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 32; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 45; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 41.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1117; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1118; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1119. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1120; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1121; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1117; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1118; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1119; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1120; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1121; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1122; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 34; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1122; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 34; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1123; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1124; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1125. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1126; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1121; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1127. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1123; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1124; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1125; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1126; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1121; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1127.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1128; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1129; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1130. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1131; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1132; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1133. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1128; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1129; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1130; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1131; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1132; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1133.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1134; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях данное антитело дополнительно содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44. В одном из воплощений антитело содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 33; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1134; и (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 42; (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 43; и (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 44.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело к C10orf54, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит одну или более консенсусных последовательностей, происходящих из родственных антител, которые изображены на ФИГ. 17А и 17В. Описанный в данной заявке термин "консенсусная последовательность" относится к аминокислотным последовательностям, содержащим консервативные аминокислоты, общие для ряда последовательностей, и вариабельные аминокислоты, которые варьируют в пределах определенных аминокислотных последовательностей. Предложенные консенсусные последовательности CDR включают CDR, соответствующие CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и/или CDRL3. Консенсусные последовательности CDR антител кС10огт54 показаны на ФИГ. 17А и 17В. Соответственно, в некоторых воплощениях гуманизированное антитело к C10orf54 содержит VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность GYTFSX₁X₂WIE (SEQ ID NO: 1149), где X₁ представляет собой R или Т, а Х₂ представляет собой Y или Н; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность EILPGSGSTX₁YNEKFKG (SEQ ID NO: 1150), где X₁ представляет собой N или S; и/или (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность xxxxxxxxxX₁X₂Y (SEQ ID NO: 1151), где x представляет собой остаток любой аминокислоты, X₁ представляет собой М или F, а Х₂ представляет собой G или D. В определенных воплощениях гуманизированное антитело к C10orf54 содержит VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 45); (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность KX₁SNRFS (SEQ ID NO: 1152), где X₁ представляет собой V или L; и/или (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность FQGSHX₁PX₂T (SEQ ID NO: 1153), где Х₁ представляет собой V или F, а Х₂ представляет собой W или Y. В определенных воплощениях гуманизированное антитело к C10orf54 содержит: (а) VH-область, содержащую: (1) VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность GYTFSX₁X₂WIE (SEQ ID NO: 1149), где X₁ представляет собой R или Т, а Х₂ представляет собой Y или Н; (2) VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность EILPGSGSTX₁YNEKFKG (SEQ ID NO: 1150), где X₁ представляет собой N или S; и/или (3) VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность xxxxxxxxxX¹X₂Y (SEQ ID NO: 1151), где x представляет собой остаток любой аминокислоты, X₁ представляет собой М или F, а Х₂ представляет собой G или D; и (b) VL-область, содержащую: (1) VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 45); (2) VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность KX₁SNRFS (SEQ ID NO: 1152), где X₁ представляет собой V или L; и/или (3) VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность FQGSHX₁PX₂T (SEQ ID NO: 1153), где X₁ представляет собой V или F, а Х₂ представляет собой W или Y.

В некоторых воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат VH-область, которая содержит или в состав которой входит VH-домен. В других воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат VH-область, которая содержит или в состав которой входит VH-цепь. В некоторых воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат VL-область, которая содержит или в состав которой входит VL-домен. В других воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат VL-область, которая содержит или в состав которой входит VL-цепь. В некоторых воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, имеют комбинацию (1) VH-домена или VH-цепи; и/или (2) VL-домена или VL-цепи.

В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, содержит шесть или состоит из шести CDR, например, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3, которые идентифицированы в Таблицах 5-33. В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, может содержать меньше шести CDR. В некоторых воплощениях данное антитело содержит один, два, три, четыре или пять или состоит из одного, двух, трех, четырех или пяти CDR, выбранных из группы, состоящей из VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3. В конкретных воплощениях данное антитело содержит один, два, три, четыре или пять или состоит из одного, двух, трех, четырех или пяти CDR, выбранных из группы, состоящей из VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3 мышиного моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, описанного в данной заявке, или их гуманизированного варианта, которые идентифицированы в Таблицах 5-33. Соответственно, в некоторых воплощениях данное антитело содержит один, два, три, четыре или пять или состоит из одного, двух, трех, четырех или пяти CDR, выбранных из любого из VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3, идентифицированных в Таблицах 5-33.

В некоторых воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат один или более (например, один, два или три) VH CDR, перечисленных в Таблицах 5-33. В других воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат один или более (например, один, два или три) VL CDR, перечисленных в Таблицах 5-33. В следующих воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, содержат один или более (например, один, два или три) VH CDR, перечисленных в Таблицах 5-33 и один или более CDR, перечисленных в Таблицах 5-33. Соответственно, в определенных воплощениях антитела содержат VH CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 и 1717-1720. В другом воплощении антитела содержат VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 и 1917. В другом воплощении антитела содержат VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 и 1385-1424. В определенных воплощениях антитела содержат VH CDR1, и/или VH CDR2, и/или VH CDR3, независимо выбранные из VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, как показано для любой из VH-областей, приведенных в Таблицах 5-33. В определенных воплощениях антитела содержат VL CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 и 1915. В другом воплощении антитела содержат VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 и 1898-1900. В другом воплощении антитела содержат VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 и 1493-1525. В определенных воплощениях антитела содержат VL CDR1, и/или VL CDR2, и/или VL CDR3, независимо выбранных из VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, как показано для любой из VL-областей, приведенных в Таблицах 5-33.

Кроме того, в данной заявке предложены антитела, содержащие один или более VH CDR и один или более (например, один, два или три) VL CDR, перечисленных в Таблицах 5-33. В частности, в данной заявке предложено антитело, содержащее VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720) и VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917) и VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915); VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917) и VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271,42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271,42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VLCDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681 -1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR1 (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 или 1717-1720), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); VH CDR2 (SEQ ID NO: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 или 1917), VH CDR3 (SEQ ID NO: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 или 1385-1424), VL CDR1 (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 или 1915), VL CDR2 (SEQ ID NO: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 или 1898-1900) и VL CDR3 (SEQ ID NO: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 или 1493-1525); или любую их комбинацию, выбранную из VH CDR (SEQ ID NO: 36, 30, 59-62, 33, 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894 1070-1078, 38, 32, 319, 35, 883-885, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125 и 1130) и VL CDR (SEQ ID NO: 45, 253-271, 42, 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 47, 41, 44, 1056-1058, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127 и 1133), перечисленных в Таблицах 5-33.

В определенных воплощениях гуманизированные антитела к C10orf54 связываются с полипептидом, фрагментом полипептида или эпитопом C10orf54 с аффинностью, сопоставимой с аффинностью одного или более мышиных монокпональных антител, обозначенных как 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А. Кроме того, данные гуманизированные антитела к C10orf54 могут содержать одну, две, три или четыре человеческие или гуманизированные каркасные области в вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина и/или одну, две, три или четыре человеческие или гуманизированные каркасные области в вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина. Также предложены FR области тяжелой и/или легкой цепи, которые содержат одну или более обратных мутаций, при которых остаток FR иммуноглобулина человека заменен на соответствующий остаток, имеющийся в родительской мышиной тяжелой или легкой цепи, или на другой сопоставимый остаток. Согласно некоторым аспектам, аминокислотные последовательности для CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой и легкой цепей для некоторых гуманизированных антител к C10orf54 также могут включать одну или более мутаций, при которых в CDR введен остаток, как идентифицировано в Таблицах 5-33. Аминокислотные последовательности для FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой и легкой цепей, которые могут быть использованы для гуманизированных антител к C10orf54, идентифицированы в Таблицах 5-11 и приведены на ФИГ. 3-9, 17 и 22-25.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область, которая содержит: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 и 1828; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 и 323-326; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 и 1848-1875; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 54, 320, 168054, 320, 1680. Соответственно, в некоторых воплощениях гуманизированное антитело содержит VH-область, которая включает VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 и 1828. В некоторых воплощениях гуманизированное антитело содержит VH-область, которая включает VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 и 323-326. В некоторых воплощениях гуманизированное антитело содержит VH-область, которая включает VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 и 1848-1875. В некоторых воплощениях гуманизированное антитело содержит VH-область, которая включает VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 54, 320, 1680.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VL-область, которая содержит: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 и 1878; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 и 1823-1826; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 и 1901; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78. Соответственно, согласно некоторым аспектам, гуманизированное антитело содержит VL-область, которая включает VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 и 1878. Согласно некоторым аспектам, гуманизированное антитело содержит VL-область, которая включает VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 и 1823-1826. Согласно некоторым аспектам, гуманизированное антитело содержит VL-область, которая включает VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 и 1901. Согласно некоторым аспектам, гуманизированное антитело содержит VL-область, которая включает VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит VH-область и VL-область, при этом VH-область дополнительно содержит: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 и 1828; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 и 323-326; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 и 1848-1875; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 54, 320, 168054, 320, 1680; и при этом VL-область дополнительно содержит: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 и 1878; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 и 1823-1826; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 и 1901; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78.

Кроме того, в данной заявке предложены антитела, содержащие одну или более (например, одну, две, три или четыре) VH FR и одну или более VL FR, приведенных в Таблицах 5-11. В частности, в данной заявке предложено антитело, содержащее VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901; VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 168054, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR1 (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 или 1828), VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); VH FR2 (SEQ ID NO: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64 или 323-326), VH FR3 (SEQ ID NO: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 или 1848-1875), VH FR4 (SEQ ID NO: 54, 320, 1680), VL FR1 (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 или 1878), VL FR2 (SEQ ID NO: 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 или 1823-1826), VL FR3 (SEQ ID NO: 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 или 1901) и VL FR4 (SEQ ID NO: 78); или любую их комбинацию из VH FR (SEQ ID NO: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 52, 106, 56, 122-124, 63, 64, 323-326, 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882 903-1030, 54, 320, 1680) и VL FR (SEQ ID NO: 75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067, 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069 или 78), приведенных в Таблицах 5-11.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VH-область, содержащую: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 1550-1555, 105 и 1649-1652; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52 и 106; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1560-1614 и 1653-1679; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54 и 1680. В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VL-область, содержащую: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1615-1629, 79 и 278; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92, 80 и 284; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1634-1648, 81, 1689-1714, 285, 286 и 288; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78. В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VH-область и VL-область, при этом VH-область дополнительно содержит: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 1550-1555, 105 и 1649-1652; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52 и 106; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1560-1614 и 1653-1679; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54 и 1680; и при этом VL-область дополнительно содержит: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1615-1629, 79 и 278; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92, 80 и 284; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1634-1648, 81, 1689-1714, 285, 286 и 288; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VH-область, содержащую: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 39, 1715, 1716, 1550, 1827, 1828, 105, 55 и 115-121; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 63, 64, 56, 323-326 и 122-124; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1560, 1561, 1721-1742, 1566, 1567, 1571, 1575, 1585, 1562, 1563, 1848-1875, 1565-1568, 1570-1572, 1574, 1575, 1577, 1578, 1581, 1582, 1584, 1585, 1587, 1591, 1593, 1594, 1597, 1602, 1603, 53, 107, 96-98, 292-318, 57 и 327-833; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54 и 320. В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VL-область, содержащую: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1743, 75, 252, 1878, 1877, 79 и 277- 283; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1823-1826, 76, 80 и 284; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, 276, 1901, 81 и 285-291; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78. В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VH-область и VL-область, при этом VH-область дополнительно содержит: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 39, 1715, 1716, 1550, 1827, 1828, 105, 55 и 115-121; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 63, 64, 56, 323-326 и 122-124; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1560, 1561, 1721-1742, 1566, 1567, 1571, 1575, 1585, 1562, 1563, 1848-1875, 1565-1568, 1570-1572, 1574, 1575, 1577, 1578, 1581, 1582, 1584, 1585, 1587, 1591, 1593, 1594, 1597, 1602, 1603, 53, 107, 96-98, 292-318, 57 и 327-833; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54 и 320; и при этом VL-область дополнительно содержит: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1743, 75, 252, 1878, 1877, 79 и 277- 283; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1823-1826, 76, 80 и 284; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, 276, 1901, 81 и 285-291; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78.

В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VH-область, содержащую: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 39, 105, 58, 55, 115-121 и 895-902; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 56 и 122-124; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 107-113, 859-882, 57, 125-251 и 903-1030; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 54. В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VL-область, содержащую: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 91, 1031-1037, 79 и 1059-1061; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92, 1038-1044, 80, 284 и 1062-1067; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 93, 1049-1055, 81, 1068, 285 и 1069; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78. В определенных воплощениях гуманизированное антитело, которое связывается с группой А белков или химерных белков C10orf54, описанных в данной заявке, содержит VH-область и VL-область, при этом VH-область дополнительно содержит: (1) VH FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 39, 105, 58, 55, 115-121 и 895-902; (2) VH FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 106, 56 и 122-124; (3) VH FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 107-113, 859-882, 57, 125-251 и 903-1030; и/или (4) VH FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 54; и при этом VL-область дополнительно содержит: (1) VL FR1, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 91, 1031-1037, 79 и 1059-1061; (2) VL FR2, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92, 1038-1044, 80, 284 и 1062-1067; (3) VL FR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 93, 1049-1055, 81, 1068, 285 и 1069; и/или (4) VL FR4, имеющую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 78.

В некоторых воплощениях антителами, предложенными в данной заявке, являются антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54) и включают антитела, содержащие производные VH-доменов, VH CDR, VL-доменов и VL CDR, описанные в данной заявке, которые связваются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54). Кроме того, в данной заявке предложены антитела, содержащие производные мышиного моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, при этом данные антитела связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54). Стандартные методы, известные специалистам в данной области техники, можно использовать для введения мутаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело или его фрагмент, предложенные в данной заявке, включая, например, сайт-специфический мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез, приводящие к введению аминокислотных замен. В определенных воплощениях данные производные включают менее 25 аминокислотных замен, менее 20 аминокислотных замен, менее 15 аминокислотных замен, менее 10 аминокислотных замен, менее 5 аминокислотных замен, менее 4 аминокислотных замен, менее 3 аминокислотных замен или менее 2 аминокислотных замен по сравнению с исходной молекулой. В конкретном воплощении данные производные содержат консервативные аминокислотные замены, выполненные в одном или более положениях для несущественных по предварительным оценкам аминокислотных остатков. "Консервативная аминокислотная замена" представляет собой замену, при которой аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, имеющий боковую цепь с тем же зарядом. Семейства аминокислотных остатков, имеющих боковые цепи с одинаковыми зарядами, определены в данной области техники. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серии, треонин, тирозин, цистеин), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Альтернативно, мутации могут быть введены случайным образом на протяжении всей или части кодирующей последовательности, например, с использованием насыщающего мутагенеза, и может быть проведен скрининг полученных мутантов по биологической активности для идентификации мутантов, которые сохраняют активность. После проведения мутагенеза кодируемый белок может быть экспрессирован, и можно определить активность этого белка.

В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности мышиного моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А либо его антигенсвязывающего фрагмента, такого как VH-домен или VL-домен. В одном из воплощений антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12-29. В другом воплощении антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности представленной в Таблицах 5-33. В еще одном воплощении антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит аминокислотную последовательность VH CDR и/или VL CDR, которая по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности VH CDR, представленной в Таблицах 5-33, и/или аминокислотной последовательности VL CDR, представленной в Таблицах 5-33.

В определенных воплощениях, антитела, используемые в соответствие со способами, предложенными в данной заявке, обладают высокой аффинностью в отношении полипептида или фрагмента полипептида C10orf54 или его эпитопа. В одном из воплощений, антитела, используемые в соответствие со способами, предложенными в данной заявке, обладают более высокой аффинностью к антигену C10orf54, чем известные антитела (например, имеющиеся в продаже моноклональные антитела, обсуждаемые в другом месте в данном описании). В конкретном воплощении, антитела, используемые в соответствие со способами, предложенными в данной заявке, обладают 2-10-кратной (или выше) более высокой аффинностью в отношении антигена C10orf54, чем известное антитело к C10orf54, по оценкам с использованием методов, изложенных в данном описании или известных специалисту в данной области техники (например, в анализе с применением BIAcore). В соответствии с этими воплощениями аффинность антител, в одном из воплощений, оценивают в анализе с применением BIAcore.

В конкретном воплощении антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит аминокислотную последовательность VH-домена и/или аминокислотную последовательность VL-домена, кодируемую нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется с (1) комплементарной нуклеотидной последовательностью, кодирующей любой из VH- и/или VL-доменов, представленной в Таблицах 2 и 4-10, в жестких условиях (например, в условиях гибридизации с ДНК на фильтрах в 6х растворе хлорида натрия/цитрата натрия (SSC) при примерно 45°С с последующими одной или более промывками в 0,2xSSC/0,1% SDS при примерно 50-65°С), в особо жестких условиях (например, в условиях гибридизации с нуклеиновой кислотой на фильтрах в 6xSSC при примерно 45°С с последующими одной или более промывками в 0,1xSSC/0,2% SDS при примерно 68°С) или в других жестких условиях гибридизации, которые известны специалистам в данной области техники (см., например, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York на страницах 6.3.1-6.3.6 и 2.10.3).

В другом воплощении антитело, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержит аминокислотную последовательность VH CDR или аминокислотную последовательность VL CDR, кодируемые нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется с комплементарной нуклеотидной последовательностью, кодирующей любой из VH CDR и/или VL CDR, представленной в Таблицах 2 и 4-10, в жестких условиях (например, в условиях гибридизации с ДНК на фильтрах в 6xSSC при примерно 45°С с последующими одной или более промывками в 0,2xSSC/0,1% SDS при примерно 50-65°С), в особо жестких условиях (например, в условиях гибридизации с нуклеиновой кислотой на фильтрах в 6xSSC при примерно 45°С с последующими одной или более промывками в 0,1xSSC/0,2% SDS при примерно 68°С) или в других жестких условиях гибридизации, которые известны специалистам в данной области техники (см., например, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York на страницах 6.3.1-6.3.6 и 2.10.3).

В некоторых воплощениях, антитела, предложенные в данной заявке, являются химически модифицированными, например, в результате ковалентного присоединения молекулы любого типа к антителу. Например, но не в качестве ограничения, производные антител включают антитела, которые были подвергнуты химической модификации, например, путем гликозилирования, ацетилирования, ПЭГилирования, фосфорилирования, амидирования, получения производных с использованием известных защитных/блокирующих групп, протеолитического расщепления, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Любую из многочисленных химических модификаций можно выполнить известными методами, включая, но не ограничиваясь этим, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, режим обработки, использование метаболического синтеза туникамицина и т.д. Кроме того, антитело может содержать одну или более неклассических аминокислот.

Кроме того, в данной заявке предложены антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), содержащие каркасную область, известную специалистам в данной области техники (например, фрагмент иммуноглобулина человека или не являющегося человеком вида). Каркасная область может представлять собой, например, природную или консенсусную каркасные области. В конкретных воплощениях, каркасная область антитела, предложенного в данной заявке, происходит из иммуноглобулина человека (для ознакомления со списком каркасных областей иммуноглобулинов человека см., например, работу Chothia et al., 1998, J, Mol. Biol., 278: 457-479, включенную в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте). Также см. Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.), 5-ое издание.

Кроме того, в данной заявке предложены антитела, которые связываются с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54), антитела, содержащие аминокислотную последовательность одного или более CDR мышиного моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, включая таковые, также приведенные в Таблицах 5-33, или их гуманизированные варианты (например, VH CDR или VL CDR из Таблиц 5-11), и каркасные области иммуноглобулинов человека с одной или более аминокислотными заменами по одному, двум, трем или более из следующих остатков: (а) редко встречающихся каркасных остатков, которые различаются в каркасе мышиного антитела (например, каркасе донорного антитела) и каркасе человеческого антитела (например, каркасе акцепторного антитела); (b) остатков зоны Верньера, когда они различаются в каркасе донорного антитела и каркасе акцепторного антитела; (с) остатков, обеспечивающих межцепочечную упаковку на поверхности контакта VH/VL, которые различаются в каркасе донорного антитела и каркасе акцепторного антитела; (d) канонических остатков, которые различаются в последовательностях каркаса донорного антитела и каркаса акцепторного антитела, в частности, в последовательностях каркасных областей, наиболее важных для определения канонического класса CDR петель мышиного антитела; (е) остатков, которые граничат с CDR; (g) остатков, способных взаимодействовать с антигеном; (h) остатков, способных взаимодействовать с CDR; и (i) остатков в зоне контакта VH-домена и VL-домена. В определенных воплощениях, антитела, которые связываются с антигеном C10orf54, содержащие каркасные области иммуноглобулина человека с одной или более аминокислотными заменами по одному, двум, трем или более идентифицированным выше остаткам, представляют собой антагонистические антитела к C10orf54. В определенных воплощениях, антитела, которые связываются с антигеном C10orf54, содержащие каркасные области иммуноглобулина человека с одной или более аминокислотными заменами по одному, двум, трем или более идентифицированным выше остаткам, представляют собой агонистические антитела к C10orf54.

Антитела, предложенные в данной заявке, включают, но не ограничиваются этим, синтетические антитела, моноклональные антитела, рекомбинантно продуцированные антитела, мультиспецифичные антитела (включая биспецифичные антитела), человеческие антитела, гуманизированные антитела, верблюжьи антитела, химерные антитела, интраантитела, антиидиотипические (anti-Id) антитела и функциональные фрагменты любых из перечисленных выше антител. Неограничивающие примеры функциональных фрагментов включают одноцепочечные Fv (scFv) (в том числе, например, моноспецифичные, биспецифичные и т.д.), Fab фрагменты, F(ab') фрагменты, F(ab)₂ фрагменты, F(ab')₂ фрагменты, соединенные дисульфидными связями Fv (sdFv), Fd фрагменты, Fv фрагменты, диатело, триотело, тетратело и миниантитело.

В частности, антитела, предложенные в данной заявке, включают молекулы иммуноглобулинов и иммунологически активные части молекул иммуноглобулинов, например, молекулы, которые содержат антигенсвязывающий сайт, который связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54). Молекулы иммуноглобулинов, предложенные в данной заявке, могут быть молекулами иммуноглобулинов любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и IgY), класса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подкласса.

Варианты и производные антител включают функциональные фрагменты антител, которые сохраняют способность связываться с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54). Типичные функциональные фрагменты включают Fab фрагменты (фрагмент антитела, который содержит антигенсвязывающий домен и содержит легкую цепь и часть тяжелой цепи, соединенные мостиковой дисульфидной связью); Fab' (фрагмент антитела, содержащий один антигенсвязывающий домен, представляющий собой Fab, и дополнительную часть тяжелой цепи, соединенные через шарнирную область); F(ab')₂ (две Fab' молекулы, соединенные межцепочечными дисульфидными связями в шарнирных областях тяжелых цепей; Fab' молекулы могут быть направлены на один и тот же эпитоп или на разные эпитопы); биспецифичный Fab (Fab молекула, имеющая два антигенсвязывающих домена, каждый из которых может быть направлен на свой эпитоп); одноцепочечный Fab, содержащий вариабельную область, также известный как sFv (вариабельная, определяющая связывание с антигеном область, состоящая из одной легкой и тяжелой цепи антитела, связанных вместе цепью из 10-25 аминокислот); соединенный дисульфидными связями Fv или dsFv (вариабельная, определяющая связывание с антигеном область, состоящая из одной легкой и тяжелой цепи антитела, связанных вместе дисульфидной связью); верблюжья VH (вариабельная, определяющая связывание с антигеном область одной тяжелой цепи антитела, в которой некоторые аминокислоты на поверхности VH являются такими же, как обнаруженные в тяжелой цепи природных верблюжьих антител); биспецифичный sFv (молекула sFv или dsFv, имеющая два антигенсвязывающих домена, каждый из которых может быть направлен на свой эпитоп); диатело (димеризованный sFv, образованный, когда VH-домен первого sFv соединяется с VL-доменом второго sFv, а VL-домен первого sFv соединяется с VH-доменом второго sFv; данные два антигенсвязывающих участка диатела могут быть напрвлены на один и тот же эпитоп или на разные эпитопы); и триатело (тримеризованный sFv, образованный способом, аналогичным диателу, но в котором три антигенсвязывающих домена объединены в единый комплекс; данные три антигенсвязывающих домена могут быть направлены на один и тот же эпитоп или разные эпитопы). Производные антител также включают одну или более CDR последовательностей антигенсвязывающего центра антитела (antibody combining site). Данные CDR последовательности могут быть соединены вместе с использованием остова, когда имеются две или более CDR последовательностей. В определенных воплощениях антитело содержит одноцепочечный Fv ("scFv"). scFv представляют собой фрагменты антитела, содержащие VH- и VL-домены антитела, при этом данные домены присутствуют в виде единой полипептидой цепи. Как правило, полипептид scFv дополнительно содержит полипептидный линкер между VH- и VL-доменами, который дает возможность scFv образовывать желаемую структуру для связывания с антигеном. Обзор по scFv см. в Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).

Антитела, предложенные в данной заявке, могут быть моноспецифичными, биспецифичными, триспецифичными или иметь более высокую степень специфичности. Мультиспецифичные антитела могут обладать специфичностью к разным эпитопам полипептида C10orf54 или могут обладать специфичностью как к полипептиду C10orf54, так и к гетерологичному эпитопу, например, гетерологичному полипептиду или материалу твердой подложки. В конкретных воплощениях, антитела, предложенные в данной заявке, являются моноспецифичными в отношении определенного эпитопа полипептида C10orf54 и не связываются с другими эпитопами.

Кроме того, в данной заявке предложены слитые белки, содержащие антитело, предложенное в данной заявке, которое связывается с антигеном C10orf54, и гетерологичный полипептид. В некоторых воплощениях гетерологичный полипептид, с которым слито антитело, является полезным для направленного воздействия антитела на клетки, имеющие экспрессируемый на клеточной поверхности C10orf54.

Кроме того, в данной заявке предложены панели антител, которые связываются с антигеном C10orf54. В конкретных воплощениях, панели антител имеют разные константы скорости ассоциации, разные константы скорости диссоциации, разные аффинности в отношении антигена C10orf54 и/или обладают разной специфичностью в отношении антигена C10orf54. В некоторых воплощениях, панели содержат или состоят из примерно 10, примерно 25, примерно 50, примерно 75, примерно 100, примерно 125, примерно 150, примерно 175, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950 или примерно 1000 или более антител. Панели антител можно использовать, например, в 96-луночных или 384-луночных планшетах, таких, которые применяются в анализах типа ELISA.

КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛ И СЛИТЫЕ БЕЛКИ

В некоторых воплощениях, антитела, предложенные в данной заявке, конъюгированы или слиты рекомбинантным путем с диагностическим, детектируемым или терапевтическим агентом или любой другой молекулой. Конъюгированные или слитые рекомбинантным путем антитела могут быть полезны, например, для мониторинга или прогнозирования начала, развития, прогрессирования и/или тяжести С10огт54-опосредуемого заболевания в качестве части процедуры клинических испытаний, таких как определение эффективности конкретной терапии.

Подобная диагностика и детекция могут быть выполнены, например, посредством сочетания антитела с детектируемыми веществами, включая, но не ограничиваясь этим, различные ферменты, такие как, но не ограничиваясь этим, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза или ацетилхолинэстераза; простетические группы, такие как, но не ограничиваясь этим, стрептавидин/биотин и авидин/биотин; флуоресцентные материалы, такие как, но не ограничиваясь этим, умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламин флуоресцеин, данзилхлорид или фикоэритрин; люминесцентные материалы, такие как, но не ограничиваясь этим, люминол; биолюминесцентные материалы, такие как, но не ограничиваясь этим, люцифераза, люциферин и экворин; хемилюминесцентный материал, такой как, но не ограничиваясь этим, соединение на основе акридиния или HALOTAG; радиоактивные материалы, такие как, но не ограничиваясь этим, йод (¹³¹I, ¹²⁵I, ¹²³I и ¹²¹I), углерод (¹⁴С), сера (³⁵S), тритий (³Н), индий (¹¹⁵In, ¹¹³In, ¹¹²In и ¹¹¹In), технеций (⁹⁹Тс), таллий (²⁰¹Ti), галлий (⁶⁸Ga, ⁶⁷Ga), палладий (¹⁰³Pd), молибден (⁹⁹Мо), ксенон (¹³³Хе), фтор (¹⁸F), ¹⁵³Sm, ¹⁷⁷Lu, ¹⁵⁹Gd, ¹⁴⁹Pm, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁵Yb, ¹⁶⁶Ho, ⁹⁰Y, ⁴⁷Sc, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁴²Pr, ¹⁰⁵Rh, ⁹⁷Ru, ⁶⁸Ge, ⁵⁷Co, ⁶⁵Zn, ⁸⁵Sr, ³²P, ¹⁵³Gd, ¹⁶⁹Yb, ⁵¹Cr, ⁵⁴Mn, ⁷⁵Se, ¹¹³Sn и ¹¹⁷Sn; и испускающие позитроны металлы при использовании различных видов позитронно-эмиссионной томографии, и нерадиоактивные парамагнитные ионы металлов.

Кроме того, в данной заявке предложены антитела, которые конъюгированы или слиты рекомбинантным путем с терапевтической группировкой (или одной или более терапевтическими группировками), а также их применения. Антитело может быть конъюгировано или слито рекомбинантным путем с терапевтической группировкой, такой как цитотоксин, например, цитостатический или разрушающий клетки агент, терапевтический агент или ион радиоактивного металла, например, источник альфа-излучения. Цитотоксин или цитотоксический агент включает любой агент, который является губительным для клеток. Терапевтические группировки включают, но не ограничиваются этим, антиметаболиты (например, метотрексат, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил, декарбазин); алкилирующие агенты (например, мехлорэтамин, тиотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (BCNU обозначает бис-хлорэтилнитрозомочевину) и ломустин (CCNU обозначает 1-(2-хлорэтил)-3-циклогексил-1-нитрозомочевина), циклофосфамид, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цис-дихлордиаминплатину(II) (DDP) и цисплатин); антрациклины (например, даунорубицин (ранее дауномицин) и доксорубицин); антибиотики (например, актиномицин D (ранее актиномицин), блеомицин, митрамицин и антрамицин (АМС)); молекулы на основе ауристатина (например, ауристатин РНЕ, ауристатин F, монометилауристатин Е, бриостатин 1 и соластатин 10; см. Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother., 46: 3802-8 (2002), Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother., 45: 3580-4 (2001), Mohammad et al., Anticancer Drugs, 12: 735-40 (2001), Wall et al., Biochem. Biophys. Res. Commun, 266: 76-80 (1999), Mohammad et al., Int. J. Oncol., 15: 367-72 (1999), все они включены в данное описание посредством ссылки); гормоны (например, глюкокортикоиды, прогестины, андрогены и эстрогены), ингибиторы ферментов репарации ДНК (например, этопозид или топотекан), ингибиторы киназ (например, соединение ST1571, иматиниба мезилат (Kantarjian et al., Clin. Cancer Res., 8(7): 2167-76 (2002)); цитотоксические агенты (например, паклитаксел, цитохалазин В, грамицидин D, этидия бромид, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи и соединения, раскрытые в патентах США №№6245759, 6399633, 6383790, 6335156, 6271242, 6242196, 6218410, 6218372, 6057300, 6034053, 5985877, 5958769, 5925376 5922844, 5911995, 5872223, 5863904, 5840745, 5728868, 5648239, 5587459); ингибиторы фарнезилтрансферазы (например, R115777, BMS-214662 и ингибиторы, описанные, например, в патентах США №№: 6458935, 6451812, 6440974, 6436960, 6432959, 6420387, 6414145, 6410541, 6410539, 6403581, 6399615, 6387905, 6372747, 6369034, 6362188, 6342765, 6342487, 6300501, 6268363, 6265422, 6248756, 6239140, 6232338, 6228865, 6228856, 6225322, 6218406, 6211193, 6187786, 6169096, 6159984, 6143766, 6133303, 6127366, 6124465, 6124295, 6103723, 6093737, 6090948, 6080870, 6077853, 6071935, 6066738, 6063930, 6054466, 6051582, 6051574 и 6040305); ингибиторы топоизомеразы (например, камптотецин; иринотекан; SN-38; топотекан; 9-аминокамптотецин; GG-211 (GI 147211); DX-8951f; IST-622; рубитекан; пиразолоакридин; XR-5000; сентопин (saintopin); UCE6; UCE1022; TAN-1518A; TAN 1518В; KT6006; KT6528; ED-110; NB-506; ED-110; NB-506 и ребеккамицин); булгареин (bulgarein); вещества, связывающиеся с малой бороздкой ДНК, такие как краситель Hoescht 33342 и краситель Hoechst 33258; нитидин; фагаронин; эпиберберин; коралин; бета-лапахон; ВС-4-1; бифосфонаты (например, алендронат, цимадронат, клодронат, тилудронат, эпидронат, ибандронат, неридронат, олпандронат, ризедронат, пиридронат, памидронат, золедронат) ингибиторы HMG-CoA (3-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент А) редуктазы (например, ловастатин, симвастатин, аторвастатин, правастатин, флувастатин, статин, церивастатин, лескол, липитор, розувастатин и аторвастатин); антисмысловые олигонуклеотиды (например, описанные в патентах США №№6277832, 5998596, 5885834, 5734033 и 5618709); ингибиторы аденозиндезаминазы (например, флударабина фосфат и 2-хлордезоксиаденозин); ибритутомаб тиуксетан (Zevalin®); тозитумомаб (Bexxar®)) и их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, клатраты и пролекарства.

Кроме того, антитело, предложенное в данной заявке, может быть конъюгировано или слито рекомбинантным путем с терапевтической группировкой или группировкой лекарственного средства, которая модифицирует определенный биологический ответ. Терапевтические группировки или группировки лекарственного средства не должны истолковываться как ограниченные классическими химическими терапевтическими агентами. Например, группировка лекарственного средства может представлять собой белок, пептид или полипептид, обладающий желаемой биологической активностью. Такие белки могут включать, например, токсин, такой как абрин, рицин А, экзотоксин синегнойной палочки, холерный токсин или дифтерийный токсин; такой белок, как фактор некроза опухоли, γ-интерферон, α-интерферон, фактор роста нервов, тромбоцитарный фактор роста, тканевой активатор плазминогена, апоптотический агент, например, TNF-γ, AIM (молекула-индуктор активации) I (см. международную публикацию № WO 97/33899), AIM II (см. международную публикацию № WO 97/34911), Fas лиганд (Takahashi et al., 1994, J. Immunol., 6: 1567-1574) и VEGF (см. международную публикацию № WO 99/23105), антиангиогенный агент, например, ангиостатин, эндостатин или компонент каскада коагуляции (например, тканевой фактор); или модификатор биологического отклика, как например, лимфокин (например, интерферон-гамма, интерлейкин-1 ("IL-1"), интерлейкин-2 ("IL-2"), интерлейкин-5 ("IL-5"), интерлейкин-6 ("IL-6"), интерлейкин-7 ("IL-7"), интерлейкин 9 ("IL-9"), интерлейкин-10 ("IL-10"), интерлейкин-12 ("IL-12"), интерлейкин-15 ("IL-15"), интерлейкин-23 ("IL-23"), гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор ("GM-CSF") и гранулоцитарный колониестимулирующий фактор ("G-CSF")) или фактор роста (например, гормон роста ("GH")), или вызывающий коагуляцию агент (например, кальций, витамин К, тканевые факторы, такие как, но не ограничиваясь этим, фактор Хагемана (фактор XII), высокомолекулярный кининоген (HMWK), прекалликреин (PK), вызывающие коагуляцию белковые факторы II (протромбин), фактор V, XIIa, VIII, XIIIa, XI, XIa, IX, IXa, X, фосфолипид и мономер фибрина).

Кроме того, в данной заявке предложены антитела, которые слиты рекомбинантным путем или химически конъюгированы (ковалентно или нековалентно конъюгированы) с гетерологичным белком или полипептидом (или его фрагментом, например, с полипептидом, состоящим из примерно 10, примерно 20, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90 или примерно 100 аминокислот) с образованием слитых белков, а также их применение. В частности, согласно данному изобретению предложены слитые белки, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, предложенного в данной заявке (например, Fab фрагмент, Fd фрагмент, Fv фрагмент, F(ab)₂ фрагмент, VH-домен, VH CDR, VL-домен или VL CDR), и гетерологичный белок, полипептид или пептид. В одном из воплощений гетерологичный белок, полипептид или пептид, с которым слито антитело, является полезным для направленного воздействия антитела на клетку конкретного типа, например, клетку, которая экспрессирует C10orf54 или рецептор C10orf54. Например, антитело, которое связывается с рецептором на клеточной поверхности, экспрессированным конкретного типа клеткой (например, клеткой иммунной системы), может быть слито или конъюгировано с модифицированным антителом, предложенным в данной заявке.

Конъюгированный или слитый белок может содержать любое антитело, предложенное в данной заявке, изложенной в данном описании, и гетерологичный полипептид. В одном из воплощений конъюгированный или слитый белок, предложенный в данной заявке, содержит VH- или VL-домен любого мышиного моноклонального антитела 5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33А, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51А, 353А или 305А, как приведено в Таблице 2, и гетерологичный полипептид. В другом воплощении конъюгированный или слитый белок, предложенный в данной заявке, содержит VH-домен, имеющий аминокислотную последовательность любого из VH-доменов, приведенных в Таблицах 5-33, и/или VL-домен, имеющий аминокислотную последовательность любого из VL-доменов, приведенных в Таблицах 5-33, и гетерологичный полипептид. В другом воплощении конъюгированный или слитый белок, предложенный в данной заявке, содержит один или более VH CDR, имеющих аминокислотную последовательность любого из VH CDR, приведенных в Таблицах 5-33, и гетерологичный полипептид. В другом воплощении конъюгированный или слитый белок содержит один или более VL CDR, имеющих аминокислотную последовательность любого из VL CDR, приведенных в Таблицах 5-33, и гетерологичный полипептид. В другом воплощении конъюгированный или слитый белок, предложенный в данной заявке, содержит по меньшей мере один VH-домен и по меньшей мере один VL-домен, приведенные в Таблицах 5-33, и гетерологичный полипептид. В еще одном воплощении конъюгированный или слитый белок, предложенный в данной заявке, содержит по меньшей мере один VH CDR и по меньшей мере один VL CDR, приведенные в Таблицах 5-33, и гетерологичный полипептид.

Помимо этого, антитело, предложенное в данной заявке, может быть конъюгировано с терапевтическими группировками, такими как ион радиоактивного металла, например, источниками альфа-излучения, такими как ²¹³Bi, либо макроциклическими хелаторами, полезными для конъюгирования ионов радиоактивных металлов, включая, но не ограничиваясь этим, ¹³¹In, ¹³¹Lu, ¹³¹Y, ¹³¹Но, ¹³¹Sm, с полипептидами. В определенных воплощениях макроциклический хелатор представляет собой 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N'',N'''-тетрауксусную кислоту (DOTA), которая может быть присоединена к антителу через линкерную молекулу. Такие линкерные молекулы широко известны в данной области техники и описаны в работах Denardo et al., 1998, Clin. Cancer Res., 4(10): 2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem., 10(4): 553-7; и Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol., 26(8): 943-50, каждая из которых включена посредством ссылки во всей своей полноте.

Кроме того, для облегчения очистки антитела, предложенные в данной заявке, могут быть слиты с маркерными последовательностями, такими как пептиды. В конкретных воплощениях маркерная аминокислотная последовательность представляет собой гексагистидиновый пептид, такой как метка, предусмотренный в векторе pQE (QIAGEN, Inc.), который, среди многих прочих, имеется в продаже. Как описано в Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 821-824, например, наличие гексагистидина обеспечивает удобную очистку слитого белка. Другие пептидные метки, полезные для очистки, включают, но не ограничиваются этим, гемагглютининовую ("НА") метку, которая соответствует эпитопу белка гемагглютинина вируса гриппа (Wilson et al., 1984, Cell, 37: 767), и метку "FLAG".

Способы слияния или конъюгирования терапевтических группировок (включая полипептиды) с антителами хорошо известны, см., например, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", в Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", в Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", в Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", в Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press, 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev., 62: 119-58; патенты США №№5336603, 5622929, 5359046, 5349053, 5447851, 5723125, 5783181, 5908626, 5844095 и 5112946; ЕР 307434; ЕР 367166; ЕР 394827; публикации РСТ WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631 и WO 99/04813; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-10539, 1991; Traunecker et al., Nature, 331: 84-86, 1988; Zheng et al., J. Immunol., 154: 5590-5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 11337-11341, 1992, которые включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Слитые белки могут быть получены, например, с помощью методов перетасовки генов, перетасовки мотивов, перетасовки экзонов и/или перетасовки кодонов (в совокупности называемых "перетасовкой ДНК"). Перетасовка ДНК может быть использована для изменения активности антител, предложенных в данной заявке (например, для получения антител с более высокой аффинностью и более низкими константами скорости диссоциации). В общем случае см. патенты США №№5605793, 5811238, 5830721, 5834252 и 5837458; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol., 8: 724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2): 76-82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol., 287: 265-76; и Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques, 24(2): 308- 313 (каждый из этих патентов и каждая из этих публикаций тем самым включены посредством ссылки во всей своей полноте). Антитела или кодируемые антитела могут быть изменены с использованием случайного мутагенеза с применением допускающей ошибки ПЦР, случайной вставки нуклеотидов или других методов перед проведением рекомбинации. Полинуклеотид, кодирующий антитело, предложенное в данной заявке, может быть повторно объединен с одним или более компонентами, мотивами, секциями, частями, доменами, фрагментами и т.д. одной или более чем одной из гетерологичных молекул.

Антитело, предложенное в данной заявке, также может быть конъюгировано со вторым антителом с образованием гетероконъюгата антитела, как описано в патенте США №4676980, который включен в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Терапевтическая группировка или лекарственное средство, конъюгированное или слитое рекомбинантным путем с антителом, предложенным в данной заявке, которое связывается с антигеном C10orf54, должно быть выбрано с целью достижения желаемого(ых) профилактического(их) или терапевтического(их) эффекта(ов). В определенных воплощениях антитело представляет собой модифицированное антитело. Практикующий врач или другой медицинский работник при принятии решения о том, какую терапевтическую группировку или лекарственное средство следует конъюгировать или рекомбинантным путем сливать с антителом, предложенным в данной заявке, должен учитывать следующее: природу заболевания, тяжесть заболевания и состояние субъекта.

Антитела, предложенные в данной заявке, также могут быть присоединены к твердым подложкам, которые, в частности, полезны для проведения иммуноанализов или очистки целевого антигена. Такие твердые подложки включают, но не ограничиваются этим, стекло, целлюлозу, полиакриламид, найлон, полистирол, поливинилхлорид или полипропилен.

КОНЪЮГАТ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО (ADC)

В некоторых воплощениях в данной заявке предложены конъюгаты антитело-лекарственное средство, в том числе конъюгат антитело-лекарственное средство приведенных ниже формул (Ia) и (Ib):

или его фармацевтически приемлемая соль;

где:

А представляет собой антитело или фрагмент антитела;

два изображенных остатка цистеина образуются в результате раскрытия дисульфидной связи цистеин-цистеин в А;

каждый из X и X' независимо представляет собой О, S, NH или NR¹, где R¹ представляет собой С_1-6алкил;

W_a представляет собой =N-, =СН-, =СНСН₂-, =C(R²)- или =CHCH(R²)-; W_b представляет собой -NH-, -N(R¹)-, -СН₂-, -CH₂-NH-, -CH₂-N(R¹)-, -СН₂СН₂-, -CH(R²)-или -CH₂CH(R²)-; где R¹ и R² независимо представляют собой С_1-6алкил;

СТХ представляет собой цитотоксин;

R представляет собой любую химическую группу; или R отсутствует;

каждый L¹, L² и L³ независимо представляет собой линкер, выбранный из группы, состоящей из -О-, -С(О)-, -S-, -S(O)-, -S(O)₂-, -NH-, -NCH₃-, -(CH₂)_q-, -NH(CH₂)₂NH-, -OC(O)-, -CO₂-, -NHCH₂CH₂C(O)-, -C(O)NHCH₂CH₂NH-, -NHCH₂C(O)-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -NCH₃C(O)-, -C(O)NCH₃-, -(CH₂CH₂O)_p, -(CH₂CH₂O)_pCH₂CH₂-, -СН₂СН₂-(CH₂CH₂O)_р-, -ОСН(CH₂O-)₂, -(АА)_r-, цикпопентанила, циклогексанила, незамещенного фениленила и фениленила, замещенного 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из атома галогена, CF₃-, CF₃O-, СН₃О-, -С(O)ОН, -С(О)OC_1-3алкила, -C(O)CH₃, -CN, -NH-, -NH₂, -О-, -ОН, -NHCH₃, -N(CH₃)₂ и С_1-3алкила;

каждый a, b и с независимо представляет собой целое число 0, 1, 2 или 3 при условии, что по меньшей мере один из a, b или с равен 1;

каждый из k и k' независимо представляет собой целое число 0 или 1;

каждый р независимо представляет собой целое число от 1 до 14;

каждый q независимо представляет собой целое число от 1 до 12;

каждый символ АА независимо представляет собой аминокислоту;

каждый r представляет собой 1-12;

m равно целому числу от 1 до 4;

n равно целому числу от 1 до 4; и

связь представляет собой одинарную или двойную связь.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ib) R выбран из группы, состоящей из W, (L¹)_a, (L²)_b, (L³)_c, Z, W-(L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c, (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c-Z и W-(L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c-Z, которые определены в даном описании. В определенных воплощениях R выбран из группы, состоящей из W, (L¹)_a, (L²)_b, (L³)_c и W-(L¹)_a-(L²)_b-(L³)c. В определенных воплощениях R выбран из группы, состоящей из Z, (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c-Z и W-(L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c-Z.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ia) или (Ib) n равно целому числу 2 (например, в случае двух межцепочечных дисульфидных связей между тяжелой цепью и легкой цепью). В определенных воплощениях n равно целому числу 3 (например, в случае двух межцепочечных дисульфидных связей между тяжелой цепью и легкой цепью и одной межцепочечной дисульфидной связи между шарнирными областями тяжелых цепей). В определенных воплощениях n равно целому числу 4 (например, в случае двух межцепочечных дисульфидных связей между тяжелой цепью и легкой цепью и двух межцепочечных дисульфидных связей между шарнирными областями тяжелых цепей).

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ib) R представляет собой детектируемый зонд. В определенных воплощениях R представляет собой флуорофор, хромофор, радиоактивную метку, фермент, лиганд, антитело или фрагмент антитела. В определенных воплощениях R представляет собой лиганд (например, лиганд, специфичный к рецептору на опухолевой клетке, такому как специфический мембранный антиген предстательной железы, или на инфицированной вирусом клетке, такой как клетка, инфицированная вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)).

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ib) R связан с остальной частью линкерной молекулы через амидную, N-(С_1-6алкил)амидную, карбаматную, N-(С_1-6алкил)карбаматную, аминную, N-(C_1-6алкил)аминную, простую эфирную, простую тиоэфирную связь, связь через группу мочевины, N-(С_1-6алкил)мочевины или N,N-ди(С_1-6алкил)мочевины.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ia) или (Ib) каждый из L¹, L² и L³ независимо выбран из группы, состоящей из -NHC(O)-, -C(O)NH-, -(CH₂CH₂O)_р, -(CH₂CH₂O)_рСН₂СН₂-, -СН₂СН₂-(CH₂CH₂O)_р-, -ОСН(CH₂O-)₂, -(АА)_r-, незамещенного фениленила и фениленила, замещенного 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из атома галогена, CF₃-, CF₃O-, СН₃О-, -С(O)ОН, -С(O)ОС_1-3алкила, -C(O)CH₃, -CN, -NH-, -NH₂, -О-, -ОН, -NHCH₃, -N(CH₃)₂ и С_1-3алкила; где a, b и с каждый независимо представляет собой 0 или 1; и каждый р и r независимо представляет собой 1, 2 или 3. В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой -(АА)_r-, где -(АА)_r- представляет собой ValCit (например, первая аминокислота представляет собой валин, вторая аминокислота представляет собой цитруллин, и г равно 1). В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой -(АА)_r-, где -(АА)_r-представляет собой ValAla (например, первая аминокислота представляет собой валин, вторая аминокислота представляет собой аланин, и г равно 1). В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой фениленил, замещенный -С(O)ОН и -NH₂. В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой фениленил, замещенный -С(O)O- и -NH-. В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой фениленил, замещенный -ОС(О)- и -NH-. В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой фениленил, замещенный -О- и -NH-. В определенных воплощениях один или более чем один из L¹, L² и L³ представляет собой пара-аминобензил (РАВ), который возможно замещен -С(O)О-, -ОС(О)- или -О-. В определенных воплощениях L¹ представляет собой -(CH₂)_q-, L² отсутствует, L³ отсутствует, и СТХ соединен с (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c амидной связью. В определенных воплощениях L¹ представляет собой -(CH₂)_q-, L² представляет собой -(ОСН₂СН₂)_р-, L³ отсутствует, и СТХ соединен с (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c амидной связью. В определенных воплощениях L¹ представляет собой -(CH₂CH₂O)_p-, L² представляет собой -(CH₂)_q-, L³ отсутствует, и СТХ соединен с (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c амидной связью. В определенных воплощениях каждый L¹ независимо выбран из группы, состоящей из -(CH₂CH₂O)_pCH₂CH₂- и -СН₂СН₂-(CH₂CH₂O)_p-, L² отсутствует, L³ отсутствует, и СТХ соединен с (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c амидной связью. В определенных воплощениях каждый L¹ независимо выбран из группы, состоящей из -(CH2)_q-, -(CH₂CH₂O)_p, -(CH₂CH₂O)_pCH₂CH₂-, -СН₂СН₂-(CH₂CH₂O)_p- и -С(О)-, L² представляет собой Val-Cit, L³ представляет собой РАВ, и СТХ соединен с (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c амидной связью. В определенных воплощениях каждый L¹ независимо выбран из группы, состоящей из -(CH₂)_q-, -(CH₂CH₂O)_p, -(CH₂CH₂O)_pCH₂CH₂-, -СН₂СН₂-(CH₂CH₂O)_p- и -С(О)-, L² представляет собой Val-Cit, L³ представляет собой РАВ, и СТХ соединен с (L¹)_a-(L²)_b-(L³)_c амидной связью. В определенных воплощениях каждый L¹ независимо выбран из группы, состоящей из -(CH₂)_q-, -(CH₂CH₂O)_p, -(CH₂CH₂O)_pCH₂CH₂-, -СН₂СН₂-(CH₂CH₂O)_p- и -С(О)-, L² представляет собой Val-Ala, L³ представляет собой РАВ, и СТХ соединен с (L¹)_а-(L²)_b-(L³)_c амидной связью.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ia) или (Ib) СТХ выбран из группы, состоящей из стабилизатора тубулина, дестабилизатора тубулина, алкилирующего ДНК агента, ДНК малобороздочного лиганда, ДНК-интеркалятора, ингибитора топоизомеразы I, ингибитора топоизомеразы II, ингибитора гиразы, ингибитора белкового синтеза, ингибитора протеасом и антиметаболита.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ia) или (Ib) СТХ представляет собой химиотерапевтический агент. Средним специалистам в данной области техники известны соответствующие химиотерапевтические агенты, описанные, например, в Chu Е., DeVite V.Т., 2012, Physicians' Cancer Chemotherapy Drug Manual, 2012 (Jones & Bartlett Learning Oncology) и в аналогичных документах.

В определенных воплощениях СТХ может представлять собой любой одобренный к применению Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA) химиотерапевтический агент. В определенных воплощениях СТХ может представлять собой любой одобренный к применению FDA химиотерапевтический агент, используемый для лечения рака.

В определенных воплощениях СТХ выбран из группы, состоящей из алкилирующих агентов, антрациклинов, веществ, вызывающих повреждения цитоскелета (таксанов), эпотилонов, ингибитора гистондеацетилазы (HDAC), ингибитора топоизомеразы I, ингибитора топоизомеразы II, ингибитора киназ, монокпональных антител, нуклеотидного аналога, пептидного антибиотика, агента на основе платины, ретиноидов, алкалоида барвинка или его производного и радиоактивного изотопа.

В определенных воплощениях СТХ выбран из группы, состоящей из актиномицина, полностью транс-ретиноевой кислоты, азацитидина, азатиоприна, блеомицина, бортезомиба, карбоплатина, капецитабина, цисплатина, хлорамбуцила, циклофосфамида, цитарабина, даунорубицина, доцетаксела, доксифлуридина, доксорубицина, эпирубицина, эпотилона, этопозида, фторурацила, гемцитабина, гидроксимочевины, идарубицина, иматиниба, иринотекана, мехлорэтамина, меркаптопурина, метотрексата, митоксантрона, оксалиплатина, паклитаксела, пеметрекседа, тенипозида, тиогуанина, топотекана, валрубицина, винбластина, винкристина, виндезина и винорелбина.

В определенных воплощениях СТХ выбран из группы, состоящей из стабилизатора тубулина, дестабилизатора тубулина, алкилирующего ДНК агента, ДНК малобороздочного лиганда, ДНК-интеркалятора, ингибитора топоизомеразы I, ингибитора топоизомеразы II, ингибитора гиразы, ингибитора белкового синтеза, ингибитора протеасом и антиметаболита.

В определенных воплощениях СТХ выбран из группы, состоящей из актиномицина D, амонафида, ауристатина, бензофенона, бензотиазола, калихеамицина, камптотецина, СС-1065 (NSC 298223), цемадотина, колхицина, комбретастатина А4, доластатина, доксорубицина, элинафида, эмтанзина (DM1), этопозида, KF-12347 (лейнамицина), майтанзиноида, метотрексата, митоксантрона, нокодазола, ингибитора протеасом 1 (PSI 1), роридина А, Т-2 токсина (аналога трихотецена), таксола, тубулизина, Velcade® и винкристина. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ауристатин, калихеамицин, майтанзиноид или тубулизин.

В определенных воплощениях цитотоксин представляет собой пирролобензодиазепин (PBD), калихеамицин, доксорубицин, камптотецин, дуокармицин, DM1, DM4, майтанзиноид или тубулизин. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ауристатин, PDB, калихеамицин, доксорубицин, камптотецин, дуокармицин, DM1, DM4, майтанзиноид или тубулизин. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ауристатин, например, монометилауристатин F (MMAF) и монометилауристатин Е (ММАЕ). В определенных воплощениях цитотоксин представляет собой PBD.

В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ, MMAF, PDB, калихеамицин у, мертансин или тубулизин Т2.

В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ или MMAF, структуры которых приведены ниже:

В определенных воплощениях СТХ представляет собой PDB, выбранный из группы, состоящей из:

и

В определенных воплощениях СТХ представляет собой тубулизин Т2.

В определенных воплощениях СТХ представляет собой тубулизин Т3 или тубулизин Т4, структуры которых приведены ниже:

В некоторых воплощениях в данной заявке предложены конъюгаты антитело-лекарственное средство, в том числе конъюгат антитело-лекарственное средство приведенной ниже формулы (Ic):

или его фармацевтически приемлемая соль,

где:

А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54;

два изображенных остатка цистеина образуются в результате раскрытия дисульфидной связи цистеин-цистеин в А;

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью;

связь представляет собой одинарную или двойную связь; и

n равно целому числу от 1 до 4.

В некоторых воплощениях в данной заявке предложены конъюгаты антитело-лекарственное средство, в том числе конъюгат антитело-лекарственное средство приведенной ниже формулы (Ic1):

или его фармацевтически приемлемая соль,

где:

А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54;

два изображенных остатка цистеина образуются в результате раскрытия дисульфидной связи цистеин-цистеин в А;

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью; и

n равно целому числу от 1 до 4.

В некоторых воплощениях в данной заявке предложены конъюгаты антитело-лекарственное средство, в том числе конъюгат антитело-лекарственное средство приведенной ниже формулы (Ic2):

или его фармацевтически приемлемая соль,

где:

А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54;

два изображенных остатка цистеина образуются в результате раскрытия дисульфидной связи цистеин-цистеин в А;

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью; и

n равно целому числу от 1 до 4.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) раскрытая дисульфидная связь цистеин-цистеин в А представляет собой межцепочечную дисульфидную связь. В определенных воплощениях, когда раскрытая дисульфидная связь цистеин-цистеин в А представляет собой межцепочечную дисульфидную связь, n равно 4 (например, в случае двух межцепочечных дисульфидных связей между тяжелой цепью и легкой цепью и двух межцепочечных дисульфидных связей между шарнирными областями тяжелых цепей). В определенных воплощениях, когда раскрытая дисульфидная связь цистеин-цистеин в А представляет собой межцепочечную дисульфидную связь, n равно 3 (например, в случае двух межцепочечных дисульфидных связей между тяжелой цепью и легкой цепью и одной межцепочечной дисульфидной связи между шарнирными областями тяжелых цепей). В определенных воплощениях, когда раскрытая дисульфидная связь цистеин-цистеин в А представляет собой межцепочечную дисульфидную связь, n равно 2 (например, в случае двух межцепочечных дисульфидных связей между тяжелой цепью и легкой цепью).

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) СТХ представляет собой ауристатин, пирролобензодиазепин (PDB), калихеамицин, доксорубицин, камптотецин, дуокармицин, DM1, DM4, майтанзиноид или тубулизин, при этом СТХ соединен с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ауристатин, соединенный с L амидной связью или карбаматной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой MMAF, соединенный с L амидной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ, соединенный с L карбаматной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PBD, соединенный с L амидной связью или карбаматной связью.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) L представляет собой нерасщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) L представляет собой:

-(CH₂)_mC(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(СН₂СН₂)С(O)- или

-(СН₂СН₂)(ОСН₂СН₂)_pC(O)-;

где m равно целому числу от 5 до 11, и р равно целому числу от 1 до 3.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) L представляет собой расщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) L представляет собой:

-(CH2)_mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,

-(CH2)_mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(CH₂CH₂)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(CH₂CH₂)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂)(OCH₂CH₂)_pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)- или

-(CH₂CH₂)(OCH₂CH₂)_pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;

где m равно целому числу от 5 до 11, и р равно целому числу от 1 до 3; и

где РАВ имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) СТХ представляет собой ауристатин. В определенных воплощениях СТХ представляет собой MMAF. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PDB.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) n равно 2, 3 или 4.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Ic), (Ic1) или (Ic2) СТХ представляет собой MMAF, a L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PBD, a L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

В определенных воплощениях конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

В определенных воплощениях конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

В определенных воплощениях конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

В определенных воплощениях конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

В определенных воплощениях конъюгат антитело-лекарственное средство имеет одну из следующих формул:

и

В определенных воплощениях конъюгат антитело-лекарственное средство имеет одну из следующих формул:

и

В некоторых воплощениях в данной заявке предложен конъюгат антитело-лекарственное средство приведенной ниже формулы (Id):

где:

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью;

S_x представляет собой атом серы из первого остатка цистеина, a S_y представляет собой атом серы из второго остатка цистеина, при этом первый остаток цистеина и второй остаток цистеина происходят из разных цепей и/или из одной и той же цепи многоцепочечного антитела;

связь представляет собой одинарную или двойную связь; и

n равно целому числу от 1 до 4.

В некоторых воплощениях в данной заявке предложен конъюгат антитело-лекарственное средство приведенной ниже формулы (Id1):

где:

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью;

S_x представляет собой атом серы из первого остатка цистеина, a S_y представляет собой атом серы из второго остатка цистеина, при этом первый остаток цистеина и второй остаток цистеина происходят из разных цепей и/или из одной и той же цепи многоцепочечного антитела; и

n равно целому числу от 1 до 4.

В некоторых воплощениях в данной заявке предложен конъюгат антитело-лекарственное средство приведенной ниже формулы (Id2):

где:

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью;

S_x представляет собой атом серы из первого остатка цистеина, a S_y представляет собой атом серы из второго остатка цистеина, при этом первый остаток цистеина и второй остаток цистеина происходят из разных цепей и/или из одной и той же цепи многоцепочечного антитела; и

n равно целому числу от 1 до 4.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) СТХ представляет собой ауристатин, пирролобензодиазепин (PDB), калихеамицин, доксорубицин, камптотецин, дуокармицин, DM1, DM4, майтанзиноид или тубулизин, при этом СТХ соединен с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ауристатин, соединенный с L амидной связью или карбаматной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой MMAF, соединенный с L амидной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ, соединенный с L карбаматной связью. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PBD, соединенный с L амидной связью или карбаматной связью.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) многоцепочечное антитело содержит две тяжелые цепи и две легкие цепи.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) первый остаток цистеина происходит из первой тяжелой цепи, а второй остаток цистеина происходит из второй тяжелой цепи многоцепочечного антитела.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) первый остаток цистеина происходит из тяжелой цепи, а второй остаток цистеина происходит из легкой цепи многоцепочечного антитела.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) первый и второй остатки цистеина происходят из одной и той же тяжелой цепи многоцепочечного антитела.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) многоцепочечное антитело представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) первый остаток цистеина происходит из тяжелой цепи, а второй остаток цистеина происходит из легкой цепи многоцепочечного антитела.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) первый и второй остатки цистеина происходят из одной и той же тяжелой цепи многоцепочечного антитела.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id) конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь много цепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L; и связь представляет собой одинарную или двойную связь. В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id) конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L; и связь представляет собой одинарную или двойную связь. В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1) конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1) конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2) конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2) конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей. В определенных воплощениях один или более остатков цистеина в результате мутаций заменены на структурно родственные аминокислоты. В определенных воплощениях один или более остатков цистеина в результате мутаций заменены на аланины.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), где многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей, конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь много цепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L; и связь представляет собой одинарную или двойную связь. Для воплощений конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), приведенных выше, ADC имеет соотношение лекарственного средства и антитела (DAR), равное 3 (три молекулы лекарственного средства на одну молекулу антитела). Как изложено в данном описании, такие ADC могут быть получены так, как изложено в данном описании, посредством введения мутаций в один или более остатков цистеина шарнирной области IgG1 человека (например, в 1 остаток цистеина шарнирной области), IgG2 человека (например, в 3 остатка цистеина шарнирной области), IgG3 человека (например, в 10 остатков цистеина шарнирной области) или IgG4 человека (например, в 1 остаток цистеина шарнирной области).

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), где многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей, конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L; и связь представляет собой одинарную или двойную связь. Для воплощений конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), приведенных выше, ADC имеет DAR, равное 2 (две молекулы лекарственного средства на одну молекулу антитела). Как изложено в данном описании, такие ADC могут быть получены посредством введения мутаций в один или более остатков цистеина шарнирной области IgG1 человека (например, в 2 остатка цистеина шарнирной области), IgG2 человека (например, в 4 остатка цистеина шарнирной области), IgG3 человека (например, в 11 остатков цистеина шарнирной области) или IgG4 человека (например, в 2 остатка цистеина шарнирной области). В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id) L представляет собой нерасщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1), где многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей, конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L. Для воплощений конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1), приведенных выше, ADC имеет DAR, равное 3 (три молекулы лекарственного средства на одну молекулу антитела). Как изложено в данном описании, такие ADC могут быть получены посредством введения мутаций в один или более остатков цистеина шарнирной области IgG1 человека (например, в 1 остаток цистеина шарнирной области), IgG2 человека (например, в 3 остатка цистеина шарнирной области), IgG3 человека (например, в 10 остатков цистеина шарнирной области) или IgG4 человека (например, в 1 остаток цистеина шарнирной области).

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1), где многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей, конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L. Для воплощений конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1), приведенных выше, ADC имеет DAR, равное 2 (две молекулы лекарственного средства на одну молекулу антитела). Как изложено в данном описании, такие ADC могут быть получены посредством введения мутаций в один или более остатков цистеина шарнирной области IgG1 человека (например, в 2 остатка цистеина шарнирной области), IgG2 человека (например, в 4 остатка цистеина шарнирной области), IgG3 человека (например, в 11 остатков цистеина шарнирной области) или IgG4 человека (например, в 2 остатка цистеина шарнирной области). В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id1) L представляет собой нерасщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2), где многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей, конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L. Для воплощений конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2), приведенных выше, ADC имеет DAR, равное 3 (три молекулы лекарственного средства на одну молекулу антитела). Как изложено в данном описании, такие ADC могут быть получены посредством введения мутаций в один или более остатков цистеина шарнирной области IgG1 человека (например, в 1 остаток цистеина шарнирной области), IgG2 человека (например, в 3 остатка цистеина шарнирной области), IgG3 человека (например, в 10 остатков цистеина шарнирной области) или IgG4 человека (например, в 1 остаток цистеина шарнирной области).

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2), где многоцепочечное антитело содержит мутации в одном или более остатках цистеина в шарнирных областях двух тяжелых цепей, конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где каждая тяжелая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой Н, а каждая легкая цепь многоцепочечного антитела обозначена буквой L. Для воплощений конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2), приведенных выше, ADC имеет DAR, равное 2 (две молекулы лекарственного средства на одну молекулу антитела). Как изложено в данном описании, такие ADC могут быть получены посредством введения мутаций в один или более остатков цистеина шарнирной области IgG1 человека (например, в 2 остатка цистеина шарнирной области), IgG2 человека (например, в 4 остатка цистеина шарнирной области), IgG3 человека (например, в 11 остатков цистеина шарнирной области) или IgG4 человека (например, в 2 остатка цистеина шарнирной области). В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id2) L представляет собой нерасщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) L представляет собой:

-(CH₂)_mC(O)-,

-(CH₂CH₂O)_р(СН₂СН₂)С(O)- или

-(СН₂СН₂)(ОСН₂СН₂)_рС(O)-;

где m равно целому числу от 5 до 11, и р равно целому числу от 1 до 3.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) L представляет собой расщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) L представляет собой:

-(CH₂)_mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,

-(CH₂)_mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(CH₂CH₂)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(CH₂CH₂)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂)(OCH₂CH₂)_pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)- или

-(CH₂CH₂)(OCH₂CH₂)_pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;

где m равно целому числу от 5 до 11, и p равно целому числу от 1 до 3; и

где РАВ имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) СТХ представляет собой MMAF. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PDB.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) n равно 2, 3 или 4.

В определенных воплощениях конъюгата антитело-лекарственное средство формулы (Id), (Id1) или (Id2) СТХ представляет собой MMAF, a L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PBD, a L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-Val-Ala-, -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-, -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ADC

Способы получения ADC включают использование конъюгатов линкер-цитотоксин и молекул антител с мутациями в шарнирных областях.

Возможное значение DAR (соотношение лекарственное средство/антитело), желательное для ADC, включает, например, DAR, равное 2, 3 или 4. Например, приведенные далее схемы иллюстрируют общие схемы получения гомогенных ADC с DAR, равным 2, 3 или 4, как изложено в данном описании, которые могут быть получены способами, изложенными в данном описании.

Например, для ADC с антителами IgG1, в один или оба остатка цистеина шарнирной области может(гут) быть введена(ы) мутация(и) с заменой на другую аминокислоту (например, на аланин) с получением ADC с DAR, равным 3 или 2, соответственно.

Например, для ADC с антителами IgG2, в два, три или четыре остатка цистеина шарнирной области могут быть введены мутации с заменой на другую аминокислоту (например, на аланин) с получением ADC с DAR, равным 4, 3 или 2, соответственно.

Например, для ADC с антителами IgG3, в девять, десять или одинадцать остатков цистеина шарнирной области могут быть введены мутации с заменой на другую аминокислоту (например, на аланин) с получением ADC с DAR, равным 4, 3 или 2, соответственно.

В качестве другого примера, для ADC с антителами IgG4, в один или оба остатка цистеина шарнирной области может(гут) быть введена(ы) мутация(и) с заменой на другую аминокислоту (например, на аланин) с получением ADC с DAR, равным 3 или 2, соответственно.

Общие иллюстративные схемы для получения ADC с PAR, равным 2 или 3

А. Получение мутантов в шарнирной области

В. Конъюгирование

Шарнирные области тяжелых цепей IgG1 и IgG4 человека содержат два остатка цистеина, в то время как шарнирная область тяжелых цепей IgG3 человека содержит одиннадцать остатков цистеина, а шарнирная область тяжелых цепей IgG4 человека содержит четыре остатка цистеина (см. Таблицу А).

Мутанты IgG по шарнирной области получали, вводя мутацию в один остаток или оба остатка цистеина в шарнирной области с заменой на структурно родственные аминокислоты, например, на аланины. Остатки в шарнирной области пронумерованы с использованием Eu нумерации для IgG1 (Burton DR (1985) Immunoglobulin G: functional sites. Mol. Immunol., 22: 161-206). В Таблицах B-E приводятся в соответствие следующие нумерации: уникальная нумерация IMGT для С-ДОМЕНА, нумерация IMGT для экзонов, Ей нумерация и нумерация по Kabat для IgG1 (Таблица В), IgG2 (Таблица С), IgG3 (Таблица D) и IgG4 (Таблица Е) человека.

(1) J00228 соответствует аллелю IGHG1*01 (выравнивание аллелей: IGHG1 человека) и цепи G1m1,17 (G1m аллотипы). Eu гамма1 цепь кодируется аллелем IGHG1*03 (СН1 K120>R, СН3 D12>E и L14>М) и представляет собой цепь G1m3 (G1m аллотипы).

(2) СН2-Экзоны IGHG1, IGHG3 и IGHG4 кодируют 110 аминокислот.СН2-Экзон IGHG2 кодирует 109 аминокислот, ввиду наличия делеции 3-х нуклеотидов, соответствующей кодону 3 (положение 1.4 в соответствии с уникальной нумерацией IMGT для С-ДОМЕНОВ).

(3) Последние две аминокислоты СН3-экзонов IGHG обуславливают CHS (контактная гиперчувствительность), что кодируется С-концом тяжелой цепи, имеющимся в секретируемых иммуноглобулинах.

(4) В работе Kabat [2], Eu индекс для аминокислот от 219 до 221 должен быть выравнен по отношению к белку Eu (страница 671). Как следствие, положения 232, 233 и 234 соответствуют положениям по Ей индексу 219, 220 и 221, соответственно (страницы 670-678).

(5) Метки MGT (представления описания) написаны заглавными буквами.

Ссылки:

[1] Edelman G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969). PMID: 5257969.

[2] Kabat E.A. et al. Sequences of proteins of immunological interest. 5th Edition - US Department of Health and Human Services, NIH publication, №91-3242, pp. 662, 680, 689(1991).

КОНЪЮГАТЫ ЛИНКЕР-ЦИТОТОКСИН

Согласно другому аспекту, для применения совместно с антителами, описанными в данной заявке, предложены конъюгаты линкер-цитотоксин приведенных ниже формул (IIa), (IIb) и (IIc):

и

или их энантиомер, диастереомер или их смеси;

где:

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер; и

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью или карбаматной связью.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc) L представляет собой нерасщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc) L представляет собой:

-(CH₂)_mC(O)-,

-(CH₂CH₂O)_р(СН₂СН₂)С(O)- или

-(СН₂СН₂)(ОСН₂СН₂)_рС(O)-;

где m равно целому числу от 5 до 11, и р равно целому числу от 1 до 3.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc) L представляет собой расщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), L представляет собой:

-(CH₂)_mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,

-(CH₂)_mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(CH₂CH₂)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂O)_p(CH₂CH₂)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,

-(CH₂CH₂)(OCH₂CH₂)_pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)- или

-(CH₂CH₂)(OCH₂CH₂)_pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;

где m равно целому числу от 5 до 11, и р равно целому числу от 1 до 3; и

где РАВ имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc) СТХ представляет собой ауристатин. В определенных воплощениях СТХ представляет собой MMAF. В определенных воплощениях СТХ представляет собой ММАЕ. В определенных воплощениях СТХ представляет собой PBD. В определенных воплощениях СТХ представляет собой калихеамицин, доксорубицин, камптотецин, дуокармицин, DM1, DM4, майтанзиноид или тубулизин.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой ММАЕ, L представляет собой расщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой ММАЕ, L представляет собой -(CH₂)_mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)_mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, где m равно целому числу от 5 до 11.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой ММАЕ, L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH2)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой PBD, L представляет собой расщепляемый линкер.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой PBD, L представляет собой -(CH₂)_mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)_mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, где m равно целому числу от 5 до 11.

В определенных воплощениях конъюгата линкер-цитотоксин формулы (IIa), (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой PBD, L представляет собой -(СН₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет следующую структуру:

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет одну из следующих структур:

и

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет одну из следующих структур:

и

В определенных воплощениях конъюгат линкер-цитотоксин имеет одну из следующих структур:

и

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ

Терапевтические композиции, содержащие одно или более антител, предложенных в данной заявке, могут быть приготовлены для хранения путем смешивания антитела, имеющего желаемую степень чистоты, с возможными физиологически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA) в форме лиофилизированных композиций или водных растворов. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, например на основе фосфата, цитрата и других органических кислот; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид, бензетонийхлорид; фенол; бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA); сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как ион натрия; комплексы с металлами (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONIC™ или полиэтиленгликоль (PEG).

Кроме того, антитела, предложенные в данной заявке, могут быть, например, введены в состав липосом. Липосомы, содержащие представляющую интерес молекулу, готовят способами, известными в данной области техники, как например, описано в Epstein etal. (1985) Proc, Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688; Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4030; и патентах США №№4485045 и 4544545. Липосомы с увеличенным временем нахождения в кровотоке описаны в патенте США №5013556.

В частности, методом обращенно-фазового выпаривания могут быть образованы полезные иммунолипосомы с липидным составом, в который входят фосфатидилхолин, холестерин и производное фосфатидилэтаноламина и PEG (PEG-РЕ). Липосомы продавливают через фильтры с порами определенного размера, получая липосомы желаемого диаметра. Fab' фрагменты антитела, предложенного в данной заявке, могут быть конъюгированы с липосомами, как описано в Martin et al. (1982) J. Biol. Chem., 257: 286-288, посредством реакции дисульфидного обмена. Химиотерапевтический агент (такой как доксорубицин) возможно содержится внутри липосомы; см. Gabizon etal, (1989) J. National Cancer Inst. 81(19): 1484.

Композиции, как например, описанные в данной заявке, также могут содержать больше одного активного соединения, которое необходимо для конкретного подвергаемого лечению показания. В определенных воплощениях композиции содержат антитело, предложенное в данной заявке, и одно или более активных соединений с дополняющими активностями, которые не оказывают неблагоприятного воздействия друг на друга. Соответственно, такие молекулы представлены в комбинации в количествах, которые эффективны для предполаемой цели. Например, антитело, предложенное в данной заявке, может быть скомбинировано с одним или более чем одним другим терапевтическим агентом. Такую комбинированную терапию можно вводить пациенту периодически либо совместно или последовательно.

Антитело, предложенное в данной заявке, также может быть заключено в микрокапсулу, приготовленную, например, методами коацервации или межфазной полимеризации, например, в гидроксиметилцеллюлозную или желатиновую микрокапсулу и микрокапсулу из поли(метилметакрилата), соответственно; в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методы описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.

Композиции, предназначенные для использования посредством введения in vivo, должны быть стерильными. Это легко достигается с помощью фильтрования, например, через стерилизующие фильтрационные мембраны.

Также можно изготовить препараты с длительным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с длительным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие полипептид, при этом матрицы представлены в форме штампованных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриц с длительным высвобождением включают матрицы из сложных полиэфиров, гидрогелей (например, из поли-2-гидроксиэтил-метакрилата или поливинилового спирта), полилактидов (патент США №3773919), сополимеров L-глутаминовой кислоты и этил-L-глутамата, неразлагаемого этиленвинилацетата, разлагаемых сополимеров молочной кислоты и гликолевой кислоты, таких как LUPRON DEPOT™ (инъекционные микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты и гликолевой кислоты и лейпролида ацетата), и поли-D-(-)-3-гидроксимасляной кислоты. В то время как полимеры, такие как полимеры на основе этиленвинилацетата и молочной кислоты-гликолевой кислоты, позволяют осуществлять высвобождение молекул в течение более 100 суток, определенные гидрогели высвобождают белки в течение более коротких периодов времени. Когда инкапсулированные антитела остаются в организме в течение длительного времени, они могут денатурировать или агрегировать в результате воздействия водного окружения при 37°С, что приводит к потере биологической активности и возможным изменениям иммуногенности. В зависимости от вовлекаемого механизма могут быть разработаны рациональные стратегии для стабилизации. Например, если обнаружено, что механизм агрегации заключается в образовании межмолекулярных S--S связей через тиодисульфидный обмен, то стабилизация может быть достигнута посредством модификации сульфгидрильных остатков, лиофилизации из кислотных растворов, регулирования содержания влаги, использования соответствующих вспомогательных веществ и разработки специфических композиций на основе полимерных матриц.

В некоторых воплощениях фармацевтические композиции, предложенные в данной заявке, содержат терапевтически эффективные количества одного или более антител, предложенных в данной заявке, и возможно одного или более дополнительных профилактических или терапевтических агентов в фармацевтически приемлемом носителе. Такие фармацевтические композиции полезны в предупреждении, лечении или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания.

Фармацевтические носители, подходящие для введения соединений, предложенных в данной заявке, включают любые такие носители, известные специалистам в данной области техники как подходящие для конкретного способа введения.

Помимо этого, антитела, предложенные в данной заявке, могут быть приготовлены в составе композиции как единственный фармацевтически активный ингредиент или могут быть скомбинированы с другими активными ингредиентами (как например, с один или более чем одним другим профилактическим или терапевтическим агеном).

Данные композиции могут содержать одно или более антител, предложенных в данной заявке. В одном из воплощений на основе антител готовят подходящие фармацевтические препараты, такие как растворы, суспензии, таблетки, диспергируемые таблетки, пилюли, капсулы, порошки, композиции с длительным высвобождением или эликсиры для перорального введения, либо стерильные растворы или суспензии для парентерального введения, а также препарат в форме трансдермального пластыря и ингаляторов сухого порошка. В одном из воплощений на основе описанных выше антител готовят фармацевтические композиции, используя методы и методики, хорошо известные в данной области техники (см., например, Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms. 4^th ed., p. 126).

В определенных воплощениях композиций одно или более антител или их производных в эффективных концентрациях смешивают с подходящим фармацевтически приемлемым носителем. В конкретных воплощениях содержание соединений в композициях является эффективным для доставки количества, после их введения, которое лечит, предупреждает либо ослабляет C10orf54-опосредуемое заболевание или его симптом.

В одном из воплощений композиции готовят для введения в виде однократной дозы. Для приготовления композиции массовую долю соединения в эффективной концентрации растворяют, суспендируют, диспергируют в выбранном носителе или иным образом смешивают с ним с тем, чтобы имело место облегчение, предупреждение подвергаемого лечению состояния или ослабление одного или более симптомов.

В некоторых воплощениях антитело, предложенное согласно данному изобретению, вводят в фармацевтически приемлемый носитель в эффективном количестве, достаточном для оказания терапевтически полезного эффекта в отсутствие нежелательных побочных эффектов на подвергаемого лечению пациента. Терапевтически эффективную концентрацию можно определить эмпирически путем тестирования соединений в системах in vitro и in vivo с использованием рутинных методов и затем экстраполировать эти данные к дозировкам для людей.

Содержание антитела в фармацевтической композиции будет зависеть, например, от физико-химических характеристик антитела, схемы применения и вводимого количества, а также от других факторов, известных специалистам в данной области техники.

В одном из воплощений терапевтически эффективная дозировка обеспечивает получение концентрации антитела в сыворотке крови от примерно 0,1 нг/мл до примерно 50-100 мкг/мл. Фармацевтические композиции, в другом воплощении, обеспечивают получение дозировки от примерно 0,001 мг до примерно 2000 мг антитела на килограмм массы тела в сутки. Могут быть получены фармацевтические стандартные лекарственные формы, обеспечивающие получение от примерно 0,01 мг; 0,1 мг или 1 мг до примерно 500 мг; 1000 мг или 2000 мг; и в одном из воплощений, от примерно 10 мг до примерно 500 мг антитела и/или комбинации других возможных необходимых ингредиентов на одну стандартную лекарственную форму.

Препарат на основе антитела может быть введен за один раз или может быть разделен на несколько более мелких доз, подлежащих введению через интервалы времени. Очевидно, что точная дозировка и продолжительность лечения зависят от подвергаемого лечению заболевания и могут быть определены эмпирически с использованием известных протоколов тестирования или посредством экстраполяции на основе данных тестирования in vivo или in vitro. Следует отметить, что величины концентраций и доз также могут варьировать в зависимости от тяжести подлежащего облегчению состояния. Также следует понимать, что для любого конкретного субъекта конкретные режимы введения можно корректировать с течением времени с учетом индивидуальных потребностей и профессионального суждения человека, осуществляющего введение или контролирующего введение композиций, и что диапазоны концентраций, указанные в данном описании, являются всего лишь типичными и не предназначены для ограничения объема или практического применения заявленных композиций.

После смешивания или добавления антитела полученная смесь может представлять собой раствор, суспензию, эмульсию или тому подобное. Форма полученной смеси зависит от ряда факторов, включая предполагаемый способ введения и растворимость соединения в выбранном носителе или разбавителе. Эффективной концентрации достаточно для ослабления симптомов подвергаемого лечению заболевания, расстройства или состояния, и она может быть определена эмпирически.

В некоторых воплощениях предложены фармацевтические композиции для введения людям и животным в стандартных лекарственных формах, таких как таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные парентеральные растворы или суспензии и пероральные растворы или суспензии и эмульсии типа "масло-в-воде", содержащих подходящие количества соединений или их фармацевтически приемлемых производных. Антитело, в одном из воплощений, готовят и вводят в однодозовых лекарственных формах или многодозовых лекарственных формах. Термин "однодозовые лекарственные" формы, использованный в данном описании, относится к физически дискретным единицам, подходящим для субъектов, являющихся людьми и животными, и упакованным индивидуально, как это известно в данной области техники. Каждая единица дозы содержит предварительно заданное количество антитела, достаточное для получения желаемого терапевтического эффекта, вместе с необходимым фармацевтическим носителем, наполнителем или разбавителем. Примеры однодозовых лекарственных форм включают ампулы и шприцы и индивидуально упакованные таблетки или капсулы. Однодозовые лекарственные формы можно вводить, разделяя их на доли или кратные количества. "Многодозовая лекарственная" форма представляет собой множество идентичных однодозовых лекарственных форм, упакованных в одном контейнере, вводимых в отдельной однодозовой лекарственной форме. Примеры многодозовых лекарственных форм включают флаконы, бутылочки с таблетками или капсулами либо бутылочки с пинтовыми или галлонными контейнерами. Следовательно, многодозовая лекарственная форма представляет собой множество однодозовых форм, которые находятся в одной упаковке.

В конкретных воплощениях одно или более антител к C10orf54, предложенных в данной заявке, входят в состав жидкой фармацевтической композиции. Жидкие фармацевтические композиции для введения могут быть приготовлены, например, путем растворения, диспергирования или иного перемешивания активного соединения, которое определено выше, и возможных фармацевтических адъювантов в носителе, таком как, например, вода, физиологический раствор, водный раствор декстрозы, глицерин, гликоли, этанол и тому подобное, с образованием тем самым раствора или суспензии. При желании, фармацевтическая композиция, подлежащая введению, также может содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как увлажняющие агенты, эмульгирующие агенты, солюбилизирующие агенты, поддерживающие рН агенты и тому подобное, например, солей уксусной кислоты, цитрата натрия, производных циклодекстринов, сорбитана монолаурата, триэтаноламина, ацетата натрия, триэтаноламина олеата и других подобных агентов.

Современные способы приготовления таких лекарственных форм известны или будут очевидны специалистам в данной области техники; например, см. Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.

Можно приготовить лекарственные формы или композиции, содержащие антитело в диапазоне от 0,005% до 100%, при этом остальная часть будет составленной из нетоксичного носителя. Способы приготовления таких композиций известны специалистам в данной области техники.

Фармацевтические лекарственные формы для перорального применения находятся либо в твердой, либо гелевой, либо жидкой форме. Лекарственные формы в твердой форме включают таблетки, капсулы, гранулы и нерасфасованные порошки. Типы таблеток для перорального применения включают таблетки, полученные путем прессования, жевательные пастилки и таблетки, которые могут быть иметь энтеросолюбильное покрытие, сахарное покрытие или пленочное покрытие. Капсулы могут представлять собой твердые или мягкие желатиновые капсулы, в то время как гранулы и порошки могут быть предложены в нешипучей или шипучей форме, содержащей комбинацию других ингредиентов, известных специалистам в данной области техники.

В определенных воплощениях композиции представляют собой лекарственные формы в твердой форме. В определенных воплощениях композициями являются капсулы или таблетки. Таблетки, пилюли, капсулы, лепешки и тому подобное могут содержать один или более чем один из следующих ингредиентов или соединений схожей природы: связующее вещество; смазывающее вещество; разбавитель; глидант; разрыхлитель; краситель; подсластитель; ароматизатор; увлажняющий агент; вызывающее рвоту покрытие и пленочное покрытие. Примеры связующих веществ включают микрокристаллическую целлюлозу, трагакантовую камедь, раствор глюкозы, аравийскую камедь, раствор желатина, мелассу, поливинилпирролидин, повидон, кросповидоны, сахарозу и крахмальную пасту. Смазывающие вещества включают тальк, крахмал, стеарат магния или кальция, ликоподий и стеариновую кислоту. Разбавители включают, например, лактозу, сахарозу, крахмал, каолин, соль, маннит и дикальция фосфат. Глиданты включают, но не ограничиваются этим, коллоидный диоксид кремния. Разрыхлители включают натриевую соль кроскармелозы, натрия крахмала гликолят, альгиновую кислоту, кукурузный крахмал, картофельный крахмал, бентонит, метил целлюлозу, агар и карбоксиметилцеллюлозу. Красители включают, например, любые одобренные к применению сертифицированные водорастворимые красители для применения в пищевых продуктах, лекарственных и косметических средствах (FD & С dyes), их смеси; и нерастворимые в воде FD и С красители, суспендированные в гидрате оксида алюминия. Подсластители включают сахарозу, лактозу, маннит и искусственные подсластители, такие как сахарин, и любое число высушенных распылением ароматизаторов. Ароматизаторы включают природные ароматизаторы, полученные экстракцией из растений, например, из фруктов, и смеси синтетических соединений, которые вызывают приятные вкусовые ощущения, таких как, но не ограничиваясь этим, мятное масло и метилсалицилат. Увлажняющие агенты включают пропиленгликольмоностеарат, сорбитанмоноолеат, диэтиленгликольмонолаурат и полиоксиэтиленлауриловый эфир. Покрытия из вызывающих рвоту веществ включают жирные кислоты, жиры, воски, шеллак, аммиачный шеллак и ацетатфталаты целлюлозы. Пленочные покрытия включают гидроксиэтилцеллюлозу, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, полиэтиленгликоль 4000 и ацетатфталат целлюлозы.

Антитела, предложенные в данной заявке, могут быть предусмотрены в составе композиции, которая защищает их от кислотного окружения в желудке. Например, композиция может быть приготовлена с энтеросолюбильным покрытием, которое поддерживает ее целостность в желудке и позволяет высвобождать активное соединение в кишечнике. Композиция также может быть приготовлена в комбинации с нейтрализующим кислоту веществом или другим таким ингредиентом.

В том случае, когда стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, она может содержать, помимо вещества описанного выше типа, жидкий носитель, такой как нелетучее масло. Помимо этого стандартные лекарственные формы могут содержать различные другие материалы, которые модифицируют физическую форму стандартной дозировки, например, оболочки из сахара и других энтеросолюбилизирующих агентов. Соединения также могут быть введены в качестве компонента эликсира, суспензии, сиропа, облатки, вскрываемой капсулы, жевательной резинки или тому подобного. Помимо активного соединения сироп может содержать сахарозу в качестве подсластителя и некоторые консерванты, красители и окрашивающие агенты и ароматизаторы.

Антитело также можно смешивать с другими активными веществами, которые не ухудшают желаемого действия, или с веществами, которые дополняют желаемое действие, такими как нейтрализующие кислоту вещества, Н2-блокаторы и диуретики. Активным ингредиентом является антитело или его фармацевтически приемлемое производное, описанное в данной заявке. Активный ингредиент может быть включен в более высокие концентрациях, до примерно 98% по массе.

Во всех воплощениях на композиции в форме таблеток и капсул могут быть нанесены покрытия, известные специалистам в данной области техники, с целью изменения или обеспечения растворения активного ингредиента. Так, например, на них может быть нанесено традиционное усваиваемое в кишечнике покрытие, например, фенилсалицилат, воски и ацетатфталат целлюлозы.

В конкретных воплощениях композиции представляют собой жидкие лекарственные формы. Жидкие лекарственные формы для перрорального применения включают водные растворы, эмульсии, суспензии, растворы и/или суспензии, получаемые в результате повторного разведения из нешипучих гранул, и шипучие препараты, получаемые в результате повторного разведения из шипучих гранул. Водные растворы включают, например, эликсиры и сиропы. Эмульсии представляют собой эмульсии типа масло-в-воде или типа вода-в-масле.

Эликсиры представляют собой прозрачные, подслащенные, водноспиртовые препараты. Фармацевтически приемлемые носители, используемые в эликсирах, включают растворители. Сиропы представляют собой концентрированные водные растворы сахара, например, сахарозы, и могут содержать консервант. Эмульсия представляет собой двухфазную систему, в которой одна жидкость диспергируется в форме небольших капель в другой жидкости. Фармацевтически приемлемыми носителями, используемыми в эмульсиях, являются не водные жидкости, эмульгирующие агенты и консерванты. В суспензиях применяют фармацевтически приемлемые суспендирующие агенты и консерванты. Фармацевтически приемлемые вещества, используемые в нешипучих гранулах, подлежащих разведению с получением жидкой пероральной лекарственной формы, включают разбавители, подсластители и увлажняющие агенты. Фармацевтически приемлемые вещества, используемые в шипучих гранулах, подлежащих разведению с получением жидкой пероральной лекарственной формы, включают органические кислоты и источник двуокиси углерода. Красители и ароматизаторы используют во всех вышеупомянутых лекарственных формах.

Растворители включают глицерин, сорбит, этиловый спирт и сироп. Примеры консервантов включают глицерин, метил- и пропилпарабен, бензойную кислоту, бензоат натрия и спирт. Примеры неводных жидкостей, применяемых в эмульсиях, включают минеральное масло и хлопковое масло. Примеры эмульгирующих агентов включают желатин, аравийскую камедь, трагакант, бентонит и поверхностно-активные вещества, такие как полно ксиэтилен-сорбитанмоноолеат. Суспендирующие агенты включают натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, пектин, трагакант, вигум и аравийскую камедь. Подсластители включают сахарозу, сиропы, глицерин и искусственные подсластители, такие как сахарин. Увлажняющие агенты включают пропиленгликольмоностеарат, сорбитанмоноолеат, диэтиленгликольмонолаурат и полиоксиэтиленлауриловый эфир. Органические кислоты включают лимонную и винную кислоту. Источники двуокиси углерода включают бикарбонат натрия и карбонат натрия. Красители включают любые одобренные к применению сертифицированные водорастворимые FD и С красители и их смеси. Ароматизаторы включают природные ароматизаторы, полученные экстракцией из растений, например, из фруктов, и смеси синтетических соединений, которые вызывают приятные вкусовые ощущения.

Чтобы приготовить твердую лекарственную форму, в одном из воплощений раствор или суспензию, например, в пропиленкарбонате, растительных маслах или триглицеридах, инкапсулируют в желатиновую капсулу. Такие растворы и их приготовление и инкапсулирование описаны в патентах США №№4328245, 4409239 и 4410545. Чтобы приготовить жидкую лекарственную форму, раствор, например, в полиэтиленгликоле, может быть разбавлен достаточным количеством фармацевтически приемлемого жидкого носителя, например, воды, чтобы его было легко отмерить для введения.

Альтернативно, жидкие или полутвердые композиции для перорального применения могут быть приготовлены путем растворения или диспергирования активного соединения или его соли в растительных маслах, гликолях, триглицеридах, сложных эфирах пропиленгликоля (например, пропиленкарбонате) и других подобных носителях и инкапсулирования этих растворов или суспензий в оболочки твердых или мягких желатиновых капсул. Другие полезные композиции включают композиции, приведенные в патентах США №№ RE28819 и 4358603. Кратко, такие композиции включают, но не ограничиваются этим, композиции, содержащие соединение, предложенное в данной заявке, диалкилированный моно- или полиалкиленгликоль, в том числе, но не ограничиваясь этим, 1,2-диметоксиметан, диглим, триглим, тетраглим, простой диметиловый эфир полиэтиленгликоля-350, простой диметиловый эфир полиэтилен гликоля-550, простой диметиловый эфир полиэтиленгликоля-750, где 350, 550 и 750 относятся к приблизительной средней молекулярной массе полиэтиленгликоля, и один или более антиоксидантов, таких как бутил ированный гид рокси толуол (ВНТ), бутилированный гидроксианизол (ВНА), пропилгаллат, витамин Е, гидрохинон, гидроксикумарин, этаноламин, лецитин, кефалин, аскорбиновая кислота, яблочная кислота, сорбит, фосфорная кислота, тиодипропионовая кислота и ее сложные эфиры и дитиокарбаматы.

Другие композиции включают, но не ограничиваются этим, водноспиртовые растворы, содержащие фармацевтически приемлемый ацеталь. Спирты, используемые в этих композициях, представляют собой любые фармацевтически приемлемые смешивающиеся с водой растворители, имеющие одну или более гидроксильных групп, включая, но не ограничиваясь этим, пропиленгликоль и этанол. Ацетали включают, но не ограничиваются этим, ди(низший алкил)ацетали (низший алкил)альдегидов, такие как диэтилацеталь ацетальдегида.

Парентеральное введение, в одном из воплощений, характеризуется инъекцией, и данным описанием также охвачено либо подкожное, либо внутримышечное, либо внутривенное введение. Инъекционные препараты могут быть приготовлены в традиционных формах, либо в виде растворов или суспензий в жидкости, либо в виде твердых форм, подходящих для приготовления раствора или суспензии в жидкости перед инъекцией, либо в виде эмульсий. Инъекционные препараты, растворы и эмульсии также содержат один или более эксципиентов. Подходящими эксципиентами являются, например, вода, физиологический раствор, декстроза, глицерин или этанол. Помимо этого, при желании, фармацевтические композиции, подлежащие введению, также могут содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие агенты, поддерживающие рН агенты, стабилизаторы, усилители растворимости и другие подобные агенты, такие как, например, ацетат натрия, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинолеат и циклодекстрины.

Имплантация системы с медленным высвобождением или с длительным высвобождением, позволяющаям поддерживать постоянный уровень дозировки (см., например, патент США №3710795), также включена в данное описание. Кратко, соединение, предложенное согласно данному изобретению, диспергируют в твердой внутренней матрице, например, из полиметилметакрилата, полибутилметакрилата, пластифицированного или непластифицированного поливинилхлорида, пластифицированного найлона, пластифицированного полиэтилентерефталата, природного каучука, полиизопрена, полиизобутилена, полибутадиена, полиэтилена, сополимеров этилена и винилацетата, силиконовых каучуков, полидиметилсилоксанов, сополимеров на основе силиконкарбоната, гидрофильных полимеров, таких как гидрогели сложных эфиров акриловой и метакриловой кислот, коллаген, перекрестно сшитый поливиниловый спирт и перекрестно сшитый частично гидролизованный поливинилацетат, которая (матрица) окружена внешней полимерной мембраной, например, из полиэтилена, полипропилена, сополимеров на основе этилена/пропилена, сополимеров на основе этилена/этилакрилата, сополимеров на основе этилена/винилацетата, силиконовых каучуков, полидиметилсилоксанов, неопренового каучука, хлорированного полиэтилена, поливинилхлорида, сополимеров винилхлорида с винилацетатом, винилиденхлоридом, этиленом и пропиленом, ионсодержащего полиэтилентерефталата, бутилкаучука, эпихлоргидриновых каучуков, сополимера на основе этилена/винилового спирта, тройного сополимера на основе этилена/винилацетата/винилового спирта и сополимера на основе этилена/винилоксиэтанола, которая (мембрана) является нерастворимой в жидкостях организма. Антитело диффундирует через внешнюю полимерную мембрану на стадии высвобождения с регулируемой скоростью. Количество антитела, содержащегося в таких парентеральных композициях, сильно зависит от его конкретной природы, а также активности соединения и потребностей субъекта.

Препараты для парентерального введения включают стерильные растворы, готовые для инъекций, стерильные сухие растворимые продукты, такие как лиофилизированные порошки, готовые для комбинирования с растворителем непосредственно перед применением, в том числе таблетки для подкожных инъекций, стерильные суспензии, готовые для инъекций, стерильные сухие нерастворимые продукты, готовые для комбинирования с разбавителем непосредственно перед применением, и стерильные эмульсии. Растворы могут быть либо водными, либо неводными.

В случае внутривенного введения подходящие носители включают физиологический раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) и растворы, содержащие загущающие и солюбилизирующие агенты, такие как глюкоза, полиэтиленгликоль и пол и про пилен гликоль и их смеси.

Фармацевтически приемлемые носители, используемые в парентеральных препаратах, включают водные разбавители, неводные разбавители, антимикробные агенты, изотонические агенты, буферы, антиоксиданты, местные анестетики, суспендирующие и диспергирующие агенты, эмульгирующие агенты, комплексообразующие или хелатирующие агенты и другие фармацевтически приемлемые вещества.

Примеры водных разбавителей включают раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, изотонический раствор декстрозы для инъекций, стерильную воду для инъекций, раствор Рингера с декстрозой и лактатом для инъекций. Неводные парентеральные разбавители включают нелетучие масла растительного происхождения, хлопковое масло, кукурузное масло, кунжутное масло и арахисовое масло. В препараты для парентерального введения, упакованные в многодозовые контейнеры, могут быть добавлены антимикробные агенты в бактериостатических или фунгистатических концентрациях, которые включают фенолы или крезолы, соединения ртути, бензиловый спирт, хлорбутанол, метиловый и пропиловый сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты, тимеросал, бензалконийхлорид и бензетонийхлорид. Изотонические агенты включают хлорид натрия и декстрозу. Буферы включают фосфатный и цитратный буферы. Антиоксиданты включают бисульфат натрия. Местные анестетики включают прокаина гидрохлорид. Суспендирующие и диспергирующие агенты включают натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозу и поливинилпирролидон. Эмульгирующие агенты включают полисорбат 80 (TWEEN^® 80). Комплексообразующий или хелатирующий ионы металлов агент включает EDTA. Фармацевтически приемлемые носители также включают этиловый спирт, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль в случае смешивающихся с водой разбавителей и гидроксид натрия, соляную кислоту, лимонную кислоту или молочную кислоту для подведения рН.

Концентрацию фармацевтически активного соединения подводят таким образом, чтобы после инъекции обеспечить достижение эффективного количества для получения желаемого фармакологического эффекта. Точная доза зависит от возраста, массы и состояния пациента или животного, которая известна в данной области техники.

Однодозовые парентеральные препараты могут быть упакованы в ампулу, флакон или шприц с иглой. Все препараты для парентерального введения могут быть стерильными, как известно и как практикуется в данной области техники.

В качестве иллюстрации, эффективным способом введения считается внутривенная или интраартериальная инфузия стерильного водного раствора, содержащего активное соединение. Другим воплощением является стерильный водный или масляный раствор либо стерильная суспензия в воде или масле, содержащий (а я) активное вещество, вводимый(ая) путем инъекции по мере необходимости для получения желаемого фармакологического эффекта.

Инъекционные препараты предназначены для местного и системного введения. В одном из воплощений препарат в терапевтически эффективной дозировке готовят таким образом, чтобы в подвергаемой(ых) обработке ткани(ях) активное соединение содержалось в концентрации, составляющей по меньшей мере от примерно 0,1% масс./масс. до примерно 90% масс./масс. или более, в определенных воплощениях, более 1% масс./масс..

Антитело может быть суспендировано с получением микронизированной или другой подходящей формы. Форма полученной смеси зависит от ряда факторов, включая предполагаемый путь введения и растворимость соединения в выбранном носителе или разбавителе. Эффективной концентрации достаточно для ослабления симптомов состояния, и она может быть определена эмпирически.

В других воплощениях фармацевтические композиции представляют собой лиофилизированные порошки, которые можно повторно разводить для введения в виде растворов, эмульсий и других смесей. Кроме того, их можно повторно разводить и на их основе готовить композиции в виде твердых веществ или гелей.

Лиофилизированный порошок готовят путем растворения антитела, предложенного в данной заявке, или его фармацевтически приемлемого производного в подходящем растворителе. В некоторых воплощениях лиофилизированный порошок является стерильным. Растворитель может содержать эксципиент, который улучшает стабильность, или другой фармакологический компонент порошка или раствора, приготовленного повторным разведением из данного порошка. Эксципиенты, которые можно использовать, включают, но не ограничиваются этим, декстрозу, сорбит, фруктозу, кукурузный сироп, ксилит, глицерин, глюкозу, сахарозу или другой подходящий агент. Растворитель также может содержать буфер, такой как буфер на основе цитрата, фосфата натрия или калия либо другой такой буфер, известный специалистам в данной области техники, в одном из воплощений примерно с нейтральным значением рН. Последующие стерильная фильтрация раствора, затем лиофилизация в стандартных условиях, известных специалистам в данной области техники, обеспечивают получение желаемой композиции. В одном из воплощений полученный раствор будет разлит порциями во флаконы для проведения лиофилизации. Каждый флакон будет содержать однократную дозировку или несколько дозировок соединения. Лиофилизированный порошок можно хранить в соответствующих условиях, как например, при температуре от примерно 4°С до комнатной температуры.

В результате повторного разведения этого лиофилизированного порошка с использованием воды для инъекций получают композиции для применения при парентеральном введении. Для осуществления повторного разведения лиофилизированный порошок добавляют к стерильной воде или другому подходящему носителю. Точное количество зависит от выбранного соединения. Такое количество может быть определено эмпирически.

Смеси для местного применения готовят так, как описано для местного и системного введения. Полученная смесь может представлять собой раствор, суспензию, эмульсии или тому подобное и может быть приготовлена в виде кремов, гелей, мазей, эмульсий, растворов, эликсиров, лосьонов, суспензий, настоек, паст, пенок, аэрозолей, жидкостей для промываний, спреев, суппозиториев, перевязочных материалов, пластырей на кожу или какой-либо другой композиции, подходящей для местного введения.

На основе антител, предложенных в данной заявке, могут быть приготовлены аэрозоли для местного применения, например посредством ингаляции (см., например, патенты США №№4044126, 4414209 и 4364923, в которых описываются аэрозоли для доставки стероидного гормона, полезного для лечения воспалительных заболеваний, в частности, астмы). Эти композиции для введения в дыхательные пути могут быть в форме аэрозоля или раствора для небулайзера либо в виде микроизмельчеиного порошка для инсуффляций, по отдельности или в комбинации с инертным носителем, таким как лактоза. В этом случае частицы композиции будут, в одном из воплощений, иметь диаметр меньше 50 микрон, в одном из воплощений, меньше 10 микрон.

На основе данных соединений могут быть приготовлены композиции для локального или местного применения, например, для местного нанесения на кожу и слизистые оболочки, например, глаза, в форме гелей, кремов и лосьонов, и для внесения в глаз, либо для интрацистернального или интраспинального применения. Местное введение предназначено для трансдермальной доставки, а также для введения в глаза или слизистую оболочку, либо для ингаляционных терапий. Кроме того, можно вводить назальные растворы активного соединения, по отдельности или в комбинации с другими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

Такие растворы, в частности, предназначенные для офтальмического применения, могут быть приготовлены в виде 0,01%-10%-ных изотонических растворов, рН примерно 5-7, с использованием соответствующих солей.

Другие пути введения, например, с использованием трансдермальных пластырей, в том числе ионофоретических и электрофоретических средств, и ректальное введение, также включены в данное описание.

Трансдермальные пластыри, в том числе ионофоретические и электрофоретические средства, хорошо известны специалистам в данной области техники. Например, такие пластыри описаны в патентах США №№6267983, 6261595, 6256533, 6167301, 6024975, 6010715, 5985317, 5983134, 5948433 и 5860957.

Например, фармацевтическими лекарственными формами для ректального введения являются ректальные суппозитории, капсулы и таблетки для оказания системного действия. Термин "ректальные суппозитории", используемый в данном описании, означает твердые формы для введения в прямую кишку, которые плавятся или размягчаются при температуре тела, высвобождая один или более фармакологически или терапевтически активных ингредиентов. Фармацевтически приемлемыми веществами, применяемыми в ректальных суппозиториях являются основы или наполнители и агенты для повышения точки плавления. Примеры основ включают масло какао (масло какао-бобов), смесь глицерин-желатин, карбовакс (полиоксиэтиленгликоль) и соответствующие смеси моно-, ди- и триглицеридов жирных кислот. Можно использовать комбинации различных основ. Агенты для повышения точки плавления суппозиториев включают спермацет и воск. Ректальные суппозитории могут быть приготовлены либо способом прессования, либо формования. Масса ректального суппозитория, в одном из воплощений, составляет примерно 2-3 грамма.

Таблетки и капсулы для ректального введения могут быть приготовлены с использованием одного и того же фармацевтически приемлемого вещества и теми же способами, как и в случае композиций для перорального введения.

Антитела и другие композиции, предложенные в данной заявке, также могут быть приготовлены для направленного воздействия на конкретную ткань, рецептор или другую область организма подлежащего лечению субъекта. Многие из таких способов направленного воздействия хорошо известны специалистам в данной области техники. Все такие способы направленного воздействия включены в данную заявку для применения в композициях по настоящему изобретению. В качестве неограничивающих примеров способов направленного воздействия см., например, патенты США №№6316652, 6274552, 6271359, 6253872, 6139865, 6131570, 6120751, 6071495, 6060082, 6048736, 6039975, 6004534, 5985307, 5972366, 5900252, 5840674, 5759542 и 5709874.

В одном из воплощений, в качестве фармацевтически приемлемых носителей также могут быть использованы липосомальные суспензии, в том числе липосомы, направленно воздействующие на ткани, как например, липосомы, направленно воздействующие на опухоли. Они могут быть приготовлены в соответствии со способами, известными специалистам в данной области техники. Например, липосомные композиции могут быть приготовлены так, как описано в патенте США №4522811. Кратко, липосомы, такие как многослойные везикулы (MLV), могут быть образованы в результате высушивания яичного фосфатидилхолина и фосфатидилсерина из головного мозга (в молярном соотношении 7:3) на внутренней поверхности колбы. Добавляют раствор соединения, предложенного в данной заявке, в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS), не содержащем двухвалентных катионов, и колбу встряхивают, пока не диспергирует липидная пленка. Полученные везикулы промывают для удаления неинкапсулированного соединения, собирают центрифугированием и затем ресуспендируют в PBS.

СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ И ДОЗЫ

Кроме того, в данной заявке предложены композиции, содержащие одно или более антител, предложенных в данной заявке, для применения в предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома заболевания, такого как C10orf54-опосредуемое заболевание.

В определенных воплощениях данного изобретения предложены композиции, содержащие одно или более антител, предложенных в данной заявке, для применения в сдерживании развития, предупреждении или лечении C10orf54-опосредуемого заболевания и/или для облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания. Типичные C10orf54-опосредуемые заболевания включают нарушение клеточной пролиферации, рак, опухолеобразование и болезнь "трансплантат-против-хозяина" (GVHD) или их симптомы.

В определенных воплощениях данного изобретения предложены композиции, содержащие одно или более антител, предложенных в данной заявке, для применения в предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания, такого как нарушение клеточной пролиферации. Нарушение клеточной пролиферации может включать рак или опухолеобразование или их симптомы. В определенных воплощениях нарушение клеточной пролиферации ассоциировано с повышенной экспрессией и/или активностью C10orf54. Например, в определенных воплощениях нарушение клеточной пролиферации ассоциировано с повышенной экспрессией C10orf54 на поверхности раковой клетки. Примеры нарушений клеточной пролиферации, которые подлежат лечению, предупреждению или симптомы которых могут быть облегчены антителами, предложенными в данной заявке, включают, но не ограничиваются этим, рак мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, соединительной ткани, прямой кишки, желудка, пищевода, легкого, гортани, почки, полости рта, яичников или рак предстательной железы, или саркомы, меланомы, глиомы, лимфомы или лейкозы, или метастазы при любом из этих видов раков. Типичные нарушения клеточной пролиферации включают, но не ограничиваются этим, лейкоз, или острый или хронический, фибросаркому и рак мочевого пузыря.

Лейкозы представляют собой виды рака кроветворных тканей, характеризующиеся искажением пролиферации и развития лейкоцитов и их предшественников в крови и костном мозге. Обычно лейкозы классифицируют либо как хронические (медленно прогрессирующие), либо острые (быстро прогрессирующие). Лейкозы можно дополнительно классифицировать, беря за основу тип пораженных клеток крови. Например, лейкоз лимфоидных клеток включает лимфоидный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз или лимфобластный лейкоз, а лейкоз миелоидных клеток включает миелоидный лейкоз, миелогенный лейкоз, миелобластный лейкоз или гранулоцитарный лейкоз. Четыре основных типа лейкозов, которые можно лечить, предупреждать или симптомы которых можно облегчать способами, предложенными в данной заявке, включают острый лимфобластный лейкоз (ALL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), острый миелогенный лейкоз (AML) и хронический миелобластный лейкоз (CML).

Согласно одному из аспектов данного изобретения предложены способы предупреждения или лечения заболевания, описанного в данной заявке, путем введения субъекту терапевтически эффективного количества, соответственно, антитела к C10orf54, описанного в данной заявке, или композиции на его основе. В определенных воплощениях способ лечения заболевания включает введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело к C10orf54 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Способ, предложенный в данной заявке, также может включать использование по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, такого как агенты, предложенные в данной заявке, либо в виде отдельного средства лечения, либо в виде конъюгированного или рекомбинантно слитого с антителом к C10orf54, предложенным в данной заявке.

В одном из воплощений антитело к C10orf54, предложенное в данной заявке, можно использовать для направленного воздействия на C10orf54, экспрессируемый раковыми клетками, путем приведения в контакт данного антитела с C10orf54 с образованием комплекса антитело-антиген, вследствие чего конъюгированный или рекомбинантно слитый агент, описанный в данной заявке, получает доступ к внутреннему содержимому клетки. В одном из воплощений связанное антитело интернализуется раковой клеткой, экспрессирующей C10orf54.

В определенных воплощениях согласно данному изобретению предложены композиции, содержащие одно или более антител, предложенных в данной заявке, для применения в предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания, такого как GVHD или его симптом. GVHD обычно наблюдается после применения аллогенных или несоответствующим образом подобранных трансплантатов костного мозга (ВМТ).

В некоторых воплощениях GVHD представляет собой острую GVHD. Симптомы острой GVHD могут проявляться быстро и могут быть слабо выраженными или тяжелыми. В некоторых случаях острая GVHD развивается в течение примерно трех месяцев после трансплантации, например, когда формула крови восстанавливается после трансплантации. В некоторых случаях при острой GVHD поражается кожа, желудочно-кишечный (ЖК) тракт и/или печень. Например, у некоторых пациентов кожная форма острой GVHD начинается с появления сыпи, например, на ладонях рук пациента, подошвах ног или плечах. Однако, такая сыпь может стать обширной и может быть зудящей и болезненной и/или может приводить к образованию волдырей и шелушению. Печеночная форма острой GVHD может затрагивать нормальные функции печени, например, влиять на ферменты печени, и может, в свою очередь, вызывать желтуху. Печеночная форма острой GVHD также может быть причиной опухания и болезненности живота пациента, если печень станет увеличенной. Наконец, симптомы кишечной формы острой GVHD (или GVHD пищеварительной системы) могут включать диарею, появление слизи или крови в фекалиях, спазмы или боль в животе, расстройство пищеварения, тошноту и/или потерю аппетита. Другие общие симптомы острой GVHD могут включать анемию, субфебрильную температуру тела и/или усиление предрасположенности к инфекциям. Любую комбинацию таких симптомов острой GVHD можно предотвращать, лечить и/или облегчать с использованием композиций и способов, предложенных в данной заявке.

В других воплощениях GVHD представляет собой хроническую GVHD. Хроническая GVHD может наблюдаться в течение от примерно трех месяцев до примерно одного года или больше после трансплантации. Хроническая GVHD может протекать в слабо выраженной или тяжелой форме и в общем случае включает симптомы, схожие с симтомами при острой GVHD. При хронической GVHD может поражаться кожа и пищеварительная система, включая печень, но также могут вовлекаться другие органы и иммунная система (например, делая пациента более предрасположенным к инфекциям) и/или соединительные ткани. Симптомы кожной формы хронической GVHD включают сыпь, сухую кожу, грубую кожу, зудящую кожу, потемнение цвета кожи, утолщение кожи и/или могут затрагивать волосы (например, вызывать выпадение волос, появление седины) или ногти (например, приводить к жесткости или ломкости ногтей). Кишечная форма хронической GVHD может поражать пищеварительную систему, полость рта, пищевод, выстилку желудка и/или выстилку кишечника, и симптомы могут включать диарею, сухую или раздраженную полость рта, боли при глотании, слабое всасывание питательных веществ в желудке, вздутие живота, желудочные колики. Печеночная форма хронической GVHD может быть причиной повреждения и рубцевания печени (цирроза). Хроническая GVHD глаз может поражать слезообразующие железы, вызывая сухость глаз, жжение и болезненные ощущения или затрудненное восприятие яркого света. Легочная форма хронической GVHD может быть причиной одышки, стерторозного дыхания, непрекращающегося кашля и/или вызывать усиление предрасположенности к инфекциям дыхательных путей. Хроническая GVHD поражает сухожилия (например, вызывает воспаление), которые соединяют мышцу с костью, что приводит к затруднению при выпрямлении или сгибании рук и ног. Любую комбинацию таких симптомов хронической GVHD можно предотвращать, лечить и/или облегчать с использованием композиций и способов, предложенных в данной заявке.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, может быть использовано, например, в способах терапии in vitro, ex vivo и in vivo. В некоторых воплощениях в данной заявке предложены способы ингибирования роста или пролиферации клеток либо in vivo, либо in vitro, при этом данный способ включает приведение в контакт клетки с эффективным количеством композиции или антитела к C10orf54, предложенных в данной заявке. В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, может быть использовано в способе индуцирования гибели клеток. Данный способ может включать приведение в контакт клетки с эффективным количеством композиции или антитела к C10orf54, предложенных в данной заявке. Эти способы могут быть осуществлены в условиях, дающих возможность для связывания антитела с полипептидом, фрагментом полипептида или эпитопом C10orf54, например, но не ограничиваясь этим, когда полипептид C10orf54 экспрессирован на поверхности клетки. В случае ингибирования клеточного роста или пролиферации клеток такое ингибирование может включать уменьшение роста или пролиферации клеток по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100% и может включать гибель клеток. В определенных воплощениях данная клетка представляет собой раковую клетку или предраковую клетку. В определенных воплощениях клетка представляет собой раковую клетку мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, соединительной ткани, прямой кишки, желудка, пищевода, легкого, гортани, почки, полости рта, яичников или предстательной железы либо клетку саркомы, меланомы, глиомы, лимфомы или лейкозную клетку. В определенных воплощениях данная клетка представляет собой иммунную клетку, экспрессирующую полипептид C10orf54, такую как, но не ограничиваясь этим, регуляторная Т-клетка (т.е. супрессорная Т-клетка).

Антитело к C10orf54 можно вводить человеку в терапевтических или профилактических целях. Кроме того, антитело к C10orf54 можно вводить не являющемуся человеком млекопитающему, экспрессирующему C10orf54, с которым данное антитело перекрестно взаимодействует (например, примату, свинье, крысе или мыши), в ветеринарных целях или в качестве животной модели заболевания у человека. Что касается последнего, то такие животные модели могут быть полезны для оценки терапевтической или профилактической эффективности антител или иммуноконъюгатов, предложенных в данной заявке (например, для тестирования дозировок и временной динамики при введении).

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, можно использовать в способе модулирования иммунного ответа у субъекта. Такие способы могут включать введение эффективного количества композиции, содержащей антитело, предложенное в данной заявке, субъекту. Согласно некоторым аспектам модулирование может включать (а) усиление активации Т-клеток; (b) усиление пролиферации Т-клеток и/или (с) усиление продуцирования цитокинов. Методы анализа модулирования иммунного ответа хорошо известны специалисту в данной области техники и очевидно, что квалифицированный специалист сможет легко выполнить такие анализы.

В конкретном воплощении композиция для применения в сдерживании развития, предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания содержит антитело, описанное в данной заявке. В другом конкретном воплощении композиция для применения в сдерживании развития, предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания содержит антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок или функциональный фрагмент антитела, описанного в данной заявке.

В другом воплощении композиция для применения в сдерживании развития, предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания содержит одно или более антител, описанных в данной заявке.

Как обсуждалось более подробно в другом месте данного описания, композиция, предложенная в данной заявке, может быть использована либо отдельно, либо в комбинации с другими соединениями или композициями. Кроме того, антитела могут быть дополнительно слиты рекомбинантным путем по N- или С-концу с гетерологичным полипептидом или химически конъюгированы (в том числе методами ковалентного и нековалентного конъюгирования) с полипептидами или другими соединениями. Например, антитела, предложенные в данной заявке, могут быть слиты рекомбинантным путем или конъюгированы с молекулами, полезными в качестве меток в анализах, используемых для детекции, и с эффекторными молекулами, такими как гетерологичные полипептиды, лекарственные средства, радионуклеотиды или токсины. См., например, публикации РСТ WO 92/08495, WO 91/14438, WO 89/12624, патент США №5314995 и ЕР 396387.

Антитела, предложенные в данной заявке, могут быть использованы, например, для очистки, детекции и направленного воздействия на антигены C10orf54 в диагностических и терапевтических методах как in vitro, так и in vivo. Например, модифицированные антитела находят применение в иммуноанализах для качественного и количественного измерения уровней C10orf54 в биологических образцах. См., например, работу Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed., 1988) (включенную в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте).

Кроме того, в данной заявке предложены способы сдерживания развития, лечения, предупреждения и/или ослабления одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания путем введения субъекту эффективного количества антитела или фармацевтической композиции, содержащей антитело, предложенное в данной заявке. Согласно одному из аспектов, антитело является по существу очищенным (например, по существу не содержащим веществ, которые ограничивают его действие или вызывают нежелательные побочные эффекты). В конкретных воплощениях антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело. Субъектом, которому вводят терапевтическое средство, может быть млекопитающее, например, не являющееся приматом млекопитающее (например, крупный рогатый скот, свиньи, лошади, кошки, собаки, крысы и т.д.) или примат (например, обезьяна, такая как яванский макак, или человек). В конкретном воплощении субъектом является человек. В другом воплощении субъектом является человек с C10orf54-опосредуемым заболеванием.

Известны различные системы доставки, и их можно использовать для введения профилактического или терапевтического агента (например, антитела, предложенного в данной заявке), включая, но не ограничиваясь этим, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, применение рекомбинантных клеток, способных экспрессировать данное антитело, рецептор-опосредуемого эндоцитоза (см., например, Wu and Wu, J. Biol. Chem., 262: 4429-4432 (1987)), конструирование нуклеиновой кислоты как части ретро вирусного или другого вектора и т.д. Методы введения профилактического или терапевтического агента (например, антитела, предложенного в данной заявке) или фармацевтической композиции включают, но не ограничиваются этим, парентеральное введение (например, интрадермальное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное и подкожное), эпидуральное и мукозальное (например, интраназальным и пероральным путями). В конкретном воплощении профилактический или терапевтический агент (например, антитело, предложенное в данной заявке) или фармацевтическую композицию вводят интраназально, внутримышечно, внутривенно или подкожно. Профилактические или терапевтические агенты или композиции можно вводить любым удобным путем, например, посредством инфузии или болюс-инъекции, посредством всасывания через эпителиальные или кожнослизистые выстилки (например, через слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку носовой полости, слизистые оболочки прямой кишки и кишечника и т.д.) и можно вводить вместе с другими биологически активными агентами. Введение может быть системным или местным. Помимо этого также можно использовать легочное введение, например, посредством применения ингалятора или небулайзера и композиции с аэрозолирующим агентом. См., например, патенты США №№6019968, 5985320, 5985309, 5934272, 5874064, 5855913, 5290540 и 4880078; и публикации РСТ №№ WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346 и WO 99/66903, каждый(ая) из которых включен(а) в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

В конкретном воплощении желательным может оказаться местное введение профилактического или терапевтического агента или фармацевтической композиции, предложенных в данной заявке, в область, нуждающуюся в лечении. Этого можно достичь, например, и не в качестве ограничения, посредством местной инфузии, путем местного введения (например, с помощью интраназального спрея), посредством инъекции или с использованием имплантата, при этом имплантат может представлять собой пористый, непористый или гелеобразный материал, включая мембраны, такие как силастиковые мембраны или волокна. В определенных воплощениях, когда вводят антитела, предложенное в данной заявке, следует соблюдать осторожность при использовании материалов, которые не абсорбируют данное антитело.

В другом воплощении терапевтический агент или композиция, предложенные в данной заявке, могут быть доставлены в везикуле, в частности, в липосоме (см. Langer, 1990, Science, 249: 1527-1533; Treat и др. в Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, там же, стр. 317-327; в целом см. там же).

В другом воплощении, терапевтический агент или композиция, предложенные в данной заявке, могут быть доставлены в системе с регулируемым высвобождением или с длительным высвобождением. В одном из воплощений для достижения регулируемого или длительного высвобождения можно использовать насос (см. Langer, выше; Sefton, 1987, CRC Grit. Ref. Biomed. Eng., 14: 20; Buchwald et al., 1980, Surgery, 88: 507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med., 321: 574). В другом воплощении для достижения регулируемого или длительного высвобождения терапевтического агента (например, антитела, предложенного в данной заявке) или композиции, предложенных в данной заявке, можно использовать полимерные материалы (см., например, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem., 23: 61; также см. Levy etal., 1985, Science, 228: 190; During et al., 1989, Ann. Neurol., 25: 351; Howard et al., 1989, J. Neurolsurg., 71: 105); патент США №5679377; патент США №5916597; патент США №5912015; патент США №5989463; патент США №5128326; публикацию РСТ № WO 99/15154; и публикацию РСТ № WO 99/20253. Примеры полимеров, используемых в композициях с длительным высвобождением, включают, но не ограничиваются этим, поли-2-гидроксиэтилметакрилат, полиметилметакрилат, полиакриловую кислоту, сополимер этилена и винилацетата, полиметакриловую кислоту, полигликолиды (PLG), полиангидриды, поли-N-винилпирролидон, поливиниловый спирт, полиакриламид, пол и этилен гликоль, полилактиды (PLA), полилактид-ко-гликолиды (PLGA) и сложные полиортоэфиры. В конкретном воплощении полимер, используемый в композиции с длительным высвобождением, является инертным, не содержащим вымываемых примесей, стабильным при хранении, стерильным и биоразлагаемым. В еще одном воплощении система с регулируемым или длительным высвобождением может быть размещена в непосредственной близости от терапевтической мишени, например, в носовых проходах или легких, в результате чего потребуется только часть системной дозы (см., например, Goodson, в Medical Applications of Controlled Release, выше, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Системы с регулируемым высвобождением обсуждаются в обзоре Langer (1990, Science, 249: 1527-1533). Для приготовления композиций с длительным высвобождением, содержащих одно или более антител, предложенных в данной заявке, можно использовать любой метод, известный специалисту в данной области техники. См., например, патент США №4526938, публикацию РСТ WO 91/05548, публикацию РСТ WO 96/20698, Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel", Radiotherapy & Oncology, 39:179-189, Song et al., 1995, Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions", PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology, 50: 372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application", Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 24: 853-854 и Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery", Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater., 24: 759-760.

В конкретном воплощении, когда соединение, предложенное в данной заявке, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую профилактический или терапевтический агент (например, антитело, предложенное в данной заявке), данную нуклеиновую кислоту можно вводить in vivo для стимулирования экспрессии кодируемого ею терапевтического агента, при этом ее конструируют в виде части соответствующего нуклеиновокислотного экспрессирующего вектора и вводят так, чтобы она оказалась внутри клетки, например, посредством применения ретровирусного вектора (см. патент США №4980286), или путем прямой инъекции, или посредством применения бомбардировки микрочастицами (например, с использованием генной пушки; Biolistic, Dupont), или применения покрытия из липидов, либо рецепторов клеточной поверхности, либо агентов трансфекции, или путем введения ее в связанном состоянии с последовательностью гомеобокс-подобного пептида, который, как известно, поступает в ядро (см., например, Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 1864-1868) и т.д. Альтернативно, для экспрессии нуклеиновая кислота может быть введена внутрь клетки и встроена в результате гомологической рекомбинации в ДНК клетки хозяина.

В конкретном воплощении композиция содержит одно, два или больше антител, предложенных в данной заявке. В другом воплощении композиция содержит одно, два или больше антител, предложенных в данной заявке, и профилактический или терапевтический агент, отличный от антитела, предложенного в данной заявке. В определенных воплощениях данные агенты, как известно, полезны или использовались либо используются в настоящее время для предупреждения, лечения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания. Помимо профилактических или терапевтических агентов, композиции, предложенные в данной заявке, также могут содержать носитель.

Композиции, предложенные в данной заявке, включают нерасфасованные лекарственные композиции, полезные при изготовлении фармацевтических композиций (например, композиций, подходящих для введения субъекту или пациенту), которые можно использовать для приготовления стандартных лекарственных форм. В конкретном воплощении композиция, предложенная в данной заявке, представляет собой фармацевтическую композицию. Такие композиции содержат профилактически или терапевтически эффективное количество одного или более чем одного профилактического или терапевтического агента (например, антитела, предложенного в данной заявке, или другого профилактического или терапевтического агента) и фармацевтически приемлемый носитель. В определенных воплощениях фармацевтические композиции приготовлены такими, чтобы они подходили для конкретного пути введения субъекту.

В конкретном воплощении данная композиция приготовлена в соответствии с общепринятыми методиками в виде фармацевтической композиции, адаптированной для внутривенного введения людям. Обычно, композициями для внутривенного введения являются растворы в стерильном изотоническом водном буфере. При необходимости композиция также может включать в себя солюбилизирующий агент и местный анестетик, такой как лидокаин, для облегчения боли в месте инъекции. Такие композиции, однако, можно вводить отличным от внутривенного введения путем.

Как правило, ингредиенты композиций, предложенных в данной заявке, поставляются либо по отдельности, либо смешанными вместе в стандартной лекарственной форме, например, в виде сухого лиофилизированного порошка или не содержащего воды концентрата в герметично закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества активного агента. Если данная композиция подлежит введению посредством инфузии, то ее можно распределять с использованием инфузионного флакона, содержащего стерильные фармацевтической степени чистоты воду или физиологический раствор. Если такую композицию вводят путем инъекции, то должно быть предусмотрено наличие ампулы со стерильной водой для инъекций или физиологическим раствором, чтобы ингредиенты можно было смешать перед введением.

В определенных воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, упаковано в герметично закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества антитела. В одном из воплощений антитело поставляется в виде сухого стерильного лиофилизированного порошка или не содержащего воды концентрата в герметично закрытом контейнере и может быть повторно разведено, например, в воде или физиологическом растворе до концентрации, целесообразной для введения субъекту. В определенных воплощениях антитело поставляется в виде сухого стерильного лиофилизированного порошка в герметично закрытом контейнере в стандартной лекарственной дозировке, составляющей по меньшей мере 0,1 мг; по меньшей мере 0,5 мг; по меньшей мере 1 мг; по меньшей мере 2 мг; или по меньшей мере 3 мг; например, по меньшей мере 5 мг; по меньшей мере 10 мг; по меньшей мере 15 мг; по меньшей мере 25 мг; по меньшей мере 30 мг; по меньшей мере 35 мг; по меньшей мере 45 мг; по меньшей мере 50 мг; по меньшей мере 60 мг; по меньшей мере 75 мг; по меньшей мере 80 мг; по меньшей мере 85 мг; по меньшей мере 90 мг; по меньшей мере 95 мг; или по меньшей мере 100 мг. Лиофилизированное антитело можно хранить при температуре от 2 до 8°С в его первоначальном контейнере, и данное антитело можно вводить в срок не более 12 часов, например, в срок не более 6 часов, в срок не более 5 часов, в срок не более 3 часов или в срок не более 1 часа после повторного разведения. В альтернативном воплощении антитело в жидкой форме поставляется в герметично закрытом контейнере с указанием количества и концентрации антитела. В определенных воплощениях антитело в жидкой форме поставляется в герметично закрытом контейнере в концентрации по меньшей мере 0,1 мг/мл, по меньшей мере 0,5 мг/мл или по меньшей мере 1 мг/мл, например, по меньшей мере 5 мг/мл, по меньшей мере 10 мг/мл, по меньшей мере 15 мг/мл, по меньшей мере 25 мг/мл, по меньшей мере 30 мг/мл, по меньшей мере 40 мг/мл, по меньшей мере 50 мг/мл, по меньшей мере 60 мг/мл, по меньшей мере 70 мг/мл, по меньшей мере 80 мг/мл, по меньшей мере 90 мг/мл или по меньшей мере 100 мг/мл.

Композиции, предложенные в данной заявке, могут быть приготовлены в виде нейтральных или солевых форм. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные с такими анионами, как анионы, происходящие из соляной, фосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислот и т.д., и соли, образованные с такими катионами, как катионы, происходящие из гидроксидов натрия, калия, аммония, кальция, трехвалентного железа, катионы изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т.д.

Количество терапевтического агента (например, антитела, предложенного в данной заявке) или композиции, предложенной в данной заявке, которое будет эффективным в предупреждении, лечении и/или облегчении одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания, может быть определено стандартными клиническими методами.

Соответственно, для предупреждения, лечения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания антитело или композицию можно вводить человеку в дозировке, которая приводит к получению титра сыворотки крови, составляющего от примерно 0,1 мкг/мл до примерно 450 мкг/мл и в некоторых воплощениях по меньшей мере 0,1 мкг/мл, по меньшей мере 0,2 мкг/мл, по меньшей мере 0,4 мкг/мл, по меньшей мере 0,5 мкг/мл, по меньшей мере 0,6 мкг/мл, по меньшей мере 0,8 мкг/мл, по меньшей мере 1 мкг/мл, по меньшей мере 1,5 мкг/мл, по меньшей мере 2 мкг/мл, по меньшей мере 5 мкг/мл, по меньшей мере 10 мкг/мл, по меньшей мере 15 мкг/мл, по меньшей мере 20 мкг/мл, по меньшей мере 25 мкг/мл, по меньшей мере 30 мкг/мл, по меньшей мере 35 мкг/мл, по меньшей мере 40 мкг/мл, по меньшей мере 50 мкг/мл, по меньшей мере 75 мкг/мл, по меньшей мере 100 мкг/мл, по меньшей мере 125 мкг/мл, по меньшей мере 150 мкг/мл, по меньшей мере 200 мкг/мл, по меньшей мере 250 мкг/мл, по меньшей мере 300 мкг/мл, по меньшей мере 350 мкг/мл, по меньшей мере 400 мкг/мл, по меньшей мере 450 мкг/мл. Помимо этого, для облегчения идентификации оптимальных диапазонов дозировок возможно могут помочь результаты анализов in vitro. Точная доза, применяемая в композиции, также будет зависеть от пути введения и тяжести C10orf54-опосредуемого заболевания, и ее выбор должен быть сделан в соответствии с заключением практикующего врача и состояния каждого пациента.

Значения эффективных доз могут быть определены экстраполированием с использованием кривой зависимости доза-ответ, полученной из экспериментов в тест-системах in vitro или на животных моделях.

Для антител, предложенных в данной заявке, вводимая пациенту дозировка в определенных воплощениях может составлять от 0,1 мг/кг до 100 мг/кг массы тела пациента. В некоторых воплощениях вводимая пациенту дозировка составляет от примерно 1 мг/кг до примерно 75 мг/кг массы тела пациента. В определенных воплощениях вводимая пациенту дозировка составляет от 1 мг/кг до 20 мг/кг массы тела пациента, например, от 1 мг/кг до 5 мг/кг массы тела пациента. В общем случае, человеческие антитела имеют более длительный полупериод существования в организме человека, чем антитела из других видов, вследствие наличия иммунного ответа на чужеродные полипептиды. По этой причине часто возможно использование более низких дозировок человеческих антител и менее частое введение. Кроме того, дозировка и частота введения антител, предложенных в данной заявке, могут быть снижены благодаря усилению поглощения и проникновения антител в ткани, обусловленного модификациями, такими как, например, липидизация.

В одном из воплощений антитело, предложенное в данной заявке, вводят 5 раз, 4 раза, 3 раза, 2 раза или 1 раз в дозе приблизительно 100 мг/кг или меньше, приблизительно 75 мг/кг или меньше, приблизительно 50 мг/кг или меньше, приблизительно 25 мг/кг или меньше, приблизительно 10 мг/кг или меньше, приблизительно 5 мг/кг или меньше, приблизительно 1 мг/кг или меньше, приблизительно 0,5 мг/кг или меньше либо приблизительно 0,1 мг/кг или меньше для предупреждения, лечения или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания. В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, вводят примерно 1-12 раз, причем эти дозы можно вводить по необходимости, например, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в месяц, один раза в два месяца, один раза в три месяца и т.д., как определено врачом. В некоторых воплощениях можно чаще (например, 3-6 раз) осуществлять введение более низкой дозы (например, 1-15 мг/кг). В других воплощениях можно реже (например, 1-3 раза) вводить более высокую дозу (например, 25-100 мг/кг). Однако, что очевидно специалистам в данной области техники, другие дозировочные количества и схемы введения легко поддаются определению, и они включены в объем данного описания.

В конкретном воплощении антитело, предложенное в данной заявке, в составе композиции с длительным высвобождением вводят субъекту, такому как человек, в дозе приблизительно 100 мг/кг, приблизительно 75 мг/кг или меньше, приблизительно 50 мг/кг или меньше, приблизительно 25 мг/кг или меньше, приблизительно 10 мг/кг или меньше, приблизительно 5 мг/кг или меньше, приблизительно 1 мг/кг или меньше, приблизительно 0,5 мг/кг или меньше, приблизительно 0,1 мг/кг или меньше для предупреждения, лечения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания. В другом конкретном воплощении антитело, предложенное в данной заявке, вводят субъекту, такому как человек, не в составе композиции с длительным высвобождением, а в виде болюса, составляющего приблизительно 100 мг/кг, приблизительно 75 мг/кг или меньше, приблизительно 50 мг/кг или меньше, приблизительно 25 мг/кг или меньше, приблизительно 10 мг/кг или меньше, приблизительно 5 мг/кг или меньше, приблизительно 1 мг/кг или меньше, приблизительно 0,5 мг/кг или меньше либо приблизительно 0,1 мг/кг или меньше, для предупреждения, лечения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания и через некоторый период времени субъекту вводят (например, интраназально или внутримышечно) один, два, три или четыре раза антитело, предложенное в данной заявке, в составе композиции с длительным высвобождением в дозе приблизительно 100 мг/кг, приблизительно 75 мг/кг или меньше, приблизительно 50 мг/кг или меньше, приблизительно 25 мг/кг или меньше, приблизительно 10 мг/кг или меньше, приблизительно 5 мг/кг или меньше, приблизительно 1 мг/кг или меньше, приблизительно 0,5 мг/кг или меньше либо приблизительно 5 мг/кг или меньше. Согласно этому "некоторый период времени" может составлять от 1 до 5 суток, неделю, две недели или месяц.

В некоторых воплощениях разовую дозу антитела, предложенного в данной заявке, вводят пациенту для предупреждения, лечения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать раз, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать, двадцать один, двадцать два, двадцать три, двадцать четыре, двадцать пять или двадцать шесть раз с периодичностью один раз в две недели (например, приблизительно 14 суток) в течение годового курса лечения, причем данная доза выбрана из группы, состоящей из доз примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 1 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 15 мг/кг, примерно 20 мг/кг, примерно 25 мг/кг, примерно 30 мг/кг, примерно 35 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 45 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 55 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 65 мг/кг, примерно 70 мг/кг, примерно 75 мг/кг, примерно 80 мг/кг, примерно 85 мг/кг, примерно 90 мг/кг, примерно 95 мг/кг, примерно 100 мг/кг или их комбинации (например, каждая вводимая один раз в месяц доза может быть или может не быть одинаковой).

В другом воплощении разовую дозу антитела, предложенного в данной заявке, вводят пациенту для предупреждения, лечения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать раз с периодичностью приблизительно один раз в месяц (например, приблизительно 30 суток) в течение годового курса лечения, причем данная доза выбрана из группы, состоящей из доз примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 1 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 15 мг/кг, примерно 20 мг/кг, примерно 25 мг/кг, примерно 30 мг/кг, примерно 35 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 45 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 55 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 65 мг/кг, примерно 70 мг/кг, примерно 75 мг/кг, примерно 80 мг/кг, примерно 85 мг/кг, примерно 90 мг/кг, примерно 95 мг/кг, примерно 100 мг/кг или их комбинации (например, каждая вводимая один раз в месяц доза может быть или может не быть одинаковой).

В одном из воплощений разовую дозу антитела, предложенного в данной заявке, вводят пациенту для лечения, предупреждения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания два, три, четыре, пять или шесть раз с периодичностью приблизительно один раз в два месяца (например, приблизительно 60 суток) в течение годового курса лечения, причем данная доза выбрана из группы, состоящей из доз примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 1 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 15 мг/кг, примерно 20 мг/кг, примерно 25 мг/кг, примерно 30 мг/кг, примерно 35 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 45 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 55 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 65 мг/кг, примерно 70 мг/кг, примерно 75 мг/кг, примерно 80 мг/кг, примерно 85 мг/кг, примерно 90 мг/кг, примерно 95 мг/кг, примерно 100 мг/кг или их комбинации (например, каждая вводимая один раз в два месяца доза может быть или может не быть одинаковой).

В некоторых воплощениях разовую дозу антитела, предложенного в данной заявке, вводят пациенту для лечения, предупреждения и/или облегчения одного или более чем одного симптома C10orf54-опосредуемого заболевания два, три или четыре раза с периодичностью приблизительно один раз в три месяца (например, приблизительно 120 суток) в течение годового курса лечения, причем данная доза выбрана из группы, состоящей из доз примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 1 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 15 мг/кг, примерно 20 мг/кг, примерно 25 мг/кг, примерно 30 мг/кг, примерно 35 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 45 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 55 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 65 мг/кг, примерно 70 мг/кг, примерно 75 мг/кг, примерно 80 мг/кг, примерно 85 мг/кг, примерно 90 мг/кг, примерно 95 мг/кг, примерно 100 мг/кг или их комбинации (например, каждая вводимая один раз в три месяца доза может быть или может не быть одинаковой).

В определенных воплощениях путь введения пациенту дозы антитела, предложенного в данной заявке, является интраназальным, внутримышечным, внутривенным или их комбинацией, но также приемлемы и другие пути, описанные в данной заявке. Каждая доза может быть введена с использованием одного и того же или разных путей введения. В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данной заявке, можно вводить с использованием разных путей введения одновременно с другими дозами или после других доз этого же или другого антитела, предложенного в данной заявке.

В некоторых воплощениях, антитела, предложенные в данной заявке, вводят субъекту в профилактических или терапевтических целях. Антитела можно вводить субъекту в профилактических или терапевтических целях с тем, чтобы предотвратить, ослабить или облегчить C10orf54-опосредуемое заболевание или его симптомы.

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ АНТИТЕЛ

Меченые антитела, предложенные в данной заявке, и их производные и аналоги, которые связываются с антигеном C10orf54, можно использовать в диагностических целях для детекции, диагностирования или мониторинга C10orf54-опосредуемого заболевания. Кроме того, в данной заявке предложены способы детекции C10orf54-опосредуемого заболевания, включающие: (а) проведение анализа экспрессии антигена C10orf54 в клетках или образце ткани субъекта с использованием одного или более антител, предложенных в данной заявке, которые связываются с антигеном C10orf54; и (b) сравнение уровней антигена C10orf54 с контрольным уровнем, например, уровнями в образцах нормальной ткани (например, от пациента без C10orf54-опосредуемого заболевания или от одного и того же пациента до начала заболевания), при этом возрастание анализируемого уровня антигена C10orf54 по сравнению с контрольным уровнем антигена C10orf54 указывает на наличие C10orf54-опосредуемого заболевания.

Также, согласно данному изобретению предложен диагностический анализ для диагностики C10orf54-опосредуемого заболевания, включающий: (а) проведение анализа уровня антигена C10orf54 в клетках или в образце ткани индивидуума с использованием одного или более антител, предложенных в данной заявке, которые связываются с антигеном C10orf54; и (b) сравнение уровня антигена C10orf54 с контрольным уровнем, например, уровнями в образцах нормальной ткани, при этом возрастание анализируемого уровня антигена C10orf54 по сравнению с контрольным уровнем антигена C10orf54 указывает на наличие C10orf54-опосредуемого заболевания. Более полная диагностика C10orf54-опосредуемого заболевания может позволить работникам здравохранения раньше применить профилактические меры или интенсивное лечение, тем самым предупреждая развитие или дальнейшее прогрессирование C10orf54-опосредуемого заболевания.

Антитела, предложенные в данной заявке, можно использовать для анализа уровней антигена C10orf54 в биологическом образце с применением классических иммуногистологических методов, которые изложены в данном описании или которые известны специалистам в данной области техники (например, см. Jalkanen etal., 1985, J. Cell Biol., 101: 976-985; и Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol., 105: 3087-3096). Другие методы с использованием антител, полезные для детекции генной экспрессии, включают иммуноанализы, такие как твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (RIA). Подходящие метки для анализа антител известны в данной области техники и включают ферментативные метки, такие как глюкозооксидаза; радиоактивные изотопы, такие как йод (¹²⁵I, ¹²¹I), углерод (¹⁴С), сера (³⁵S), тритий (³Н), индий (¹²¹In) и технеций (⁹⁹Тс); люминесцентные метки, такие каклюминол; и флуоресцентные метки, такие как флуоресцеин, родамин и биотин.

Согласно одному из аспектов данного изобретения предложен способ детекции и диагностики C10orf54-опосредуемого заболевания у человека. В одном из воплощений диагностика включает: а) введение (например, парентерально, подкожно или внутрибрюшинно) субъекту эффективного количества меченого антитела, которое связывается с антигеном C10orf54; b) выжидание в течение некоторого промежутка времени после введения с целью обеспечения возможности меченому антителу сконцентрироваться у субъекта преимущественно в местах экспрессии антигена C10orf54 (и чтобы содержание несвязавшихся меченых молекул достигло фонового уровня); с) определение фонового уровня; и d) детекцию меченого антитела у субъекта, при этом детекция меченого антитела выше фонового уровня указывает на то, что данный субъект имеет C10orf54-опосредуемое заболевание. Фоновый уровень может быть определен различными методами, включая сравнение количества обнаруженных меченых молекул со стандартным значением, ранее определенным для данной конкретной системы.

В данной области техники будет очевидно, что размер субъекта и используемая система визуализации будут определять количество визуализирующей группировки, необходимое для получения диагностического изображения. Для субъекта-человека, в случае группировки радиоактивного изотопа, количество вводимого радиоактивного соединения обычно будет лежать в диапазоне примерно от 5 до 20 милликюри для ⁹⁹Тс. Меченое антитело затем будет предпочтительно накапливаться в месте расположения клеток, которые содержат конкретный белок. Визуализация опухоли in vivo описана в S.W. Burchiel et al., "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments." (глава 13 в Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cancer, S.W. Burchiel and B.A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982)).

В зависимости от нескольких показателей, включая тип используемой метки и способ введения, промежуток времени после введения с целью обеспечения возможности меченому антителу сконцентрироваться у субъекта преимущественно в местах экспрессии антигена и чтобы содержание несвязавшегося меченого антитела достигло фонового уровня, составляет от 6 до 48 часов, или от 6 до 24 часов, или от 6 до 12 часов. В другом воплощении промежуток времени после введения составляет от 5 до 20 суток или от 5 до 10 суток.

В одном из воплощений мониторинг C10orf54-опосредуемого заболевания осуществляют, повторяя применение способа диагностики C10orf54-опосредуемого заболевания, например, через один месяц после проведения первоначальной диагностики, через шесть месяцев после проведения первоначальной диагностики, через один год после проведения первоначальной диагностики и т.д.

Присутствие меченой молекулы может быть обнаружено у субъекта с использованием методов, известных в данной области техники для сканирования in vivo. Эти методы зависят от типа используемой метки. Специалисты в данной области будут в состоянии определить соответствующий метод детекции конкретной метки. Методы и устройства, которые могут быть использованы в диагностических способах, предложенных в данной заявке, включают, но не ограничиваются этим, компьютерную томографию (СТ), сканирование целого организма, например позитронно-эмиссионную томографию (PET), магнитно-резонансную визуализацию (MRI) и эхографию.

В конкретном воплощении молекулу метят радиоактивным изотопом и детектируют у пациента с использованием чувствительного к излучению хирургического инструмента (Thurston et al., патент США №5441050). В другом воплощении молекулу метят флуоресцентным соединением и детектируют у пациента с использованием чувствительного к флуоресценции сканирующего устройства. В другом воплощении молекулу метят испускающим позитроны металлом и детектируют у пациента с использованием позитронно-эмиссионной томографии. В еще одном воплощении молекулу метят парамагнитной меткой и детектируют у пациента с использованием магнитно-резонансной томографии (MRI).

СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ

Антитела, предложенные в данной заявке, которые связываются с антигеном, могут быть получены любым методом, известным в данной области техники для синтеза антител, в частности, с использованием химического синтеза или методов рекомбинантной экспрессии. При практическом применении настоящего описания используются, если не указано иное, традиционные методы молекулярной биологии, микробиологии, генетического анализа, рекомбинантной ДНК, органической химии, биохимии, ПЦР, синтеза и модификации олигонуклеотидов, гибридизации нуклеиновых кислот и методы смежных областей, находящиеся в пределах компетентности специалиста в данной области техники. Эти методы описаны в ссылках, цитированных в данном описании, и полностью раскрыты в литературе. См., например, Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 и ежегодные откорректированные издания); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 и ежегодные откорректированные издания); Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al, (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.

Поликлональное антитела, которые связываются с антигеном, могут быть получены с использованием различных методик, хорошо известных в данной области техники. Например, человеческий антиген можно вводить различным животным-хозяевам, включая, но не ограничиваясь этим, кроликов, мышей, крыс и т.д., чтобы индуцировать получение сывороток, содержащих поликлональные антитела, специфичные к человеческому антигену. Для усиления иммунного ответа, в зависимости от вида хозяина, можно использовать различные адъюванты, и они включают, но не ограничиваются этим, адъювант Фрейнда (полный и неполный), минеральные гели, такие как гель гидроксида алюминия, поверхностно-активные вещества, такие как лизолецитин, полиолы типа плюроника, полианионы, пептиды, масляные эмульсии, гемоцианины лимфы улитки, динитрофенол и потенциально полезные для человека адъюванты, такие как BCG (бацилла Кальмета-Герена) и Corynebacterium parvum. Такие адъюванты также хорошо известны в данной области техники.

Моноклональные антитела могут быть получены с использованием широкого круга методов, известных в данной области техники, включая применение гибридомных и рекомбинантных технологий и методов фагового дисплея или их комбинации. Например, моноклональные антитела могут быть получены с ипользованием гибридомных методик, включая известные в данной области техники, о которых сообщается, например, в работах Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., Monoclonal Antibodies and T-Cell Hvbridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981), включенных посредством ссылки во всей своей полноте. Термин "моноклональное антитело", использованный в данном описании, не ограничивается антителами, полученными с использованием гибридомной технологии. В данном описании в другом месте обсуждаются другие типичные методы получения моноклональных антител, такие как, например, применение технологии KM mouse™. Дополнительные типичные методы получения моноклональных антител приводятся в примерах в данном описании.

Методы получения и скрининга специфических антител с использованием гибридомной технологии являются общепризнанными и хорошо известными в данной области техники методами. Кратко, мыши могут быть иммунизированы антигеном C10orf54, и как только обнаружен иммунный ответ, например, в сыворотке крови мышей обнаружены антитела, специфичные к антигену C10orf54, проводят забор селезенки мышей и осуществляют выделение спленоцитов. Затем выполняют слияние спленоцитов с использованием хорошо известных методов с любыми подходящими клетками миеломы, например клетками клеточной линии SP20, которую можно получить из АТСС (Американская коллекция типовых культур). Гибридомы отбирают и клонируют методом предельного разведения.

Кроме того, для иммунизации животного можно использовать метод множественных сайтов повторных иммунизации (RIMMS) (статья Kilptrack et al., 1997, Hybridoma, 16: 381-9, включенная посредством ссылки во всей своей полноте). Затем клоны гибридом анализируют известными в данной области техники методами в отношении клеток, которые секретируют антитела, способные связываться с рассматриваемым полипептидом. В результате иммунизации мышей положительными клонами гибридом можно получить асцитную жидкость, которая, как правило, содержит высокие уровни антител.

Соответственно, в данной заявке предложены также способы получения антител посредством культивирования гибридомной клетки, секретирующей модифицированное антитело, предложенное в данной заявке, при этом в определенных воплощениях гибридому получают в результате слияния спленоцитов, выделенных из мыши, иммунизированной антигеном C10orf54, с клетками миеломы и затем скрининга гибридом, полученных в результате данного слияния, в отношении клонов гибридом, которые секретируют антитело, способное связываться с антигеном C10orf54.

Фрагменты антител, распознающие специфические антигены C10orf54, могут быть получены любым методом, известным специалистам в данной области техники. Например, Fab и F(ab')₂ фрагменты, предложенные в данной заявке, могут быть получены в результате протеолитического расщепления молекул иммуноглобулинов с использованием таких ферментов, как папаин (для получения Fab фрагментов) или пепсин (для получения F(ab')₂ фрагментов). F(ab')₂ фрагменты содержат вариабельную область, константную область легкой цепи и СН1-домен тяжелой цепи. Помимо этого, антитела, предложенные в данной заявке, также могут быть получены с использованием различных методов фагового дисплея, известных в данной области техники.

Например, антитела также могут быть получены с использованием различных методов фагового дисплея. В методах фагового дисплея функциональные домены антител проявляются на поверхности фаговых частиц, которые несут кодирующие их полинуклеотидные последовательности. В частности, последовательности ДНК, кодирующие VH- и VL-домены, амплифицируют из библиотек кДНК животного (например, из библиотек кДНК пораженных тканей человека или мыши). ДНК, кодирующую VH- и VL-домены, повторно объединяют вместе с scFv линкером с использованием ПЦР и клонируют в фагмидный вектор. Вектор вводят с использованием электропорации в Е, coli и Е. coli инфицируют хелперным фагом. Используемый в этих методах фаг обычно представляет собой нитевидный бактериофаг, включая fd и М13, и нуклеотидные последовательности VH- и VL-доменов обычно слиты рекомбинантным путем либо с фаговым геном III, или геном VIII. Фаг, экспрессирующий антигенсвязывающий домен, который связывается с конкретным антигеном, может быть отобран или идентифицирован с использованием антигена, например, с использованием меченого антигена или антигена, связанного с твердой поверхностью или гранулой либо захваченного на твердой поверхности или грануле. Примеры методов фагового дисплея, которые могут быть использованы для получения антител, предложенных в данной заявке, включают методы, описанные в работах Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods, 182: 41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods, 184: 177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol., 24: 952-958; Persic et al., 1997, Gene, 187: 9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology, 57: 191-280; в заявке PCT №PCT/GB91/01 134; международных публикациях №№ WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401 и WO97/13844; и патентах США №№5698426, 5223409, 5403484, 5580717, 5427908, 5750753, 5821047, 5571698, 5427908, 5516637, 5780225, 5658727, 5733743 и 5969108; каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Как описано в приведенных выше ссылках, после отбора, проведенного с использованием фага, кодирующие антитело участки ДНК фага, могут быть выделены и использованы для получения целых антител, включая человеческие антитела, или любого другого желаемого связывающегося с антигеном фрагмента, и экспрессированы в любом желаемом хозяине, включая клетки млекопитающих, клетки насекомых, растительные клетки, дрожжи и бактерии, например, как описано ниже. Методы получения фрагментов Fab, Fab' и F(ab')₂ рекомбинантным путем также могут быть применены с использованием способов, известных в данной области техники, таких, как описанные в публикациях РСТ № WO 92/22324; Mullinax et al., 1992, Bio Techniques, 12(6): 864-869; Sawai et al., 1995, AJRI, 34: 26-34; и Better et al., 1988, Science, 240: 1041-1043 (данные источники включены посредством ссылки во всей своей полноте).

Чтобы получить целые антитела, ПЦР праймеры, содержащие нуклеотидные последовательности VH или VL, сайт рестрикции и фланкирующие последовательности для защиты сайта рестрикции, можно использовать для амплификации VH- или VL-последовательностей в scFv клонах. С использованием методик клонирования, известных специалистам в данной области техники, ПЦР-амплифицированные VH-домены могут быть клонированы в векторы, экспрессирующие константную область VH, например, константную область иммуноглобулина гамма 4 человека, а ПЦР-амплифицированные VL-домены могут быть клонированы в векторы, экспрессирующие константную область VL, например, константные области каппа или лямбда иммуноглобулина человека. VH-и VL-домены также могут быть клонированы в один вектор, экспрессирующий необходимые константные области. Векторами, привносящими тяжелую цепь, и векторами, привносящими легкую цепь, затем совместно трансфицируют клеточные линии для получения стабильно или временно трансфицированных клеточных линий, которые экспрессируют полноразмерные антитела, например, IgG, с использованием методов, известных специалистам в данной области техники.

Для некоторых применений, включая применение антител in vivo на людях и в анализах обнаружения in vitro, можно использовать человеческие или химерные антитела. Для терапевтического лечения людей особо желательны полностью человеческие антитела. Человеческие антитела могут быть получены разными способами, известными в данной области техники, включая описанные выше методы фагового дисплея с использованием библиотек антител, происходящих из последовательностей иммуноглобулинов человека. Также см. патенты США №№4444887 и 4716111 и публикации международных заявок №№ WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 и WO 91/10741; все они включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

В конкретных воплощениях получают человеческие антитела. Человеческие антитела и/или полностью человеческие антитела могут быть получены с использованием любого способа, известного в данной области техники, включая примеры, предложенные в данной заявке. Например, с использованием трансгенных мышей, которые не способны экспрессировать функциональные эндогенные иммуноглобулины, но которые могут экспрессировать гены иммуноглобулинов человека. Например, в мышиные эмбриональные стволовые клетки могут быть введены случайным образом или с использованием гомологической рекомбинации комплексы генов тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина человека. Альтернативно, нуклеотидные последовательности, кодирующие вариабельную область, константную область и D-сегмент (diversity region) иммуноглобулина человека, могут быть введены в мышиные эмбриональные стволовые клетки в дополнение к генам тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина человека. Гены тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина мыши могут быть переведены в нефункциональное состояние по отдельности или совместно с введением локуса иммуноглобулина человека посредством гомологической рекомбинации. В частности, гомозиготная делеция J_H-области предотвращает образование эндогенных антител. Модифицированные эмбриональные стволовые клетки подращивают и с использованием микроинъекции вводят в бластоциты для получения химерных мышей. Химерных мышей далее размножают для получения гомозиготного потомства, которое экспрессирует человеческие антитела. Трансгенных мышей иммунизируют обычным образом выбранным антигеном, например, целым полипептидом или частью полипептида. Моноклональные антитела, направленные против данного антигена, могут быть получены из иммунизированных, трансгенных мышей с использованием традиционной гибридомой технологии. Полученные трансгенным путем иммуноглобулины человека, содержащиеся в трансгенных мышах, претерпевают реаранжировку в процессе дифференцировки В-клеток и впоследствии подвергаются переключению класса и соматическим мутациям. Таким образом, с использованием этого метода можно получать терапевтически полезные антитела IgG, IgA, IgM и IgE. Обзор по этой технологии получения человеческих антител см. в работе Lonberg и Huszar (1995, Int. Rev. Immunol., 13: 65-93). Подробное обсуждение этой технологии для получения человеческих антител и моноклональных человеческих антител и протоколы для получения таких антител см., например, в публикациях РСТ №№ WO 98/24893, WO 96/34096 и WO 96/33735; и патентах США №№5413923, 5625126, 5633425, 5569825, 5661016, 5545806, 5814318 и 5939598, которые включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте. Другие способы подробно описаны в примерах в данном описании. Помимо этого, для получения человеческих антител, направленных на выбранный антиген, с использованием технологии, аналогичной описанной выше, можно контактировать с такими компаниями, как Abgenix, Inc. (Freemont, СА) и Genpharm (San Jose, CA).

Химерное антитело представляет собой молекулу, в которой разные части антитела происходят из разных молекул иммуноглобулинов. Методы получения химерных антител известны в данной области техники. См., например, Morrison, 1985, Science, 229: 1202; Oi et al., 1986, BioTechniques, 4: 214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods, 125: 191-202 и патенты США №№5807715, 4816567, 4816397 и 6331415, которые включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Гуманизированное антитело представляет собой антитело или его вариант либо их фрагмент, которое(ый) способно(ен) связываться с определенным антигеном и которое(ый) содержит каркасную область, имеющую по существу аминокислотную последовательность иммуноглобулина человека, и CDR, имеющий по существу аминокислотную последовательность иммуноглобулина вида, не являющегося человеком. Гуманизированное антитело содержит по существу по меньшей мере один домен, и обычно все из обоих вариабельных доменов (Fab, Fab', F(ab')₂, Fabc, Fv), в которых все или по существу все участки CDR соответствуют таковым иммуноглобулина вида, не являющегося человеком (например, донорного антитела), и все или по существу все каркасные области являются такими же, как консенсусная последовательность иммуноглобулина человека. В определенных воплощениях гуманизированное антитело также содержит по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), обычно иммуноглобулина человека. Обычно антитело будет содержать как легкую цепь, так и по меньшей мере вариабельный домен тяжелой цепи. Антитело также может включать участок СН1, шарнирный участок, участки СН2, СН3 и СН4 тяжелой цепи. Гуманизированное антитело может быть выбрано из любого класса иммуноглобулинов, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, и любого изотипа, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Обычно, константный домен является константным доменом фиксации комплемента, в том случае, если желательно, чтобы гуманизированное антитело проявляло цитотоксическую активность, и данный класс обычно представляет собой IgG1. Когда такая цитотоксическая активность является нежелательной, константный домен может быть из класса IgG2. Примеры константных доменов VL и VH, которые можно использовать в определенных воплощениях, включают, но не ограничиваются этим, С-каппа и С-гамма-1 (nG1m), описанные в Johnson et al, (1997), J. Infect. Dis., 176, 1215-1224 и описанные в патенте США №5824307. Гуманизированное антитело может содержать последовательности из более чем одного класса или изотипа, и выбор конкретных константных доменов для оптимизации желаемых эффекторных функций находится в пределах компетенции среднего специалиста в данной области техники. Каркасные и CDR участки гуманизированного антитела не обязательно точно соответствуют исходным последовательностям, например, донорный CDR или консенсусный каркас может быть подвергнут мутациям с заменой, вставкой или делецией по меньшей мере одного остатка, вследствие чего данный остаток CDR или каркаса в этом сайте не будет соответствовать ни консенсусному, ни вводимому антителу. Такие мутации, однако, не будут обширными. Обычно, по меньшей мере 75% остатков гуманизированного антитела будут соответствовать остаткам исходных последовательностей FR и CDR, чаще 90% или более 95%. Гуманизированные антитела могут быть получены с использованием различных методов, известных в данной области техники, включая, но не ограничиваясь этим, CDR-привитие (европейский патент № ЕР 239400; международная публикация № WO 91/09967; и патенты США №№5225539, 5530101 и 5585089), венирование или изменение поверхности (европейские патенты №№ ЕР 592106 и ЕР 519596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5): 489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering, 7(6): 805-814; и Roguska et al., 1994, PNAS, 91: 969-973), перетасовку цепей (патент США №5565332) и методы, описанные, например, в патенте США №6407213, патенте США №5766886, WO 9317105, Tan et al., J. Immunol., 169: 1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng., 13(5): 353-60 (2000), Morea et al., Methods, 20(3): 267-79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem., 272(16): 10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng., 9(10): 895 904 (1996), Couto et al., Cancer Res., 55 (23 Supp): 5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res., 55(8): 1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene, 150(2): 409-10 (1994) и Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235(3): 959-73 (1994). Также см. публикацию патентной заявки США № US 2005/0042664 А1 (24 февраля 2005 г.), которая включена в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте. Часто, каркасные остатки в каркасных областях будут заменены на соответствующий остаток из CDR донорного антитела с целью изменения (например, улучшения) связывания с антигеном. Такие замены в каркасе идентифицируют методами, хорошо известными в данной области техники, например, путем моделирования взаимодействия остатков CDR и каркаса для идентификации остатков каркаса, важных для связывания с антигеном, и сравнения последовательностей для идентификации необычных остатков каркаса в определенных положениях. (См., например, Queen и др., патент США №5585089; и работу Reichmann et al., 1988, Nature, 332: 323, которые включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте).

Однодоменные антитела, например, антитела, не содержащие легких цепей, могут быть получены способами, хорошо известными в данной области техники. См. работы Riechmann et al., 1999, J. Immunol., 231: 25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol., 1(3): 253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol., 74(4): 277302; патент США №6005079; и международные публикации №№ WO 94/04678, WO 94/25591 и WO 01/44301, каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Кроме того, антитела, которые связываются с антигеном C10orf54, в свою очередь, могут быть использованы для получения антиидиотипических антител, которые "имитируют" антиген, с использованием методов, хорошо известных специалистам в данной области техники. (См., например, Greenspan & Bona, 1989, FAS ЕВ J., 7(5): 437-444; и Nissinoff, 1991, J. Immunol., 147(8): 2429-2438).

ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ, КОДИРУЮЩИЕ АНТИТЕЛО

Кроме того, в данной заявке предложены полинуклеотиды, содержащие нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, предложенное в данной заявке, которое связывается с C10orf54 (например, с полипептидом C10orf54, фрагментом полипептида C10orf54, эпитопом C10orf54). Кроме того, в данной заявке предложены полинуклеотиды, которые гибридизуются в условиях высокой жесткости, промежуточной или низкой жесткости, например, как определено выше, с полинуклеотидами, которые кодируют антитело или модифицированное антитело, предложенное в данной заявке.

В определенных воплощениях, молекулы нуклеиновой кислоты, предложенные в данной заявке, содержат нуклеиновокислотную последовательность или состоят из нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность VH и/или VL, приведенную в данном описании, или любую их комбинацию (например, такую, как нуклеотидная последовательность, кодирующая антитело, предложенное в данной заявке, например, полноразмерное антитело, тяжелую и/или легкую цепь антитела или одноцепочечное антитело, предложенное в данной заявке).

РЕКОМБИНАНТНАЯ ЭКСПРЕССИЯ АНТИТЕЛА

Рекомбинантная экспрессия антитела, предложенного в данной заявке (например, полноразмерного антитела, тяжелой и/или легкой цепи антитела или одноцепочечного антитела, предложенного в данной заявке), которое связывается с антигеном C10orf54, требует конструирования экспрессирующего вектора, содержащего полинуклеотид, который кодирует данное антитело. После того, как полинуклеотид, кодирующий молекулу антитела, тяжелую или легкую цепь антитела или его фрагмент (такой, как фрагмент, содержащий вариабельный домен тяжелой и/или легкой цепи), получен, вектор для получения молекулы антитела может быть получен с использованием методов технологии рекомбинантной ДНК, хорошо известных в данной области техники. Так, способы получения белка посредством экспрессии полинуклеотида, содержащего нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, изложены в данном описании. Для конструирования экспрессирующих векторов, содержащих последовательности, кодирующие антитело, и соответствующие сигналы контроля транскрипции и трансляции, можно использовать способы, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Эти способы включают, например, методы рекомбинантной ДНК in vitro, синтетические методы и генетическую рекомбинацию in vivo. Таким образом, в данной заявке также предложены способные к репликации векторы, содержащие нуклеотидную последовательность, кодирующую молекулу антитела, предложенного в данной заявке, тяжелую или легкую цепь антитела, вариабельный домен тяжелой или легкой цепи антитела или их фрагмент, или CDR тяжелой или легкой цепи, и все они функционально связаны с промотором. Такие векторы могут включать нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область молекулы антитела (см., например, международные публикации №№ WO 86/05807 и WO 89/01036; и патент США №5122464), и нуклеотидная последовательность вариабельного домена антитела может быть клонирована в такой вектор для экспрессии целой тяжелой, целой легкой цепи или обеих целых тяжелой и легкой цепей.

Экспрессирующий вектор переносят в клетку хозяина традиционными методами, и трансфицированные клетки затем культивируют традиционными методами для получения антитела, предложенного в данной заявке. Таким образом, в данной заявке также предложены клетки хозяина, содержащие полинуклеотид, кодирующий антитело, предложенное в данной заявке, или его фрагменты, или его тяжелую или легкую цепь либо их фрагмент, или одноцепочечное антитело, предложенное в данной заявке, и все они функционально связаны с гетерологичным промотором. В определенных воплощениях для экспрессии двухцепочечных антител, векторы, кодирующие и тяжелую и легкую цепи, могут быть совместно экспрессированы в клетке хозяина для экспрессии целой молекулы иммуноглобулина, как подробно описано ниже.

Для экспрессии антител, предложенных в данной заявке, можно использовать разнообразные векторные системы для экспрессии в клетках хозяина (см., например, патент США №5807715). Такие системы для экспрессии в клетках хозяина представляют собой носители, с помощью которых представляющие интерес кодирующие последовательности могут быть получены и впоследствии очищены, но также представляют собой клетки, которые после трансформации или трансфекции соответствующими нуклеотидными кодирующими последовательностями могут экспрессировать in situ антитело, предложенное в данной заявке. Они включают, но не ограничиваются этим, микроорганизмы, такие как бактерии (например, Е. coli и В. subtilis), трансформированные экспрессирующими векторами на основе рекомбинантной ДНК бактериофага, плазмидной ДНК или космидной ДНК, содержащими кодирующие антитело последовательности; дрожжи (например, Saccharomyces pichia), трансформированные рекомбинантными дрожжевыми экспрессирующими векторами, содержащими кодирующие антитело последовательности; системы клеток насекомых, инфицированных рекомбинантными вирусными экспрессирующими векторами (например, на основе бакуловируса), содержащими кодирующие антитело последовательности; системы растительных клеток, инфицированных рекомбинантными вирусными экспрессирующими векторами (например, на основе вируса мозаики цветной капусты, CaMV; вируса табачной мозаики, TMV) или трансфицированных рекомбинантными плазмидными экспрессирующими векторами (например, на основе Ti-плазмиды), содержащими кодирующие антитело последовательности; или системы клеток млекопитающих (например, клетки COS, яичников китайского хомячка (СНО), почки новорожденного сирийского хомячка (BHK), HEK293 (почки эмбриона человека, линии 293), NS0 и 3Т3), несущие рекомбинантные экспрессирующие конструкции, содержащие промоторы, происходящие из генома клеток млекопитающих (например, промотор металлотионеина) или из вирусов млекопитающих (например, поздний промотор аденовируса; промотор белка 7,5K вируса осповакцины). В определенных воплощениях бактериальные клетки, такие как Escherichia coli, или эукариотические клетки, применяемые в особенности для экспрессии целой молекулы рекомбинантно го антитела, используют для экспрессии молекулы рекомбинантного антитела. Например, клетки млекопитающих, такие как клетки яичников китайского хомячка (СНО), вместе с вектором, таким как вектор, содержащий главный промоторный элемент немедленно раннего гена из цитомегаловируса человека, являются эффективной системой для экспрессии антител (Foecking et al., 1986, Gene, 45: 101; и Cockett et al., 1990, Bio/Technology, 8: 2). В конкретных воплощениях антитела, предложенные в данной заявке, получают в клетках СНО. В конкретном воплощении экспрессия нуклеотидных последовательностей, кодирующих антитела, предложенные в данной заявке, которые связываются с антигеном C10orf54, регулируется конститутивным промотором, индуцибельным промотором или тканеспецифичным промотором.

В бактериальных системах, в зависимости от предполагаемого применения подлежащей экспрессии молекулы антитела, может быть предпочтительно выбран ряд экспрессирующих векторов. Например, когда для создания фармацевтических композиций на основе молекулы антитела должно быть наработано большое количество такого антитела, желательным может стать применение векторов, управляющих экспрессией с получением высоких уровней продуктов на основе слитого белка, очистка которых не вызывает затруднений. Такие векторы включают, но не ограничиваются этим, экспрессирующий в Е. coli вектор pUR278 (Ruther et al., 1983, EMBO, 12: 1791), в котором кодирующая антитело последовательность может быть лигирована индивидуально в вектор в рамке с участком, кодирующим lac Z, в результате чего получается слитый белок; pIN векторы (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res., 13: 3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem., 24: 5503-5509) и тому подобное. Для экспрессии чужеродных полипептидов в виде белков, слитых с глутатион-5-трансферазой (GST), также можно использовать pGEX векторы. В общем случае, такие слитые белки являются растворимыми и могут быть легко очищены из лизированных клеток посредством адсорбции и связывания с матричными гранулами из глутатион-агарозы с последующим элюированием в присутствии свободного глутатиона. pGEX векторы сконструированы с возможностью включения в них сайтов расщепления протеазами - тромбином или фактором Ха, с тем, чтобы клонированный целевой генный продукт мог быть освобожден от группировки GST.

В системе (клеток) насекомых в качестве вектора для экспрессии чужеродных генов используют вирус ядерного полиэдроза Autographs californica (AcNPV). Данный вирус развивается в клетках Spodoptera frugiperda. Последовательность, кодирующую антитело, можно клонировать индивидуально в несущественные участки (например, в полиэдриновый ген) вируса и помещать под контроль AcNPV промотора (например, промотора полиэдринового гена).

В клетках хозяина в случае млекопитающих можно использовать ряд экспрессирующих систем на основе вирусов. В случаях использования аденовируса в качестве экспрессирующего вектора, последовательность, кодирующую представляющее интерес антитело, можно лигировать с последовательностью комплекса, контролирующего транскрипцию/трансляцию аденовируса, например, содержащего поздний промотор и трехкомпонентную лидерную последовательность. Этот химерный ген затем может быть встроен в геном аденовируса посредством рекомбинации in vitro или in vivo. Вставка в несущественный участок вирусного генома (например, участок Е1 или Е3) будет приводить к получению рекомбинантного жизнеспособного вируса, способного экспрессировать молекулу данного антитела в инфицированных хозяевах (например, см. Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 355-359). Для достижения эффективной трансляции встроенных последовательностей, кодирующих антитело, также могут быть необходимы специфические сигналы инициации. Такие сигналы включают инициирующий кодон ATG и примыкающие последовательности. Кроме того, инициирующий кодон должен находиться в рамке считывания, соответствующей желаемой кодирующей последовательности, чтобы гарантировать трансляцию всей вставки. Эти экзогенные сигналы контроля трансляции и инициирующие кодоны могут быть различного происхождения, как природными, так и синтетическими. Эффективность экспрессии можно повысить путем введения соответствующих усиливающих транскрипцию элементов, терминаторов транскрипции и т.д. (см., например, Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol., 153: 51-544).

Помимо всего этого можно выбрать штамм клеток хозяина, который модулирует экспрессию встроенных последовательностей или модифицирует и осуществляет процессинг генного продукта конкретным желаемым образом. Такие модификации (например, гликозилирование) и процессинг (например, расщепление) белковых продуктов могут быть важны для функционирования данного белка. Разные клетки хозяина имеют характерные и специфические механизмы посттрансляционного процессинга и модификации белков и генных продуктов. Соответствующие клеточные линии или системы хозяев могут быть выбраны для обеспечения корректной модификации и процессинга экспрессируемого чужеродного белка. Для этой цели можно использовать эукариотические клетки хозяина, которые обладают клеточным механизмом для надлежащего процессинга первичного транскрипта, гликозилирования и фосфорилирования генного продукта. Такие клетки хозяина в случае млекопитающих включают, но не ограничиваются этим, клетки СНО, VERY, BHK, HeLa, COS, MDCK, HEK293, 3Т3, WI-38, ВТ483, Hs578T, НТВ2, ВТ20 и T47D, NS0 (клеточная линия миеломы мыши, которая не продуцирует эндогенно каких-либо иммуноглобулиновых цепей), CRL7O3O и HsS78Bst. В конкретных воплощениях полностью человеческие моноклональные антитела к C10orf54, предложенные в данной заявке, получают в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО.

Для продолжительного продуцирования рекомбинантных белков с высоким выходом полезна, но не обязательна, стабильная экспрессия. Например, можно сконструировать клеточные линии, которые стабильно экспрессируют молекулу данного антитела. Вместо использования экспрессирующих векторов, которые содержат вирусные ориджины репликации, клетки хозяина могут быть трансфицированы ДНК, контролируемой соответствующими регулирующими экспрессию элементами (например, промоторными, энхансерными последовательностями, терминаторами транскрипции, сайтами полиаденилирования и т.д.) и содержащей селектируемый маркер. После введения чужеродной ДНК сконструированные клетки можно оставить расти в течение 1-2 суток в обогащенной среде, после чего перевести их на селективную среду. Селектируемый маркер в рекомбинантной плазмиде придает устойчивость, необходимую для отбора, и его присутствие дает возможность клеткам стабильно интегрировать плазмиду в их хромосомы и расти с образованием очагов (foci), которые, в свою очередь, могут быть клонированы и расширены до получения клеточных линий. Этот способ можно предпочтительно использовать для конструирования клеточных линий, которые экспрессируют молекулу антитела. Такие сконструированные клеточные линии могут быть полезны, в частности, при скрининге и оценке соединений, которые непосредственно или опосредованно взаимодействуют с молекулой данного антитела.

Можно использовать ряд систем селекции, включая, но не ограничиваясь этим, гены тимидинкиназы (tk) вируса простого герпеса (Wigler et al., 1977, Cell, 11: 223), гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазы (hgprt) (Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48: 202) и аденинфосфорибозилтрансферазы (aprt) (Lowy et al., 1980, Cell, 22: 8-17), которые могут быть применены в tk-, hgprt- или aprt-несущих клетках, соответственно. Кроме того, в качестве основы для селекции можно использовать устойчивость к антиметаболитам в случае следующих генов: dhfr (гена дигидрофолатредуктазы), который придает устойчивость к метотрексату (Wigler et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 357; O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527); gpt (гена глутамат-пируваттрансаминазы), который придает устойчивость к микофенольной кислоте (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 2072); neo (гена неомицинфосфотрансферазы), который придает устойчивость к аминогликозиду G-418 (Wu and Wu, 1991, Biotherapy, 3: 87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 32: 573-596; Mulligan, 1993, Science, 260: 926-932; и Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem., 62: 191-217; May, 1993, TIB TECH, 11(5): I55-215); и hygro (гена устойчивости к гигромицину), который придает устойчивость к гигромицину (Santerre et al., 1984, Gene, 30: 147). Для селекции желаемого рекомбинантного клона можно неизменно применять методы, общеизвестные в области технологии рекомбинантной ДНК, и такие методы описаны, например, в Ausubel et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); и в главах 12 и 13 в Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); ColberreGarapin et al., 1981, J. Mol. Biol., 150: 1, которые включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Уровни экспрессии молекулы антитела могут быть повышены с применением амплификации вектора (в качестве обзора см. Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)). Когда маркер в векторной системе, экспрессирующей антитело, амплифицируется, повышение уровня ингибитора, присутствующего в культуре клетки хозяина, будет вызывать увеличение числа копий маркерного гена. Поскольку амплифицированный участок связан с геном, кодирующим антитело, продуцирование антитела также будет усиливаться (Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol., 3: 257).

Клетка-хозяин может быть подвергнута совместной трансфекции двумя экспрессирующими векторами, предложенными в данной заявке, при этом первый вектор кодирует полипептид тяжелой цепи, а второй вектор кодирует полипептид легкой цепи. Оба эти вектора могут содержать идентичные селектируемые маркеры, которые обеспечивают одинаковую экспрессию полипептидов тяжелой и легкой цепей. Альтернативно, может быть использован один вектор, который кодирует и способен экспрессировать полипептиды обеих цепей, тяжелой и легкой. В такой ситуации нуклеотидная последовательность легкой цепи должна быть помещена перед нуклеотидной последовательностью тяжелой цепи для того, чтобы избежать образования избытка токсичной свободной тяжелой цепи (Proudfoot, 1986, Nature, 322: 52; и Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 2197-2199). Кодирующие последовательности для тяжелой и легкой цепей могут содержать кДНК или геномную ДНК.

После продуцирования антитела с использованием рекомбинантной экспрессии, оно может быть очищено любым способом, известным в данной области техники для очистки молекулы иммуноглобулина, например, хроматографией (например, ионообменной, аффинной, в частности, за счет аффинности к специфическому антигену после очистки с использованием колоночной хроматографии на носителе с иммобилизованным белком А и гель-фильтрации), центрифугированием, с использованием дифференциальной растворимости или любым другим стандартным методом очистки белков. Кроме того, чтобы облегчить очистку, антитела, предложенные в данной заявке, могут быть слиты с гетерологичными полипептидными последовательностями, изложенными в данном описании или иным образом известными в данной области техники.

НАБОРЫ

Согласно данному изобретению также предложены фармацевтическая упаковка или фармацевтический набор, содержащая(ий) один или более контейнеров, заполненных одним или более ингредиентами фармацевтических композиций, предложенных в данной заявке, например, одним или более антителами, предложенными в данной заявке. Возможно, что вместе с таким(и) контейнером(ами) может находиться указание в форме, предписываемой государственным учреждением по регулированию производства, применению или продаже фармацевтических средств или биологических продуктов, которое отражает разрешение данного учреждения на производство, применение или продажу для введения человеку. В некоторых воплощениях набор содержит листовку-вкладыш. Используемый термин "листовка-вкладыш" относится к инструкциям, обычно включаемым в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях относительно применения таких терапевтических продуктов, а также инструкции по применению.

Кроме того, в данной заявке предложены наборы, которые можно использовать в описанных выше способах. В одном из воплощений набор содержит антитело, предложенное в данной заявке, как например, выделенное антитело, в одном или более контейнерах. В конкретном воплощении наборы, предложенные в данной заявке, содержат по существу выделенный антиген C10orf54 в качестве контроля. В определенных воплощениях наборы, предложенные в данной заявке, дополнительно содержат контрольное антитело, которое не взаимодействует с антигеном C10orf54. В другом конкретном воплощении наборы, предложенные в данной заявке, содержат средство для детекции связывания модифицированного антитела с антигеном C10orf54 (например, антитело может быть конъюгировано с детектируемым субстратом, таким как флуоресцентное соединение, ферментативный субстрат, радиоактивное соединение или люминесцентное соединение, либо с детектируемым субстратом может быть конъюгировано второе антитело, которое распознает первое антитело). В конкретных воплощениях набор может включать полученный рекомбинантным путем или химически синтезированный антиген C10orf54. Антиген C10orf54, предусмотренный в таком наборе, также может быть присоединен к твердой подложке. В более конкретном воплощении детектирующее средство описанного выше набора включает твердую подложку, к которой присоединен антиген C10orf54. Такой набор также может включать неприсоединенное репортер-меченное антитело к антителу человека. В этом воплощении детекцию связывания антитела с антигеном C10orf54 можно осуществлять по связыванию с репортер-меченным антителом.

Следующие далее примеры предложены в качестве иллюстрации и без ограничения.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ C10ORF54 НА ПОВЕРХНОСТИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОГЕННОМ ЛЕЙКОЗЕ (AML)

В общей сложности 14 свежих образцов мононуклеарных клеток костного мозга (ВММС) от пациентов с AML были получены из AllCells, а дополнительные 16 замороженных образцов - от пациентов из Центра изучения рака Фреда Хатчинсона (Fred Hutchinson Cancer Research Center, FHCRC). В качестве контроля анализировали 16 свежих образцов ВММС от здоровых доноров. Для контроля качества отдельных образцов с AML проводили окрашивание гематоксилином и эозином бластных клеток в образцах с AML или контролировали экспрессию маркера AML с использованием проточной цитометрии/FACS анализа. Обработка образцов была оптимизирована таким образом, чтобы максимально поддержать жизнеспособность клеток во время выделения образцов. Были определены оптимальные времена мечения для образцов с AML, чтобы обеспечить эффективное мечение без ущерба для целостности клеток.

Для идентификации и количественного определения репертуара поверхностных белков клеток в образцах использовали профилирование поверхностных антигенов-мишеней. Внеклеточные домены белков, связанных с клеточными мембранами интактных первичных опухолевых клеток с AML, химически метили и затем хроматографически обогащали в отношении меченых белков с использованием смолы для твердофазной аффинной хроматографии. Элюированные белки хранили при -80°С перед проведением масс-спектрометрического анализа, как описано ниже.

Идентифицировали белки, обогащенные методом sTAg, и проводили количественное измерение, используя жидкостную хроматографию высокого разрешения в сочетании с панорамной тандемной масс-спектрометрией (MS). Гибридный масс-спектрометр ThermoFisher LTQ-ORBITRAP VELOS, в котором сочетается чувствительность линейной ионной ловушки с высоким разрешением и точностью определения массы, обеспечиваемыми принципиально новым масс-анализатором с орбитальной ионной ловушкой (Olsen et al., Mol. Cell Proteomics, 8: 2759-2769, 2009), соединенный с установкой для нанопоточной жидкостной хроматографии, был применен для панорамной, "снизу вверх" протеомики с целью установления идентичности и проведения количественных измерений белков во фракциях, обогащенных поверхностными белками AML-клеток (Yates et al., Annu. Rev. Biomed. Eng., 11: 49-79, 2009). Триптические гидролизаты обогащенных поверхностных белков разделяли на основе их гидрофобности в режиме онлайн с использованием нанопоточной жидкостной хроматографии с регистрацией масс пептидов и спектров фрагментации в динамическом режиме с применением масс-спектрометра. Чтобы установить идентичностб пептидов и белков, исходные MS-данные обрабатывали с использованием алгоритма SEQUEST, выполняемого на платформе быстрой обработки Sorcerer 2 (Lundgren et al., Curr. Protoc. Bioinformatics, Chapter 13: Unit 13.3, 2009), с целью определения наилучшего соответствия между экспериментальными спектрами фрагментации и теми, которые были определены in-silico из протеома человека. Полученные соответствия статистически подтверждали с использованием алгоритмов PEPTIDEPROPHET (Keller et al., Anal. Chem., 74: 5383-5392, 2002) и PROTEIN PROPHET (Nesvizhskii et al., Anal. Chem., 75: 4646-4658, 2003), реализуемых с применением программного обеспечения SCAFFOLD (программного обеспечения Proteome) для обеспечения минимально возможного уровня ложноположительных результатов (FDR) и, таким образом, включения только точно идентифицированных белков в пул кандидатов.

Относительные количественные уровни идентифицированных белков в образцах sTAg определяли с использованием метода подсчета спектров (SC) (рассмотренного в работе Neilson et al., Proteomics, 11: 535-553, 2011). Метод подсчета спектров основан на эмпирической демонстрации того, что количество соотнесенных (положительно идентифицированных) спектров, ассоциированных с пептидами из каждого белка, строго коррелирует с относительным количеством этого белка в исходной смеси (Liu et al., Anal. Chem., 76: 4193-4201, 2004). Подсчет спектров идентифицированных пептидов осуществляли с использованием программы из программного обеспечения SCAFFOLD, которая отображает, сортирует и фильтрует результаты данных масс-спектрометрии, запрошенные SEQUEST. Исходные данные метода подсчета спектров преобразовывали в выраженные в процентах величины нормированного фактора относительного содержания в спектре (% NSAF) (Zybailov et al., J. Proteome Res., 5: 2339-2347, 2006) для учета различий в размерах белка и вариабельности в общей концентрации белка. Отдельные моноклональные антитела использовали для проверки протеомных измерений с применением количественного FACS-анализа в качестве независимого внешнего критерия, подтверждающего результаты протеомного профилирования на основе sTAg масс-спектрометрии, относящиеся к экспрессии белков на поверхности первичных опухолевых клеток (см., например, пример 2).

Используя sTAg-анализ, C10orf54, имеющий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1080, идентифицировали как присутствующий на поверхности опухолевых клеток с AML. Как показано на ФИГ. 1А, с применением sTAg-метода C10orf54 идентифицировали в 7 из 30 первичных образцов с AML со средним значением % NSAF 0,06. В отличие от этого, C10orf54 не был обнаружен ни в одном из 16 образцов ВММС от здоровых доноров. Маркер AML, CD33, идентифицировали в 11 из 30 образцов с AML со средним значением % NSAF 0,07 и в четырех из 16 образцов нормальных ВММС со средним значением % NSAF 0,05. На ФИГ. 1 В показана выборка sTAg-образцов, продемонстрированных на ФИГ. 1А. На основании этого анализа можно сказать, что C10orf54, по-видимому, будет в сравнимой с CD33 степенью экспрессирован в образцах, полученных от пациентов с AML, и экспрессирован у значительной части пациентов с AML по сравнению с соответствующими нормальными контролями.

ПРИМЕР 2. ЭКСПРЕССИЯ C10ORF54

A. Экспрессия в случае AML

Исследования с использованием проточной цитометрии проводили с 23 образцами первичных и 3 образцами нормальных BM-MNC, полученными, как описано в примере 1, используя антитела к C10orf54 для анализа профиля экспрессии C10orf54 в случае AML. Антитела были помечены флюорохромами AF647 или AF488. Клетки подсчитывали и использовали 500000 клеток/окрашивание, ресуспендированых в буфере для FACS: среда RPMI (среда от Мемореального института Розуэлла Парка), 4% HIFBS (инактивированная нагреванием фетальная телячья сыворотка), 0,02% NaN₃. Антитела инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре в темноте и затем анализировали с применением прибора MACSQuant (Miltenyl Biotec, Auburn, CA). Данный анализ проводили с использованием программного обеспечения FLOWJO (TreeStar, Ashland, OR). Результаты FACS-анализа с использованием антитела к C10orf54 76Е1 показаны на ФИГ. 2.

B. Экспрессия в опухолевых тканях по сравнению с нормальными тканями

Для определения экспрессии белка C10orf54 в различных нормальных и опухолевых тканях человека проводили исследования с использованием тканевых матриц (ТМА).

Использовали различные фиксированные в формалине и залитые парафином ткани, включая ТМА, полученные из US Biomax (Rockville, MD) и Protein Biotechnologies (Ramona, CA). Фиксированные в формалине и залитые парафином клетки саркомы, трансфицированные C10orf54, исходные клетки саркомы и клетки плаценты человека использовали в качестве положительных и отрицательных контролей. Антитело к C10orf54 (Novus Biologicals (Littleton СО80120) №по каталогу NBP1-88967 C10orf54/B7-H5/PD-1Н) использовали в разведении 1:150 в цитратном буфере, рН 6,0 для извлечения антигена.

Иммуногистохимическое окрашивание проводили с использованием Dako Autostainer (Dako North America, Carpenteria, CA93013) при комнатной температуре с промывками PBS между стадиями.

Нормальная экспрессия C10orf54 в тканях в основном была ограничена клетками иммунной системы в большинстве тканей, где производилась оценка. C10orf54-положительные кровеносные сосуды наблюдали в тканях центральной нервной системы (ЦНС), правда при более высоком увеличении, и экспрессия C10orf54, по-видимому, имелась на околососудистых клетках (перицитах) и клетках иммунной системы. Трофобласты в плаценте были строго положительными в отношении C10orf54. Единственная эпителиальная ткань, в которой наблюдалась положительная экспрессия C10orf54, представляла собой реактивные центры миндалины. Однако, эта положительная экспрессия может быть обусловлена наличием большого количества положительных лимфоцитов, проходящих через эпителий. Ткани с отрицательной экспрессией включали гломерулы, канальцы и протоки почек, гепатоциты и синусоидные капилляры печени, альвеолы и бронхи легких, островки и ацинусы поджелудочной железы, сердечную мышцу, предстательную железу, яичники, крипты толстой кишки, железы и эпителий желудка, железы и эпителий кожи, тимус, матку, надпочечники, скелетные мышцы, нейроны ЦНС, эпителий мочевого пузыря и крупные сосуды.

Таким образом, в целом, исследования ТМА нормальных тканей показали наиболее сильное положительное окрашивание для трофобластов плаценты и положительное окрашивание клеток иммунной системы в тонком кишечнике (в собственной пластинке слизистой оболочки), селезенке, миндалине, мочеточнике и легком.

Исследования ТМА опухолевых тканей неожиданно показали наличие C10orf54-положительных клеток в более чем 99% опухолей, имеющих воспаление. Эти результаты суммированы в Таблице 34.

С. Экспрессия в миелоидных супрессорных клетках (MDSC) Для определения уровней экспрессии C10orf54 в субпопуляции MDSC (CD11b⁺ лейкоцитах) очищенных мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС) от здоровых доноров проводили исследования с использованием проточной цитометрии, как описано ниже. Оценивали экспрессию и выполняли количественное определение с использованием меченого моноклонального антитела 76Е1 в следующих популяциях MDSC: моноцитарных (CD11b⁺/CD14⁺/HLA-DR^-), гранул о цитарных (CD11b⁺/CD15⁺/HLA-DR^-) и незрелых миелоидных клетках (CD11b⁺/CD15^-/HLA-DR^-). Образцы РВМС, использованные в этих экспериментах, получали от ALLCELLS (Emeryville, СА).

Антитело клона 76Е1 метили, используя Alexa Fluor 647. Получали образцы РВМС и вводили метку LIVE/DEAD Yellow (LDY). 100 мкл (10⁶ клеток) добавляли к следующему: реагенту, блокирующему Fc-рецептор (FcR) человека; маркерам клеточной линии; CD11b-РЕ(фикоэритрин); CD14-АРС(аллофикоцианин)-Су7; CD15-PerCP-Cy5.5; HLA-DR-PE-Cy7 и 1 мкг меченого антитела 76E1-AF647. После инкубации в течение 30 минут при 4°С в темноте образцы промывали и анализировали.

Для каждого образца с использованием анализатора MACSQuant рассчитывали средние значения интенсивности флуоресценции (MFI). Чтобы определить число копий C10orf54, использовали набор Quantum Simply Cellular anti-Mouse IgG (Bangs Laboratories, 815B).

Процентная доля 76E1-AF-647⁺ клеток, обнаруженных в трех субпопуляциях MDSC, суммировано на ФИГ. 26А. Аналогичным образом, число копий C10orf54 для каждой субпопуляции MDSC суммировано на ФИГ. 26В.

С использованием описанного выше анализа удалось идентифицировать как Lin^-/CD11b⁺ лейкоциты, так и субпопуляции MDSC, для которых показано, что популяция MDSC моноцитарного типа демонстрирует наиболее высокий уровень экспрессии C10orf54 среди образцов РВМС от здоровых субъектов.

D. Экспрессия в CD4⁺/CD25⁺ Т-клетках

Для определения уровней экспрессии C10orf54 в наивных CD4⁺/CD25⁺ Т-клетках, обнаруженных в РВМС человека, проводили исследования с использованием проточной цитометрии, как описано выше. Оценивали и выполняли количественное определение экспрессии с использованием меченого моноклонального антитела 76Е1, как описано выше. CD4⁺/CD25⁺ Т-клетки выделяли, используя набор для выделения CD4+/CD25+ регуляторных Т-клеток человека (Miltenyi-Biotec, 130-091-301). Аликвоты с каждой стадии выделения (РВМС, CD4+ Т-клетки, CD4+/CD25+ Т-клетки) анализировали в отношении экспрессии C10orf54. Проводили количественное определение величин MFI, используя набор Quantum Simply Cellular anti-Mouse IgG (Bangs Laboratories, 815B). Для оценки этой методологии получали образцы РВМС человека от ALLCELLS.

Описанный выше анализ показал, что C10orf54 минимально экспрессирован в CD4⁺/D25⁺ Т-клетках.

E. Экспрессия в случае меланомы человека

Для определения экспрессии C10orf54 в образцах опухоли меланомы человека и для оценки большого количества клеточных подтипов (макрофагов, миелоидных клеток, Т-клеток и опухолевых клеток) проводили исследования с иммуногистохимическим (IHC) окрашиванием и двойным окрашиванием с использованием иммунофлуоресценции (IF), как описано ниже.

Оценивали три разных вида меланомы: две меланомы мягких тканей кожи (М113044 и OD41239) и одну метастазирующую в лимфатический узел меланому (WD-12972). Один образец меланомы мягких тканей (OD41239) более чем на 90% представлял собой опухоль, в то время как другая меланома мягких тканей и меланома, метастазирующая в лимфатический узел (LN), характеризовались сильной воспалительной реакцией с меньшим количеством имеющихся опухолевых клеток.

Антитела, использованные в этом исследовании, приведены ниже в Таблице 35. Кроме этого, в меланоме каждой ткани для определения количества опухолевых клеток в образцах ткани и содержания C10orf54-положительных опухолевых клеток с использованием IHC окрашивали Gp100, который предпочтительно экспрессирован с высокими уровнями в клетках меланомы.

Чтобы провести двойное окрашивание с использованием IF, замороженные криостатные срезы (8 мкм) фиксировали в смеси 75% этанола крепости 200 и 25% ацетона в течение 5 минут. К образцам добавляли смесь первичных антител (2-х разных видов, разбавленных в разбавителе Dako с № по каталогу S3022; разбавленных в соответствии с Таблицей 35) и инкубировали в течение 1 часа. Затем добавляли вторичные антитела при соотношении 1:200 и инкубировали в течение 30 мин. Добавляли покровные стекла с Prolong Gold + DAPI (ThermoFisher, № по каталогу 36935) и оставляли подсыхать на ночь. Для анализа образцов использовали вертикальный флуоресцентный микроскоп Olympus ВХ52.

Чтобы провести IHC окрашивание с антителом gp100, замороженные криостатные срезы (8 мкм) фиксировали в смеси 75% этанола крепости 200 и 25% ацетона в течение 5 минут. Эндогенную пероксидазу блокировали посредством инкубации с Bloxall (Vector, № по каталогу SP-6000) в течение 5 минут. Образцы дополнительно блокировали с использованием блокирующего набора с авидином и биотином (BioLegend, № по каталогу SIG-31126), с каждым в течение 10 мин и набора Protein Block (Dako, № по каталогу 0909) в течение 30 мин. Добавляли первичное антитело gp100 (Abcam, № по каталогу ab37062; соотношение 1:100) и инкубировали в течение 1 часа. Добавляли вторичное биотинилированное антикроличье антитело (Vector, № по каталогу ВА1000) в соотношении 1:200 и инкубировали в течение 30 мин. Окрашивание с использованием конъюгата стрептавидин-HRP (пероксидаза хрена) проводили с применением набора VECTASTAIN Elite ABC (Vector Laboratories, № по каталогу PK6100) в течение 30 мин. Также проводили окрашивание с использованием DAB (3,3'-диаминобензидин) (Sigma, № по каталогу D4418) и контрастирующее окрашивание гематоксилином Майера (EMS, № по каталогу 26043-05).

Далее кратко сформулированы результаты приведенных выше экспериментов.

Gp100: почти все опухолевые клетки во всех трех образцах тканей с меланомой были C10orf54-отрицательными.

CD3: М113044: большое число Т-клеток были очень слабо C10orf54-положительными. Приблизительно 30% клеток были C10orf54-положительными/CD3-отрицательными. OD41239: лишь очень немногие присутствующие Т-клетки и почти все CD3-положительные клетки были C10orf54-отрицательными. WD-12972: наблюдается большое количество Т-клеток. Многие из них были также слабо C10orf54-положительными. Т-клетки в опухоли были в основном C10orf54-отрицательными и было много C10orf54-положительных клеток, которые были CD3-отрицательными во всей тканях с опухолью.

CD68: М113044: большинство CD68-положительных клеток были C10orf54-отрицательными). OD41239: подмножество CD68-положительных клеток были также C10orf54-положительными. WD-12972: CD68-положительные клетки были в большинстве случаев C10orf54-отрицательными, хотя было также некоторое количество CD68-отрицательных/C10orf54-положительных клеток.

CD11b: почти все CD11b-положительные клетки были также C10orf54-положительными. Однако, были C10orf54-положительные клетки, которые были CD11b-отрицательными во всех трех опухолях меланомы.

PD-L1: PD-L1-положительные клетки были также в большинстве случаев C10orf54-положительными во всех трех опухолях. Опять же, были C10orf54-положительные клетки, которые были PD-L1-отрицательными во всех трех мела номах.

Суммируя, почти все gp100-положительные опухолевые клетки меланомы были C10orf54-отрицательными во всех трех образцах меланомы. Наблюдалась большая вариабельность в количестве воспалительного инфильтрата клеток в 3 разных образцах тканей с меланомой. Однако, почти все CD11b- и PD-L1-положительные клетки в этих меланомах были C10orf54-положительными и большинство CD3-положительных Т-клеток были либо C10orf54-отрицательными, либо очень слабо C10orf54-положительными.

F. Экспрессия в случае немелкоклеточного рака легкого (NSCLC)

Чтобы определить уровни экспрессии C10orf54 в РВМС от пациентов с NSCLC, проводили исследования с использованием проточной цитометрии, как описано ниже. Чтобы оценить субпопуляции CD11b, CD33, CD14 и CD15, проводили оценку и количественное определение экспрессии с использованием меченого моноклонального антитела 26А. Типичные образцы РВМС от здорового пациента и пациента с клинически диагностированным NSCLC, которые использовали в этих исследованиях, получали от ALLCELLS (Emeryville, СА).

Антитело клона 26А метили, используя Alexa Fluor 647. Получали образцы РВМС. 100 мкл (10⁶ клеток) добавляли к следующему: реагенту, блокирующему FcR человека; маркерам клеточной линии; CD11b-PE; CD14-APC-Cy7; CD15-PerCP-Су5.5; HLA-DR-PE-Cy7 и 1 мкг меченого антитела 26a-AF647. После инкубирования в течение 30 минут при 4°С в темноте образцы промывали, ресуспендировали в рабочем растворе DAPI и анализировали.

Для каждого образца с использованием анализатора MACSQuant рассчитывали средние значения интенсивности флуоресценции (MFI). Чтобы определить число копий C10orf54, использовали набор Quantum Simply Cellular anti-Mouse IgG (Bangs Laboratories, 815B).

Экспрессию C10orf54 оценивали в субпопуляциях РВМС из образца NSCLC в сравнении с образцом от здорового пациента так, как показано на ФИГ. 27. Эти результаты суммированы в Таблице 36, в которой показано число копий C10orf54 в случае экспрессии в подмножествах клеток.

Помимо этого, проводили исследования с использованием тканевых матриц (ТМА) для определения экспрессии белка C10orf54 в случае NSCLC.

Использовали различные фиксированные в формалине и залитые парафином ткани, включая ТМА, полученные из US Biomax (Rockville, MD). Фиксированные в формалине и залитые парафином клетки саркомы, трансфицированные C10orf54, и исходные клетки саркомы использовали в качестве положительных и отрицательных контролен. Антитело к C10orf54 (Novus Biologicals (Littleton CO80120), № по каталогу NBP1-88967 C10orf54/B7-H5/PD-1Н) использовали в разведении 1:150 в цитратном буфере, рН 6,0 для извлечения антигена.

Иммуногистохимическое окрашивание проводили с использованием Dako Autostainer (Dako North America, Carpenteria, CA93013) при комнатной температуре с промывками PBS между стадиями.

Для ТМА с опухолью легкого, содержащих все типы опухолей NSCLC, было выявлено, что все типы NSCLC характеризуются положительной экспрессией C10orf54. Однако, количество образцов в этих ТМА было относительно небольшим, за исключением плоскоклеточной карциномы (SCC), для которой наблюдали убедительную картину экспрессии C10orf54.

SCC-подтип далее оценивали для четырех дополнительных ТМА. Для двух ТМА имелись дополнительные данные о выживаемости. Однако, не наблюдали никакой корреляции, когда эти данные анализировали в зависимости от процентной доли C10orf54-положительных клеток. Для одной ТМА также имелись данные об экспрессии рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), однако не наблюдали никакой корреляции, когда анализировали в зависимости от процентной доли C10orf54-положительных клеток. Для этой ТМА количество образцов могло быть слишком малым для определения истинной корреляции. Также оценивали объединенные данные для всех четырех ТМА в случае SCC. Образцы разделяли в соответствии со степенью воспаления, имеющегося в анализируемых очагах воспаления. Когда не наблюдали никакого воспаления, не было обнаружено никаких C10orf54-положительных клеток. Однако удивительно, что в большинстве образцов с легким или выраженным воспалением имелся C10orf54-положительные инфильтрующие клетки. Например, в одной ТМА в случае SCC 17% демонстрировали отсутствие воспаления, 28% демонстрировали легкое воспаление и 55% демонстрировали умеренно выраженное воспаление. Из 28%, которые демонстрировали легкое воспаление, 85% были C10orf54-положительными, а из 55%, которые демонстрировали умеренно выраженное воспаление, 92% были C10orf54-положительными.

Таким образом, приведенные выше анализы указывают на возрастание популяции C10orf54 в каждом подмножестве по сравнению со здоровым донором. Аналогичным образом, наблюдается большее число копий C10orf54 в образцах от пациентов с NSCLC по сравнению со здоровым донором. Кроме того, NSCLC с воспалением убедительно коррелировал с экспрессией C10orf54.

ПРИМЕР 3. ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К C10ORF54

Антитела к C10orf54 получали, используя платформу iTAb. В этой системе линию опухолевых клеток мыши трансдуцируют для стабильной экспрессии белка человека и затем подкожно имплантируют сингенным мышам. Мышей обрабатывают антителом к CD8 для удаления клеток, опосредующих путь отторжения, оставляя при этом гуморальный иммунный ответ незатронутым. После проведения этой иммунизации собирают спленоциты и проводят слияние с иммортализованной клеткой-партнером для получения гибридом. Антитела из этих гибридом подвергают скринингу в нескольких анализах, разработанных для идентификации разнообразной панели антител с хорошими связывающими свойствами. Затем отобранные антитела нарабатывают для тестирования in vivo, как приведено ниже.

Клеточные линии саркомы мышей, экспрессирующие C10orf54, получали посредством вирусной инфекции клеточных линий саркомы. ПЦР-амплифицированный ген C10orf54 клонировали в экспрессирующий вирусный вектор для мышиных стволовых клеток с геном устойчивости к неомицину и секвенировали для подтверждения идентичности. Для получения вирусных частиц клетки HEK 293t с белками для упаковки ретровируса трансфицировали в присутствии реагента трансфекции FUGENE HD (Roche) с ретровирусным экспрессирующим вектором, содержащим ген C10orf54. Вирусные частицы, собранные из супернатанта культуральных сред через 48 часов после проведения трансфекции, использовали для инфицирования клеток саркомы. После отбора с использованием G418 объединяли стабильные трансфектанты и затем клонировали путем предельного разведения. Затем проводили отбор и подращивание клонов в присутствии антибиотиков. Клоны с наивысшим уровнем экспрессии C10orf54 по результатам измерений с использованием проточной цитометрии подращивали и помещали в банк. Эти клеточные линии затем использовали для иммунизации сингенных мышей с целью получения антител и в анализах по связыванию для отбора антител, как приведено ниже.

Для проведения иммунизации клеточную линию саркомы мыши, экспрессирующую C10orf54, подкожно имплантировали мышам 129s6/SvEv, которые являются сингенными с данной линией саркомы. Мышам повторно вводили клеточную линию за трое суток до отбора селезенки. Спленоциты выделяли в виде отдельных клеток и проводили слияние с клетками SP2-MIL6, используя PEG1500. Полученные гибридомы высевали в 384-луночные планшеты и оставляли расти в течение десяти суток.

Антитела к C10orf54 первоначально отбирали с использованием основанного на применении клеток твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) для детектирования связывания с C10orf54. Чтобы провести этот анализ, экспрессирующие C10orf54 клетки саркомы высевали в 384-луночные планшеты за одни сутки до проведения анализа. Затем клетки обрабатывали супернатантами гибридом. После инкубации и промывки присутствие связанного антитела детектировали с использованием конъюгированного с пероксидазой антитела козы к IgG мыши (Jackson ImmunResearch Laboratories) с последующим добавлением хемилюминесцентного субстрата (ThermoScientific SuperSignal ELISA Pico Substrate). Гибридомы, идентифицированные как положительные при первоначальном скрининге, переносили в лунки 96-луночного планшета. После подращивания супернатанты тестировали в аналогичном анализе для подтверждения.

Изотип антител идентифицировали с использованием ELISA, применяя антитела козы к Fc мыши, специфичные к изотипу. Для проведения этого анализа C10orf54-экспрессирующие клетки высевали в 384-луночные планшеты за одни сутки до проведения анализа. Затем клетки обрабатывали супернатантами гибридом. После инкубации и промывки клетки инкубировали с конъюгированным с пероксидазой антителом козы, специфичным к IgG1 или IgG2a мыши (Jackson ImmunResearch Laboratories), с последующим добавлением хемилюминесцентного субстрата (ThermoScientific SuperSignal ELISA Pico Substrate).

Концентрацию антитела в супернатантах, которые, как установлено, были положительными в отношении связывания с C10orf54-экспрессирующими клетками, измеряли с использованием ELISA. Супернатанты тестировали в четырех разведениях. Для каждого антитела для расчета концентрации антитела в супернатанте использовали разведение, дающее значение в пределах линейного диапазона стандартной кривой. Концентрация антител в супернатантах лежала в диапазоне от 1 мкг/мл до 500 мкг/мл, при этом приблизительно для 300 супернатантов составляла больше 10 мкг/мл. По результатам связывания с C10orf54 отбирали двадцать два моноклональных антитела и подвергали дальнейшему анализу in vitro и in vivo, как изложено в данном описании.

Последовательности отобранных двадцати двух моноклональных антител (5В, 46А, 97А, 128А, 146С, 208А, 215А, 26А, 164А, 230А, 76Е1, 53А, 259А, 33ЗА, 39А, 124А, 175А, 321D, 141А, 51 А, 353А, 305А) показаны ниже.

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 5 В показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 5 В с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 5 В с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 46А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 46А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 46А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 97А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 97А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 97А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 128А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 128А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 128А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 146С показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 146С с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 146С с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 208А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 208А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 208А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 215А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 215А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 215А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 26А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 26А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 26А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 164А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 164А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 164А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 164А, номер 2, с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 230А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 230А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 230А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 76Е1 показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 76Е1 с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 76Е1 с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 53А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 53А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 53А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 259А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 259А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 259А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 33А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 33А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 33А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 39А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 39А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 39А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 124А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 124А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 124А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 175А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 175А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 175А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 321 D показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 321D с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 321D с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 141А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 141А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 141А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 51А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 51А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 51А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 353А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 353А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 353А с сигнальной последовательностью:

Нуклеиновокислотные и аминокислотные последовательности для вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела 305А показаны ниже.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела 305А с сигнальной последовательностью:

Вариабельная область легкой цепи антитела 305А с сигнальной последовательностью:

Последовательности CDR для отобранных двадцати двух моноклональных антител приведены в Таблицах 12-33 и использованы для получения гуманизированных антител кС10огт54.

ПРИМЕР 4. СОРТИРОВКА И ЭПИТОПНОЕ КАРТИРОВАНИЕ АНТИТЕЛ К C10ORF54

Разнообразие паратопов VH и VK (вариабельная каппа-цепь) 22 антител к C10orf54 человека оценивали, анализируя последовательности вариабельных областей. Поиск каждой нуклеотидной последовательности проводили, используя IMGT/V-Quest (IMGT®, международную информационную систему ImMunoGeneTics, http://www.imgt.org (основатель и директор: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France)), и последовательность гена зародышевой линии с наивысшей степенью идентичности с запрашиваемой последовательностью помещали в таблицу (Таблица 37). Антитела с одними и теми же последовательностями VH и VK генов зародышевой линии помещали в одну паратопную группу (Таблица 37).

Чтобы исследовать разнообразие эпитопов антител к C10orf54 человека, клетки 293t трансфицировали, используя 1 из 10 разных C10orf54-экспрессирующих конструкций, которые также экспрессировали флуоресцентный маркер. Белки C10orf54 и химерные белки, кодируемые использованными конструкциями, показаны в Таблице 38. Через двое суток после проведения трансфекции клетки отделяли от планшета для тканевых культур, обрабатывали раствором антитела к C10orf54 человека (2 мкг/мл), промывали, обрабатывали поликлональным антителом к IgG-Fc мыши, конъюгированным с Alexa Fluor 647, промывали и для выявления жизнеспособности обрабатывали красителем 4',6-диамидино-2-фенилиндола дигидрохлоридом. После обнаружения на проточном цитометре 10000 живых "событий" живые клетки, меченные флуоресцентным маркером, анализировали по степени окрашивания антителом кС10огт54 человека. Когда среднее значение интенсивности флуоресценции по отношению к антителу с контрольным изотипом возрастало по меньшей мере 20 раз, считалось, что антитело "окрашивает" рассматриваемую C10orf54-экспрессирующую конструкцию. Результаты этих экспериментов по сортировке и описание наборов (bins) конструкций показаны в Таблице 39.

Аминокислотные последовательности для белков C10orf54 и химерных белков, кодируемых экспрессирующими конструкциями, показаны ниже.

Аминокислотная последовательность для белка C10orf54 человека, кодируемого экспрессирующей конструкцией СС1, показана ниже:

Аминокислотная последовательность белка C10orf54 мыши, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС2, показана ниже:

Аминокислотная последовательность белка C10orf54 крысы, кодируемая экспрессирующей конструкцией ССЗ, показана ниже:

Аминокислотная последовательность белка C10orf54 яванского макака, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС4, показана ниже:

Аминокислотная последовательность химерного белка, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС5, показана ниже:

Аминокислотная последовательность химерного белка, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС6, показана ниже:

Аминокислотная последовательность химерного белка, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС7, показана ниже:

Аминокислотная последовательность химерного белка, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС8, показана ниже:

Аминокислотная последовательность химерного белка, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС9, показана ниже:

Аминокислотная последовательность химерного белка, кодируемая экспрессирующей конструкцией СС10, показана ниже:

Результаты этих экспериментов демонстрируют, что антитела к C10orf54, описанные в данной заявке, связываются с различными эпитопами C10orf54 человека, включая АА33-169, АА84-169, АА115-169 и АА84-115.

ПРИМЕР 5. ПОЛУЧЕНИЕ ГУМАНИЗИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ

Мышиные антитела, полученные так, как описано в примере 3, отбирали для секвенирования. Эти отобранные моноклональные антитела, обозначенные как 76Е1, 141А и 175А, подвергали гуманизации двумя способами, как приведено ниже. Результаты гуманизации показаны на ФИГ. 3-8.

В первом способе гуманизации большинство аминокислот в каждом определяющем комплементарность участке (CDR), которые идентифицированы ранее, последовательности вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и вариабельного домена легкой цепи (VL) были превращены в аланин. Полученную последовательность для VH и для VL, показанную на ФИГ. 9, использовали в качестве исходных данных для алгоритма идентификации подгруппы человека на веб-сайте Dr. Andrew C.R. Martin www.bioinf.org.uk/abs/; этот способ представляет собой вариант, взятый из работы Deret, S. et al., SUBIM: a Program for Analysing the Kabat Database and Determining the Variability Subgroup of a new Immunoglobulin Sequence, Comput. Appl. Biosci., 11: 435-439 (1995). VH антитела 76E1, VH антитела 141А и VH антитела 175A были наиболее близки к подгруппе I VH иммуноглобулина человека, VL антитела 76Е1 и VL антитела 175А были наиболее близки к подгруппе II VL-каппа иммуноглобулина человека, a VL антитела 141А был наиболее близок к подгруппе III VL-каппа иммуноглобулина человека. Для каждой мышиной VH- и VL-последовательности антител 76Е1, 141А и 175А выбирали одну акцепторную VH- или VL-последовательность зародышевой линии человека из соответствующей подгруппы последовательностей зародышевой линии человека и все последовательности соединяющих областей, собранные с использованием IMGT®, международной информационной системы ImMunoGeneTics, www.imgt.org (основатель и директор: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France)).

Во втором способе гуманизации (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285-4289 (1992)) в качестве акцептора для мышиных VH-последовательностей - VH антитела 76E1, VH антитела 141А и VH антитела 175A -использовали подгруппу III VH иммуноглобулина зародышевой линии человека; в качестве акцептора для VL антитела 76Е1, VL антитела 141А и VL антитела 175А использовали подгруппу I VL-каппа иммуноглобулина человека.

Для оптимизации связывания гуманизированного антитела может потребоваться изменение в положениях каркаса антитела зародышевой линии человека (например, остатков в VH и VL, не относящихся к CDR) до соответствующих положений родительской мышиной последовательности 76Е1, 141А или 175А. Возможные изменения для каждой гуманизированной последовательности отмечены на ФИГ. 3-8. Возможные изменения в последовательностях CDR гуманизированных антител для облегчения осложнений, вызванных дезамидированием экспонированных в растворитель остатков аспарагинов, окислением экспонированных в растворитель остатков метионина и образованием изоаспарагиновой кислоты, также отмечены на ФИГ. 3-8.

Были разработаны компьютерно-графические модели VH- и VL-доменов мышиных антител 76Е1, 141А и 175А, чтобы помочь в выборе остатков в CDR и каркасных остатков, которые могут потребовать изменений. Использовали программу Swiss-PdB Viewer (Guex, N. and Peitsch, M.C., SWISS-MODEL and the Swiss-PdBViewer: An environment for comparative protein modeling. Electrophoresis, 18: 2714-2723 (1997). Веб-сайт Экспертной системы анализа белков (ExPASY). Кристаллические структуры антител были взяты с веб-сайта Банка данных белковых структур (Berman, Н.М., Westbrook, J., Feng, Z., Gilliland, G., Bhat, T.N., Weissig, H., Shindyalov, I.N., Bourne P.E., The Protein Data Bank Nucleic Acids Research, 28: 235-242 (2000). Последовательности VH- и VL-доменов гуманизированных антител 76E1, 141А и 175A показаны на ФИГ. 3-8.

Получали дополнительные гуманизированные антитела к C10orf54, содержащие VH-домен, VL-домен, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и/или VL CDR3, которые показаны в Таблицах 12-33. Например, отдельные мышиные моноклональные антитела, обозначенные как 26А, 128А, 124А и 259А, подвергали гуманизации с использованием приведенного далее способа, результаты которого показаны на ФИГ. 22А, 22В, 23А, 23В, 24А, 24В, 25А и 25В. Последовательности CDR и VH/VL-последовательности для антител, обозначенных как 26А, 128А, 124А и 259А, показаны в Таблицах 19, 15, 27 и 24, соответственно.

Последовательности VH и VL каждого мышиного монокпонального антитела использовали в качестве исходных данных для программы IgBLAST на веб-сайте Национального центра биотехнологической информации (NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/; Ye, J. et al., Nucleic Acids Research, 41: W34-W40 (2013)). В IgBLAST используется мышиная VH- или VL-последовательность и сравнивается с библиотекой известных последовательностей антител зародышевой линии человека. Использовали базы данных IMGT для VH-генов человека (F+ORF, 273 последовательности из зародышевой линии) и IMGT для VL-каппа генов человека (F+ORF, 74 последовательности из зародышевой линии). IgBLAST выдает 10 лучших последовательностей антител зародышевой линии человека согласно оценке в баллах.

Для всех четырех VH антител 26А, 128А, 124А и 259А выбирали последовательность зародышевой линии антитела человека IGHV1-46 (аллель 1) в качестве акцепторной последовательности, а соединяющую область (J-ген) тяжелой цепи антитела человека IGHJ4 (аллель 1) выбирали из последовательностей соединяющих областей антитела человека, собранных с использованием международной информационной системы ImMunoGeneTics, IMGT®, www.imgt.org (см. ФИГ. 22А, 23А, 24А и 25А).

Для VL антитела 26А выбирали последовательность зародышевой линии антитела человека IGKV43-11 (аллель 1) в качестве акцепторной последовательности, а соединяющую область (J-ген) легкой цепи антитела человека IGKJ2 (аллель 1) выбирали из последовательностей соединяющих областей антитела человека, собранных с использованием международной информационной системы ImMunoGeneTics, IMGT®, www.imgt.org (см. ФИГ. 22В).

Для VL антитела 128А выбирали последовательность зародышевой линии антитела человека IGKV1-39 (аллель 1) в качестве акцепторной последовательности, а в качестве соединяющей области (J-гена) последовательность легкой цепи антитела человека IGKJ2 (аллель 1) (см. ФИГ. 23В).

Для VL антитела 124А выбирали последовательность зародышевой линии антитела человека IGKV2-30 (аллель 1) в качестве акцепторной последовательности, а в качестве соединяющей области (J-гена) последовательность легкой цепи антитела человека IGKJ2 (аллель 1) (см. ФИГ. 24В).

Для VL антитела 259А выбирали последовательность зародышевой линии антитела человека IGKV2-28 (аллель 1) в качестве акцепторной последовательности, а в качестве соединяющей области (J-гена) последовательность легкой цепи антитела человека IGKJ2 (аллель 1) (см. ФИГ. 25В).

ПРИМЕР 6. ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ

Антитела к C10orf54 тестировали по их противоопухолевой активности в животной модели опухолей. Для проведения этих исследований клеточную линию Kasumi-3 (острый миелоидный лейкоз) получали из АТСС (CRL-2725) и культивировали в соответствии с протоколами поставщиков. Животных получали от Taconic (Hudson, NY). Исследования проводили с антителами к C10orf54 на животной модели опухолей.

В этих экспериментах иммунодефицитных самок мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом и диабетом без ожирения (NOD-SCID) в возрасте 4-6 недель использовали в модели опухоли Kasumi-3. Мышам подкожно в правый бок вводили 1,2×10⁶ жизнеспособных клеток (Kasumi-3) в смеси PBS (без магния или кальция) и матригеля от BD (BD Biosciences) в отношении 1:1. Общий введенный объем на одну мышь составлял 200 мкл, из которых 50% приходилось на матригель (BD Biosciences). После того, как размер опухоли достигал 65-200 мм³, мышей случайным образом рандомизировали. Антитела вводили один раз в неделю в дозе 15 мг/кг в течение четырех недель, массу тела и размер опухоли измеряли один раз и два раза в неделю, соответственно. Объем опухоли рассчитывали так, как описано (van der Horst et al., 2009, Neoplasia, 11(4): 355-364). Эксперименты проводили на группах по меньшей мере из 8 животных на одну экспериментальную точку.

Статистическую значимость между обрабатываемыми и контрольными группами рассчитывали, используя пакет программ Graphpad Prism и применяя двухсторонний t-тест Стьюдента. Значение р меньше 0,05 считалось значимым. Результаты трех типичных экспериментов показаны в Таблице 40. В случае эксперимента 1 объемы опухолей, при которых начинали обработку, составляли 114,7 мм³ (96-е сутки). В случае эксперимента 2 объемы опухолей, при которых начинали обработку, составляли 114,5 мм³ (103-и сутки). В случае эксперимента 1 объемы опухолей, при которых начинали обработку, составляли 133 мм³ (34-е сутки).

Как показано на ФИГ. 10 (также см. Таблицу 40, эксперимент 1), обработка антителом к C10orf54 вызывала сильное ингибирование роста опухолей в развившихся опухолях Kasumi-3. Обработка ни одним из антител не оказывала значительного влияния на массу тела, и это есть указание на то, что обработка антителом не оказывала токсичного действия. Как показано на ФИГ. 11 (также см. Таблицу 40, эксперимент 3), повторная обработка антителом 175А вызывала сильное ингибирование роста опухолей в развившихся опухолях Kasumi-3.

ПРИМЕР 7. ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ КОНЪЮГАТОВ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО

Конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) получали и использовали в анализах вторичных ADC и анализах ADC, где антитела к C10orf54 напрямую конъюгированы с цитотоксином, как проиллюстрировано на приведенной далее типичной общей схеме А, где группа малеимидо присоединена к цитотоксину (СТХ) через линкер (L):

Например, согласно приведенной выше схеме A, L может представлять собой одно из следующего:

(1) -(СН₂)₅-С(O)-; (2) -(СН₂)₅-С(O)-валин-цитруллин; (3) -(СН₂)₅-С(O)-валин-аланин; (4) -(СН₂)₅-С(O)-валин-цитруллин-фениленил, где фениленил замещен 2-мя заместителями, выбранными из группы, состоящей из -С(O)ОН и -NH₂; (5) -(СН₂)₅-С(O)-валин-аланин-фениленил, где фениленил замещен 2-мя заместителями, выбранными из группы, состоящей из -С(O)ОН и -NH₂; (6) -(СН₂СН₂)-(CH₂CH₂O)₄-С(O)-валин-цитруллин-фениленил, где фениленил замещен 2-мя заместителями, выбранными из группы, состоящей из -С(O)ОН и -NH₂; или (7) -(СН₂СН₂)-(CH₂CH₂O)₄-С(O)-валин-аланин-фениленил, где фениленил замещен 2-мя заместителями, выбранными из группы, состоящей из -С(O)ОН и -NH₂.

Например, согласно приведенной выше схеме A, L может представлять собой одно из следующего: (1) капроил ("с"); (2) капроил-валин-цитруллин ("cValCit"); (3) капроил-валин-аланин ("cValAla"); (4) капроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил ("cValCit-PAB"); (5) капроил-валин-аланин-пара-аминобензил ("cValAla-PAB"); (6) (dPEG)₄-валин-цитруллин-пара-аминобензил ("dPEG₄-ValCit-РАВ"); или (7) (dPEG)₄-валин-аланин-пара-аминобензил ("dPEG₄-ValAla-PAB").

Например, когда конъюгат антитело-лекарственное средство получают с использованием малеимидной группы ("m"), присоединяемой к цитотоксину, СТХ, через линкер, как проиллюстрировано на приведенной выше схеме А, конъюгат антитело-лекарственное средство может содержать одно из следующего: (1) малеимидокапроил ("mc"); (2) малеимидокапроил-валин-цитруллин ("mcValCit"); (3) малеимидокапроил-валин-аланин ("mcValAla"); (4) малеимидокапроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил ("mcValCit-PAB"); (5) малеимидокапроил-валин-аланин-пара-аминобензил ("mcValAla-PAB"); (6) малеимидокапроил-(dPEG)₄-валин-цитруллин-пара-аминобензил ("m-dPEG4-ValCit-PAB"); или (7) малеимидокапроил-(dPEG)₄-валин-аланин-пара-аминобензил ("m-dPEG4-ValAla-PAB").

Как проиллюстрировано на следующих далее схемах B-F, конъюгат антитело-лекарственное средство с приведенной выше схемы А, может быть получен с использованием малеимидокапроил-монометилауристатина F ("mc-MMAF"), малеимидокапроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил-монометилауристатина F ("mcValCit-PAB-MMAF"), малеимидокапроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил-монометилауристатина Е ("mcValCit-PAB-MMAE"), малеимидокапроил-(dPEG)₄-валин-цитруллин-пара-аминобензил-CC1065 ("m-dPEG₄-ValCit-PAB-CC1065") или малеимидокапроил-валин-аланин-пирролобензодиазепина ("mcValAla-PBD").

Типичные конъюгаты антитело-лекарственное средство получают с использованием малеимидокапроил-монометилауристатина F (mc-MMAF), как проиллюстрировано на следующей далее схеме В, где группа малеимидо присоединена к цитотоксину (СТХ представляет собой MMAF) через линкер (L представляет собой капроильную группу):

Типичные конъюгаты антитело-лекарственное средство также получают с использованием малеимидокапроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил-

монометилауристатина F (mcValCit-PAB-MMAF), как проиллюстрировано на следующей далее схеме С, где группа малеимидо присоединена к цитотоксину (СТХ представляет собой MMAF) через линкер (L представляет собой капроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил):

Типичные конъюгаты антитело-лекарственное средство также получают с использованием малеимидокапроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил-монометилауристатина Е (mcValCit-PAB-MMAE), как проиллюстрировано на следующей далее схеме D, где группа малеимидо присоединена к цитотоксину (СТХ представляет собой ММАЕ) через линкер (L представляет собой капроил-валин-цитруллин-пара-аминобензил):

Типичные конъюгаты антитело-лекарственное средство также получают с использованием малеимидокапроил-(dPEG)₄-валин-цитруллин-пара-аминобензил-СС1065 (m-dPEG₄-ValCit-PAB-CC1065), как проиллюстрировано на следующей далее схеме Е, где группа малеимидо присоединена к цитотоксину (СТХ представляет собой СС1065) через линкер (L представляет собой (dPEG)₄-валин-цитруллин-пара-аминобензил):

На схеме Е структура циклофосфамида, СС1065, изображена в нижнем левом углу схемы, при этом стрелка указывает место присоединения (например, через свободную аминогруппу на молекуле СС1065) к карбонильной группе пара-аминобензоатной группировки линкера.

Типичные конъюгаты антитело-лекарственное средство также получают с использованием малеимидокапроил-валин-аланин-пирролобензодиазепина (mc-ValAla-PBD), как проиллюстрировано на следующей далее схеме F, где группа малеимидо присоединена к цитотоксину (СТХ представляет собой PBD), через линкер (L представляет собой капроил-валин-аланин):

ADC, приведенные на типичных схемах B-F, получали так, как изложено ниже. В стерильных пробирках типа эппендорф емкостью 1,7 мл приводили во взаимодействие 20 мг антитела в концентрации 20 мг/мл в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS), рН 7,4 (Gibco; не содержащем Mg и Са) с 1 мМ диэтилентриаминпентауксусной кислотой (DTPA) в качестве хелатора. Затем добавляли 2,75 экв. раствора трис(2-карбоксиэтил)фосфина гидрохлорида (ТСЕР HCl) (Sigma; концентрация в ампуле 0,5 М) или 50 мкл 100 мМ раствора дитиотреита (DTT) в среднем соотношении лекарственного средства и антитела (DAR), составляющем 4 моля лекарственного средства на один моль антитела, и инкубировали при 37°С в течение 1 часа, чтобы содержание "немеченых" или свободных антител составляло менее 10% от общего содержания антител.

Для оценки содержания свободных тиолов, пригодных для конъюгирования, использовали колориметрический анализ с применением дитио-бис-нитробензоата (DTNB; реагента Элмана) (Ellman et al., Biochemical Pharmacology, 7: 88-95 (1961)). Раствор восстановленного антитела охлаждали в ледяной бане примерно при 0°С в течение 15 минут. Затем к раствору восстановленного антитела добавляли конъюгат линкер-цитотоксин, как приведено ниже: (1) для схемы В добавляли 60 мкл mc-MMAF из 10 мМ концентрированного раствора в DMSO (9,74 мг в 1,074 мл DMSO до концентрации 10 мМ); (2) для схемы С добавляли 60 мкл mcValCit-PAB-MMAF из 10 мМ концентрированного раствора в DMSO (9,4 мг в 707 мкл DMSO до концентрации 10 мМ); (3) для схемы D добавляли 60 мкл mcValCit-PAB-MMAE из 10 мМ концентрированного раствора в DMSO (3,24 мг в 247 мкл DMSO до концентрации 10 мМ); (4) для схемы Е добавляли 60 мкл тс-dPEG4-ValCit-PAB-CC1065 из 10 мМ концентрированного раствора в DMSO (3,8 мг в 258 мкл DMSO до концентрации 10 мМ); и (5) для схемы F добавляли 60 мкл mc-ValAla-PBD из 10 мМ концентрированного раствора в DMSO. После добавления конъюгата линкер-цитотоксин к раствору восстановленного антитела данный раствор инкубировали на плите на вращающихся роликах в холодильнике при 4°С в течение ночи (или альтернативно при 37°С в течение 2 часов) для получения ADC. Повторяли анализ с использованием DTNB, чтобы продемонстрировать отсутствие оставшихся свободных тиолов (бесцветный раствор означает отсутствие свободных тиолов, а желтый цвет указывает на наличие оставшихся свободных тиолов и неполное конъюгирование исходного вещества). Концентрацию ADC определяли, используя спектрофотометр NanoDrop. Неочищенный ADC очищали, используя либо гель-хроматографическое (SEC) разделение на PD-10, либо хроматографию SEC на колонке с Сефадексом G-200 с элюированием соответствующим рабочим буфером или буфером для получения конечной композиции. Очищенный ADC хранили при 4°С.

Метод гидрофобной хроматографии (HIC) в варианте высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) использовали для определения среднего содержания лекарственного средства в ADC. С применением системы HPLC Agilent 1200 с бинарным насосом, соединенной с масс-спектрометром Agilent 6130b с электрораспылением, колонку NPR Butyl-C4 от Tosoh (2,1 мм × 75 мм) использовали с бинарным градиентом при скорости потока 0,8 мл/мин с детектированием при 220 нм, 254 нм и 280 нм, применяя диодно-матричный детектор с возможностью регистрации в ультрафиолетовой и видимой области спектра. В качестве подвижной фазы А использовали 1,5 М раствор сульфата натрия в 1xPBS, в качестве подвижной фазы В использовали 1xPBS с 25% изопропанола с элюированием 0-100%-ным линейным градиентом в количестве 10-12 объемов колонки при начальном уравновешивании в течение 5 минут и промывкой 100%-ной подвижной фазой В в течение 5 минут в конце каждого HPLC-анализа. "Немеченое" или свободное антитело элюировалось первым в ходе прохождения линейного градиента, при этом пики соответствуют возрастанию среднего содержания лекарственного средства в порядке гидрофобности, что коррелирует с возрастающим содержанием антитела в исходном веществе. Времена удерживания для свободного антитела подтверждали посредством анализа с использованием стандартной инъекции 20 мкл концентрированного раствора (1 мг/мл) антитела. Посредством совместного элюирования свободного антитела и ADC окончательно подтверждали относительные количества каждого из них.

На ФИГ. 12 показаны результаты анализа вторичных ADC с использованием антител к C10orf54 в анализе жизнеспособности клеток с применением C10orf54-экспрессирующей линии саркомы. Антитела к C10orf54 инкубировали в соотношении 2:1 с вторичным антителом козы к мышиному антителу, конъюгированному с MMAF. Клетки высевали в количестве 1000 клеток/лунка и инкубировали в присутствии антител в течение 72 часов. Уничтожение таких C10orf54-экспрессирующих клеток саркомы осуществляли с использованием антител к C10orf54, тестируемых зависимым от концентрации образом.

На ФИГ. 13-14 показана активность неконъюгированных антител к C10orf54 и антител к C10orf54, напрямую конъюгированных с ММАЕ, в анализах жизнеспособности клеток с применением C10orf54-экспрессирующих линий саркомы. Для проведения этих анализов клетки могут быть высеяны в различных количествах в лунки и проинкубированы в течение различных промежутков времени в присутствии или в отсутствие антител к C10orf54 и ADC. Например, для анализов, показанных на ФИГ. 13, клетки высевали в количестве 1000 клеток/лунка и инкубировали в присутствии антител в течение 72 часов. В этих анализах in vitro с применением клеток, конъюгированные с MMAF антитела к C10orf54 уничтожали клетки саркомы зависимым от концентрации образом.

На ФИГ. 15 показаны результаты обработки антителами к C10orf54 и ADC (например, неконъюгированными и конъюгированными с MMAF антителами к C10orf54) в животной модели опухолей (например, модели ксенотрансплантатов) с C10orf54-экспрессирующими и исходными линиями саркомы.

ПРИМЕР 8. ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ КОНЪЮГАТОВ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО

Дополнительные конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ia) или (Ib) по настоящему изобретению могут быть получены так, как проиллюстрировано формулой (Ia) на следующей далее схеме G и формулой (Ib) на следующей далее схеме Н:

Могут быть получены дополнительные конъюгаты антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, при этом конъюгаты антитело-лекарственное средство имеют формулу (Ic1):

или их фармацевтически приемлемая соль,

где:

А представляет собой антитело, при этом данным антителом является антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54;

два изображенных остатка цистеина образуются в результате раскрытия дисульфидной связи цистеин-цистеин в А;

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью; и

n равно целому числу от 1 до 4.

Например, получают конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1), где СТХ представляет собой монометилауристатин F (MMAF), L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-, и n равно 4.

Например, получают конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1), где конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) являются такими, где СТХ представляет собой монометилауристатин Е (ММАЕ), L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-О-С(О)-, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) являются такими, которые имеют следующую формулу:

где А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) являются такими, где СТХ представляет собой пирролобензодиазепин (PBD), L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-О-С(О)-, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) являются такими, которые имеют одну из следующих формул:

и

Конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) получают с использованием конъюгатов линкер-цитотоксин приведенной ниже формулы (IIa):

или энантиомера, диастереомера или их смесей;

где:

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер; и

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) получали с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин формулы (Ia), где СТХ представляет собой MMAF, a L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) получали с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин, который имеет следующую структуру:

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин формулы (IIa), где СТХ представляет собой ММАЕ, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-С(О)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O).

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин, который имеет следующую структуру:

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (1 с1) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин формулы (IIa), где СТХ представляет собой PBD, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-, -(СН₂)₅С(O)-Val-Cit-, -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic1) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин, который имеет одну из следующих структур:

Могут быть получены дополнительные конъюгаты антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, при этом конъюгаты антитело-лекарственное средство имеют формулу (Ic2):

или их фармацевтически приемлемая соль,

где:

А представляет собой антитело, при этом данным антителом является антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54;

два изображенных остатка цистеина образуются в результате раскрытия дисульфидной связи цистеин-цистеин в А;

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер;

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью; и

n равно целому числу от 1 до 4.

Например, получают конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2), где СТХ представляет собой монометилауристатин F (MMAF), L представляет собой -(СН₂)₅С(O)-, и n равно 4.

Например, получают конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2), при этом конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

где А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) являются такими, где СТХ представляет собой монометилауристатин Е (ММАЕ), L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-О-С(О)-, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) являются такими, которые имеют следующую формулу:

где А представляет собой антитело к C10orf54, возможно гуманизированное антитело к C10orf54, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) являются такими, где СТХ представляет собой пирролобензодиазепин (PBD), L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-О-С(О)-, и n равно 4.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) являются такими, которые имеют одну из следующих формул:

и

Конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с использованием конъюгатов линкер-цитотоксин одной из приведенных ниже формул (IIb) и (IIc):

или энантиомера, диастереомера или их смесей;

где:

L представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер; и

СТХ представляет собой цитотоксин, соединенный с L амидной связью, карбаматной связью, дисульфидной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью или сложноэфирной связью.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин формулы (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой MMAF, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин, который имеет одну из следующих структур:

и

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин формулы (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой ММАЕ, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-РАВ-О-С(О)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин, который имеет одну из следующих структур:

и

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин формулы (IIb) или (IIc), где СТХ представляет собой PBD, a L представляет собой -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-, -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-, -(CH₂)₅C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- или -(CH₂)₅C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.

Например, конъюгаты антитело-лекарственное средство формулы (Ic2) получают с применением антител к C10orf54 (например, гуманизированных антител к C10orf54), используя конъюгат линкер-цитотоксин, который имеет одну из следующих структур:

и

Получают конъюгаты антитело-лекарственное средство, которые приведены в этом примере и в данном описании, где для конъюгирования используют одну или более межцепочечных дисульфидных связей в антителе (например, четыре межцепочечные дисульфидные связи, как изображено выше на типичных схемах F и G). Конъюгаты антитело-лекарственное средство, где для конъюгирования используют одну или более межцепочечных дисульфидных связей в антителе, как изложено в данном описании, характеризуются предпочтительным соотношением антитела и лекарственного средства, равным четырем.

Эксперименты по жизнеспособности клеток проводили, используя линии клеток AML человека, такие как OCI/AML3, PL21 и P31/FUJ. Для анализов первичных ADC выполняли пересев миелоидных клеточных линий в среде RPMI или минимальной поддерживающей среде (MEM) (LifeTech), дополненных 10-20% фетальной телячьей сыворотки (LifeTech), согласно установленной практике. Для анализа токсичности клетки высевали в 384-луночные планшеты (Greiner) по 3000 клеток на одну лунку в 50 мкл среды.

Для анализов первичных ADC готовили серийные разведения конъюгированных с DBM(C6)MMAF антител к C10orf54 из 100-300 нМ растворов в RPMI и добавляли в соответствующие лунки в двух повторах, используя устройство для манипуляции с жидкостями iPipette (Apricot Designs). Затем планшеты с клетками инкубировали в течение трех суток с последующим лизисом в реагенте для анализа Cell-Titer Glo (Promega).

Для анализов первичных ADC проводят количественное определение люминесценции на планшетном ридере Synergy НТ (BioTek) и результаты отображают в виде графика. Значения IC₅₀ рассчитывают путем подгонки четырехпараметрической сигмоидальной кривой (GraphPad). Результаты типичных анализов первичных ADC с использованием трех миелоидных клеточных линий показаны в виде значений IC₅₀ (нМ) в Таблице 41. Например, ADC, представленные в Таблице 41, создавали посредством конъюгирования гуманизированных вариантов антител с конъюгатом линкер-токсин, таким как DBM-(C6)-MMAF, как описано в этом примере 8. Результаты указывают на то, что обе клеточные линии OCI/AML3 и P31/FUJ были чувствительными к ADC на основе антитела к C10orf54, в то время как клеточная линия PL21 оказалась менее чувствительной.

Подразумевается, что описанные выше воплощения настоящего изобретения являются только типичными, и специалистам в данной области техники будут известны, или они смогут установить, не используя ничего, кроме рутинного экспериментирования, многочисленные эквиваленты конкретных методик, изложенных в данном описании. Считается, что все такие эквиваленты находятся в объеме настоящего изобретения и охватываются следующей далее формулой изобретения. Кроме того, как использовано в этом описании и формуле изобретения, формы единственного числа, описываемые в английской версии артиклями "a," "an" и "the", включают формы множественного числа, если содержание явно не диктует иное. Так, например, ссылка на "антитело" включает смесь двух или более таких антител, и тому подобное. Кроме того, специалистам обычной квалификации в данной области будет известно, что последовательности выполнения рабочих операций должны быть изложены в некотором определенном порядке с целью объяснения и составления формулы изобретения, но настоящее изобретение предполагает различные изменения, выходящие за пределы такого определенного порядка.

ПРИМЕР 9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ АНАЛИЗЫ

Для определения оптимальных условий культивирования и активации наивных Т-клеток при условии, что эта активация может быть устранена посредством введения антител к C10orf54, проводили следующие эксперименты. Сразу после определения оптимальных условий их можно использовать при дальнейшем скрининге антител к C10orf54, например, антител, описанных в данной заявке. Были определены оптимальные концентрации антител к CD3, антител к CD28, C10orf54-Fc и Т-клеток.

Для определения жизнеспособности Т-клеток, культивируемых в различных условиях, использовали люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. Активации Т-клеток добивались путем предварительного покрытия планшетов антителами к CD3 с последующей костимуляцией антителами к CD28 в растворе. Начальные условия основывали на данных, представленных в Wang et al., Biofunctions of three new B7 family members, https://www.mdsystems.com (10 декабря 2015 г.).

Концентрация Т-клеток, по-видимому, является важной характеристикой для анти-CD3/анти-CD28-зависимой стимуляции Т-клеток. Только при самом большом протестированном количестве, 50000 клеток на одну лунку 384-луночного планшета, была продемонстрирована такая зависимость, и ее использовали для всех дальнейших стадий. Минимальная концентрация антитела к CD3, при которой достигали активации, близкой к максимальному уровню, составляла 5 мкг/мл. При этой определенной концентрации антител к CD3 наблюдали зависимое от концентрации влияние C10orf54-Fc на пролиферацию Т-клеток. При более сильной активации, достигаемой с использованием магнитных гранул, покрытых CD2/CD3/CD28, такого эффекта не наблюдали.

Было показано, что минимальная концентрация антитела к CD28, при которой достигалась пролиферация Т-клеток, близкая к максимальному уровню, составляла примерно 3-4 мкг/мл. Зависимое от концентрации влияние C10orf54-Fc на пролиферацию Т-клеток наблюдали во всем тестируемом диапазоне для антитела KCD28. В результате, для дальнейших стадий выбрана точка 3,2 мкг/мл.

Пан Т-клетки вели себя аналогично наивным Т-клеткам. Однако, наивные Т-клетки оказались более чувствительными к ингибированию под действием C10orf54-Fc, чем пан Т-клетки (ФИГ. 30А-30С).

Таким образом, на основании описанного выше анализа оптимизированными условиями для культивирования и активации наивных Т-клеток являются: концентрация 5 мкг/мл для антител к CD3 и 3,2 мкг/мл для антител к CD28. Умеренный уровень активации давал возможность устранить эту активацию посредством введения C10orf54-Fc, делая этот анализ полезным для оценки антител к C10orf54.

Чтобы определить, усиливают ли антитела к C10orf54 стимуляцию Т-клеток, проводили дополнительные анализы in vitro так, как описано ниже.

Антитела к C10orf54, описанные в данной заявке, иммобилизовали на планшете в различных концентрациях. Наивные Т-клетки стимулировали путем добавления растворимых антител к CD28 в концентрации 5 мкг/мл и приведения в контакт наивных Т-клеток с иммобилизованными антителами к CD3 в концентрации 3,2 мкг/мл в том же планшете, где присутствовали антитела к C10orf54. Усиление стимуляции Т-клеток регистрировали по секреции IL-2, секреции интерферона-γ (IFN-γ) и встраиванию ³Н-тимидина (индикатора пролиферации клеток).

Влияние антител к C10orf54 на стимуляцию Т-клеток суммировано в приведенной ниже Таблице 42.

Кроме того, чтобы определить, индуцируют ли антитела к C10orf54 пролиферацию Т-клеток, проводили анализы in vitro так, как описано ниже.

Конструкцию C10orf54-Fc, описанную выше, иммобилизовали на планшете в различных концентрациях. В качестве положительного контроля на отдельном планшете также иммобилизовали конструкцию IgG-Fc. Наивные Т-клетки стимулировали путем добавления растворимых антител к CD28 в концентрации 5 мкг/мл и приведения в контакт наивных Т-клеток с иммобилизованными антителами к CD3 в концентрации 3,2 мкг/мл в том же планшете, где присутствовала или конструкция C10orf54-Fc, или IgG-Fc в качестве контроля. Кроме того, добавляли растворимые антитела к C10orf54 (26А или 175А, описанные в данной заявке) для дополнительного усиления стимуляции Т-клеток. Усиление стимуляции Т-клеток регистрировали по секреции IL-2, секреции IFN-γ и встраиванию ³Н-тимидина (индикатора пролиферации клеток).

Антитело к C10orf54 26А ослабляло C10orf54-опосредуемое подавление пролиферации наивных Т-клеток, а также секрецию IL-2 и IFN-γ. Эти результаты показаны на ФИГ. 29.

Чтобы определить, ингибирует ли C10orf54 стимуляцию Т-клеток в случае наивных Т-клеток, CD4+ Т-клеток и CD8+ Т-клеток, проводили дополнительные анализы in vitro так, как описано ниже.

Конструкцию C10orf54-Fc, описанную выше, иммобилизовали на планшете в различных концентрациях. В качестве положительного контроля на отдельном планшете также иммобилизовали конструкцию IgG-Fc. Т-клетки стимулировали путем добавления растворимых антител к CD28 в концентрации 5 мкг/мл и приведения в контакт Т-клеток с иммобилизованными антителами к CD3 в концентрации 3,2 мкг/мл в том же планшете, где присутствовала или конструкция C10orf54-Fc, или IgG-Fc в качестве контроля. Ингибирование стимуляции Т-клеток регистрировали по встраиванию ³Н-тимидина (индикатора пролиферации клеток).

Иммобилизованная конструкция C10orf54-Fc в концентрации 10 мкг/мл ингибировала анти-CD3/анти-CD28-стимулированные наивные Т-клетки, а также ингибировала CD4+ или CD8+ Т-клетки, по результатам измерений по встраиванию ³Н-тимидина. Эти результаты показаны на ФИГ. 28. В дополнительных анализах для ослабления C10orf54-опосредуемого подавления наивных Т-клеток, CD4⁺ Т-клеток или CD8⁺ Т-клеток при проведении анализа добавляют антитела к C10orf54, например, 26А.

Содержание всех приведенных в данном описании ссылок включено тем самым посредством ссылки. Другие воплощения представлены в следующей далее формуле изобретения.

--->

SEQUENCE LISTING

<110> Igenica Biotherapeutics, Inc.

<120> ANTI-C10ORF54 ANTIBODIES AND USES THEREOF

<130> 13390-028-228

<140> TBA

<141> 2015-12-11

<150> US 62/090,880

<151> 2014-12-11

<160> 1923

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 118

<212> PRT

<213> Murine

<220>

<223> Murine antibody 76E1 VH domain

<400> 1

Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Ser Thr Met Ile Thr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 121

<212> PRT

<213> Murine

<220>

<223> Murine antibody 141A VH domain

<400> 2

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Glu Glu Val Tyr Asp Gly Tyr Pro Trp Phe Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 3

<211> 119

<212> PRT

<213> Murine

<220>

<223> Murine antibody 175A VH domain

<400> 3

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 4

<211> 112

<212> PRT

<213> Murine

<220>

<223> Murine antibody 76E1 VL domain

<400> 4

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 5

<211> 106

<212> PRT

<213> Murine

<220>

<223> Murine antibody 141A VL domain

<400> 5

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 6

<211> 112

<212> PRT

<213> Murine

<220>

<223> Murine antibody 175A VH domain

<400> 6

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Leu Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 7

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Human germline Immunoglobulin (IMGT IGHV1-18) Heavy chain

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 8

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Human germline Immunoglobulin (IMGT IGHV3-48) Heavy chain

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 9

<211> 100

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Human germline Immunoglobulin (IMGT IGKV2-28) light chain

<400> 9

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro

100

<210> 10

<211> 95

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Human germline Immunoglobulin (IMGT IGKV1-39) light chain

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro

85 90 95

<210> 11

<211> 96

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Human germline Immunoglobulin (IMGT IGKV3-20) light chain

<400> 11

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

<210> 12

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 12

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Ile Thr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Ile Thr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 14

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Ile Thr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Ile Thr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 16

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Glu Val Tyr Asp Gly Tyr Pro Trp Phe Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 17

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 17

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Glu Val Tyr Asp Gly Tyr Pro Trp Phe Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 18

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Glu Val Tyr Asp Gly Tyr Pro Trp Phe Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 19

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 19

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Glu Val Tyr Asp Gly Tyr Pro Trp Phe Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 20

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 21

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 23

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VH domain

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VL domain

<400> 24

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 25

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VL domain

<400> 25

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 26

<211> 106

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VL domain

<400> 26

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 27

<211> 106

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VL domain

<400> 27

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 28

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VL domain

<400> 28

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Leu Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 29

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody VL domain

<400> 29

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Leu Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 30

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR1

<400> 30

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn Met Asn

1 5 10

<210> 31

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 31

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR3

<400> 32

Ser Thr Met Ile Thr Pro Phe Asp Tyr

1 5

<210> 33

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1a VH CDR1

<400> 33

Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Trp Ile Glu

1 5 10

<210> 34

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1a VH CDR2

<400> 34

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 35

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1a VH CDR3

<400> 35

Glu Glu Val Tyr Asp Gly Tyr Pro Trp Phe Gly Tyr

1 5 10

<210> 36

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A VH CDR1

<400> 36

Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His Trp Ile Glu

1 5 10

<210> 37

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A VH CDR2

<400> 37

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 38

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A VH CDR3

<400> 38

Trp Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 39

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1a VH FR1

<400> 39

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 40

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVK1 VL CDR2

<400> 40

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 41

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVK2 VL CDR3

<400> 41

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 42

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVK3 VL CDR1

<400> 42

Arg Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met His

1 5 10

<210> 43

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVK2 VL CDR3

<400> 43

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVK3 VL CDR3

<400> 44

Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr

1 5

<210> 45

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> VL CDR1 of a humanized anti-C10orf54 antibody

<400> 45

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 46

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A VL CDR2

<400> 46

Lys Leu Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 47

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A VL CDR3

<400> 47

Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 48

<400> 48

000

<210> 49

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1b VH CDR2

<400> 49

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 50

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1b VH CDR2

<400> 50

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 51

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1b VH FR1

<400> 51

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 52

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1b VH FR2

<400> 52

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 53

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1b VH FR3

<400> 53

Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 54

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1b VH FR4

<400> 54

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 55

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3b VH FR1

<400> 55

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 56

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR2

<400> 56

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser

1 5 10

<210> 57

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH3 VH FR3

<400> 57

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 58

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVH1a VH FR1

<400> 58

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 59

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR1

<400> 59

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Gln Met Asn

1 5 10

<210> 60

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR1

<400> 60

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 61

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR1

<400> 61

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asp Met Asn

1 5 10

<210> 62

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR1

<400> 62

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Ala Met Asn

1 5 10

<210> 63

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH FR2

<400> 63

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 64

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH FR2

<400> 64

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 65

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 65

Asn Ile Glu Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 66

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 66

Asn Ile Ser Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 67

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 67

Asn Ile Ala Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 68

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 68

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Gln Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 69

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 69

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ser Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 70

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 70

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asp Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 71

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 71

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 72

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 72

Asn Ile Glu Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Gln Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 73

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 73

Asn Ile Glu Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ser Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 74

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 74

Asn Ile Glu Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asp Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 75

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL FR1

<400> 75

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

20

<210> 76

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL FR2

<400> 76

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 77

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL FR3

<400> 77

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 78

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL FR4

<400> 78

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 79

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 79

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 80

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR2

<400> 80

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 81

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 81

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 82

<211> 15

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Joining region IMGT IGHJ4-01

<400> 82

Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10 15

<210> 83

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 83

Asn Ile Glu Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 84

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 84

Asn Ile Ser Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Gln Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 85

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 85

Asn Ile Ser Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ser Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 86

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 86

Asn Ile Ser Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asp Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 87

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 87

Asn Ile Ser Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 88

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 88

Asn Ile Ala Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Gln Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 89

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 89

Asn Ile Ala Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ser Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 90

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 90

Asn Ile Ala Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Asp Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 91

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVK3 VL FR1

<400> 91

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 92

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVK3 VL FR2

<400> 92

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 93

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 141A-huVK3 VL FR3

<400> 93

Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 94

<211> 12

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Joining region IMGT IGKJ2-01

<400> 94

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 95

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH CDR2

<400> 95

Asn Ile Ala Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 96

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH FR3

<400> 96

Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 97

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH FR3

<400> 97

Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 98

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1a VH FR3

<400> 98

Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 99

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3b VH CDR2

<400> 99

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 100

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3b VH CDR2

<400> 100

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 101

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1a VH CDR2

<400> 101

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Gln Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 102

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1a VH CDR2

<400> 102

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 103

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1a VH CDR2

<400> 103

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asp Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 104

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1a VH CDR2

<400> 104

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 105

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1a VH FR1

<400> 105

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 106

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1a VH FR2

<400> 106

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 107

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 107

Arg Ala Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 108

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 108

Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 109

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 109

Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 110

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 110

Arg Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 111

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 111

Arg Val Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 112

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 112

Arg Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 113

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1 VH FR3

<400> 113

Arg Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 114

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH1b VH CDR2

<400> 114

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 115

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 115

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 116

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 116

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 117

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 117

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 118

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 118

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 119

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 119

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 120

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 120

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 121

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR1

<400> 121

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 122

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR2

<400> 122

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser

1 5 10

<210> 123

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR2

<400> 123

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly

1 5 10

<210> 124

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3a VH FR2

<400> 124

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 125

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 125

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 126

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 126

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 127

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 127

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 128

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 128

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 129

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 129

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 130

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 130

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 131

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 131

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 132

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 132

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 133

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 133

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 134

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 134

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 135

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 135

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 136

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 136

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 137

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 137

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 138

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 138

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 139

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 139

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 140

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 140

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 141

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 141

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 142

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 142

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 143

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 143

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 144

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 144

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 145

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 145

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 146

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 146

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 147

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 147

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 148

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 148

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 149

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 149

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 150

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 150

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 151

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 151

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 152

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 152

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 153

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 153

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 154

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 154

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 155

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 155

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 156

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 156

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 157

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 157

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 158

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 158

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 159

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 159

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 160

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 160

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 161

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 161

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 162

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 162

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 163

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 163

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 164

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 164

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 165

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 165

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 166

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 166

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 167

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 167

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 168

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 168

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 169

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 169

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 170

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 170

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 171

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 171

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 172

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 172

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 173

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 173

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 174

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 174

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 175

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 175

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 176

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 176

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 177

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 177

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 178

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 178

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 179

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 179

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 180

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 180

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 181

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 181

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 182

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 182

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 183

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 183

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 184

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 184

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 185

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 185

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 186

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 186

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 187

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 187

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 188

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 188

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 189

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 189

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 190

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 190

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 191

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 191

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 192

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 192

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 193

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 193

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 194

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 194

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 195

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 195

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 196

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 196

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 197

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 197

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 198

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 198

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ala Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 199

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 199

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 200

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 200

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 201

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 201

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 202

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 202

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 203

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 203

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 204

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 204

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 205

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 205

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 206

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 206

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 207

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 207

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 208

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 208

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 209

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 209

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 210

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 210

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 211

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 211

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 212

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 212

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 213

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 213

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 214

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 214

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 215

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 215

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 216

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 216

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 217

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 217

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 218

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 218

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 219

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 219

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 220

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 220

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 221

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 221

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 222

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 222

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 223

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 223

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 224

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 224

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 225

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 225

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 226

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 226

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 227

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 227

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 228

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 228

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 229

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 229

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 230

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 230

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 231

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 231

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 232

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 232

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 233

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 233

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ala Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 234

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 234

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ala Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 235

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 235

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 236

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 236

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 237

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 237

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 238

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 238

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 239

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 239

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 240

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 240

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 241

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 241

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 242

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 242

Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 243

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 243

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 244

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 244

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 245

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 245

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 246

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 246

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 247

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 247

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 248

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 248

Arg Ala Thr Phe Ser Arg Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 249

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 249

Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ala Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 250

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 250

Arg Phe Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 251

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVH3 VH FR3

<400> 251

Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 252

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL FR1

<400> 252

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

20

<210> 253

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 253

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 254

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 254

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 255

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 255

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ala Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 256

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 256

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 257

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 257

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Ser Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 258

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 258

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Ala Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 259

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 259

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 260

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 260

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Gln Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 261

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 261

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Ser Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 262

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 262

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Ala Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 263

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 263

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asp Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 264

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 264

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Gln Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 265

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 265

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 266

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 266

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Ala Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 267

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 267

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 268

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 268

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ala Gly Gln Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 269

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 269

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ala Gly Ser Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 270

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 270

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ala Gly Ala Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 271

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR1

<400> 271

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ala Gly Asp Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 272

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR2

<400> 272

Lys Leu Ser Gln Arg Phe Ser

1 5

<210> 273

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR2

<400> 273

Lys Leu Ser Ser Arg Phe Ser

1 5

<210> 274

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR2

<400> 274

Lys Leu Ser Ala Arg Phe Ser

1 5

<210> 275

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL CDR2

<400> 275

Lys Leu Ser Asp Arg Phe Ser

1 5

<210> 276

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK2 VL FR3

<400> 276

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 277

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 277

Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 278

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 278

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 279

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 279

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys

20

<210> 280

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 280

Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 281

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 281

Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys

20

<210> 282

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 282

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys

20

<210> 283

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR1

<400> 283

Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys

20

<210> 284

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR2

<400> 284

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 285

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 285

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 286

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 286

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 287

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 287

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 288

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 288

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 289

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 289

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 290

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 290

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Leu Gly Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 291

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 175A-huVK1 VL FR3

<400> 291

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Leu Gly Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 292

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 292

Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 293

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 293

Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 294

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 294

Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 295

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 295

Arg Ala Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 296

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 296

Arg Ala Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 297

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 297

Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 298

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 298

Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 299

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 299

Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 300

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 300

Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 301

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 301

Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 302

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 302

Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 303

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 303

Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 304

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 304

Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 305

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 305

Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 306

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 306

Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 307

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 307

Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 308

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 308

Arg Ala Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 309

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 309

Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 310

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 310

Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 311

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 311

Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 312

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 312

Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 313

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 313

Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 314

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 314

Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 315

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 315

Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 316

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 316

Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 317

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 317

Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 318

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1 VH FR3

<400> 318

Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 319

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1b VH CDR3

<400> 319

Ser Thr Leu Ile Thr Pro Phe Asp Tyr

1 5

<210> 320

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1b VH FR4

<400> 320

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 321

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1b VH CDR2

<400> 321

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 322

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH1b VH CDR2

<400> 322

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Asp Tyr Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 323

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR2

<400> 323

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val Ser

1 5 10

<210> 324

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR2

<400> 324

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Ser

1 5 10

<210> 325

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR2

<400> 325

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val Gly

1 5 10

<210> 326

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR2

<400> 326

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 327

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 327

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 328

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 328

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 329

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 329

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 330

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 330

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 331

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 331

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 332

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 332

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 333

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 333

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 334

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 334

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 335

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 335

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 336

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 336

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 337

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 337

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 338

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 338

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 339

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 339

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 340

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 340

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 341

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 341

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 342

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 342

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 343

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 343

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 344

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 344

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 345

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 345

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 346

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 346

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 347

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 347

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 348

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 348

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 349

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 349

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 350

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 350

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 351

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 351

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 352

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 352

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 353

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 353

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 354

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 354

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 355

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 355

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 356

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 356

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 357

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 357

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 358

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 358

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 359

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 359

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 360

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 360

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 361

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 361

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 362

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 362

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 363

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 363

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 364

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 364

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 365

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 365

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 366

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 366

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 367

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 367

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 368

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 368

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 369

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 369

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 370

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 370

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 371

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 371

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 372

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 372

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 373

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 373

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 374

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 374

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 375

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 375

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 376

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 376

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 377

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 377

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 378

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 378

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 379

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 379

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 380

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 380

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 381

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 381

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 382

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 382

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 383

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 383

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 384

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 384

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 385

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 385

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 386

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 386

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 387

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 387

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 388

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 388

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 389

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 389

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 390

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 390

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 391

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 391

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 392

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 392

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 393

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 393

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 394

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 394

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 395

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 395

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 396

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 396

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 397

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 397

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 398

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 398

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 399

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 399

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 400

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 400

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 401

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 401

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 402

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 402

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 403

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 403

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 404

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 404

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 405

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 405

Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 406

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 406

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Ser Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 407

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 407

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 408

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 408

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 409

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 409

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 410

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 410

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 411

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 411

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 412

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 412

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 413

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 413

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 414

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 414

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 415

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 415

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 416

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 416

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 417

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 417

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 418

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 418

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 419

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 419

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 420

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 420

Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 421

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 421

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 422

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 422

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 423

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 423

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 424

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 424

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 425

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 425

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 426

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 426

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 427

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 427

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 428

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 428

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 429

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 429

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 430

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 430

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 431

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 431

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 432

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 432

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 433

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 433

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 434

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 434

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 435

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 435

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 436

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 436

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 437

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 437

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 438

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 438

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 439

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 439

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 440

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 440

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 441

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 441

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 442

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 442

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 443

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 443

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 444

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 444

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 445

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 445

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 446

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 446

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 447

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 447

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 448

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 448

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 449

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 449

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 450

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 450

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 451

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 451

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 452

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 452

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 453

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 453

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 454

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 454

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 455

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 455

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 456

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 456

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 457

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 457

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 458

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 458

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 459

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 459

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 460

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 460

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 461

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 461

Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 462

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 462

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 463

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 463

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 464

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 464

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 465

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 465

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 466

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 466

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 467

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 467

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 468

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 468

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 469

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 469

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 470

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 470

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 471

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 471

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 472

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 472

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 473

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 473

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 474

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 474

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 475

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 475

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 476

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 476

Arg Ala Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 477

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 477

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 478

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 478

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 479

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 479

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 480

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 480

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 481

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 481

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 482

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 482

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 483

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 483

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 484

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 484

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 485

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 485

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 486

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 486

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 487

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 487

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 488

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 488

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 489

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 489

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 490

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 490

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 491

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 491

Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 492

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 492

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 493

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 493

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 494

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 494

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 495

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 495

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr

20 25 30

<210> 496

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 496

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 497

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 497

Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 498

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> humanized antibody 76E1-huVH3 VH FR3

<400> 498