ПРИМЕНЕНИЕ ТРИМЕБУТИНА МАЛЕАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА Российский патент 2024 года по МПК A61K31/24 A61P29/00 A61P1/00 C07C219/18 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к фармацевтике, в частности гастроэнтерологии, и может быть использовано для профилактики или лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Среди острых и хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) важную роль занимают состояния, ассоциированные с процессами воспаления. Они могут развиваться в следствие нарушения микробиологического баланса в тонком и толстом кишечнике, генетической предрасположенности, экзогенных воздействий и иных патологических факторов.

Одним из самых распространенных в популяции воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта является синдром раздраженного кишечника (СРК) - хроническое функциональное расстройство желудочно-кишечного тракта, от которого страдают от 9 до 23% населения во всем мире. Процент пациентов, обращающихся за медицинской помощью в связи с СРК, приближается к 12% в практике первичной медико-санитарной помощи и на сегодняшний день является самой крупной подгруппой, наблюдаемой в гастроэнтерологических клиниках [1].

СРК характеризуется изменением режима работы кишечника в сочетании с дискомфортом, напряжением или болью в животе, миалгиями, вздутием живота, нарушением стула, психоэмоциональными ощущениями наличия серьезного нарушения в работе кишечника у пациента. Изменение моторики желудочно-кишечного тракта, висцеральная гиперчувствительность, постинфекционная реактивность, взаимодействие мозга и кишечника, изменение фекальной микрофлоры, избыточный бактериальный рост, чувствительность к пище, мальабсорбция углеводов и воспаление кишечника ⎯ все это может участвовать в патогенезе СРК. Функциональные расстройства ЖКТ, наиболее известным из которых, помимо СРК, является функциональная диспепсия (ФД) занимают значимое место среди «функциональных соматических синдромов», наряду с синдромом хронической усталости и фибромиалгией, с которыми они часто перекрываются. Ряд других сопутствующих состояний может возникать чаще, чем ожидалось, у пациентов с СРК, включая желудочно-эзофагальный рефлюкс, нарушения мочеполовой системы, фибромиалгию, головную боль, боль в спине и разнообразные психологические симптомы [2].

Этиология заболевания по-прежнему остается недостаточно изученной, т.к. в его развитие одновременно может вовлекаться большое количество патологических факторов. Не существует отдельного физиопаталогического механизма, которым можно было бы объяснить причины его возникновения, но существует по меньшей мере 3 взаимосвязанных фактора, которые действуют таким образом, который изменяется от одного индивидуума к другому: i) измененная реактивность желудочно-кишечного тракта, ii) моторика или выделение в ответ на раздражающие просвет стимулы (пища, вздутие, воспаление, бактериальные факторы) или стимулы окружающей среды (психосоциальный стресс), которые вызывают симптомы диареи или запора, и iii) гиперчувствительность кишечника с увеличенным висцеральным ощущением и болью. Помимо вышеуказанных факторов, с каждым годом появляется все больше данных о роли иммунной активации при развитии СРК, что в основном показано в исследованиях, изучающих механизмы, способствующие развитию воспаления или стойким изменениям в иммунных клетках слизистой оболочки, энтерохромаффинных и тучных клетках, энтеральной нервной системы и микробиоте желудочно-кишечного тракта. Цитокиновый дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов (а также полиморфизмы в генах цитокинов) в системном кровотоке и слизистой оболочке кишечника также может характеризовать проявления СРК.

Воздействие развивающейся кишечной патологии вызывает стойкое слабовыраженное системное воспаление и воспаление в слизистых оболочках кишечника, которое характеризуется измененным составом циркулирующих клеток, инфильтрацией иммунных клеток слизистой оболочки и увеличением продукции различных цитокинов у пациентов с СРК. Установлено, что дисбаланс между про- и противовоспалительными цитокинами играет важную роль в патогенезе СРК, что было подтверждено многочисленными исследованиями. Про- и противовоспалительные цитокины являются важными модуляторами иммунного ответа, а также играют важную роль в развитии воспаления кишечника. Продукция цитокинов находится под генетическим контролем, и дисбаланс уровня секреции цитокинов может вызывать предрасположенность к заболеванию наряду с клиническими симптомами. Имеются доказательства развития устойчивого воспаления при СРК, подтвержденные рядом исследований, в которых был обнаружен низкий уровень противовоспалительных цитокинов у пациентов с СРК или других исследований, в которых были обнаружены высокие уровни провоспалительных цитокинов или дисбаланс провоспалительных цитокинов и доля противовоспалительных цитокинов [3]. Недавние исследования также показали усиление врожденного иммунного ответа у пациентов с СРК путем оценки экспрессии и активации Toll-подобных рецепторов. Полученные данные позволяют предположить, что активация иммунного ответа может играть ключевую роль в патогенезе СРК. В частности, большое значение в патогенезе воспалительных заболеваний имеют провоспалительные цитокины, которые синтезируются макрофагами, Т-лимфоцитами и эндотелиальными клетками. Со временем в крови появляются иммунные комплексы, которые поражают другие органы и ткани: кожу, органы зрения, опорно-двигательный аппарат, систему кроветворения. Процесс изменения уровня системных цитокинов или цитокинов слизистой оболочки, а также полиморфизм их генов, по-видимому, играет значительную роль. Патофизиологию этого процесса связывают с несколькими состояниями, такими как изменение висцеральной чувствительности, чувствительности к пище, изменения в микробиоме кишечника-хозяина, а также нарушения передачи сигналов на уровне мозг-кишечник [4].

При развитии у пациента СРК, согласно полученным данным, существует тенденция к присутствию в кровотоке и в тканях кишечника высоких уровней провоспалительных цитокинов, таких как ФНО-α, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, и снижению уровней противовоспалительного цитокина ИЛ-10, ингибирующего высвобождение провоспалительных цитокинов, а также презентацию антигена. Некоторые из этих цитокинов снижают риск СРК, например, противовоспалительные цитокины, такие как ИЛ-10, а некоторые из них связаны с развитием СРК, например, провоспалительные цитокины, которые всегда способствуют воспалительной реакции, такие как ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ-18 и ФНО-α и т. д. Основными провоспалительными цитокинами, связанными с СРК, являются ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО-α [5].

Из уровня техники известно, что одним из распространенных лекарственных препаратов, применяемым с 1969 г для терапии СРК, оказывающим воздействие на участвующих в пищеварении периферические энкефалинэргические рецепторы, является тримебутин. Молекула тримебутина представляет собой 2-диметиламино-2-фенилбутилэфир 3,4,5-триметоксибензойной кислоты и его соль с малеиновой кислотой (малеат). В основном тримебутин назначают перорально в виде различных твердых лекарственных форм, в том числе в виде таблеток как быстрораспадающихся, так и с замедленным действием. Поскольку тримебутин плохо растворим в воде, для повышения его биодоступности была получена и введена в клиническую практику его растворимая соль-малеат. Тримебутин применяется в форме малеата для лечения пищеварительной дисфункции, такой как боль в животе, диспепсия, тошнота или рвота, синдром раздраженного кишечника, или для лечения функциональных расстройств желудочно-кишечного тракта; и производится и продается в виде таблеток, инъекций, гранул для приготовления суспензии, в форме суппозиториев и суспензии для перорального применения. Областью применения тримебутина, помимо СРК, является терапия различных разновидностей острых и хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. Несмотря на большое разнообразие подобных заболеваний, патогенез большинства из них схож с механизмами развития воспалительного процесса. Применение тримебутина малеата для лечения СРК не изменяет нормальную моторику и активность кишечника, но регулирует аномальную гипо- и гиперактивность, увеличивая количество длинных всплесков у пациентов с запором и уменьшая - у пациентов с преобладанием диареи. Тримебутина малеат ускоряет опорожнение желудка и сокращает лаг-период (т. е. период до начала постоянного опорожнения желудка) [6]. Тримебутина малеат также показан лицам с послеоперационной паралитической непроходимостью кишечника для ускорения возобновления перистальтики после абдоминальной операции [7]. Тримебутина малеат обладает умеренным сродством к опиатным рецепторам, которые действуют на периферические дельта-, мю- и каппа-рецепторы [8]. Также считается, что тримебутина малеат воздействует непосредственно на гладкие мышцы ЖКТ, ингибируя приток Ca²⁺, уменьшает амплитуду внешних K⁺ токов путем ингибирующего действия как на Ca²⁺-независимые, так и на зависимые типы K⁺ каналов [9]. Активность тримебутина малеата, связанная с блокадой натриевых каналов, приводит к ингибированию высвобождения глутамата, и указывает на потенциальный терапевтический эффект этого соединения при купировании болевого синдрома [10].

Из уровня техники известны документы, характеризующие применение тримебутина.

В документе EP1244441 (A1) описывается применение тримебутина (2-диметиламино-2-фенилбутил-3,4,5-триметоксибензоата гидромалеата) для приготовления лекарственного средства для профилактики и/или или лечения соматической боли. Недостатком данного применения является ориентированность на использование тримебутина для купирования болевых состояний, не учитывая случаи терапии развития воспалительного процесса, не сопровождающегося болевым синдромом.

В документе RU2770301 (C2) описывается применение полиморфной формы тримебутина малеата для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, где упомянутая фармацевтическая композиция содержит в терапевтически эффективном количестве полиморфную форму тримебутина малеата. Недостатком является применение, без получения желаемого конечного результата борьбы с развитием сопутствующих воспалительных процессов в ЖКТ.

В документе RU2581920 (C2) описывается фармацевтическая композиция, адаптированная для перорального введения, содержащая тримебутин или его соли. Указанная композиция используется для предотвращения или лечения синдрома раздраженного кишечника, включающего повторяющийся желудочно-кишечный дискомфорт или боль. Недостатком данной композиции является применение тримебутина, как регулятора перистальтики кеишечника безотносительно возможного противовоспалительного эффекта.

В документе WO1995001803 описано применение тримебутина для лечения боли в желудке и патологических симптомов, таких как гастроэзофагеальный рефлюкс, несварение, обусловленное избыточным потреблением пищи, диспепсией и запором, без получения желаемого конечного результата борьбы с воспалительным процессом, развивающимся на фоне данных состояний.

В публикации Трухана Д.И. и соавт. [13] описывается тримебутин малеат, как опиоидным агонистом, который действует на периферические дельта, мю- и каппа-рецепторы, расположенные на гладкомышечных клетках всего желудочно-кишечного тракта, а также описывается применение тримебутина малеата для лечения функциональных гастроинтестинальных расстройств. Недостатком применения является то, что применение тримебутина малеата для профилактики рецидивов или лечения острых и хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта не раскрывается.

Наиболее близкий вариант применения описывается в публикации Langhgari, Naser-Aldin et al. [12], где раскрывается применение опиатов для профилактики рецидивов или лечения острых и хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. При этом применение тримебутина малеата для профилактики рецидивов или лечения острых и хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта не раскрывается.

Задачей предлагаемого изобретения является выявление и использование новых свойств тримебутина малеата при применении в суточной дозировке 600 мг, для лечения острых и хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта за счет достижения максимальных уровней провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb и противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в желудочно-кишечном тракте.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является неожиданно выявленный эффект влияния тримебутина малеата в суточной дозировке 600 мг на достижение максимальных уровней провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb и противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в желудочно-кишечном тракте.

Поставленная задача решается тем, что предложено применение тримебутина матеата в суточной дозе 600 мг для достижения максимального изменения уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb и противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в желудочно-кишечном тракте, отличающееся тем, что уровень провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb снижается, а уровень противовоспалительного цитокина ИЛ-10 повышается.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В процессе исследования влияния тримебутина малеата на про - и противовоспалительную активность в ЖКТ было неожиданно обнаружено, что применение тримебутина малеата сопровождается развитием тканеспецифичного противовоспалительного действия, выраженного в достижении максимального изменения уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb и противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в желудочно-кишечном тракте. При этом данное действие имеет зависимый эффект от дозы тримебутина малеата. При применении тримебутина малеата в суточной дозе 600 мг однократно или двукратно с интервалом 12 часов между приёмами наблюдались наиболее выраженные изменения цитокинового профиля (про-воспалительных и противовоспалительных цитокинов), вероятно связанные с воздействием на регуляторное звено Nf-kb, которые носили статистически значимый характер.

ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Все технические и специальные термины, использованные в описании, имеют общепринятое в данной области техники значение.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано посредством Фиг. 1 и Фиг. 2.

На Фиг.1 изображены основные этапы экспериментального исследования противовоспалительного действия тримебутина малеата на модели синдрома раздраженного кишечника у самцов крыс Wistar.

На Фиг. 2 изображены результаты визуальной регистрации картины некропсии у интактных крыс (группы контроль норма) (2а); крыс группы негативного контроля (группы контроль патология) (2б: цифрой «1» обозначено вздутие, цифрой «2» - истончение слизистой, цифрой «3» - очаговые геморрагии); крыс, получавших тримебутина малеат в дозе 52,3 мг/кг по схеме 1 (2в); крыс, получавших тримебутина малеат в дозе 104,6 мг/кг по схеме 2 (2г); крыс, получавших тримебутина малеат в дозе 209,2 мг/кг по схеме 3 (2д).

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В соответствии с определенными фактами, обнаруженными в настоящем изобретении, представлены следующие варианты осуществления:

В частном случае указанное применение тримебутина малеата используется для лечения синдрома разраженного кишечника.

В отдельных случаях применение тримебутина малеата отличается тем, что тримебутина малеат применяют в составе лекарственного препарата в форме таблетки, гранулы для приготовления готовой суспензии.

Предпочтительно тримебутина малеат вводят пациенту в суточной дозе 600 мг.

Предпочтительно тримебутина малеата вводят пациенту по схеме не менее двух раз в день по 100-300 мг с интервалом 8-12 часов между приемами до достижения суточной дозировки 600 мг.

Тримебутина малеат могут вводить пациенту вне зависимости от возраста.

Было неожиданно обнаружено, что применение тримебутина малеата сопровождается развитием тканеспецифичного противовоспалительного действия. При этом данное действие имеет зависимый эффект от дозы тримебутина малеата. Как будет показано далее, при применении тримебутина малеата в суточной дозе 600 мг однократно или двукратно с интервалом 12 часов между приёмами наблюдались наиболее выраженные изменения цитокинового профиля (про-воспалительных и противовоспалительных цитокинов), которые носили статистически значимый характер.

Далее приводятся примеры осуществления изобретения, которые иллюстрируют изобретение, но не охватывают все возможные варианты его осуществления и не ограничивают изобретение.

ПРИМЕРЫ

Изобретение поясняется следующими иллюстративными примерами, которые не ограничивают заявленный объем охраны.

Пример 1. Влияние тримебутина малеата на тканеспицефическую про-воспалительную активность

Исследование выполняли на 60 крысах-самцах линии Wistar массой 200-220 грамм, возрастом 3 месяца. Животные были получены из питомника лабораторных животных «Рапполово» (Россия, Ленинградская обл.) и на время проведения эксперимента содержались в контролируемых условиях лаборатории живых систем. Условиях содержания: температура окружающего воздуха - 22±2°С, относительная влажность - 60±5%, при 12-ти часовом смене суточного цикла. Крыс размещали по 5 особей в макролоновых клетках на гранулированном подстиле из твердых пород древесины со свободным доступом к воде и корму. Исследование выполнено согласно рекомендациям Directive 2010/63 / EU of the European Parliament and of the council on the protection of animals used for scientific purposes, September 22, 2010 и ARRIVE guidelines [13].

СРК моделировали у крыс путем однократного перорального введения раствора уксусной кислоты (АО «Вектон») в концентрации 0,6 % [14].

При расчете эффективной дозировки тримебутина малеата использовался коэффициент межвидового пересчета доз для крыс. Дозы эквивалентные максимальной суточной, ½ от максимальной суточной дозы и двукратной суточной дозы составили: 104,6 мг/кг; 52,3 мг/кг и 209,2 мг/кг соответственно [15].

Тримебутин малеат вводили согласно следующим схемам:

1. Перорально в дозе 52,3 мг/кг в сутки на протяжение 7 дней после моделирования патологии.

2. Перорально в дозе 104,6 мг/кг в сутки на протяжение 7 дней после моделирования патологии.

3. Перорально в дозе 209,2 мг/кг в сутки на протяжение 7 дней после моделирования патологии.

В ходе исследования были сформированы следующие экспериментальные группы по 12 особей:

1. ИН - интактные животные (крысы без патологии СРК, положительный контроль, (группа 1);

2. НК - негативный контроль (крысы с моделью патологии СРК, но без лечения, (группа 2),

3. группы животных с моделью СРК, получавших тримебутина малеат в различных схемах применения (группы 3,4 и 5).

Крыс декапитировали под хлоралгидратным наркозом (350 мг/кг, внутрибрюшинно), визуально регистрировали картину некропсии и извлекали сегмент толстого кишечника, который гомогенизировали в фосфатно-солевом буфере (в соотношении 1:10), центрифугировали при 10 000g. Полученный супернатант использовали для определения ИЛ-6, ФНО-а, ИЛ-1, Nf-kb методом ИФА.

В каждую лунку микропланшета добавляли анализируемый образец, авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена и инкубировали. После этого добавляли раствор TMB-субстрата: в тех лунках, которые содержат антиген, антитело к нему, конъюгированное с биотином, и авидин, конъюгированный с ферментом, будет наблюдаться изменение цвета. Реакцию фермент-субстрат останавливали добавлением раствора серной кислоты и спектрофотометрически измеряли изменение окраски при длине волны 450 нм на ИФА-ридере «Infinite f 50 Тecan» (Австрия). Концентрация ИЛ-6, ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-10, Nf-kb в образцах определялась путем сравнения показателей оптической плотности образцов с оптической плотностью стандартных образцов. В работе использованы видоспецифичные наборы реактивов, производства Cloud Clone (США).

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программного пакета STATISTICA 6.0. Результаты были выражали в виде M ± SEM (среднее значение ± стандартная ошибка среднего значения). Сравнение средних проводили методом ANOVA с post-hoc тестом Тьюки в случае данных, подчиняющихся закону нормального распределения, и тестом Краскелла-Уоллиса, при распределении данных отличном от нормального. Нормальность распределения проверяли с помощью теста Шапиро-Уилка. Различия между исследуемыми группами считали статистически значимыми при р <0,05.

Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Сравнительная оценка про-воспалительных реакций в разных группах животных

Показатель: ИЛ-6, пг/мл ФНО-а, пг/мл ИЛ-1, пг/мл Nf-kb, пг/мл ИН (контроль норма) 0,86±0,03 0,87±0,029 0,91±0,034 0,72±0,029 НК (контроль патология) 3,7±0,041# 3,3±0,023# 2,6±0,059# 2,4±0,026# Тримебутина малеат, 52,3 мг/кг (схема 1) 2,94±0,029 Δ 2,72±0,033 Δ 1,88±0,033* 1,97±0,024 Тримебутина малеат, 104,6 мг/кг (схема 2) 1,46±0,06* 1,64±0,055* 1,86±0,054* 1,65 ±0,047* Тримебутина малеат, 209,2 мг/кг (схема 3) 2,13±0,033*Δ 2,08±0,021* Δ 1,90±0,055* 1,71±0,033*

Примечание: # - достоверно относительно ИН группы (тест Тьюки, p<0,05); * - достоверно относительно НК группы (тест Тьюки, p<0,05); Δ - достоверно относительно группы животных, получавших тримебутина малеат в дозе 104,6 мг/кг (тест Тьюки, p<0,05).

Согласно полученным данным, у НК группы крыс отмечалась выраженная воспалительная реакция в стенке кишечника, о чем свидетельствовало повышение концентрации провоспалительных цитокинов ИЛ-6, ФНО-α и ИЛ-1, а также Nf-kb в 4,3; 3,8; 2,9 и 3,3 раза относительно аналогичных показателей интактных животных (все показатели p<0,05).

Результаты некропсии животных из группы контроля представлены на фигуре 2 Позициями обозначены: 1- вздутие; 2 - истончение слизистой; 3 - очаговые геморрагии.

Выраженные изменения содержания провоспалительных цитокинов отмечали при введении животным тримебутина малеата в дозе 104,6 мг/кг по схеме 2. Так в сравнении с НК группой крыс было отмечено уменьшение концентрации ИЛ-6 - на 60,5% (p<0,05), ФНО-α - 50,3% (p<0,05) и ИЛ-1 - 28,5% (p<0,05), Nf-kb - 31,3% (p<0,05).

Следует отметить, что концентрация ИЛ-6 и ФНО-α у животных, получавших тримебутина малеат в дозе 104,6 мг/кг по схеме 2, было достоверно меньше (p<0,05), чем у крыс, которым вводили тримебутина малеат в дозах 52,3 и 209,2 мг/кг по схемам 2 и 3. Введение тримебутина малеата в дозе 104,6 мг/кг по схеме 2 не сопровождалось развитием патологических изменений органов ЖКТ (фиг. 2).

В тоже время на фоне введения животным тримебутина малеата в дозе 104,6 мг/кг по схеме 1 наблюдалось снижение (относительно нелеченых крыс) содержания провоспалительных цитокинов ИЛ-6, ФНО-α, ИЛ-1 - на 32,4% (p<0,05); 25,5% (p<0,05), 25,4% (p<0,05) соответственно, и Nf-kb - на 30,4% (p<0,05). По результатам некропсии животных, получавших тримебутина малеат в дозе 104,6 мг/кг по схеме 1, патологических изменений не зафиксировано (фиг. 2).

На основании полученных данных по протоколу исследования, в условиях экспериментального СРК, отмечается, что применение тримебутина малеата сопровождается развитием тканеспецифичного противовоспалительного действия. При этом отмечено, что данное действие имеет зависимый эффект от дозы тримебутина малеата.

Так оптимальной дозой тримебутина малеата можно считать 104,6 мг/кг в сутки на протяжении 7 дней. При применении тримебутина малеата в данной дозе наблюдались наиболее выраженные изменения цитокинового профиля, вероятно связанные с воздействием на регуляторное звено Nf-kb (активируется ИЛ-1, ФНО-a), которые носили статистически значимый характер, как по отношению к нелеченым животным, так и крысам, которые получали тримебутина малеат в других дозах и отличном от данного режима применения.

Пример 2. Влияние тримебутина малеата на стимуляцию противовоспалительной активности

Исследование проводили на 60 крысах-самцах линии Wistar массой 200-220 грамм, возрастом 3 месяца. Животные были получены из питомника лабораторных животных «Рапполово» (Россия, Ленинградская обл.) и на время проведения эксперимента содержались в контролируемых условиях лаборатории живых систем. Условиях содержания: температура окружающего воздуха - 22±2°С, относительная влажность - 60±5%, при 12-ти часовом смене суточного цикла. Крыс размещали по 5 особей в макролоновых клетках на гранулированном подстиле из твердых пород древесины со свободным доступом к воде и корму. Исследование выполнено согласно рекомендациям Directive 2010/63 / EU of the European Parliament and of the council on the protection of animals used for scientific purposes, September 22, 2010 и ARRIVE guidelines [13].

СРК моделировали крыс путем однократного перорального введения раствора уксусной кислоты (АО «Вектон») в концентрации 0,6 % [14].

При расчете эффективной дозировки тримебутина малеата использовался коэффициент межвидового пересчета доз для крыс. Дозы эквивалентные максимальной суточной, ½ от максимальной суточной дозы и двукратной суточной дозы составили: 104,6 мг/кг; 52,3 мг/кг и 209,2 мг/кг соответственно [15].

Тримебутин малеат вводили согласно следующим схемам:

4. Перорально в дозе 52,3 мг/кг в сутки на протяжение 7 дней после моделирования патологии.

5. Перорально в дозе 104,6 мг/кг в сутки на протяжение 7 дней после моделирования патологии.

6. Перорально в дозе 209,2 мг/кг в сутки на протяжение 7 дней после моделирования патологии.

В ходе исследования были сформированы следующие экспериментальные группы по 12 особей:

4. ИН - интактные животные (крысы без патологии СРК, положительный контроль, (группа 1);

5. НК - негативный контроль (крысы с моделью патологии СРК, но без лечения, (группа 2),

6. группы животных с моделью СРК, получавших тримебутина малеат в различных схемах применения (группы 3,4 и 5).

Крыс декапитировали под хлоралгидратным наркозом (350 мг/кг, внутрибрюшинно), визуально регистрировали картину некропсии и извлекали сегмент толстого кишечника, который гомогенизировали в фосфатно-солевом буфере (в соотношении 1:10), центрифугировали при 10 000g. Полученный супернатант использовали для определения ИЛ-10. В каждую лунку микропланшета добавляли анализируемый образец, авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена и инкубировали. После этого добавляли раствор TMB-субстрата: в тех лунках, которые содержат антиген, антитело к нему, конъюгированное с биотином, и авидин, конъюгированный с ферментом, будет наблюдаться изменение цвета. Реакцию фермент-субстрат останавливали добавлением раствора серной кислоты и спектрофотометрически измеряли изменение окраски при длине волны 450 нм на ИФА-ридере «Infinite f 50 Тecan» (Австрия). Концентрация ИЛ-10 в образцах определялась путем сравнения показателей оптической плотности образцов с оптической плотностью стандартных образцов. В работе использованы видоспецифичные наборы реактивов, производства Cloud Clone (США). Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программного пакета STATISTICA 6.0. Результаты выражали в виде M ± SEM (среднее значение ± стандартная ошибка среднего значения). Сравнение средних проводили методом ANOVA с post-hoc тестом Тьюки в случае данных, подчиняющихся закону нормального распределения, и тестом Краскелла-Уоллиса, при распределении данных отличном от нормального. Нормальность распределения проверяли с помощью теста Шапиро-Уилка. Различия между исследуемыми группами считались статистически значимыми при р <0,05.

Полученные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Сравнительная оценка про-воспалительных реакций в разных группах животных

Показатель: ИЛ-10, пг/мл: ИН (контроль норма) 2,02±0,035 НК (контроль патология) 1,1±0,021# Тримебутина малеат, 52,3 мг/кг
(схема 1) 1,33±0,048* Тримебутина малеат, 104,6 мг/кг
(схема 2) 1,72±0,04* Тримебутина малеат, 209,2 мг/кг
(схема 3) 1,57±0,06

Примечание: # - достоверно относительно ИН группы (тест Тьюки, p<0,05); * - достоверно относительно НК группы (тест Тьюки, p<0,05); Δ - достоверно относительно группы животных, получавших тримебутина малеат в дозе 104,6 мг/кг (тест Тьюки, p<0,05).

Согласно полученным данным, у НК группы крыс концентрация ИЛ-10 была на 45,5% (p<0,05) ниже чем у группы интакта (табл.2). Визуально post mortem у крыс с СРК, но без лечения отмечено истончение стенки кишечника, очаговые геморрагии и вздутие (фиг. 2). Результаты некропсии интактных животных представлены на фигуре 2.

В тоже время на фоне введения животным тримебутина малеата в дозе 104,6 мг/кг по схеме 2 наблюдалось повышении концентрации ИЛ-10 (противовоспалительный цитокин) - на 29,1% (p<0,05). По результатам некропсии животных, получавших тримебутина малеат в дозах 52,3 мг/кг и 209,2 мг/кг по схеме 1 и 3, патологических изменений не зафиксировано (фиг. 2).

Наиболее выраженные изменения содержания ИЛ-10 отмечены при введении животным тримебутина малеата в дозе 104,6 мг/кг по схеме 2. Содержание ИЛ-10 у данной группы животных увеличилось на 56,4% (p<0,05).

На основании проведенных экспериментальных исследований отмечается, что у тримебутина малеата присутствует выраженное собственное противовоспалительное фармакодинамическое свойство (проявляемое при суточное дозировке у животных 104,6 мг/кг), выражаемое в активации «противовоспалительного» звена иммунитета, и оцениваемого по соответствующему цитокину - ИЛ-10.

Литература:

1. Saha L. Irritable bowel syndrome: pathogenesis, diagnosis, treatment, and evidence-based medicine. World J Gastroenterol. 2014 Jun 14;20(22):6759-73. doi: 10.3748/wjg.v20.i22.6759. PMID: 24944467; PMCID: PMC4051916.

2. Sebastián Domingo JJ. Irritable bowel syndrome. Med Clin (Barc). 2022 Jan 21;158(2):76-81. English, Spanish. doi: 10.1016/j.medcli.2021.04.029. Epub 2021 Jul 6. PMID: 34238582.

3. Schmulson M, Pulido-London D, Rodriguez O, Morales-Rochlin N, Martinez-García R, Gutierrez-Ruiz MC, et al. Lower serum ИЛ-10 Is an independent predictor of IBS among volunteers in Mexico. Am J Gastroenterol. 2012;107(5):747-753.

4. Öhman L, Isaksson S, Lundgren A, Simrén M, Sjövall H. A controlled study of colonic immune activity and β7+ blood T lymphocytes in patients with irritable bowel syndrome. Clin Gastroenterol Hepatol. 2005;3(10):980-986.

5. Kumar S, Singh P, Kumar A. Targeted therapy of irritable bowel syndrome with anti-inflammatory cytokines. Clin J Gastroenterol. 2022 Feb;15(1):1-10. doi: 10.1007/s12328-021-01555-8. Epub 2021 Dec 4. PMID: 34862947; PMCID: PMC8858303.

6. Frexinos J., Fioramonti J., Bueno L. Effect of trimebutine on colonic myoelectrical activity in IBS patients. Eur. J. Clin. Pharmacol. 1985;28:181-185. doi: 10.1007/BF00609689].

7. Delvaux M., Wingate D. Trimebutine: Mechanism of Action, Effects on Gastrointestinal Function and Clinical Results. J. Int. Med. Res. 1997;25:225-246. doi: 10.1177/030006059702500501.

8. Roman F., Pascaud X., Taylor J.E., Junien J.-L. Interactions of trimebutine with guinea-pig opioid receptors. J. Pharm. Pharmacol. 1987;39:404-407. doi: 10.1111/j.2042-7158.1987.tb03409.x.

9. Tan W., Zhang H., Luo H.-S., Xia H. Effects of trimebutine maleate on colonic motility through Ca2+-activated K+ channels and L-type Ca2+ channels. Arch. Pharmacal Res. 2011;34:979-985. doi: 10.1007/s12272-011-0615-0.

10. Roman F.J., Lanet S., Hamon J., Brunelle G., Maurin A., Champeroux P., Richard S., Alessandri N., Gola M. Pharmacological properties of trimebutine and N-monodesmethyltrimebutine. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999;289:1391-1397.

11. ТРУХАН Д.И. и др. Тримебутин в лечении функциональных гастроинтестинальных расстройств. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2016, № 11(часть 6), с. 1072-1076 [доступен онлайн https://applied-research.ru/ru/article/view?id=10725].

12. LASHGARI, NASER-ALDIN et al. Current overview of opioids in progression of inflammatory bowel disease; pharmacological and clinical considerations. Molecular biology reports, 2021, vol. 48(1), рр.855-874. doi:10.1007/s11033-020-06095-x [доступен онлайн https://link.springer.com/article/10.1007/s11033-020-06095-x].

13. Percie du Sert, N., Hurst, V., Ahluwalia, A., Alam, S., Avey, M. T., Baker, M. Würbel, H. (2020). The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biology, 18(7), e3000410. https:// doi.org/10.1371/journal.pbio.3000410.

14. Lpez-Gómez L, Antn J, López-Tofiño Y, Pomana B, Uranga JA, Abalo R. Effects of Commercial Probiotics on Colonic Sensitivity after Acute Mucosal Irritation. Int J Environ Res Public Health. 2022 May 26;19(11):6485. doi: 10.3390/ijerph19116485. PMID: 35682075; PMCID: PMC9180892.

15. FDA Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers.

Изобретение относится к медицине и фармацевтике, а именно к гастроэнтерологии. Раскрывается применение тримебутина малеата в суточной дозе 600 мг для достижения максимального изменения уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb и противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в желудочно-кишечном тракте. Изобретение может быть использовано для профилактики или лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 2 пр.

1. Применение тримебутина малеата в суточной дозе 600 мг для достижения максимального изменения уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb и противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в желудочно-кишечном тракте.

2. Применение по п. 1, отличающиеся тем, что уровень провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа, Nf-kb снижается, а уровень противовоспалительного цитокина ИЛ-10 повышается.

3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что тримебутина малеата применяют по схеме не менее двух раз в день по 100-300 мг с интервалом 8-12 часов между приемами для достижения суточной дозировки 600 мг.

4. Применение по п. 1, отличающееся тем, что тримебутина малеат применяют в составе лекарственного препарата в форме таблетки, гранулы для приготовления готовой суспензии.