СОЕДИНЕНИЕ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОРАКОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА Российский патент 2024 года по МПК C07D487/04 A61K31/519 A61P35/00 

[0001] Настоящее изобретение испрашивает приоритет заявки на патент Китая 202011483614.1, поданной в Национальное управление интеллектуальной собственности Китая (CNIPA) 16 декабря 2020 года и озаглавленной «Соединение, способ его получения и его применение для получения противоракового лекарственного средства», содержание которой полностью включено в настоящую заявку путем ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

[0002] Настоящее изобретение относится к области техники фармацевтика и, в частности, к производному 2H-пиразоло[3,4-d]пиримидина, способу его получения и его применению для получения противоракового лекарственного средства.

Уровень техники

[0003] Рецепторы фактора роста фибробластов (FGFR) являются членами семейства рецепторных тирозинкиназ (RTK) и представляют собой рецепторные протеинтирозинкиназы (RPTK), в том числе четыре высококонсервативные трансмембранные тирозинкиназы: FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4. Сигнальный путь FGFR заключается в том, что лиганд связывается с рецептором, чтобы вызвать димеризацию FGFR, тем самым вызывая каскадную активацию нижеследующих сигнальных путей, таких как Ras-MAPK, PI3K-Akt, STAT и PLCγ. FGFR играют важную роль в различных клеточных функциях, таких как пролиферация и дифференцировка клеток, а также в биологических процессах, включающих в себя развитие, ангиогенез, гомеостаз и заживление ран. Согласно исследованиям ^(1-3), 7,1% онкологических больных имеют нарушения FGFR. Например, амплификация FGFR1 чаще всего наблюдалась у пациентов с плоскоклеточным немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) с долей 20%, она наблюдалась у 10% пациентов с раком молочной железы, у 5% пациентов с раком яичников и у 3% пациентов с раком мочевого пузыря. В настоящее время мутации FGFR2 обнаружены при раке желудка (10%), раке эндометрия (12%), плоскоклеточном НМРЛ (5%) и трижды негативном раке молочной железы (ТНРМЖ) (4%); и мутации FGFR3 хорошо известны при раке мочевого пузыря (от 50% до 60%) и миеломе (от 15% до 20%). Нарушение передачи сигналов FGF19/FGFR4 тесно связано с гепатоцеллюлярной карциномой (ГЦК). Следовательно, разработка нового селективного ингибитора FGFR для блокирования сигнального пути FGF/FGFR представляет собой многообещающую терапевтическую стратегию для лечения рака, связанного с FGFR^(4-5).

[0004] Исследователи стремятся разработать ингибитор FGFR в качестве нового противоракового средства для лечения рака, связанного с FGFR. Несколько многоцелевых ингибиторов тирозинкиназы (TKI) изначально применялись для лечения рака, связанного с аномалиями FGFR⁽⁶⁾, это такие препараты как довитиниб (TKI-258), люцитаниб (E-3810)⁽⁷⁾, нинтеданиб (BIBF-1120)⁽⁸⁾ и понатиниб (AP-24534)⁽⁹⁾. Эти ингибиторы FGFR, разработанные ранее, являются неселективными⁽¹⁰⁾. Впоследствии было разработано несколько TKI, селективных в отношении FGFR, с различными каркасами. Некоторые TKI в настоящее время находятся на разных стадиях клинических исследований, например, AZD-4547 (фаза III)⁽¹¹⁾, BGJ-398 (фаза II)⁽¹²⁾, LY-2874455 (фаза II)⁽¹³⁾ и JNJ-42756493. (фаза II)⁽¹⁴⁾, и эти селективные ингибиторы FGFR являются АТФ-конкурентными ингибиторами, которые связываются с активной формой FGFR. Кроме того, сообщалось об ингибиторах FGFR, разработанных многими фармацевтическими химическими лабораториями^(15-21).

Сущность изобретения

[0005] Технические проблемы/задачи, решаемые настоящим изобретением, включают в себя, по меньшей мере, преодоление недостатков известного уровня техники и создание производного 2H-пиразоло[3,4-d]пиримидина, разработку способа его получения, и его применение для получения противоракового лекарственного средства.

[0006] Для решения вышеуказанных задач настоящее изобретение раскрывает следующие технические решения:

[0007] Настоящее изобретение относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли:

[0008] формула I,

[0009] где Ar представляет собой любой элемент, выбранный из группы, состоящей из замещенного арила и замещенной гетероциклической группы;

[0010] R представляет собой любую структуру, выбранную из группы, состоящей из H, алкила, арила, -CF₃ и алкил-трет-амина; и

[0011] Линкер представляет собой любой линкер, выбранный из группы, состоящей из алкила, алкоксила, гетероатомного заместителя и замещенного N-гетероциклического кольца.

[0012] Предпочтительно Ar представляет собой [0013] Предпочтительно R представляет собой H, CF₃, (CH₃)₂NCH₂ или CH₃.

[0014] Предпочтительно линкер представляет собой или

[0015] Предпочтительно, соединение выбрано из группы, состоящей из соединения 1 - соединения 40:

соединение 1, соединение 2, соединение 3, соединение 4, соединение 5, соединение 6, соединение 7, соединение 8, соединение 9, соединение 10, соединение 11, соединение 12, соединение 13, соединение 14, соединение 15, соединение 16, соединение 17, соединение 18, соединение 19, соединение 20, соединение 21, соединение 22, соединение 23, соединение 24, соединение 25, соединение 26, соединение 27, соединение 28, соединение 29, соединение 30, соединение 31, соединение 32, соединение 33, соединение 34, соединение 35, соединение 36,

соединение 37, соединение 38, соединение 39 и соединение 40.

[0016] Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с указанным выше техническим решением со следующим способом синтеза:

[0017]

[0018] Предпочтительно способ получения может включать в себя следующие этапы:

[0019] подвергание соединения со структурой, показанной в формуле а, и соединения со структурой, показанной в формуле b, реакции Мицунобу при комнатной температуре в течение 4 часов с получением соединения со структурой, показанной в формуле с;

[0020] подвергание соединения со структурой, показанной в формуле c, и соединения со структурой, показанной в формуле d, реакции сочетания Сузуки при температуре 80°C с получением соединения со структурой, показанной в формуле e;

[0021] подвергание соединения со структурой, показанной в формуле e, и трифторуксусной кислоты (TFA) реакции снятия защиты при температуре 0°C с получением соединения со структурой, показанной в формуле f; и

[0022] подвергание соединения со структурой, показанной в формуле f, реакции ацилирования при комнатной температуре с получением соединения со структурой, показанной в формуле I.

[0023] формула a, формула b, формула c, Ar-B(OH)₂ формула d, формула e и формула f.

[0024] Настоящее изобретение также относится к применению соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с вышеуказанным техническим решением для получения ингибитора пролиферации опухолевых клеток, где опухолевая клетка представляет собой опухолевую клетку, ассоциированную с аномалией FGFR.

[0025] Предпочтительно опухолевая клетка включает в себя NCI-H1581 или SNU-16.

[0026] Настоящее изобретение также относится к применению соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с вышеуказанным техническим решением для блокирования сигнального пути фактора роста фибробластов (FGF)/FGFR в опухолевой клетке, где опухолевая клетка представляет собой опухолевую клетку, ассоциированную с аномалией FGFR.

[0027] Предпочтительно опухолевая клетка включает в себя NCI-H1581 или SNU-16.

[0028] Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с вышеуказанным техническим решением, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ; и

[0029] лекарственная форма фармацевтической композиции представляет собой любую фармацевтически приемлемую лекарственную форму.

[0030] Настоящее изобретение также относится к применению соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с вышеуказанным техническим решением или фармацевтической композиции в соответствии с вышеуказанным техническим решением для получения лекарственного средства для лечения и/или предотвращения рака.

[0031] Предпочтительно рак представляет собой рак, связанный с аномалией FGFR.

[0032] Настоящее изобретение также относится к применению фармацевтической композиции в соответствии с вышеуказанным техническим решением для получения необратимого ингибитора пан-FGFR.

[0033] Настоящее изобретение также относится к способу лечения рака, включающему в себя следующий этап:

[0034] введение противоракового лекарственного средства пациенту посредством перорального введения или внутрибрюшинной инъекции,

[0035] где противораковое лекарственное средство включает в себя соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с вышеуказанным техническим решением.

[0036] Предпочтительно противораковое лекарственное средство включает в себя соединение 10 или соединение 36.

[0037] Предпочтительно противораковое лекарство вводят в дозе 50 мг/кг или 100 мг/кг; и

[0038] доза рассчитывается в соответствии с дозировкой соединения 10 или соединения 36.

[0039] Предпочтительно, когда противораковое лекарственное средство включает в себя соединение 10, противораковое лекарственное средство вводят перорально.

[0040] Предпочтительно, когда противораковое лекарственное средство включает в себя соединение 36, противораковое лекарственное средство вводят посредством внутрибрюшинной инъекции.

[0041] В настоящем изобретении термин «фармацевтически приемлемый адъювант» включает в себя фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества, разбавители и тому подобное, совместимые с активными фармацевтическими ингредиентами. Получение фармацевтической композиции с фармацевтически приемлемым адъювантом хорошо известно специалистам в данной области техники.

[0042] В настоящем изобретении фармацевтическая композиция может быть объединена с фармацевтически приемлемым адъювантом (таким как носитель, вспомогательное вещество, разбавитель и тому подобное, хорошо известными специалистам в данной области техники) для приготовления различных составов, предпочтительно включая твердые составы и жидкие препараты, такие как таблетки, пилюли, капсулы, порошки, суспензии, гранулы, сиропы, эмульсии, суспензии и различные лекарственные формы с замедленным высвобождением, которые предпочтительно можно вводить перорально.

Краткое описание чертежей

[0043] На Фигуре 1 показано, что соединение 10 ингибирует активацию FGFR1 и его нижележащий сигнальный путь в клетках NCI-H1581 и ингибирует активацию FGFR2 и его нижележащий сигнальный путь в клетках SNU-16 в зависимости от градиента концентрации, где A показывает ингибирование активации FGFR1 и его нижележащего сигнального пути в клетках NCI-H1581, а B показывает ингибирование активации FGFR2 и его нижестоящего сигнального пути в клетках SNU-16;

[0044] На Фигуре 2 показано, что соединение 36 ингибирует активацию FGFR1 и его нижележащий сигнальный путь в клетках NCI-H1581 и ингибирует активацию FGFR2 и его нижележащий сигнальный путь в клетках SNU-16 в зависимости от градиента концентрации, где A показывает ингибирование активации FGFR1 и его нижележащего сигнального пути в клетках NCI-H1581, а B показывает ингибирование активации FGFR2 и его нижележащего сигнального пути в клетках SNU-16;

[0045] На Фигуре 3 показаны кривые объема опухоли (A), статистическая диаграмма массы опухоли через 26 дней лечения (B), кривые изменения массы тела в процессе лечения (C) и фотография опухолей через 26 дней лечения (D) в модели опухоли с подкожно трансплантированными опухолевыми клетками NCI-H1581 при ингибировании пролиферации опухоли соединением 10; и

[0046] На Фигуре 4 показаны кривые изменения объема опухоли (A), статистическая диаграмма массы опухоли через 26 дней лечения (B), кривые изменения массы тела в процессе лечения (C), фотография опухолей через 26 дней лечения (D) и уровни фосфорилирования FGFR1 в тканях при различных вариантах лечения, обнаруженные с помощью иммуногистохимии (ИГХ) (E) в модели опухоли с подкожно трансплантированными опухолевыми клетками NCI-H1581 при ингибировании пролиферации опухоли соединением 36.

Подробное описание вариантов осуществления изобретения

[0047] Если не указано иное, то технические термины, используемые в следующих примерах, имеют те же значения, которые обычно понимаются специалистами в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Если не указано иное, то в следующих примерах все используемые тестовые реагенты представляют собой обычные биохимические реагенты, а все тестовые способы представляют собой обычные способы.

[0048] Настоящее изобретение будет подробно описано ниже со ссылкой на примеры.

[0049] Пример 1: Получение соединения 1

соединение 1

[0050]

[0051] Конкретный способ получения был следующим:

[0052] 1) Получение соединения (1-1)

соединение (1-1)

[0053]

[0054] 3-Бром-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин (500 мг, 2,34 ммоль) растворяли в сухом тетрагидрофуране (ТГФ) (23 мл) и затем добавляли в трифенилфосфин (ТФФ) (2,08 г, 7,94 ммоль) и 1-Boc-3-азетидинметанол; диизопропилазодиформиат (DIAD) (1,60 г, 7,94 ммоль) добавляли по каплям при температуре 0°С под защитой аргона, затем температуру медленно повышали до комнатной и оставляли реакцию еще на 4 часа; и реакционный раствор сушили центрифугированием и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 5:1 до 2:1) с получением соединения 1-1 (желтая маслянистая жидкость, 685 мг, 69%).

[0055] Результаты анализа соединения 1-1 методом ядерного магнитного резонанса (ЯМР) были следующими:

[0056] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,06 (s, 1H), 7,96-7,87 (m, 6H), 7,64 - 7,45 (m, 9H), 4,48 (d, J=7,3 Гц, 2H), 3,97 (t, J=8,5 Гц, 2H), 3,88-3,74 (m, 2H), 3,19-2,98 (m, 1H), 1,41 (s, 9H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 163,1, 163,0, 156,2, 155,9, 154,6, 154,5, 133,4, 133,4, 133,3, 133,3, 132,4, 132,3, 132,2, 128,8, 128,7, 128,7, 128,6, 128,6, 128,5, 128,4, 127,8, 127,4, 120,9, 107,1, 79,3, 52,9, 51,5, 49,7, 28,8, 28,4, 21,7, 14,2. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₃₂H₃₂BrN₆NaO₂P⁺: 665,1400, обнаружено 665,1402.

[0057] 2) Получение соединения (1-2)

соединение (1-2)

[0058]

[0059] Соединение 1-1 (5,01 мг, 6,74 ммоль) и 3,5-диметоксифенилбороновую кислоту (1,59 г, 8,76 ммоль) растворяли в смешанном растворе 1,4-диоксана и воды (9 мл, об.:об. = 3:1), а затем добавляли карбонат калия (1,87 г, 13,5 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (778 мг, 0,674 ммоль); полученную систему трижды заменяли аргоном, а затем нагревали до температуры 80°С на масляной бане для проведения реакции в течение ночи; и после завершения реакции полученную реакционную систему промывали насыщенным раствором хлорида натрия (270 мл), затем экстрагировали этилацетатом (90 мл), полученную органическую фазу сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (дихлорметан (ДХМ): метанол = от 70:1 до 30:1) с получением соединения 1-2 (желтая маслянистая жидкость, 4,3 г, 60%).

[0060] Результаты ЯМР-анализа соединения 1-2 были следующими:

[0061] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,06 (d, J=3,2 Гц, 1H), 7,89-7,71 (m, 6H), 7,56-7,40 (m, 11H), 6,70-6,41 (m, 1H), 4,58 (dd, J=7,3, 3,2 Гц, 2H), 4,11-3,96 (m, 2H), 3,92-3,84 (m, 2H), 3,76 (d, J=3,1 Гц, 6H), 3,26 - 3,07 (m, 1H), 1,41 (d, J=3,1 Гц, 9H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 163,9, 163,9, 163,5, 163,4, 160,3, 156,3, 156,3, 155,2, 154,7, 146,1, 135,6, 134,2, 133,5, 133,4, 133,4, 133,3, 132,3, 132,2, 132,0, 132,0, 132,0, 1292, 128,6, 128,6, 128,5, 128,5, 128,4, 128,4, 128,2, 128,2, 127,8, 107,9, 100,6, 79,3, 77,4, 55,3, 49,5, 28,9, 28,4, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₄₀H₄₁N₆NaO₄P⁺: 723,2819, обнаружено 723,2822.

[0062] 3) Получение соединения (1-3)

соединение (1-3)

[0063]

[0064] При температуре 0°С соединение 1-2 (450 мг, 0,587 ммоль) растворяли в ДХМ (5 мл), затем медленно по каплям добавляли TFA (5 мл), через 30 мин реакция завершалась; корректировку щелочности полученного реакционного раствора проводили с помощью насыщенного NaHCO₃, и полученную органическую фазу концентрировали сушкой с получением коричнево-желтого маслянистого промежуточного продукта. При температуре 0°С этот промежуточный продукт растворяли в 5 мл ДХМ, затем добавляли триэтиламин (ТЭА) (98,2 мкл, 0,704 ммоль) и затем по каплям добавляли акрилоилхлорид (52,2 мкл, 0,646 ммоль); и далее реакцию оставляли на 1 ч при комнатной температуре; и когда с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) определяли завершение реакции, полученную реакционную систему промывали насыщенным раствором NaCl и затем подвергали экстракции этилацетатом, а полученную органическую фазу сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (ДХМ : метанол = от 30:1 до 10:1) с получением соединения 1-3 (желтая маслянистая жидкость, 78 мг, 72%).

[0065] 4) Получение соединения 1-3: Соединение 1-3 (100 мг, 0,189 ммоль) добавляли к смешанному раствору уксусной кислоты, ТГФ и воды (3 мл, 3:1:2) и реакцию проводили при комнатной температуре в течение 18 часов; и когда с помощью ТСХ определяли завершение реакции, значение рН полученного реакционного раствора доводили до 7-8 с помощью насыщенного раствора NaHCO₃ (15 мл), проводили экстракцию этилацетатом (10 мл × 2) и полученную органическую фазу сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (ДХМ : метанол = от 15:1 до 7:1) с получением соединения 1-3 (желтое твердое вещество, 57,8 мг, 70%).

[0066] Результаты ЯМР-анализа соединения 1 были следующими:

[0067] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 6,80 (d, J = 2,3 Гц, 2H), 6,57 (t, J=2,3 Гц, 1H), 6,33 (dd, J=17,0, 1,9 Гц, 1H), 6,17 (dd, J=17,0, 10,3 Гц, 1H), 5,76-5,57 (m, 3H), 4,76-4,61 (m, 2H), 4,38-4,14 (m, 3H), 4,02 (dd, J=10,5, 5,5 Гц, 1H), 3,87 (s, 6H), 3,49-3,25 (m, 1H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,7, 161,6, 157,8, 156,2, 154,7, 144,7, 134,8, 127,4, 127,2, 125,7, 106,3, 101,2, 98,4, 55,6, 53,5, 50,8, 49,4, 32,7, 29,1, 27,9. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₀H₂₂N₆NaO₃⁺: 417,1646, обнаружено 417,1648.

[0068] Пример 2: Получение соединения 2

соединение 2

[0069]

[0070] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-3-гидроксиметилпирролидина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 2 были следующими:

[0071] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 6,81 (d, J = 2,2 Гц, 2H), 6,62-6,54 (m, 2H), 6,25 (dd, J=16,9, 2,0 Гц, 1H), 5,76 (s, 2H), 5,66 (dd, J=10,6, 2,0 Гц, 1H), 4,65 (d, J=13,3 Гц, 1H), 4,49 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,99 (d, J=13,7 Гц, 1H), 3,86 (s, 6H), 3,00 (t, J=12,6 Гц, 1H), 2,64-2,52 (m, 1H), 1,97-1,94 (m, 1H), 1,91 (s, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 164,5, 161,5, 158,0, 156,0, 154,6, 144,6, 134,9, 128,5, 127,5, 106,4, 101,3, 98,3, 55,6, 50,0, 49,1, 45,7, 45,2, 39,9, 37,74 29,6, 27,9. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₁H₂₄N₆NaO₃⁺: 431,1802, обнаружено 431,1804.

[0072] Пример 3: Получение соединения 3

соединение 3

[0072]

[0074] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество N-Boc-4-гидроксипиперидина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 3 были следующими:

[0075] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 6,80 (d, J=2,2 Гц, 2H), 6,67-6,51 (m, 2H), 6,31 (dd, J=16,8, 1,8 Гц, 1H), 5,84-5,63 (m, 3H), 5,05 (tt, J=11,3, 4,2 Гц, 1H), 4,85 (d, J=13,4 Гц, 1H), 4,20 (d, J=13,9 Гц, 1H), 3,86 (s, 6H), 3,33 (t, J=12,7 Гц, 1H), 3,02 - 2,85 (m, 1H), 2,34 (t, J=11,8 Гц, 2H), 2,11 (d, J=13,0 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (101 МГц, CDCl₃) δ 161,5, 157,8, 155,8, 154,7, 154,3, 144,1, 135,1, 132,1, 131,6, 106,3, 101,1, 100,0, 98,3, 79,6, 55,7, 55,6, 52,9, 45,5, 29,7, 28,4, 26,8. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₁H₂₄N₆NaO₃⁺: 431,1802, обнаружено 431,1805.

[0076] Пример 4: Получение соединения 4

соединение 4

[0077]

[0078] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество N-Boc-4-пиперидинметанола вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединение (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 4 были следующими:

[0079] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,34 (s, 1H), 6,80 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,57-6,49 (m, 2H), 6,23 (d, J=16,8 Гц, 1H), 5,89 (s, 2H), 5,64 (d, J=10,6 Гц, 1H), 4,65 (d, J=13,3 Гц, 1H), 4,33 (d, J=7,1 Гц, 2H), 3,97 (d, J=13,8 Гц, 1H), 3,85 (s, 6H), 3,00 (t, J=12,9 Гц, 1H), 2,62 (t, J=12,9 Гц, 1H), 2,33 (d, J=11,0 Гц, 1H), 1,66 (d, J=16,3 Гц, 3H), 1,33 (td, J=14,3, 7,5 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,4, 161,5, 161,5, 157,9, 156,0, 154,7, 144,3, 134,9, 127,9, 127,9, 127,4, 106,4, 101,1, 99,9, 98,2, 55,6, 51,9, 45,6, 41,8, 36,8, 30,5, 29,4. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₂H₂₆N₆NaO₃⁺: 445,1959, обнаружено 445,1961.

[0080] Пример 5: Получение соединения 5

соединение 5

[0081]

[0082] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество N-Boc-4-пиперидинэтанола вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 5 были следующими:

[0083] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (d, J=1,1 Гц, 1H), 6,81 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,57 (d, J=2,4 Гц, 1H), 6,44-6,36 (m, 2H), 5,68 (dd, J=9,6, 2,7 Гц, 1H), 4,50 (dd, J=12,8, 6,9 Гц, 2H), 3,87 (s, 7H), 3,80-3,72 (m, 2H), 3,72-3,65 (m, 1H), 3,57-3,47 (m, 2H), 3,01 (d, J=7,3 Гц, 1H), 1,65 (m, 4H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 166,3, 162,5, 158,7, 156,8, 155,2, 145,2, 136,0, 128,9, 128,4, 107,4, 102,1, 99,3, 56,6, 47,3, 45,6, 43,2, 36,9, 34,6, 33,5, 32,9, 32,6, 30,7, 30,4. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₃H₂₈N₆NaO₃⁺: 459,2115, обнаружено 459,2115.

[0084] Пример 6: Получение соединения 6

соединение 6

[0085]

[0086] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-3-гидроксиметилпиперидина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 6 были следующими:

[0087] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,39-8,33 (m, 1H), 6,93-6,75 (m, 2H), 6,63-6,46 (m, 2H), 6,21 (dd, J=16,9, 8,7 Гц, 1H), 5,99 (s, 2H), 5,61 (dd, J=32,0, 10,5 Гц, 1H), 4,53-4,27 (m, 3H), 3,86 (s, 6H), 3,07 (dt, J=23,7, 12,4 Гц, 1H), 2,81 (dt, J = 44,0, 12,0 Гц, 1H), 2,35 (s, 1H), 1,93 (s, 1H), 1,58 - 1,29 (m, 2H), 1,26 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,5, 161,6, 157,9, 155,9, 154,7, 127,8, 127,4, 106,3, 101,3, 98,2, 55,6, 49,8, 49,7, 49,5, 46,5, 45,8, 42,7, 37,4, 36,4, 28,7, 25,2, 24,1. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₂H₂₆N₆NaO₃⁺: 445,1959, обнаружено 445,1961.

[0088] Пример 7: Получение соединения 7

соединение 7

[0089]

[0090] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество трет-бутил 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-карбоксилата вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 7 были следующими:

[0091] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,36 (s, 1H), 6,80 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,60-6,47 (m, 2H), 6,26 (dd, J=16,8, 1,9 Гц, 1H), 5,67 (dd, J=10,5, 1,9 Гц, 1H), 4,57 (t, J = 6,7 Гц, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,62 (s, 2H), 3,49 (s, 2H), 2,96 (t, J=6,7 Гц, 2H), 2,56 (t, J=5,0 Гц, 4H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 161,5, 157,4, 155,1, 154,5, 144,6, 134,8, 127,9, 127,4, 106,3, 101,2, 98,2, 95,6, 56,7, 55,6, 52,6, 50,9, 45,6, 44,4, 41,8, 31,9, 29,1. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₂H₂₇N₇NaO₃⁺: 460,2068, обнаружено 460,2072.

[0092] Пример 8: Получение соединения 8

соединение 8

[0093]

[0094] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-4-(3-гидроксипропан)пиперазина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 8 были следующими:

[0095] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,36 (s, 1H), 6,81 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,58-6,50 (m, 2H), 5,88 (s, 2H), 5,69 (dd, J=10,5, 1,9 Гц, 1H), 4,52 (t, J=6,9 Гц, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,69 (d, J=6,9 Гц, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,51 (dt, J=10,8, 6,0 Гц, 6H), 2,21 (p, J=7,0 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 160,3, 154,4, 133,4, 133,3, 132,2, 132,1, 132,0, 129,0, 128,6, 128,6, 128,4, 128,1, 127,3, 127,3, 107,9, 100,5, 55,4, 55,3, 53,1, 52,5, 45,2, 26,4. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₃H₂₉N₇NaO₃⁺: 474,2224, обнаружено 474,2226.

[0096] Пример 9: Получение соединения 9

соединение 9

[0097]

[0098] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-4-(4-гидроксибутан)пиперазина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 9 были следующими:

[0099] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,40-8,36 (m, 1H), 6,81 (dd, J=3,2, 2,0 Гц, 2H), 6,54 (ddd, J=17,4, 8,7, 4,1 Гц, 2H), 6,28 (dt, J=16,9, 2,5 Гц, 1H), 5,72 - 5,66 (m, 1H), 5,61 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 3,89 - 3,82 (m, 6H), 3,67 (s, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,41 (s, 6H), 2,01 (s, 2H), 1,56 (s, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, MeOD) δ 169,4, 166,0, 152,2, 151,70, 147,6, 145,9, 132,7, 128,5, 126,6, 106,2, 106,1, 101,5, 101,4, 96,5, 56,6, 54,7, 53,5, 51,1, 40,5, 39,1, 38,5, 35,2, 28,3, 22,7. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₃₁N₇NaO₃⁺: 488,2381, обнаружено 488,2383.

[0100] Пример 10: Получение соединения 10

соединение 10

[0101]

[0102] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-4-(5-гидроксипентан)пиперазина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 10 были следующими:

[0103] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 6,82-6,80 (m, 2H), 6,58-6,55 (m, 1H), 6,53 (d, J=10,4 Гц, 1H), 6,27 (d, J=16,7 Гц, 1H), 5,68 (d, J=10,6 Гц, 1H), 5,61 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,67 (s, 2H), 3,53 (s, 2H), 2,42-2,38 (m, 4H), 2,34-2,30 (m, 2H), 2,02-1,96 (m, 2H), 1,54 (d, J=7,4 Гц, 2H), 1,39 (d, J=6,9 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 161,6, 157,7, 155,9, 154,3, 144,0, 135,1, 127,7, 127,5, 106,4, 101,1, 100,0, 98,3, 58,2, 55,6, 53,4, 52,7, 47,1, 45,7, 41,8, 40,5, 29,6, 29,3, 26,2, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₃₃N₇NaO₃⁺: 502,2537, обнаружено 502,2539.

[0104] Пример 11: Получение соединения 11

соединение 11

[0105]

[0106] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-4-(6-гидроксигексан)пиперазина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 11 были следующими:

[0107] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,34 (d, J=1,3 Гц, 1H), 6,81 (dd, J=2,3, 1,3 Гц, 2H), 6,61-6,52 (m, 2H), 6,29 (dt, J=16,9, 1,6 Гц, 1H), 6,00 (s, 2H), 5,69 (dt, J=10,5, 1,6 Гц, 1H), 4,43 (t, J=7,3 Гц, 2H), 3,86 (d, J=1,3 Гц, 6H), 3,69 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,56 (t, J=4,9 Гц, 2H), 2,42 (t, J=5,0 Гц, 4H), 2,33 (t, J=7,6 Гц, 2H), 1,97 (t, J=7,2 Гц, 2H), 1,54-1,45 (m, 2H), 1,38 (t, J=4,3 Гц, 4H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 161,5, 157,8, 155,3, 154,1, 144,2, 135,0, 135,0, 127,9, 127,5, 127,5, 106,4, 106,4, 101,1, 98,2, 58,3, 55,6, 53,4, 52,7, 47,2, 45,7, 41,8, 29,7, 27,0, 26,6, 26,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₃₅N₇NaO₃⁺: 516,2694, обнаружено 516,2696.

[0108] Пример 12: Получение соединения 12

соединение 12

[0109]

[0110] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 1-Boc-4-(7-гидроксигептан)пиперазина вместо 1-Boc-3-азетидинметанола в способе получения соединения (1-1). Результаты ЯМР-анализа соединения 12 были следующими:

[0111] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (d, J=2,8 Гц, 1H), 6,82 (t, J=2,5 Гц, 2H), 6,62-6,50 (m, 2H), 6,33-6,23 (m, 1H), 5,77-5,56 (m, 3H), 4,42 (s, 2H), 3,86 (d, J=2,8 Гц, 6H), 3,70 (s, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,50-2,37 (m, 4H), 2,33 (s, 2H), 1,96 (s, 2H), 1,47 (s, 2H), 1,33 (d, J=27,0 Гц, 6H). ¹³C ЯМР (101 МГц, CDCl₃) δ 165,6, 161,8, 158,1, 156,1, 154,5, 144,3 135,5, 135,5, 128,1, 127,8, 106,7, 101,4, 101,4, 98,6, 58,7, 55,9, 53,7, 53,1, 47,5, 46,0, 42,2, 30,0, 29,9, 29,3, 27,6, 26,9, 26,8. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₇H₃₇N₇NaO₃⁺: 530,2850, обнаружено 530,2852.

[0112] Пример 13: Получение соединения 13

соединение 13

[0113]

[0114] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3,4-метиленфенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 13 были следующими:

[0115] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,36 (s, 1H), 7,16 (d, J=2,7 Гц, 1H), 6,97 (d, J=7,9 Гц, 1H), 6,62-6,49 (m, 1H), 6,28 (dd, J=16,9, 2,0 Гц, 1H), 6,06 (s, 2H), 5,86-5,65 (m, 3H), 4,42 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,70 (d, J=7,5 Гц, 2H), 3,55 (t, J=5,1 Гц, 2H), 2,43 (t, J=4,9 Гц, 4H), 2,35 (t, J=7,6 Гц, 2H), 1,99 (td, J=16,9, 15,0, 9,4 Гц, 2H), 1,79-1,14 (m, 6H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,2, 157,8, 155,7, 154,2, 148,6, 148,5, 143,8, 127,4, 127,1, 122,1, 109,0, 108,9, 101,6, 101,5, 98,2, 58,1, 53,3, 52,7, 46,9, 45,6, 41,7, 29,5, 26,1, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₂₉N₇NaO₃⁺: 4860,2224, обнаружено 4860,2226.

[0116] Пример 14: Получение соединения 14

соединение 14

[0117]

[0118] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество бензофуран-2-бороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 14 были следующими:

[0119] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,39 (s, 1H), 7,68 (dd, J=7,3, 1,5 Гц, 1H), 7,59-7,55 (m, 1H), 7,40-7,32 (m, 3H), 6,53 (dd, J=16,8, 10,6 Гц, 1H), 6,28 (dd, J=16,9, 1,9 Гц, 1H), 5,68 (dd, J=10,6, 2,0 Гц, 1H), 4,46 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,69 (s, 2H), 3,55 (s, 2H), 2,44 (s, 4H), 2,36 (t, J=7,6 Гц, 2H), 2,01 (p, J=7,4 Гц, 2H), 1,57 (q, J=7,6 Гц, 2H), 1,44-1,36 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 163,8, 157,6, 156,0 154,4, 149,5, 134,7, 128,3, 127,8, 127,4, 125,1, 124,0, 121,7, 111,0, 104,3, 97,9, 58,1, 53,3, 52,7, 47,3, 45,6, 41,7, 29,5, 26,1, 24,4. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₂₉N₇NaO₂⁺: 482,2269, обнаружено 482,2271.

[0120] Пример 15: Получение соединения 15

соединение 15

[0121]

[0122] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество п-метоксибороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 15 были следующими:

[0123] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 8,24 (s, 1H), 7,61 (d, J = 8,6 Гц, 2H), 7,18-7,06 (m, 2H), 6,82-6,64 (m, 1H), 6,19 (dd, J=16,7, 2,0 Гц, 1H), 5,74 (dd, J=10,6, 1,9 Гц, 1H), 4,41 (t, J=6,8 Гц, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,62 (s, 4H), 2,48 (s, 4H), 2,39 (s, 2H), 1,96 (q, J=7,3 Гц, 2H), 1,60-1,52 (m, 2H), 1,35 (q, J=7,9 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 157,7, 155,9, 155,9, 154,4, 143,6, 140,4, 133,9, 132,5, 129,6, 127,8, 126,7, 125,9, 124,7, 64,1, 58,2, 53,4, 52,7, 48,6, 47,1, 29,5, 26,0, 24,5, 15,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₃₁N₇NaO₂⁺: 472,2426, обнаружено 472,2428.

[0124] Пример 16: Получение соединения 16

соединение 16

[0125]

[0126] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 4-ацетиламинофенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 16 были следующими:

[0127] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,24 (d, J=1,3 Гц, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,54-7,43 (m, 3H), 6,72 (dd, J=16,9, 10,7 Гц, 1H), 6,18 (dt, J=16,8, 1,7 Гц, 1H), 5,73 (dt, J=10,6, 1,7 Гц, 1H), 4,43 (t, J=6,7 Гц, 2H), 3,60 (q, J=6,7, 4,6 Гц, 4H), 2,46 (d, J=5,2 Гц, 4H), 2,37 (t, J=7,6 Гц, 2H), 2,16 (d, J=1,4 Гц, 3H), 1,97 (t, J=7,4 Гц, 2H), 1,57 (dd, J=11,0, 4,7 Гц, 2H), 1,34 (p, J=7,6 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, MeOD) δ 170,6, 165,9, 158,4, 155,4, 153,8, 144,4, 139,14, 133,2, 129,6, 127,3, 127,3, 123,7, 120,4, 120,1, 100,0, 97,6, 57,6, 52,8, 52,3, 45,0, 41,3, 28,9, 25,3, 23,9, 22,4. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₃₂N₈NaO₂⁺: 472,2426, обнаружено 472,2428.

[0128] Пример 17: Получение соединения 17

соединение 17

[0129]

[0130] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что эквимолярное количество 4-трифторметоксифенилбороновой кислоты использовали вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 17 были следующими:

[0131] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,27 (s, 1H), 7,70 (t, J=7,6 Гц, 1H), 7,63 (d, J=10,6 Гц, 1H), 7,49-7,42 (m, 1H), 7,35 (dd, J=7,8, 5,3 Гц, 1H), 6,73 (dd, J=16,8, 10,7 Гц, 1H), 6,18 (dd, J=16,8, 1,9 Гц, 1H), 5,73 (dd, J=10,7, 2,0 Гц, 1H), 4,44 (t, J=6,8 Гц, 2H), 3,61 (d, J=5,4 Гц, 4H), 2,50-2,37 (m, 4H), 2,35 (d, J=7,7 Гц, 2H), 1,99 (q, J=7,1 Гц, 2H), 1,59-1,55 (m, 2H), 1,35 (s, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 166,2, 158,5, 156,8, 155,4, 150,6, 143,3, 136,3, 131,8, 128,6, 128,4, 127,6, 122,3, 121,9, 120,1, 99,2, 59,1, 54,3, 53,6, 48,1, 46,6, 42,8, 30,4, 27,1, 25,4. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₂₈F₃N₇NaO₂⁺: 526,2143, обнаружено 526,2145.

[0132] Пример 18: Получение соединения 18

соединение 18

[0133]

[0134] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 2-нафталинбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 18 были следующими:

[0135] ¹H ЯМР (400 МГЦ, CDCl₃) δ 8,41 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,03 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,93 (dd, J=9,3, 3,6 Гц, 2H), 7,82 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,58 (dd, J=6,2, 3,2 Гц, 2H), 6,51 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,27 (d, J=16,8 Гц, 1H), 5,67 (d, J=10,7 Гц, 1H), 4,49 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,51 (d, J=15,2 Гц, 2H), 2,37 (dd, J=19,5, 12,3 Гц, 6H), 2,04 (dd, J=14,6, 7,4 Гц, 2H), 1,57 (dd, J=14,7, 7,5 Гц, 2H), 1,42 (dd, J=14,9, 7,9 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,28, 157,63, 155,97, 154,54, 149,88, 142,42, 135,37, 135,35, 130,91, 127,75, 127,50, 127,24, 126,68, 121,64, 121,38, 121,00, 118,73, 98,31, 58,16, 53,43, 52,73, 47,17, 45,72, 41,87, 29,53, 26,24, 24,52. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₇H₃₁N₇NaO⁺: 492,2482, обнаружено 492,2484.

[0136] Пример 19: Получение соединения 19

соединение 19

[0137]

[0138] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 4-метилнафталинбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 19 были следующими:

[0139] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,37 (s, 1H), 8,10 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,91 (d, J=8,3 Гц, 1H), 7,63-7,41 (m, 4H), 6,52 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,26 (dd, J=16,8, 1,7 Гц, 1H), 5,67 (dd, J=10,5, 1,7 Гц, 1H), 4,50 (t, J=7,1 Гц, 2H), 3,66 (s, 2H), 3,49 (d, J=16,9 Гц, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,36 (dd, J=19,3, 12,0 Гц, 6H), 2,13-1,98 (m, 2H), 1,57 (dt, J=14,9, 7,6 Гц, 2H), 1,42 (dt, J=15,0, 7,6 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,27, 159,72, 157,75, 155,67, 154,23, 144,16, 134,49, 130,52, 127,93, 127,88, 127,43, 120,40, 120,11, 115,46, 114,30, 98,54, 98,31, 63,68, 58,15, 53,31, 52,69, 47,03, 41,74, 29,71, 29,54, 26,11, 24,50, 24,04. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₈H₃₃N₇NaO⁺: 570,1587, обнаружено 570,1590.

[0140] Пример 20: Получение соединения 20

соединение 20

[0141]

[0142] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 4-бромнафталинбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 20 были следующими:

[0143] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 8,11 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,92 (d, J=8,3 Гц, 1H), 7,64-7,42 (m, 4H), 6,53 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,27 (dd, J=16,8, 1,7 Гц, 1H), 5,68 (dd, J=10,5, 1,7 Гц, 1H), 4,51 (t, J=7,1 Гц, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,50 (d, J=17,0 Гц, 2H), 2,37 (dd, J=19,3, 12,0 Гц, 6H), 2,13-1,99 (m, 2H), 1,58 (dt, J=14,9, 7,6 Гц, 2H), 1,43 (dt, J=15,0, 7,6 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,16, 157,62, 157,55, 155,88, 154,26, 149,40, 134,60, 128,22, 127,80, 127,72, 127,32, 125,04, 123,91, 121,64, 121,60, 110,91, 104,17, 99,87, 97,77, 58,01, 53,21, 52,59, 47,20, 45,47, 41,63, 29,34, 24,31. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₇H₃₀BrN₇NaO⁺: 570,1587, обнаружено 570,1590.

[0144] Пример 21: Получение соединения 21

соединение 21

[0145]

[0146] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 2,5-диметоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 21 были следующими:

[0147] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,35 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,02 (d, J=8,6 Гц, 2H), 6,56 (dd, J=16,8, 10,6 Гц, 1H), 6,28 (d, J=16,8 Гц, 1H), 5,70 (d, J=7,6 Гц, 1H), 4,44 (t, J=7,1 Гц, 2H), 3,81 (d, J=11,0 Гц, 6H), 3,69 (s, 2H), 3,55 (s, 2H), 2,47-2,32 (m, 6H), 2,03 (dd, J=14,0, 7,0 Гц, 2H), 1,61 - 1,52 (m, 2H), 1,41 (dd, J=14,7, 7,6 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,28, 158,41, 155,55, 154,40, 153,90, 150,49, 140,79, 127,83, 127,47, 123,11, 117,10, 116,10, 113,43, 100,37, 58,17, 56,76, 55,85, 53,35, 52,72, 47,06, 45,66, 41,80, 29,55, 26,21. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₃₃N₇NaO₃⁺: 502,2537, обнаружено 502,2539.

[0148] Пример 22: Получение соединения 22

соединение 22

[0149]

[0150] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3,4-диметоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 22 были следующими:

[0151] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,39 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 6,64-6,50 (m, 1H), 6,29 (d, J=16,6 Гц, 1H), 5,70 (d, J=10,2 Гц, 3H), 4,43 (d, J=6,9 Гц, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,38 (dd, J=22,3, 15,1 Гц, 6H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,57 (d, J=6,9 Гц, 2H), 1,40 (d, J=7,0 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃)δ 165,34, 165,29, 157,82, 155,94, 155,91, 155,87, 154,22, 154,05, 153,99, 144,18, 138,75, 128,59, 127,92, 127,42, 105,53, 98,33, 61,03, 58,18, 56,33, 53,39, 52,70, 47,06, 29,61, 26,19, 24,53. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₃₃N₇NaO₃⁺: 502,2537, обнаружено 502,2539.

[0152] Пример 23: Получение соединения 23

соединение 23

[0153]

Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3,4,5-триметоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 23 были следующими:

[0155] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,30 (s, 1H), 6,82 (d, J=1,3 Гц, 2H), 6,47 (ddd, J=16,8, 10,5, 1,3 Гц, 1H), 6,19 (dt, J=16,8, 1,6 Гц, 1H), 5,87 (s, 2H), 5,60 (dt, J=10,5, 1,6 Гц, 1H), 4,36 (t, J=7,3 Гц, 2H), 3,86 (d, J=1,3 Гц, 6H), 3,83 (d, J=1,3 Гц, 3H), 3,60 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,47 (t, J=5,0 Гц, 2H), 2,33 (t, J=5,1 Гц, 4H), 2,27 (d, J=7,5 Гц, 2H), 1,93 (q, J=7,6 Гц, 2H), 1,49 (t, J=7,6 Гц, 2H), 1,33 (d, J=7,6 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,2, 158,0, 155,8, 154,2, 153,9, 144,1, 138,8, 128,6, 128,6, 128,4, 127,7, 127,5, 105,6, 98,3, 61,0, 58,2, 56,3, 53,4, 52,7, 47,0, 45,7, 41,9, 29,7, 29,6, 26,3, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₃₅N₇NaO₄⁺: 532,2643, обнаружено 536,2645.

[0156] Пример 24: Получение соединения 24

соединение 24

[0157]

[0158] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3-трифторметилфенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 24 были следующими:

[0159] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,37 (s, 1H), 7,68-7,54 (m, 3H), 7,33 (d, J=6,5 Гц, 1H), 6,59-6,47 (m, 1H), 6,25 (dd, J=16,8, 4,6 Гц, 1H), 5,95-5,59 (m, 3H), 4,43 (d, J=6,6 Гц, 2H), 3,64 (d, J=9,2 Гц, 2H), 3,52 (s, 2H), 2,39 (d, J=5,7 Гц, 4H), 2,32 (d, J=7,3 Гц, 2H), 1,98 (q, J=7,1 Гц, 2H), 1,56 (s, 2H), 1,42-1,32 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 157,7, 155,8, 154,5, 149,8, 142,5, 135,3, 130,9, 127,7, 127,5, 126,7, 121,4, 121,0, 98,3, 58,1, 53,4, 52,7, 47,2, 45,7, 41,9, 29,7, 29,5, 26,2, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₂₈F₃N₇NaO⁺: 510,2205, обнаружено 510,2207.

[0160] Пример 25: Получение соединения 25

соединение 25

[0161]

[0162] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3-изопропоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 25 были следующими:

[0163] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,15 (d, J=1,2 Гц, 1H), 7,36 (t, J=7,9 Гц, 1H), 7,11 (dd, J=8,2, 5,0 Гц, 2H), 7,00-6,95 (m, 1H), 6,70-6,60 (m, 1H), 6,09 (dt, J=16,8, 1,6 Гц, 1H), 5,64 (dt, J=10,6, 1,6 Гц, 1H), 4,60 (q, J=6,0 Гц, 1H), 4,32 (t, J=6,8 Гц, 2H), 3,53 (t, J=6,3 Гц, 4H), 2,38 (s, 4H), 2,30 (t, J=7,6 Гц, 2H), 1,87 (d, J=7,1 Гц, 2H), 1,48 (t, J=7,8 Гц, 2H), 1,25 (dd, J=6,0, 1,3 Гц, 6H), 1,22 (d, J=7,4 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, MeOD) δ 166,0, 158,6, 158,5, 155,4, 153,7, 144,7, 134,0, 130,2, 127,3, 127,3, 120,1, 116,4, 115,5, 100,0, 97,6, 69,9, 57,6, 52,8, 52,3, 46,4, 45,0, 41,3, 28,9, 25,2, 23,9, 21,0. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₃₅N₇NaO₂⁺: 500,2744, обнаружено 500,2747.

[0164] Пример 26: Получение соединения 26

соединение 26

[0165]

[0166] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3-бензилоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 26 были следующими:

[0167] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,37 (s, 1H), 7,49-7,27 (m, 8H), 7,11 (d, J=8,5 Гц, 1H), 6,54 (dd, J=16,8, 10,4 Гц, 1H), 6,28 (d, J=16,8 Гц, 1H), 5,69 (d, J=10,4 Гц, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,17 (s, 2H), 4,44 (t, J=7,4 Гц, 2H), 3,62 (d, J=49,9 Гц, 4H), 2,39 (d, J=27,3 Гц, 6H), 2,03-1,93 (m, 2H), 1,38 (s, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 159,4, 157,7, 155,4, 154,2, 144,1, 136,6, 134,5, 133,3, 130,6, 128,7, 128,1, 127,7, 127,5, 127,4, 120,9, 116,0, 114,5, 98,2, 70,0, 58,1, 53,3, 52,7, 47,1, 45,7, 41,8, 29,5, 26,2, 24,5, 21,2. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₃₀H₃₅N₇NaO₂⁺: 548,2744, обнаружено 548,2747.

[0168] Пример 27: Получение соединения 27

соединение 27

[0169]

[0170] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 2-хлор-5-метоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 27 были следующими:

[0171] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,35 (d, J=4,2 Гц, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,99 (dq, J=19,8, 3,2 Гц, 2H), 6,53 (ddd, J=15,6, 10,7, 3,9 Гц, 1H), 6,25 (dd, J=16,9, 3,9 Гц, 1H), 5,80-5,22 (m, 3H), 4,45 (t, J=6,5 Гц, 2H), 3,82 (d, J=4,9 Гц, 3H), 3,68-3,63 (m, 2H), 3,51 (s, 2H), 2,39 (d, J=5,4 Гц, 4H), 2,31 (q, J=6,2, 5,4 Гц, 2H), 1,99 (q, J=6,8 Гц, 2H), 1,53 (q, J=7,1 Гц, 2H), 1,42 - 1,28 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 158,6, 157,7, 155,9, 153,8, 141,1, 132,6, 131,1, 127,7, 127,5, 124,7, 116,9, 99,9, 70,5, 58,2, 55,7, 53,4, 52,7, 47,1, 45,7, 41,9, 29,5, 26,2, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₃₀ClN₇NaO₂⁺: 506,2042, обнаружено 506,2044.

[0172] Пример 28: Получение соединения 28

соединение 28

[0173]

[0174] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество п-фторфенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 28 были следующими:

[0175] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,31 (s, 1H), 7,25 (s, 2H), 6,54 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,29 (dd, J=16,8, 1,7 Гц, 1H), 6,24 (s, 2H), 5,70 (d, J=10,5 Гц, 1H), 4,35 (t, J=7,0 Гц, 2H), 3,69 (t, J=29,6 Гц, 4H), 2,44 (d, J=31,0 Гц, 6H), 1,92 (dd, J=14,9, 7,4 Гц, 2H), 1,58 (s, 2H), 1,35-1,30 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,21, 158,54, 157,68, 155,61, 153,68, 141,11, 132,50, 131,04, 127,66, 127,44, 124,68, 116,84, 99,80, 58,07, 55,65, 53,26, 52,63, 47,07, 45,59, 41,74, 29,40, 26,09, 24,40. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₃H₂₈FN₇NaO⁺: 460,2232, обнаружено 460,2230.

[0176] Пример 29: Получение соединения 29

соединение 29

[0177]

[0178] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3-фтор-4-гидроксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 29 были следующими:

[0179] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,34 (s, 1H), 7,72-7,62 (m, 2H), 7,26-7,23 (m, 1H), 6,55 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,28 (dd, J=16,8, 1,9 Гц, 1H), 5,69 (dd, J=10,5, 1,9 Гц, 1H), 4,44 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,51 (d, J=21,5 Гц, 2H), 2,47-2,39 (m, 4H), 2,36-2,31 (m, 2H), 1,99 (dt, J=15,0, 7,5 Гц, 2H), 1,55 (dd, J=15,1, 7,6 Гц, 2H), 1,42-1,33 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,30, 162,94, 161,55, 157,73, 157,26, 156,54, 154,10, 119,85, 117,25, 100,41, 100,29, 99,99, 61,49, 57,97, 53,20, 52,53, 47,28, 29,69, 29,65, 29,40, 29,26, 24,72, 24,24. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₃H₂₈FN₇NaO₂⁺: 476,2181, обнаружено 476,2180.

[0180] Пример 30: Получение соединения 30

соединение 30

[0181]

[0182] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 6-метоксинафталин-2-бороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 30 были следующими:

[0183] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,37 (d, J=5,6 Гц, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,91 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,83 (d, J=8,9 Гц, 1H), 7,77 (dd, J=8,4, 1,6 Гц, 1H), 7,26-7,19 (m, 2H), 6,51 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,31 - 6,16 (m, 1H), 5,77 (d, J=66,8 Гц, 2H), 5,67 (dd, J=10,5, 1,9 Гц, 1H), 4,47 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,38 (dd, J=21,6, 14,2 Гц, 6H), 2,02 (dt, J=14,8, 7,4 Гц, 2H), 1,63 - 1,53 (m, 2H), 1,41 (dt, J=15,1, 7,5 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,27, 158,50, 157,93, 155,54, 154,31, 144,47, 134,66, 129,73, 128,92, 128,23, 128,12, 127,81, 127,54, 127,43, 126,28, 119,94, 105,79, 98,49, 58,13, 55,42, 53,27, 52,70, 47,05, 45,55, 41,71, 29,57, 26,08, 24,51. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₈H₃₃N₇NaO₂⁺: 522,2588, обнаружено 522,2587.

[0184] Пример 31: Получение соединения 31

соединение 31

[0185]

[0186] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество п-нитрофенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 31 были следующими:

[0187] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,45-8,36 (m, 3H), 7,92 (d, J=8,8 Гц, 2H), 6,54 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,27 (dd, J=16,9, 2,0 Гц, 1H), 5,90-5,63 (m, 3H), 4,48 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,59-3,50 (m, 2H), 2,42 (t, J=5,1 Гц, 4H), 2,35 (dd, J=8,5, 6,5 Гц, 2H), 2,01 (p, J=7,6 Гц, 2H), 1,63-1,55 (m, 2H), 1,41 (dt, J=11,4, 6,8 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 157,6, 155,9, 154,7, 148,0, 141,7, 139,6, 129,2, 127,8, 127,5, 124,6, 98,4, 77,2, 58,1, 53,4, 52,7, 47,4, 45,7, 41,8, 29,7, 29,5, 26,2, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₃H₂₈N₈NaO₃⁺: 487,2177, обнаружено 487,2179.

[0188] Пример 32: Получение соединения 32

соединение 32

[0189]

[0190] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3-фтор-5-метоксифенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 31 были следующими:

[0191] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 7,24 (d, J=2,1 Гц, 2H), 6,99-6,87 (m, 1H), 6,54 (dd, J=16,8, 10,6 Гц, 1H), 6,27 (dd, J=16,8, 1,9 Гц, 1H), 5,80-5,63 (m, 3H), 4,44 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,66 (d, J=12,5 Гц, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,45-2,33 (m, 6H), 2,02-1,96 (m, 2H), 1,55 (dd, J=15,0, 7,5 Гц, 2H), 1,37 (dd, J=15,2, 7,2 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,31, 164,85, 164,72, 162,35, 162,23, 157,51, 155,78, 154,50, 127,78, 127,48, 111,59, 111,33, 104,53, 104,28, 98,15, 58,13, 53,38, 52,69, 47,23, 45,66, 41,82, 29,49, 26,17, 24,51. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₃₀FN₇NaO₂⁺: 490,2337, обнаружено 490,2335.

[0192] Пример 33: Получение соединения 33

соединение 33

[0193]

[0194] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3,5-дифторфенилбороновой кислоты, которую использовали вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 33 были следующими:

[0195] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,36 (s, 1H), 7,01 (dd, J=8,4, 2,2 Гц, 2H), 6,73 (dt, J=10,5, 2,3 Гц, 1H), 6,55 (dd, J=16,8, 10,6 Гц, 1H), 6,28 (dd, J=16,8, 1,9 Гц, 1H), 5,83 (s, 2H), 5,69 (dd, J=10,5, 1,9 Гц, 1H), 4,44 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,66 (m, J=16,1 Гц, 2H), 3,55 (m, 2H), 2,37 (dd, J=23,0, 15,7 Гц, 6H), 1,98 (dd, J=14,9, 7,5 Гц, 2H), 1,56 (dd, J=14,8, 7,4 Гц, 2H), 1,45-1,36 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,28, 162,81, 161,77, 161,65, 157,58, 155,96, 154,41, 127,74, 127,49, 110,07, 110,04, 107,79, 107,57, 102,38, 102,13, 98,25, 58,15, 55,81, 53,35, 52,74, 47,12, 29,51, 24,50. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₃H₂₇F₂N₇NaO⁺: 478,2137, обнаружено 478,2139.

[0196] Пример 34: Получение соединения 34

соединение 34

[0197]

[0198] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3,5-бис(трифторметил)фенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 34 были следующими:

[0199] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,44 (s, 1H), 8,20 (s, 2H), 7,99 (s, 1H), 6,61-6,51 (m, 1H), 6,28 (d, J=17,0 Гц, 1H), 5,69 (d, J=10,6 Гц, 1H), 4,48 (t, J=7,0 Гц, 2H), 3,64 (s, 4H), 2,39 (d, J=26,1 Гц, 6H), 2,05-1,99 (m, 2H), 1,78 (s, 2H), 1,38 (dd, J=23,0, 12,9 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,3, 157,5, 156,0, 154,8, 140,9, 135,5, 133,2, 132,9, 132,6, 128,5, 127,8, 127,5, 124,4, 122,5, 121,7, 98,4, 58,1, 53,4, 52,7, 47,35 45,7, 41,8, 29,5, 26,2, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₂₇F₆N₇NaO⁺: 578,2073, обнаружено 578,2075.

[0200] Пример 35: Получение соединения 35

соединение 35

[0201]

[0202] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 1, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 3-фтор-5-трифторметилфенилбороновой кислоты вместо 3,5-диметоксифенилбороновой кислоты в способе получения соединения (1-2). Результаты ЯМР-анализа соединения 35 были следующими:

[0203] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,35 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,58 (dd, J=8,7, 2,0 Гц, 1H), 7,40-7,37 (m, 1H), 6,48 (dd, J=16,8, 10,5 Гц, 1H), 6,20 (dd, J=16,8, 1,9 Гц, 1H), 5,61 (dd, J=10,5, 1,9 Гц, 1H), 4,39 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,47 (s, 2H), 2,34 (t, J=5,1 Гц, 4H), 2,30 - 2,24 (m, 2H), 1,96-1,90 (m, 2H), 1,52-1,47 (m, 2H), 1,32 (t, J=7,6 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 162,0, 161,5, 157,8, 155,6, 154,1, 144,2, 135,0, 129,5, 127,8, 127,7, 106,4, 101,0, 98,2, 58,0, 55,6, 53,3, 52,5, 47,0, 46,0, 42,2, 29,7, 29,5, 26,2, 24,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₄H₂₇F₄N₇NaO⁺: 528,2105, обнаружено 528,2107.

[0204] Пример 36: Получение соединения 36

соединение 36

[0205]

[0206] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 10, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 4,4,4-трифторкротоновой кислоты вместо акрилоилхлорида в способе получения соединения (1-3). Результаты ЯМР-анализа соединения 36 были следующими:

[0207] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,32 (s, 1H), 6,92 (dt, J=15,4, 2,1 Гц, 1H), 6,78 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,73 - 6,64 (m, 1H), 6,52 (t, J=2,3 Гц, 1H), 4,40 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,82 (s, 6H), 3,65 (t, J=5,2 Гц, 2H), 3,50 (t, J=5,0 Гц, 2H), 2,40 (q, J=4,7 Гц, 4H), 2,32 (t, J=7,5 Гц, 2H), 1,96 (p, J=7,4 Гц, 2H), 1,52 (q, J=7,6 Гц, 2H), 1,36 (q, J=8,2 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 162,3, 161,8, 158,1, 155,8, 154,3, 144,4, 135,3, 129,7, 129,4, 128,0, 127,9, 121,4, 106,6, 101,3, 98,5, 58,3, 55,8, 53,5, 52,7, 47,3, 46,2, 42,5, 29,9, 29,8, 26,4, 24,7. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₃₂F₃N₇NaO₃⁺: 570,2411, обнаружено 570,2413.

[0208] Пример 37: Получение соединения 37

соединение 37

[0209]

[0210] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 34, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 4,4,4-трифторбутеновой кислоты вместо акрилоилхлорида в способе получения соединения (1-3). Результаты ЯМР-анализа соединения 37 были следующими:

[0211] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,43 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,20 (s, 2H), 7,99 (s, 1H), 6,94 (d, J=15,5 Гц, 1H), 6,72 (dt, J=14,9, 6,8 Гц, 1H), 4,48 (t, J=7,0 Гц, 2H), 3,69 (s, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,41 (d, J=31,2 Гц, 6H), 2,02 (q, J=7,8 Гц, 2H), 1,59 (s, 2H), 1,44-1,26 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 164,1, 162,1, 161,6, 157,4, 155,9, 154,7, 141,3, 136,6, 127,7, 121,0, 118,9, 118,7, 113,4, 113,2, 98,2, 58,0, 53,3, 52,5, 47,2, 45,9, 42,2, 29,7, 29,5, 26,1, 24,5, 14,1. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₂₆F₉N₇NaO⁺: 646,1947, обнаружено 646,1947.

[0212] Пример 38: Получение соединения 38

соединение 38

[0213]

[0214] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 35, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество 4,4,4-трифторбутеновой кислоты вместо акрилоилхлорида в способе получения соединения (1-3). Результаты ЯМР-анализа соединения 38 были следующими:

[0215] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8.43 (d, J=2.3 Гц, 1H), 8.20 (s, 2H), 7.99 (s, 1H), 6.94 (d, J=15.5 Гц, 1H), 6.71 (dq, J=14.2, 6.7 Гц, 1H), 4.48 (t, J=7.0 Гц, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.54 (s, 2H), 2.41 (d, J=31.2 Гц, 6H), 2.01 (t, J=7.6 Гц, 2H), 1.59 (s, 2H), 1.48-1.27 (m, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 162.0, 155.2, 154.6, 142.9, 133.2, 132.1, 132.1, 129.4, 129.0, 128.6, 128.5, 127.9, 121.3, 120.8, 111.6, 105.6, 58.1, 53.3, 52.6, 46.9, 46.0, 42.3, 29.5, 26.3, 24.5, 22.1. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₂₆F₉N₇NaO⁺: 646,1947, обнаружено 646,1947.

[0216] Пример 39: Получение соединения 39

соединение 39

[0217]

[0218] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 10, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество транс-4-диметиламинокротоновой кислоты вместо акрилоилхлорида в способе получения соединения (1-3). Результаты ЯМР-анализа соединения 39 были следующими:

[0219] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,38 (s, 1H), 6,81 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,56 (t, J=2,3 Гц, 1H), 5,60 (s, 2H), 4,43 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,67 (t, J=5,1 Гц, 2H), 3,59 (t, J=5,1 Гц, 2H), 3,49 (s, 1H), 2,45 (t, J=5,1 Гц, 4H), 2,33 (t, J=7,4 Гц, 2H), 1,96 (d, J=7,5 Гц, 2H), 1,50-1,35 (m, 4H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 161,5, 161,5, 157,7, 155,9, 144,0, 135,1, 106,4, 101,0, 100,0 98,3, 58,1, 55,6, 53,1, 52,4, 52,3, 49,4, 47,1, 45,8, 43,4, 43,3, 43,2, 37,4, 29,6, 26,9, 26,5. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₅H₃₁N₇NaO₃⁺: 500,2831, обнаружено 500,2833.

[0220] Пример 40: Получение соединения 40

соединение 40

[0221]

[0222] Конкретный способ получения был таким же, как и способ получения соединения 10, за исключением того, что одним из исходных материалов было эквимолярное количество кротоновой кислоты вместо акрилоилхлорида в способе получения соединения (1-3). Результаты ЯМР-анализа соединения 40 были следующими:

[0223] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,31 (s, 1H), 6,88-6,73 (m, 3H), 6,52 (t, J=2,3 Гц, 1H), 6,20 (dq, J=15,0, 1,7 Гц, 1H), 4,39 (t, J=7,2 Гц, 2H), 3,82 (s, 6H), 3,62 (d, J=8,1 Гц, 2H), 3,56-3,43 (m, 2H), 2,36 (t, J=5,1 Гц, 4H), 2,29 (dd, J=8,7, 6,4 Гц, 2H), 2,01-1,91 (m, 2H), 1,83 (dd, J=6,9, 1,7 Гц, 3H), 1,52 (t, J=7,6 Гц, 2H), 1,36 (ddd, J=15,3, 9,1, 5,4 Гц, 2H). ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ 165,5, 161,5, 158,0, 155,7, 154,1, 144,1, 141,5, 135,1, 121,4, 119,9, 106,4, 101,1, 98,2, 60,4, 58,2, 55,5, 53,5, 53,4, 52,8, 47,0, 45,5, 41,8, 29,6, 26,2, 24,5, 18,2. МСВР (ИЭР) рассчитано для C₂₆H₃₅N₇NaO₃⁺: 516,2694, обнаружено 516,2696.

[0224] Пример 41. Испытание активности фермента.

[0225] В настоящем изобретении для оценки ингибирующего действия соединения на четыре подтипа FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4 использовали технологию гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF). Сначала конструировали прокариотические экспрессионные векторы FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4; и когда прокариотические экспрессионные векторы были идентифицированы как правильные, белки FGFR экспрессировали и очищали в большом масштабе в системе Escherichia coli (E. coli) и определяли концентрации белков. Полученные белки хранили аликвотами. Перед началом испытания активности фермента использовали набор реагентов HTRF KinEA от компании Cisbio (62TK0PEB) для предварительного разбавления каждого компонента, необходимого в системе измерения активности фермента, буфером активности фермента до требуемой рабочей концентрации. Готовили 384-луночный планшет (66PL384025), в каждую лунку добавляли 5 мкл раствора белка, 1 мкл соединения и 2 мкл субстрата и в последнюю очередь добавляли 2 мкл АТФ для инициации реакции. Для каждой концентрации ставили три параллельных эксперимента. В контрольной группе 1 мкл соединения заменяли 1 мкл диметилсульфоксида (ДМСО); а в группе положительного контроля вместо него использовали положительное лекарственное средство AZD4547, при этом другие условия остались без изменений. 384-луночный планшет запечатывали и инкубировали при комнатной температуре в течение примерно 1 часа. После завершения инкубации в каждую лунку добавляли 5 мкл меченного лантанидом фосфорилированного субстратного антитела (донор) и 5 мкл меченного стрептавидином реагента XL665 (рецептор) для остановки реакции, после чего планшет инкубировали при комнатной температуре в течение примерно 1 ч в темноте. Наконец, для обнаружения флуоресцентного сигнала использовали многофункциональное считывающее устройство для микропланшетов TECAN Infinite M1000PRO, рассчитывали скорость ингибирования и значение IC50 определяли с помощью программного обеспечения GraphPad Prism 7.0.

[0226] Результаты показали, что соединения 1-40 могут ингибировать белковую активность FGFR1/2/3/4 в различной степени.

[0227] Таблица 1. Исследования взаимосвязи структура-активность (ВСА), основанные на результатах измерений активности фермента

№ Соединения Ar Линкер R Активность фермента (IC₅₀/нМ) FGFR1 FGFR2 FGFR3 FGFR4 1 H 315 540 520 1921 2 818 666 525 >5000 3 433 424 371 2730 4 615 641 521 >5000 5 741 1210 580 1780 6 790 1130 769 >5000 7 372 455 335 1610 8 323 351 414 4700 9 36,0 27,4 22,5 4210 10 3,2 1,4 2,7 3270 11 12,9 11,2 11,3 3207 12 5,9 2,2 3,4 >5000 13 476 789 875 2709 14 2109 1864 344 >5000 15 >5000 3121 >5000 >5000 16 1353 2511 1321 >5000 17 3523 4111 >5000 >5000 18 >5000 >5000 >5000 >5000 19 >5000 >5000 >5000 >5000 20 >5000 >5000 >5000 >5000 21 866 954 1978 >5000 22 324 231 523 >5000 23 277 223 486 4910 24 1877 >5000 >5000 3903 25 >5000 >5000 >5000 2246 26 1501 2345 >5000 >5000 27 554 763 731 2723 28 185 337 321 2987 29 417 560 318 2580 30 >5000 >5000 >5000 >5000 31 >5000 >5000 >5000 >5000 32 118 133 132 >5000 33 790 >10 >10 4112 34 133 165 115 3921 35 14,1 29,3 13,2 4102 36 CF₃ 0,7 0,7 0,9 809 37 9,9 12,1 10,2 >5000 38 101 65 97 2401 39 (CH₃)₂NCH₂ 13,8 37,5 15,5 >5000 40 CH₃ 16,6 26,3 12,4 >5000 AZD4547 Н.Д. 1,1 2,2 1,8 660

[0228] Пример 42. Анализ клеточной пролиферации

[0229] В настоящем изобретении были выбраны соединения 10 и 36, и колориметрический метод определения метилтиазолилтетразола (МТТ) был использован для оценки ингибирующего пролиферацию действия соединений 10 и 36 на различные опухолевые клетки. Опухолевые клетки в логарифмической фазе роста собирали путем трипсинизации и ресуспендировали в 1 мл свежей среды, отбирали небольшое количество полученной суспензии, разбавляли и осуществляли подсчет клеток с помощью гемоцитометра. В зависимости от скорости роста опухолевые клетки высевали в 96-луночный планшет с плотностью от 3000 клеток на лунку до 5000 клеток на лунку, а затем культивировали в инкубаторе в течение 24 часов. Опухолевые клетки обрабатывали соединениями 10 и 36 в 8 концентрациях, по три лунки для каждой концентрации, а затем инкубировали в течение 96 часов. После завершения инкубации в каждую лунку добавляли по 10 мкл раствора МТТ (5 мг/мл), планшет постукивали для тщательного перемешивания, а затем инкубировали в инкубаторе в течение 3-4 часов. По окончании инкубации жидкость в лунках осторожно пипетировали и удаляли, а затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл раствора ДМСО. Программы считывающего устройства для микропланшетов были настроены на определение значений поглощения при длинах волн 490 нм и 570 нм соответственно, скорость ингибирования пролиферации при каждой концентрации рассчитывали в соответствии с формулой, и в конце для обработки данных использовали программное обеспечение Graphpad Prism 7 для расчета IC₅₀.

[0230] Результаты, приведенные в Таблице 1 показали, что соединения 10 и 36 значительно ингибировали пролиферацию клеток плоскоклеточной карциномы легких человека NCI-H1581 (амплификация FGFR1) и клеток рака желудка человека SNU-16 (амплификация FGFR2) и в некоторой степени ингибировали пролиферацию клеток гепатомы человека SK-hep-1 (амплификация FGFR4), но не оказывали явного ингибирующего действия на опухолевые клетки с нормальной экспрессией FGFR, что указывает на высокую селективность соединений 10 и 36.

[0231] Таблица 2. Антипролиферативная активность соединения 36 в отношении конкретных линий раковых клеток

Соединение IC₅₀/мкМ NCI-H1581 FGFR1 амплификация SNU-16 FGFR2 амплификация SK-hep-1 FGFR4 амплификация Huh-7 A549 AZD4547 0,042±0,002 0,006±0,001 2,78±0,069 >10 >10 10 0,051±0,003 0,037±0,005 2,86±0,250 >10 >10 36 0,055±0,008 0,043±0,006 3,05±0,120 >10 >10

[0232] Пример 43. Ингибирование соединениями 10 и 36 FGF/FGFR и их нижележащих сигнальных путей.

[0233] Для дальнейшего выяснения влияния соединений 10 и 36 на передачу сигналов FGF/FGFR влияние соединений на фосфорилирование FGFR и нижележащего сигнального белка подтверждали вестерн-блоттингом (WB). Клетки плоскоклеточной карциномы легкого человека NCI-H1581 и клетки рака желудка человека SNU-16 собирали в логарифмической фазе роста посредством трипсинизации и ресуспендировали в 1 мл свежей среды, затем отбирали небольшой объем полученной суспензии опухолевых клеток, разбавляли и осуществляли подсчет клеток с помощью гемоцитометра. Отбирали соответствующий объем суспензии опухолевых клеток, высевали в 6-луночный планшет с плотностью 3×10⁵ клеток на лунку и культивировали в инкубаторе в течение 24 часов. После полного прилипания клеток использованную среду отбирали пипеткой и удаляли, добавляли свежие среды с соединениями 10 и 36 в разных концентрациях и инкубировали планшет в инкубаторе в течение 12 часов. После завершения инкубации культуральный супернатант отбирали пипеткой и удаляли, а планшет трижды промывали предварительно охлажденным 1X раствором ФСБ, чтобы полностью удалить пипеткой остаточный раствор. В каждую лунку добавляли 60 мкл лизирующего буфера RIPA и осторожно соскабливали клетки клеточным скребком; полученный лизирующий буфер переносили в пробирку типа Eppendorf на 1,5 мл, инкубировали на ледяной бане в течение 10 минут и центрифугировали при 14000 об/мин в течение 10 минут, полученный супернатант пипеткой переносили в новую пробирку типа Eppendorf на 1,5 мл, и небольшое количество супернатанта пипетировали для определения содержания белка; и соответствующий объем 5-кратного загрузочного буфера добавляли к оставшемуся супернатанту, полученную смесь встряхивали для тщательного перемешивания и помещали на металлическую баню при температуре 100°C на 10 минут. В соответствии с определенным содержанием белка рассчитывали соответствующее количество загрузки из расчета 30 мкг белка на лунку. Белки выделяли с помощью электрофореза в 8% полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-ПААГ), выделенные белки переносили на поливинилиденфторидную (PVDF) мембрану, окрашивали понсо S, и PDVF мембрану с белками вырезали согласно молекулярной массе целевого белка, промывали 1X раствором TBST для удаления понсо S и блокировали 5%-ным сухим обезжиренным молоком в течение 30 мин. PDVF мембрану трижды промывали 1X раствором TBST, PDVF мембрану с полосой целевого белка помещали в инкубационный бокс, добавляли соответствующий инкубационный раствор первичных антител и инкубировали PDVF мембрану при температуре 4°C в течение ночи. После завершения инкубации с первичными антителами мембрану трижды промывали 1X раствором TBST, добавляли соответствующий инкубационный раствор вторичных антител и инкубировали мембрану при комнатной температуре в течение 1,5 часов. После завершения инкубации мембрану трижды промывали 1X раствором TBST и проявляли окраску с помощью набора для хемилюминесценции со сверхчувствительной пероксидазой хрена (HRP).

[0234] Как показано на Фигуре 1 и Фигуре 2, соединения 10 и 36 не только значительно ингибировали фосфорилирование FGFR1 в клетках NCI-H1581 и фосфорилирование FGFR2 в клетках SNU-16, но также дозозависимо ингибировали активацию нижележащих PLCγ, AKT и ERK. То есть, соединения 10 и 36 могут сильно ингибировать FGF/FGFR и нижележащие сигнальные пути in vitro.

[0235] Пример 44. Значительное ингибирование соединениями 10 и 36 роста опухоли у мышей.

[0236] Для оценки противоопухолевого действия соединений 10 и 36 in vivo была создана мышиная модель подкожного ксенотрансплантата клеток плоскоклеточной карциномы легких человека NCI-H1581 с высокой экспрессией FGFR1. Клетки в логарифмической фазе роста собирали посредством трипсинизации, трижды промывали 1X ФСБ. Полученный клеточный осадок разбавляли до 1×10⁸ клеток/мл раствором для ресуспендирования (среда 1640: матригель = 1:1) и инокулировали в нижние части подмышечных впадин передних конечностей 5-6-недельных самок мышей линии BALB/c Nude в количестве 5×10⁶ клеток на мышь. При увеличении объема опухоли от 50 мм³ до 100 мм³ мышей случайным образом делили на три группы (контрольная, 50 мг/кг и 100 мг/кг) по 6 мышей в каждой. Соединение 10 вводили перорально каждый день, а соединение 36 вводили каждый день внутрибрюшинно. Измеряли объем опухоли и массу тела мыши. Мышей лечили через 26 дней после введения, ткань опухоли иссекали и фиксировали в растворе формалина для последующего использования.

[0237] Как показано на Фигуре 3 и Фигуре 4, соединения 10 и 36 ингибировали пролиферацию клеток NCI-H1581 у мышей дозозависимым образом со степенью ингибирования 72% в группе с высокой дозой; ингибировал активацию фосфорилирования FGFR1 в опухолевой ткани; и не приводили к очевидной потере массы тела, указывая на то, что соединения 10 и 36 хорошо переносились in vivo при всех дозах.

[0238] В заключение, настоящее изобретение оптимизирует 2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин для получения его новых производных (соединения 10 и 36), а соединения 10 и 36 служат эффективными и селективными ингибиторами FGFR1, FGFR2 и FGFR3, которые проявляют необратимый эффект связывания с белком-мишенью. Соединения являются ведущими соединениями, которые могут не только ингибировать FGF/FGFR и нижележащие сигнальные пути в низких концентрациях, но также оказывать значительное антипролиферативное действие на линию раковых клеток NCI-H1581 in vitro и in vivo. Кроме того, соединения 10 и 36 обладают низкой токсичностью и отличными фармакокинетическими свойствами и в настоящее время идентифицируются как потенциальные кандидаты в лекарственные средства.

[0239] Вышеприведенное описание представляет собой только примеры настоящего изобретения и не предназначено для ограничения настоящего изобретения. Любые модификации, эквивалентные замены и улучшения, соответствующие сущности и принципу настоящего изобретения, должны быть включены в заявленный объем настоящего изобретения.

[0240] Ссылки

[0241] (1) Turner, N.; Grose, R. Fibroblast growth factor signalling: from development to cancer. Nat. Rev. Cancer 2010, 10, 116−129.

[0242] (2) Carter, E.P.; Fearon, A.E.; Grose, R.P. Careless talk costs lives: fibroblast growth factor receptor signalling and the consequences of pathway malfunction. Trends Cell Biol. 2015, 25, 221−233.

[0243] (3) Touat, M.; Ileana, E.; Postel-Vinay, S.; Andre, F.; Soria, J. C. Targeting FGFR signaling in cancer. Clin. Cancer Res. 2015, 21, 2684−2694.

[0244] (4) Dieci, M.V.; Arnedos, M.; Andre, F.; Soria, J. C. Fibroblast growth factor receptor inhibitors as a cancer treatment: from a biologic rationale to medical perspectives. Cancer Discovery 2013, 3, 264−279.

[0245] (5) Hagel, M.; Miduturu, C.; Sheets, M.; Rubin, N.; Weng, W.; Stransky, N.; Bifulco, N.; Kim, J. L.; Hodous, B.; Brooijmans, N.; Shutes, A.; Winter, C.; Lengauer, C.; Kohl, N. E.; Guzi, T. First selective small molecule inhibitor of FGFR4 for the treatment of hepatocellular carcinomas with an activated FGFR4 signaling pathway. Cancer Discovery 2015, 5, 424−437.

[0246] (6) Babina, I. S.; Turner, N. C. Advances and challenges in targeting FGFR signalling in cancer. Nat. Rev. Cancer 2017, 17, 318−332.

[0247] (7) Renhowe, P.A.; Pecchi, S.; Shafer, C.M.; Machajewski, T.D.; Jazan, E. M.; Taylor, C.; Antonios-McCrea, W.; McBride, C.M.; Frazier, K.; Wiesmann, M.; Lapointe, G.R.; Feucht, P.H.; Warne, R.L.; Heise, C.C.; Menezes, D.; Aardalen, K.; Ye, H.; He, M.; Le, V.; Vora, J.; Jansen, J. M.; Wernette-Hammond, M. E.; Harris, A. L. Design, structure-activity relationships and in vivo characterization of 4-amino-3-benzimidazol-2-ylhydroquinolin-2-ones: a novel class of receptor tyrosine kinase inhibitors. J. Med. Chem. 2009, 52, 278−292.

[0248] (8) Bello, E.; Colella, G.; Scarlato, V.; Oliva, P.; Berndt, A.; Valbusa, G.; Serra, S.C.; D’Incalci, M.; Cavalletti, E.; Giavazzi, R.; Damia, G.; Camboni, G. E-3810 is a potent dual inhibitor of VEGFR and FGFR that exerts antitumor activity in multiple preclinical models. Cancer Res. 2011, 71, 1396−1405.

[0249] (9) Roth, G. J.; Heckel, A.; Colbatzky, F.; Handschuh, S.; Kley, J.; Lehmann-Lintz, T.; Lotz, R.; Tontsch-Grunt, U.; Walter, R.; Hilberg, F. Design, synthesis, and evaluation of indolinones as triple angiokinase inhibitors and the discovery of a highly specific 6-methoxycarbonyl-substituted indolinone (BIBF 1120). J. Med. Chem. 2009, 52, 4466−4480.

[0250] (10) Gozgit, J.M.; Wong, M.J.; Moran, L.; Wardwell, S.; Mohemmad, Q.K.; Narasimhan, N. I.; Shakespeare, W.C.; Wang, F.; Clackson, T.; Rivera, V. M. Ponatinib (AP24534), a multitargeted pan-FGFR inhibitor with activity in multiple FGFR-amplified or mutated cancer models. Mol. Cancer Ther. 2012, 11, 690−699.

[0251] (11) Gavine, P.R.; Mooney, L.; Kilgour, E.; Thomas, A.P.; Al-Kadhimi, K.; Beck, S.; Rooney, C.; Coleman, T.; Baker, D.; Mellor, M. J.; Brooks, A. N.; Klinowska, T. AZD4547: an orally bioavailable, potent, and selective inhibitor of the fibroblast growth factor receptor tyrosine kinase family. Cancer Res. 2012, 72, 2045−2056.

[0252] (12) Guagnano, V.; Furet, P.; Spanka, C.; Bordas, V.; Le Douget, M.; Stamm, C.; Brueggen, J.; Jensen, M.R.; Schnell, C.; Schmid, H.; Wartmann, M.; Berghausen, J.; Drueckes, P.; Zimmerlin, A.; Bussiere, D.; Murray, J.; Graus Porta, D. Graus Porta, D. Discovery of 3-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxy-phenyl)-1-{6-[4-(4-ethyl-piperazin-1-yl)-phenylamino]-pyrimidin-4-yl}-1-methyl-urea (NVP-BGJ398), a potent and selective inhibitor of the fibroblast growth factor receptor family of receptor tyrosine kinase. J. Med. Chem. 2011, 54, 7066−7083.

[0253] (13) Zhao, G.; Li, W. Y.; Chen, D.; Henry, J.R.; Li, H. Y.; Chen, Z.; Zia-Ebrahimi, M.; Bloem, L.; Zhai, Y.; Huss, K.; Peng, S. B.; McCann, D. J. A novel, selective inhibitor of fibroblast growth factor receptors that shows a potent broad spectrum of antitumor activity in several tumor xenograft models. Mol. Cancer Ther. 2011, 10, 2200−2210.

[0254] (14) Perera, T. P. S.; Jovcheva, E.; Mevellec, L.; Vialard, J.; De Lange, D.; Verhulst, T.; Paulussen, C.; Van De Ven, K.; King, P.; Freyne, E.; Rees, D.C.; Squires, M.; Saxty, G.; Page, M.; Murray, C.W.; Gilissen, R.; Ward, G.; Thompson, N. T.; Newell, D.R.; Cheng, N.; Xie, L.; Yang, J.; Platero, S.J.; Karkera, J.D.; Moy, C.; Angibaud, P.; Laquerre, S.; Lorenzi, M. V. Discovery and pharmacological characterization of JNJ-42756493 (erdafitinib), a functionally selective small-molecule FGFR family inhibitor. Mol. Cancer Ther. 2017, 16, 1010−1020.

[0255] (15) Zhou, W.; Hur, W.; McDermott, U.; Dutt, A.; Xian, W.; Ficarro, S. B.; Zhang, J.; Sharma, S.V.; Brugge, J.; Meyerson, M.; Settleman, J.; Gray, N. S. A structure-guided approach to creating covalent FGFR inhibitors. Chem. Biol. 2010, 17, 285−295.

[0256] (16) Tan, L.; Wang, J.; Tanizaki, J.; Huang, Z.; Aref, A. R.; Rusan, M.; Zhu, S. J.; Zhang, Y.; Ercan, D.; Liao, R.G.; Capelletti, M.; Zhou, W.; Hur, W.; Kim, N.; Sim, T.; Gaudet, S.; Barbie, D.A.; Yeh, J. R. J.; Yun, C.H.; Hammerman, P. S.; Mohammadi, M.; Janne, P. A.; Gray, N. S. Development of covalent inhibitors that can overcome resistance to first-generation FGFR kinase inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2014, 111, E4869−E4877.

[0257] (17) Brown, W.S.; Tan, L.; Smith, A.; Gray, N. S.; Wendt, M.K. Covalent targeting of fibroblast growth factor receptor inhibits metastatic breast cancer. Mol. Cancer Ther. 2016, 15, 2096−2106.

[0258] (18) Brameld, K.A.; Owens, T. D.; Verner, E.; Venetsanakos, E.; Bradshaw, J.M.; Phan, V.T.; Tam, D.; Leung, K.; Shu, J.; LaStant, J.; Loughhead, D.G.; Ton, T.; Karr, D.E.; Gerritsen, M. E.; Goldstein, D.M.; Funk, J. O. Discovery of the irreversible covalent FGFR inhibitor 8-(3-(4-acryloylpiperazin-1-yl)propyl)-6-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-2-(methylamino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-one (PRN1371) for the treatment of solid tumors. J. Med. Chem. 2017, 60, 6516−6527.

[0259] (19) Wang, Y.; Dai, Y.; Wu, X.; Li, F.; Liu, B.; Li, C.; Liu, Q.; Zhou, Y.; Wang, B.; Zhu, M.; Cui, R.; Tan, X.; Xiong, Z.; Liu, J.; Tan, M.; Xu, Y.; Geng, M.; Jiang, H.; Liu, H.; Ai, J.; Zheng, M. Discovery and Development of a Series of Pyrazolo[3,4‑d]pyridazinone Compounds as the Novel Covalent Fibroblast Growth Factor Receptor Inhibitors by the Rational Drug Design. J. Med. Chem. 2019, 62, 7473−7488.

[0260] (20) Wang, Y.; Li, L.; Fan, J.; Dai, Y.; Jiang, A.; Geng, M.; Ai, J.; Duan, W. Discovery of Potent Irreversible Pan-Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) Inhibitors. J. Med. Chem. 2018, 61, 9085−9104.

[0261] (21) Li, X.; Guise, C. P.; Taghipouran, R.; Yosaatmadja, Y.; Ashoorzadeh, A.; Paik, W.; Squire, C. J.; Jiang, S.; Luo, J.; Xu, Y.; Tu, Z.; Lu, X.; Ren, X.; Patterson, A.V.; Smaill, J. B.; Ding, K. 2-Oxo-3, 4-dihydropyrimido[4, 5-d]pyrimidinyl derivatives as new irreversible pan fibroblast growth factor receptor (FGFR) inhibitors. Eur. J. Med. Chem. 135, 2017, 531−543.

Настоящее изобретение относится к соединению пиразоло[3,4-d]пиримидина формулы (I), его применению для получения противоопухолевого лекарственного средства и фармацевтической композиции. В формуле (I): Ar представляет собой R представляет собой H, CF₃, (CH₃)₂NCH₂ или CH₃ и линкер представляет собой и указанное соединение также включает соединение 25 и соединение 26. Предложенные соединения оказывают ингибирующее действие на FGFR для блокирования сигнального пути FGF/FGFR и могут применяться для лечения рака, связанного с FGFR. 4 н. и 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 44 пр.

1. Соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль:

формула I,

где Ar представляет собой

R представляет собой H, CF₃, (CH₃)₂NCH₂ или CH₃ и

линкер представляет собой или

и указанное соединение также включает

соединение 25 и соединение 26.

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где соединение является соединением, выбранным из группы, состоящей из:

соединение 7, соединение 8, соединение 9, соединение 10, соединение 11, соединение 12, соединение 13, соединение 14, соединение 15, соединение 16, соединение 17, соединение 18, соединение 19, соединение 20, соединение 21, соединение 22, соединение 23, соединение 24, соединение 27, соединение 28, соединение 29, соединение 30, соединение 31, соединение 32, соединение 33, соединение 34, соединение 35, соединение 36,

соединение 37, соединение 38, соединение 39 и соединение 40.

3. Фармацевтическая композиция для ингибирования белковой активности FGFR1/2/3/4 в различной степени, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по п. 1 или 2, где фармацевтическая композиция также содержит одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ; и

лекарственная форма фармацевтической композиции представляет собой любую фармацевтически приемлемую лекарственную форму.

4. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 или 2 или фармацевтической композиции по п. 3 для получения лекарственного средства для лечения и/или предотвращения рака, ассоциированного с аномалией FGFR.

5. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 или 2 или фармацевтической композиции по п. 3 для получения необратимого ингибитора пан-FGFR.