МУТАНТНЫЙ ПОЛИПЕПТИД ГИДРОКСИФЕНИЛПИРУВАТДИОКСИГЕНАЗА, КОДИРУЮЩИЙ ЕГО ГЕН И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2024 года по МПК C12N9/02 C12N15/53 C12N15/63 A01H1/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к мутантному полипептиду гидроксифенилпируватдиоксигеназа, кодирующему его гену и его применению, и, в частности, к мутантному полипептиду гидроксифенилпируватдиоксигеназа, который устойчив к гербицидам-ингибиторам HPPD, кодирующему его гену и его применению.

Предшествующий уровень техники

Гидроксифенилпируватдиоксигеназы (сокращенно HPPD) представляют собой ферменты, которые в присутствии иона железа (Fe²⁺) и кислорода катализируют реакцию, в которой 4-гидроксифенилпировиноградная кислота (сокращенно НРР), продукт деградации тирозина, трансформируется в гомогентизиновую кислоту/гомогентизат (сокращенно HG), предшественник токоферола и пластохинона в растениях (сокращенно RQ). Токоферол действует как антиоксидант, ассоциированный с мембраной. PQ выполняет функцию не только переносчика электронов между PSII и комплексом цитохром b6/f, но также очень важного кофактора фитоендесатуразы, участвующей в биосинтезе каротиноидов.

Гербициды, которые действуют посредством ингибирования HPPD, главным образом включают три химических семейства: трикетоны, изоксазолы и пиразолинаты. Ингибирование HPPD блокирует биосинтез PQ из тирозина в растениях, что приводит, вследствие этого, к истощению PQ и недостатку каротиноидов. HPPD-ингибирующие гербициды представляют собой мобильные во флоэме «отбеливатели», которые вызывают появление белых освещаемых новых меристем и листьев. Каротиноиды являются необходимыми для фотозащитного действия. В отсутствии каротиноидов синтез и функция хлорофилла будут нарушены под действием УФ-излучения и активных форм кислорода, что приводит, таким образом, к подавлению роста и даже гибели растения.

Способы получения растений, которые являются устойчивыми к гербицидам-ингибиторам HPPD, включают: 1) сверхэкспрессию фермента HPPD таким образом, чтобы образовывать в растении количества фермента HPPD, которые являются достаточными в отношении гербицидов-ингибиторов HPPD, таким образом, чтобы иметь достаточно доступного функционального фермента, несмотря на наличие его ингибитора; и 2) осуществление мутации целевого фермента HPPD в функциональный HPPD, который менее чувствителен к гербицидам или их активным метаболитам, но сохраняют способность трансформации в HG. Относительно мутантных HPPD, в то время как данный мутантный фермент HPPD может обеспечивать полезный уровень толерантности к некоторым гербицидам-ингибиторам HPPD, тот же мутантный HPPD может быть довольно неподходящим для обеспечения коммерческих уровней толерантноти к отличному, более желательному гербициду-ингибитору HPPD. Например, гербициды-ингибиторы HPPD могут отличаться с точки зрения спектра сорняков, с которыми они борятся, их производственных затрат и преимуществ их использования для окружающей среды. Соответственно, необходимы новые способы и/или композиции для придания разным сельскохозяйственным культурам и сортам сельскохозяйственных культур толерантности к гербицидам - ингибиторам HPPD.

Краткое изложение сущности изобретения

Целью настоящего изобретения является предложение нового мутантного полипептида - гидроксифенилпируватдиоксигеназы, гена, кодирующего его, и его применения. Мутантный полипептид гидроксифенилпируватдиоксигеназа не только обладает ферментативной активностью HPPD, но также позволяет растениям, трансформированным генами, кодирующими мутантный полипептид -гидроксифенилпируватдиоксигеназу, обладать хорошей толерантностью к гербицидам-ингибиторам HPPD.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению предложен мутантный полипептид гидроксифенилпируватдиоксигеназа, который сохраняет активность осуществления катализа реакции превращения 4-гидроксифенилпировиноградной кислоты в гомогентизи новую кислоту или гомогентизат и является менее чувствительным к гербициду-ингибитору HPPD, чем нативный немутантный HPPD, содержащий следующую мутацию в положении, соответствующем положению 372 аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1: F372A, F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372C, F372M, F372Q, F372D или делеция F372;

Предпочтительно, мутантный полипептид гидроксифенилпируватдиоксигеназа содержит следующую мутацию в положении, соответствующем положению 372 аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1: F372A, F372G или F372V.

Более предпочтительно, мутантный полипептид гидроксифенилпируватдиоксигеназа содержит следующую мутацию в положении, соответствующем положению 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1: F372A.

Кроме того, мутантный полипептид гидроксифенилпируватдиоксигеназа получен из HPPD в растениях или микроорганизмах.

Предпочтительно, растение содержит однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, растение представляет собой овес (Avena sativa), пшеницу (Triticum aestivum), ячмень (Hordeum vulgare), просо (Setaria italica), кукурузу (Zea mays), сорго (Sorghum bicolor), Brachypodium distachyon, рис (Oryza sativa), табак (Nicotiana tabacum), подсолнечник (Heiianthus annuus), люцерну (Medicago sativa), сою (Glycine max), cicer arietinum, арахис (Arachis hypogaea), сахарную свеклу (Beta vulgaris), огурец (Cucumis sativus), хлопок (Gossypium hirsutum), масличный рапс (Brassica napus), картофель (Solarium tuberosum), томат (Solarium lycopersicum) или Arabidopsis thaliana;

Предпочтительно, микроорганизм представляет собой Cyanophyta, Pseudomonas fluorescens или бактерии из рода Sphingobium или Burkhoideria.

Кроме того, когда нативный немутантный HPPD имеет аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1, полипептид дополнительно содержит следующую мутацию в положении 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1: F372L, F372I, F372W, F372N, F372E или F372K.

Исходя из указанного выше технического решения, мутантный полипептид гидроксифенилпируватдиоксигеназа содержит вторую мутацию;

Предпочтительно, вторая мутация в положении, соответствующем положению 413 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, содержит следующую мутацию: G413W, G413H, G413M, G413F или G413C; более предпочтительно, вторая мутация в положении, соответствующем положению 413 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, представляет собой мутацию G413W;

Возможно, когда нативный немутантный HPPD имеет аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1, вторая мутация в положении 110 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, представляет собой мутацию - делецию.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложен полинуклеотид, кодирующий мутантный полипептид -гидроксифенилпируватдиоксигеназу.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложена экспрессионная кассета или рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотид под регуляцией эффективно-связанных регуляторных последовательностей.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложен способ расширения объема гербицидов, к которому растения устойчивы, включающий экспрессию мутантного полипептида -гидроксифенилпируватдиоксигеназы вместе с по меньшей мере одним белком, толерантным к гербициду, отличным от мутантного полипептида -гидроксифенилпируватдиоксигеназы.

Кроме того, белок, толерантный к гербициду, представляет собой 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS - от англ. 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase), глифосатоксидоредуктазу, глифосат-N-ацетилтрансферазу, глифосатдекарбоксилазу, глюфосинатацетилтрансферазу, альфа-кетоглутарат-зависимую диоксигеназу, дикамбамонооксигеназу, ацетолактатсинтазу, цитохром-подобный белок и/или протопорфириногеноксидазу.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложен способ отбора трансформированных растительных клеток, включающий трансформацию множества растительных клеток полинуклеотидом и культивирование клеток в концентрации гербицида-ингибитора HPPD, которая обеспечивает возможность роста трансформированных клеток, экспрессирующих полинуклеотид, одновременно с уничтожением нетрансформированных клеток или ингибированием роста нетрансформированных клеток.

Предпочтительно, растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana;

Предпочтительно, гербицид -ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид - ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид - ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид - ингибитор HPPD класса изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно, способ отбора трансформированных растительных клеток сои включает трансформацию множества растительных клеток сои полинукпеотидом и культивирование клеток при концентрации гербицида-ингибитора HPPD, которая обеспечивает возможность роста трансформированных клеток, которые экспрессируют полинуклеотид, и уничтожает нетрансформированные клетки или ингибирует рост нетрансформированных клеток, где гербицид-ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложен способ борьбы с сорняками, включающий внесение эффективной дозы гербицида-ингибитора HPPD в поле, на котором посажено целевое растение, где целевое растение содержит полинуклеотид;

Предпочтительно, целевое растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, целевое растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana; еще более предпочтительно, целевое растение представляет собой растение, толерантное к глифосату, и сорняки представляют собой сорняки, устойчивые к глифосату;

Предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид-ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид-ингибитор HPPD класса изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно, способ борьбы с сорняками включает внесение эффективной дозы гербицида-ингибитора HPPD в поле, на котором выращивают растение сои, где растение сои содержит полинуклеотид; где гербицид-ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложен способ защиты растения от повреждений, вызванных гербицидом-ингибитором HPPD, или придания растению толерантности к гербициду-ингибитору HPPD, включающий введение полинуклеотида или экспрессионной кассеты или рекомбинантного вектора в растение, приводящее к получению количества мутантного полипептида -

гидроксифенилпируватдиоксигеназы, которое является достаточным для защиты растения, в которое введен полинуклеотид или экспрессионная кассета или рекомбинантный вектор, от повреждений, вызванных гербицидом-ингибитором HPPD.

Предпочтительно, растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana;

Предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид-ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид-ингибитор HPPD изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно, способ защиты растения сои от повреждений, вызванных гербицидом-ингибитором HPPD, или придания растению сои толерантности к гербициду-ингибитору HPPD включает введение полинуклеотида или экспрессионной кассеты или рекомбинантного вектора в растение сои, приводящее к получению количества мутантного полипептида -гидроксифенилпируватдиоксигеназы, которое является достаточным для защиты растения сои, в которое введен полинукпеотид или экспрессионная кассета или рекомбинантный вектор, от повреждения, вызванного гербицидом-ингибитором HPPD; где гербицид-ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дооплнительно предложен способ получения растения, которое толерантно к гербициду-ингибитору HPPD, включающий введение полинуклеотида в геном данного растения;

Предпочтительно, способ введения включает способы генетической трансформации, редактирования генома или мутации гена.

Предпочтительно, растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana;

Предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид-ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид-ингибитор HPPD изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно, способ получения растений сои, которые устойчивы к гербициду-ингибитору HPPD, включает введение полинуклеотида в геном растений сои; где гербицид - ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Для достижения указанной выше цели согласно настоящему изобретению дополнительно предложен способ культивации растения, которое толерантно к гербициду-ингибитору HPPD, включающий:

посадку по меньшей мере одной пропагулы растения, где пропагула растения содержит в своем геноме полинуклеотид;

обеспечение роста пропагулы растения в растение; и

внесение эффективной дозы гербицида-ингибитора HPPD в среду для выращивания растения, содержащую по меньшей мере данное растение, и сбор растения, имеющего уменьшенное повреждение растения и/или повышенную урожайность растения, по сравнению с другими растениями без полинуклеотида;

Предпочтительно, растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana;

Предпочтительно гербицид-ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид-ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид-ингибитор HPPD изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно, способ культивации растения сои, которое толерантно к гербициду-ингибитору HPPD, включает посадку по меньшей мере одного семени растения сои, где семя растения сои содержит в своем геноме полинуклеотид; обеспечение роста семени растения сои в растение сои; внесение эффективной дозы гербицида-ингибитора HPPD в среду для выращивания растения, содержащую по меньшей мере растение сои, и сбор растения сои с уменьшенным повреждением растения и/или повышенной урожайностью растения, по сравнению с другими растениями сои, которые не содержат полинуклеотид; где гербицид-ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ получения переработанного сельскохозяйственного продукта, включающий обработку собранного продукта, полученного данным способом из растения, которое толерантно к гербициду-ингибитору HPPD, с получением переработанного сельскохозяйственного продукта.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложена система посадки для борьбы с ростом сорняков, включающая гербицид-ингибитор HPPD и среду для выращивания растения, в которой находится по меньшей мере одно целевое растение, где целевое растение содержит полинуклеотид;

Предпочтительно, целевое растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana; еще более предпочтительно, целевое растение представляет собой растение, толерантное к глифосату, и сорняки представляют собой сорняки, устойчивые к глифосату.

Предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид-ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид-ингибитор HPPD изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно, система посадки для борьбы с ростом сорняков включает гербицид-ингибитор HPPD и среду выращивания растений, в которой находится по меньшей мере одно растение сои, где растение сои содержит полинуклеотид, и гербицид-ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Для достижения указанной выше цели, согласно настоящему изобретению дополнительно предложено применение мутантного пептида -гидроксифенилпируватдиоксигеназы для придания растению толерантности к гербициду - ингибитору HPPD;

Предпочтительно растение включает однодольные растения и двудольные растения; более предпочтительно, растение представляет собой овес, пшеницу, ячмень, просо, кукурузу, сорго, Brachypodium distachyon, рис, табак, подсолнечник, люцерну, сою, cicer arietinum, арахис, сахарную свеклу, огурец, хлопок, масличный рапс, картофель, томат или Arabidopsis thaliana;

Предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD включает гербицид-ингибитор HPPD из класса пиразолинатов, трикетонов и/или изоксазолов; более предпочтительно, гербицид-ингибитор HPPD класса пиразолинатов представляет собой топрамезон, гербицид-ингибитор HPPD класса трикетонов представляет собой мезотрион и гербицид-ингибитор HPPD класса изоксазолов представляет собой изоксафлутол; особенно предпочтительно применение мутантного полипептида - гидроксифенилпируватдиоксигеназы для придания растению сои толерантности к гербициду-ингибитору HPPD, где гербицид-ингибитор HPPD представляет собой топрамезон, мезотрион или изоксафлутол.

Термин в единственном числе, в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к одному или более чем одному (а именно, к по меньшей мере одному). Например, «элемент» означает один или более элементов (компонентов). Кроме того, следует понимать, что термин «содержат» или его варианты, такие как «содержит» или «содержащий», подразумевает включение установленного элемента, целого числа или стадии или группы элементов, целых чисел или стадий, но не исключение любого другого элемента, целого числа или стадии или группы элементов, целых чисел или стадий.

В контексте настоящего изобретения термины «гидроксифенилпируватдиоксигеназа (HPPD)», «4-гидроксифенил пируватдиоксигеназа (4-HPPD)» и «п-гидроксифенилпируватдиоксигеназа (п-HPPD)» являются синонимами.

Термин «гербицид-ингибитор HPPD» относится к гербицидам, которые действуют или прямо или опосредованно с ингибированием HPPD, где гербициды представляют собой отбеливатели. Наиболее коммерчески доступные гербициды-ингибиторы HPPD принадлежат к одному из трех химических семейств, как перечислено ниже: (1) Трикетоны, например, сулкотрион (а именно, 2-[2-хлор-4-(метилсулфонил)бензоил]-1,3-циклогександион), мезотрион (а именно, 2-[4-(метилсульфонил)-2-нитробензоил]-1,3-циклогександион); темботрион (а именно, 2-[2-хлор-4-(метилсульфонил)-3-[(2,2,2-трифторэтокси)метил]бензоил]-1,3-циклогександион); (2) Изоксазолы, например, изоксатлутол (а именно, (5-циклопропил-4-изоксазолил)[2-(метилсульфонил)-4-(трифторметил)фенил]метанон); (3) Пиразолинаты, например, топрамезон (а именно, [3-(4,5-дигиро-3-изоксазолил)-2-метил-4-(метилсульфонил)фенил] (5-гилрокси-1-метилпиразол-4-ил)метанон), пирасульфотол (а именно, (5-гидрокси-1,3-диметилпиразол-4-ил)(2-метилсульфонил-4-(трифторметилфенил)метанон).

В том виде, в котором он используется в данном документе, топрамезон (также известный как BAS-670H), относится к [3-(4,5-дигидро-3-изоксазолил)-2-метил-4-(метилсульфонил)фенил] (5-гилрокси-1-метил-пиразол-4-ил)метанону в виде белого твердого кристаллического вещества. Он представляет собой гербицид - ингибитор HPPD типа системной проводимости из класса пиразолинатов для обработки стеблей и листьев в послевсходовый период в типичной дозировке от 30% концентрата суспензии. Коммерческие композиции попрамезона (такие как Topramezone SC) могут быть использованы для борьбы со злаковыми и широколистными сорняками, в количестве 5,6-6,7 г на акр. Сорняки, с которыми можно эффективно бороться, включают, но не ограничиваются следующими: Digitaria sanguinalis (Calathodes oxycarpa), Barnyard grass, Eleusine indica Gaertn, Eriochloa villosa, Setaria viridis (Giant foxtaif), Chenopodium album, Polygonaceae, Abutilon avicennae, Abutilon theophrasti, Pigweeds, Portulaca oleracea, Xanthium strumarium и Solanum nigrum. Topramezone SC в сочетании с Атразином могут приводить к значимо усиленному эффекту. Помимо прекрасной эффективности на упомянутых выше сорняках, топрамезон может также оказывать хорошие эффекты контроля на злостных широколистных сорняках, таких как Cephaianopios segetum Kitam (Cirsium segestum), Sonchus arvensis, Acaiypha austraiis и Commeiina communis (Asiatic dayflower), и в частности он может эффективно осуществлять борьбу с Setaria viridis, Digitaria sanguinalis, Eleusine indica Gaertn и Eriochloa villosa, с которыми трудно бороться посредством мезотриона.

В том виде, в котором она используется в данном документе, фраза «эффективная доза» топрамезона означает использование в количестве, находящемся от 25 до 100 г а. и./га (грамм активного ингредиента на гектар), включая от 30 до 95 г а. и./га, от 40 до 90 г а. и./га, от 50 до 85 г а. и./га или от 60 до 80 г а. и./га.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «мезотрион» относится к 2-[4 метилсульфонил)-2-нитробензоил]-1,3-циклогександиону в виде коричневого или светло-желтого твердого вещества. Он является селективным гербицидом-ингибитором HPPD системного типа из класса трикетонов, который обеспечивает борьбу с сорняками как в до-, так и послевсходовый период у растений. Он может поглощаться растениями через листья и корни и транслоцироваться сверху вниз от верхней части к нижней части, приводя к симптому хлороза (пожелтение) меристем с последующим некрозом (мертвая ткань) через 3-5 суток после применения гербицида и дальнейшей гибели всех растений. Мезотрион является полезным для до- и послевсходового контроля над однолетними широколистными сорняками и злаковыми сорняками у растений; где однолетние широколистные сорняки, с которыми главным образом можно осуществлять борьбу, включают Xanthium strum ahum, Abutilon theophrasti, Chenopodium album, amaranth, Polygonaceae, Solatium nigrum и Ambrosia trifida; и злаковые сорняки, с которыми могут осуществлять борьбу, главным образом включают молодой ежовник, Digitaria sanguinalis, Setaria viridis и Brachiaria decumbens.

В том виде, в котором она используется в данном документе, фраза «эффективная доза» мезотриона означает применение в количестве от 70 до 420 г а. и./га, включая от 75 до 150 г а. и./га, от 105 до 210 г а. и./га, от 150 до 225 г а. и./га или от 210 до 315 г а. и./га.

В том виде, в котором он используется в данном документе, изоксафлутол относится к 5-цикпопропил-4-изоксазолил)[2-(метилсульфонил)-4-(трифторметил)фенил]метанону в виде белого-бледножелтого твердого вещества. Он представляет собой селективный системный довсходовый гербицид-ингибитор HPPD класса органических гетероциклических изоксазолов и главным образом работает посредством поглощения и транслокации через молодые корни сорняков. Изоксафлутол главным образом полезен для борьбы с разными однолетними широколистными сорняками, такими как Abutilon theophrasti, Chenopodium album, Kochia scoparia, Salsola arbuscula, Solanum nigrum, Amaranthus retroflexus, Polygonum bungeanum, Bidens pilosa, Portuiaca oleracea, Chickweed, Elsholtzia, Xanthium strum ahum, Acalypha australis, Amethystea caerulea, Polygonum Lapathifolium и Veronica polita, в полях засушливых сельскохозяйственных культур, и также обладает хорошей эффективностью борьбы с некоторыми однолетними злаковыми сорняками, такими как Digitaria sanguinalis, Barnyard grass, Eleusine indica Gaertn, Leptochloa chinensis, Setaria faberi и Setaria viridis.

В том виде, в котором она используется в данном документе, фраза «эффективная доза» изоксафлутола означает применение в количестве, находящемся в интервале от 67 до 280 г а. и./га, включая от 70 до 134 г а. и./га, от 70 до 140 г а. и./га, от 134 до 201 г а. и./га или от 140 до 210 г а. и./га.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «устойчивость» является наследственным и позволяет растению расти и размножаться в обстоятельствах, когда эффективную обработку обычным гербицидом проводят на данном растении. Как признает специалист в данной области, даже если существует степень повреждения (как например, небольшой некроз, растворение, хлороз или другое повреждение) в отношении данного растения, обработанного гербицидом, по меньшей мере урожайность не значительно уменьшена, и таким образом растение может все еще считаться «устойчивым». Иными словами данное растение обладает повышенной способностью противостоять разным степеням повреждения, вызванного гербицидом, и, в общем, повреждение растения дикого типа с тем же генотипом может быть обусловлено той же дозой гербицида. Термин «толерантный» или «толерантность» в настоящем изобретении является более широким, чем термин «устойчивый», и включает «устойчивость».

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «придавать» относится к предоставлению растению характеристики или признака, такого как толерантность к гербициду и/или другие желательные признаки.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «гетерологичный» означает из другого источника. В контексте ДНК «гетерологичный» относится к любой чужеродной «не своей» ДНК, включая, ДНК из другого растения того же вида. Например, в настоящем изобретении ген HPPD сои, который может экспрессироваться в растении сои посредством способов трансгенеза, будет все еще считаться «гетерологичной» ДНК.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «нуклеиновая кислота» включает полимер из дезоксирибонуклеотидов или рибонуклеотидов или в одно- или двухцепочечной формах, и если не указано иное, охватывает известные аналоги (например, пептидные нуклеиновые кислоты), имеющие существенные свойства природных нуклеотидов в том, что они гибридизуются с одноцепочечными нуклеиновыми кислотами способом, схожим с нуклеотидами, встречающимися в природе.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «кодирующий» или «кодируемый», при использовании в контексте конкретной нуклеиновой кислота, означает, что нуклеиновая кислота содержит необходимую информацию для направления трансляции нуклеотидной последовательности в конкретный белок. Информация, посредством которой белок кодируется, определяется применением кодонов. Нуклеиновая кислота, кодирующая белок, может содержать нетранслируемые последовательности (например, интроны) в пределах транслируемых областей нуклеиновой кислоты или может не иметь таких промежуточных нетанслируемых последовательностей (например, как в кДНК).

Белки по изобретению могут быть изменены разными путями, включая аминокислотные замены, делеции, усечения и вставки. Например, варианты аминокислотных последовательностей или фрагменты мутантных белков HPPD могут быть получены посредством мутаций в ДНК. Способы индукции полинуклеотидных мутаций хорошо известны в данной области. См., например, Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492; Kunkel et al. (1987) Methods in Enzymol. 154:367-382; U.S. Pat. No. 4873192; Walker и Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York) и ссылки, приведенные в данном документе. Руководство в отношении соответствующих аминокислотных замен, которые часто не влияют на биологическую активность интересующего белка, можно найти в модели Dayhoff et al. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.). Консервативные замены, такие как замена одной аминокислоты другой, обладающей похожими свойствами, могут быть оптимальными.

Как описано в данном документе, мутантные полипептиды HPPD или их варианты и фрагменты обладают ферментативной активностью HPPD и придают растениям толерантность к некоторым классам гербицидов-ингибиторов HPPD. Мутантные полипептиды HPPD имеют замены аминокислот в одном или более положениях относительно исходной последовательности дикого типа, из которой они происходят, и демонстрируют усиленную толерантность к одному или более гербицидам-ингибиторам HPPD. Ферменты HPPD, которые демонстрируют усиленную толерантность к по меньшей мере одному гербициду-ингибитору HPPD, могут вести себя таким образом за счет экспонирования, по сравнению с немутантным исходным ферментом.

ДНК-последовательности, кодирующие такие мутантные полипептиды HPPD, используются в обеспечении растений, растительных клеток и семян по настоящему изобретению, которые предлагают повышенную толерантность к одному или более гербицидам-ингибиторам HPPD, по сравнению с аналогичными растениями, аналогично экспрессирующими немутантный исходный фермент.

Гены HPPD растения, кодирующие такие мутантные полипептиды HPPD, полезны для создания растений, устойчивых к гербицидам-ингибиторам HPPD. Растительные гены HPPD, модифицированные таким образом, особенно подходят для экспрессии в растениях для придания растениям толерантности к гербициду.

Многие последовательности HPPD известны в данной области и могут использоваться для создания мутантных последовательностей HPPD посредством осуществления замен, делеций и/или присоединений в соответствующих аминокислотах. Положение 372 по настоящему изобретению рассчитывают, используя положение аминокислоты в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD Avena native, изложенной в SEQ ID NO: 1, в качестве стандарта. Мутантный полипептид HPPD согласно настоящему изобретению содержит мутацию, встречающуюся в аминокислоте (фенилаланин), соответствующей положению 372 SEQ ID NO: 1, причем мутантные формы представляют собой F372A, F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372C, F372M, F372Q, F372D или делецию F372; предпочтительно F372A, F372G и F372V; и более предпочтительно F372A. Таким образом, известную или предполагаемую последовательность HPPD можно выравнивать по аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, с использованием стандартных инструментов выравнивания последовательностей, и замены или делеций в соответствующих аминокислотах, по сравнению с аминокислотной последовательностью, как изложено в SEQ ID NO: 1, как описано в данном документе, могут быть получены в известной или предполагаемой последовательности HPPD.

Настоящее изобретение включает мутантный полипептид HPPD, который получен из HPPD в растениях или микроорганизмах, обладает ферментативной активностью HPPD и содержит по меньшей мере одну мутацию в положении 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, возможно дополнительно в сочетании с мутацией в других известных положениях (соответствующих положениям, находящимся в полипептиде HPPD), например, в сочетании с одной или более мутациями в следующих соответствующих положениях: Р215, G298, G332, F333, G334, G336 и N337 в аминокислотной последовательности HPPD из Pseudomonas fluorescens, и/или V217, А326, L358 и G408 в аминокислотной последовательности HPPD из Avena; предпочтительно, G336 включает мутантную форму: G336W, G336H, G336M, G336F или G336C; мутация V217 включает мутантную форму V217I; мутация А326 включает мутантную форму A326R; мутация L358 включает мутантную форму L358M; и мутация G408 включает мутантную форму G408A. В разных воплощениях, описанных выше, мутантная форма в положении 372 может представлять собой F372A, F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372C, F372M, F372Q, F372D или делецию F372; предпочтительно, мутантная форма представляет собой F372A, F372G и F372V; и более предпочтительно, мутантная форма представляет собой F372A.

Кроме того, настоящее изобретение включает мутантный полипептид HPPD, который получен из HPPD (посредством замен, делеций и/или присоединений) в растениях или микроорганизмах разных видов или разных экотипов в пределах одного и того же вида. Помимо HPPD из экотипов в пределах вида, как перечислено в примерах настоящего изобретения, иллюстративные HPPD из разных экотипов в пределах одного и того же вида дополнительно включают, но не ограничиваются HPPD из экотипов в пределах следующих видов: HPPD из разных экотипов хлопка с номером доступа: A0A0D2PWQ6, A0A2P5SI66, A0A0D2LWN1 или A0A0D2N7F6; HPPD из Brachypodium distachyon с номером доступа: I1IJR8; HPPD из разных экотипов ячменя с номером доступа: BAJ86732.1, BAJ95714.1 или F2E412; HPPD из разных экотипов просо с номером доступа: ХР_012704274.1 или RCV05326.1; HPPD из разных экотипов риса с номером доступа: A3A3J1, B8AIH6 или A0A0E0G1W2; HPPD из разных экотипов сои с номером доступа: A5Z1N7, I1M6Z4, A0A088MGH9 или I1M6Z5; HPPD из разных экотипов масличного рапса с номером доступа: VDC64417.1, CDY10210.1, AFB74208.1, ХР_013695640.1, ХР_013695641.1, RID40406.1, RID48932.1, ХР_009118533.1, ХР_009119049.1, ХР_013723237.1, AFB74218.1 или AFB74207.1; HPPD из подсолнечника с номером доступа: A0A251VJ25; HPPD из разных экотипов люцерны с номером доступа: ХР_003617391.2, ААХ59006.1, ХР_003617384.1, ХР_013466115.1, АЕТ00342.2 или A0A396HWH5; HPPD из сахарной свеклы с номером доступа: LOC104902719; HPPD из разных экотипов табака с номером доступа: ХР_009770088.1 или ХР_009587203.1; HPPD из картофеля с номером доступа: LOC102595018; HPPD из разных экотипов томата с номером доступа: ХР_004240171.1, NP_001310368.1, ХР_015082678.1 или ADZ24700.1; и HPPD из арахиса с номером доступа: ХР_025608715.1 (данные номера доступа имеются в базе данных GenBank или информационной базе данных UniProt).

В одном воплощении настоящее изобретение включает мутантный полипептид HPPD, который получен из аминокислотной последовательности HPPD из Avena, как изложено в SEQ ID NO: 1 или обладает по меньшей мере примерно 80%-ной, 85%-ной, 90%-ной, 91%-ной, 92%-ной, 93%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной или более высокой идентичностью последовательностей с SEQ ID NO: 1, обладает ферментативной активностью HPPD и содержит по меньшей мере одну мутацию в положении 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, возможно дополнительно в комбинации с другими известными мутациями. В разных воплощениях полипептид может содержать в положении, соответствующем положению 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, следующие мутации: F372A, F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372L, F372I, F372W, F372C, F372N, F372E, F372M, F372Q, F372D, F372K или делеция F372; предпочтительно мутантная форма представляет собой F372A, F372G и F372V; и более предпочтительно мутантная форма представляет собой F372A.

В еще одном воплощении настоящее изобретение включает мутантный полипептид HPPD, который получен из аминокислотной последовательности HPPD из Pseudomonas fluorescens, как изложено в SEQ ID NO: 27, или обладает по меньшей мере примерно 80%-ной, 85%-ной, 90%-ной, 91%-ной, 92%-ной, 93%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной или более высокой идентичностью последовательностей с SEQ ID NO: 27, обладает ферментативной активностью HPPD и содержит по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, возможно в комбинации с другими известными мутациями. В разных воплощениях полипептид может содержать в положении, соответствующем положению 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, следующие мутации: F372A, F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372C, F372M, F372Q, F372D или делеция F372; предпочтительно мутантная форма представляет собой F372A, F372G и F372V; и более предпочтительно мутантная форма представляет собой F372A.

Термин «положение 372» или «372 положение» не только в узком смысле относится к аминокислоте (фенилаланин) в положении 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, но также в широком смысле, включает положение, соответствующее аминокислоте в положении 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, полученное в известной или предполагаемой аминокислотной последовательности HPPD, которую можно выравнивать с аминокислотной последовательностью, как изложено в SEQ ID NO: 1, с использованием стандартных инструментов выравнивания последовательностей (как например, программное обеспечение CLUSTAL), которое могло бы быть положением 372 аминокислотной последовательности данного HPPD.

Термин «соответствующий...» относится к положению, соответствующему аминокислоте в конкретном положении аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, полученному посредством выравнивания аминокислотной последовательности HPPD, которая происходит из отличного вида или отличного экотипа в пределах одного и того же вида, с аминокислотной последовательностью, как изложено в SEQ ID NO: 1, с использованием стандартных инструментов выравнивания последовательностей, как например, положение, соответствующее аминокислоте в положении 372 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1.

Термины «полипептид», «пептид» и «белок» используются взаимозаменяемо в данном документе и относятся к полимеру аминокислотных остатков. Термины относятся к полимерам аминокислот, в которых один или более аминокислотных остатков являются искусственным химическим аналогом соответствующей аминокислоты, встречающейся в природе, а также к полимерам аминокислот, встречающихся в природе. Полипептиды по изобретению могут быть получены или из нуклеиновой кислоты, раскрытой в данном документе, или посредством стандартных методик молекулярной биологии. Например, усеченный белок по изобретению может быть получен посредством экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты по изобретению в соответствующей клетке-хозяине или в качестве альтернативы посредством комбинации процедур ex vivo, таких как расщепление протеазами и очистка.

Соответственно, согласно настоящему изобретению также предложены молекулы нуклеиновых кислот, включая полинуклеотидные последовательности, которые кодируют мутантные полипептиды HPPD, которые обладают ферментативной активностью HPPD и которые придают растениям толерантность к определенным классам гербицидов, которые ингибируют HPPD и его варианты и фрагменты. В общем, изобретение включает любую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует любой из мутантных полипептидов HPPD, описанных в данном документе, а также любую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептиды HPPD, имеющие одну или более консервативных замен аминокислот, по сравнению с мутантными полипептидами HHPD, описанными в данном документе. Консервативные замены, обеспечивающие функционально похожие аминокислоты, хорошо известны в данной области. Каждая из следующих пяти групп содержит аминокислоты, которые представляют собой консервативные замены друг друга: алифатические: глицин (G), аланин (А), валин (V), лейцин (L), изолейцин (I); ароматические: фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W); серосодержащие: метионин (М), цистеин (С); основные: аргинин (I), лизин (K), гистидин (Н); кислые: аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е), аспарагин (N), глутамин (Q).

В одном воплощении согласно настоящему изобретению предложена полинуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность, происходящую из HPPD в растениях или микроорганизмах, где полипептид обладает ферментативной активностью HPPD и содержит по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем аминокислоте в положении 372 SEQ ID NO: 1.

Соответственно, последовательности, которые обладают активностью толерантности в отношении гербицидов-ингибиторов HPPD и гибридизуются с генами, кодирующими мутантные полипептиды HPPD по изобретению, включены в настоящее изобретение. Иллюстративные последовательности обладают по меньшей мере примерно 75%-ной, 80%-ной, 85%-ной, 90%-ной, 91%-ной, 92%-ной, 93%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной или более высокой идентичностью последовательностей с SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 169, и SEQ ID NO: 175 по изобретению.

Любой традиционный способ гибридизации и амплификации нуклеиновых кислот можно использовать для идентификации наличия мутантного гена HPPD по настоящему изобретению. Молекула нуклеиновой кислоты или ее фрагмент способен специфично гибридизоваться с другими молекулами нуклеиновой кислоты в определенных условиях. В настоящем изобретении, если две молекулы нуклеиновой кислоты могут образовывать структуру антипараллельной двухцепочечной нуклеиновой кислоты, тогда можно считать, что две данные молекулы нуклеиновой кислоты могут специфично гибридизоваться друг с другом. Если две молекулы нуклеиновой кислоты демонстрируют полную комплементарность, тогда говорят, что одна молекула нуклеиновой кислоты из двух является «комплементарной» другой молекуле нуклеиновой кислоты. В настоящем изобретении, когда каждый нуклеотид молекулы нуклеиновой кислоты комплементарен соответствующему нуклеотиду другой молекулы нуклеиновой кислоты, тогда говорят, что данные две молекулы нуклеиновой кислоты демонстрируют «полную комплементарность». Если две молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизоваться друг с другом с достаточной стабильностью, что делает возможным их отжиг и связывание друг с другом по меньшей мере в традиционных условиях «низкой жесткости», тогда говорят, что данные две молекулы нуклеиновой кислоты являются «минимально комплементарными». Аналогично, если две молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизоваться друг с другом с достаточной стабильностью, что девает возможным их отжиг и связывание друг с другом по меньшей мере в традиционных условиях «высокой жесткости», тогда говорят, что данные две молекулы нуклеиновой кислоты являются «комплементарными». Отклонение от полной комплементарности является допустимым, при условии, что данное отклонение не полностью препятствует образованию двумя молекулами двухцепочечной структуры. Для обеспечения выполнения молекулой нуклеиновой кислоты функции праймера или зонда, гарантировано только то, что молекула обладает достаточной комплементарностью своей последовательности для обеспечения образования стабильной двухцепочечной структуры в условиях конкретного растворителя и концентрации соли.

В настоящем изобретении по существу гомологичная последовательность представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая может специфично гибридизоваться с комплементарной цепью подходящей молекулы нуклеиновой кислоты в условиях высокой жесткости. Подходящие условия жесткости, которые стимулируют гибридизацию ДНК, хорошо известны специалисту в данной области; например, подходящие жесткие условия могут быть достигнуты посредством обработки 6,0× хлоридом натрия/цитратом натрия (SSC) в условиях приблизительно 45°С и затем промывки 2,0×SSC в условиях 50°С. Например, концентрация соли на стадии промывки может быть выбрана из следующих условий: от условия низкой жесткости примерно 2,0×SSC и 50°С до условия высокой жесткости примерно 0,2×SSC и 50°С. Кроме того, температурные условия на стадии промывки могут возрастать от условий низкой жесткости комнатной температуры (примерно 22°С) до условий высокой жесткости примерно 65°С. И температурные условия и концентрация соли могут варьировать, и также возможно, чтобы один из двух оставался неизменным, в то время как другой меняется. Предпочтительно, жесткие условия в настоящем изобретении могут быть достигнуты посредством специфичной гибридизации с мутантным геном HPPD по настоящему изобретению в 6×SSC, растворе 0,5% SDS при 65°С и затем промывки мембраны каждый раз 2×SSC, 0,1% SDS и 1×SSC, 0,1% SDS.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «осуществление гибридизации» или «осуществление специфичной гибридизации» относится к связыванию, образованию дуплекса или гибридизации молекулы только с конкретной нуклеотидной последовательностью в жестких условиях, когда данная последовательность присутствует в (например, тотальной клеточной) ДНК или РНК смеси комплекса.

Из-за вырожденности генетического кодона, разнообразие разных ДНК-последовательностей может кодировать одну и ту же аминокислотную последовательность. Получение данных альтернативных ДНК последовательностей, кодирующих один и тот же или по существу один и тот же белок, находится в пределах компетентности специалиста в данной области. Данные разные ДНК-последовательности включены в объем настоящего изобретения. «По существу такая же» последовательность относится к последовательности с заменой, делецией, присоединением или вставкой аминокислоты, которая по существу не влияет на активность толерантности к гербициду, и включает фрагмент, сохраняющий активность толерантности к гербициду.

Термин «функциональная активность» или «активность» в настоящем изобретении означает, что белок/фермент, используемый в настоящем изобретении (отдельно или в комбинации с другими белками), обладает способностью осуществлять деградацию гербицида или снижать активность гербицида. Растение, продуцирующее белок по настоящему изобретению, предпочтительно продуцирует «эффективное количество» белка, таким образом, чтобы при обработке растения гербицидом, уровень экспрессии белка был достаточным для того, чтобы придать растению полную или частичную толерантность к гербициду (если не указано иное, в общем количестве). Гербицид можно использовать в количестве, которое обычно уничтожило бы целевое растение или в нормальном полевом количестве и концентрации. Предпочтительно, растительная клетка или растение по настоящему изобретению защищены от подавления или повреждения роста, вызванного обработкой гербицидом. Трансформированное растение и растительная клетка по настоящему изобретению предпочтительно устойчивы к гербицидам - ингибиторам HPPD, то есть, трансформированное растение и растительная клетка могут расти в присутствии эффективной дозы гербицидов-ингибиторов HPPD.

Ген и белок в настоящем изобретении не только содержат конкретную иллюстративную последовательность, но также содержат часть или фрагмент и/или фрагмент (включая внутреннюю делецию и/или концевую делецию, по сравнению с полноразмерным белком), вариант, мутант, вариант белка, замену (белок, имеющий замененные аминокислоты), химеру и слитый белок, которые сохраняют активность толерантности к гербициду-ингибитору HPPD, характерную для конкретного иллюстративного белка.

Термин «вариант» в настоящем изобретении предназначен для обозначения по существу похожих последовательностей. В случае полинуклеотидов вариант содержит делецию и/или присоединение одного или более нуклеотидов в одном или более внутренних сайтах в пределе референсного полинуклеотида и/или замену одного или более нуклеотидов в одном или более сайтах в мутантном полинуклеотиде HPPD. В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «референсный полинуклеотид или полипептид» включает мутантную нуклеотидную последовательность HPPD или аминокислотную последовательность, соответственно. В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «нативный полинуклеотид или полипептид» включает встречающуюся в природе нуклеотидную последовательность или аминокислотную последовательность, соответственно. В случае полинуклеотидов консервативные варианты включают такие последовательности, которые, из-за вырожденности генетического кода, кодируют аминокислотную последовательность одного из мутантных полипептидов HPPD по изобретению. Встречающиеся в природе варианты аллелей, такие как эти, можно идентифицировать с использованием хорошо известных методик молекулярной биологии, например, посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) и методик гибридизации, как изложено ниже. Варианты полинуклеотидов также включают полипептиды синтетического происхождения, такие как полинуклеотиды, образованные, например, посредством использования сайт-направленного мутагенеза, но которые все еще кодируют мутантный белок HPPD по изобретению. Обычно, варианты конкретного полинуклеотида по изобретению будут обладать по меньшей мере примерно 75%-ной, 80%-ной, 85%-ной, 90%-ной, 91%-ной, 92%-ной, 93%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной или более высокой идентичностью последовательностей с последовательностью конкретного полинуклеотида, как определено посредством программ и параметров выравнивания последовательностей.

Подразумевается, что термин «вариант белка» в настоящем изобретении обозначает белок, полученный из референсного белка в результате делеций или добавления одной или более аминокислот в одном или более внутренних сайтах в мутантном белке HPPD и/или замены одной или более аминокислот в одном или более сайтах в мутантном белке HPPD. Варианты белков, охваченные настоящим изобретением, являются биологически активными, то есть они продолжают обладать желательной биологической активностью мутантного белка HPPD, а именно, ферментативной активностью HPPD и/или толерантностью к гербициду, как описано в данном документе. Такие варианты могут являться результатом, например, генетического полиморфизма или манипуляций, осуществляемых человеком. Биологически активные варианты мутантного белка HPPD по изобретению будут обладать по меньшей мере примерно 85%-ной, 90%-ной, 91%-ной, 92%-ной, 93%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной или более высокой идентичностью последовательностей по всей аминокислотной последовательности для мутантного белка HPPD, как определено посредством программ и параметров выравнивания последовательностей. Биологически активный вариант белка по изобретению может отличаться от того белка по только лишь 1-15 аминокислотным остаткам, только лишь 1-10, как например, 6-10, только лишь 5, только лишь 4, 3, 2 или даже 1 аминокислотному остатку.

Способы выравнивания последовательностей хорошо известны в данной области и могут быть выполнены с использованием математических алгоритмов, таких как алгоритм Myers and Miller (1988) CABIOS 4:11-17; локальный алгоритм выравнивания Smith et al. (1981) Adv. Appl. Math. 2:482; глобальный алгоритм выравнивания Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453; и алгоритм Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 872264, модифицированный как в Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Компьютерные реализации данных математических алгоритмов можно использовать для сравнения последовательностей для определения идентичности последовательностей. Такие реализации включают, но не ограничиваются следующими: CLUSTAL в программе PC/Gene (доступна у Intelligenetics, Mountain View, Калифорния); программа ALIGN (версия 2.0) и GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA и TFASTA в пакете программ GCG Wisconsin Genetics, версия 10 (доступна у Accelrys Inc., 9685 Scranton Road, San Diego, Калифорния, США).

В некоторых примерах, аминокислоты, кодирующие мутантные полипептиды HPPD или их варианты, которые сохраняют ферментативную активность HPPD, могут быть суммированы с любой комбинацией интересующих полинуклеотидных последовательностей для создания растения с желательным признаком. Термин «признак» относится к фенотипу, происходящему из конкретной последовательности или групп последовательностей. Например, аминокислоты/полинуклеотиды, кодирующие мутантный полипептид HPPD или его вариант, который сохраняет ферментативную активность HPPD, могут быть суммированы с любыми другими полинукпеотидами, кодирующими полипептиды, которые придают желательный признак, включая, но, не ограничиваясь нижеследующим: устойчивость к заболеваниям, насекомым и гербицидам, устойчивость к тепловому воздействию и засухе, уменьшенное время созревания сельскохозяйственных культур, улучшенная промышленная обработка, как например, для превращения крахмала или биомассы в ферментируемые сахара, и улучшенное агрономическое качество, как например, высокое содержание масла и высокое содержание белка.

Специалисту в данной области хорошо известно, что польза от комбинации двух или более способов действия в улучшении спектра контролируемых сорняков, и/или борьбы с видами, более устойчивыми от природы, или устойчивыми видами сорняка, может также распространятся на химические вещества, в отношении которых толерантность к гербициду была обеспечена в сельскохозяйственных культурах посредством искусственных способов (или трансгенно или нетрансгенно) помимо HPPD-устойчивых сельскохозяйственных культур. Фактически, признаки, кодирующие следующие виды устойчивости, могут быть совмещены отдельно или во множестве комбинаций для обеспечения способности эффективно контролировать или предотвращать переключение сорняка на гербициды: устойчивость к глифосату (как например, EPSPS, GOX и GAT из устойчивых растений или бактерий), устойчивость к глюфосинату (как например, PAT и Ваг), толерантность к гербициду - к ингибиторам ацетолактатсинтазы (ALS - от англ. acetolactate synthase) (как например, имидазолиноны, сульфонилмочевина, триазолпиримидины, сульфонированный анилин, пиримидинилтиобензойные кислоты и гены устойчивости к другим химическим веществам, например, AHAS, Csrl и SurA), толерантность к гербициду феноксиауксин (как например, арилоксиалканоатдиоксигеназа-12 (AAD-12)), толерантность к гербициду дикамба (как например, дикамбамонооксигеназа (DMO - от англ. dicamba monooxygenase)), устойчивость к бромоксинилу (как например, Вхп), устойчивость к ингибитору фитоендесатуразы (PDS - от англ. phytoene desaturase), толерантность к гербициду - ингибиторам фотосистемы II (как например, psbA), толерантность к гербициду -ингибиторам фотосистемы I, толерантность к гербициду - ингибиторам протопорфириногеноксидазы IX (РРО - от англ. protoporphyrinogen oxidase) (как например, РРО-1), толерантность к гербициду на основе фенилмочевины (как например, CYP76B1) и ферментам, деградирующим дихлорметоксибензойную кислоту.

Глифосат широко используется, поскольку он борется с очень широким спектром широколистных и злаковых видов сорняков. Однако, повторное применение глифосата в сельскохозяйственной культуре, устойчивой к глифосату, и несельскохозяйственные применения привели к (и будут продолжать) переключению с сорняка на вид, по природе более устойчивый, или биотипы, устойчивые к глифосату. Большинство программ по управлению толерантностью к гербициду предлагают использование эффективной дозы «партнеров»-гербицидов танковой смеси в качестве средства задержки появления устойчивых сорняков, где «партнеры»-гербициды обеспечивают контроль над тем же видом, но имеют отличные способы действия. Совмещение гена, кодирующего мутантный полипептид HPPD по настоящему изобретению, с признаком устойчивости к глифосату (и/или признаками устойчивости к другому гербициду) может достигать контроля над видом сорняка, устойчивого к глифосату (широколистный вид сорняка, контролируемый одним или более гербицидами-ингибиторами HPPD) в сельскохозяйственных культурах, устойчивых к глифосату, посредством обеспечения селективного использования глифосата и гербицидов-ингибиторов HPPD (таких как топрамезон, мезотрион или изоксафлутол) в той же сельскохозяйственной культуре. Применения данных гербицидов могут быть проведены одновременно в танковой смеси, содержащей два или более гербицидов с разными способами действия, или могут быть проведены отдельно в одной композиции гербицида в последовательных применениях (например, перед посадкой или перед или после всходов) (с временным интервалом применений, находящимся в диапазоне от 2 часов до 3 месяцев); или в качестве альтернативы применения данных гербицидов можно проводить посредством использования комбинации любого числа гербицидов, характеризующих каждую категорию применимых соединений в любой момент времени (от 7 месяцев после посадки сельскохозяйственной культуры до времени, когда сельскохозяйственную культуру собирают (или интервал до сбора урожая в случае одного гербицида, где взят самый короткий)).

Гибкость при борьбе с широколистными сорняками очень важна, с точки зрения времени применения, количества применения одного гербицида и способностей бороться с устойчивыми или резистентными сорняками. Диапазон применения глифосата, совмещаемого с геном устойчивости к глифосату/мутантным геном HPPD, в сельскохозяйственных культурах может составлять от 250 до 2500 г а.и./га (а.и./га - «активный ингредиент на гектар»). Диапазон применения гербицидов-ингибиторов HPPD (одного или более) может составлять от 25 до 500 г а.и./га. Оптимальная комбинация времени для данных применений зависит от конкретных условий, видов и окружающей среды.

Композиция гербицида (например, сложный эфир, кислота или солеобразование, или растворимый концентрат, эмульгируемый концентрат или растворимая жидкость) и добавка танковой смеси (например, адъювант или совместимый агент) могут значимо влиять на борьбу с сорняком на основе данного гербицида или комбинации одного или более гербицидов. Любая химическая комбинация любых указанных выше гербицидов находится в пределах объема настоящего изобретения.

Кроме того, ген, кодирующий мутантный полипептид HPPD по настоящему изобретению, в отдельности или в совокупности с другими характеристиками сельскохозяйственных культур, устойчивых к гербициду, можно объединять с одним или более другими входными признаками (например, устойчивость к насекомому, устойчивость к грибам или устойчивость к стрессу и т.д.) или выходными признаками (например, повышенная урожайность, улучшенное количество масла, повышенное качество волокна и т.д.). Таким образом, настоящее изобретение можно использовать для предоставления готовых решений в сельском хозяйстве для улучшения качеств сельскохозяйственных культур со способностями для осуществления гибкого и экономичного контроля над любым количеством сельскохозяйственных вредителей.

Данные суммарные комбинации можно создавать любым способом, включая, но, не ограничиваясь скрещиванием растений посредством любой общепринятой методологии или методологии TopCross или генетической трансформации. Если последовательности объединяют посредством генетической трансформации растений, интересующие полинуклеотид ные последовательности можно объединять в любой момент времени и в любом порядке. Например, трансгенное растение, содержащее один или более желательных признаков, можно использовать в качестве мишени для введения дополнительных признаков посредством последующей трансформации. Признаки могут быть введены одновременно в протоколе совместной трансформации с интересующими полинуклеотидами, предоставленными любой комбинацией кассет для трансформации. Например, если будут вводить две последовательности, данные две последовательности могут содержаться в отдельных кассетах для трансформации (trans) или содержаться на одной и той же кассете для трансформации (cis). Экспрессией последовательностей может управлять один и тот же промотор или разные промоторы. В некоторых случаях может быть желательным вводить кассету для трансформации, которая будет подавлять экспрессию интересующего полинуклеотида. Данную кассету для трансформации можно объединять с любой комбинацией других кассет для супрессии или кассет для сверхэкспрессии для создания желательной комбинации признаков в растении. Дополнительно следует признать тот факт, что полинуклеотидные последовательности можно объединять при желательном положении в геноме с использованием системы сайт-специфичной рекомбинации.

Ген, кодирующий мутантный полипептид HPPD согласно настоящему изобретению, обладает более высокой толерантностью к гербицидам-ингибиторам HPPD, который является важной основой для возможностей получения сельскохозяйственных культур, толерантных к гербициду, и селектируемого маркера признака.

Термин «экспрессионная кассета», в том виде, в котором он используется в данном документе, означает молекулу нуклеиновой кислоты, способную направлять экспрессию конкретной нуклеотидной последовательности в соответствующей клетке-хозяине, содержащую промотор, эффективно связанный с интересующей нуклеотидной последовательностью (а именно, полинуклеотидом, кодирующим мутантный полипептид HPPD или его вариант, который сохраняет ферментативную активность HPPD, отдельно или в комбинации с одной или более дополнительными молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими полипептиды, которые придают желательные признаки), которая эффективно связана с сигналами терминации. Кодирующая область обычно кодирует интересующий белок, но может также кодировать интересующую функциональную РНК, например, антисмысловую РНК или нетранслируемую РНК, в смысловом или антисмысловом направлении. Экспрессионная кассета, содержащая интересующую нуклеотидную последовательность, может быть химерной, что означает, что по меньшей мере один из ее компонентов является гетерологичным в отношении по меньшей мере одного из ее других компонентов. Экспрессионная кассета может также представлять собой экспрессионную кассету, которая встречается в природе, но получена в рекомбинантной форме, полезной для гетерологичной экспрессии. Обычно, однако, экспрессионная кассета является гетерологичной в отношении хозяина, а именно, конкретная ДНК-последовательность экспрессионной кассеты не встречается в природе в клетке-хозяине и должна быть введена в новую клетку-хозяина посредством события трансформации. Экспрессия нуклеотидной последовательности в экспрессионной кассете может находиться под контролем конститутивного промотора или индуцибельного промотора, который инициирует транскрипцию, только когда клетка-хозяин подвергается действию некоторых конкретных внешних стимулов. Дополнительно, промотор может также быть специфичным в отношении конкретной ткани или органа или стадии развития.

Настоящее изобретение охватывает трансформацию растений экспрессионными кассетами, способными экспрессировать интересующий полинуклеотид (а именно, полинуклеотид, кодирующий мутантный полипептид HPPD или его вариант, который сохраняет ферментативную активность HPPD отдельно или в комбинации с одной или более дополнительными молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими полипептиды, которые сообщают желательные признаки). Экспрессионная кассета будет включать в 5'-3' наравлении транскрипции область инициации транскрипции и трансляции (а именно, промотор) и открытую рамку считывания полинуклеотида. Экспрессионная кассета может, возможно, содержать область терминации транскрипции и трансляции (а именно, область терминации), функциональную в растениях. В некоторых воплощениях экспрессионная кассета содержит ген селектируемого маркера для обеспечения селекции стабильных трансформантов. Экспрессионные конструкции по изобретению могут также содержать лидерную последовательность и/или последовательность, делающую возможной индуцибельную экспрессию интересующего полинуклеотида.

Регуляторные последовательности экспрессионной конструкции эффективно связаны с интересующим полинуклеотидом. Регуляторная последовательность в настоящем изобретении включает промотор, транзитный пептид, терминатор, энхансер, лидерную последовательность, интрон и другие регуляторные последовательности, функционально связанные с геном толерантности к гербициду, кодирующим мутантный пептид HPPD, но не ограничивается ими.

Промотор представляет собой растительный экспрессируемый промотор. «Растительный экспрессируемый промотор» относится к промотору, который обеспечивает экспрессию кодирующей последовательности, связанной с ним, в растительной клетке. Растительный экспрессируемый промотор может представлять собой конститутивный промотор. Примеры промоторов, направляющих конститутивную экспрессию в растениях, включают, но не ограничиваются нижеследующим: промотор 35S, происходящий из вируса мозаики цветной капусты, промоторы Ubi кукурузы, промоторы гена GOS2 риса и тому подобное. В качестве альтернативы, растительный экспрессируемый промотор может представлять собой тканеспецифичный промотор, то есть промотор направляет экспрессию кодирующей последовательности в нескольких тканях, таких как зеленые ткани, на уровне, выше чем в других тканях растения (который можно измерить посредством общепринятых исследований РНК), такой как промотор ФЕП-карбоксилазы (Фосфоенолпируваткарбоксилаза). В качестве альтернативы, растительный экспрессируемый промотор может представлять собой промотор, индуцируемый поранением. Промотор, индуцируемый поранением, или промотор, направляющий профиль экспрессии, индуцируемой поранением, означает, что когда растение страдает от поранения, вызванного механическим фактором или обгладыванием насекомыми, экспрессия кодирующей последовательности под регуляцией промотора значимо улучшается, по сравнению с условиями нормального роста. Примеры промоторов, индуцируемых поранением, включают промоторы генов ингибиторов протеазы картофеля и томата (pin I и pin II) и гена ингибитора протеазы кукурузы (MPI), но, не ограничиваются ими.

Транзитный пептид (также известный как сигнальная последовательность секреции или последовательность нацеливания) направляет трансгенный продукт в конкретную органеллу или клеточный компартмент.В случае рецепторного белка транзитный пептид может быть гетерологичным, например, нацеливаясь на хлоропласт с использованием последовательности, кодирующей транзитный белок хлоропласта, или нацеливаясь на эндоплазматический ретикулум с использованием последовательности удерживания «KDEL», или нацеливаясь на вакуоль с использованием СТРР гена фитолектина ячменя.

Лидерная последовательность включает, но не ограничивается нижеследующим: лидерная последовательность вирусов, содержащих малую РНК, как например, лидерная последовательность EMCV (5' некодирующая область вируса энцефаломиокардита); лидерная последовательность вируса картофеля группы Y, как например, лидерная последовательность MDMV (от англ. Maize Dwarf Mosaic Virus - вирус карликовой мозаики кукурузы); белок, связывающий тяжелую цепь иммуноглобулина человека (BiP); нетранслируемая лидерная последовательность мРНК белка оболочки вируса мозаики люцерны (AMV (от англ. alfalfa mosaic virus) RNA4); и лидерная последовательность вируса мозаики табака (TMV - от англ. tobacco mosaic virus).

Энхансер включает, но не ограничивается нижеследующим: энхансер вируса мозаики цветной капусты (CaMV - от англ. cauliflower mosaic virus), энхансер вируса мозаики норичника (FMV - от англ. figwort mosaic virus), энхансер вируса кольцевой гравировки гвоздики (CERV - от англ. carnation etched ring virus), энхансер вируса мозаики прожилок маниока (CsVMV - от англ. cassava vein mosaic virus), энхансер вируса мозаики мирабилис (MMV - от англ. mirabilis mosaic virus), энхансер вируса курчавости желтых листьев цеструм (CmYLCV - от англ. cestrum yellow leaf curling virus), энхансер вируса курчавости листьев хлопка (CLCuMV- от англ. cotton leaf curl Multan virus), энхансер вируса пятнистости желтых листьев коммелины (CoYMV - от англ. commelina yellow mottle virus) и энхансер колимовируса хлорозных жилок арахиса (PCLSV- от англ. peanut chlorotic streak caulimovirus).

Для применения у однодольного растения интрон включает, но не ограничивается нижеследующим: интрон hsp70 кукурузы, интрон убиквитина кукурузы, интрон Adh 1, интрон сахарозосинтазы или интрон Act1 риса. Для применения у двудольного растения интрон включает интрон САТ-1, интрон pKANNIBAL, интрон PIV2 и интрон «суперубиквитина», но не ограничивается ими.

Терминатор может представлять собой подходящую сигнальную последовательность полиаденилирования, которая функционирует в растении, включая сигнальную последовательность полиаденилирования, происходящую из гена нопалинсинтетазы Agrobacterium tumefaciens (NOS - от англ. nopaline synthetase), сигнальную последовательность полиаденилирования, происходящую из гена ингибитора протеазы II (pinll), сигнальную последовательность полиаденилирования, происходящую из гена ssRUBISCO Е9 гороха, и сигнальную последовательность полиаденилирования, происходящую из гена α-тубулина, но, не ограничиваясь ими.

Фраза «эффективное связывание» в настоящем изобретении указывает на связывание последовательностей нуклеиновой кислоты, которое позволяет одной из последовательностей обеспечивать функцию, требуемую для последовательности, связанной с ней. «Эффективное связывание» в настоящем изобретении может связывать промотор с интересующей последовательностью, таким образом, что транскрипцию интересующей последовательности контролирует и регулирует промотор. Когда интересующая последовательность кодирует белок, и экспрессия данного белка является желательной, «эффективное связывание» означает, что: промотор связан с последовательностью таким образом, что полученный транскрипт эффективно транслируется. Если связывание промотора с кодирующей последовательностью представляет собой слияние транскрипта, и нужно достичь экспрессии кодируемого белка, получается такое связывание, что первый кодон инициации трансляции в полученном транскрипте представляет собой кодон инициации в кодирующей последовательности. В качестве альтернативы, если связывание промотора с кодирующей последовательностью представляет собой слияние трансляции, и должна достигаться экспрессия кодируемого белка, получается такое связывание, что первый кодон инициации трансляции, содержащийся в 5'-нетранслируемой последовательности, связан с промотором таким образом, что взаимосвязь полученного продукта трансляции с открытой рамкой считывания трансляции, кодирующей желательный белок, находится внутри рамки. Последовательности нуклеиновых кислот, которые могут быть «эффективно связаны», включают, но не ограничиваются нижеследующим: последовательности, обеспечивающие функции экспрессии генов (а именно, элементы экспрессии генов, такие как промоторы, 5'-нетранслируемые области, интроны, области, кодирующие белок, 3'-нетранслируемые области, сайты полиаденилирования и/или терминаторы транскрипции), последовательности, обеспечивающие перенос ДНК и/или функции интеграции (а именно, пограничные последовательности Т-ДНК, сайты распознавания сайт-специфичной рекобиназы и сайты распознавания интегразы), последовательности, обеспечивающие селективные функции (а именно, маркеры устойчивости к антибиотикам и гены биосинтеза), последовательности, обеспечивающие функции оценивания маркера, последовательности, помогающие в манипуляции с последовательностями, in vitro или in vivo (а именно, полилинкерные последовательности и последовательности сайт-специфичной рекомбинации), и последовательности, обеспечивающие функции репликации (а именно, бактериальные точки начала репликации, автономно реплицирующиеся последовательности и центромерные последовательности).

Геном растения, растительной ткани или растительной клетки в настоящем изобретении относится к любому генетическому материалу в пределах растения, растительной ткани или растительной клетки, и включает ядерный, пластидный и митохондриальный геномы.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «часть растения» или «растительная ткань» включает растительные клетки, растительные протопласты, культуры растительных клеточных тканей, из которых можно регенерировать растения, растительные каллусы, растительные фрагменты и растительные клетки, которые являются интактными в растениях и частях растений, таких как зародыши, пыльца, семязачатки, семена, листья, цветы, ветки, плоды, косточки, колосья, початки, колосковая чешуя, цветоножки, корни, корневые кончики, пыльники и т.п.

Мутантный полипептид HPPD по настоящему изобретению может применяться к разным типам растений. Двудольное растение включает, но не ограничивается следующими двудольными растениями: люцерна, фасоль, цветная капуста, белокочанная капуста, морковка, сельдерей, хлопок, огурец, баклажан, салат-латук, дыня, горошек, перец, цуккини, редиска, масличный рапс, шпинат, соя, тыква, томат, Arabidopsis thaliana, арахис или арбуз; предпочтительно двудольное растение относится к огурцу, сое, Arabidopsis thaliana, табаку, хлопку или масличному рапсу. Однодольное растение включает кукурузу, рис, сорго, пшеницу, ячмень, рожь, просо, сахарный тростник, овес или газонную траву, но не ограничивается ими Предпочтительно, однодольное растение относится к кукурузе, рису, сорго, пшенице, ячменю, просо, сахарному тростнику или овсу.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «трансформация растения» означает, что как только мутантный полинуклеотид HPPD, резистентный или толерантный к гербициду, отдельно или в комбинации с одной или более дополнительными молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими полипептиды, которые придают желательные признаки, заклонирован в экспрессионную систему, им трансформируют растительную клетку. Рецепторы и целевые экспрессионные кассеты по настоящему изобретению можно вводить в растительную клетку множеством путей, принятых в данной области. Термин «введение» в контексте полинуклеотида, например, интересующей нуклеотидной конструкции, предназначен для обозначения предоставления растению полинуклеотида таким образом, чтобы полинуклеотид получил доступ к внутренней части клетки растения. Когда более чем один полинуклеотид подлежит введению, данные полинуклеотиды могут быть собраны как часть одной нуклеотидной конструкции или в виде отдельных нуклеотидных конструкций, и могут быть расположены на одном и том же или разных векторах для трансформации. Соответственно, данные полинуклеотиды могут быть введены в интересующую клетку-хозяина в одном событии трансформации, в отдельных событиях трансформации или, например, в растениях, в качестве части протокола скрещивания. Способы по изобретению не зависят от конкретного способа введения одного или более полинуклеотидов в растение, за исключением того, что полинуклеотид(ы) получает(ют) доступ к внутренней части по меньшей мере одной клетки растения. Способы введения одного или более полинуклетидов в растения известны в данной области, включая способы временной трансформации, способы стабильной трансформации и способы, опосредованные вирусом, или методики редактирования генома, но, не ограничиваясь ими.

Термин «стабильная трансформация» означает, что экзогенный ген вводят в геном растения, и он стабильно интегрирует в растение или его геном любых последующих поколений, таким образом, что экзогенный ген стабильно наследуется.

Термин «транзиентная трансформация» означает, что молекулу нуклеиновой кислоты или белок вводят в растительную клетку для выполнения функции, но она не интегрирует в геном растения, таким образом, что экзогенный ген не может стабильно наследоваться.

Термин "методика редактирования генома» относится к методикам, используемым для модификации генома, которые способны точно управлять последовательностями генома для реализации операций, таких как сайт-направленные мутации генов, вставки и делеции. В настоящее время, методики редактирования генома главным образом включают технологии на основе самонаводящихся эндонуклеаз (НЕ - от англ. homing endonuclease), цинк-пальцевых нуклеаз (ZFN - от англ. zinc-finger nuclease), эффекторных нуклеаз, подобных активатору транскрипции (TALEN - от англ. transcription activator-like effector nuclease) и коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами (CRISPR - от англ. Clustered regulatory interspaced short palindromic repeat).

Многочисленные векторы для трансформации, доступные для трансформации растения, известны специалистам в данной области, и гены, относящиеся к данному изобретению, можно использовать совместно с любыми такими векторами. Выбор вектора будет зависеть от предпочтительной методики трансформации и целевых видов для трансформации. Для некоторых целевых видов разные селективные маркеры в отношении антибиотика или гербицида могут быть предпочтительными. Селективные маркеры, повседневно используемые в трансформации, включают ген nptll (который опубликован Bevan et al., Nature 304:184-187 (1983)), который придает устойчивость к канамицину и родственным антибиотикам или гербицидам; гены pat и bar, которые придают толерантность к гербициду глюфосинат (также называемому фосфинотрицином; см. White et al., Nucl. Acids Res 18: 1062 (1990), Spencer et al. Theon. Appl. Genet. 79: 625-631 (1990) и пат. США №№5561236 и 5276268); ген hph, который придает устойчивость к антибиотику гигромицин (Blochinger & Diggelmann, Mol. Cell. Biol. 4: 2929-2931); ген dhfr, который придает устойчивость к метатрексату (Bourouis et al., EMBO J. 2(7): 1099-1104 (1983)); ген EPSPS, который придает устойчивость к глифосату (пат. США №№4940935 и 5188642); ген глифосат N-ацетилтрансферазы (GAT от англ. glyphosate N-acetyltransferase), который также придает устойчивость к глифосату (Castle et al. (2004) Science, 304:1151-1154; Патентная заявка США №№20070004912, 20050246798 и 20050060767); и ген маннозо-6-фосфатизомеразы, который обеспечивает способность метаболизировать маннозу (Пат. США №№5767378 и 5994629).

Способы регенерации растений также хорошо известны в данной области. Например, для доставки чужеродной ДНК использовали плазмидные векторы Ti, а также непосредственное поглощение ДНК, липосомы, электропорацию, микроинъекцию и бомбардирующие микрочастицы.

Система посадки в настоящем изобретении относится к комбинации растения и его любой толерантности к гербициду и/или обработки гербицидом, доступной на разных стадиях развития растения, таким образом, с получением растения с высокой урожайностью и/или с уменьшенным повреждением.

В настоящем изобретении сорняки относятся к растениям, конкурирующим с культивируемыми целевыми растениями в среде роста растений.

Термин «борьба» и/или «предупреждение» в настоящем изобретении относится к по меньшей мере непосредственному внесению (например, посредством распыления) эффективной дозы гербицида-ингибитора HPPD в среду для роста растения, таким образом, чтобы минимизировать развитие сорняков и/или остановить рост сорняков. В то же самое время, культивируемые целевые растения должны быть морфологически нормальными и могут культивироваться в традиционных способах потребления и/или получения продукта; и предпочтительно, по сравнению с нетрансгенными растениями дикого вида, у культивируемых растений уменьшилось повреждение растения и/или повысилась урожайность растения. Уменьшенное повреждение растения включает улучшенную устойчивость стебля и/или улучшенную массу зерна и т.д., но не ограничивается этим. Эффект «борьбы» и/или «предупреждения», оказываемый мутантным полипептидом HPPD на сорняки, может существовать независимо и не будет уменьшен, и/или потерян из-за наличия других веществ, которые могут «бороться с» и/или «предупреждать» сорняки. В частности, если какая-либо ткань трансгенного растения (содержащего ген, кодирующий мутантный полипептид HPPD) имеет и/или продуцирует мутантный полипептид HPPD и/или другое вещество, которое может бороться с сорняками одновременно и/или в отдельности, тогда наличие другого вещества не будет ни влиять на эффект «борьбы с» и/или «предупреждения» мутантного полипептида HPPD на сорняки, ни приводить к эффекту «борьбы» и/или «предупреждения», полностью и/или частично достигаемому другим веществом, независимо от мутантного полипептида HPPD.

«Пропагула растения» в настоящем изобретении включает, но не ограничивается половыми пропагулами растения и вегетативными пропагулами растения. Половые пропагулы растения включают семена растения, но не ограничиваются ими; и вегетативные пропагулы растения относятся к вегетативным органам или конкретной ткани растения, которые могут образовывать новое растение в условиях ex vivo. Вегетативные органы или конкретная ткань включают корни, стебли и листья, но не ограничиваются ими, например: растения с корнями в качестве вегетативных пропагул, включающие клубнику, батат и т.п.; растения со стеблями в качестве вегетативных пропагул, включающие сахарный тростник, картофель (клубни) и т.п.; и растения с листьями в качестве вегетативных пропагул, включающие алоэ, бегонии и т.п.

Настоящее изобретение может также придавать растению новый признак толерантности к гербициду, и не наблюдается никаких негативных эффектов, оказываемых на фенотипы (включая урожайность). Растение в настоящем изобретении может выдерживать, например, 2×, 3×, 4× или 5× уровень общего применения по меньшей мере одного тестируемого гербицида. Улучшение данных уровней устойчивости находится в пределах объема настоящего изобретения. Например, прогнозируемую оптимизацию и дополнительное развитие можно проводить на разных методиках, известных в данной области, для повышения уровня экспрессии данного гена.

Согласно настоящему изобретению предложен мутантный полипептид HPPD, кодирующий его ген и его применение, обладающий следующими преимуществами:

1. Во-первых, настоящее изобретение раскрывает, что разные формы мутаций (предпочтительно мутаций из фенилаланина в аланин, глицин или валин), встречающиеся в положении 372 полипептида HPPD, происходящего из разных видов или разных экотипов в пределах одного и того же вида, могут придавать растениям более высокую толерантность к гербицидам -ингибиторам HPPD, и, в частности, толерантность к четырехкратной полевой концентрации топрамезона, и, таким образом, имеют очень большую перспективу применения в растениях.

2. Мутация в положении 372 полипептида HPPD по настоящему изобретению в комбинации с мутациями в других положениях также может придавать растениям толерантность ктопрамезону.

Техническое решение по настоящему изобретению дополнительно подробно проиллюстрировано ниже посредством графических материалов и примеров.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 представляет собой схематичную структурную диаграмму рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02 для Arabidopsis thaliana согласно настоящему изобретению;

Фиг. 2 представляет собой фотографию, показывающую толерантность растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые был введен ген HPPD Avena sativa (немутантный и мутантный) к топрамезону согласно настоящему изобретению (А: растения Arabidopsis thaliana дикого типа; В: растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые был введен нуклеотид AsHPPD-02; С: растения Arabidopsis thaliana, в которые была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02);

Фиг.3 представляет собой филогенетическое дерево HPPD из разных видов согласно настоящему изобретению;

Фиг. 4 представляет собой серию фотографий, показывающих толерантность растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые были введены гены HPPD (немутантные и мутантные) из разных источников, к топрамезону согласно настоящему изобретению (А: растения Arabidopsis thaliana дикого типа; В: растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые были введены немутантные гены HPPD (оптимизированы в соответствии с предпочтением кодонов); С: растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые были введены мутантные гены HPPD (F372A));

Фиг. 5 представляет собой схематичную структурную диаграмму контрольного рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375NN согласно настоящему изобретению;

Фиг. 6 представляет собой схематичную структурную диаграмму рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11950, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02 для Oryza sativa согласно настоящему изобретению;

Фиг. 7 представляет собой серию фотографий, показывающих толерантность растения сои в которые был введен мутантный ген HPPD, к топрамезону согласно настоящему изобретению (А: растения сои Т₁, в которые был введет контрольный вектор DBN11375NN; В: растения сои Т₁, в которые была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02; С: растения сои Т₁, в которые была введена нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372A-02; D: растения сои Т₁, в которые была введена нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-02; Е: растения сои T₁, в которые была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-A110; F: растения сои Т₁, в которые введена нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-G413W).

Подробное описание изобретения

Воплощения мутантного полипептида гидроксифенилпируватдиоксигеназа, кодирующего его гена и его применения согласно настоящему изобретению будут дополнительно проиллюстрированы в конкретных примерах.

Пример 1: Выбор положения 372 AsHPPD для мутации и проверка эффекта мутации

1. Получение генов AsHPPD и AsHPPDm-F372A

Аминокислотная последовательность (440 аминокислот) нативного HPPD Avena sativa (AsHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 1 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность AsHPPD-01 (1323 нукпеотида), кодирующая AsHPPD, изложена как SEQ ID NO: 2 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность AsHPPD-02, кодирующая AsHPPD, который получен на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена, как SEQ ID NO: 3 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности AsHPPD мутировало из исходного фенилаланина (F) в аланин (А) с получением мутантной аминокислотной последовательности AsHPPD (AsHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 4 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность AsHPPD-01 (AsHPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 5 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02, кодирующая AsHPPDm-F372A, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена как SEQ ID NO: 6 в перечне последовательностей.

2. Синтез указанных выше нукпеотидных последовательностей

5'- и 3'-Концы синтезированной нуклеотидной последовательности AsHPPD-02 (SEQ ID NO: 3) и нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-02 (SEQ ID NO: 6) соответственно связывали с универсальным праймером-адаптером 1:

Универсальный праймер-адаптер 1 для 5'-конца: 5'-agtttttctgattaacagactagt-3', как изложено в SEQ ID NO: 399 в перечне последовательностей; и

Универсальный праймер-адаптер 1 для 3'-конца: 5'-caaatgtttgaacgatcggcgcgcc-3', как изложено в SEQ ID NO: 400 в перечне последовательностей.

3. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих гены HPPD Avena sativa (F372A), для Arabidopsis thaliana

Растительный экспрессионный вектор DBNBC-01 подвергали двойному расщеплению с использованием рестриктаз Spe I и Asc I для линеаризации растительного экспрессионного вектора. Продукт расщепления очищали с получением линеаризованного каркаса экспрессионного вектора DBNBC-01 (каркас вектора: pCAMBIA2301 (который имеется в продаже от CAMBIA)), который затем подвергался реакции рекомбинации с нуклеотидной последовательностью AsHPPDm-F372A-02, связанной с универсальным праймером-адаптером 1, в соответствии с процедурой согласно инструкциям набора для «бесшовного» соединения продуктов Takara In-Fusion (Clontech, СА, США, кат.№: 121416) для конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375 со схематичной структурой, как показано на Фиг. 1 (Spec: ген устойчивости к спектиномицину; RB: правая граница; eFMV: энхансер 34S вируса мозаики норичника (SEQ ID NO: 7); prBrCBP: промотор эукариотического гена фактора элонгации-1α масличного рапса (Tsf1) (SEQ ID NO: 8); spAtCTP2: транзитный пептид хлоропласта Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 9); EPSPS: ген 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (SEQ ID NO: 10); tPsE9: терминатор гена RbcS гороха (SEQ ID NO: 11); prAtUbMO: промотор гена убиквитина 10 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 12); AsHPPDm-F372A-02: нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02 (SEQ ID NO: 6); tNos: терминатор гена нопалинсинтазы (SEQ ID NO: 13); pr35S: промотор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 14); PAT: ген фосфинотрицинацетилтрансферазы (SEQ ID NO: 15); t35S: терминатор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 16); LB: левая граница).

Компетентные клетки T₁ Escherichia coil трансформировали рекомбинантным экспрессионным вектором DBN11375 посредством использования способа теплового шока в следующих условиях теплового шока: 50 мкл компетентных клеток T₁ Escherichia coil и 10 мкл плазмидной ДНК (рекомбинантный экспрессионный вектор DBN11375) подвергали воздействию водяной бани при 42°С в течение 30 секунд, культивировали при встряхивании при 37°С в течение 1 часа (используя шейкер при скорости вращения 100 об./мин. для встряхивания) и затем культивировали в условиях температуры 37°С на чашке с твердой средой LB, содержащей 50 мг/л спектиномицина в течение 12 часов; белые бактериальные колонии отбирали и культивировали в температурных условиях 37°С в течение ночи в жидкой культуральной среде LB (10 г/л триптона, 5 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л NaCI, и 50 мг/л спектиномицина; рН подводили до рН 7,5 посредством NaOH). Плазмиды в клетках выделяли способом на основе щелочи: раствор бактерий центрифугировали при скорости вращения 12000 об./мин. в течение 1 мин, супернатант удаляли, и осажденное слоевище суспендировали в течение 1 мин, супернатант удаляли и осажденное слоевище суспендировали с 100 мкл предварительно охлажденного на льду раствора I (25 мМ Tris-HCI, 10 мМ ЭДТА (Этилендиаминтетрауксусная кислота) и 50 мМ глюкоза с рН 8,0); добавляли 200 мкл свежеприготовленного раствора II (0,2 М NaOH, 1% SDS (от англ. sodium dodecyl sulfate - додецилсульфат натрия)), смешивали посредством 4-х кратного переворачивания пробирки и помещали на лед на 3-5 мин; добавляли 150 мкл охлажденного на льду раствора III (3 М ацетат калия, 5 М уксусная кислота), сразу же однородно перемешивали и помещали на лед на 5-10 мин; смесь центрифугировали в условиях температуры 4°С и скорости вращения 12000 об./мин. в течение 5 мин, к супернатанту добавляли 2-кратные объемы безводного этанола, однородно перемешивали и помещали при комнатной температуре на 5 мин; смесь центрифугировали в условиях с температурой 4°С и скоростью вращения 12000 об./мин. в течение 5 мин, супернатант отбрасывали, и осадок промывали этанолом в концентрации 70% (об./об.) и затем сушили на воздухе; 30 мкл ТЕ (10 мМ Tris-HCI и 1 мМ ЭДТА, с рН 8,0), содержащего РНКазу (20 мкг/мл), добавляли для растворения осадка; полученный продукт подвергали воздействию водяной бани при температуре 37°С в течение 30 мин для расщепления РНК; и хранили при температуре -20°С для применения. Выделенные плазмиды идентифицировали посредством секвенирования. Результаты показали, что нуклеотидная последовательность между сайтами Spel и Ascl в рекомбинантном экспрессионном векторе DBN11375 представляла собой нуклеотидную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 6 в перечне последовательностей, а именно нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02.

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, как описано выше, нуклеотидную последовательность AsHPPD-02, связанную с универсальным праймером-адаптером 1, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора для создания рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375N. Секвенирование подтвердило, что нуклеотидная последовательность в рекомбинантном экспрессионном векторе DBN11375N содержит нуклеотидную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 3 в перечне последовательностей; то есть нуклеотидная последовательность AsHPPD-02 была правильно вставлена.

4. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11375 и DBN11375N, которые были правильно сконструированы, соответственно, трансформировали Agrobacterium GV3101 с использованием способа на основе жидкого азота в следующих условиях трансформации: 100 мкл Agrobacterium GV3101 и 3 мкл плазмидной ДНК (рекомбинантный экспрессионный вектор) помещали в жидкий азот на 10 минут и погружали в теплую воду при 37°С на 10 мин; трансформированную Agrobacterium GV3101 инокулировали в пробирку с LB, культивировали в условиях температуры 28°С и скорости вращения 200 об./мин. в течение 2 часов и распределяли по чашке с твердой LB, содержащей 50 мг/л рифампицина и 50 мг/л спектиномицина до тех пор, пока не вырастут позитивные одиночные клоны, и одиночные клоны отбирали для культивирования, и выделяли их плазмиды. Выделенные плазмиды идентифицировали посредством секвенирования. Результаты показали, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11375 и DBN11375N были абсолютно правильными.

5. Получение трансгенных растений Arabidopsis thaliana

Семена Arabidopsis thaliana дикого типа суспендировали в 0,1%-ном (масс/об.) растворе агарозы. Суспендированные семена хранили при 4°С в течение 2 суток до удовлетворения потребности в покое для обеспечения синхронного прорастания семян. Вермикулит смешивали с почвой с конским навозом, смесь орошали водой до влажного состояния, и давали воде вытечь из смеси почвы в течение 24 часов. Предварительно обработанные семена высевали в смесь почвы и покрывали увлажняющим покрывалом на 7 суток. Семена проращивали, и растения культивировали в теплице в условиях длинноволнового солнечного света (16-часов света/8-часов темноты) при постоянной температуре (22°С) и постоянной влажности (40-50%), с интенсивностью освещения 120-150 мкмоль/м²с^-1. Растения исходно орошали питательным раствором Хогланда и затем деионизированной водой, таким образом, сохраняя почву влажной, но без проникания воды.

Arabidopsis thaliana трансформировали с использованием метода погружения цветков. Одну или более 15-30 мл предварительных культур культурального раствора LB (10 г/л триптона, 5 г/л дрожжевого экстракта и 10 г/л NaCI; рН доводили до рН 7,5 с помощью NaOH), содержащего спектиномицин (50 мг/л) и рифампицин (10 мг/л) инокулировали отобранными колониями Agrobacterium. Предварительные культуры инкубировали при температуре 28°С и скорости вращения 220 об./мин. при встряхивании при постоянной скорости в течение ночи. Каждую предварительную культуру использовали для инокуляции двух культур, 500 мл, культурального раствора LB, содержащего спектиномицин (50 мг/л) и рифампицин (10 мг/л), и культуры инкубировали при 28°С при непрерывном встряхивании в течение ночи. Центрифугирование при скорости вращения примерно 4000 об./мин. проводили при комнатной температуре в течение 20 минут для осаждения клеток, и полученный супернатант отбрасывали. Осадок клеток аккуратно повторно суспендировали в 500 мл осмотической среды, которая содержала 1/2× соль MS/витамин В5, 10% (масс/об.) сахарозы, 0,044 мкМ бензиламинопурина (10 мкп/л (1 мг/мл маточного раствора в ДМСО (диметилсульфоксид)) и 300 мкл/л Silvet L-77. Растения Arabidopsis thaliana в возрасте 1 месяца погружали в осмотическую культуральную среду, которая содержала ресуспендированные клетки, на 15 секунд для обеспечения погружения самого последнего соцветия. Затем, растения Arabidopsis thaliana укладывали латерально и покрывали, и их хранили влажными в темноте в течение 24 часов. Растения Arabidopsis thaliana нормально культивировали в условиях фотопериода 16 часов света/8 часов темноты при 22°С. Семена собирали, спустя примерно 4 недели.

Свежесобранные семена T₁ (нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02 и нуклеотидная последовательность AsHPPD-02) сушили при комнатной температуре в течение 7 суток. Семена высевали в 26,5 см × 51 см диски для прорастания, и 200 мг семян T₁ (примерно 10000 семян) допускались на диск, где семена ранее суспендировали в дистиллированной воде и хранили при 4°С в течение 2 суток для удовлетворения потребности в покое, для обеспечения синхронного прорастания семян.

Вермикулит смешивали с почвой с конским навозом, смесь орошали водой до влажного состояния, и давали воде стечь самотеком. Предварительно обработанные семена высевали равномерно в смесь почвы с использованием пипетки и покрывали увлажняющим покрытием на 4-5 суток. Покрывало удаляли за 1 сутки до нанесения глюфосината (используемого для отбора совместно трансформированного гена PAT) распылением после прорастания для отбора исходного трансформанта.

Растения Т₁ подвергали распылению 0,2%-ного раствора гербицида Либерти (200 г а. и./л глюфосината) посредством сопла для подачи сжатого воздуха DeVilbiss при объеме раствора для распыления 10 мл/диск (703 л/га) через 7 суток после посадки (DAP) и 11 DAP (стадия семядолей и стадия 2-4 листа, соответственно) для обеспечения эффективного количества глюфосината 280 г а. и./га на внесение. Выживающие растения (активно растущие растения) идентифицировали через 4-7 суток после конечного опрыскивания и пересаживали в квадратные горшки, размером 7 см×7 см, полученные из почвы с конским навозом и вермикулитом (3-5 растений/диск). Пересаженные растения покрывали увлажняющим покрывалом на 3-4 суток и помещали в культуральную камеру при 22°С или непосредственно переносили в теплицу, как описано выше. Затем, покрывало удаляли, и по меньшей мере за 1 сутки до анализа способности мутантного гена HPPD для обеспечения толерантности к гербициду топрамезон, растения сажали в телицу (22±5°С, 50±30% OB (относительная влажность), 14 часов света: 10 часов темноты, минимум 500 мкЕ/м²с^-1 естественное плюс дополнительное освещение).

6. Выявление толерантности к гербициду трансгенных растений Arabidopsis thaliana, содержащих нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02.

Тансформантов T₁ исходно отбирали из нетрансформированных семян с использованием схемы отбора на основе глюфосината. Проводили скрининг примерно 20000 семян T₁, и идентифицировали 314 позитивных трансформантов поколения T₁ (ген PAT) с эффективностью трансформации примерно 1,6%.

Растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые была введена нуклеотидная последовательность AsHPPD-02, и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) подвергали распылению топрамезона в четырех разных концентрациях, а именно, 25 г а.и/га (однократная полевая концентрация, 1×), 50 г а.и./га (двухкратная полевая концентрация, 2×), 100 г а.и./га (четырехкратная полевая концентрация, 4×) и 0 г а.и./га (вода, 0×) для определения толерантности Arabidopsis thaliana к гербициду. Степень повреждения, вызванного гербицидом, измеряли для каждого растения в соответствии с долей обесцвеченной площади листа (доля обесцвеченной площади листа = обесцвеченная площадь листа/общая лощадь листах 100%) через 7 суток после распыления (7 DAT): случай, когда имеет место по существу отсутствие обесцвеченного фенотипа, определяют, как оценка 0, случай, когда доля обесцвеченной площади листа меньше чем 50%, определяют, как оценка 1, случай, когда доля обесцвеченной площади листа больше чем 50%, определяют как оценка 2, и случай, когда доля обесцвеченной площади листа составляет 100%, определяют, как оценка 3.

В соответствии с формулой X=[Σ(N×S)/(T×M)]×100, эффективность устойчивости события трансформации каждого рекомбинантного экспрессионного вектора оценивали в баллах (Х-балльная оценка в случае повреждения пестицидом, N-число растений с такой же степенью повреждения, S-степень повреждения пестицидом, Т-суммарное число растений, М-максимальная степень повреждения пестицидом) и устойчивость оценивают, исходя из следующих балльных оценок: высокоустойчивые растения (оценки в баллах 0-15), умеренно устойчивые растения (оценки в баллах 16-33), низкоустойчивые растения (оценки в баллах 34-67) и неустойчивые растения (оценки в баллах 68-100). Результаты экспериментов показаны в Таблице 1 и на Фиг. 2.

Результаты Таблицы 1 и Фиг. 2 показывают, что растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02, обладали хорошей толерантностью к (высокоустойчивые к) топрамезону, в то время как растения Arabidopsis thaliana дикого типа и растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые был введен нуклеотид AsHPPD-02, не обладали или обладали относительно низкой толерантностью к топрамезону при разных концентрациях. Таким образом, сделан вывод, что мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD (F372A) может придавать растениям толерантность к топрамезону.

Пример 2: Мутация положения 372 аминокислотных последовательностей HPPD из разных видов (F372A) и проверка эффекта мутации Для дополнительного подтверждения эффекта мутации положения 372 аминокислотной последовательности HPPD анализировали филогенетическое дерево HPPD из разных видов (как показано на Фиг. 3). Отбирали HPPD из репрезентативных видов на разных ветвях, и положение 372 аминокислотной последовательности подвергали мутации (F372A) таким образом, чтобы проверить эффект мутации.

1. Получение HPPD из разных видов и мутантных HPPD (F372A)

Аминокислотная последовательность (444 аминокислоты) нативного HPPD Zea mays (ZmHPPD) изложена как SEQ ID NO: 17 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность ZmHPPD-01 (1335 нуклеотидов), кодирующая ZmHPPD, изложена как SEQ ID NO: 18 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность ZmHPPD-02, кодирующая ZmHPPD, которая получена на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana /сои/риса, изложена как SEQ ID NO: 19 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности ZmHPPD подвергали мутации из исходного финилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности ZmHPPD (ZmHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 20 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность ZmHPPD-01 (ZmHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 21 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372A-02, кодирующая ZmHPPDm-F372A, которую получали, исходя из общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена, как SEQ ID NO: 22 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (445 аминокислот) нативного HPPD Arabidopsis thaliana (AtHPPD) изложена как SEQ ID NO: 23 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность AtHPPD (1338 нуклеотидов), кодирующая AtHPPD, изложена как SEQ ID NO: 24 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности AtHPPD повергали мутации из исходного финилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности AtHPPD (AtHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 25 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность AtHPPDm-F372A, кодирующая AtHPPDm-F372A, изложена как SEQ ID NO: 26 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (358 аминокислот) нативного HPPD Pseudomonas fluorescens (PfHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 27 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность PfHPPD-01 (1077 нуклеотидов), кодирующая PfHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 28 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность PfHPPD-02, кодирующая PfHPPD, которая была получена на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена, как SEQ ID NO: 29 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности PfHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности PfHPPD (PfHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 30 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность PfHPPD-01 (PfHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 31 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-02, кодирующая PfHPPDm-F372A, которая была получена на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена, как SEQ ID NO: 32 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (436 аминокислот) нативного HPPD Gossypium hirsutum (GsHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 33 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность GsHPPD-01 (1311 нуклеотидов), кодирующая GsHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 34 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность GsHPPD-02, кодирующая GsHPPD, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 35 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности GsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности GsHPPD (GsHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 36 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность GsHPPD-01 (GsHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 37 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность GsHPPDm-F372A-02, кодирующая GsHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 38 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (436 аминокислот) нативного HPPD Triticum aestivum (TaHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 39 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD-01 (1311 нуклеотидов), кодирующая TaHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 40 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD-02, кодирующая TaHPPD, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 41 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD (TaHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 42 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD-01 (TaHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 43 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPDm-F372A-02, кодирующая TaHPPDm-F372A, которую получали, исходя из предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 44 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (436 аминокислот) нативного HPPD Brachypodium distachyon (BdHPPD) изложена как SEQ ID NO: 45 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность BdHPPD-01 (1311 нуклеотидов), кодирующая BdHPPD, изложена как SEQ ID NO: 46 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BdHPPD-02, кодирующая BdHPPD, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 47 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности BdHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности BdHPPD (BdHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 48 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность BdHPPD-01 (BdHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 49 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность BdHPPDm-F372A-02, кодирующая BdHPPDm-F372A, которая получена, исходя из предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 50 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (434 аминокислоты) нативного HPPD Hordeum vulgare (HvHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 51 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность HvHPPD-01 (1305 нуклеотидов), кодирующая HvHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 52 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность HvHPPD-02, кодирующая HvHPPD, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена в SEQ ID NO: 53 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности HvHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности HvHPPD (HvHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 54 в перечне последовательностей. Мутантная полинуклеотидная последовательность HvHPPD-01 (HvHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 55 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность HvHPPDm-F372A-02, кодирующая HvHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 56 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (441 аминокислота) нативного HPPD Setaria italica (Si HPPD) изложена как SEQ ID NO: 57 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность SiHPPD-01 (1326 нуклеотидов), кодирующая SiHPPD, изложена как SEQ ID NO: 58 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SiHPPD-02, кодирующая SiHPPD, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 59 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности SiHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности SiHPPD (SiHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 60 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность SiHPPD-01 (SiHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 61 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность SiHPPDm-F372A-02, кодирующая SiHPPDm-F372A, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 62 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (440 аминокислот) нативного HPPD Sorghum bicolor (SbHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 63 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность SbHPPD-01 (1323 нуклеотида), кодирующая SbHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 64 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SbHPPD-02, кодирующая SbHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 65 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности SbHPPD подвергалось мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности SbHPPD (SbHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 66 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность SbHPPD-01 (SbHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 67 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность SbHPPDm-F372A-02, кодирующая SbHPPDm-F372A, которую получали, исходя из предпочтительности кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 68 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (446 аминокислот) нативного HPPD Oryza sativa (OsHPPD) изложена как SEQ ID NO: 69 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность OsHPPD-01 (1341 нуклеотид), кодирующая OsHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 70 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность OsHPPD-02, кодирующая OsHPPD, которую получали на основе преимущества кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 71 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности OsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности OsHPPD (OsHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 72 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность OsHPPD-01 (OsHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 73 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность OsHPPDm-F372A-02, кодирующая OsHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 74 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (488 аминокислот) нативного HPPD Glycine max (GmHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 75 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность GmHPPD-01 (1467 нуклеотидов), кодирующая GmHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 76 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность GmHPPD-02, кодирующая GmHPPD, которая была получена на основе предпочтений кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 77 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности GmHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности GmHPPD (GmHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 78 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность GmHPPD-01 (GmHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 79 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность GmHPPDm-F372A-02, кодирующая GmHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 80 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (434 аминокислоты) нативного HPPD Cicer arietinum (CaHPPD) изложена как SEQ ID NO: 81 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность CaHPPD-01 (1305 нуклеотидов), кодирующая CaHPPD, изложена как SEQ ID NO: 82 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CaHPPD-02, кодирующая CaHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 83 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотой последовательности CaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности CaHPPD (CaHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 84 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность CaHPPD-01 (CaHPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 85 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность CaHPPDm-F372A-02, кодирующая CaHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 86 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (443 аминокислоты) нативного HPPD Brassica napus (BnHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 87 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность BnHPPD-01 (1332 нуклеотида), кодирующая BnHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 88 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BnHPPD-02, кодирующая BnHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 89 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности BnHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности BnHPPD (BnHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 90 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность BnHPPD-01 (BnHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 91 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность BnHPPDm-F372A-02, кодирующая BnHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 92 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (451 аминокислота) нативного HPPD Helianthus annuus (HaHPPD) изложена как SEQ ID NO: 93 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность HaHPPD-01 (1356 нуклеотидов), кодирующая HaHPPD, изложена как SEQ ID NO: 94 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность HaHPPD-02, кодирующая HaHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 95 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности HaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин, с получением мутантной аминокислотной последовательности HaHPPD (HaHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 96 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность HaHPPD-01 (HaHPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 97 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность HaHPPDm-F372A-02, кодирующая HaHPPDm-F372A, которую получали, на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 98 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (435 аминокислот) нативного HPPD Medicago sativa (MsHPPD) изложена как SEQ ID NO: 99 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность MsHPPD-01 (1308 нуклеотидов), кодирующая MsHPPD, изложена как SEQ ID NO: 100 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность MsHPPD-02, кодирующая MsHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 101 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности MsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин, с получением мутантной аминокислотной последовательности MsHPPD (MsHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 102 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность MsHPPD-01 (MsHPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 103 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность MsHPPDm-F372A-02, кодирующая MsHPPDm-F372A, которая была получена на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 104 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (434 аминокислоты) нативного HPPD Beta vulgaris (BvHPPD) изложена как SEQ ID NO: 105 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность BvHPPD-01 (1305 нуклеотидов), кодирующая BvHPPD, изложена как SEQ ID NO: 106 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BvHPPD-02, кодирующая BvHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 107 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности BvHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности BvHPPD (BvHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 108 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность BvHPPD-01 (BvHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 109 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность BvHPPDm-F372A-02, кодирующая BvHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 110 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (447 аминокислот) нативного HPPD Nicotiana tabacum (NtHPPD) изложена как SEQ ID NO: 111 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность NtHPPD-01 (1344 нуклеотида), кодирующая NtHPPD, изложена как SEQ ID NO: 112 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность NtHPPD-02, кодирующая NtHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 113 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности NtHPPD подвергали мутации из фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности NtHPPD (NtHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 114 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная кислота NtHPPD-01 (NtHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 115 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность NtHPPDm-F372A-02, кодирующая NtHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 116 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (455 аминокислот) нативного HPPD Cucumis sativus (CsHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 117 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность CsHPPD-01 (1368 нуклеотидов), кодирующая CsHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 118 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CsHPPD-02, кодирующая CsHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 119 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности CsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности CsHPPD (CsHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 120 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность CsHPPD-01 (CsHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 121 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность CsHPPDm-F372A-02, кодирующая CsHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 122 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (447 аминокислот) нативного HPPD Solanum tuberosum (StHPPD) изложена как SEQ ID NO: 123 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность StHPPD-01 (1343 нуклеотида), кодирующая StHPPD, изложена как SEQ ID NO: 124 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность StHPPD-02, кодирующая StHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 125 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности StHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности StHPPD (StHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 126 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность StHPPD-01 (StHPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 127 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность StHPPDm-F372A-02, кодирующая StHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 128 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (441 аминокислота) нативного HPPD Solanum lycopersicum (SIHPPD) изложена как SEQ ID NO: 129 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность SIHPPD-01 (1326 нуклеотидов), кодирующая SIHPPD изложена как SEQ ID NO: 130 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SIHPPD-02, кодирующая SIHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 131 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности SIHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности SIHPPD (SIHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 132 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность SIHPPD-01 (SIHPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 133 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность SIHPPDm-F372A-02, кодирующая SIHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 134 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (504 аминокислоты) нативного HPPD Arachis hypogaea (AhHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 135 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность AhHPPD-01 (1515 нуклеотидов), кодирующая AhHPPD, изложена как SEQ ID NO: 136 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность AhHPPD-02, кодирующая AhHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 137 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности AhHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности AhHPPD (AhHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 138 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность AhHPPD-01 (AhHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 139 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность AhHPPDm-F372A-02, кодирующая AhHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 140 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (339 аминокислот) нативного HPPD Cyanobacteria (CyHPPD) изложена, как SEQ ID NO: 141 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность CyHPPD-01 (1020 нуклеотидов), кодирующая CyHPPD, изложена, как SEQ ID NO: 142 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CyHPPD-02, кодирующая CyHPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 143 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности CyHPPD, подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности CyHPPD (CyHPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 144 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность CyHPPD-01 (CyHPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 145 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность CyHPPDm-F372A-02, кодирующая CyHPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 146 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (350 аминокислот) нативного HPPD Sphingobium sp, N1 (N1HPPD) изложена как SEQ ID NO: 147 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность N1HPPD-01 (1053 нуклеотида), кодирующая N1HPPD, изложена как SEQ ID NO: 148 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N1HPPD-02, кодирующая N1HPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 149 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности N1HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности N1 HPPD (N1 HPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 150 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность N1HPPD-01 (N1HPPDm-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 151 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность N1 HPPDm-F372A-02, кодирующая N1 HPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 152 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (363 аминокислоты) нативного HPPD Sphingobium sp.N2 (N2HPPD) изложена, как SEQ ID NO: 153 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность N2HPPD-01 (1092 нуклеотида), кодирующая N2HPPD, изложена, как SEQ ID NO: 154 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N2HPPD-02, кодирующая N2HPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 155 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности N2HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности N2HPPD (N2HPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 156 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность N2HPPD-01 (N2HPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 157 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность N2HPPDm-F372A-02, кодирующая N2HPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 158 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (365 аминокислот) нативного HPPD Burkholderia sp.N3 (N3HPPD) изложена как SEQ ID NO: 159 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность N3HPPD-01 (1098 нуклеотидов), кодирующая N3HPPD, изложена как SEQ ID NO: 160 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N3HPPD-02, кодирующая N3HPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 161 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности N3HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности N3HPPD (N3HPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 162 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность N3HPPD-01 (N3HPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 163 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность N3HPPDm-F372A-02, кодирующая N3HPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 164 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (365 аминокислот) нативного HPPD Burkholderia sp.N4 (N4HPPD) изложена, как SEQ ID NO: 165 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность N4HPPD-01 (1098 нуклеотидов), кодирующая N4HPPD, изложена, как SEQ ID NO: 166 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N4HPPD-02, кодирующая N4HPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 167 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности N4HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности N4HPPD (N4HPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 168 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность N4HPPD-01 (N4HPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 169 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность N4HPPDm-F372A-02, кодирующая N4HPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 170 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (350 аминокислот) нативного HPPD Sphingobium sp, N5 (N5HPPD) изложена как SEQ ID NO: 171 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность N5HPPD-01 (1053 нуклеотида), кодирующая N5HPPD, изложена, как SEQ ID NO: 172 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N5HPPD-02, кодирующая N5HPPD, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 173 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности N5HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности N5HPPD (N5HPPDm-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 174 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность N5HPPD-01 (N5HPPDm-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 175 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность N5HPPDm-F372A-02, кодирующая N5HPPDm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 176 в перечне последовательностей.

2. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих HPPDS из разных видов (F372A), для Arabidopsis thaliana

Согласно способу конструирования рекомбинантный экспрессионный вектор DBN11375, содержащий нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано выше в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность AtHPPDm-F372A, PfHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность GsHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность TaHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность BdHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность HvHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность SiHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность SbHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность OsHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность GmHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность CaHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность BnHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность HaHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность MsHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность BvHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность NtHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность CsHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность StHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность SIHPPDm-F372A-0, нуклеотидную последовательность AhHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность CyHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность N1 HPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность N2HPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность N3HPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность N4HPPDm-F372A-02 и нуклеотидную последовательность N5HPPDm-F372A-02, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11376 - DBN11402. Секвенирование подтверждало, что упомянутые выше нуклеотид ные последовательности были вставлены правильно в рекомбинантных экспрессионных векторах DBN11376 - DBN11402.

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано выше в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность ZmHPPD-02, нуклеотидную последовательность AtHPPD, нуклеотидную последовательность PfHPPD-02, нуклеотидную последовательность GsHPPD-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD-02, нуклеотидную последовательность BdHPPD-02, нуклеотидную последовательность HvHPPD-02, нуклеотидную последовательность SiHPPD-02, нуклеотидную последовательность SbHPPD-02, нуклеотидную последовательность OsHPPD-02, нуклеотидную последовательность GmHPPD-02, нуклеотидную последовательность CaHPPD-02, нуклеотидную последовательность BnHPPD-02, нуклеотидную последовательность HaHPPD-02, нуклеотидную последовательность MsHPPD-02, нуклеотидную последовательность BvHPPD-02, нуклеотидную последовательность NtHPPD-02, нуклеотидную последовательность CsHPPD-02, нуклеотидную последовательность StHPPD-02, нуклеотидную последовательность SIHPPD-02, нуклеотидную последовательность AhHPPD-02, нуклеотидную последовательность CyHPPD-02, нуклеотидную последовательность N1HPPD-02, нуклеотидную последовательность N2HPPD-02, нуклеотидную последовательность N3HPPD-02, нуклеотидную последовательность N4HPPD-02 нуклеотидную последовательность и нуклеотидную последовательность N5HPPD-02, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11376N - DBN11402N. Секвенирование подтверждало, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантных экспрессионных векторах DBN11376N - DBN11402N.

3. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Согласно способу трансформации Agrobacterium рекомбинантными векторами для Arabidopsis thaliana, как описано выше в п. 4. Примера 1, рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11376-DBN11402 и DBN11376N-DBN11402N, которые были правильно сконструированы, трансформировали Agrobacterium GV3101, соответственно, используя способ на основе жидкого азота. Результаты проверяли посредством секвенирования, показывая, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11376-DBN11402 и DBN11376N-DBN11402N являлись абсолютно правильными.

4. Выявление толерантности к гербициду растений Arabidopsis thaliana, в которые были введены HPPD (F372A) из разных видов

Согласно способу, как описано выше, в п. 5 Примера 1, соцветия Arabidopsis thaliana погружали в раствор Agrobacterium, как описано в Примере 3, таким образом, чтобы ввести Т-ДНК в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11376-DBN11402 и DBN11376N-DBN11402N, сконструированные в Примере 2, в хромосомы Arabidopsis thaliana, с получением, таким образом, соответствующих трансгенных растений Arabidopsis thaliana, а именно, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AtHPPDm-F372A, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность GsHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность BdHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность HvHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность SiHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность SbHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность OsHPPDm-F372A-02, растений Ti Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность GmHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность CaHPPDm-F372A-02, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность BnHPPDm-F372A-02, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность HaHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность MsHPPDm-F372A-02, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность BvHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность NtHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность CsHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность StHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность SIHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AhHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность CyHPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N1 HPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N2HPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N3HPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N4HPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N5HPPDm-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AtHPPD, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность GsHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность BdHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность HvHPPD-02, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность SiHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность SbHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность OsHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность GmHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность CaHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность BnHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность HaHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность MsHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность BvHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность NtHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность CsHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность StHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность SIHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AhHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность CyHPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N1HPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N2HPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N3HPPD-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N4HPPD-02, и растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность N5HPPD-02.

Согласно способу, как описано выше в п. 6 Примера 1, на указанные выше растения T₁ Arabidopsis thaliana и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) распыляли топрамезон в трех разных концентрациях, соответственно, а именно, 25 га.и./га (однократная полевая концентрация, 1×), 100 г а.и./га (четырехкратная полевая концентрация, 4×) и 0 г а.и./га (вода, 0×) для выявления толерантности Arabidopsis thaliana к гербициду. Результаты эксперимента показаны в Таблице 2 и Фиг. 4.

Результаты Таблицы 2 и Фиг. 4 показывают, что по сравнению с растениями Arabidopsis thaliana, в которые вводили немутантные гены HPPD, все растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили гены HPPD с мутацией в положении 372 из разных видов, обладали разной степенью толерантности к топрамезону, и, в частности, растения Arabidopsis thaliana, в которых гены HPPD с мутацией в положении 372 из микроорганизмов, обладали относительно превосходящей толерантностью к топрамезону, в то время как растения Arabidopsis thaliana дикого типа не обладали толерантностью к топрамезону. Таким образом, видно, что положение 372 является ключевым положением HPPD. Мутация положения 372 (F372A) аминокислотных последовательностей HPPD из разных видов может придавать растениям толерантность к топрамезону.

Пример 3: Мутация положения 372 аминокислотных последовательностей HPPD из разных экотипов в пределах одного и того же вида (F372A) и подтверждение эффекта мутации

Для подтверждения эффекта мутации положения 372 аминокислотной последовательности HPPD из разных экотипов в пределах одного и того же вида, положение 372 HPPD из разных экотипов Triticum aestivum (F372A) подвергали мутации для подтверждения эффекта его мутации.

1. Получение HPPD из разных экотипов Triticum aestivum и мутантных HPPD (F372A) Аминокислотная последовательность (471 аминокислота) нативного HPPD экотипа Triticum aestivum 1 с номером доступа UniProt A0A3B5YS13 (TaHPPDI) изложена как SEQ ID NO: 177 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD1-01 (1416 нуклеотидов), кодирующая TaHPPDI, изложена как SEQ ID NO: 178 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD1-02, кодирующая TaHPPDI, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 179 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPDI подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPDI (TaHPPDI m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 180 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPDI-01 (TaHPPDI m-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 181 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPDI m-F372A-02, кодирующая TaHPPDIm-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 182 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (436 аминокислот) нативного HPPD экотипа Triticum aestivum 2 с номером доступа UniProt Q45FE8 (TaHPPD2) изложена, как SEQ ID NO: 183 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD2-01 (1311 нуклеотидов), кодирующая TaHPPD2, изложена, как SEQ ID NO: 184 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD2-02, кодирующая TaHPPD2, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 185 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD2 подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD2 (TaHPPD2m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 186 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD2-01 (TaHPPD2m-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 187 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPD2m-F372A-02, кодирующая TaHPPD2m-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 188 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (436 аминокислот) нативного HPPD экотипа Triticum aestivum 3 с номером доступа UniProt A0A3B6PKV0 (TaHPPD3) изложена, как SEQ ID NO: 189 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD3-01 (1311 нуклеотидов), кодирующая TaHPPD3, изложена как SEQ ID NO: 190 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD3-02, кодирующая TaHPPD3, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 191 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD3 подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD3 (TaHPPD3m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 192 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD3-01 (TaHPPD3m-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 193 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPD3m-F372A-02, кодирующая TaHPPD3m-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 194 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (433 аминокислоты) нативного HPPD экотипа Triticum aestivum 4 с номером доступа UniProt A0A3B6NLC6 (TaHPPD4) изложена, как SEQ ID NO: 195 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD4-01 (1302 нуклеотида), кодирующая TaHPPD4, изложена как SEQ ID NO: 196 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD4-02, кодирующая TaHPPD4, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 197 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD4 подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD4 (TaHPPD4m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 198 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD4-01 (TaHPPD4m-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 199 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPD4m-F372A-02, кодирующая TaHPPD4m-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 200 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (413 аминокислот) нативного HPPD экотипа Triticum aestivum 5 с номером доступа UniProt A0A3B6NNK0 (TaHPPDS) изложена, как SEQ ID NO: 201 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD5-01 (1242 нуклеотида), кодирующая TaHPPDS, изложена, как SEQ ID NO: 202 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD5-02, кодирующая TaHPPD5, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 203 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPDS подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPDS (TaHPPD5m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 204 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD5-01 (TaHPPD5m-F372A-01) изложена как SEQ ID NO: 205 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPD5m-F372A-02, кодирующая TaHPPD5m-F372A, которую получали на основе предпочтения последовательностей Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 206 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (403 аминокислоты) нативной HPPD экотипа Triticum aestivum 6 с номером доступа UniProt A0A3B5YPS5 (TaHPPD6) изложена как SEQ ID NO: 207 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD6-01 (1212 нуклеотидов), кодирующая TaHPPD6, изложена как SEQ ID NO: 208 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD6-02, кодирующая TaHPPD6, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 209 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD6 подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD6 (TaHPPD6m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 210 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD6-01 (TaHPPD6m-F372A-01) изложена, как SEQ ID NO: 211 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPD6m-F372A-02, кодирующая TaHPPD6m-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 212 в перечне последовательностей.

Аминокислотная последовательность (381 аминокислота) нативного HPPD экотипа Triticum aestivum 7 с номером доступа UniProt A7WK82 (TaHPPD7) изложена как SEQ ID NO: 213 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность TaHPPD7-01 (1146 нуклеотидов), кодирующая TaHPPD7, изложена как SEQ ID NO: 214 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPD7-02, кодирующая TaHPPD7, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 215 в перечне последовательностей. Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD7 подвергали мутации из исходного фенилаланина в аланин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD7 (TaHPPD7m-F372A), как изложено в SEQ ID NO: 216 в перечне последовательностей. Мутантная нуклеотидная последовательность TaHPPD7-01 (TaHPPD7m-F372A-01) изложена,как SEQ ID NO: 217 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность TaHPPD7m-F372A-02, кодирующая TaHPPD7m-F372A, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 218 в перечне последовательностей.

2. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих HPPD из разных экотипов Triticum aestivum (F372A), для Arabidopsis thaliana

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность TaHPPD1m-F372A-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD2m-F372A-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD3m-F372A-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD4m-F372A-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD5m-F372A-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD6m-F372A-02 и нуклеотидную последовательность TaHPPD7m-F372A-02, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11403 - DBN11409. Секвенирование подтверждало, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11403 - DBN11409.

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность TaHPPD1-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD2-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD3-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD4-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD5-02, нуклеотидную последовательность TaHPPD6-02 и нуклеотидную последовательность TaHPPD7-02, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионных векторов DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11403N-DBN11409N. Секвенирование подтверждало, что упомянутые выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11403N-DBN11409N.

3. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Согласно способу трансформации Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana, как описано выше в п. 4 Примера 1, рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11403-DBN11409 и DBN11403N-DBN11409N, которые были правильно сконструированы, трансформировали Agrobacterium GV3101, соответственно, с использованием способа на основе жидкого азота. Результаты подтверждали посредством секвенирования, что показывало, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11403-DBN11409 и DBN11403N-DBN11409N были абсолютно правильными.

4. Выявление толерантности к гербициду растений Arabidopsis thaliana, в которых вводили HPPD из разных экотипов Triticum aestivum (F372A)

Согласно способу, как описано выше в п. 5 Примера 1, соцветия Arabidopsis thaliana погружали в раствор Agrobacterium, как описано в Примере 3, таким образом, чтобы ввести Т-ДНК в рекомбинантных экспрессионных векторах DBN11403-DBN11409 и DBN11403N-DBN11409N, сконструированных в Примере 2, в хромосомы Arabidopsis thaliana, с получением, таким образом, соответствующих трансгенных растений Arabidopsis thaliana, а именно, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPDIm-F372A-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD2m-F372A-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD3m-F372A-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD4m-F372A-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD5m-F372A-02, растений Т₁, Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD6m-F372A-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD7m-F372A-02, и растений Т₁, Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPDI-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD2-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD3-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD4-02, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD5-02, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD6-02, и растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность TaHPPD7-02.

Согласно способу, как описано выше в п. 6 Примера 1, на упомянутые выше растения T₁ Arabidopsis thaliana и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) распыляли топрамезон в трех разных концентрациях, соответственно, а именно, 25 г а.и./га (однократная полевая концентрация, 1×), 100 г а.и./га (четырехкратная полевая концентрация, 4×) и 0 г а.и./га (вода, 0×) для выявления толерантности Arabidopsis thaliana к гербициду. Результаты экспериментов показаны в Таблице 3.

Результаты Таблицы 3 показывают, что все растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили гены HPPD с мутацией в положении 372 из разных экотипов Triticum aestivum, обладали хорошей толерантностью к топрамезону (с высокой или умеренной устойчивостью), в то время как растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили немутантные гены HPPD, и растения Arabidopsis thaliana дикого типа, демонстрировали отсутствие толерантности к топрамезону. Это указывает на то, что мутация положения 372 аминокислотных последовательностей HPPD из разных экотипов в пределах одного и того же вида (F372A) может придавать растениям толерантность к топрамезону, а именно, эффекты мутации идентичны в случае аминокислотных последовательностей HPPD из разных экотипов в пределах одного и того же вида.

Пример 4: Разные формы мутации в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из разных видов и подтверждение эффектов мутации

Для дополнительного подтверждения эффектов разных форм мутации в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD, мутации насыщения всех аминокислот осуществляли в положении 372 HPPD из растительного источника (Avena sativa) и источника-микроорганизма (Pseudomonas fluorescens), оба из которых демонстрировали лучшую толерантность к топрамезону.

1. Получение мутации насыщения HPPD из источников Avena sativa и Pseudomonas fluorescens

Положение 372 аминокислотной последовательности AsHPPD подвергали мутации насыщения, а именно, исходный фенилаланин подвергали мутации в другие 18 аминокислот, соответственно (за исключением фенилаланина и аланина), и мутации - делеции с получением аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372G как изложено в SEQ ID NO: 219 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372V, как изложено в SEQ ID NO: 220 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372L, как изложено в SEQ ID NO: 221 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372I, как изложено в SEQ ID NO:222 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372P, как изложено в SEQ ID NO: 223 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372Y, как изложено в SEQ ID NO: 224 в перечне последовательностей, аминокислотных последовательностей AsHPPDm-F372W, как изложено в SEQ ID NO: 225 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372S, как изложено в SEQ ID NO: 226 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372T, как изложено в SEQ ID NO: 227 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372C, как изложено в SEQ ID NO: 228 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372M, как изложено в SEQ ID NO: 229 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372N, как изложено в SEQ ID NO: 230 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372Q, как изложено в SEQ ID NO: 231 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372D, как изложено в SEQ ID NO: 232 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372E, как изложено в SEQ ID NO: 233 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372K, как изложено в SEQ ID NO: 234 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372R, как изложено в SEQ ID NO: 235 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372H, как изложено в SEQ ID NO: 236 в перечне последовательностей, и аминокислотной последовательности AsHPPDm-F372 (делеция), как изложено в SEQ ID NO: 237 в перечне последовательностей; нуклеотидные последовательности, кодирующие указанные выше аминокислотные последовательности, получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, а именно, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372G, как изложено в SEQ ID NO: 238 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372V, как изложено в SEQ ID NO: 239 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372L, как изложено в SEQ ID NO: 240 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372l, как изложено в SEQ ID NO: 241 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372P, как изложено в SEQ ID NO: 242 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372Y, как изложено в SEQ ID NO: 243 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372W, как изложено в SEQ ID NO: 244 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372S, как изложено в SEQ ID NO: 245 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372T, как изложено в SEQ ID NO: 246 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372C, как изложено в SEQ ID NO: 247 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372M, как изложено в SEQ ID NO: 248 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372N, как изложено в SEQ ID NO: 249 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372Q, как изложено в SEQ ID NO: 250 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372D, как изложено в SEQ ID NO: 251 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372E, как изложено в SEQ ID NO: 252 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372K, как изложено в SEQ ID NO: 253 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372R, как изложено в SEQ ID NO:254 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372H, как изложено в SEQ ID NO: 255 в перечне последовательностей, и нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372 (делеция), как изложено в SEQ ID NO: 256 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности PfHPPD подвергали мутации, а именно, исходный фенилаланин подвергался мутации в другие 18 аминокислот, соответственно (за исключением фенилаланина и аланина) и мутации - делеций с получением аминокислотной последовательности FfHPPDm-F372G, как изложено в SEQ ID NO: 257 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372V, как изложено в SEQ ID NO: 258 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372L, как изложено в SEQ ID NO: 259 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности FfHPPDm-F372I, как изложено в SEQ ID NO: 260 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372P, как изложено в SEQ ID NO: 261 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372Y, как изложено в SEQ ID NO:262 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372W, как изложено в SEQ ID NO: 263 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372S, как изложено в SEQ ID NO: 264 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372T, как изложено в SEQ ID NO: 265 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности FfHPPDm-F372C, как изложено в SEQ ID NO: 266 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372M, как изложено в SEQ ID NO: 267 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности FfHPPDm-F372N, как изложено в SEQ ID NO: 268 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372Q, как изложено в SEQ ID NO: 269 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности FfHPPDm-F372D, как изложено в SEQ ID NO: 270 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372E, как изложено в SEQ ID NO: 271 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372K, как изложено в SEQ ID NO: 272 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372R, как изложено в SEQ ID NO: 273 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности FfHPPDm-F372H, как изложено в SEQ ID NO: 274 в перечне последовательностей, аминокислотной последовательности PfHPPDm-F372 (делеция), как изложено в SEQ ID NO: 275 в перечне последовательностей; нуклеотидные последовательности, кодирующие указанные выше аминокислотные последовательности, получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thalianalcovilpvica, а именно, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372G, как изложено в SEQ ID NO: 276 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372V, как изложено в SEQ ID NO: 277 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372L, как изложено в SEQ ID NO: 278 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372l, как изложено в SEQ ID NO: 279 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372P, как изложено в SEQ ID NO: 280 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372Y, как изложено в SEQ ID NO: 281 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372W, как изложено в SEQ ID NO: 282 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372S, как изложено в SEQ ID NO: 283 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372T, как изложено в SEQ ID NO: 284 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372C, как изложено в SEQ ID NO: 285 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372M, как изложено в SEQ ID NO: 286 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372N, как изложено в SEQ ID NO: 287 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372Q, как изложено в SEQ ID NO: 288 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372D, как изложено в SEQ ID NO: 289 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372E, как изложено в SEQ ID NO: 290 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372K, как изложено в SEQ ID NO: 291 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372R, как изложено в SEQ ID NO: 292 в перечне последовательностей, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372H, как изложено в SEQ ID NO: 293 в перечне последовательностей, и нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372 (делеция), как изложено в SEQ ID NO: 294 в перечне последовательностей.

2. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих мутацию насыщения HPPD, для Arabidopsis thaliana

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372L, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372I, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372P, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372Y, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372W, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372S, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372T, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372C, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372M, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372N, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372Q, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372D, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372E, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372K, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372R, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372H, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372 и нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372L, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372I, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372P, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372Y, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372W, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372S, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372T, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372C, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372M, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372N, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372Q, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372D, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372E, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372K, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372R, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372H и нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11410-DBN11447. Секвенирование подтвердило, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантных экспрессионных векторах DBN11410-DBN11447.

3. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Согласно способу трансформации Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana, как описано в п. 4 Примера 1, рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11410-DBN11447, которые были правильно сконструированы, трансформировали Agrobacterium GV3101, соответственно, с использованием способа на основе жидкого азота, и результаты проверяли посредством секвенирования, показывая, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11410-DBN11447 были абсолютно правильными.

4. Выявление толерантности к гербициду растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили мутацию насыщения HPPD

Согласно способу, как описано выше в п. 5 Примера 1, соцветия Arabidopsis thaliana погружали в раствор Agrobacterium, как описано в Примере 3, таким образом, чтобы ввести Т-ДНК рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11410 - DBN11447, сконструированных в Примере 2, в хромосомы Arabidopsis thaliana, с получением, таким образом, соответствующих трансгенных растений Arabidopsis thaliana, а именно, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372V, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372L, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F3721, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372P, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372Y, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372W, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372S, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372T, растений T₁ Arabidopsis thaliana T₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372C, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372M, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372N, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372Q, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372D, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372E, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372K, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372R, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372H, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372, и растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372G, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372V, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372L, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372I, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372P, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372Y, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372W, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372S, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372T, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372C, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372M, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372N, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372Q, растений Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372D, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372E, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372K, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372R, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372H, и растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372.

Согласно способу, как описано выше в п. 6 Примера 1, на упомянутые выше растения T₁ Arabidopsis thaliana, растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPD-02, растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPD-02, и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) распыляли топрамезон в четырех разных концентрациях, соответственно, а именно, 25 г а.и./га (однократная полевая концентрация, 1×), 50 г а.и./га (двухкратная концентрация, 2×), 100 г а.и./га (четырехкратная концентрация, 4×) и 0 г а.и./га (вода, 0×) для выявления толерантности Arabidopsis thaliana к гербициду. Результаты эксперимента показаны в Таблицах 4 и 5.

Результаты в Таблицах 4 и 5 показали, что: (1) после мутации насыщения HPPD из источника Avena sativa, за исключением того, что растения Arabidopsis thaliana с мутантными формами F372Y, F372R и F372H не обладали толерантностью к топрамезону, растения Arabidopsis thaliana с другими мутантными формами имели разные степени толерантности к топрамезону, и особенно растения с мутантными формами F372G, F372V, F372I, F372N, F372Q, F372D, F372 (делеция) обладали лучшей толерантностью к топрамезону, в то время как растения Arabidopsis thaliana дикого типа и растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили немутантный ген HPPD (AsHPPD-02), не обладали или обладали низкой толерантностью к разным концентрациям топрамезона; таким образом, мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из источника Avena sativa в F372A, F372G, F372V, F372L, F372I, F372P, F372W, F372S, F372T, F372C, F372M, F372N, F372Q, F372D, F372E, F372K и F372 (делеция) может придавать растениям толерантность к топрамезону; (2) после мутации насыщения HPPD из источника Pseudomonas fluorescens, растения Arabidopsis thaliana с мутантными формами F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372C, F372M, F372Q, F372D и F372 (делеция) обладали разными степенями толерантности к топрамезону, растения Arabidopsis thaliana с другими мутантными формами не обладали толерантностью к топрамезону, в то время как растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили немутантный ген HPPD (PfHPPD-02), и растения Arabidopsis thaliana дикого типа не обладали толерантностью к топрамезону, таким образом, мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из источника Pseudomonas fluorescens в F372A, F372G, F372V, F372P, F372S, F372T, F372C, F372M, F372Q, F372D и F372 (делеция) может придавать растениям толерантность к топрамезону. Результаты также показали, что мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из источника Avena sativa и источника Pseudomonas fluorescens в F372G и F372V может придавать растениям лучшую толерантность к топрамезону.

Пример 5: Мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из разных источников - видов (F372G и F372V) и подтверждение эффектов мутации

Для дополнительного подтверждения эффектов мутации F372G или F372V в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из разных источников-видов, мутацию (F372G или F372V) осуществляли в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из соответствующих источников - видов, выбранных в Примере 2.

1. Получение мутантного HPPD (F372G и F372V) из разных источников - видов

Положение 372 аминокислотной последовательности ZmHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности ZmHPPD (ZmHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 295 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372G, кодирующая ZmHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена как SEQ ID NO: 296 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности AtHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности AtHPPD (AtHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 297 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность AtHPPDm-F372G, кодирующая AtHPPDm-F372G, изложена, как SEQ ID NO: 298 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности GsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности GsHPPD (GsHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 299 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность GsHPPDm-F372G, кодирующая GsHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 300 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD (TaHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 301 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPDm-F372G, кодирующая TaHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 302 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности BdHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности BdHPPD (BdHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 303 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BdHPPDm-F372G, кодирующая BdHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 304 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности HvHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности HvHPPD (HvHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 305 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность HvHPPDm-F372G, кодирующая HvHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 306 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности SiHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности SiHPPD (SiHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 307 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SiHPPDm-F372G, кодирующая SiHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 308 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности SbHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин, с получением аминокислотной последовательности SbHPPD (SbHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 309 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SbHPPDm-F372G, кодирующая SbHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 310 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности OsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности OsHPPD (OsHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 311 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность OsHPPDm-F372G, кодирующая OsHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 312 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности GmHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности GmHPPD (GmHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 313 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность GmHPPDm-F372G, кодирующая GmHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 314 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности CaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности CaHPPD (CaHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 315 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CaHPPDm-F372G, кодирующая CaHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 316 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности BnHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности BnHPPD (BnHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 317 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BnHPPDm-F372G, кодирующая BnHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 318 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности HaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности HaHPPD (HaHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 319 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность HaHPPDm-F372G, кодирующая HaHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 320 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности MsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности MsHPPD (MsHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 321 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность MsHPPDm-F372G, кодирующая MsHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 322 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности BvHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности BvHPPD (BvHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 323 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BvHPPDm-F372G, кодирующая BvHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 324 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности NtHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности NtHPPD (NtHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 325 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность NtHPPDm-F372G, кодирующая NtHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 326 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности CsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности CsHPPD (CsHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 327 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CsHPPDm-F372G, кодирующая CsHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 328 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности StHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности StHPPD (StHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 329 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность StHPPDm-F372G, кодирующая StHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 330 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности SIHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности SIHPPD (SIHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 331 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SIHPPDm-F372G, кодирующая SIHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 332 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности AhHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности AhHPPD (AhHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 333 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность AhHPPDm-F372G, кодирующая AhHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 334 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности CyHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности CyHPPD (CyHPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 335 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CyHPPDm-F372G, кодирующая CyHPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 336 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N1HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности N1HPPD (N1HPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 337 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N1HPPDm-F372G, кодирующая N1HPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 338 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N2HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности N2HPPD (N2HPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 339 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N2HPPDm-F372G, кодирующая N2HPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 340 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N3HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности N3HPPD (N3HPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 341 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N3HPPDm-F372G, кодирующая N3HPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 342 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N4HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности N4HPPD (N4HPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 343 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N4HPPDm-F372G, кодирующая N4HPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 344 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N5HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в глицин с получением мутантной аминокислотной последовательности N5HPPD (N5HPPDm-F372G), как изложено в SEQ ID NO: 345 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N5HPPDm-F372G, кодирующая N5HPPDm-F372G, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 346 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности ZmHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности ZmHPPD (ZmHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 347 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372V, кодирующая ZmHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 348 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности AtHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности AtHPPD (AtHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 349 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность AtHPPDm-F372V, кодирующая AtHPPDm-F372V, изложена в SEQ ID NO: 350 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности GsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности GsHPPD (GsHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 351 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность GsHPPDm-F372V, кодирующая GsHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 352 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности TaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности TaHPPD (TaHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 353 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность TaHPPDm-F372V, кодирующая TaHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 354 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности BdHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности BdHPPD (BdHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 355 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BdHPPDm-F372V, кодирующая BdHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 356 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности HvHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности HvHPPD (HvHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 357 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность HvHPPDm-F372V, кодирующая HvHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 358 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности SiHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности SiHPPD (SiHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 359 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SiHPPDm-F372V, кодирующая SiHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 360 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности SbHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности SbHPPD (SbHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 361 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SbHPPDm-F372V, кодирующая SbHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 362 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности OsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности OsHPPD (OsHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 363 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность OsHPPDm-F372V, кодирующая OsHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 364 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности GmHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности GmHPPD (GmHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 365 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность GmHPPDm-F372V, кодирующая GmHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 366 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности CaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности CaHPPD (CaHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 367 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CaHPPDm-F372V, кодирующая CaHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 368 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности BnHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности BnHPPD (BnHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 369 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BnHPPDm-F372V, кодирующая BnHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 370 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности HaHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности HaHPPD (HaHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 371 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность HaHPPDm-F372V, кодирующая HaHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 372 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности MsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности MsHPPD (MsHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 373 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность MsHPPDm-F372V, кодирующая MsHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 374 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности BvHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности BvHPPD (BvHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 375 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность BvHPPDm-F372V, кодирующая BvHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 376 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности NtHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности NtHPPD (NtHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 377 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность NtHPPDm-F372V, кодирующая NtHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 378 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности CsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности CsHPPD (CsHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 379 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CsHPPDm-F372V, кодирующая CsHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 380 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности StHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности StHPPD (StHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 381 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность StHPPDm-F372V, кодирующая StHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 382 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности SIHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности SIHPPD (SIHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 383 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность SIHPPDm-F372V, кодирующая SIHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 384 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности AhHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности AhHPPD (AhHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 385 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность AhHPPDm-F372V, кодирующая AhHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 386 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности CyHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности CyHPPD (CyHPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 387 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность CyHPPDm-F372V, кодирующая CyHPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 388 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N1HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности N1HPPD (N1HPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 389 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N1HPPDm-F372V, кодирующая N1HPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 390 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N2HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности N2HPPD (N2HPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 391 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N2HPPDm-F372V, кодирующая N2HPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 392 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N3HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности N3HPPD (N3HPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 393 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N3HPPDm-F372V, кодирующая N3HPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 394 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N4HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности N4HPPD (N4HPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 395 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N4HPPDm-F372V, кодирующая N4HPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 396 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности N5HPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина в валин с получением мутантной аминокислотной последовательности N5HPPD (N5HPPDm-F372V), как изложено в SEQ ID NO: 397 в перечне последовательностей, и нуклеотидная последовательность N5HPPDm-F372V, кодирующая N5HPPDm-F372V, которую получали на основе предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana, изложена, как SEQ ID NO: 398 в перечне последовательностей.

2. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих мутантный HPPD (F372G и F372V) из разных источников-видов, для Arabidopsis thaliana

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность AtHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность GsHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность TaHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность BdHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность HvHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность SiHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность SbHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность OsHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность GmHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность CaHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность BnHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность HaHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность MsHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность BvHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность NtHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность CsHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность StHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность SIHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность AhHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность CyHPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность N1HPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность N2HPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность N3HPPDm-F372G, нуклеотидную последовательность N4HPPDm-F372G и нуклеотидную последовательность N5HPPDm-F372G, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11448-DBN11473. Секвенирование подтверждало, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11448-DBN11473.

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность AtHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность GsHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность TaHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность BdHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность HvHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность SiHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность SbHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность OsHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность GmHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность CaHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность BnHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность HaHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность MsHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность BvHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность NtHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность CsHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность StHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность SIHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность AhHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность CyHPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность N1 HPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность N2HPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность N3HPPDm-F372V, нуклеотидную последовательность N4HPPDm-F372V и нуклеотидную последовательность N5HPPDm-F372V, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11474-DBN11499. Секвенирование подтверждало, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11474-DBN11499.

3. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Согласно способу трансформации Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana, как описано в п. 4 Примера 1, рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11448-DBN11499, которые были правильно сконструированы, трансформировали Agrobacterium GV3101, соответственно, с использованием способа на основе жидкого азота, и результаты подтверждали посредством секвенирования, что показывало, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11448-DBN11499 были абсолютно правильными.

4. Выявление эффектов толерантности к гербициду растений Arabidopsis thaliana, в которых был введен мутантный HPPD (F372G и F372V) из разных источников-видов

Согласно способу, как описано в п. 5 Примера 1, соцветия Arabidopsis thaliana погружали в раствор Agrobacterium, как описано в Примере 3, таким образом, чтобы ввести Т-ДНК рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11448-DBN11499, сконструированных в Примере 2, в хромосомы Arabidopsis thaliana с получением, таким образом, соответствующих трансгенных растений Arabidopsis thaliana, а именно, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность AtHPPDm-F372G, растений Ti Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность GsHPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность TaHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность BdHPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность HvHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность SiHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность SbHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность OsHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность GmHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность CaHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность BnHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность HaHPPDm-F372G, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность MsHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность BvHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность NtHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность CsHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность StHPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность SIHPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность AhHPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность CyHPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N1HPPDm-F372G, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N2HPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N3HPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N4HPPDm-F372G, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N5HPPDm-F372G, и растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность AtHPPDm-F372V, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность GsHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность TaHPPDm-F372V, растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность BdHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность HvHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность SiHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность SbHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность OsHPPDm-F372V, растений Ti Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность GmHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность CaHPPDm-F372V, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность BnHPPDm-F372V, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность HaHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность MsHPPDm-F372V, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность BvHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность NtHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность CsHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность StHPPDm-F372V, растений Ti Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность SIHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность AhHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность CyHPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N1HPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N2HPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N3HPPDm-F372V, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N4HPPDm-F372V, и растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которых была введена нуклеотидная последовательность N5HPPDm-F372V.

Согласно способу, как описано в п. 6 Примера 1, на упомянутые выше растения Т₁ Arabidopsis thaliana и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) распыляли топрамезон в двух разных концентрациях, соответственно, а именно, 25 г а.и./га (однократная полевая концентрация, 1×) и 100 г а.и./га (четырехкратная полевая концентрация, 4×) для выявления толерантности Arabidopsis thaliana к гербициду. Результаты эксперимента показаны в Таблицах 6 и 7.

Результаты в Таблицах 6 и 7 показали, что: по сравнению с растениями Arabidopsis thaliana, в которых вводили немутантный ген HPPD в Примере 2, и растениями Arabidopsis thaliana дикого типа, растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили мутацию (F372G или F372V) в положении 372 гена HPPD из разных источников-видов, обладали разными степенями толерантности к топрамезону, и особенно растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили мутацию в положении 372 гена HPPD из источника-микроорганизма, обладали лучшей толерантности к топрамезону. Таким образом, мутация (F372G или F372V) в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD из разных источников-видов может придавать растениям толерантность к топрамезону.

Пример 6: Комбинация мутации положения 372 с мутацией другого положения в аминокислотной последовательности HPPD и эффект ее мутаций

1. Получение последовательности с комбинацией мутаций Положение 372 аминокислотной последовательности AsHPPD подергали мутации из исходного фенилаланина (F) в аланин (А), и мутацию-делецию осуществляли на аланине (А) в положении 110 с получением мутантной аминокислотной последовательности AsHPPD (AsHPPDm-F372A-A110), как изложено в SEQ ID NO: 412 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-A110, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена в SEQ ID NO: 413 в перечне последовательностей.

Мутацию - делецию осуществляли на аланине (А) в положении 110 аминокислотной последовательности AsHPPD с получением мутантной аминокислотной последовательности AsHPPD (AsHPPDm-A110), как изложено в SEQ ID NO: 414 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность AsHPPDm-A110, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена в SEQ ID NO: 415 в перечне последовательностей.

Положение 372 аминокислотной последовательности PfHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина (F) в аланин (А), и положение 336 (соответствующее положению 413 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, а именно, положению 413) подвергали мутации из исходного глицина (G) в триптофан (W) с получением мутантной аминокислотной последовательности PfHPPD (PfHPPDm-F372A-G413W), как изложено в SEQ ID NO: 416 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена в SEQ ID NO: 417 в перечне последовательностей.

Положение 336 аминокислотной последовательности PfHPPD (соответствующее положению 413 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, а именно, положению 413) подвергали мутации из исходного глицина (G) в триптофан (W) с получением мутантной аминокислотной последовательности PfHPPD (PfHPPDm-G413W), как изложено в SEQ ID NO: 418 в перечне последовательностей; нуклеотидная последовательность FfHPPDm-G413W, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена в SEQ ID NO: 419 в перечне последовательностей.

2. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих комбинацию мутаций HPPD, для Arabidopsis thaliana

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-A110, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W и нуклеотидную последовательность FfHPPDm-G413W, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11500-DBN11503. Секвенирование подтверждало, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11500-DBN11503.

3. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Согласно способу трансформации Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana, как описано в п. 4 Примера 1, рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11500-DBN11503, которые были правильно сконструированы, трансформировали Agrobacterium GV3101, соответственно, используя способ на основе жидкого азота. Результаты подтверждали посредством секвенирования, показывая, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11500-DBN11503 были абсолютно правильными.

4. Выявление толерантности к гербициду растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена комбинация мутаций HPPD

Согласно способу, как описано в п. 5 Примера 1, соцветия Arabidopsis thaliana погружали в раствор Agrobacterium, как описано в Примере 3, таким образом, чтобы ввести Т-ДНК рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11500-DBN11503, сконструированных в Примере 2, рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11375-DBN11375N, сконструированных в п. 3 Примера 1, и рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11378 - DBN11378N, сконструированных в п. 2 Примера 2, в хромосомы Arabidopsis thaliana, с получением, таким образом, соответствующих трансгенных растений Arabidopsis thaliana, а именно, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-A110, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-G413W, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-02, и растений T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-02.

Согласно способу, как описано в п. 6 Примера 1, на растения T₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-А110, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-G413W, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-02, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-02, и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) распыляли топрамезон в трех разных концентрациях, соответственно, а именно, 25 г а.и./га (однократная полевая концентрация, 1×), 100 г а.и./га (четырехкратная полевая концентрация, 4×) и 0 г а.и./га (вода, 0×) для выявления толерантности Arabidopsis thaliana к гербициду. Результаты эксперимента показаны в Таблице 8.

Результаты в Таблице 8 показали, что: (1) по сравнению с растениями Arabidopsis thaliana дикого типа и растениями Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-02, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-А110, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, и растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, обладали лучшей толерантностью к топрамезону (высокоустойчивые); (2) по сравнению с растениями Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-02, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-A110, обладали некоторой толерантностью к низкой концентрации топрамезона, но данная толерантность была значимо ниже, чем толерантность растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, и растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02; (3) по сравнению с растениями Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-02, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-G413W, обладали некоторой толерантностью к низкой концентрации топрамезона, но толерантность была значимо ниже, чем толерантность растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-G413W, и растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02. Видно, что комбинация мутаций в положении 372 и в других положениях аминокислотной последовательности HPPD не оказывала влияния на толерантность одной единственной мутации в положении 372 к топрамезону, что указывало на то, что мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD придавала растениям важность и стабильность толерантности к топрамезону.

Пример 7: Мутация других положений (положения, отличные от 372) аминокислотной последовательности AsHPPD и подтверждение эффекта мутации

1. Получение мутантных генов в других положениях аминокислотной последовательности AsHPPD (положение, отличное от 372)

Положение 284 (соответствующее положению 284 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, а именно положению 284) аминокислотной последовательности AsHPPD подвергали мутации из исходного глутамина (Q) в аланин (А) с получением мутантной аминокислотной последовательности AsHPPD (AsHPPDm-Q284A), как изложено в SEQ ID NO: 420 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность AsHPPDm-Q284A, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена в SEQ ID NO: 421 в перечне последовательностей.

Положение 359 (соответствующее положению 359 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, а именно положению 359) аминокислотной последовательности AsHPPD подвергали мутации из исходного лейцина (L) в триптофан (W) с получением мутантной аминокислотной последовательности AsHPPD (AsHPPDm-L359W), как изложено в SEQ ID NO: 422 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность AsHPPDm-L359W, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thalianafco и/риса, изложена в SEQ ID NO: 423 в перечне последовательностей.

Положение 415 (соответствующее положению 415 аминокислотной последовательности, как изложено в SEQ ID NO: 1, а именно положению 415) аминокислотной последовательности AsHPPD подвергали мутации из исходного фенилаланина (F) в аланин (А) с получением мутантной аминокислотной последовательности AsHPPD (AsHPPDm-F415A), как изложено в SEQ ID NO: 424 в перечне последовательностей. Нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F415A, кодирующая указанную выше аминокислотную последовательность, которую получали на основе общего предпочтения кодонов Arabidopsis thaliana/сои/риса, изложена в SEQ ID NO: 425 в перечне последовательностей.

2. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих ген HPPD, мутантный в других положениях (положение, не являющееся 372) для Arabidopsis thaliana

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Примера 1, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-Q284A, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-L359W и нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F415A, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 1, соответственно, подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-01 с последовательным получением рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11504, DBN11505 и DBN11506. Секвенирование подтверждало, что указанные выше нуклеотидные последовательности были правильно вставлены в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11504, DBN11505 и DBN11506.

3. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana

Согласно способу трансформации Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами для Arabidopsis thaliana, как описано в п. 4 Примера 1, рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11504, DBN11505 и DBN11506, которые были правильно сконструированы, трансформировали Agrobacterium GV3101, соответственно, с использованием способа на основе жидкого азота. Результаты подтверждали посредством секвенирования, показывая, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11504, DBN11505 и DBN11506 были абсолютно правильными.

4. Выявление толерантности к гербициду растений Arabidopsis thaliana, в которых была введена мутация в других положениях (положение, отличное от 372) гена HPPD

Согласно способу, как описано в п. 5 Примера 1, соцветия Arabidopsis thaliana погружали в раствор Agrobacterium Примера 3, таким образом, чтобы трансформировать Т-ДНК рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11504, DBN11505 и DBN11506 в хромосому Arabidopsis thaliana, с получением соответствующих трансгенных растений Arabidopsis thaliana, а именно, растений Т-, Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-Q284A, растений Ti Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-L359W, и растений Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F415A.

Согласно способу, как описано в п. 6 Примера 1, на растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-Q284A, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-L359W, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F415A, и растения Arabidopsis thaliana дикого типа (18 суток после посева) распыляли топрамезон в трех разных концентрациях, соответственно, а именно, 25 г а.и./га (однократные полевые концентрации, 1×), 100 г а.и./га (четырехкратные полевые концентрации, 4×) и 0 г а.и./га (вода, 0×). Результаты эксперимента показаны в Таблице 9.

Результаты в Таблице 9 показали, что: по сравнению с растением Т₁ Arabidopsis thaliana, в которое вводили нукпеотид AsHPPD-02, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-Q284A, растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-L359W, и растения Т₁ Arabidopsis thaliana, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F415A, демонстрировали отсутствие значимого различия в отношении толерантности к топрамезону. Может быть видно, что не все мутации любых положений в аминокислотной последовательности HPPD (как например, три положения, описанные в данном примере, или соседние положения других эффективных положений мутации) могут придавать растениям толерантность к топрамезону, и это также указывает на то, что мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD по настоящему изобретению имеет непредсказуемый технический эффект.

Пример 8: Получение и верификация трансгенных растений сои

1. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами

Согласно способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11375, содержащего нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 3 Пример 1, рекомбинантный экспрессионный вектор DBN11375NN конструировали в качестве контроля, и его структура показана на Фиг. 5 (Spec: ген устойчивости к спектиномицину; RB: правая граница; eFMV: энхансер 34S вируса мозаики норичника (SEQ ID NO: 7); prBrCBP: промотор эукариотического гена фактора элонгации 1а масличного рапса (Tsf1) (SEQ ID NO: 8); spAtCTP2: транзитный пептид хлоропластов Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 9); EPSPS: ген 5-енолпируватшикимат-3-фосфатсинтазы (SEQ ID NO: 10); tPsE9: терминатор гена RbcS гороха (SEQ ID NO: 11); pr35S: промотор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 14); PAT: ген фосфинотрицин-N-ацетилтрансферазы (SEQ ID NO: 15); t35S: терминатор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 16); LB: левая граница).

Рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11375, описанными в п. 3 Примера 1, DBN11376 и DBN11378, описанными в п. 2 Примера 2, DBN11500 и DBN11502, описанными в Примере 6, и упомянутыми выше контрольными рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11375NN трансформировали Agrobacterium LBA4404 (Invitrogen, Chicago, США, кат.: 18313-015), соответственно, с использованием способа на основе жидкого азота в следующих условиях трансформации: 100 мкл Agrobacterium LBA4404 и 3 мкл плазмидной ДНК (рекомбинантный экспрессионный вектор) помещали в жидкий азот на 10 минут и выдерживали на бане в теплой воде при 37°С в течение 10 минут; Трансформированные Agrobacterium LBA4404 инокулировали в пробирку с LB, культивировали в условиях температуры 28°С и скорости вращения 200 об./мин. в течение 2 часов и затем распределяли по чашке с LB, содержащей 50 мг/л рафампицина и 50 мг/л спектиномицина до тех пор, пока не вырастут позитивные единичные клоны, и одиночные клоны отбирали для культивирования, и выделяли из них плазмиды. Выделенные плазмиды идентифицировали посредством секвенирования. Результаты показали, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11375, DBN11376, DBN11378, DBN11500, DBN11502 и DBN11375NN были абсолютно правильными.

2. Получение трансгенных растений сои

Согласно общепринятому способу инфицирования Agrobacterium, ткань семядольного узла стерильно культивируемого сорта сои Zhonghuang13 совместно культивировали с Agrobacterium, как описано в п. 1 данного Примера, таким образом, чтобы ввести Т-ДНК (включающую последовательность энхансера 34S вируса мозаики норичника, последовательность промотора эукариотического гена фактора элонгации 1α масличного рапса (Tsf1), последовательность транзитного пептида хлоропластов Arabidopsis thaliana, ген 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы, последовательность терминатора гена RbcS гороха, последовательность промотора гена убиквитина 10 Arabidopsis thaliana, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, последовательность терминатора гена нопалинсинтетазы, последовательность промотора 35S вируса мозаики цветной капусты, ген фосфинотрицин-N-ацетил-трансферазы и последовательность терминатора 35S вируса мозаики цветной капусты) рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11375, DBN11376, DBN11378, DBN11500, DBN11502 и DBN11375NN в хромосомы сои с получением, таким образом, растений сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растений сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растений сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растений сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, и растений сои, в которых вводили контрольный вектор DBN11375NN.

Для трансформации сои, опосредованной Agrobacterium, кратко, зрелые семена сои проращивали в культуральной среде для прорастания сои (3,1 г/л соли В5, витамина В5, 20 г/л сахарозы и 8 г/л агара, рН 5,6) и затем культивировали в условиях температуры 25±1°С; и фотопериода (свет/темнота) 16 ч/8 ч. После 4-6 суток прорастания, отбирали стерильные проростки сои, набухшие в ярко-зеленых семядольных узлах, подсемядольные части отрезали на 3-4 миллиметра ниже семядольных узлов, семядоли разрезали продольно, и удаляли апикальные почки, латеральные почки и зародышевые корни. Рану создавали на уровне семядольного узла с использованием спинки скальпеля, и ткани семядольного узла с поранением приводили в контакт с суспензией Agrobacterium, где Agrobacterium может переносить нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110 или нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W в ткани семядольного узла с поранением (стадия 1: стадия инфицирования). На данной стадии ткани семядольного узла предпочтительно погружали в суспензию Agrobacterium (OD₆₆₀ (от англ. optical density - оптическая плотность) равна 0,5-0,8, культуральная среда для инфицирования (2,15 г/л соли MS, витамина В5, 20 г/л сахарозы, 10 г/л глюкозы, 40 мг/л ацетосирингона (AS), 4 г/л 2-морфолинэтансульфоновой кислоты (MES - от англ. morpholine ethanesulfonic acid) и 2 мг/л зеатина (ZT), рН 5,3)) для инициации инокуляции. Ткани семядольного узла совместно культивировали с Agrobacterium на протяжении периода времени (3 суток) (стадия 2: стадия совместной культивации). Предпочтительно, после стадии инфицирования ткани семядольного узла культивировали на твердой культуральной среде (4,3 г/л соли MS, витамина В5, 20 г/л сахарозы, 10 г/л глюкозы, 4 г/л MES, 2 мг/л ZT и 8 г/л агара, рН 5,6). После данной стадии совместной культивации может иметь место возможная стадия «восстановления», на которой использовали культуральную среду для восстановления (3,1 г/л соли В5, витамина В5, 1 г/л MES, 30 г/л сахарозы, 2 мг/л ZT, 8 г/л агара, 150 мг/л цефалоспорина, 100 мг/л глутаминовой кислоты и 100 мг/л аспарагиновой кислоты, рН 5,6) с добавлением по меньшей мере одного антибиотика (150-250 мг/л цефалосоприна) для ингибирования роста Agrobacterium, и без добавления селективного агента для растительных тансформантов (стадия 3: стадия восстановления). Предпочтительно, блоки тканей, регенерированные из семядольных узлов, культивировали в твердой культуральной среде, содержащей антибиотик и не содержащей селективный агент, для устранения Agrobacterium и обеспечения стадии восстановления для инфицированных клеток. Затем, блоки тканей, регенерированные из семядольных узлов, культивировали в культуральной среде, содержащей селективный агент (глифосат), и отбирали растущие тансформированные каллусы (стадия 4: стадия селекции). Предпочтительно, блоки тканей, регенерированные из семядольных узлов, культивировали в культуральной твердой среде для осуществления скрининга (3,1 г/л соли В5, витамина В5, 1 г/л MES, 30 г/л сахарозы, 1 мг/л 6-бензиладенина (6-ВАР), 8 г/л агара, 150 мг/л цефалоспорина, 100 мг/л глутаминовой кислоты, 100 мг/л аспарагиновой кислоты и 0,25 моль/л 1М-(фосфонометил)глицина, рН 5,6), содержащей селективный агент, таким образом, с получением селективного роста трансформированных клеток. Затем, растения регенерировали из тансформированных клеток (стадия 5: стадия регенериции). Предпочтительно, блоки тканей, регенерированные из семядольных узлов, растущих в культуральной среде, содержащей селективный агент, культивировали в твердых культуральных средах (культуральная среда для дифференцировки В5 и культуральная среда для укоренения В5) для регенерации растений.

Устойчивые ткани, которые подвергались скринингу, переносили на культуральную среду для дифференцировки В5 (3,1 г/л соли В5, витамина В5, 1 г/л MES, 30 г/л сахарозы, 1 мг/л ZT, 8 г/л агарозы, 150 мг/л цефалоспорина, 50 мг/л глутаминовой кислоты, 50 мг/л аспарагиновой кислоты, 1 мг/л гиббереллина, 1 мг/л ауксина и 0,25 моль/л N-(фосфонометил)глицина, рН 5,6) и культивировали при 25°С для дифференцировки. Дифференцированные проростки переносили на культуральную среду для укоренения В5 (3,1 г/л соли В5, витамина В5, 1 г/л MES, 30 г/л сахарозы, 8 г/л агара, 150 мг/л цефалоспорина и 1 мг/л индол-3-масляной кислоты (IBA - от англ. indole-3-butyric acid)), культивировали в культуральной среде для укоренения при 25°С до достижения высоты примерно 10 см, и затем переносили в теплицу до плодоношения. В теплице растения культивировали при 26°С в течение 16 часов и затем культивировали при 20°С в течение 8 часов в сутки.

Растения сои Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения сои Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения сои Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растения сои Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, и растения сои Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-G413W, пересаживали в теплицу для культивации и размножения с получением соответствующих трансгенных растений Т₁.

3. Проверка трансгенных растений сои с использованием TaqMan Примерно 100 мг листьев из растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-А110, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, и растений сои Т₁, в которых вводили контрольный вектор DBN11375NN, отбирали в качестве образцов, и их геномную ДНК выделяли посредством набора DNeasy Plant Maxi из Qiagen, и выявляли число копий гена EPSPS посредством метода количественной ПЦР (полимеразная цепная реакция) на основе флуоресценции зонда Taqman, таким образом, чтобы определить число копий мутантного гена HPPD. В то же время растения сои дикого типа использовали в качестве контролей, и выявляли и анализировали в соответствии с упомянутым выше способом. Были установлены и усреднены трехкратные повторности для данных экспериментов.

Конкретный способ выявления числа копий гена EPSPS выглядел следующим образом:

Стадия 11. 100 мг листьев растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-А110, растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, растений сои Т₁, в которых вводили контрольный вектор DBN11375NN, и растений сои дикого типа брали и растирали в гомогенат, используя жидкий азот, в ступке, и для каждого образца брали трехкратные повторности;

Стадия 12. Геномную ДНК упомянутых выше образцов выделяли, используя набор DNeasy Plant Mini из Qiagen, посредством конкретного способа, как описано в руководстве по использованию продукта;

Стадия 13. Концентрации геномной ДНК упомянутых выше образцов выявляли, используя NanoDrop 2000 (Thermo Scientific);

Стадия 14. Концентрации геномной ДНК упомянутых выше образцов регулировали под одно и то же значение в интервале от 80 до 100 нг/мкл;

Стадия 15. Число копий образцов идентифицировали, используя метод количественной ПЦР на основе флуоресценции зонда Taqman, где образцы, для которых было известно и было идентифицировано число копий, брали в качестве стандартов, образцы растений сои дикого типа брали в качестве контроля, и для каждого образца брали три повторности и усредняли; последовательности праймеров и зонда для количественной ПЦР на основе флуоресценции выглядели следующим образом:

Следующие праймеры и зонд использовали для выявления последовательности гена EPSPS:

праймер 1:ctggaaggcgaggacgtcatcaata, как изложено в SEQ ID NO: 401 в перечне последовательностей;

праймер 2: tggcggcattgccgaaatcgag, как изложено в SEQ ID NO: 402 в перечне последовательностей;

зонд 1: atgcaggcgatgggcgcccgcatccgta, как изложено в SEQ ID NO: 403 в перечне последовательностей;

система ПЦР-реакции:

JumpStart™ Taq ReadyMix™ (Sigma) 10 мкл 50× смесь праймеров/зонда 1 мкл геномная ДНК 3 мкл вода (ddH₂O) 6 мкл

50× Смесь праймеров/зонда содержит 45 мкл каждого праймера в концентрации 1 мМ, 50 мкл зонда в концентрации 100 мкМ и 860 мкл 1× ТЕ буфера и хранили при 4°С в пробирке из желтого стекла.

Условия ПЦР-реакции:

Данные анализировали, используя программное обеспечение SDS2.3 (Applied Biosystems).

Посредством анализа результатов эксперимента по числу копий гена EPSPS, дополнительно продемонстрировали, что все из нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-02, нуклеотидной последовательности ZmHPPDm-F372A-02, нуклеотидной последовательности PfHPPDm-F372A-02, нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-A110, нуклеотидной последовательности PfHPPDm-F372A-G413W были вставлены в хромосому выявленных растений сои, и все из растений сои Т₁, в которых была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которых была введена нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которых была введена нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-02, растений сои Т₁, в которых была введена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растений сои Т₁, в которых была введена нуклеотидная последовательность FfHPPDm-F372A-G413W, и растений T₁ сои, в которых был введен контрольный вектор DBN11375NN, проводили к получению однокопийных трансгенных растений сои.

4. Выявление толерантности к гербициду трансгенных растений сои к топрамезону

На растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность, и растения сои, в которые вводили контрольный вектор DBN11375NN, и растения сои дикого типа (V3-V4 на стадии прорастания) распыляли топрамезон в двух разных концентрациях, соответственно, а именно, 50 г а.и./га (2-кратная полевая концентрация, 2×) и 100 г а.и./га (4-кратная полевая концентрация, 4×) для выявления толерантности растений сои к гербициду. Согласно способу в п. 6 Примера 1, после 7 суток опрыскивания (7 DAT), степень повреждения каждого растения, вызванного гербицидом, статистически анализировали, и соответственно осуществляли оценку в баллах и оценку устойчивости. Растения сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S1 и S2), растения сои, в которые вставляли нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S3 и S4), растения сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S5 и S6), растения сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S7 и S8), растения сои, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S9 и S10), растения сои, в которые вводили контрольный вектор DBN11375NN, принадлежали в общей сложности к одной линии (S11), и растения сои дикого типа принадлежали в общей сложности к одной линии (CK1); и из каждой линии выбирали и выявляли 8 растений. Результаты показаны в Таблице 10 и на Фиг. 7.

Для сои, 4-хкратная полевая концентрация топрамезона является эффективной дозой для обработки при высоком давлении. Результаты в Таблице 10 и на Фиг. 7 показали следующее: (1) по сравнению с растениями сои Т₁, в которые вставляли контрольный вектор DBN11375NN, и растениями сои дикого типа, растения сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, и растения сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-G413W, были способны представить более высокую толерантность к гербицидам на основе топрамезона, что указывало на то, что мутантный HPPD (F372A) может придавать трансгенным растениям сои высокий уровень толерантности к топрамезону; (2) по сравнению с растениями сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, и растениями сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, отсутствовало значимое различие в толерантности к топрамезону растений сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, и растений сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность PFHPPDm-F372A-G413W, что дополнительно указывало на то, что мутация в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD придает растениям важность и стабильность толерантности к топрамезону.

Пример 9: Получение и подтверждение трансгенных растений риса

1. Конструирование рекомбинантных экспрессионных векторов риса, содержащих ген HPPD

5-' и 3'-концы нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-02, как описано в п. 1 Примера 1, нуклеотидной последовательности ZmHPPDm-F372A-02 и нуклеотидной последовательности PfHPPDm-F372A-02, как описано в п. 1 Примера 2, и нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-A110, как описано в Примере 6, соответственно, были связаны со следующим универсальным праймером-адаптером 2:

Универсальный праймер-адаптер 2 для 5'-конца: 5'-tgcagataccaagcggccactagt-3', как изложено в SEQ ID NO: 404 в перечне последовательностей;

Универсальный праймер-адаптер 2 для 3'-конца: 5'-caaatgtttgaacgatcggcgcgcc-3', как изложено в SEQ ID NO: 400 в перечне последовательностей;

Растительный экспрессионный вектор DBNBC-02 подвергали двойному расщеплению с использованием рестриктаз Spe I и Asc I для линеаризации растительного экспрессионного вектора. Продукт расщепления очищали с получением линеаризованного каркаса экспрессионного вектора DBNBC-02 (каркас вектора: рСАМВ1А2301 (который имеется в продаже от CAMBIA)), который затем подвергался реакции рекомбинации с нуклеотидной последовательностью AsHPPDm-F372A-02, связанной с универсальным праймером-адаптером 2, в соответствии с процедурой согласно инструкциям к набору для «бесшовного» соединения продуктов Takara In-Fusion (Clontech, СА, США, CAT: 121416) для конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11950 со структурой вектора, как показано на Фиг. 6. (Spec: ген устойчивости к спектиномицину; RB: правая граница; prOsActl: промотор актина 1 риса (SEQ ID NO: 405); PAT: ген фосфинотрицин-N-ацетилтрансферазы (SEQ ID NO: 15); t35S: терминатор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 16); pr35S: промотор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 14); iZmHSP70: интрон белка теплового шока 70 кДа Zea mays (SEQ ID NO: 406); AsHPPDm-F372A-02: нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02 (SEQ ID NO: 6); tNos: терминатор гена нопалинсинтазы (SEQ ID NO: 13); prZmUbi: промотор гена убиквитина 1 Zea mays (SEQ ID NO: 407); Hpt: ген гигромицинфосфотрансферазы (SEQ ID NO: 408); t35S: терминатор 35S вируса мозаики цветной капусты (SEQ ID NO: 16); LB: левая граница).

Компетентные клетки T₁ Escherichia coii трансформировали в соответствии с способом теплового шока, описанным в п. 3 Примера 1, и плазмиды в клетках выделяли посредством щелочного способа. Выделенную плазмиду идентифицировали посредством секвенирования. Результаты указали на то, что рекомбинантный экспрессионный вектор DBN11950 содержал нуклеотидную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 6 в перечне последовательностей, а именно, нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02.

Согласно указанному выше способу конструирования рекомбинантного экспрессионного вектора DBN11950, нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность и нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, которые были связаны с универсальным праймером-адаптером 2, соответственно подвергали реакции рекомбинации с линеаризованным каркасом экспрессионного вектора DBNBC-02, для последовательного конструирования рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11951-DBN11953. Секвенирование подтвердило, что нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02 и нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110 правильно вставляли в рекомбинантные экспрессионные векторы DBN11951-DBN11953.

2. Трансформация Agrobacterium рекомбинантными экспрессионными векторами

Рекомбинантными экспрессионными векторами DBN11950-DBN11953, которые были правильно сконструированы, соответственно, трансформировали Agrobacterium ЕНА105а с использованием способа на основе жидкого азота в следующих условиях трансформации: 100 мкл Agrobacterium ЕНА105а и 3 мкл плазмидной ДНК (рекомбинантный экспрессионный вектор) помещали в жидкий азот на 10 минут и выдерживали на бане в теплой воде при 37°С в течение 10 минут; трансформированные Agrobacterium ЕНА105а инокул провал и в пробирку с LB, культивировали в условиях температуры 28°С и скорости вращения 200 об./мин. в течение 2 часов и распределяли на чашке с LB, содержащей 50 мг/л рифампицина и 50 мг/л спектиномицина до тех пор, пока не вырастут позитивные одиночные клоны, и одиночные клоны отбирали для культивирования, и выделяли их плазмиды. Выделенные плазмиды идентифицировали посредством секвенирования. Результаты показали, что структуры рекомбинантных экспрессионных векторов DBN11950-DBN11953 были абсолютно правильными.

3. Получение трансгенных растений риса

Для трансформации риса, опосредованной Agrobacterium, кратко, сорт риса Nipponbare проращивали в индукционной культуральной среде (3,1 г/л соли N6, витаминов N6, 300 мг/л казеина, 30 г/л сахарозы, 2 мг/л дихролфеноксиуксусной кислоты (2,4-D), 3 г/л растительного геля; рН 5,8), и каллусы индуцировали из зрелых зародышей риса (Стадия 1: стадия индукции каллусов). После этого, каллусы выбирали и затем приводили в контакт с суспензией Agrobacterium, где Agrobacterium может переносить следующие нуклеотидные последовательности: нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02, нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-A110, нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372A-02 или нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-02 в по меньшей мере одну клетку в одном из данных каллусов (стадия 2: стадия инфицирования). На данной стадии, каллусы предпочтительно погружали в суспензию Agrobacterium (OD₆₆₀ равна 0,3, седа для инфицирования (3,1 г/л солей N6, витаминов N6, 300 мг/л казеина, 30 г/л сахарозы, 10 г/л глюкозы, 40 мг/л AS, 2 мг/л 2,4-D; рН 5,4)) для начала инокуляции. Каллусы совместно культивировали с Agrobacterium на протяжении периода времени (3 суток) (стадия 3: стадия совместного культивирования). Предпочтительно, после стадии инфицирования, каллусы культивировали в твердой среде (3,1 г/л солей N6, витаминов N6, 300 мг/л казеина, 30 г/л сахарозы, 10 г/л глюкозы, 40 мг/л AS, 2 мг/л 2,4-D, 3 г/л растительного геля; рН 5,8). После стадии совместного культивирования может иметь место стадия «восстановления», на которой использовали среду для восстановления (3,1 г/л солей N6, витаминов N6, 300 мг/л казеина, 30 г/л сахарозы, 2 мг/л 2,4-D, 3 г/л растительного геля; рН 5,8) с добавлением по меньшей мере одного антибиотика (150-250 мг/л цефамицина) для ингибирования роста Agrobacterium, и без добавления какого-либо селективного агента для растительных трансформантов (стадия 4: стадия восстановления). Предпочтительно, каллусы культивировали в твердой среде, содержащей антибиотик, но не содержащей селективный агент, таким образом, чтобы устранить Agrobacterium и обеспечить период восстановления для инфицированных клеток. Затем, инокулированные каллусы культивировали на среде, содержащей селективный агент (гигромицин), и отбирали растущие трансформированные каллусы (стадия 5: стадия селекции). Предпочтительно, каллусы культивировали в твердой селективной среде (3,1 г/л солей N6, витаминов N6, 300 мг/л казеина, 30 г/л сахарозы, 50 мг/л гигромицина, 2 мг/л 2,4-D, 3 г/л растительного геля; рН 5,8), содержащей селективный агент, что приводило к селективному росту трансформированных клеток. Затем, каллусы регенерировали в растения (стадия 6: стадия регенерации). Предпочтительно, каллусы, растущие на среде, содержащей селективный агент, культивировали в твердой среде (среда для дифференцировки N6 и среда для укоренения MS) для регенерации растений.

Устойчивые каллусы, полученные в результате скрининга, переносили в среду для дифференцировки N6 (3,1 г/л солей N6, витаминов N6, 300 мг/л казеина, 30 г/л сахарозы, 150 мг/л цефамицина, 20 мг/л гигромицина, 2 мг/л 6-бензиладенина, 1 мг/л нафталинуксусной кислоты, 3 г/л растительного геля; рН 5,8), и культивировали для дифференцировки при 25°С. Дифференцированные проростки переносили на среду для укоренения MS (2,15 г/л солей MS, витаминов MS, 300 мг/л казеина, 15 г/л сахарозы, 3 г/л растительного геля; рН 5.8) и культивировали при 25°С. Когда проростки достигали примерно 10 см в высоту, их перемещали в теплицу и культивировали до плодоношения. В теплице их культивировали при 30°С с получением трансформированных растений риса Т₀.

Растения риса Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения риса Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растения риса Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения риса Т₀, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, переносили в теплицу для культивации и размножения с получением соответствующих трансгенных растений TV

4. Проверка трансгенных растений риса с использованием TaqMan Примерно 100 мг листьев из растений риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растений риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, и растений риса Ть в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-02, отбирали в качестве образцов, и из них выделяли геномную ДНК с помощью набора DNeasy Plant Maxi Qiagen, и выявляли число копий гена Hpt методом количественной ПЦР на основе флуоресценции зонда Taqman таким образом, чтобы определить число копий мутантного гена HPPD. В то же время, растения риса дикого типа использовали в качестве контроля и выявляли и анализировали согласно упомянутому выше способу. Для данных экспериментов были установлены и усреднены три повтора.

Конкретный способ выявления числа копий гена Hpt выглядел следующим образом:

Стадия 31. 100 мг листьев растений риса, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений риса, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растений риса, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растений риса, в которые вводили нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-02, и растений риса дикого типа брали и измельчали в гомогенат, используя жидкий азот, в ступке, и для каждого образца брали три повторности.

Стадия 32. Геномную ДНК упомянутых выше образцов выделяли, используя набор DNeasy Plant Mini Qiagen, с помощью конкретного способа, как описано в руководстве по использованию продукта;

Стадия 33. Концентрации геномной ДНК упомянутых выше образцов выявляли, используя NanoDrop 2000 (Thermo Scientific);

Стадия 34. Концентрации геномной ДНК упомянутых выше образцов регулировали до постоянного значения в интервале от 80 до 100 нг/мкл;

Стадия 35. Число копий образцов идентифицировали, используя способ количественной ПЦР на основе флуоресценции зонда Taqman, где образцы, для которых было известно и идентифицировано число копий, брали в качестве стандартов, образцы растений риса дикого типа брали в качестве контроля, и для каждого образца использовали три повторения и проводили усреднение; последовательности праймеров и зонда для количественной ПЦР на основе флуоресценции выглядели следующим образом:

Следующие праймеры и зонд использовали для выявления последовательности гена Hpt

праймер 3: gcataacagcggtcattgactg, как изложено в SEQ ID NO: 409 в перечне последовательностей;

праймер 4: agaagatgttggcgacctcg, как изложено в SEQ ID NO: 410 в перечне последовательностей;

зонд 2: agcgaggcgatgttcggggattc, как изложено в SEQ ID NO: 411 в перечне последовательностей;

Система ПЦР-реакции:

JumpStart™ Taq ReadyMix™ (Sigma) 10 мкл 50× смесь праймеров/зонда 1 мкл Геномная ДНК 3 мкл вода (ddH₂O) 6 мкл

50× Смесь праймеров/зонда содержит 45 мкл каждого праймера в концентрации 1 мМ, 50 мкл зонда в концентрации 100 мкМ и 860 мкл 1× ТЕ буфера, и хранили при 4°С в пробирке из желтого стекла.

Условия ПЦР-реакции:

Данные анализировали, используя программное обеспечение SDS2.3 (Applied Biosystems).

Посредством анализа результатов экспериментов по числу копий гена EPSPS, дополнительно продемонстрировали, что все из нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-02, нуклеотидной последовательности AsHPPDm-F372A-A110, нуклеотидной последовательности ZmHPPDm-F372A-02 и нуклеотидной последовательности PfHPPDm-F372A-02 были включены в хромосому выявленных растений риса, и все из растений риса Т₁, в которые была вставлена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-02, растений риса Т₁, в которые была вставлена нуклеотидная последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растений риса Т₁, в которые была вставлена нуклеотидная последовательность ZmHPPDm-F372A-02, и растений риса Т₁, в которые была вставлена нуклеотидная последовательность PfHPPDm-F372A-02, приводили к получению однокопийных трансгенных растений сои.

5. Выявление толерантности трансгенных растений риса к гербициду Растения риса Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения риса Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растения риса Т_1, в которые вставляли нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения риса Т_1, в которые вставляли нуклеотидную последовательность FfHPPDm-F372A-02, и на растения риса дикого типа (V3-V4 на стадии прорастания) распыляли топрамезон в двух разных концентрация, соответственно, а именно, 50 г а.и./га (2-хкратная полевая концентрация, 2×) и 100 г а.и./га (4-хкратная полевая концентрация, 4×) для выявления толерантности растений риса к гербициду. Согласно способу в п. 6 Примера 1, после 7 суток распыления (7 DAT), степень повреждения каждого растения, вызванного гербицидом, статистически анализировали, и соответственно проводили оценивание в баллах и оценку устойчивости. Растения риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S12 и S13), растения риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S14 и S15), растения риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S16 и S17), растения риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S18 и S19), и растения риса дикого типа принадлежали в общей сложности к одной линии (CK2); и 8 растений отбирали из каждой линии и анализировали. Результаты показаны в Таблице 11.

В случае риса 4-хкратная концентрация топрамезона представляет собой эффективную дозу для обработки при высоком давлении. Результаты в Таблице 11 показали, что, по сравнению с растениями риса дикого типа, растения риса Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения риса Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растения риса Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения риса Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, могли представлять более высокую толерантность к гербицидам на основе топрамезона. Между тем, отсутствовало значимое различие между толерантностью растений риса T₁ к топрамезону, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, и устойчивостью растений риса Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, что указывало на то, что мутации в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD достаточно для обеспечения трансгенных растений риса с высоким уровнем толерантности к гербицидам топрамезон.

Пример 10: Проверка толерантности трансгенных растений сои к другим ингибиторам HPPD

Для дополнительного подтверждения эффекта толерантности HPPD (F372A) на других ингибиторах HPPD на растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, растения сои Т₁, в которые вводили контрольный вектор DBN11375NN в Примере 8, и растения сои дикого типа (V3-V4 на стадии прорастания) осуществляли распыление, как изложено ниже, для выявления толерантности каждого растения сои к гербициду, (1) 140 г а.и./га (2-хкратная полевая концентрация, 2×) изоксафлутола; (2) 280 г а.и./га (4-хкратная полевая концентрация, 4×) изоксафлутола; (3) 210 г а.и./га (2-хкратная полевая концентрация, 2×) мезотриона; (4) 420 г а.и./га (4-хкратная полевая концентрация, 4×) мезотриона. Согласно способу в п. 6 Примера 1, после 7 суток распыления (7 DAT), степень повреждения каждого растения под действием гербицида статистически анализировали, и соответственно осуществляли оценку в баллах и оценку толерантности. Растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S1 и S2), растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S3 и S4), растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S5 и S6), растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, принадлежали в общей сложности к двум линиям (S7 и S8), растения сои Т_1, в которые вводили нуклеотидную последовательность контрольного вектора DBN11375NN, принадлежали в общей сложности к одной линии (S11), и растения сои дикого типа принадлежали в общей сложности к одной линии (CK1); и 8 растений отбирали из каждой линии и анализировали. Результаты показаны в Таблице 12.

В случае растений сои, 4-хкратная полевая концентрация изоксафлутола и 4-хкратная полевая концентрация мезотриона являются эффективными дозами для обработки при высоком давлении. Результаты в Таблице 12 показали следующее: (1) по сравнению с растениями сои T₁, в которые вводили контрольный вектор DBN11375NN, и растениями сои дикого типа, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность ZmHPPDm-F372A-02, растения сои Т₁, в которые вставляли нуклеотидную последовательность PfHPPDm-F372A-02, и растения сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, могли представлять разные степени толерантности к гербицидам-изоксафлутолу и мезотриону, и в особенности растения сои T₁ с геном HPPD в положении 372, мутантным из источника Avena sativa, обладают лучшей толерантностью к гербициду изоксафлутол и мезотрион, что указывает на то, что мутантный HPPD (F372A) может придавать трансгенным растениям сои толерантность к данным двум гербицидам - ингибиторам HPPD; (2) по сравнению с растениями сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-02, отсутствовало значимое различие в толерантности к гербицидам - изоксафлутолу и мезотриону растений сои Т₁, в которые вводили нуклеотидную последовательность AsHPPDm-F372A-A110, что указывало на то, что мутации в положении 372 аминокислотной последовательности HPPD достаточно для обеспечения растений с высоким уровнем толерантности к гербицидам изоксафлутолу и мезотриону.

В заключение, в настоящем изобретении впервые раскрыто, что мутация в положении 372 полипептидов гидроксифенилпируватдиоксигеназы из разных видов может придавать растениям более высокую толерантность к гербицидам-ингибиторам HPPD - пиразолинатам, изоксазолам и трикетонам, до такой степени, что растения могут выдерживать по меньшей мере однократную полевую концентрацию топрамезона, изоксафлутола или мезотриона. Таким образом, настоящее изобретение имеет перспективу широкого применения в растениях.

Наконец, следует отметить, что все указанные выше примеры используются только для иллюстрации воплощений настоящего изобретения, а не для ограничения настоящего изобретения. Несмотря на то, что настоящее изобретение подробно описано со ссылкой на предпочтительные Примеры, специалисты в данной области должны понимать, что воплощения настоящего изобретения могли бы быть модифицированы или эквивалентно заменены без отступления от сущности и объема технических решений настоящего изобретения.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> BEIJING DABEINONG BIOTECHNOLOGY CO., LTD.

<120> МУТАНТНЫЙ ПОЛИПЕПТИД ГИДРОКСИФЕНИЛПИРУВАТДИОКСИГЕНАЗА,

КОДИРУЮЩИЙ ЕГО ГЕН И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

<130> FP1190743P

<160> 425

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 440

<212> ПРТ

<213> Аминокислотная последовательность AsHPPD (Avena sativa)

<400> 1

Met Pro Pro Thr Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val

1 5 10 15

Thr Pro Glu His Ala Ala Arg Ser Phe Pro Arg Val Val Arg Val Asn

20 25 30

Pro Arg Ser Asp Arg Phe Pro Val Leu Ser Phe His His Val Glu Leu

35 40 45

Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu

50 55 60

Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala

65 70 75 80

His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu Ala Phe Leu Phe Thr

85 90 95

Ala Pro Tyr Ala Pro Pro Pro Gln Glu Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr

100 105 110

Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Thr Phe Ala Ala

115 120 125

Ala His Gly Leu Ala Val Arg Ser Val Gly Val Arg Val Ala Asp Ala

130 135 140

Ala Glu Ala Phe Arg Val Ser Val Ala Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe

145 150 155 160

Ala Pro Ala Asp Leu Gly His Gly Phe Gly Leu Ala Glu Val Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Pro Asp Glu Thr Asp

180 185 190

Leu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Ser Pro Gly Ala Val

195 200 205

Asp Tyr Gly Leu Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu

210 215 220

Met Ala Pro Val Ile Asp Tyr Met Lys Gly Phe Leu Gly Phe His Glu

225 230 235 240

Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu

245 250 255

Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Ala Val Leu Leu Pro Leu

260 265 270

Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr

275 280 285

Leu Glu Tyr His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser

290 295 300

Asn Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Thr Pro Met

305 310 315 320

Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Gln Ala Lys Tyr Tyr Glu Gly

325 330 335

Val Arg Arg Ile Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Ile Lys Glu

340 345 350

Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu

355 360 365

Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Phe Phe Leu

370 375 380

Glu Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Val Gly Gln

385 390 395 400

Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser

405 410 415

Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Val Lys

420 425 430

Gln Ser Val Val Ala Gln Lys Ser

435 440

<210> 2

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Нуклеотидная последовательность AsHPPD-01 (Avena sativa)

<400> 2

atgccgccca cccccgccac cgccaccggc gccgccgcgg ccgccgtgac tccagagcac

60

gcggcccgga gctttccccg agtggtccgc gtcaacccgc gcagcgaccg cttccccgtg

120

ctctccttcc accacgtcga gctctggtgc gccgacgccg cctcagcggc cggacgcttc

180

tccttcgcgc tcggcgcgcc gctcgccgcc cggtccgacc tctccacggg gaactccgcg

240

cacgcctccc tcctgctccg ctcgggcgcc ctcgccttcc tcttcacggc gccctacgcg

300

ccgccgccgc aggaggccgc cacggccgca gccaccgcct ccatcccctc cttctccgcc

360

gacgccgcgc ggacgttcgc cgccgcccac ggcctcgcgg tgcgctccgt cggggtccgc

420

gtcgctgacg ccgccgaggc cttccgcgtc agcgtagccg gcggcgctcg cccggccttc

480

gccccagccg acctcggcca tggcttcggc ctcgccgagg tcgagctcta cggcgacgtc

540

gtgctacgct tcgtcagcta cccggacgag acagacctgc cattcctgcc agggttcgag

600

cgcgtgagca gccccggcgc cgtggactac ggcctcacgc ggttcgacca cgtcgtgggc

660

aacgtcccgg agatggcccc ggtcatagac tacatgaaag gcttcttggg gttccacgag

720

ttcgccgagt tcaccgccga ggacgtgggc acgaccgaga gcgggctcaa ctcggtggtg

780

ctcgccaaca actccgaggc cgtgctgctg ccgctcaacg agcccgtgca cggcacaaag

840

cgacggagcc agatacagac gtacctggag tatcacggcg ggcccggcgt gcagcacatc

900

gcgctcgcca gcaacgacgt gctcaggacg ctcagggaga tgcgggcgcg cacgcccatg

960

ggcggcttcg agttcatggc gccaccgcag gcgaaatact atgaaggcgt gcggcgcatc

1020

gcaggtgacg tgctctcgga agagcagatc aaggaatgcc aggagctggg ggtgctagtc

1080

gacagggatg atcaaggggt gttgctccaa atcttcacca agccagtagg ggacaggcca

1140

acgtttttcc tggagatgat ccaaagaatc gggtgcatgg agaaggacga ggtcgggcaa

1200

gagtaccaga agggtggctg cggcgggttt ggcaagggca atttctccga gctgttcaag

1260

tccattgagg actatgagaa atcccttgag gtcaagcaat ctgttgtagc tcagaaatcc

1320

tag

1323

<210> 3

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- нуклеотидная

последовательность AsHPPD-02

<400> 3

atgccaccta ctccagctac agctactggt gctgctgctg ctgccgttac tcctgagcac

60

gctgccaggt cattccccag ggtggttcgc gtgaacccca gatctgatag gttcccagtt

120

ctgagcttcc accatgttga gctgtggtgc gctgatgctg cttctgctgc tggcaggttc

180

tctttcgctc ttggtgctcc actcgctgct agatctgatc tgtctacagg aaatagcgct

240

catgcctcac tcctgcttcg ctcaggtgct ttggccttcc tcttcaccgc tccatatgct

300

cccccacctc aggaggctgc tactgctgct gctacagcct ccattccaag cttctcagct

360

gatgccgcta gaaccttcgc tgctgctcat ggacttgccg tgaggtctgt tggtgttcgc

420

gtggctgatg ctgctgaggc tttcagagtt tccgttgccg gcggagctag gccagctttc

480

gctcctgctg atttgggaca tggtttcggc ctggctgagg ttgagcttta cggtgacgtg

540

gttctccgct tcgtgtctta cccagatgag actgacctgc ctttccttcc cggcttcgag

600

agagtttcct ctcctggtgc cgtggattac ggcctgacaa ggttcgacca cgtggttgga

660

aacgttcccg agatggctcc agtgatcgat tacatgaagg gcttccttgg attccatgag

720

ttcgccgagt tcactgctga ggacgtggga accactgagt ccggtttgaa ctctgtggtt

780

ctcgccaaca attctgaggc tgttttgctc cctctgaatg agcctgtgca tggaaccaag

840

aggagaagcc agattcaaac ttacctggag taccacggtg gccctggagt tcagcatatc

900

gcccttgctt ctaatgatgt gttgcgcaca ctcagagaga tgcgcgccag aacccccatg

960

ggaggtttcg agttcatggc cccaccacag gctaagtact acgagggcgt tagaaggatt

1020

gctggagacg tgttgagcga ggagcagatc aaggagtgcc aagagctggg tgttcttgtg

1080

gatagggatg accagggcgt tctgcttcaa attttcacta agccagtggg cgaccgccct

1140

acattcttcc ttgagatgat tcaaagaatc ggctgcatgg agaaggatga ggttggacag

1200

gagtaccaaa agggcggatg cggtggcttc ggaaagggta acttcagcga gttgttcaag

1260

tcaatcgagg actacgagaa gagcctcgag gtgaagcagt cagtggttgc ccaaaagtcc

1320

tga

1323

<210> 4

<211> 440

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность- аминокислотная

последовательность AsHPPDm-F372A

<400> 4

Met Pro Pro Thr Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val

1 5 10 15

Thr Pro Glu His Ala Ala Arg Ser Phe Pro Arg Val Val Arg Val Asn

20 25 30

Pro Arg Ser Asp Arg Phe Pro Val Leu Ser Phe His His Val Glu Leu

35 40 45

Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu

50 55 60

Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala

65 70 75 80

His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu Ala Phe Leu Phe Thr

85 90 95

Ala Pro Tyr Ala Pro Pro Pro Gln Glu Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr

100 105 110

Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Thr Phe Ala Ala

115 120 125

Ala His Gly Leu Ala Val Arg Ser Val Gly Val Arg Val Ala Asp Ala

130 135 140

Ala Glu Ala Phe Arg Val Ser Val Ala Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe

145 150 155 160

Ala Pro Ala Asp Leu Gly His Gly Phe Gly Leu Ala Glu Val Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Pro Asp Glu Thr Asp

180 185 190

Leu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Ser Pro Gly Ala Val

195 200 205

Asp Tyr Gly Leu Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu

210 215 220

Met Ala Pro Val Ile Asp Tyr Met Lys Gly Phe Leu Gly Phe His Glu

225 230 235 240

Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu

245 250 255

Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Ala Val Leu Leu Pro Leu

260 265 270

Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr

275 280 285

Leu Glu Tyr His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser

290 295 300

Asn Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Thr Pro Met

305 310 315 320

Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Gln Ala Lys Tyr Tyr Glu Gly

325 330 335

Val Arg Arg Ile Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Ile Lys Glu

340 345 350

Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu

355 360 365

Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Phe Phe Leu

370 375 380

Glu Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Val Gly Gln

385 390 395 400

Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser

405 410 415

Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Val Lys

420 425 430

Gln Ser Val Val Ala Gln Lys Ser

435 440

<210> 5

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- нуклеотидная

последовательность AsHPPDm-F372A-01

<400> 5

atgccgccca cccccgccac cgccaccggc gccgccgcgg ccgccgtgac tccagagcac

60

gcggcccgga gctttccccg agtggtccgc gtcaacccgc gcagcgaccg cttccccgtg

120

ctctccttcc accacgtcga gctctggtgc gccgacgccg cctcagcggc cggacgcttc

180

tccttcgcgc tcggcgcgcc gctcgccgcc cggtccgacc tctccacggg gaactccgcg

240

cacgcctccc tcctgctccg ctcgggcgcc ctcgccttcc tcttcacggc gccctacgcg

300

ccgccgccgc aggaggccgc cacggccgca gccaccgcct ccatcccctc cttctccgcc

360

gacgccgcgc ggacgttcgc cgccgcccac ggcctcgcgg tgcgctccgt cggggtccgc

420

gtcgctgacg ccgccgaggc cttccgcgtc agcgtagccg gcggcgctcg cccggccttc

480

gccccagccg acctcggcca tggcttcggc ctcgccgagg tcgagctcta cggcgacgtc

540

gtgctacgct tcgtcagcta cccggacgag acagacctgc cattcctgcc agggttcgag

600

cgcgtgagca gccccggcgc cgtggactac ggcctcacgc ggttcgacca cgtcgtgggc

660

aacgtcccgg agatggcccc ggtcatagac tacatgaaag gcttcttggg gttccacgag

720

ttcgccgagt tcaccgccga ggacgtgggc acgaccgaga gcgggctcaa ctcggtggtg

780

ctcgccaaca actccgaggc cgtgctgctg ccgctcaacg agcccgtgca cggcacaaag

840

cgacggagcc agatacagac gtacctggag tatcacggcg ggcccggcgt gcagcacatc

900

gcgctcgcca gcaacgacgt gctcaggacg ctcagggaga tgcgggcgcg cacgcccatg

960

ggcggcttcg agttcatggc gccaccgcag gcgaaatact atgaaggcgt gcggcgcatc

1020

gcaggtgacg tgctctcgga agagcagatc aaggaatgcc aggagctggg ggtgctagtc

1080

gacagggatg atcaaggggt gttgctccaa atcgctacca agccagtagg ggacaggcca

1140

acgtttttcc tggagatgat ccaaagaatc gggtgcatgg agaaggacga ggtcgggcaa

1200

gagtaccaga agggtggctg cggcgggttt ggcaagggca atttctccga gctgttcaag

1260

tccattgagg actatgagaa atcccttgag gtcaagcaat ctgttgtagc tcagaaatcc

1320

tag

1323

<210> 6

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- нуклеотидная

последовательность AsHPPDm-F372A-02

<400> 6

atgccaccta ctccagctac agctactggt gctgctgctg ctgccgttac tcctgagcac

60

gctgccaggt cattccccag ggtggttcgc gtgaacccca gatctgatag gttcccagtt

120

ctgagcttcc accatgttga gctgtggtgc gctgatgctg cttctgctgc tggcaggttc

180

tctttcgctc ttggtgctcc actcgctgct agatctgatc tgtctacagg aaatagcgct

240

catgcctcac tcctgcttcg ctcaggtgct ttggccttcc tcttcaccgc tccatatgct

300

cccccacctc aggaggctgc tactgctgct gctacagcct ccattccaag cttctcagct

360

gatgccgcta gaaccttcgc tgctgctcat ggacttgccg tgaggtctgt tggtgttcgc

420

gtggctgatg ctgctgaggc tttcagagtt tccgttgccg gcggagctag gccagctttc

480

gctcctgctg atttgggaca tggtttcggc ctggctgagg ttgagcttta cggtgacgtg

540

gttctccgct tcgtgtctta cccagatgag actgacctgc ctttccttcc cggcttcgag

600

agagtttcct ctcctggtgc cgtggattac ggcctgacaa ggttcgacca cgtggttgga

660

aacgttcccg agatggctcc agtgatcgat tacatgaagg gcttccttgg attccatgag

720

ttcgccgagt tcactgctga ggacgtggga accactgagt ccggtttgaa ctctgtggtt

780

ctcgccaaca attctgaggc tgttttgctc cctctgaatg agcctgtgca tggaaccaag

840

aggagaagcc agattcaaac ttacctggag taccacggtg gccctggagt tcagcatatc

900

gcccttgctt ctaatgatgt gttgcgcaca ctcagagaga tgcgcgccag aacccccatg

960

ggaggtttcg agttcatggc cccaccacag gctaagtact acgagggcgt tagaaggatt

1020

gctggagacg tgttgagcga ggagcagatc aaggagtgcc aagagctggg tgttcttgtg

1080

gatagggatg accagggcgt tctgcttcaa attgccacta agccagtggg cgaccgccct

1140

acattcttcc ttgagatgat tcaaagaatc ggctgcatgg agaaggatga ggttggacag

1200

gagtaccaaa agggcggatg cggtggcttc ggaaagggta acttcagcga gttgttcaag

1260

tcaatcgagg actacgagaa gagcctcgag gtgaagcagt cagtggttgc ccaaaagtcc

1320

tga

1323

<210> 7

<211> 542

<212> ДНК

<213> Энхансер 34S вируса мозаики норичника

<400> 7

aattctcagt ccaaagcctc aacaaggtca gggtacagag tctccaaacc attagccaaa

60

agctacagga gatcaatgaa gaatcttcaa tcaaagtaaa ctactgttcc agcacatgca

120

tcatggtcag taagtttcag aaaaagacat ccaccgaaga cttaaagtta gtgggcatct

180

ttgaaagtaa tcttgtcaac atcgagcagc tggcttgtgg ggaccagaca aaaaaggaat

240

ggtgcagaat tgttaggcgc acctaccaaa agcatctttg cctttattgc aaagataaag

300

cagattcctc tagtacaagt ggggaacaaa ataacgtgga aaagagctgt cctgacagcc

360

cactcactaa tgcgtatgac gaacgcagtg acgaccacaa aagaattagc ttgagctcag

420

gatttagcag cattccagat tgggttcaat caacaaggta cgagccatat cactttattc

480

aaattggtat cgccaaaacc aagaaggaac tcccatcctc aaaggtttgt aaggaagaat

540

tc

542

<210> 8

<211> 1534

<212> ДНК

<213> промотор эукариотического гена фактора элонгации-1? масличного

рапса (Tsf1) (Brassica napus)

<400> 8

gattatgaca ttgctcgtgg aatgggacag ttatggtatt tttttgtaat aaattgtttc

60

cattgtcatg agattttgag gttaatctat gagacattga atcacttagc attagggatt

120

aagtagtcac aaatcgcatt caagaagctg aagaacacgt tatggtctaa tggttgtgtc

180

tctttattag aaaatgttgg tcagtagcta tatgcactgt ttctgtaaaa ccatgttggt

240

gttgtgttta tttcaagaca catgttgagt ccgttgattc agagcttttg tcttcgaaca

300

caatctagag agcaaatttg ggttcaattt ggatatcaat atgggttcga ttcagataga

360

acaataccct ttgatgtcgg gtttcgattt ggttgagatt catttttatc gggtttggtt

420

cgattttcga attcggttta ttcgccccct catagcatct acattctgca gattaatgta

480

caagttatgg aaaaaaaaat gtggttttcg aattcggttt agtagctaaa cgttgcttgc

540

agtgtagtta tgggaattat gaaacacgac cgaaggtatc aattagaaga acgggtcaac

600

gggtaagtat tgagaaatta ccggagggta aaaataaaca gtattctttt tttttcttaa

660

cgaccgacca aggttaaaaa aagaaaggag gacgagatac aggggcatga ctgtaattgt

720

acataagatc tgatctttaa accctaggtt tccttcgcat cagcaactat aaataattct

780

gagtgccact cttcttcatt cctagatctt tcgccttatc gctttagctg aggtaagcct

840

ttctatacgc atagacgctc tcttttctct tctctcgatc ttcgttgaaa cggtcctcga

900

tacgcatagg atcggttaga atcgttaatc tatcgtctta gatcttcttg attgttgaat

960

tgagcttcta ggatgtattg tatcatgtga tggatagttg attggatctc tttgagtgaa

1020

ctagctagct ttcgatgcgt gtgatttcag tataacagga tccgatgaat tatagctcgc

1080

ttacaattaa tctctgcaga tttattgttt aatcttggat ttgatgctcg ttgttgatag

1140

aggatcgttt atagaactta ttgattctgg aattgagctt gtgtgatgta ttgtatcatg

1200

tgatcgatag ctgatggatc tatttgagtg aactagcgta cgatcttaag atgagtgtgt

1260

attgtgaact gatgattcga gatcagcaaa acaagatctg atgatatctt cgtcttgtat

1320

gcatcttgaa tttcatgatt ttttattaat tatagctcgc ttagctcaaa ggatagagca

1380

ccacaaaatt ttattgtggt agaaatcggt tcgattccga tagcagctta ctgtgatgaa

1440

tgattttgag atttggtatt tgatatatgt ctactgtgtt gaatgatcgt ttatgcattg

1500

tttaatcgct gcagatttgc attgacaagt agcc

1534

<210> 9

<211> 228

<212> ДНК

<213> транзитный пептид хлоропласта Arabidopsis thaliana

<400> 9

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc

60

tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca

120

cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc

180

tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc

228

<210> 10

<211> 1368

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- Нуклеотидная

последовательность гена EPSPS

<400> 10

atgcttcacg gtgcaagcag ccgtccagca actgctcgta agtcctctgg tctttctgga

60

accgtccgta ttccaggtga caagtctatc tcccacaggt ccttcatgtt tggaggtctc

120

gctagcggtg aaactcgtat caccggtctt ttggaaggtg aagatgttat caacactggt

180

aaggctatgc aagctatggg tgccagaatc cgtaaggaag gtgatacttg gatcattgat

240

ggtgttggta acggtggact ccttgctcct gaggctcctc tcgatttcgg taacgctgca

300

actggttgcc gtttgactat gggtcttgtt ggtgtttacg atttcgatag cactttcatt

360

ggtgacgctt ctctcactaa gcgtccaatg ggtcgtgtgt tgaacccact tcgcgaaatg

420

ggtgtgcagg tgaagtctga agacggtgat cgtcttccag ttaccttgcg tggaccaaag

480

actccaacgc caatcaccta cagggtacct atggcttccg ctcaagtgaa gtccgctgtt

540

ctgcttgctg gtctcaacac cccaggtatc accactgtta tcgagccaat catgactcgt

600

gaccacactg aaaagatgct tcaaggtttt ggtgctaacc ttaccgttga gactgatgct

660

gacggtgtgc gtaccatccg tcttgaaggt cgtggtaagc tcaccggtca agtgattgat

720

gttccaggtg atccatcctc tactgctttc ccattggttg ctgccttgct tgttccaggt

780

tccgacgtca ccatccttaa cgttttgatg aacccaaccc gtactggtct catcttgact

840

ctgcaggaaa tgggtgccga catcgaagtg atcaacccac gtcttgctgg tggagaagac

900

gtggctgact tgcgtgttcg ttcttctact ttgaagggtg ttactgttcc agaagaccgt

960

gctccttcta tgatcgacga gtatccaatt ctcgctgttg cagctgcatt cgctgaaggt

1020

gctaccgtta tgaacggttt ggaagaactc cgtgttaagg aaagcgaccg tctttctgct

1080

gtcgcaaacg gtctcaagct caacggtgtt gattgcgatg aaggtgagac ttctctcgtc

1140

gtgcgtggtc gtcctgacgg taagggtctc ggtaacgctt ctggagcagc tgtcgctacc

1200

cacctcgatc accgtatcgc tatgagcttc ctcgttatgg gtctcgtttc tgaaaaccct

1260

gttactgttg atgatgctac tatgatcgct actagcttcc cagagttcat ggatttgatg

1320

gctggtcttg gagctaagat cgaactctcc gacactaagg ctgcttga

1368

<210> 11

<211> 643

<212> ДНК

<213> терминатор гена RbcS гороха (Pisum sativum)

<400> 11

agctttcgtt cgtatcatcg gtttcgacaa cgttcgtcaa gttcaatgca tcagtttcat

60

tgcgcacaca ccagaatcct actgagtttg agtattatgg cattgggaaa actgtttttc

120

ttgtaccatt tgttgtgctt gtaatttact gtgtttttta ttcggttttc gctatcgaac

180

tgtgaaatgg aaatggatgg agaagagtta atgaatgata tggtcctttt gttcattctc

240

aaattaatat tatttgtttt ttctcttatt tgttgtgtgt tgaatttgaa attataagag

300

atatgcaaac attttgtttt gagtaaaaat gtgtcaaatc gtggcctcta atgaccgaag

360

ttaatatgag gagtaaaaca cttgtagttg taccattatg cttattcact aggcaacaaa

420

tatattttca gacctagaaa agctgcaaat gttactgaat acaagtatgt cctcttgtgt

480

tttagacatt tatgaacttt cctttatgta attttccaga atccttgtca gattctaatc

540

attgctttat aattatagtt atactcatgg atttgtagtt gagtatgaaa atatttttta

600

atgcatttta tgacttgcca attgattgac aacatgcatc aat

643

<210> 12

<211> 1322

<212> ДНК

<213> промотор гена убиквитина 10 Arabidopsis thaliana

<400> 12

gtcgacctgc aggtcaacgg atcaggatat tcttgtttaa gatgttgaac tctatggagg

60

tttgtatgaa ctgatgatct aggaccggat aagttccctt cttcatagcg aacttattca

120

aagaatgttt tgtgtatcat tcttgttaca ttgttattaa tgaaaaaata ttattggtca

180

ttggactgaa cacgagtgtt aaatatggac caggccccaa ataagatcca ttgatatatg

240

aattaaataa caagaataaa tcgagtcacc aaaccacttg ccttttttaa cgagacttgt

300

tcaccaactt gatacaaaag tcattatcct atgcaaatca ataatcatac aaaaatatcc

360

aataacacta aaaaattaaa agaaatggat aatttcacaa tatgttatac gataaagaag

420

ttacttttcc aagaaattca ctgattttat aagcccactt gcattagata aatggcaaaa

480

aaaaacaaaa aggaaaagaa ataaagcacg aagaattcta gaaaatacga aatacgcttc

540

aatgcagtgg gacccacggt tcaattattg ccaattttca gctccaccgt atatttaaaa

600

aataaaacga taatgctaaa aaaatataaa tcgtaacgat cgttaaatct caacggctgg

660

atcttatgac gaccgttaga aattgtggtt gtcgacgagt cagtaataaa cggcgtcaaa

720

gtggttgcag ccggcacaca cgagtcgtgt ttatcaactc aaagcacaaa tacttttcct

780

caacctaaaa ataaggcaat tagccaaaaa caactttgcg tgtaaacaac gctcaataca

840

cgtgtcattt tattattagc tattgcttca ccgccttagc tttctcgtga cctagtcgtc

900

ctcgtctttt cttcttcttc ttctataaaa caatacccaa agcttcttct tcacaattca

960

gatttcaatt tctcaaaatc ttaaaaactt tctctcaatt ctctctaccg tgatcaaggt

1020

aaatttctgt gttccttatt ctctcaaaat cttcgatttt gttttcgttc gatcccaatt

1080

tcgtatatgt tctttggttt agattctgtt aatcttagat cgaagacgat tttctgggtt

1140

tgatcgttag atatcatctt aattctcgat tagggtttca taaatatcat ccgatttgtt

1200

caaataattt gagttttgtc gaataattac tcttcgattt gtgatttcta tctagatctg

1260

gtgttagttt ctagtttgtg cgatcgaatt tgtcgattaa tctgagtttt tctgattaac

1320

ag

1322

<210> 13

<211> 253

<212> ДНК

<213> Терминатор(Agrobacterium tumefaciens)

<400> 13

gatcgttcaa acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg

60

atgattatca tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc

120

atgacgttat ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac

180

gcgatagaaa acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct

240

atgttactag atc

253

<210> 14

<211> 530

<212> ДНК

<213> Промотор (вирус мозаики цветной капусты)

<400> 14

ccatggagtc aaagattcaa atagaggacc taacagaact cgccgtaaag actggcgaac

60

agttcataca gagtctctta cgactcaatg acaagaagaa aatcttcgtc aacatggtgg

120

agcacgacac gcttgtctac tccaaaaata tcaaagatac agtctcagaa gaccaaaggg

180

caattgagac ttttcaacaa agggtaatat ccggaaacct cctcggattc cattgcccag

240

ctatctgtca ctttattgtg aagatagtgg aaaaggaagg tggctcctac aaatgccatc

300

attgcgataa aggaaaggcc atcgttgaag atgcctctgc cgacagtggt cccaaagatg

360

gacccccacc cacgaggagc atcgtggaaa aagaagacgt tccaaccacg tcttcaaagc

420

aagtggattg atgtgatatc tccactgacg taagggatga cgcacaatcc cactatcctt

480

cgcaagaccc ttcctctata taaggaagtt catttcattt ggagaggaca

530

<210> 15

<211> 552

<212> ДНК

<213> ген фосфинотрицин N-ацетилтрансферазы

Нуклеотидная последовательность (Streptomyces

viridochromogenes)

<400> 15

atgtctccgg agaggagacc agttgagatt aggccagcta cagcagctga tatggccgcg

60

gtttgtgata tcgttaacca ttacattgag acgtctacag tgaactttag gacagagcca

120

caaacaccac aagagtggat tgatgatcta gagaggttgc aagatagata cccttggttg

180

gttgctgagg ttgagggtgt tgtggctggt attgcttacg ctgggccctg gaaggctagg

240

aacgcttacg attggacagt tgagagtact gtttacgtgt cacataggca tcaaaggttg

300

ggcctaggat ccacattgta cacacatttg cttaagtcta tggaggcgca aggttttaag

360

tctgtggttg ctgttatagg ccttccaaac gatccatctg ttaggttgca tgaggctttg

420

ggatacacag cccggggtac attgcgcgca gctggataca agcatggtgg atggcatgat

480

gttggttttt ggcaaaggga ttttgagttg ccagctcctc caaggccagt taggccagtt

540

acccagatct ga

552

<210> 16

<211> 195

<212> ДНК

<213> Терминатор(вирус мозаики цветной капусты)

<400> 16

ctgaaatcac cagtctctct ctacaaatct atctctctct ataataatgt gtgagtagtt

60

cccagataag ggaattaggg ttcttatagg gtttcgctca tgtgttgagc atataagaaa

120

cccttagtat gtatttgtat ttgtaaaata cttctatcaa taaaatttct aattcctaaa

180

accaaaatcc agtgg

195

<210> 17

<211> 444

<212> ПРТ

<213> ZmHPPD Аминокислотная последовательность (Zea mays)

<400> 17

Met Pro Pro Thr Pro Thr Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ser Ala Ala Glu Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg Asn

20 25 30

Phe Val Arg Phe Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ala Phe

35 40 45

His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg

50 55 60

Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser

65 70 75 80

Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu

85 90 95

Ser Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Ala Asp Ala Ala Thr

100 105 110

Ala Ala Leu Pro Ser Phe Ser Ala Ala Ala Ala Arg Arg Phe Ala Ala

115 120 125

Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala

130 135 140

Glu Glu Ala Phe Arg Thr Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala Phe

145 150 155 160

Gly Pro Val Asp Leu Gly Arg Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Gly Ala Ala

180 185 190

Gly Glu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Gly Val Ala Ser Pro Gly Ala

195 200 205

Ala Asp Tyr Gly Leu Ser Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro

210 215 220

Glu Leu Ala Pro Ala Ala Ala Tyr Phe Ala Gly Phe Thr Gly Phe His

225 230 235 240

Glu Phe Ala Glu Phe Thr Thr Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly

245 250 255

Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Asn Val Leu Leu Pro

260 265 270

Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr

275 280 285

Phe Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Met Ala Leu Ala

290 295 300

Ser Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala

305 310 315 320

Met Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Thr Ser Asp Tyr Tyr Asp

325 330 335

Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Glu Ala Gln Ile Lys

340 345 350

Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val

355 360 365

Leu Leu Gln Ile Phe Pro Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe

370 375 380

Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Arg Asp Glu Lys Gly

385 390 395 400

Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe

405 410 415

Ser Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala

420 425 430

Met Gln Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala Gln Gly Ser

435 440

<210> 18

<211> 1335

<212> ДНК

<213> ZmHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Zea mays)

<400> 18

atgcccccga cccccacagc cgccgcagcc ggcgccgccg tggcggcggc atcagcagcg

60

gagcaggcgg cgttccgcct cgtgggccac cgcaacttcg tccgcttcaa cccgcgctcc

120

gaccgcttcc acacgctcgc gttccaccac gtggagctct ggtgcgccga cgcggcctcc

180

gccgcgggcc gcttctcctt cggcctgggc gcgccgctcg ccgcgcgctc cgacctctcc

240

acgggcaact ccgcgcacgc gtccctgctg ctccgctccg gctccctctc cttcctcttc

300

acggcgccct acgcgcacgg cgccgacgcc gccaccgctg cgctgccctc cttctccgcc

360

gccgccgcgc ggcgcttcgc ggccgaccac ggcctcgcgg tgcgcgccgt cgcgctccgc

420

gtcgccgacg ccgaggaggc cttccgcacc agcgtcgcgg ccggggcgcg cccggctttc

480

ggccccgtcg acctcggccg cggcttccgc ctcgccgagg tcgagctcta cggcgacgtc

540

gtgctccggt acgtgagcta cccggacggc gcggcgggcg agcccttcct gccggggttc

600

gagggcgtgg ccagccccgg ggcggccgac tacgggctga gcaggttcga ccacatcgtc

660

ggcaacgtgc cggagctggc gcccgccgcc gcctacttcg ccggcttcac ggggttccac

720

gagttcgccg agttcacgac ggaggacgtg ggcaccgcgg agagcggcct caactccatg

780

gtgctcgcca acaactcgga gaacgtgctg ctcccgctca acgagccggt gcacggcacc

840

aagcgccgca gccagataca gacgttcctg gaccaccacg gcggccccgg cgtgcagcac

900

atggcgctgg ccagcgacga cgtgctcagg acgctgaggg agatgcaggc gcgctcggcc

960

atgggcggct tcgagttcat ggcgcctccc acatccgact actatgacgg cgtgaggcgg

1020

cgcgccgggg acgtgctcac ggaagcacag attaaggagt gccaggagct aggggtgctg

1080

gtggataggg atgaccaggg cgtgctgctc caaatcttcc ccaagccagt gggggacagg

1140

ccaacgctgt tcttggagat catccaaagg atcgggtgca tggagaggga tgagaagggg

1200

caagaatacc agaagggtgg ctgcggcggg ttcggcaagg gaaacttctc gcagctgttc

1260

aaatccatcg aggattatga gaagtccctt gaagccatgc aagctgctgc agcagctaca

1320

gctcagggat cctag

1335

<210> 19

<211> 1335

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- Нуклеотидная

последовательность ZmHPPD-02

<400> 19

atgccaccca cacccacagc agcagcggcg ggcgcagcgg tcgcagcggc gtcagcggcg

60

gagcaagcgg cgttcagatt ggttggtcac cgcaacttcg tgagattcaa tcctcgctca

120

gatagattcc atactctggc cttccaccat gttgagcttt ggtgcgctga tgctgcttct

180

gctgctggaa ggttcagctt cggtttgggt gctcccctcg ctgctagatc tgatttgagc

240

actggtaact cagcacatgc ttccctcctg cttagatctg gctctctgag cttccttttc

300

actgctccat atgctcatgg tgctgatgct gctacagctg ctctcccttc attctccgct

360

gctgctgcta ggagattcgc tgctgatcac ggattggctg tgagggctgt tgcacttaga

420

gttgctgatg ctgaggaggc cttccgcacc tctgttgctg ctggagccag accagctttc

480

ggacctgttg atctcggaag gggtttccgc ctggctgagg tggagcttta cggcgatgtg

540

gttctgcgct acgttagcta tcctgatggt gctgctggtg aacctttcct tccaggattc

600

gagggtgtgg cctcaccagg tgccgctgat tacggcctgt ccagattcga ccacattgtt

660

ggaaatgttc ctgagcttgc tccagctgct gcctacttcg ctggcttcac cggattccat

720

gagttcgccg agttcaccac tgaggatgtg ggaactgctg agtctggttt gaatagcatg

780

gtgctcgcca acaattcaga gaacgttttg ctccctctga atgagcccgt gcacggaaca

840

aagagaaggt cccagattca aaccttcttg gatcaccacg gcggcccagg tgttcagcat

900

atggctctcg cctccgatga cgtgttgaga accctcaggg agatgcaagc caggtctgct

960

atgggtggct tcgagttcat ggccccacct acaagcgatt actatgatgg tgtgcgcaga

1020

agggctggcg acgttcttac cgaggctcag atcaaggagt gccaagagct gggcgtgctt

1080

gttgatagag atgaccaggg agttctgctt caaattttcc ccaagccagt gggcgacagg

1140

cctactttgt tcctcgagat tatccagaga atcggatgca tggagaggga tgagaagggt

1200

caggagtacc aaaagggagg ttgcggcgga ttcggcaagg gaaatttctc acaactcttc

1260

aagtccatcg aggactatga aaagagtctg gaagcgatgc aggcagcagc agcagcaacc

1320

gcacaggggt cgtga

1335

<210> 20

<211> 444

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность- Аминокислотная

последовательность ZmHPPDm-F372A

<400> 20

Met Pro Pro Thr Pro Thr Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ser Ala Ala Glu Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg Asn

20 25 30

Phe Val Arg Phe Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ala Phe

35 40 45

His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg

50 55 60

Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser

65 70 75 80

Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu

85 90 95

Ser Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Ala Asp Ala Ala Thr

100 105 110

Ala Ala Leu Pro Ser Phe Ser Ala Ala Ala Ala Arg Arg Phe Ala Ala

115 120 125

Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala

130 135 140

Glu Glu Ala Phe Arg Thr Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala Phe

145 150 155 160

Gly Pro Val Asp Leu Gly Arg Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Gly Ala Ala

180 185 190

Gly Glu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Gly Val Ala Ser Pro Gly Ala

195 200 205

Ala Asp Tyr Gly Leu Ser Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro

210 215 220

Glu Leu Ala Pro Ala Ala Ala Tyr Phe Ala Gly Phe Thr Gly Phe His

225 230 235 240

Glu Phe Ala Glu Phe Thr Thr Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly

245 250 255

Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Asn Val Leu Leu Pro

260 265 270

Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr

275 280 285

Phe Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Met Ala Leu Ala

290 295 300

Ser Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala

305 310 315 320

Met Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Thr Ser Asp Tyr Tyr Asp

325 330 335

Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Glu Ala Gln Ile Lys

340 345 350

Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val

355 360 365

Leu Leu Gln Ile Ala Pro Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe

370 375 380

Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Arg Asp Glu Lys Gly

385 390 395 400

Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe

405 410 415

Ser Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala

420 425 430

Met Gln Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala Gln Gly Ser

435 440

<210> 21

<211> 1335

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- Нуклеотидная

последовательность ZmHPPDm-F372A-01

<400> 21

atgcccccga cccccacagc cgccgcagcc ggcgccgccg tggcggcggc atcagcagcg

60

gagcaggcgg cgttccgcct cgtgggccac cgcaacttcg tccgcttcaa cccgcgctcc

120

gaccgcttcc acacgctcgc gttccaccac gtggagctct ggtgcgccga cgcggcctcc

180

gccgcgggcc gcttctcctt cggcctgggc gcgccgctcg ccgcgcgctc cgacctctcc

240

acgggcaact ccgcgcacgc gtccctgctg ctccgctccg gctccctctc cttcctcttc

300

acggcgccct acgcgcacgg cgccgacgcc gccaccgctg cgctgccctc cttctccgcc

360

gccgccgcgc ggcgcttcgc ggccgaccac ggcctcgcgg tgcgcgccgt cgcgctccgc

420

gtcgccgacg ccgaggaggc cttccgcacc agcgtcgcgg ccggggcgcg cccggctttc

480

ggccccgtcg acctcggccg cggcttccgc ctcgccgagg tcgagctcta cggcgacgtc

540

gtgctccggt acgtgagcta cccggacggc gcggcgggcg agcccttcct gccggggttc

600

gagggcgtgg ccagccccgg ggcggccgac tacgggctga gcaggttcga ccacatcgtc

660

ggcaacgtgc cggagctggc gcccgccgcc gcctacttcg ccggcttcac ggggttccac

720

gagttcgccg agttcacgac ggaggacgtg ggcaccgcgg agagcggcct caactccatg

780

gtgctcgcca acaactcgga gaacgtgctg ctcccgctca acgagccggt gcacggcacc

840

aagcgccgca gccagataca gacgttcctg gaccaccacg gcggccccgg cgtgcagcac

900

atggcgctgg ccagcgacga cgtgctcagg acgctgaggg agatgcaggc gcgctcggcc

960

atgggcggct tcgagttcat ggcgcctccc acatccgact actatgacgg cgtgaggcgg

1020

cgcgccgggg acgtgctcac ggaagcacag attaaggagt gccaggagct aggggtgctg

1080

gtggataggg atgaccaggg cgtgctgctc caaatcgctc ccaagccagt gggggacagg

1140

ccaacgctgt tcttggagat catccaaagg atcgggtgca tggagaggga tgagaagggg

1200

caagaatacc agaagggtgg ctgcggcggg ttcggcaagg gaaacttctc gcagctgttc

1260

aaatccatcg aggattatga gaagtccctt gaagccatgc aagctgctgc agcagctaca

1320

gctcagggat cctag

1335

<210> 22

<211> 1335

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность- Нуклеотидная

последовательность ZmHPPDm-F372A-02

<400> 22

atgccaccca cacccacagc agcagcggcg ggcgcagcgg tcgcagcggc gtcagcggcg

60

gagcaagcgg cgttcagatt ggttggtcac cgcaacttcg tgagattcaa tcctcgctca

120

gatagattcc atactctggc cttccaccat gttgagcttt ggtgcgctga tgctgcttct

180

gctgctggaa ggttcagctt cggtttgggt gctcccctcg ctgctagatc tgatttgagc

240

actggtaact cagcacatgc ttccctcctg cttagatctg gctctctgag cttccttttc

300

actgctccat atgctcatgg tgctgatgct gctacagctg ctctcccttc attctccgct

360

gctgctgcta ggagattcgc tgctgatcac ggattggctg tgagggctgt tgcacttaga

420

gttgctgatg ctgaggaggc cttccgcacc tctgttgctg ctggagccag accagctttc

480

ggacctgttg atctcggaag gggtttccgc ctggctgagg tggagcttta cggcgatgtg

540

gttctgcgct acgttagcta tcctgatggt gctgctggtg aacctttcct tccaggattc

600

gagggtgtgg cctcaccagg tgccgctgat tacggcctgt ccagattcga ccacattgtt

660

ggaaatgttc ctgagcttgc tccagctgct gcctacttcg ctggcttcac cggattccat

720

gagttcgccg agttcaccac tgaggatgtg ggaactgctg agtctggttt gaatagcatg

780

gtgctcgcca acaattcaga gaacgttttg ctccctctga atgagcccgt gcacggaaca

840

aagagaaggt cccagattca aaccttcttg gatcaccacg gcggcccagg tgttcagcat

900

atggctctcg cctccgatga cgtgttgaga accctcaggg agatgcaagc caggtctgct

960

atgggtggct tcgagttcat ggccccacct acaagcgatt actatgatgg tgtgcgcaga

1020

agggctggcg acgttcttac cgaggctcag atcaaggagt gccaagagct gggcgtgctt

1080

gttgatagag atgaccaggg agttctgctt caaattgctc ccaagccagt gggcgacagg

1140

cctactttgt tcctcgagat tatccagaga atcggatgca tggagaggga tgagaagggt

1200

caggagtacc aaaagggagg ttgcggcgga ttcggcaagg gaaatttctc acaactcttc

1260

aagtccatcg aggactatga aaagagtctg gaagcgatgc aggcagcagc agcagcaacc

1320

gcacaggggt cgtga

1335

<210> 23

<211> 445

<212> ПРТ

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 23

Met Gly His Gln Asn Ala Ala Val Ser Glu Asn Gln Asn His Asp Asp

1 5 10 15

Gly Ala Ala Ser Ser Pro Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Ser Lys Phe

20 25 30

Val Arg Lys Asn Pro Lys Ser Asp Lys Phe Lys Val Lys Arg Phe His

35 40 45

His Ile Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Val Ala Arg Arg Phe

50 55 60

Ser Trp Gly Leu Gly Met Arg Phe Ser Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr

65 70 75 80

Gly Asn Met Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Thr Ser Gly Asp Leu Arg

85 90 95

Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Leu Ser Ala Gly Glu Ile

100 105 110

Lys Pro Thr Thr Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Asp His Gly Ser Cys

115 120 125

Arg Ser Phe Phe Ser Ser His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Ile

130 135 140

Glu Val Glu Asp Ala Glu Ser Ala Phe Ser Ile Ser Val Ala Asn Gly

145 150 155 160

Ala Ile Pro Ser Ser Pro Pro Ile Val Leu Asn Glu Ala Val Thr Ile

165 170 175

Ala Glu Val Lys Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr

180 185 190

Lys Ala Glu Asp Thr Glu Lys Ser Glu Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg

195 200 205

Val Glu Asp Ala Ser Ser Phe Pro Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu

210 215 220

Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Gly Pro Ala Leu Thr Tyr

225 230 235 240

Val Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Gln Phe Ala Glu Phe Thr Ala Asp

245 250 255

Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Ala Val Leu Ala Ser

260 265 270

Asn Asp Glu Met Val Leu Leu Pro Ile Asn Glu Pro Val His Gly Thr

275 280 285

Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala

290 295 300

Gly Leu Gln His Leu Ala Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu

305 310 315 320

Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Ser Ile Gly Gly Phe Asp Phe Met Pro

325 330 335

Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Gln Asn Leu Lys Lys Arg Val Gly Asp

340 345 350

Val Leu Ser Asp Asp Gln Ile Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu

355 360 365

Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro

370 375 380

Leu Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Val Gly

385 390 395 400

Cys Met Met Lys Asp Glu Glu Gly Lys Ala Tyr Gln Ser Gly Gly Cys

405 410 415

Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu

420 425 430

Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ala Lys Gln Leu Val Gly

435 440 445

<210> 24

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Нуклеотидная последовательность AtHPPD Arabidopsis thaliana

<400> 24

atgggccacc aaaacgccgc cgtttcagag aatcaaaacc atgatgacgg cgctgcgtcg

60

tcgccgggat tcaagctcgt cggattttcc aagttcgtaa gaaagaatcc aaagtctgat

120

aaattcaagg ttaagcgctt ccatcacatc gagttctggt gcggcgacgc aaccaacgtc

180

gctcgtcgct tctcctgggg tctggggatg agattctccg ccaaatccga tctttccacc

240

ggaaacatgg ttcacgcctc ttacctactc acctccggtg acctccgatt ccttttcact

300

gctccttact ctccgtctct ctccgccgga gagattaaac cgacaaccac agcttctatc

360

ccaagtttcg atcacggctc ttgtcgttcc ttcttctctt cacatggtct cggtgttaga

420

gccgttgcga ttgaagtaga agacgcagag tcagctttct ccatcagtgt agctaatggc

480

gctattcctt cgtcgcctcc tatcgtcctc aatgaagcag ttacgatcgc tgaggttaaa

540

ctatacggcg atgttgttct ccgatatgtt agttacaaag cagaagatac cgaaaaatcc

600

gaattcttgc cagggttcga gcgtgtagag gatgcgtcgt cgttcccatt ggattatggt

660

atccggcggc ttgaccacgc cgtgggaaac gttcctgagc ttggtccggc tttaacttat

720

gtagcggggt tcactggttt tcaccaattc gcagagttca cagcagacga cgttggaacc

780

gccgagagcg gtttaaattc agcggtcctg gctagcaatg atgaaatggt tcttctaccg

840

attaacgagc cagtgcacgg aacaaagagg aagagtcaga ttcagacgta tttggaacat

900

aacgaaggcg cagggctaca acatctggct ctgatgagtg aagacatatt caggaccctg

960

agagagatga ggaagaggag cagtattgga ggattcgact tcatgccttc tcctccgcct

1020

acttactacc agaatctcaa gaaacgggtc ggcgacgtgc tcagcgatga tcagatcaag

1080

gagtgtgagg aattagggat tcttgtagac agagatgatc aagggacgtt gcttcaaatc

1140

ttcacaaaac cactaggtga caggccgacg atatttatag agataatcca gagagtagga

1200

tgcatgatga aagatgagga agggaaggct taccagagtg gaggatgtgg tggttttggc

1260

aaaggcaatt tctctgagct cttcaagtcc attgaagaat acgaaaagac tcttgaagcc

1320

aaacagttag tgggatga

1338

<210> 25

<211> 445

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-AtHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 25

Met Gly His Gln Asn Ala Ala Val Ser Glu Asn Gln Asn His Asp Asp

1 5 10 15

Gly Ala Ala Ser Ser Pro Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Ser Lys Phe

20 25 30

Val Arg Lys Asn Pro Lys Ser Asp Lys Phe Lys Val Lys Arg Phe His

35 40 45

His Ile Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Val Ala Arg Arg Phe

50 55 60

Ser Trp Gly Leu Gly Met Arg Phe Ser Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr

65 70 75 80

Gly Asn Met Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Thr Ser Gly Asp Leu Arg

85 90 95

Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Leu Ser Ala Gly Glu Ile

100 105 110

Lys Pro Thr Thr Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Asp His Gly Ser Cys

115 120 125

Arg Ser Phe Phe Ser Ser His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Ile

130 135 140

Glu Val Glu Asp Ala Glu Ser Ala Phe Ser Ile Ser Val Ala Asn Gly

145 150 155 160

Ala Ile Pro Ser Ser Pro Pro Ile Val Leu Asn Glu Ala Val Thr Ile

165 170 175

Ala Glu Val Lys Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr

180 185 190

Lys Ala Glu Asp Thr Glu Lys Ser Glu Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg

195 200 205

Val Glu Asp Ala Ser Ser Phe Pro Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu

210 215 220

Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Gly Pro Ala Leu Thr Tyr

225 230 235 240

Val Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Gln Phe Ala Glu Phe Thr Ala Asp

245 250 255

Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Ala Val Leu Ala Ser

260 265 270

Asn Asp Glu Met Val Leu Leu Pro Ile Asn Glu Pro Val His Gly Thr

275 280 285

Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala

290 295 300

Gly Leu Gln His Leu Ala Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu

305 310 315 320

Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Ser Ile Gly Gly Phe Asp Phe Met Pro

325 330 335

Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Gln Asn Leu Lys Lys Arg Val Gly Asp

340 345 350

Val Leu Ser Asp Asp Gln Ile Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu

355 360 365

Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro

370 375 380

Leu Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Val Gly

385 390 395 400

Cys Met Met Lys Asp Glu Glu Gly Lys Ala Tyr Gln Ser Gly Gly Cys

405 410 415

Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu

420 425 430

Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ala Lys Gln Leu Val Gly

435 440 445

<210> 26

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-AtHPPDm-F372A Нуклеотидная

последовательность

<400> 26

atgggccacc aaaacgccgc cgtttcagag aatcaaaacc atgatgacgg cgctgcgtcg

60

tcgccgggat tcaagctcgt cggattttcc aagttcgtaa gaaagaatcc aaagtctgat

120

aaattcaagg ttaagcgctt ccatcacatc gagttctggt gcggcgacgc aaccaacgtc

180

gctcgtcgct tctcctgggg tctggggatg agattctccg ccaaatccga tctttccacc

240

ggaaacatgg ttcacgcctc ttacctactc acctccggtg acctccgatt ccttttcact

300

gctccttact ctccgtctct ctccgccgga gagattaaac cgacaaccac agcttctatc

360

ccaagtttcg atcacggctc ttgtcgttcc ttcttctctt cacatggtct cggtgttaga

420

gccgttgcga ttgaagtaga agacgcagag tcagctttct ccatcagtgt agctaatggc

480

gctattcctt cgtcgcctcc tatcgtcctc aatgaagcag ttacgatcgc tgaggttaaa

540

ctatacggcg atgttgttct ccgatatgtt agttacaaag cagaagatac cgaaaaatcc

600

gaattcttgc cagggttcga gcgtgtagag gatgcgtcgt cgttcccatt ggattatggt

660

atccggcggc ttgaccacgc cgtgggaaac gttcctgagc ttggtccggc tttaacttat

720

gtagcggggt tcactggttt tcaccaattc gcagagttca cagcagacga cgttggaacc

780

gccgagagcg gtttaaattc agcggtcctg gctagcaatg atgaaatggt tcttctaccg

840

attaacgagc cagtgcacgg aacaaagagg aagagtcaga ttcagacgta tttggaacat

900

aacgaaggcg cagggctaca acatctggct ctgatgagtg aagacatatt caggaccctg

960

agagagatga ggaagaggag cagtattgga ggattcgact tcatgccttc tcctccgcct

1020

acttactacc agaatctcaa gaaacgggtc ggcgacgtgc tcagcgatga tcagatcaag

1080

gagtgtgagg aattagggat tcttgtagac agagatgatc aagggacgtt gcttcaaatc

1140

gctacaaaac cactaggtga caggccgacg atatttatag agataatcca gagagtagga

1200

tgcatgatga aagatgagga agggaaggct taccagagtg gaggatgtgg tggttttggc

1260

aaaggcaatt tctctgagct cttcaagtcc attgaagaat acgaaaagac tcttgaagcc

1320

aaacagttag tgggatga

1338

<210> 27

<211> 358

<212> ПРТ

<213> PfHPPD Аминокислотная последовательность (Pseudomonas

fluorescens)

<400> 27

Met Ala Asp Leu Tyr Glu Asn Pro Met Gly Leu Met Gly Phe Glu Phe

1 5 10 15

Ile Glu Phe Ala Ser Pro Thr Pro Gly Thr Leu Glu Pro Ile Phe Glu

20 25 30

Ile Met Gly Phe Thr Lys Val Ala Thr His Arg Ser Lys Asn Val His

35 40 45

Leu Tyr Arg Gln Gly Glu Ile Asn Leu Ile Leu Asn Asn Glu Pro Asn

50 55 60

Ser Ile Ala Ser Tyr Phe Ala Ala Glu His Gly Pro Ser Val Cys Gly

65 70 75 80

Met Ala Phe Arg Val Lys Asp Ser Gln Lys Ala Tyr Asn Arg Ala Leu

85 90 95

Glu Leu Gly Ala Gln Pro Ile His Ile Asp Thr Gly Pro Met Glu Leu

100 105 110

Asn Leu Pro Ala Ile Lys Gly Ile Gly Gly Ala Pro Leu Tyr Leu Ile

115 120 125

Asp Arg Phe Gly Glu Gly Ser Ser Ile Tyr Asp Ile Asp Phe Val Tyr

130 135 140

Leu Glu Gly Val Glu Arg Asn Pro Val Gly Ala Gly Leu Lys Val Ile

145 150 155 160

Asp His Leu Thr His Asn Val Tyr Arg Gly Arg Met Val Tyr Trp Ala

165 170 175

Asn Phe Tyr Glu Lys Leu Phe Asn Phe Arg Glu Ala Arg Tyr Phe Asp

180 185 190

Ile Lys Gly Glu Tyr Thr Gly Leu Thr Ser Lys Ala Met Ser Ala Pro

195 200 205

Asp Gly Met Ile Arg Ile Pro Leu Asn Glu Glu Ser Ser Lys Gly Ala

210 215 220

Gly Gln Ile Glu Glu Phe Leu Met Gln Phe Asn Gly Glu Gly Ile Gln

225 230 235 240

His Val Ala Phe Leu Thr Asp Asp Leu Val Lys Thr Trp Asp Ala Leu

245 250 255

Lys Lys Ile Gly Met Arg Phe Met Thr Ala Pro Pro Asp Thr Tyr Tyr

260 265 270

Glu Met Leu Glu Gly Arg Leu Pro Asp His Gly Glu Pro Val Asp Gln

275 280 285

Leu Gln Ala Arg Gly Ile Leu Leu Asp Gly Ser Ser Val Glu Gly Asp

290 295 300

Lys Arg Leu Leu Leu Gln Ile Phe Ser Glu Thr Leu Met Gly Pro Val

305 310 315 320

Phe Phe Glu Phe Ile Gln Arg Lys Gly Asp Asp Gly Phe Gly Glu Gly

325 330 335

Asn Phe Lys Ala Leu Phe Glu Ser Ile Glu Arg Asp Gln Val Arg Arg

340 345 350

Gly Val Leu Thr Ala Asp

355

<210> 28

<211> 1077

<212> ДНК

<213> PfHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Pseudomonas

fluorescens)

<400> 28

atggcagatc tatacgaaaa cccaatgggc ctgatgggct ttgaattcat cgaattcgcg

60

tcgccgacgc cgggcaccct ggagccgatc ttcgagatca tgggcttcac caaagtcgcg

120

acccaccgtt ccaagaacgt gcacctgtac cgccagggcg agatcaacct gatcctcaac

180

aacgagccca acagcatcgc ctcctacttt gcggccgaac acggcccgtc ggtgtgcggc

240

atggcgttcc gcgtgaagga ctcgcaaaag gcctacaacc gcgccctgga actcggcgcc

300

cagccgatcc atattgacac cgggccgatg gaattgaacc tgccggcgat caagggcatc

360

ggcggcgcgc cgttgtacct gatcgaccgt ttcggcgaag gcagctcgat ctacgacatc

420

gacttcgtgt acctcgaagg tgtggagcgc aatccggtcg gtgcaggtct caaagtcatc

480

gaccacctga cccacaacgt ctatcgcggc cgcatggtct actgggccaa cttctacgag

540

aaattgttca acttccgtga agcgcgttac ttcgatatca agggcgagta caccggcctg

600

acttccaagg ccatgagtgc gccggacggc atgatccgca tcccgctgaa cgaagagtcg

660

tccaagggcg cggggcagat cgaagagttc ctgatgcagt tcaacggcga aggcatccag

720

cacgtggcgt tcctcaccga cgacctggtc aagacctggg acgcgttgaa gaaaatcggc

780

atgcgcttca tgaccgcgcc gccagacact tattacgaaa tgctcgaagg ccgcctgcct

840

gaccacggcg agccggtgga tcaactgcag gcacgcggta tcctgctgga cggatcttcc

900

gtggaaggcg acaaacgcct gctgctgcag atcttctcgg aaaccctgat gggcccggtg

960

ttcttcgaat tcatccagcg caagggcgac gatgggtttg gcgagggcaa cttcaaggcg

1020

ctgttcgagt ccatcgaacg tgaccaggtg cgtcgtggtg tattgaccgc cgattaa

1077

<210> 29

<211> 1077

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-PfHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 29

atggctgatt tgtatgaaaa tcctatggga ttgatgggat ttgaatttat tgaatttgct

60

tctcctactc ctggaacttt ggaacctatt tttgaaatta tgggatttac taaggttgct

120

actcatagat ctaagaatgt tcatttgtat agacaaggag aaattaattt gattttgaat

180

aatgaaccta attctattgc ttcttatttt gctgctgaac atggaccttc tgtttgtgga

240

atggctttta gagttaagga ttctcaaaag gcttataata gagctttgga attgggagct

300

caacctattc atattgatac tggacctatg gaattgaatt tgcctgctat taagggaatt

360

ggaggagctc ctttgtattt gattgataga tttggagaag gatcttctat ttatgatatt

420

gattttgttt atttggaagg agttgaaaga aatcctgttg gagctggatt gaaggttatt

480

gatcatttga ctcataatgt ttatagagga agaatggttt attgggctaa tttttatgaa

540

aagttgttta attttagaga agctagatat tttgatatta agggagaata tactggattg

600

acttctaagg ctatgtctgc tcctgatgga atgattagaa ttcctttgaa tgaagaatct

660

tctaagggag ctggacaaat tgaagaattt ttgatgcaat ttaatggaga aggaattcaa

720

catgttgctt ttttgactga tgatttggtt aagacttggg atgctttgaa gaagattgga

780

atgagattta tgactgctcc tcctgatact tattatgaaa tgttggaagg aagattgcct

840

gatcatggag aacctgttga tcaattgcaa gctagaggaa ttttgttgga tggatcttct

900

gttgaaggag ataagagatt gttgttgcaa attttttctg aaactttgat gggacctgtt

960

ttttttgaat ttattcaaag aaagggagat gatggatttg gagaaggaaa ttttaaggct

1020

ttgtttgaat ctattgaaag agatcaagtt agaagaggag ttttgactgc tgattga

1077

<210> 30

<211> 358

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-PfHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 30

Met Ala Asp Leu Tyr Glu Asn Pro Met Gly Leu Met Gly Phe Glu Phe

1 5 10 15

Ile Glu Phe Ala Ser Pro Thr Pro Gly Thr Leu Glu Pro Ile Phe Glu

20 25 30

Ile Met Gly Phe Thr Lys Val Ala Thr His Arg Ser Lys Asn Val His

35 40 45

Leu Tyr Arg Gln Gly Glu Ile Asn Leu Ile Leu Asn Asn Glu Pro Asn

50 55 60

Ser Ile Ala Ser Tyr Phe Ala Ala Glu His Gly Pro Ser Val Cys Gly

65 70 75 80

Met Ala Phe Arg Val Lys Asp Ser Gln Lys Ala Tyr Asn Arg Ala Leu

85 90 95

Glu Leu Gly Ala Gln Pro Ile His Ile Asp Thr Gly Pro Met Glu Leu

100 105 110

Asn Leu Pro Ala Ile Lys Gly Ile Gly Gly Ala Pro Leu Tyr Leu Ile

115 120 125

Asp Arg Phe Gly Glu Gly Ser Ser Ile Tyr Asp Ile Asp Phe Val Tyr

130 135 140

Leu Glu Gly Val Glu Arg Asn Pro Val Gly Ala Gly Leu Lys Val Ile

145 150 155 160

Asp His Leu Thr His Asn Val Tyr Arg Gly Arg Met Val Tyr Trp Ala

165 170 175

Asn Phe Tyr Glu Lys Leu Phe Asn Phe Arg Glu Ala Arg Tyr Phe Asp

180 185 190

Ile Lys Gly Glu Tyr Thr Gly Leu Thr Ser Lys Ala Met Ser Ala Pro

195 200 205

Asp Gly Met Ile Arg Ile Pro Leu Asn Glu Glu Ser Ser Lys Gly Ala

210 215 220

Gly Gln Ile Glu Glu Phe Leu Met Gln Phe Asn Gly Glu Gly Ile Gln

225 230 235 240

His Val Ala Phe Leu Thr Asp Asp Leu Val Lys Thr Trp Asp Ala Leu

245 250 255

Lys Lys Ile Gly Met Arg Phe Met Thr Ala Pro Pro Asp Thr Tyr Tyr

260 265 270

Glu Met Leu Glu Gly Arg Leu Pro Asp His Gly Glu Pro Val Asp Gln

275 280 285

Leu Gln Ala Arg Gly Ile Leu Leu Asp Gly Ser Ser Val Glu Gly Asp

290 295 300

Lys Arg Leu Leu Leu Gln Ile Ala Ser Glu Thr Leu Met Gly Pro Val

305 310 315 320

Phe Phe Glu Phe Ile Gln Arg Lys Gly Asp Asp Gly Phe Gly Glu Gly

325 330 335

Asn Phe Lys Ala Leu Phe Glu Ser Ile Glu Arg Asp Gln Val Arg Arg

340 345 350

Gly Val Leu Thr Ala Asp

355

<210> 31

<211> 1077

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-PfHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 31

atggcagatc tatacgaaaa cccaatgggc ctgatgggct ttgaattcat cgaattcgcg

60

tcgccgacgc cgggcaccct ggagccgatc ttcgagatca tgggcttcac caaagtcgcg

120

acccaccgtt ccaagaacgt gcacctgtac cgccagggcg agatcaacct gatcctcaac

180

aacgagccca acagcatcgc ctcctacttt gcggccgaac acggcccgtc ggtgtgcggc

240

atggcgttcc gcgtgaagga ctcgcaaaag gcctacaacc gcgccctgga actcggcgcc

300

cagccgatcc atattgacac cgggccgatg gaattgaacc tgccggcgat caagggcatc

360

ggcggcgcgc cgttgtacct gatcgaccgt ttcggcgaag gcagctcgat ctacgacatc

420

gacttcgtgt acctcgaagg tgtggagcgc aatccggtcg gtgcaggtct caaagtcatc

480

gaccacctga cccacaacgt ctatcgcggc cgcatggtct actgggccaa cttctacgag

540

aaattgttca acttccgtga agcgcgttac ttcgatatca agggcgagta caccggcctg

600

acttccaagg ccatgagtgc gccggacggc atgatccgca tcccgctgaa cgaagagtcg

660

tccaagggcg cggggcagat cgaagagttc ctgatgcagt tcaacggcga aggcatccag

720

cacgtggcgt tcctcaccga cgacctggtc aagacctggg acgcgttgaa gaaaatcggc

780

atgcgcttca tgaccgcgcc gccagacact tattacgaaa tgctcgaagg ccgcctgcct

840

gaccacggcg agccggtgga tcaactgcag gcacgcggta tcctgctgga cggatcttcc

900

gtggaaggcg acaaacgcct gctgctgcag atcgcttcgg aaaccctgat gggcccggtg

960

ttcttcgaat tcatccagcg caagggcgac gatgggtttg gcgagggcaa cttcaaggcg

1020

ctgttcgagt ccatcgaacg tgaccaggtg cgtcgtggtg tattgaccgc cgattaa

1077

<210> 32

<211> 1077

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-PfHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 32

atggccgatt tgtacgagaa cccaatggga ctcatgggtt tcgagttcat tgagttcgct

60

tcccccaccc caggtacttt ggagcctatt ttcgagatca tgggcttcac taaggttgcc

120

acacacaggt ctaagaatgt gcatctctac cgccaaggag agattaacct gatccttaac

180

aatgagccta atagcatcgc ctcatacttc gctgctgagc atggtccatc tgtttgcggc

240

atggctttca gagtgaagga ttcacaaaag gcctacaaca gggctttgga gctcggcgcc

300

cagcccattc atatcgacac cggacctatg gagctgaatc ttcctgccat taagggcatc

360

ggcggagctc cattgtacct cattgatcgc ttcggcgagg gctcctctat ctacgatatc

420

gacttcgtgt acctggaggg cgttgagaga aaccctgtgg gagctggtct gaaggttatc

480

gaccacctta ctcataatgt ttacagagga aggatggtgt actgggccaa cttctacgag

540

aagctgttca atttccgcga ggctagatac ttcgatatta agggcgagta cacaggactt

600

acctccaagg ccatgtctgc tcccgacggt atgattagga tcccattgaa cgaggagagc

660

tcaaagggcg ccggacagat tgaggagttc ctcatgcaat tcaatggtga aggcatccag

720

cacgttgctt tcctgacaga tgaccttgtg aagacctggg atgccctcaa gaagattggc

780

atgaggttca tgaccgctcc acctgacact tactacgaga tgttggaggg acgcctccct

840

gatcatggcg agcccgttga ccagctgcaa gctagaggaa tcctcctgga tggttcctct

900

gtggagggcg acaagaggct tttgctccaa attgctagcg agactcttat gggacccgtg

960

ttcttcgagt tcatccagag gaagggcgat gacggattcg gcgagggcaa cttcaaggcc

1020

ctgttcgagt ctattgagag agatcaggtg aggcgcggcg ttcttacagc tgactga

1077

<210> 33

<211> 436

<212> ПРТ

<213> GsHPPD Аминокислотная последовательность (Gossypium hirsutum)

<400> 33

Met Val Gln Thr Asn Gln Ser Gly Ser Gly Asn Asp Phe Lys Leu Val

1 5 10 15

Gly Phe Ser Asn Phe Val Arg Ser Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Thr

20 25 30

Val Lys Arg Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr Asn

35 40 45

Val Ala Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Gln Phe Val Ala Lys

50 55 60

Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Leu Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg

65 70 75 80

Ser Arg Asp Leu Asn Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile

85 90 95

Ala Val Ala Gln Asn Leu Ser Pro Gln Ser Thr Ala Ser Ile Pro Ser

100 105 110

Phe Asp His Ser Leu Cys Arg Ser Phe Ala Ala Thr His Gly Leu Gly

115 120 125

Val Arg Ala Ile Ala Ile Glu Val Asp Asp Ala Glu Thr Ala Phe Thr

130 135 140

Thr Ser Val Thr His Gly Ala Leu Pro Phe Cys Pro Pro Thr Pro Leu

145 150 155 160

Gly Asp Val Ala Thr Ile Ala Glu Val Lys Leu Tyr Gly Asp Val Val

165 170 175

Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Thr Thr Thr Ile Asn Ser Asp His Asp Phe

180 185 190

Leu Pro Gly Phe Glu Lys Ile Glu Asp Thr Leu Ser Tyr Pro Leu Asp

195 200 205

Tyr Gly Leu Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu

210 215 220

Gly Pro Ala Val Ser Tyr Val Lys Ser Phe Thr Gly Phe His Glu Phe

225 230 235 240

Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn

245 250 255

Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Met Val Leu Leu Pro Met Asn

260 265 270

Glu Pro Val Phe Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu

275 280 285

Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Val Ser Glu

290 295 300

Asp Ile Phe Lys Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Phe Val Gly

305 310 315 320

Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys Lys Leu

325 330 335

Lys Gln Arg Ala Gly Asp Ile Leu Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys

340 345 350

Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu

355 360 365

Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu

370 375 380

Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Val Lys Asp Glu Glu Gly Lys Gln

385 390 395 400

Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu

405 410 415

Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln

420 425 430

Ser Gln Asn Pro

435

<210> 34

<211> 1311

<212> ДНК

<213> GsHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Gossypium hirsutum)

<400> 34

atggtccaga caaaccagtc tggttccggc aatgatttca agctcgtcgg attctcgaat

60

ttcgtccggt caaatccaaa atccgatcgg ttcaccgtca aacgtttcca ccacatcgag

120

ttttggtgta ccgacgccac taacgtcgct cgccgttttt catggggtct cggtatgcaa

180

tttgtagcta aatcggattt atccaccgga aatttgaccc atgcttctta tctcctccgt

240

tcccgtgacc tgaacttcct tttcactgcc ccctattccc cttctattgc cgttgctcaa

300

aacctctccc ctcaatccac cgcttcgatc ccttcttttg atcattcact ctgccgctcc

360

ttcgctgcca cccacggctt aggcgttcgc gccatcgcca tcgaagttga cgatgccgaa

420

accgctttca ccaccagtgt cacacatggc gcgttaccct tttgccctcc taccccactc

480

ggcgacgtcg ccactatcgc cgaagtcaaa ctctacggcg acgtcgtttt gcgttacgtc

540

agttacacca ccaccataaa ctccgaccat gatttcttgc cgggattcga gaaaatagaa

600

gacacccttt cttacccttt agattacgga ctccgacgac tcgaccacgc cgtcggcaac

660

gtcccagaac tcggtcccgc tgtttcgtac gttaaatcct tcaccggctt ccacgaattc

720

gctgaattca cagctgaaga cgtcggaact agcgaaagtg gactaaactc cgtcgtttta

780

gctaacaacg aagaaatggt attacttccg atgaacgaac cggtgttcgg aacaaaaagg

840

aaaagccaaa tccaaacgta tttagaacac aacgaaggtg ccggagttca acatttggca

900

ttggtgagtg aagatatatt caagacgtta agagaaatga ggaagagaag cttcgtcggc

960

ggttttgagt tcatgccgtc gccgccgccg acttattata aaaaattgaa gcaaagggca

1020

ggggatattt tgagtgatga acagattaaa gagtgtgaag aactggggat tctggttgat

1080

agagatgatc aagggacttt gctgcaaatt ttcactaagc cagttggtga taggccaacc

1140

atcttcatag agataataca aagaattggg tgcatggtga aggatgaaga aggaaagcaa

1200

taccaaaaag gtggatgtgg tggttttggg aaaggcaact tttctgagct cttcaaatcc

1260

attgaagaat atgagaaatc tcttgaagcc aaacaatctc agaatccatg a

1311

<210> 35

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-GsHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 35

atggtgcaga caaaccaatc cggctctgga aatgacttca agcttgtggg cttcagcaac

60

ttcgttaggt ccaatcctaa gtctgacaga ttcaccgtta agaggttcca ccatattgag

120

ttctggtgca cagatgccac caacgtggct aggcgcttct catggggtct cggcatgcag

180

ttcgttgcca agagcgacct ctcaactggc aacctgacac acgctagcta cctcctgcgc

240

tcaagagatc tcaatttcct gttcactgcc ccctacagcc catcaattgc cgtggctcag

300

aatctctccc cacaatctac tgctagcatc ccttcattcg atcacagcct ttgcaggtca

360

ttcgccgcta cacatggatt gggtgtgcgc gccattgcta tcgaggttga tgacgccgag

420

actgctttca ccactagcgt gacacacggc gcccttcctt tctgcccacc tacccccttg

480

ggagacgtgg ccactatcgc tgaggttaag ctctacggcg atgtggttct gcgctacgtt

540

tcctacacaa ccactattaa ctctgatcat gacttcctcc ccggtttcga gaagatcgag

600

gatactcttt cctacccatt ggactacggc cttagaaggt tggatcacgc cgtgggcaat

660

gttcctgagc tgggacccgc tgtgtcctac gttaagtctt tcacaggctt ccatgagttc

720

gccgagttca ccgctgagga cgtgggaact tccgagtctg gtcttaactc tgtggttttg

780

gccaacaatg aggagatggt gcttttgcct atgaacgagc ctgttttcgg aacaaagcgc

840

aagtcccaga ttcaaaccta ccttgagcac aacgagggcg ccggagtgca gcatcttgct

900

ttggtttctg aggatatctt caagaccttg agagagatga ggaagcgcag cttcgttggc

960

ggattcgagt tcatgccttc acccccacct acttactaca agaagctcaa gcagagagct

1020

ggagatattc tgtccgacga gcaaatcaag gagtgcgagg agctcggaat tctggtggac

1080

agggatgacc agggtacact cctgcaaatc ttcaccaagc ccgttggcga tcgcccaacc

1140

attttcatcg agattatcca aagaattggt tgcatggtga aggacgagga gggcaagcag

1200

taccaaaagg gtggctgcgg aggtttcggc aagggcaact tctccgagct cttcaagtct

1260

atcgaggagt acgagaagag cctggaggct aagcagtcac aaaatccctg a

1311

<210> 36

<211> 436

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-GsHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 36

Met Val Gln Thr Asn Gln Ser Gly Ser Gly Asn Asp Phe Lys Leu Val

1 5 10 15

Gly Phe Ser Asn Phe Val Arg Ser Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Thr

20 25 30

Val Lys Arg Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr Asn

35 40 45

Val Ala Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Gln Phe Val Ala Lys

50 55 60

Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Leu Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg

65 70 75 80

Ser Arg Asp Leu Asn Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile

85 90 95

Ala Val Ala Gln Asn Leu Ser Pro Gln Ser Thr Ala Ser Ile Pro Ser

100 105 110

Phe Asp His Ser Leu Cys Arg Ser Phe Ala Ala Thr His Gly Leu Gly

115 120 125

Val Arg Ala Ile Ala Ile Glu Val Asp Asp Ala Glu Thr Ala Phe Thr

130 135 140

Thr Ser Val Thr His Gly Ala Leu Pro Phe Cys Pro Pro Thr Pro Leu

145 150 155 160

Gly Asp Val Ala Thr Ile Ala Glu Val Lys Leu Tyr Gly Asp Val Val

165 170 175

Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Thr Thr Thr Ile Asn Ser Asp His Asp Phe

180 185 190

Leu Pro Gly Phe Glu Lys Ile Glu Asp Thr Leu Ser Tyr Pro Leu Asp

195 200 205

Tyr Gly Leu Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu

210 215 220

Gly Pro Ala Val Ser Tyr Val Lys Ser Phe Thr Gly Phe His Glu Phe

225 230 235 240

Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn

245 250 255

Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Met Val Leu Leu Pro Met Asn

260 265 270

Glu Pro Val Phe Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu

275 280 285

Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Val Ser Glu

290 295 300

Asp Ile Phe Lys Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Phe Val Gly

305 310 315 320

Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys Lys Leu

325 330 335

Lys Gln Arg Ala Gly Asp Ile Leu Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys

340 345 350

Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu

355 360 365

Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu

370 375 380

Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Val Lys Asp Glu Glu Gly Lys Gln

385 390 395 400

Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu

405 410 415

Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln

420 425 430

Ser Gln Asn Pro

435

<210> 37

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-GsHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 37

atggtccaga caaaccagtc tggttccggc aatgatttca agctcgtcgg attctcgaat

60

ttcgtccggt caaatccaaa atccgatcgg ttcaccgtca aacgtttcca ccacatcgag

120

ttttggtgta ccgacgccac taacgtcgct cgccgttttt catggggtct cggtatgcaa

180

tttgtagcta aatcggattt atccaccgga aatttgaccc atgcttctta tctcctccgt

240

tcccgtgacc tgaacttcct tttcactgcc ccctattccc cttctattgc cgttgctcaa

300

aacctctccc ctcaatccac cgcttcgatc ccttcttttg atcattcact ctgccgctcc

360

ttcgctgcca cccacggctt aggcgttcgc gccatcgcca tcgaagttga cgatgccgaa

420

accgctttca ccaccagtgt cacacatggc gcgttaccct tttgccctcc taccccactc

480

ggcgacgtcg ccactatcgc cgaagtcaaa ctctacggcg acgtcgtttt gcgttacgtc

540

agttacacca ccaccataaa ctccgaccat gatttcttgc cgggattcga gaaaatagaa

600

gacacccttt cttacccttt agattacgga ctccgacgac tcgaccacgc cgtcggcaac

660

gtcccagaac tcggtcccgc tgtttcgtac gttaaatcct tcaccggctt ccacgaattc

720

gctgaattca cagctgaaga cgtcggaact agcgaaagtg gactaaactc cgtcgtttta

780

gctaacaacg aagaaatggt attacttccg atgaacgaac cggtgttcgg aacaaaaagg

840

aaaagccaaa tccaaacgta tttagaacac aacgaaggtg ccggagttca acatttggca

900

ttggtgagtg aagatatatt caagacgtta agagaaatga ggaagagaag cttcgtcggc

960

ggttttgagt tcatgccgtc gccgccgccg acttattata aaaaattgaa gcaaagggca

1020

ggggatattt tgagtgatga acagattaaa gagtgtgaag aactggggat tctggttgat

1080

agagatgatc aagggacttt gctgcaaatt gctactaagc cagttggtga taggccaacc

1140

atcttcatag agataataca aagaattggg tgcatggtga aggatgaaga aggaaagcaa

1200

taccaaaaag gtggatgtgg tggttttggg aaaggcaact tttctgagct cttcaaatcc

1260

attgaagaat atgagaaatc tcttgaagcc aaacaatctc agaatccatg a

1311

<210> 38

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-GsHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 38

atggtgcaga caaaccaatc cggctctgga aatgacttca agcttgtggg cttcagcaac

60

ttcgttaggt ccaatcctaa gtctgacaga ttcaccgtta agaggttcca ccatattgag

120

ttctggtgca cagatgccac caacgtggct aggcgcttct catggggtct cggcatgcag

180

ttcgttgcca agagcgacct ctcaactggc aacctgacac acgctagcta cctcctgcgc

240

tcaagagatc tcaatttcct gttcactgcc ccctacagcc catcaattgc cgtggctcag

300

aatctctccc cacaatctac tgctagcatc ccttcattcg atcacagcct ttgcaggtca

360

ttcgccgcta cacatggatt gggtgtgcgc gccattgcta tcgaggttga tgacgccgag

420

actgctttca ccactagcgt gacacacggc gcccttcctt tctgcccacc tacccccttg

480

ggagacgtgg ccactatcgc tgaggttaag ctctacggcg atgtggttct gcgctacgtt

540

tcctacacaa ccactattaa ctctgatcat gacttcctcc ccggtttcga gaagatcgag

600

gatactcttt cctacccatt ggactacggc cttagaaggt tggatcacgc cgtgggcaat

660

gttcctgagc tgggacccgc tgtgtcctac gttaagtctt tcacaggctt ccatgagttc

720

gccgagttca ccgctgagga cgtgggaact tccgagtctg gtcttaactc tgtggttttg

780

gccaacaatg aggagatggt gcttttgcct atgaacgagc ctgttttcgg aacaaagcgc

840

aagtcccaga ttcaaaccta ccttgagcac aacgagggcg ccggagtgca gcatcttgct

900

ttggtttctg aggatatctt caagaccttg agagagatga ggaagcgcag cttcgttggc

960

ggattcgagt tcatgccttc acccccacct acttactaca agaagctcaa gcagagagct

1020

ggagatattc tgtccgacga gcaaatcaag gagtgcgagg agctcggaat tctggtggac

1080

agggatgacc agggtacact cctgcaaatc gctaccaagc ccgttggcga tcgcccaacc

1140

attttcatcg agattatcca aagaattggt tgcatggtga aggacgagga gggcaagcag

1200

taccaaaagg gtggctgcgg aggtttcggc aagggcaact tctccgagct cttcaagtct

1260

atcgaggagt acgagaagag cctggaggct aagcagtcac aaaatccctg a

1311

<210> 39

<211> 436

<212> ПРТ

<213> TaHPPD Аминокислотная последовательность (Triticum aestivum)

<400> 39

Met Pro Pro Thr Pro Thr Thr Pro Ala Ala Thr Gly Ala Gly Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ala Val Thr Pro Glu His Ala Arg Pro Arg Arg Met Val Arg Phe

20 25 30

Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ser Phe His His Val Glu

35 40 45

Phe Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ala

50 55 60

Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser

65 70 75 80

Val His Ala Ser Gln Leu Leu Arg Ser Gly Asn Leu Ala Phe Leu Phe

85 90 95

Thr Ala Pro Tyr Ala Asn Gly Cys Asp Ala Ala Thr Ala Ser Leu Pro

100 105 110

Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Arg Phe Ser Ala Asp His Gly Leu

115 120 125

Ala Val Arg Ser Ile Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala Ala Glu Ala Phe

130 135 140

Arg Ala Ser Val Asp Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe Ser Pro Val Asp

145 150 155 160

Leu Gly Arg Gly Phe Gly Phe Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val

165 170 175

Val Leu Arg Phe Val Ser His Pro Asp Gly Thr Asp Val Pro Phe Leu

180 185 190

Pro Gly Phe Glu Gly Val Ser Asn Pro Gly Ala Val Asp Tyr Gly Leu

195 200 205

Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Ser Ala

210 215 220

Ala Ala Tyr Val Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe

225 230 235 240

Thr Thr Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Met Val

245 250 255

Leu Ala Asn Asn Ser Glu Gly Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val

260 265 270

His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Phe Leu Glu His His

275 280 285

Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Val Ala Ser Ser Asp Val Leu

290 295 300

Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Asp

305 310 315 320

Phe Leu Pro Pro Pro Leu Pro Lys Tyr Tyr Glu Gly Val Arg Arg Ile

325 330 335

Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys Glu Cys Gln Glu Leu

340 345 350

Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Phe

355 360 365

Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu Glu Met Ile Gln

370 375 380

Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Arg Gly Glu Glu Tyr Gln Lys

385 390 395 400

Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys

405 410 415

Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ser Ala Ala

420 425 430

Val Gln Gly Ser

435

<210> 40

<211> 1311

<212> ДНК

<213> TaHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Triticum aestivum)

<400> 40

atgccgccca cccccaccac ccccgcagcc accggcgccg gcgctgccgc cgcggtgacg

60

ccggagcacg cgcggccgcg ccgaatggtc cgcttcaacc cgcgcagcga ccgcttccac

120

acgctctcct tccaccacgt cgagttctgg tgcgcggacg ccgcctccgc cgccggccgc

180

ttcgccttcg cgctcggcgc gccgctcgcc gccaggtccg acctctccac ggggaactcc

240

gtgcacgcct cccagctgct ccgctcgggc aacctcgcct tcctcttcac cgcgccctac

300

gccaacggct gcgacgccgc caccgcctcc ctgccctcct tctccgccga cgccgcgcgc

360

cggttctccg cggaccacgg gctcgcggtg cgctccatag cgctgcgcgt cgcggacgcc

420

gccgaggcct tccgcgccag cgtcgacggg ggcgcgcgcc cggccttcag ccccgtggac

480

ctcggccgcg gcttcggctt tgcggaggtc gagctctacg gcgacgtcgt gctccgcttc

540

gtcagccatc cggacggcac ggacgtgccc ttcttgccgg ggttcgaggg cgtgagcaac

600

ccgggtgccg tggactacgg cctgacacgg tttgaccacg tcgtcggcaa cgtcccggag

660

cttgcttccg ccgccgccta cgtagccggc ttcacgggtt tccatgagtt cgccgagttc

720

acgacggagg acgtgggcac ggccgagagc gggctcaact cgatggtgct cgccaacaac

780

tcggagggcg tgctgctgcc gctcaacgag ccggtgcacg gcaccaagcg ccggagccag

840

atacagacgt tcctggaaca ccacggcggc ccgggtgtgc agcacatcgc ggtggccagc

900

agcgacgtgc tcaggacgct cagggagatg cgtgcgcgct ccgccatggg cggcttcgac

960

ttcctgccac ccccgctgcc gaagtactac gaaggcgtgc ggcgcatcgc cggggatgtg

1020

ctctcggagg cgcagatcaa ggaatgccag gagctggggg tgctcgtcga cagggacgac

1080

caaggggtgt tgctacaaat cttcacaaag ccagtggggg acaggccaac gctgttcctg

1140

gagatgatcc aaaggatcgg gtgcatggag aaggacgaga gaggggaaga gtaccagaag

1200

ggtggctgcg gcgggttcgg caaaggcaac ttctccgagc tgttcaagtc cattgaagat

1260

tacgagaagt cccttgaagc caagcaatct gctgcagttc agggatcata g

1311

<210> 41

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-TaHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 41

atgccaccta ctcccactac acctgctgct actggagctg gtgctgctgc agctgttact

60

ccagagcatg ctagaccaag gagaatggtt agattcaacc cacgctcaga tagattccat

120

accctttcct tccaccatgt tgagttctgg tgcgctgatg ctgcttctgc tgctggacgc

180

ttcgctttcg cccttggagc tcctttggcc gctagatccg atctgtctac cggtaatagc

240

gtgcacgctt cacagctcct gcgctctggc aacctcgcct tcctgttcac tgctccctac

300

gccaatggct gcgacgccgc tacagctagc ctcccaagct tctcagccga tgccgctaga

360

aggttctctg ctgaccatgg acttgccgtt agaagcattg ctttgagggt ggccgatgcc

420

gctgaggctt tcagggcttc agttgatggc ggagctagac cagccttctc ccctgttgat

480

cttggcaggg gattcggttt cgccgaggtg gagctctacg gagacgtggt tctgcgcttc

540

gtttctcacc ctgatggtac tgacgtgcct ttcttgcccg gtttcgaggg cgttagcaac

600

cccggcgctg tggattacgg acttacaagg ttcgaccacg tggttggcaa tgtgcctgag

660

ttggcttccg ccgctgccta cgttgccgga ttcaccggtt tccatgagtt cgctgagttc

720

acaaccgagg atgttggtac tgccgagtcc ggccttaact ctatggtttt ggctaacaat

780

tcagagggcg tgcttttgcc cctcaatgag ccagttcacg gaaccaagcg cagatcccag

840

attcaaactt tcctggagca ccatggtggc cctggtgtgc aacatatcgc tgttgcctcc

900

tctgatgtgc ttaggacttt gcgcgagatg agagctagat cagccatggg aggtttcgat

960

ttcctcccac caccactccc aaagtactac gagggagtta ggcgcattgc tggtgacgtg

1020

ctgtccgagg cccagatcaa ggagtgccaa gagctcggag tgctggttga tagagatgac

1080

cagggtgtgc tcctgcaaat tttcacaaag ccagttggcg acaggcctac ccttttcttg

1140

gagatgattc agagaatcgg ttgcatggag aaggatgaga ggggcgagga gtaccaaaag

1200

ggcggatgcg gtggcttcgg caagggaaac ttcagcgagc tcttcaagtc aatcgaggac

1260

tacgagaagt ccctggaggc caagcagtct gctgccgtgc aaggcagctg a

1311

<210> 42

<211> 436

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-TaHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 42

Met Pro Pro Thr Pro Thr Thr Pro Ala Ala Thr Gly Ala Gly Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ala Val Thr Pro Glu His Ala Arg Pro Arg Arg Met Val Arg Phe

20 25 30

Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ser Phe His His Val Glu

35 40 45

Phe Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ala

50 55 60

Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser

65 70 75 80

Val His Ala Ser Gln Leu Leu Arg Ser Gly Asn Leu Ala Phe Leu Phe

85 90 95

Thr Ala Pro Tyr Ala Asn Gly Cys Asp Ala Ala Thr Ala Ser Leu Pro

100 105 110

Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Arg Phe Ser Ala Asp His Gly Leu

115 120 125

Ala Val Arg Ser Ile Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala Ala Glu Ala Phe

130 135 140

Arg Ala Ser Val Asp Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe Ser Pro Val Asp

145 150 155 160

Leu Gly Arg Gly Phe Gly Phe Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val

165 170 175

Val Leu Arg Phe Val Ser His Pro Asp Gly Thr Asp Val Pro Phe Leu

180 185 190

Pro Gly Phe Glu Gly Val Ser Asn Pro Gly Ala Val Asp Tyr Gly Leu

195 200 205

Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Ser Ala

210 215 220

Ala Ala Tyr Val Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe

225 230 235 240

Thr Thr Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Met Val

245 250 255

Leu Ala Asn Asn Ser Glu Gly Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val

260 265 270

His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Phe Leu Glu His His

275 280 285

Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Val Ala Ser Ser Asp Val Leu

290 295 300

Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Asp

305 310 315 320

Phe Leu Pro Pro Pro Leu Pro Lys Tyr Tyr Glu Gly Val Arg Arg Ile

325 330 335

Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys Glu Cys Gln Glu Leu

340 345 350

Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Ala

355 360 365

Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu Glu Met Ile Gln

370 375 380

Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Arg Gly Glu Glu Tyr Gln Lys

385 390 395 400

Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys

405 410 415

Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ser Ala Ala

420 425 430

Val Gln Gly Ser

435

<210> 43

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-TaHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 43

atgccgccca cccccaccac ccccgcagcc accggcgccg gcgctgccgc cgcggtgacg

60

ccggagcacg cgcggccgcg ccgaatggtc cgcttcaacc cgcgcagcga ccgcttccac

120

acgctctcct tccaccacgt cgagttctgg tgcgcggacg ccgcctccgc cgccggccgc

180

ttcgccttcg cgctcggcgc gccgctcgcc gccaggtccg acctctccac ggggaactcc

240

gtgcacgcct cccagctgct ccgctcgggc aacctcgcct tcctcttcac cgcgccctac

300

gccaacggct gcgacgccgc caccgcctcc ctgccctcct tctccgccga cgccgcgcgc

360

cggttctccg cggaccacgg gctcgcggtg cgctccatag cgctgcgcgt cgcggacgcc

420

gccgaggcct tccgcgccag cgtcgacggg ggcgcgcgcc cggccttcag ccccgtggac

480

ctcggccgcg gcttcggctt tgcggaggtc gagctctacg gcgacgtcgt gctccgcttc

540

gtcagccatc cggacggcac ggacgtgccc ttcttgccgg ggttcgaggg cgtgagcaac

600

ccgggtgccg tggactacgg cctgacacgg tttgaccacg tcgtcggcaa cgtcccggag

660

cttgcttccg ccgccgccta cgtagccggc ttcacgggtt tccatgagtt cgccgagttc

720

acgacggagg acgtgggcac ggccgagagc gggctcaact cgatggtgct cgccaacaac

780

tcggagggcg tgctgctgcc gctcaacgag ccggtgcacg gcaccaagcg ccggagccag

840

atacagacgt tcctggaaca ccacggcggc ccgggtgtgc agcacatcgc ggtggccagc

900

agcgacgtgc tcaggacgct cagggagatg cgtgcgcgct ccgccatggg cggcttcgac

960

ttcctgccac ccccgctgcc gaagtactac gaaggcgtgc ggcgcatcgc cggggatgtg

1020

ctctcggagg cgcagatcaa ggaatgccag gagctggggg tgctcgtcga cagggacgac

1080

caaggggtgt tgctacaaat cgctacaaag ccagtggggg acaggccaac gctgttcctg

1140

gagatgatcc aaaggatcgg gtgcatggag aaggacgaga gaggggaaga gtaccagaag

1200

ggtggctgcg gcgggttcgg caaaggcaac ttctccgagc tgttcaagtc cattgaagat

1260

tacgagaagt cccttgaagc caagcaatct gctgcagttc agggatcata g

1311

<210> 44

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-TaHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 44

atgccaccta ctcccactac acctgctgct actggagctg gtgctgctgc agctgttact

60

ccagagcatg ctagaccaag gagaatggtt agattcaacc cacgctcaga tagattccat

120

accctttcct tccaccatgt tgagttctgg tgcgctgatg ctgcttctgc tgctggacgc

180

ttcgctttcg cccttggagc tcctttggcc gctagatccg atctgtctac cggtaatagc

240

gtgcacgctt cacagctcct gcgctctggc aacctcgcct tcctgttcac tgctccctac

300

gccaatggct gcgacgccgc tacagctagc ctcccaagct tctcagccga tgccgctaga

360

aggttctctg ctgaccatgg acttgccgtt agaagcattg ctttgagggt ggccgatgcc

420

gctgaggctt tcagggcttc agttgatggc ggagctagac cagccttctc ccctgttgat

480

cttggcaggg gattcggttt cgccgaggtg gagctctacg gagacgtggt tctgcgcttc

540

gtttctcacc ctgatggtac tgacgtgcct ttcttgcccg gtttcgaggg cgttagcaac

600

cccggcgctg tggattacgg acttacaagg ttcgaccacg tggttggcaa tgtgcctgag

660

ttggcttccg ccgctgccta cgttgccgga ttcaccggtt tccatgagtt cgctgagttc

720

acaaccgagg atgttggtac tgccgagtcc ggccttaact ctatggtttt ggctaacaat

780

tcagagggcg tgcttttgcc cctcaatgag ccagttcacg gaaccaagcg cagatcccag

840

attcaaactt tcctggagca ccatggtggc cctggtgtgc aacatatcgc tgttgcctcc

900

tctgatgtgc ttaggacttt gcgcgagatg agagctagat cagccatggg aggtttcgat

960

ttcctcccac caccactccc aaagtactac gagggagtta ggcgcattgc tggtgacgtg

1020

ctgtccgagg cccagatcaa ggagtgccaa gagctcggag tgctggttga tagagatgac

1080

cagggtgtgc tcctgcaaat tgctacaaag ccagttggcg acaggcctac ccttttcttg

1140

gagatgattc agagaatcgg ttgcatggag aaggatgaga ggggcgagga gtaccaaaag

1200

ggcggatgcg gtggcttcgg caagggaaac ttcagcgagc tcttcaagtc aatcgaggac

1260

tacgagaagt ccctggaggc caagcagtct gctgccgtgc aaggcagctg a

1311

<210> 45

<211> 436

<212> ПРТ

<213> BdHPPD Аминокислотная последовательность (Brachypodium

distachyon)

<400> 45

Met Pro Pro Pro Ala Thr Thr Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Val Thr

1 5 10 15

Pro Glu His Ala Arg Pro Pro Arg Arg Val Ala Arg Val Asn Pro Arg

20 25 30

Ser Asp Arg Phe Ser Ala Leu Ser Phe His His Val Glu Leu Trp Cys

35 40 45

Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu Gly Ala

50 55 60

Pro Pro Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala His Ala

65 70 75 80

Ser Ile Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro

85 90 95

Tyr Ala Pro Ser Pro Ala Ser Asp Ser Ala Ala Ser Ile Pro Ser Phe

100 105 110

Ser Ala Ser Ala Ala Arg Gln Phe Thr Ala Asp His Gly Gly Leu Ala

115 120 125

Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ser Ser Ala Ser Asp Ala Phe His

130 135 140

Ala Ser Val Ser Ala Gly Ala Arg Pro Ser Phe Pro Pro Ala Asp Leu

145 150 155 160

Gly Gln Gly Phe Ala Leu Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val Val

165 170 175

Leu Arg Phe Ile Ser His Pro Asp Glu Asn Thr Glu Ile Pro Phe Leu

180 185 190

Pro Gly Phe Glu Ser Val Ser Asn Pro Gly Ala Ser Thr Tyr Gly Leu

195 200 205

Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Ser Leu Ala Pro Val

210 215 220

Ala Ala Tyr Ile Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe

225 230 235 240

Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ala Asp Ser Gly Leu Asn Ser Val Val

245 250 255

Leu Ala Asn Asn Ser Glu Arg Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val

260 265 270

His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Asp His His

275 280 285

Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser Asp Asp Val Leu

290 295 300

Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Glu

305 310 315 320

Phe Leu Ala Pro Pro Pro Pro Asn Tyr Tyr Asp Gly Val Arg Arg Arg

325 330 335

Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys Glu Cys Gln Glu Leu

340 345 350

Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Phe

355 360 365

Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu Glu Met Ile Gln

370 375 380

Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Ile Gly Gln Glu Gln Gln Lys

385 390 395 400

Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Arg

405 410 415

Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ser Ala Val

420 425 430

Val Gln Glu Ser

435

<210> 46

<211> 1311

<212> ДНК

<213> BdHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Brachypodium

distachyon)

<400> 46

atgccgcccc ctgcgactac cgccgccccc gccgccgcgg cggtgacgcc ggagcacgcg

60

aggcctcccc gccgcgtggc ccgcgtcaac ccgcggagcg accgcttcag cgcgctctcc

120

ttccaccacg tggagctctg gtgcgcggac gccgcctccg ccgcgggccg cttctccttc

180

gcgctcggcg cgccgcccgc cgcccgctcc gacctctcca cggggaactc cgcgcacgcc

240

tccatcctcc tccgctcggg atccctcgcc ttcctcttca ccgccccata cgccccctcc

300

cccgcatccg attccgccgc ctccatcccc tccttctccg cctccgccgc gcgccagttc

360

accgccgacc acggcggcct ggccgtgcgc gccgtcgccc tccgcgtctc ctccgcctcc

420

gacgccttcc acgccagcgt ctccgccggc gcgcgcccct ccttcccacc cgccgacctc

480

ggccagggct tcgcgctcgc cgaagtcgag ctctacggcg acgtcgttct ccgcttcatc

540

agccaccccg acgaaaacac cgaaatcccc ttcctcccag gtttcgaatc cgtcagcaac

600

cccggcgcgt ccacctacgg gctcacgcgg ttcgaccacg tggtgggcaa cgtgccgtcc

660

ctcgcccccg tcgccgccta catcgccggc ttcaccgggt tccacgagtt cgccgagttc

720

acggccgagg acgtgggcac ggccgactcc gggctcaact cggtggtgct cgccaacaac

780

tcggagcggg tgctgctgcc gctcaacgag cccgtgcacg gcaccaagcg ccgcagccag

840

atccagacgt acctcgacca ccacggcggg cccggcgtgc agcacatcgc gctcgccagc

900

gacgacgtgc tcaggacgct cagggagatg cgcgcgcgct ccgccatggg cggcttcgag

960

ttcctcgcgc cgccgccgcc taattactac gacggcgtgc ggcgacgcgc aggggatgtg

1020

ctctccgagg cgcagattaa ggaatgccag gagcttgggg tgctcgtcga cagggatgac

1080

caaggggtgc tgctccagat cttcaccaag ccagtcgggg acaggccaac gttgttcctg

1140

gagatgatcc aaaggatcgg gtgcatggag aaggacgaga tcggacaaga gcaacagaag

1200

ggtggctgcg gcgggtttgg caagggcaac ttctcggagc tgttcaggtc catcgaagag

1260

tatgagaaat cccttgaagc caagcaatct gctgtagttc aggaatccta g

1311

<210> 47

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BdHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 47

atgccacctc ccgctaccac tgctgctcct gctgctgctg ctgtgacacc agagcatgct

60

aggccaccta ggagagtggc tagagttaac cctaggagcg atcgcttctc tgctcttagc

120

ttccaccatg ttgagctttg gtgcgctgat gctgcttcag ctgctggacg cttctccttc

180

gctcttggtg ctcccccagc tgctagatca gacttgtcca ctggaaattc tgcccatgct

240

agcattctcc tgagaagcgg ttcactcgct ttcctgttca cagctcctta tgctccttcc

300

cctgcttctg attctgctgc ttctatcccc agcttctcag cttccgccgc taggcagttc

360

accgctgatc atggcggact tgccgtgcgc gccgttgctc tgagagtgtc ctctgccagc

420

gacgctttcc atgcctctgt tagcgccgga gctaggccat cattccctcc cgccgatctc

480

ggacaaggtt tcgcccttgc tgaggtggag ttgtacggcg atgtggttct tcgcttcatt

540

tcacaccctg acgagaacac cgagatccca ttcttgcctg gcttcgagtc agtttccaat

600

ccaggagcta gcacatacgg tcttacccgc ttcgaccacg tggttggcaa cgtgccctca

660

ttggctccag ttgccgctta cattgccggt ttcactggct tccatgagtt cgctgagttc

720

actgccgagg atgtgggcac agctgactca ggactcaact ccgtggttct ggccaacaat

780

tccgagagag tgcttttgcc tctgaatgag cccgttcacg gcaccaagag aaggtctcag

840

attcaaactt acctcgatca ccatggtggc cctggagtgc agcatatcgc cctggcttcc

900

gatgacgttc ttagaacttt gagggagatg cgcgctagat ctgccatggg aggtttcgag

960

ttccttgccc cacctccccc aaactactac gatggtgtgc gcagaagggc tggcgacgtt

1020

ctgtctgagg cccagattaa ggagtgccaa gagctcggtg tgctggttga tcgcgatgac

1080

cagggcgtgc tcctgcaaat cttcacaaag ccagttggcg acagacctac ccttttcttg

1140

gagatgattc agaggatcgg ctgcatggag aaggacgaga ttggacaaga gcagcaaaag

1200

ggcggatgcg gtggcttcgg caagggaaat ttctctgagc tcttcaggag catcgaggag

1260

tacgagaagt ctctggaggc taagcagagc gccgtggttc aagagtcatg a

1311

<210> 48

<211> 436

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-BdHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 48

Met Pro Pro Pro Ala Thr Thr Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Val Thr

1 5 10 15

Pro Glu His Ala Arg Pro Pro Arg Arg Val Ala Arg Val Asn Pro Arg

20 25 30

Ser Asp Arg Phe Ser Ala Leu Ser Phe His His Val Glu Leu Trp Cys

35 40 45

Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu Gly Ala

50 55 60

Pro Pro Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala His Ala

65 70 75 80

Ser Ile Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro

85 90 95

Tyr Ala Pro Ser Pro Ala Ser Asp Ser Ala Ala Ser Ile Pro Ser Phe

100 105 110

Ser Ala Ser Ala Ala Arg Gln Phe Thr Ala Asp His Gly Gly Leu Ala

115 120 125

Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ser Ser Ala Ser Asp Ala Phe His

130 135 140

Ala Ser Val Ser Ala Gly Ala Arg Pro Ser Phe Pro Pro Ala Asp Leu

145 150 155 160

Gly Gln Gly Phe Ala Leu Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val Val

165 170 175

Leu Arg Phe Ile Ser His Pro Asp Glu Asn Thr Glu Ile Pro Phe Leu

180 185 190

Pro Gly Phe Glu Ser Val Ser Asn Pro Gly Ala Ser Thr Tyr Gly Leu

195 200 205

Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Ser Leu Ala Pro Val

210 215 220

Ala Ala Tyr Ile Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe

225 230 235 240

Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ala Asp Ser Gly Leu Asn Ser Val Val

245 250 255

Leu Ala Asn Asn Ser Glu Arg Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val

260 265 270

His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Asp His His

275 280 285

Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser Asp Asp Val Leu

290 295 300

Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Glu

305 310 315 320

Phe Leu Ala Pro Pro Pro Pro Asn Tyr Tyr Asp Gly Val Arg Arg Arg

325 330 335

Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys Glu Cys Gln Glu Leu

340 345 350

Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Ala

355 360 365

Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu Glu Met Ile Gln

370 375 380

Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Ile Gly Gln Glu Gln Gln Lys

385 390 395 400

Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Arg

405 410 415

Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ser Ala Val

420 425 430

Val Gln Glu Ser

435

<210> 49

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BdHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 49

atgccgcccc ctgcgactac cgccgccccc gccgccgcgg cggtgacgcc ggagcacgcg

60

aggcctcccc gccgcgtggc ccgcgtcaac ccgcggagcg accgcttcag cgcgctctcc

120

ttccaccacg tggagctctg gtgcgcggac gccgcctccg ccgcgggccg cttctccttc

180

gcgctcggcg cgccgcccgc cgcccgctcc gacctctcca cggggaactc cgcgcacgcc

240

tccatcctcc tccgctcggg atccctcgcc ttcctcttca ccgccccata cgccccctcc

300

cccgcatccg attccgccgc ctccatcccc tccttctccg cctccgccgc gcgccagttc

360

accgccgacc acggcggcct ggccgtgcgc gccgtcgccc tccgcgtctc ctccgcctcc

420

gacgccttcc acgccagcgt ctccgccggc gcgcgcccct ccttcccacc cgccgacctc

480

ggccagggct tcgcgctcgc cgaagtcgag ctctacggcg acgtcgttct ccgcttcatc

540

agccaccccg acgaaaacac cgaaatcccc ttcctcccag gtttcgaatc cgtcagcaac

600

cccggcgcgt ccacctacgg gctcacgcgg ttcgaccacg tggtgggcaa cgtgccgtcc

660

ctcgcccccg tcgccgccta catcgccggc ttcaccgggt tccacgagtt cgccgagttc

720

acggccgagg acgtgggcac ggccgactcc gggctcaact cggtggtgct cgccaacaac

780

tcggagcggg tgctgctgcc gctcaacgag cccgtgcacg gcaccaagcg ccgcagccag

840

atccagacgt acctcgacca ccacggcggg cccggcgtgc agcacatcgc gctcgccagc

900

gacgacgtgc tcaggacgct cagggagatg cgcgcgcgct ccgccatggg cggcttcgag

960

ttcctcgcgc cgccgccgcc taattactac gacggcgtgc ggcgacgcgc aggggatgtg

1020

ctctccgagg cgcagattaa ggaatgccag gagcttgggg tgctcgtcga cagggatgac

1080

caaggggtgc tgctccagat cgctaccaag ccagtcgggg acaggccaac gttgttcctg

1140

gagatgatcc aaaggatcgg gtgcatggag aaggacgaga tcggacaaga gcaacagaag

1200

ggtggctgcg gcgggtttgg caagggcaac ttctcggagc tgttcaggtc catcgaagag

1260

tatgagaaat cccttgaagc caagcaatct gctgtagttc aggaatccta g

1311

<210> 50

<211> 1311

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BdHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 50

atgccacctc ccgctaccac tgctgctcct gctgctgctg ctgtgacacc agagcatgct

60

aggccaccta ggagagtggc tagagttaac cctaggagcg atcgcttctc tgctcttagc

120

ttccaccatg ttgagctttg gtgcgctgat gctgcttcag ctgctggacg cttctccttc

180

gctcttggtg ctcccccagc tgctagatca gacttgtcca ctggaaattc tgcccatgct

240

agcattctcc tgagaagcgg ttcactcgct ttcctgttca cagctcctta tgctccttcc

300

cctgcttctg attctgctgc ttctatcccc agcttctcag cttccgccgc taggcagttc

360

accgctgatc atggcggact tgccgtgcgc gccgttgctc tgagagtgtc ctctgccagc

420

gacgctttcc atgcctctgt tagcgccgga gctaggccat cattccctcc cgccgatctc

480

ggacaaggtt tcgcccttgc tgaggtggag ttgtacggcg atgtggttct tcgcttcatt

540

tcacaccctg acgagaacac cgagatccca ttcttgcctg gcttcgagtc agtttccaat

600

ccaggagcta gcacatacgg tcttacccgc ttcgaccacg tggttggcaa cgtgccctca

660

ttggctccag ttgccgctta cattgccggt ttcactggct tccatgagtt cgctgagttc

720

actgccgagg atgtgggcac agctgactca ggactcaact ccgtggttct ggccaacaat

780

tccgagagag tgcttttgcc tctgaatgag cccgttcacg gcaccaagag aaggtctcag

840

attcaaactt acctcgatca ccatggtggc cctggagtgc agcatatcgc cctggcttcc

900

gatgacgttc ttagaacttt gagggagatg cgcgctagat ctgccatggg aggtttcgag

960

ttccttgccc cacctccccc aaactactac gatggtgtgc gcagaagggc tggcgacgtt

1020

ctgtctgagg cccagattaa ggagtgccaa gagctcggtg tgctggttga tcgcgatgac

1080

cagggcgtgc tcctgcaaat cgctacaaag ccagttggcg acagacctac ccttttcttg

1140

gagatgattc agaggatcgg ctgcatggag aaggacgaga ttggacaaga gcagcaaaag

1200

ggcggatgcg gtggcttcgg caagggaaat ttctctgagc tcttcaggag catcgaggag

1260

tacgagaagt ctctggaggc taagcagagc gccgtggttc aagagtcatg a

1311

<210> 51

<211> 434

<212> ПРТ

<213> HvHPPD Аминокислотная последовательность (Hordeum vulgare)

<400> 51

Met Pro Pro Thr Pro Thr Thr Pro Ala Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala

1 5 10 15

Val Thr Pro Glu His Ala Arg Pro His Arg Met Val Arg Phe Asn Pro

20 25 30

Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ser Phe His His Val Glu Phe Trp

35 40 45

Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ala Leu Gly

50 55 60

Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala His

65 70 75 80

Ala Ser Gln Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu Ala Phe Leu Phe Thr Ala

85 90 95

Pro Tyr Ala Asn Gly Cys Asp Ala Ala Thr Ala Ser Leu Pro Ser Phe

100 105 110

Ser Ala Asp Ala Ala Arg Arg Phe Ser Ala Asp His Gly Ile Ala Val

115 120 125

Arg Ser Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala Ala Glu Ala Phe Arg Ala

130 135 140

Ser Arg Arg Arg Gly Ala Arg Pro Ala Phe Ala Pro Val Asp Leu Gly

145 150 155 160

Arg Gly Phe Ala Phe Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu

165 170 175

Arg Phe Val Ser His Pro Asp Gly Thr Asp Val Pro Phe Leu Pro Gly

180 185 190

Phe Glu Gly Val Thr Asn Pro Asp Ala Val Asp Tyr Gly Leu Thr Arg

195 200 205

Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Ala Ala

210 215 220

Tyr Ile Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala

225 230 235 240

Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala

245 250 255

Asn Asn Ser Glu Gly Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val His Gly

260 265 270

Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Phe Leu Glu His His Gly Gly

275 280 285

Pro Gly Val Gln His Ile Ala Val Ala Ser Ser Asp Val Leu Arg Thr

290 295 300

Leu Arg Lys Met Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Asp Phe Leu

305 310 315 320

Pro Pro Pro Leu Pro Lys Tyr Tyr Glu Gly Val Arg Arg Leu Ala Gly

325 330 335

Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val

340 345 350

Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys

355 360 365

Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu Glu Met Ile Gln Arg Ile

370 375 380

Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Arg Gly Glu Glu Tyr Gln Lys Gly Gly

385 390 395 400

Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile

405 410 415

Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ser Ala Ala Val Gln

420 425 430

Gly Ser

<210> 52

<211> 1305

<212> ДНК

<213> HvHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Hordeum vulgare)

<400> 52

atgccgccca cccccaccac ccccgcggct accggcgccg ccgccgcggt gacgccggag

60

cacgcgcgac cgcaccgaat ggtccgcttc aacccgcgca gcgaccgctt ccacacgctc

120

tccttccacc acgtcgagtt ctggtgcgcg gacgccgcct ccgccgccgg ccgcttcgcg

180

ttcgcgctcg gcgcgccgct cgccgccagg tccgacctct ccacggggaa ctccgcgcac

240

gcctcccagc tgctccgctc gggctccctc gccttcctct tcaccgcgcc ctacgccaac

300

ggctgcgacg ccgccaccgc ctccctgccc tccttctccg ccgacgccgc gcgccggttc

360

tccgccgacc acgggatcgc ggtgcgctcc gtagcgctgc gcgtcgcaga cgccgccgag

420

gccttccgcg ccagtcgtcg acggggcgcg cgcccggcct tcgcccccgt ggacctcggc

480

cgcggcttcg cgttcgcgga ggtcgagctc tacggcgacg tcgtgctccg cttcgtcagc

540

cacccggacg gcacggacgt gcccttcttg ccggggttcg agggcgtaac caacccggac

600

gccgtggact acggcctgac gcggttcgac cacgtcgtcg gcaacgtccc ggagcttgcc

660

cccgccgcag cctacatcgc cgggttcacg gggttccacg agttcgccga gttcacggcg

720

gaggacgtgg gcacgaccga gagcgggctc aactcggtgg tgctcgccaa caactcggag

780

ggcgtgctgc tgccgctcaa cgagccggtg cacggcacca agcgccggag ccagatacag

840

acgttcctgg aacaccacgg cggcccgggc gtgcagcaca tcgcggtggc cagcagtgac

900

gtgctcagga cgctcaggaa gatgcgtgcg cgctccgcca tgggcggctt cgacttcctg

960

ccacccccgc tgccgaagta ctacgaaggc gtgcgacgcc ttgccgggga tgtcctctcg

1020

gaggcgcaga tcaaggaatg ccaggagctg ggtgtgctcg tcgataggga cgaccaaggg

1080

gtgttgctcc aaatcttcac caagccagta ggggacaggc cgaccttgtt cctggagatg

1140

atccagagga tcgggtgcat ggagaaggac gagagagggg aagagtacca gaagggtggc

1200

tgcggcgggt tcggcaaagg caacttctcc gagctgttca agtccattga agattacgag

1260

aagtcccttg aagccaagca atctgctgca gttcagggat catag

1305

<210> 53

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-HvHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 53

atgccaccta ctcccactac accagctgct actggtgctg ctgctgctgt taccccagag

60

cacgctagac ctcataggat ggtgcgcttc aaccccagat ctgataggtt ccacacactc

120

agcttccacc atgttgagtt ctggtgcgct gatgctgctt cagctgctgg caggttcgct

180

ttcgctcttg gtgccccatt ggctgctaga tctgatctgt caaccggcaa ctccgctcat

240

gcctctcagc tcctgaggag cggatcactc gccttcctgt tcaccgctcc ttatgctaac

300

ggctgcgatg ctgctactgc ttctcttccc tccttctctg ccgatgccgc taggcgcttc

360

tcagctgacc acggtattgc cgtgaggtcc gttgctttgc gcgtggccga tgccgctgag

420

gctttcagag cctctagaag acgcggcgct aggccagctt tcgctcctgt tgatcttggt

480

agaggcttcg ctttcgccga ggtggagctt tacggtgacg tggttttgag gttcgttagc

540

catccagatg gcactgacgt gcctttcctg cccggcttcg agggagttac taaccctgat

600

gccgtggact acggccttac acgcttcgat cacgtggttg gaaatgttcc cgagttggct

660

ccagccgctg cctacatcgc cggtttcaca ggcttccatg agttcgctga gttcaccgcc

720

gaggacgtgg gaacaaccga gagcggtctt aactcagtgg ttttggctaa caattctgag

780

ggagttcttt tgcctctcaa tgagcccgtg cacggtacta agagaaggag ccagattcaa

840

acattcctgg agcaccatgg cggacctggc gtgcaacata tcgctgttgc ctcctctgat

900

gtgcttcgca ccttgagaaa gatgagggct cgctcagcca tgggtggctt cgatttcctc

960

ccaccaccac tcccaaagta ctacgagggc gttcgcagac tcgctggaga cgtgctgtcc

1020

gaggcccaga ttaaggagtg ccaagagctc ggtgtgctgg ttgatcgcga tgaccagggc

1080

gttctcctgc aaatcttcac caagcccgtg ggagacagac caactctttt cttggagatg

1140

attcagcgca tcggatgcat ggagaaggat gagagaggtg aggagtacca aaagggaggt

1200

tgcggcggat tcggaaaggg taatttctcc gagctcttca agtctattga ggactacgag

1260

aagagcctgg aggccaagca gtcagctgcc gtgcaaggct cctga

1305

<210> 54

<211> 434

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-HvHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 54

Met Pro Pro Thr Pro Thr Thr Pro Ala Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala

1 5 10 15

Val Thr Pro Glu His Ala Arg Pro His Arg Met Val Arg Phe Asn Pro

20 25 30

Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ser Phe His His Val Glu Phe Trp

35 40 45

Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ala Leu Gly

50 55 60

Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala His

65 70 75 80

Ala Ser Gln Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu Ala Phe Leu Phe Thr Ala

85 90 95

Pro Tyr Ala Asn Gly Cys Asp Ala Ala Thr Ala Ser Leu Pro Ser Phe

100 105 110

Ser Ala Asp Ala Ala Arg Arg Phe Ser Ala Asp His Gly Ile Ala Val

115 120 125

Arg Ser Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala Ala Glu Ala Phe Arg Ala

130 135 140

Ser Arg Arg Arg Gly Ala Arg Pro Ala Phe Ala Pro Val Asp Leu Gly

145 150 155 160

Arg Gly Phe Ala Phe Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu

165 170 175

Arg Phe Val Ser His Pro Asp Gly Thr Asp Val Pro Phe Leu Pro Gly

180 185 190

Phe Glu Gly Val Thr Asn Pro Asp Ala Val Asp Tyr Gly Leu Thr Arg

195 200 205

Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Ala Ala

210 215 220

Tyr Ile Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala

225 230 235 240

Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala

245 250 255

Asn Asn Ser Glu Gly Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val His Gly

260 265 270

Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Phe Leu Glu His His Gly Gly

275 280 285

Pro Gly Val Gln His Ile Ala Val Ala Ser Ser Asp Val Leu Arg Thr

290 295 300

Leu Arg Lys Met Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Asp Phe Leu

305 310 315 320

Pro Pro Pro Leu Pro Lys Tyr Tyr Glu Gly Val Arg Arg Leu Ala Gly

325 330 335

Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val

340 345 350

Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys

355 360 365

Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu Glu Met Ile Gln Arg Ile

370 375 380

Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Arg Gly Glu Glu Tyr Gln Lys Gly Gly

385 390 395 400

Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile

405 410 415

Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ser Ala Ala Val Gln

420 425 430

Gly Ser

<210> 55

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 55

atgccgccca cccccaccac ccccgcggct accggcgccg ccgccgcggt gacgccggag

60

cacgcgcgac cgcaccgaat ggtccgcttc aacccgcgca gcgaccgctt ccacacgctc

120

tccttccacc acgtcgagtt ctggtgcgcg gacgccgcct ccgccgccgg ccgcttcgcg

180

ttcgcgctcg gcgcgccgct cgccgccagg tccgacctct ccacggggaa ctccgcgcac

240

gcctcccagc tgctccgctc gggctccctc gccttcctct tcaccgcgcc ctacgccaac

300

ggctgcgacg ccgccaccgc ctccctgccc tccttctccg ccgacgccgc gcgccggttc

360

tccgccgacc acgggatcgc ggtgcgctcc gtagcgctgc gcgtcgcaga cgccgccgag

420

gccttccgcg ccagtcgtcg acggggcgcg cgcccggcct tcgcccccgt ggacctcggc

480

cgcggcttcg cgttcgcgga ggtcgagctc tacggcgacg tcgtgctccg cttcgtcagc

540

cacccggacg gcacggacgt gcccttcttg ccggggttcg agggcgtaac caacccggac

600

gccgtggact acggcctgac gcggttcgac cacgtcgtcg gcaacgtccc ggagcttgcc

660

cccgccgcag cctacatcgc cgggttcacg gggttccacg agttcgccga gttcacggcg

720

gaggacgtgg gcacgaccga gagcgggctc aactcggtgg tgctcgccaa caactcggag

780

ggcgtgctgc tgccgctcaa cgagccggtg cacggcacca agcgccggag ccagatacag

840

acgttcctgg aacaccacgg cggcccgggc gtgcagcaca tcgcggtggc cagcagtgac

900

gtgctcagga cgctcaggaa gatgcgtgcg cgctccgcca tgggcggctt cgacttcctg

960

ccacccccgc tgccgaagta ctacgaaggc gtgcgacgcc ttgccgggga tgtcctctcg

1020

gaggcgcaga tcaaggaatg ccaggagctg ggtgtgctcg tcgataggga cgaccaaggg

1080

gtgttgctcc aaatcgctac caagccagta ggggacaggc cgaccttgtt cctggagatg

1140

atccagagga tcgggtgcat ggagaaggac gagagagggg aagagtacca gaagggtggc

1200

tgcggcgggt tcggcaaagg caacttctcc gagctgttca agtccattga agattacgag

1260

aagtcccttg aagccaagca atctgctgca gttcagggat catag

1305

<210> 56

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-HvHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 56

atgccaccta ctcccactac accagctgct actggtgctg ctgctgctgt taccccagag

60

cacgctagac ctcataggat ggtgcgcttc aaccccagat ctgataggtt ccacacactc

120

agcttccacc atgttgagtt ctggtgcgct gatgctgctt cagctgctgg caggttcgct

180

ttcgctcttg gtgccccatt ggctgctaga tctgatctgt caaccggcaa ctccgctcat

240

gcctctcagc tcctgaggag cggatcactc gccttcctgt tcaccgctcc ttatgctaac

300

ggctgcgatg ctgctactgc ttctcttccc tccttctctg ccgatgccgc taggcgcttc

360

tcagctgacc acggtattgc cgtgaggtcc gttgctttgc gcgtggccga tgccgctgag

420

gctttcagag cctctagaag acgcggcgct aggccagctt tcgctcctgt tgatcttggt

480

agaggcttcg ctttcgccga ggtggagctt tacggtgacg tggttttgag gttcgttagc

540

catccagatg gcactgacgt gcctttcctg cccggcttcg agggagttac taaccctgat

600

gccgtggact acggccttac acgcttcgat cacgtggttg gaaatgttcc cgagttggct

660

ccagccgctg cctacatcgc cggtttcaca ggcttccatg agttcgctga gttcaccgcc

720

gaggacgtgg gaacaaccga gagcggtctt aactcagtgg ttttggctaa caattctgag

780

ggagttcttt tgcctctcaa tgagcccgtg cacggtacta agagaaggag ccagattcaa

840

acattcctgg agcaccatgg cggacctggc gtgcaacata tcgctgttgc ctcctctgat

900

gtgcttcgca ccttgagaaa gatgagggct cgctcagcca tgggtggctt cgatttcctc

960

ccaccaccac tcccaaagta ctacgagggc gttcgcagac tcgctggaga cgtgctgtcc

1020

gaggcccaga ttaaggagtg ccaagagctc ggtgtgctgg ttgatcgcga tgaccagggc

1080

gttctcctgc aaatcgctac caagcccgtg ggagacagac caactctttt cttggagatg

1140

attcagcgca tcggatgcat ggagaaggat gagagaggtg aggagtacca aaagggaggt

1200

tgcggcggat tcggaaaggg taatttctcc gagctcttca agtctattga ggactacgag

1260

aagagcctgg aggccaagca gtcagctgcc gtgcaaggct cctga

1305

<210> 57

<211> 441

<212> ПРТ

<213> SiHPPD Аминокислотная последовательность (Setaria italica)

<400> 57

Met Pro Pro Thr Pro Thr Pro Ala Ala Ala Ala Pro Gly Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Pro Ala Ala Gly Asp Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg

20 25 30

Gly Phe Val Arg Val Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ser

35 40 45

Phe His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Thr Ser Ala Ala Gly

50 55 60

Arg Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ser

85 90 95

Leu Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Val Asp Ala Ala

100 105 110

Thr Ala Ser Leu Pro Ser Phe Ser Ala Pro Ala Ala Arg Ser Phe Ala

115 120 125

Ala Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Ile Gly Leu Arg Val Ala Asp

130 135 140

Ala Glu Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala

145 150 155 160

Phe Lys Pro Val Glu Leu Gly Leu Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu

165 170 175

Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Ala Glu

180 185 190

Asp Ala Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Asn Val Asn Asn Pro Gly Ala

195 200 205

Leu Asn Tyr Gly Leu Arg Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro

210 215 220

Glu Leu Ala Pro Val Ala Ala Tyr Val Ala Gly Phe Thr Gly Phe His

225 230 235 240

Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly

245 250 255

Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Thr Val Leu Ile Pro

260 265 270

Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr

275 280 285

Phe Leu Asp His Asn Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala

290 295 300

Ser Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala

305 310 315 320

Met Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Ala Pro Pro Pro Asp Tyr Tyr Glu

325 330 335

Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys

340 345 350

Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val

355 360 365

Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Gln Thr Leu Phe

370 375 380

Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Gln Gly

385 390 395 400

Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe

405 410 415

Ser Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ser

420 425 430

Lys Gln Ala Ala Ala Val Gln Gly Ser

435 440

<210> 58

<211> 1326

<212> ДНК

<213> SiHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Setaria italica)

<400> 58

atgcccccga ccccgacccc cgccgccgcc gcaccgggcg ccgccgcggc gccggcagcg

60

ggggatcagg cggcgttccg cctcgtcggc caccgcggct tcgtccgcgt caacccgcgc

120

tccgaccgct tccacacgct gtcgttccac cacgtcgagc tctggtgcgc cgacgccacg

180

tccgccgccg gccgcttctc cttcgggctc ggcgcgccgc tcgccgcgcg gtccgacctc

240

tccacgggga actccgcgca cgcctcgctc ctgctccgct cgggctccct cgcgttcctc

300

ttcaccgcgc catacgcgca cggcgtcgac gccgcaaccg catccctgcc gtccttttcc

360

gcgcccgccg cgcggagctt cgcggccgac cacggcctcg cggtgcgcgc catcgggctc

420

cgcgtcgccg acgccgagga cgccttccgc gccagcgtcg ccgccggcgc gcgccccgcg

480

ttcaagcccg tcgagctcgg cctcgggttc cgcctcgccg aggtcgagct ctacggcgac

540

gtcgtcctcc gctacgtgag ctacccggac gccgaggacg cgcccttcct gccgggcttc

600

gagaacgtga acaaccccgg ggcgctgaac tacgggctca ggaggttcga ccacatcgtc

660

ggcaacgtcc cggagctggc gccggtggcc gcgtacgtcg ccgggttcac ggggttccac

720

gaattcgccg agttcacggc ggaggacgtg ggcacggcgg agagcgggct caattcgatg

780

gtgctcgcca acaactccga gaccgtgctg atcccgctca acgagcccgt ccacggcacc

840

aagcgccgca gccagataca gacgttcctg gaccacaacg gcggccccgg cgtgcagcac

900

atcgcgctgg ccagcgacga cgtgctcagg acgctgcggg agatgcaagc acgctcagcc

960

atgggcggat tcgagttcat ggcggctcca ccgcccgact attacgaagg tgtgaggcgg

1020

cgcgccgggg acgtgctctc ggaggctcag attaaggagt gccaggaact gggggtgctg

1080

gtggacaggg atgaccaggg ggtgttgctc caaatcttca ccaagccagt gggggacagg

1140

caaacattgt tcttggagat aatacaaagg attgggtgca tggagaagga cgagcagggg

1200

caggaatacc agaagggtgg ttgtggcggt tttggaaagg gaaacttctc gcagctgttc

1260

aaatccattg aggactatga gaagtccctt gaatcaaagc aagctgctgc ggttcaggga

1320

tcctaa

1326

<210> 59

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SiHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 59

atgccaccta cccccactcc tgctgctgct gctcctggtg ctgctgctgc tccagccgct

60

ggcgatcagg ccgctttcag gctggttggt cacagaggct tcgtgagggt taaccctcgc

120

tccgatagat tccatactct gtctttccac catgtggagc tttggtgcgc tgatgctaca

180

tctgctgctg gtcgcttctc attcggtctg ggcgctccac ttgccgctag atccgacttg

240

tctactggta attccgctca cgcctctctc ctgcttagat ccggctctct ggccttcctt

300

ttcacagctc cttacgccca tggcgttgat gccgctaccg ctagcctccc aagcttctca

360

gcccctgccg ctaggtcatt cgctgctgac catggattgg ctgtgcgcgc catcggactc

420

agagttgctg atgccgagga tgctttcagg gcttctgtgg ctgctggagc tagaccagcc

480

ttcaagcctg tggagctggg acttggtttc aggctggccg aggttgagct ttacggcgat

540

gtggttctgc gctacgtgtc ttaccctgat gctgaggacg cccctttcct tcccggattc

600

gagaacgtta acaatcccgg cgccttgaat tacggactca ggcgcttcga tcacattgtg

660

ggcaacgttc ccgagctggc tccagtggcc gcttacgttg ccggattcac cggtttccat

720

gagttcgctg agttcacagc tgaggatgtg ggtactgctg agtctggatt gaactcaatg

780

gtgctcgcca acaatagcga gactgttttg attcctctca atgagcccgt gcatggaact

840

aagagaaggt cacagatcca aacattcttg gaccacaatg gcggacccgg tgttcagcat

900

attgctctcg cctccgatga cgtgctgagg actcttcgcg agatgcaagc tcgctctgcc

960

atgggtggct tcgagttcat ggccgctccc ccacctgatt actacgaggg agtgcgcaga

1020

agggctggtg acgttcttag cgaggcccag atcaaggagt gccaagagtt gggcgtgctc

1080

gttgataggg atgaccaggg agttttgctc caaatcttca ccaagccagt gggagacaga

1140

cagactttgt tcctcgagat tatccaaagg attggatgca tggagaagga tgagcagggt

1200

caagagtacc agaagggagg ttgcggcgga ttcggcaagg gaaacttctc ccaactgttc

1260

aagtctattg aggactacga gaagagcctt gagtcaaagc aggccgctgc cgtgcaaggc

1320

tcctga

1326

<210> 60

<211> 441

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-SiHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 60

Met Pro Pro Thr Pro Thr Pro Ala Ala Ala Ala Pro Gly Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Pro Ala Ala Gly Asp Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg

20 25 30

Gly Phe Val Arg Val Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ser

35 40 45

Phe His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Thr Ser Ala Ala Gly

50 55 60

Arg Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ser

85 90 95

Leu Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Val Asp Ala Ala

100 105 110

Thr Ala Ser Leu Pro Ser Phe Ser Ala Pro Ala Ala Arg Ser Phe Ala

115 120 125

Ala Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Ile Gly Leu Arg Val Ala Asp

130 135 140

Ala Glu Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala

145 150 155 160

Phe Lys Pro Val Glu Leu Gly Leu Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu

165 170 175

Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Ala Glu

180 185 190

Asp Ala Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Asn Val Asn Asn Pro Gly Ala

195 200 205

Leu Asn Tyr Gly Leu Arg Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro

210 215 220

Glu Leu Ala Pro Val Ala Ala Tyr Val Ala Gly Phe Thr Gly Phe His

225 230 235 240

Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly

245 250 255

Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Thr Val Leu Ile Pro

260 265 270

Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr

275 280 285

Phe Leu Asp His Asn Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala

290 295 300

Ser Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala

305 310 315 320

Met Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Ala Pro Pro Pro Asp Tyr Tyr Glu

325 330 335

Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Ala Gln Ile Lys

340 345 350

Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val

355 360 365

Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Gln Thr Leu Phe

370 375 380

Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Gln Gly

385 390 395 400

Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe

405 410 415

Ser Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ser

420 425 430

Lys Gln Ala Ala Ala Val Gln Gly Ser

435 440

<210> 61

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SiHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 61

atgcccccga ccccgacccc cgccgccgcc gcaccgggcg ccgccgcggc gccggcagcg

60

ggggatcagg cggcgttccg cctcgtcggc caccgcggct tcgtccgcgt caacccgcgc

120

tccgaccgct tccacacgct gtcgttccac cacgtcgagc tctggtgcgc cgacgccacg

180

tccgccgccg gccgcttctc cttcgggctc ggcgcgccgc tcgccgcgcg gtccgacctc

240

tccacgggga actccgcgca cgcctcgctc ctgctccgct cgggctccct cgcgttcctc

300

ttcaccgcgc catacgcgca cggcgtcgac gccgcaaccg catccctgcc gtccttttcc

360

gcgcccgccg cgcggagctt cgcggccgac cacggcctcg cggtgcgcgc catcgggctc

420

cgcgtcgccg acgccgagga cgccttccgc gccagcgtcg ccgccggcgc gcgccccgcg

480

ttcaagcccg tcgagctcgg cctcgggttc cgcctcgccg aggtcgagct ctacggcgac

540

gtcgtcctcc gctacgtgag ctacccggac gccgaggacg cgcccttcct gccgggcttc

600

gagaacgtga acaaccccgg ggcgctgaac tacgggctca ggaggttcga ccacatcgtc

660

ggcaacgtcc cggagctggc gccggtggcc gcgtacgtcg ccgggttcac ggggttccac

720

gaattcgccg agttcacggc ggaggacgtg ggcacggcgg agagcgggct caattcgatg

780

gtgctcgcca acaactccga gaccgtgctg atcccgctca acgagcccgt ccacggcacc

840

aagcgccgca gccagataca gacgttcctg gaccacaacg gcggccccgg cgtgcagcac

900

atcgcgctgg ccagcgacga cgtgctcagg acgctgcggg agatgcaagc acgctcagcc

960

atgggcggat tcgagttcat ggcggctcca ccgcccgact attacgaagg tgtgaggcgg

1020

cgcgccgggg acgtgctctc ggaggctcag attaaggagt gccaggaact gggggtgctg

1080

gtggacaggg atgaccaggg ggtgttgctc caaatcgcta ccaagccagt gggggacagg

1140

caaacattgt tcttggagat aatacaaagg attgggtgca tggagaagga cgagcagggg

1200

caggaatacc agaagggtgg ttgtggcggt tttggaaagg gaaacttctc gcagctgttc

1260

aaatccattg aggactatga gaagtccctt gaatcaaagc aagctgctgc ggttcaggga

1320

tcctaa

1326

<210> 62

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SiHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 62

atgccaccta cccccactcc tgctgctgct gctcctggtg ctgctgctgc tccagccgct

60

ggcgatcagg ccgctttcag gctggttggt cacagaggct tcgtgagggt taaccctcgc

120

tccgatagat tccatactct gtctttccac catgtggagc tttggtgcgc tgatgctaca

180

tctgctgctg gtcgcttctc attcggtctg ggcgctccac ttgccgctag atccgacttg

240

tctactggta attccgctca cgcctctctc ctgcttagat ccggctctct ggccttcctt

300

ttcacagctc cttacgccca tggcgttgat gccgctaccg ctagcctccc aagcttctca

360

gcccctgccg ctaggtcatt cgctgctgac catggattgg ctgtgcgcgc catcggactc

420

agagttgctg atgccgagga tgctttcagg gcttctgtgg ctgctggagc tagaccagcc

480

ttcaagcctg tggagctggg acttggtttc aggctggccg aggttgagct ttacggcgat

540

gtggttctgc gctacgtgtc ttaccctgat gctgaggacg cccctttcct tcccggattc

600

gagaacgtta acaatcccgg cgccttgaat tacggactca ggcgcttcga tcacattgtg

660

ggcaacgttc ccgagctggc tccagtggcc gcttacgttg ccggattcac cggtttccat

720

gagttcgctg agttcacagc tgaggatgtg ggtactgctg agtctggatt gaactcaatg

780

gtgctcgcca acaatagcga gactgttttg attcctctca atgagcccgt gcatggaact

840

aagagaaggt cacagatcca aacattcttg gaccacaatg gcggacccgg tgttcagcat

900

attgctctcg cctccgatga cgtgctgagg actcttcgcg agatgcaagc tcgctctgcc

960

atgggtggct tcgagttcat ggccgctccc ccacctgatt actacgaggg agtgcgcaga

1020

agggctggtg acgttcttag cgaggcccag atcaaggagt gccaagagtt gggcgtgctc

1080

gttgataggg atgaccaggg agttttgctc caaatcgcta ccaagccagt gggagacaga

1140

cagactttgt tcctcgagat tatccaaagg attggatgca tggagaagga tgagcagggt

1200

caagagtacc agaagggagg ttgcggcgga ttcggcaagg gaaacttctc ccaactgttc

1260

aagtctattg aggactacga gaagagcctt gagtcaaagc aggccgctgc cgtgcaaggc

1320

tcctga

1326

<210> 63

<211> 440

<212> ПРТ

<213> SbHPPD Аминокислотная последовательность (Sorghum bicolor)

<400> 63

Met Pro Pro Thr Pro Thr Thr Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Val Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ser Ala Glu Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg Asn

20 25 30

Phe Val Arg Val Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ala Phe

35 40 45

His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg

50 55 60

Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser

65 70 75 80

Thr Gly Asn Thr Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu

85 90 95

Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Ala Asp Ala Ala Thr

100 105 110

Ala Ser Leu Pro Ser Phe Ser Ala Ala Glu Ala Arg Arg Phe Ala Ala

115 120 125

Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala

130 135 140

Glu Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala Phe

145 150 155 160

Glu Pro Val Glu Leu Gly Leu Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Asp Ala Asp

180 185 190

Ala Ser Phe Leu Pro Gly Phe Val Gly Val Thr Ser Pro Gly Ala Ala

195 200 205

Asp Tyr Gly Leu Arg Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro Glu

210 215 220

Leu Ala Pro Ala Ala Ala Tyr Phe Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu

225 230 235 240

Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu

245 250 255

Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ala Glu Asn Val Leu Leu Pro Leu

260 265 270

Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr

275 280 285

Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Met Ala Leu Ala Ser

290 295 300

Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala Met

305 310 315 320

Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Ala Pro Glu Tyr Tyr Asp Gly

325 330 335

Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Glu Ala Gln Ile Lys Glu

340 345 350

Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu

355 360 365

Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu

370 375 380

Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Lys Gly Gln

385 390 395 400

Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser

405 410 415

Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys

420 425 430

Gln Ala Ala Ala Ala Gln Gly Ser

435 440

<210> 64

<211> 1323

<212> ДНК

<213> SbHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Sorghum bicolor)

<400> 64

atgcccccga cccccaccac agccgccgca accggcgccg ccgtggcggc ggcatcagcg

60

gagcaggcgg cgttccgcct cgtgggccac cgcaacttcg tccgcgtgaa cccgcgctcc

120

gaccgcttcc acacgctcgc gttccaccac gtggagctct ggtgcgccga cgcggcctcc

180

gccgcgggcc gcttctcctt cgggctcggc gcgccgctcg ccgcgcggtc cgacctctcc

240

acggggaaca ccgcgcacgc gtccctgctg ctccgctcgg gcgccctcgc gttcctcttc

300

acggcgccct acgcgcacgg cgccgacgcc gccacggcct cgctgccctc cttctccgcc

360

gccgaggcgc ggcgcttcgc ggccgaccac ggcctcgcgg tgcgcgccgt cgcgctccgc

420

gtggccgacg cggaggacgc cttccgcgcc agcgtcgcgg ccggcgcgcg cccggcgttc

480

gagcccgtcg agctcggcct cggcttccgc ctcgccgaag tcgagctcta cggcgacgtc

540

gtgctccggt acgtgagcta cccggacgac gcggacgcgt ccttcctgcc ggggttcgtg

600

ggcgtgacca gccccggcgc ggcggactac gggctgagga ggttcgacca catcgtcggc

660

aacgtgccgg agctggcgcc ggcggccgcc tacttcgctg gcttcacggg gttccacgag

720

ttcgccgagt tcacggcgga ggacgtgggc accacggaga gcgggctcaa ctcgatggtg

780

ctcgccaaca acgcggagaa cgtgctgctc ccactcaacg agccggtgca cggcaccaag

840

cgccgcagcc agatacagac gtacttggac caccacggcg gccccggcgt gcagcacatg

900

gcgctggcca gcgacgacgt gctcaggacg ctgagggaga tgcaagcgcg ctcggccatg

960

ggcggcttcg agttcatggc gcctccggcg cccgaatact atgacggcgt gaggcggcgc

1020

gccggggacg tgctcacgga ggcacagatt aaggagtgtc aggaactagg ggtgctggtg

1080

gacagagatg accagggcgt gctgctccag atcttcacca agccagtggg ggacaggcca

1140

acgttgttct tggagatcat tcaaaggatc gggtgcatgg agaaggatga gaaggggcaa

1200

gaataccaga agggtggctg tggcgggttt ggcaagggaa acttctccca gctgttcaaa

1260

tccattgagg attatgagaa gtcccttgaa gctaagcaag ctgcagcagc tcagggatcc

1320

tag

1323

<210> 65

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SbHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 65

atgccaccta ctccaaccac tgctgctgct actggtgctg ctgtggctgc agcttctgct

60

gagcaggctg ctttccgcct ggttggacac cgcaacttcg tgagagttaa tcccagatca

120

gatcgcttcc ataccttggc cttccaccat gtggagcttt ggtgcgctga tgctgcttct

180

gctgctggca ggttctcatt cggtctgggt gccccactcg ctgctagaag cgatttgtca

240

actggaaaca cagctcacgc cagcctcctg cttagatcag gtgctttggc cttcctcttc

300

acagctccct atgctcatgg tgctgatgct gctactgctt ccctcccatc cttctctgct

360

gctgaggcta gaagattcgc tgctgaccat ggactggccg tgagggctgt tgcccttcgc

420

gttgctgatg ccgaggacgc cttcagagct tctgttgctg ctggagctag gcctgctttc

480

gagcccgttg agttgggact cggtttcaga ttggccgagg tggagctcta cggcgatgtg

540

gttctgcgct acgtgtccta ccctgatgac gctgacgcct ctttccttcc aggtttcgtg

600

ggcgttacta gccctggcgc cgctgattac ggactgagaa ggttcgacca cattgtgggc

660

aacgttccag agcttgcccc tgccgctgcc tacttcgctg gattcaccgg tttccatgag

720

ttcgccgagt tcactgctga ggatgtgggt acaaccgagt ccggcctgaa ttctatggtg

780

cttgccaaca atgctgagaa cgttttgctc cccctgaatg agccagtgca cggtacaaag

840

cgcagatccc agattcaaac ctacttggat caccacggcg gcccaggcgt tcagcatatg

900

gctctcgcct ccgatgacgt gctgagaact cttagggaga tgcaagcccg ctctgctatg

960

ggtggcttcg agttcatggc cccaccagct cctgagtact acgatggagt gaggcgcaga

1020

gccggtgacg ttcttacaga ggctcagatc aaggagtgcc aagagttggg tgtgctcgtt

1080

gatagagatg accagggcgt tctgcttcaa attttcacta agcctgtggg cgaccgcccc

1140

acactgttcc ttgagattat ccagagaatc ggctgcatgg agaaggatga gaagggacag

1200

gagtaccaaa agggaggttg cggcggattc ggcaagggaa atttctccca attgttcaag

1260

tctatcgagg actacgagaa gtctcttgag gctaagcagg ctgctgctgc tcaaggatca

1320

tga

1323

<210> 66

<211> 440

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-SbHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 66

Met Pro Pro Thr Pro Thr Thr Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Val Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ser Ala Glu Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg Asn

20 25 30

Phe Val Arg Val Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ala Phe

35 40 45

His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg

50 55 60

Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser

65 70 75 80

Thr Gly Asn Thr Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu

85 90 95

Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Ala Asp Ala Ala Thr

100 105 110

Ala Ser Leu Pro Ser Phe Ser Ala Ala Glu Ala Arg Arg Phe Ala Ala

115 120 125

Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala

130 135 140

Glu Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala Phe

145 150 155 160

Glu Pro Val Glu Leu Gly Leu Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Asp Ala Asp

180 185 190

Ala Ser Phe Leu Pro Gly Phe Val Gly Val Thr Ser Pro Gly Ala Ala

195 200 205

Asp Tyr Gly Leu Arg Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro Glu

210 215 220

Leu Ala Pro Ala Ala Ala Tyr Phe Ala Gly Phe Thr Gly Phe His Glu

225 230 235 240

Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu

245 250 255

Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ala Glu Asn Val Leu Leu Pro Leu

260 265 270

Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr

275 280 285

Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Met Ala Leu Ala Ser

290 295 300

Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala Met

305 310 315 320

Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Ala Pro Glu Tyr Tyr Asp Gly

325 330 335

Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Glu Ala Gln Ile Lys Glu

340 345 350

Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu

355 360 365

Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe Leu

370 375 380

Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Lys Gly Gln

385 390 395 400

Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser

405 410 415

Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala Lys

420 425 430

Gln Ala Ala Ala Ala Gln Gly Ser

435 440

<210> 67

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SbHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 67

atgcccccga cccccaccac agccgccgca accggcgccg ccgtggcggc ggcatcagcg

60

gagcaggcgg cgttccgcct cgtgggccac cgcaacttcg tccgcgtgaa cccgcgctcc

120

gaccgcttcc acacgctcgc gttccaccac gtggagctct ggtgcgccga cgcggcctcc

180

gccgcgggcc gcttctcctt cgggctcggc gcgccgctcg ccgcgcggtc cgacctctcc

240

acggggaaca ccgcgcacgc gtccctgctg ctccgctcgg gcgccctcgc gttcctcttc

300

acggcgccct acgcgcacgg cgccgacgcc gccacggcct cgctgccctc cttctccgcc

360

gccgaggcgc ggcgcttcgc ggccgaccac ggcctcgcgg tgcgcgccgt cgcgctccgc

420

gtggccgacg cggaggacgc cttccgcgcc agcgtcgcgg ccggcgcgcg cccggcgttc

480

gagcccgtcg agctcggcct cggcttccgc ctcgccgaag tcgagctcta cggcgacgtc

540

gtgctccggt acgtgagcta cccggacgac gcggacgcgt ccttcctgcc ggggttcgtg

600

ggcgtgacca gccccggcgc ggcggactac gggctgagga ggttcgacca catcgtcggc

660

aacgtgccgg agctggcgcc ggcggccgcc tacttcgctg gcttcacggg gttccacgag

720

ttcgccgagt tcacggcgga ggacgtgggc accacggaga gcgggctcaa ctcgatggtg

780

ctcgccaaca acgcggagaa cgtgctgctc ccactcaacg agccggtgca cggcaccaag

840

cgccgcagcc agatacagac gtacttggac caccacggcg gccccggcgt gcagcacatg

900

gcgctggcca gcgacgacgt gctcaggacg ctgagggaga tgcaagcgcg ctcggccatg

960

ggcggcttcg agttcatggc gcctccggcg cccgaatact atgacggcgt gaggcggcgc

1020

gccggggacg tgctcacgga ggcacagatt aaggagtgtc aggaactagg ggtgctggtg

1080

gacagagatg accagggcgt gctgctccag atcgctacca agccagtggg ggacaggcca

1140

acgttgttct tggagatcat tcaaaggatc gggtgcatgg agaaggatga gaaggggcaa

1200

gaataccaga agggtggctg tggcgggttt ggcaagggaa acttctccca gctgttcaaa

1260

tccattgagg attatgagaa gtcccttgaa gctaagcaag ctgcagcagc tcagggatcc

1320

tag

1323

<210> 68

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SbHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 68

atgccaccta ctccaaccac tgctgctgct actggtgctg ctgtggctgc agcttctgct

60

gagcaggctg ctttccgcct ggttggacac cgcaacttcg tgagagttaa tcccagatca

120

gatcgcttcc ataccttggc cttccaccat gtggagcttt ggtgcgctga tgctgcttct

180

gctgctggca ggttctcatt cggtctgggt gccccactcg ctgctagaag cgatttgtca

240

actggaaaca cagctcacgc cagcctcctg cttagatcag gtgctttggc cttcctcttc

300

acagctccct atgctcatgg tgctgatgct gctactgctt ccctcccatc cttctctgct

360

gctgaggcta gaagattcgc tgctgaccat ggactggccg tgagggctgt tgcccttcgc

420

gttgctgatg ccgaggacgc cttcagagct tctgttgctg ctggagctag gcctgctttc

480

gagcccgttg agttgggact cggtttcaga ttggccgagg tggagctcta cggcgatgtg

540

gttctgcgct acgtgtccta ccctgatgac gctgacgcct ctttccttcc aggtttcgtg

600

ggcgttacta gccctggcgc cgctgattac ggactgagaa ggttcgacca cattgtgggc

660

aacgttccag agcttgcccc tgccgctgcc tacttcgctg gattcaccgg tttccatgag

720

ttcgccgagt tcactgctga ggatgtgggt acaaccgagt ccggcctgaa ttctatggtg

780

cttgccaaca atgctgagaa cgttttgctc cccctgaatg agccagtgca cggtacaaag

840

cgcagatccc agattcaaac ctacttggat caccacggcg gcccaggcgt tcagcatatg

900

gctctcgcct ccgatgacgt gctgagaact cttagggaga tgcaagcccg ctctgctatg

960

ggtggcttcg agttcatggc cccaccagct cctgagtact acgatggagt gaggcgcaga

1020

gccggtgacg ttcttacaga ggctcagatc aaggagtgcc aagagttggg tgtgctcgtt

1080

gatagagatg accagggcgt tctgcttcaa attgctacta agcctgtggg cgaccgcccc

1140

acactgttcc ttgagattat ccagagaatc ggctgcatgg agaaggatga gaagggacag

1200

gagtaccaaa agggaggttg cggcggattc ggcaagggaa atttctccca attgttcaag

1260

tctatcgagg actacgagaa gtctcttgag gctaagcagg ctgctgctgc tcaaggatca

1320

tga

1323

<210> 69

<211> 446

<212> ПРТ

<213> OsHPPD Аминокислотная последовательность (Oryza sativa)

<400> 69

Met Pro Pro Thr Pro Thr Pro Thr Ala Thr Thr Gly Ala Val Ser Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ala Gly Glu Asn Ala Gly Phe Arg Leu Val Gly His Arg

20 25 30

Arg Phe Val Arg Ala Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe Gln Ala Leu Ala

35 40 45

Phe His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly

50 55 60

Arg Phe Ala Phe Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ala Ser

85 90 95

Val Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Gly Gly Asp His Gly Val Gly

100 105 110

Ala Asp Ala Ala Thr Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Pro Gly Ala

115 120 125

Ala Arg Arg Phe Ala Ala Asp His Gly Leu Ala Val His Ala Val Ala

130 135 140

Leu Arg Val Ala Asp Ala Ala Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala

145 150 155 160

Gly Ala Arg Pro Ala Phe Gln Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Phe Gly

165 170 175

Leu Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser

180 185 190

His Pro Asp Gly Ala Asp Ala Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Gly Val

195 200 205

Ser Asn Pro Gly Ala Val Asp Tyr Gly Leu Arg Arg Phe Asp His Val

210 215 220

Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Val Ala Ala Tyr Ile Ser Gly

225 230 235 240

Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly

245 250 255

Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ala Glu

260 265 270

Thr Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg

275 280 285

Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln

290 295 300

His Ile Ala Leu Ala Ser Asp Asp Val Leu Gly Thr Leu Arg Glu Met

305 310 315 320

Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Glu Phe Leu Ala Pro Pro Pro

325 330 335

Pro Asn Tyr Tyr Asp Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Ser

340 345 350

Glu Glu Gln Ile Asn Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg

355 360 365

Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp

370 375 380

Arg Pro Thr Phe Phe Leu Glu Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu

385 390 395 400

Lys Asp Glu Ser Gly Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe

405 410 415

Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu

420 425 430

Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ala Pro Thr Val Gln Gly Ser

435 440 445

<210> 70

<211> 1341

<212> ДНК

<213> OsHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Oryza sativa)

<400> 70

atgcctccca ctcccacccc caccgccacc accggcgccg tctcggccgc tgcggcggcg

60

ggggagaacg cggggttccg cctcgtcggg caccgccgct tcgtccgcgc caacccgcgg

120

agcgaccggt tccaggcgct cgcgttccac cacgtcgagc tctggtgcgc cgacgccgcg

180

tccgccgcgg gccggttcgc cttcgccctg ggcgcgccgc tcgccgccag gtccgacctc

240

tccacgggga actccgcgca cgcctccctc ctcctccgct ccgcctccgt cgcgttcctc

300

ttcaccgccc cctacggcgg cgaccacggc gtcggcgcgg acgcggccac caccgcctcc

360

atcccttcct tctccccagg cgccgcgcgg aggttcgccg cggaccacgg cctcgcggtg

420

cacgccgtgg cgctgcgcgt cgccgacgcg gccgacgcct tccgcgccag cgtcgcggcc

480

ggtgcgcgcc cggcgttcca gcccgccgac ctcggcggtg gcttcggcct cgcggaggtg

540

gagctctacg gcgacgtcgt gctccgcttc gtcagccacc cggacggcgc cgacgcgccc

600

ttcctcccgg gtttcgaggg cgtcagcaac ccgggcgccg tggactacgg cctccgccgg

660

ttcgaccacg tcgtcggcaa cgtgccggag ctcgctccgg tagccgcgta catctccggg

720

ttcaccgggt tccacgagtt cgccgagttc accgccgagg acgtgggcac cgccgagagc

780

ggcctcaact cggtggtgct cgccaacaac gcggagaccg tgctgctgcc gctcaacgag

840

ccggtgcacg gcaccaagcg gcggagccag atacagacgt acctggacca ccacggcggc

900

ccgggggtgc agcacatcgc gctggccagc gacgacgtgc tcgggacgct gagggagatg

960

cgggcgcgct ccgccatggg cggcttcgag ttcttggcgc cgccgccgcc caactactac

1020

gacggcgtgc ggcggcgcgc cggggacgtg ctctcggagg agcagatcaa cgagtgccag

1080

gagctcgggg tgctcgtgga cagggatgac cagggggtgt tgctccagat cttcaccaag

1140

ccagtaggag acaggccaac ctttttcttg gagatgatac aaaggattgg gtgcatggag

1200

aaggatgaga gtgggcagga gtaccagaag ggcggctgcg gcgggtttgg gaagggcaac

1260

ttctcggagc tgttcaagtc cattgaggag tatgagaaat cccttgaagc caagcaagcc

1320

cctacagttc aaggatccta g

1341

<210> 71

<211> 1341

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-OsHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 71

atgccaccta ctccaacacc taccgctacc actggagccg tgagcgctgc tgctgctgct

60

ggagagaacg ctggattcag actcgtgggc cacaggcgct tcgttagggc caatccacgc

120

agcgatagat tccaggctct ggccttccac catgttgagc tttggtgcgc tgacgctgcc

180

tcagctgccg gcaggttcgc tttcgctttg ggtgcccctc tcgctgctag atccgatttg

240

tctactggca acagcgctca cgcctcactc ctgcttaggt ccgcttctgt ggccttcctc

300

ttcacagccc cctacggcgg agatcatgga gttggtgctg acgctgccac aaccgcctcc

360

attcctagct tctcacccgg agctgccaga aggttcgctg ccgaccacgg tttggctgtg

420

catgctgttg ccctcagagt ggccgatgct gccgacgctt tcagggcttc agtggctgct

480

ggtgctagac cagctttcca acctgctgat ctgggtggcg gattcggact ggccgaggtg

540

gagctttacg gtgacgtggt tttgaggttc gtttcccatc ccgatggagc tgacgccccc

600

ttcctcccag gtttcgaggg cgtgtctaac ccaggtgctg ttgattacgg cttgcgcaga

660

ttcgaccacg tggttggtaa tgtgcccgag ctcgccccag ttgctgccta catcagcgga

720

ttcaccggtt tccatgagtt cgctgagttc actgccgagg atgtgggaac agccgagtcc

780

ggtttgaact ctgtggttct cgctaacaat gccgagactg tgttgctccc tcttaatgag

840

cccgttcacg gcaccaagag gcgctcacag attcaaactt acctggatca ccacggcggc

900

ccaggtgtgc agcatatcgc tcttgccagc gatgacgttt tgggaacact ccgcgagatg

960

agagctagat cagccatggg aggtttcgag ttcctggctc ccccacctcc caactactac

1020

gatggcgtga gaaggcgcgc cggagacgtt ctttccgagg agcagattaa tgagtgccaa

1080

gagctgggtg tgcttgttga tagggatgac cagggcgtgc tgcttcaaat cttcacaaag

1140

ccagttggag accgccctac cttcttcctc gagatgattc aaagaatcgg ctgcatggag

1200

aaggatgagt ctggacagga gtaccaaaag ggcggatgcg gtggcttcgg caagggaaat

1260

ttcagcgagc tgttcaagtc aattgaggag tacgagaagt cccttgaggc taagcaggcc

1320

cctaccgtgc aaggctcttg a

1341

<210> 72

<211> 446

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-OsHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 72

Met Pro Pro Thr Pro Thr Pro Thr Ala Thr Thr Gly Ala Val Ser Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ala Gly Glu Asn Ala Gly Phe Arg Leu Val Gly His Arg

20 25 30

Arg Phe Val Arg Ala Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe Gln Ala Leu Ala

35 40 45

Phe His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly

50 55 60

Arg Phe Ala Phe Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ala Ser

85 90 95

Val Ala Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Gly Gly Asp His Gly Val Gly

100 105 110

Ala Asp Ala Ala Thr Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Pro Gly Ala

115 120 125

Ala Arg Arg Phe Ala Ala Asp His Gly Leu Ala Val His Ala Val Ala

130 135 140

Leu Arg Val Ala Asp Ala Ala Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala

145 150 155 160

Gly Ala Arg Pro Ala Phe Gln Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Phe Gly

165 170 175

Leu Ala Glu Val Glu Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser

180 185 190

His Pro Asp Gly Ala Asp Ala Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Gly Val

195 200 205

Ser Asn Pro Gly Ala Val Asp Tyr Gly Leu Arg Arg Phe Asp His Val

210 215 220

Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Val Ala Ala Tyr Ile Ser Gly

225 230 235 240

Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly

245 250 255

Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ala Glu

260 265 270

Thr Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg

275 280 285

Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln

290 295 300

His Ile Ala Leu Ala Ser Asp Asp Val Leu Gly Thr Leu Arg Glu Met

305 310 315 320

Arg Ala Arg Ser Ala Met Gly Gly Phe Glu Phe Leu Ala Pro Pro Pro

325 330 335

Pro Asn Tyr Tyr Asp Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Ser

340 345 350

Glu Glu Gln Ile Asn Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg

355 360 365

Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp

370 375 380

Arg Pro Thr Phe Phe Leu Glu Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu

385 390 395 400

Lys Asp Glu Ser Gly Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe

405 410 415

Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu

420 425 430

Lys Ser Leu Glu Ala Lys Gln Ala Pro Thr Val Gln Gly Ser

435 440 445

<210> 73

<211> 1341

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-OsHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 73

atgcctccca ctcccacccc caccgccacc accggcgccg tctcggccgc tgcggcggcg

60

ggggagaacg cggggttccg cctcgtcggg caccgccgct tcgtccgcgc caacccgcgg

120

agcgaccggt tccaggcgct cgcgttccac cacgtcgagc tctggtgcgc cgacgccgcg

180

tccgccgcgg gccggttcgc cttcgccctg ggcgcgccgc tcgccgccag gtccgacctc

240

tccacgggga actccgcgca cgcctccctc ctcctccgct ccgcctccgt cgcgttcctc

300

ttcaccgccc cctacggcgg cgaccacggc gtcggcgcgg acgcggccac caccgcctcc

360

atcccttcct tctccccagg cgccgcgcgg aggttcgccg cggaccacgg cctcgcggtg

420

cacgccgtgg cgctgcgcgt cgccgacgcg gccgacgcct tccgcgccag cgtcgcggcc

480

ggtgcgcgcc cggcgttcca gcccgccgac ctcggcggtg gcttcggcct cgcggaggtg

540

gagctctacg gcgacgtcgt gctccgcttc gtcagccacc cggacggcgc cgacgcgccc

600

ttcctcccgg gtttcgaggg cgtcagcaac ccgggcgccg tggactacgg cctccgccgg

660

ttcgaccacg tcgtcggcaa cgtgccggag ctcgctccgg tagccgcgta catctccggg

720

ttcaccgggt tccacgagtt cgccgagttc accgccgagg acgtgggcac cgccgagagc

780

ggcctcaact cggtggtgct cgccaacaac gcggagaccg tgctgctgcc gctcaacgag

840

ccggtgcacg gcaccaagcg gcggagccag atacagacgt acctggacca ccacggcggc

900

ccgggggtgc agcacatcgc gctggccagc gacgacgtgc tcgggacgct gagggagatg

960

cgggcgcgct ccgccatggg cggcttcgag ttcttggcgc cgccgccgcc caactactac

1020

gacggcgtgc ggcggcgcgc cggggacgtg ctctcggagg agcagatcaa cgagtgccag

1080

gagctcgggg tgctcgtgga cagggatgac cagggggtgt tgctccagat cgctaccaag

1140

ccagtaggag acaggccaac ctttttcttg gagatgatac aaaggattgg gtgcatggag

1200

aaggatgaga gtgggcagga gtaccagaag ggcggctgcg gcgggtttgg gaagggcaac

1260

ttctcggagc tgttcaagtc cattgaggag tatgagaaat cccttgaagc caagcaagcc

1320

cctacagttc aaggatccta g

1341

<210> 74

<211> 1341

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-OsHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 74

atgccaccta ctccaacacc taccgctacc actggagccg tgagcgctgc tgctgctgct

60

ggagagaacg ctggattcag actcgtgggc cacaggcgct tcgttagggc caatccacgc

120

agcgatagat tccaggctct ggccttccac catgttgagc tttggtgcgc tgacgctgcc

180

tcagctgccg gcaggttcgc tttcgctttg ggtgcccctc tcgctgctag atccgatttg

240

tctactggca acagcgctca cgcctcactc ctgcttaggt ccgcttctgt ggccttcctc

300

ttcacagccc cctacggcgg agatcatgga gttggtgctg acgctgccac aaccgcctcc

360

attcctagct tctcacccgg agctgccaga aggttcgctg ccgaccacgg tttggctgtg

420

catgctgttg ccctcagagt ggccgatgct gccgacgctt tcagggcttc agtggctgct

480

ggtgctagac cagctttcca acctgctgat ctgggtggcg gattcggact ggccgaggtg

540

gagctttacg gtgacgtggt tttgaggttc gtttcccatc ccgatggagc tgacgccccc

600

ttcctcccag gtttcgaggg cgtgtctaac ccaggtgctg ttgattacgg cttgcgcaga

660

ttcgaccacg tggttggtaa tgtgcccgag ctcgccccag ttgctgccta catcagcgga

720

ttcaccggtt tccatgagtt cgctgagttc actgccgagg atgtgggaac agccgagtcc

780

ggtttgaact ctgtggttct cgctaacaat gccgagactg tgttgctccc tcttaatgag

840

cccgttcacg gcaccaagag gcgctcacag attcaaactt acctggatca ccacggcggc

900

ccaggtgtgc agcatatcgc tcttgccagc gatgacgttt tgggaacact ccgcgagatg

960

agagctagat cagccatggg aggtttcgag ttcctggctc ccccacctcc caactactac

1020

gatggcgtga gaaggcgcgc cggagacgtt ctttccgagg agcagattaa tgagtgccaa

1080

gagctgggtg tgcttgttga tagggatgac cagggcgtgc tgcttcaaat cgctacaaag

1140

ccagttggag accgccctac cttcttcctc gagatgattc aaagaatcgg ctgcatggag

1200

aaggatgagt ctggacagga gtaccaaaag ggcggatgcg gtggcttcgg caagggaaat

1260

ttcagcgagc tgttcaagtc aattgaggag tacgagaagt cccttgaggc taagcaggcc

1320

cctaccgtgc aaggctcttg a

1341

<210> 75

<211> 488

<212> ПРТ

<213> GmHPPD Аминокислотная последовательность (Glycine max)

<400> 75

Met Pro Met Tyr Thr Pro Ser Leu Ser Ala Pro Ser Ser Asn His Ile

1 5 10 15

Gln Pro Ser Val Thr Leu Pro Leu Tyr Ile Thr Thr Thr Lys Leu Asn

20 25 30

Leu Lys Gln Gln His His Thr Thr Pro Met Pro Ile Pro Met Cys Asn

35 40 45

Glu Ile Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Pro Gly Phe Lys Leu

50 55 60

Val Gly Phe Lys Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe

65 70 75 80

Gln Val Asn Arg Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr

85 90 95

Asn Ala Ser Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Val Ala

100 105 110

Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Gln Ile His Ala Ser Tyr Leu Leu

115 120 125

Arg Ser Gly Asp Leu Ser Phe Leu Phe Ser Ala Pro Tyr Ser Pro Ser

130 135 140

Leu Ser Ala Gly Ser Ser Ala Ala Ser Ser Ala Ser Ile Pro Ser Phe

145 150 155 160

Asp Ala Ala Thr Cys Leu Ala Phe Ala Ala Lys His Gly Phe Gly Val

165 170 175

Arg Ala Ile Ala Leu Glu Val Ala Asp Ala Glu Ala Ala Phe Ser Ala

180 185 190

Ser Val Ala Lys Gly Ala Glu Pro Ala Ser Pro Pro Val Leu Val Asp

195 200 205

Asp Arg Thr Gly Phe Ala Glu Val Arg Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu

210 215 220

Arg Tyr Val Ser Tyr Lys Asp Ala Ala Pro Gln Ala Pro His Ala Asp

225 230 235 240

Pro Ser Arg Trp Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ala Ala Ala Ser Ser Ser

245 250 255

Ser Phe Pro Glu Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val

260 265 270

Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Val Arg Tyr Leu Lys Gly Phe

275 280 285

Ser Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr

290 295 300

Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Thr

305 310 315 320

Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser

325 330 335

Gln Ile Glu Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His

340 345 350

Leu Ala Leu Val Thr His Asp Ile Phe Thr Thr Leu Arg Glu Met Arg

355 360 365

Lys Arg Ser Phe Leu Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro

370 375 380

Thr Tyr Tyr Ala Asn Leu His Asn Arg Ala Ala Asp Val Leu Thr Val

385 390 395 400

Asp Gln Ile Lys Gln Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp

405 410 415

Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg

420 425 430

Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Val Glu

435 440 445

Asp Glu Glu Gly Lys Val Tyr Gln Lys Gly Ala Cys Gly Gly Phe Gly

450 455 460

Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys

465 470 475 480

Thr Leu Glu Ala Lys Arg Thr Ala

485

<210> 76

<211> 1467

<212> ДНК

<213> GmHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Glycine max)

<400> 76

atgcccatgt acactccatc actctccgca ccctcctcca atcacattca accaagtgtc

60

acactcccct tatatatcac aaccaccaag ctcaatctca agcagcagca tcacaccaca

120

ccaatgccaa tacccatgtg caacgaaatt caagcccaag cccaagccca agcccaacct

180

gggtttaagc tcgtcggttt caaaaacttc gtccgaacca atcctaagtc ggaccgcttt

240

caagtcaacc gcttccacca catcgagttc tggtgcaccg atgccaccaa cgcctctcgc

300

cgattctctt ggggacttgg aatgcctatt gtggcaaaat ctgatctctc caccggaaac

360

caaatccacg cctcctacct cctccgctcc ggcgacctct ccttcctctt ctccgctcct

420

tactctccct ctctctccgc cggctcctcc gctgcctcct ccgcctccat tcccagtttc

480

gacgccgcca cctgccttgc cttcgctgcc aaacacggct tcggcgtccg cgccatcgcc

540

ttggaagtcg ccgacgcgga agccgctttc agcgccagcg tcgcgaaagg agccgagccg

600

gcgtcgccgc cggttctcgt cgacgatcgc accggcttcg cggaggtgcg cctctacggc

660

gacgtggtgc tccgctacgt cagctacaag gacgccgcgc cgcaggcgcc acacgcagat

720

ccgtcgcggt ggttcctgcc gggattcgag gccgcggcgt cgtcgtcttc gtttccggag

780

ctggactacg ggatccggcg gctggaccac gccgtcggga acgttccgga gctggcgccg

840

gcggtgaggt acctgaaagg cttcagcgga ttccacgagt tcgcggagtt caccgcggag

900

gacgtgggaa cgagcgagag cgggttgaac tcggtggttc tggcgaacaa ctcggagacg

960

gtgttgctgc cgctgaacga gccggtttac ggaacgaaga ggaagagcca gattgagacg

1020

tatttggaac acaacgaagg tgctggtgtg cagcaccttg cgcttgttac tcacgacatc

1080

ttcaccacac tgagagagat gagaaagcga agtttccttg gtggatttga gttcatgcct

1140

tctcctcctc ccacctatta cgccaacctc cacaaccgtg ccgctgatgt gttgaccgtt

1200

gaccagatta agcagtgtga ggagcttggg attcttgttg acagagatga tcagggcact

1260

ctgcttcaga ttttcacyaa gcctgttggg gacaggccaa cgatattcat agagataatt

1320

cagaggatcg ggtgcatggt ggaggatgag gaagggaagg tgtaccagaa gggtgcatgt

1380

gggggttttg ggaaaggcaa tttttctgag cttttcaaat ccattgaaga atatgagaag

1440

actttggaag ctaaaagaac cgcgtaa

1467

<210> 77

<211> 1467

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-GmHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 77

atgcctatgt atactccttc tttgtctgct ccttcttcta atcatattca accttctgtt

60

actttgcctt tgtatattac tactactaag ttgaatttga agcaacaaca tcatactact

120

cctatgccta ttcctatgtg taatgaaatt caagctcaag ctcaagctca agctcaacct

180

ggatttaagt tggttggatt taagaatttt gttagaacta atcctaagtc tgatagattt

240

caagttaata gatttcatca tattgaattt tggtgtactg atgctactaa tgcttctaga

300

agattttctt ggggattggg aatgcctatt gttgctaagt ctgatttgtc tactggaaat

360

caaattcatg cttcttattt gttgagatct ggagatttgt cttttttgtt ttctgctcct

420

tattctcctt ctttgtctgc tggatcttct gctgcttctt ctgcttctat tccttctttt

480

gatgctgcta cttgtttggc ttttgctgct aagcatggat ttggagttag agctattgct

540

ttggaagttg ctgatgctga agctgctttt tctgcttctg ttgctaaggg agctgaacct

600

gcttctcctc ctgttttggt tgatgataga actggatttg ctgaagttag attgtatgga

660

gatgttgttt tgagatatgt ttcttataag gatgctgctc ctcaagctcc tcatgctgat

720

ccttctagat ggtttttgcc tggatttgaa gctgctgctt cttcttcttc ttttcctgaa

780

ttggattatg gaattagaag attggatcat gctgttggaa atgttcctga attggctcct

840

gctgttagat atttgaaggg attttctgga tttcatgaat ttgctgaatt tactgctgaa

900

gatgttggaa cttctgaatc tggattgaat tctgttgttt tggctaataa ttctgaaact

960

gttttgttgc ctttgaatga acctgtttat ggaactaaga gaaagtctca aattgaaact

1020

tatttggaac ataatgaagg agctggagtt caacatttgg ctttggttac tcatgatatt

1080

tttactactt tgagagaaat gagaaagaga tcttttttgg gaggatttga atttatgcct

1140

tctcctcctc ctacttatta tgctaatttg cataatagag ctgctgatgt tttgactgtt

1200

gatcaaatta agcaatgtga agaattggga attttggttg atagagatga tcaaggaact

1260

ttgttgcaaa tttttactaa gcctgttgga gatagaccta ctatttttat tgaaattatt

1320

caaagaattg gatgtatggt tgaagatgaa gaaggaaagg tttatcaaaa gggagcttgt

1380

ggaggatttg gaaagggaaa tttttctgaa ttgtttaagt ctattgaaga atatgaaaag

1440

actttggaag ctaagagaac tgcttga

1467

<210> 78

<211> 488

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-GmHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 78

Met Pro Met Tyr Thr Pro Ser Leu Ser Ala Pro Ser Ser Asn His Ile

1 5 10 15

Gln Pro Ser Val Thr Leu Pro Leu Tyr Ile Thr Thr Thr Lys Leu Asn

20 25 30

Leu Lys Gln Gln His His Thr Thr Pro Met Pro Ile Pro Met Cys Asn

35 40 45

Glu Ile Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Pro Gly Phe Lys Leu

50 55 60

Val Gly Phe Lys Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe

65 70 75 80

Gln Val Asn Arg Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr

85 90 95

Asn Ala Ser Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Val Ala

100 105 110

Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Gln Ile His Ala Ser Tyr Leu Leu

115 120 125

Arg Ser Gly Asp Leu Ser Phe Leu Phe Ser Ala Pro Tyr Ser Pro Ser

130 135 140

Leu Ser Ala Gly Ser Ser Ala Ala Ser Ser Ala Ser Ile Pro Ser Phe

145 150 155 160

Asp Ala Ala Thr Cys Leu Ala Phe Ala Ala Lys His Gly Phe Gly Val

165 170 175

Arg Ala Ile Ala Leu Glu Val Ala Asp Ala Glu Ala Ala Phe Ser Ala

180 185 190

Ser Val Ala Lys Gly Ala Glu Pro Ala Ser Pro Pro Val Leu Val Asp

195 200 205

Asp Arg Thr Gly Phe Ala Glu Val Arg Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu

210 215 220

Arg Tyr Val Ser Tyr Lys Asp Ala Ala Pro Gln Ala Pro His Ala Asp

225 230 235 240

Pro Ser Arg Trp Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ala Ala Ala Ser Ser Ser

245 250 255

Ser Phe Pro Glu Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val

260 265 270

Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Val Arg Tyr Leu Lys Gly Phe

275 280 285

Ser Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr

290 295 300

Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Thr

305 310 315 320

Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser

325 330 335

Gln Ile Glu Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His

340 345 350

Leu Ala Leu Val Thr His Asp Ile Phe Thr Thr Leu Arg Glu Met Arg

355 360 365

Lys Arg Ser Phe Leu Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro

370 375 380

Thr Tyr Tyr Ala Asn Leu His Asn Arg Ala Ala Asp Val Leu Thr Val

385 390 395 400

Asp Gln Ile Lys Gln Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp

405 410 415

Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg

420 425 430

Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Val Glu

435 440 445

Asp Glu Glu Gly Lys Val Tyr Gln Lys Gly Ala Cys Gly Gly Phe Gly

450 455 460

Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys

465 470 475 480

Thr Leu Glu Ala Lys Arg Thr Ala

485

<210> 79

<211> 1467

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-GmHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 79

atgcccatgt acactccatc actctccgca ccctcctcca atcacattca accaagtgtc

60

acactcccct tatatatcac aaccaccaag ctcaatctca agcagcagca tcacaccaca

120

ccaatgccaa tacccatgtg caacgaaatt caagcccaag cccaagccca agcccaacct

180

gggtttaagc tcgtcggttt caaaaacttc gtccgaacca atcctaagtc ggaccgcttt

240

caagtcaacc gcttccacca catcgagttc tggtgcaccg atgccaccaa cgcctctcgc

300

cgattctctt ggggacttgg aatgcctatt gtggcaaaat ctgatctctc caccggaaac

360

caaatccacg cctcctacct cctccgctcc ggcgacctct ccttcctctt ctccgctcct

420

tactctccct ctctctccgc cggctcctcc gctgcctcct ccgcctccat tcccagtttc

480

gacgccgcca cctgccttgc cttcgctgcc aaacacggct tcggcgtccg cgccatcgcc

540

ttggaagtcg ccgacgcgga agccgctttc agcgccagcg tcgcgaaagg agccgagccg

600

gcgtcgccgc cggttctcgt cgacgatcgc accggcttcg cggaggtgcg cctctacggc

660

gacgtggtgc tccgctacgt cagctacaag gacgccgcgc cgcaggcgcc acacgcagat

720

ccgtcgcggt ggttcctgcc gggattcgag gccgcggcgt cgtcgtcttc gtttccggag

780

ctggactacg ggatccggcg gctggaccac gccgtcggga acgttccgga gctggcgccg

840

gcggtgaggt acctgaaagg cttcagcgga ttccacgagt tcgcggagtt caccgcggag

900

gacgtgggaa cgagcgagag cgggttgaac tcggtggttc tggcgaacaa ctcggagacg

960

gtgttgctgc cgctgaacga gccggtttac ggaacgaaga ggaagagcca gattgagacg

1020

tatttggaac acaacgaagg tgctggtgtg cagcaccttg cgcttgttac tcacgacatc

1080

ttcaccacac tgagagagat gagaaagcga agtttccttg gtggatttga gttcatgcct

1140

tctcctcctc ccacctatta cgccaacctc cacaaccgtg ccgctgatgt gttgaccgtt

1200

gaccagatta agcagtgtga ggagcttggg attcttgttg acagagatga tcagggcact

1260

ctgcttcaga ttgctacyaa gcctgttggg gacaggccaa cgatattcat agagataatt

1320

cagaggatcg ggtgcatggt ggaggatgag gaagggaagg tgtaccagaa gggtgcatgt

1380

gggggttttg ggaaaggcaa tttttctgag cttttcaaat ccattgaaga atatgagaag

1440

actttggaag ctaaaagaac cgcgtaa

1467

<210> 80

<211> 1467

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-GmHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 80

atgcctatgt atactccttc tttgtctgct ccttcttcta atcatattca accttctgtt

60

actttgcctt tgtatattac tactactaag ttgaatttga agcaacaaca tcatactact

120

cctatgccta ttcctatgtg taatgaaatt caagctcaag ctcaagctca agctcaacct

180

ggatttaagt tggttggatt taagaatttt gttagaacta atcctaagtc tgatagattt

240

caagttaata gatttcatca tattgaattt tggtgtactg atgctactaa tgcttctaga

300

agattttctt ggggattggg aatgcctatt gttgctaagt ctgatttgtc tactggaaat

360

caaattcatg cttcttattt gttgagatct ggagatttgt cttttttgtt ttctgctcct

420

tattctcctt ctttgtctgc tggatcttct gctgcttctt ctgcttctat tccttctttt

480

gatgctgcta cttgtttggc ttttgctgct aagcatggat ttggagttag agctattgct

540

ttggaagttg ctgatgctga agctgctttt tctgcttctg ttgctaaggg agctgaacct

600

gcttctcctc ctgttttggt tgatgataga actggatttg ctgaagttag attgtatgga

660

gatgttgttt tgagatatgt ttcttataag gatgctgctc ctcaagctcc tcatgctgat

720

ccttctagat ggtttttgcc tggatttgaa gctgctgctt cttcttcttc ttttcctgaa

780

ttggattatg gaattagaag attggatcat gctgttggaa atgttcctga attggctcct

840

gctgttagat atttgaaggg attttctgga tttcatgaat ttgctgaatt tactgctgaa

900

gatgttggaa cttctgaatc tggattgaat tctgttgttt tggctaataa ttctgaaact

960

gttttgttgc ctttgaatga acctgtttat ggaactaaga gaaagtctca aattgaaact

1020

tatttggaac ataatgaagg agctggagtt caacatttgg ctttggttac tcatgatatt

1080

tttactactt tgagagaaat gagaaagaga tcttttttgg gaggatttga atttatgcct

1140

tctcctcctc ctacttatta tgctaatttg cataatagag ctgctgatgt tttgactgtt

1200

gatcaaatta agcaatgtga agaattggga attttggttg atagagatga tcaaggaact

1260

ttgttgcaaa ttgctactaa gcctgttgga gatagaccta ctatttttat tgaaattatt

1320

caaagaattg gatgtatggt tgaagatgaa gaaggaaagg tttatcaaaa gggagcttgt

1380

ggaggatttg gaaagggaaa tttttctgaa ttgtttaagt ctattgaaga atatgaaaag

1440

actttggaag ctaagagaac tgcttga

1467

<210> 81

<211> 434

<212> ПРТ

<213> CaHPPD Аминокислотная последовательность (Cicer arietinum)

<400> 81

Met Gly Thr Ile Glu Thr Gln Thr Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Asn

1 5 10 15

Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Lys Val Lys Arg

20 25 30

Phe His His Val Glu Phe Trp Cys Pro Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg

35 40 45

Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Val Ala Lys Ser Asp Leu

50 55 60

Ser Thr Gly Asn Gln Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly Asp

65 70 75 80

Leu Asn Phe Leu Phe Thr Ala Ala Tyr Ser Pro Ser Ile Ser Leu Ser

85 90 95

Ala Pro His Pro Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Pro Thr Ser

100 105 110

Phe Ala Phe Ser Ala Ser His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Ile

115 120 125

Glu Val Asp Asp Ala Glu Phe Ala Tyr Thr Thr Ser Val Asn His Gly

130 135 140

Ala Ile Pro Ser Ser Pro Pro Val Val Leu Asp Asn Arg Val Lys Leu

145 150 155 160

Ala Glu Val Gln Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr

165 170 175

Asn Asp Pro Ile Glu Thr Ser Asn Pro Asn Pro Asn His Trp Phe Leu

180 185 190

Pro Gly Phe Glu Pro Val Glu Glu Thr Ser Ser Asn Gln Ser Ile Asp

195 200 205

Phe Gly Ile Gln Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu

210 215 220

Ser Ser Ala Leu Asn Tyr Val Lys Gln Phe Thr Gly Phe His Glu Phe

225 230 235 240

Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn

245 250 255

Ser Thr Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Thr Val Leu Leu Pro Met Asn

260 265 270

Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu

275 280 285

Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Leu Gln His Leu Ala Leu Met Ser Asn

290 295 300

Asp Ile Phe Lys Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Ile Gly

305 310 315 320

Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Ser Asn Leu

325 330 335

Lys Lys Arg Val Gly Asp Val Leu Asn Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys

340 345 350

Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Lys Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu

355 360 365

Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu

370 375 380

Ile Ile Gln Arg Val Gly Cys Met Leu Lys Asp Asp Glu Gly Lys Glu

385 390 395 400

Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu

405 410 415

Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ile Lys Arg

420 425 430

Thr Ala

<210> 82

<211> 1305

<212> ДНК

<213> CaHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Cicer arietinum)

<400> 82

atgggcacca tagaaaccca aaccgggttt aaattagttg ggttcaacaa cttcgtccga

60

accaacccaa aatcagaccg gttcaaagtg aaacgtttcc accacgtcga attttggtgc

120

cccgacgcaa ccaacaccgc acgccgcttc tcatggggac tcggaatgcc tatcgtagct

180

aaatccgacc tctctaccgg aaatcaaact cacgcttcct atctcctccg ctccggcgac

240

ctcaatttcc tcttcaccgc cgcttattcc ccatcaattt ctctttctgc tcctcatcca

300

accgcctcaa ttccatcttt ctccgcaccc acctccttcg ccttctccgc ctcccacggc

360

cttggcgtcc gcgctgtcgc aatcgaagtc gacgacgccg aattcgccta cacaacaagc

420

gtaaaccacg gcgcgatccc gtcgtctcct cccgtcgtcc tcgacaaccg cgtcaaactc

480

gctgaagttc aactctacgg cgacgtcgtt ttgcgttatg tcagttacaa cgatccgatc

540

gaaacctcaa accctaaccc taaccactgg ttcctccctg gcttcgaacc agtagaagaa

600

acatcctcta accaatcaat cgacttcgga atccaacgac tagaccacgc cgtcggaaac

660

gtaccggaac tttcatcagc actgaattac gtgaaacaat tcactggttt tcacgaattc

720

gccgaattca cagcggaaga cgttggaacg agtgagagtg ggttgaactc aacagtacta

780

gcgaacaatg aagaaacggt tttgcttccg atgaacgaac cggtttacgg taccaaaaga

840

aagagtcaga tacaaactta tttggaacac aacgaaggtg ctgggttaca gcatttagca

900

ttgatgtcaa atgatatatt caagacattg agagagatga ggaagagaag tggtattggt

960

ggatttgagt ttatgccttc accaccacca acttattata gtaatttgaa gaaacgtgtt

1020

ggtgatgttt tgaatgatga acagattaag gagtgtgagg agcttgggat tctggttgat

1080

aaagatgatc agggtactct gcttcagatt ttcactaagc ctgttggaga taggccaacc

1140

atatttatag agataattca gagagttgga tgcatgctca aggatgatga agggaaggag

1200

taccaaaagg gagggtgtgg aggctttggt aaaggaaact tctcagagct tttcaaatcc

1260

attgaagaat atgagaagac tttggaaata aaaagaaccg catga

1305

<210> 83

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-CaHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 83

atgggcacaa ttgagacaca gaccggtttc aagctcgtgg gcttcaacaa tttcgttcgc

60

accaatccta agtccgatcg cttcaaggtg aagagattcc accatgttga gttctggtgc

120

cccgacgcca ctaacacagc taggcgcttc tcttggggcc ttggaatgcc aatcgttgcc

180

aagtccgatt tgtctaccgg caatcaaact cacgctagct acctcctgag atcaggagac

240

ctcaacttcc tgttcaccgc cgcttacagc ccatcaattt ccctttctgc cccacaccca

300

accgctagca tccctagctt ctcagccccc acttcattcg ccttctccgc ttctcatggt

360

ttgggcgtgc gcgccgttgc tattgaggtt gatgacgccg agttcgctta caccactagc

420

gtgaatcacg gtgccatccc ttcctctcca cctgtggttc ttgataacag agtgaagctt

480

gctgaggttc agttgtacgg cgatgtggtt ttgcgctacg tgtcctacaa tgaccccatt

540

gagacttcta accctaatcc caaccattgg ttcctcccag gcttcgagcc tgtggaggag

600

acaagctcaa accagtccat tgatttcggt atccaaagac tggaccacgc cgtgggcaat

660

gttcctgagc tctcctctgc tctgaactac gttaagcaat tcacaggctt ccatgagttc

720

gccgagttca cagctgagga tgtgggaacc agcgagtcag gtctcaatag cacagtgctg

780

gctaacaatg aggagaccgt tcttttgccc atgaacgagc cagtgtacgg aactaagagg

840

aagtcacaga ttcaaacata ccttgagcac aatgagggag ccggtttgca gcatcttgct

900

ttgatgtcca acgacatttt caagaccctt cgcgagatga gaaagaggtc tggaatcggc

960

ggattcgagt tcatgccatc cccaccacca acttactact caaatctcaa gaagagagtg

1020

ggcgatgttc tgaacgacga gcaaattaag gagtgcgagg agcttggaat cttggtggat

1080

aaggatgacc agggtactct cctgcaaatc ttcacaaagc cagttggcga caggcctact

1140

attttcatcg agattatcca gcgcgtgggc tgcatgctga aggatgacga gggaaaggag

1200

taccaaaagg gtggctgcgg aggtttcggc aagggaaact tctccgagct cttcaagtct

1260

attgaggagt acgagaagac cctggagatc aagaggactg cctga

1305

<210> 84

<211> 434

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-CaHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 84

Met Gly Thr Ile Glu Thr Gln Thr Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Asn

1 5 10 15

Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Lys Val Lys Arg

20 25 30

Phe His His Val Glu Phe Trp Cys Pro Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg

35 40 45

Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Val Ala Lys Ser Asp Leu

50 55 60

Ser Thr Gly Asn Gln Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly Asp

65 70 75 80

Leu Asn Phe Leu Phe Thr Ala Ala Tyr Ser Pro Ser Ile Ser Leu Ser

85 90 95

Ala Pro His Pro Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Pro Thr Ser

100 105 110

Phe Ala Phe Ser Ala Ser His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Ile

115 120 125

Glu Val Asp Asp Ala Glu Phe Ala Tyr Thr Thr Ser Val Asn His Gly

130 135 140

Ala Ile Pro Ser Ser Pro Pro Val Val Leu Asp Asn Arg Val Lys Leu

145 150 155 160

Ala Glu Val Gln Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr

165 170 175

Asn Asp Pro Ile Glu Thr Ser Asn Pro Asn Pro Asn His Trp Phe Leu

180 185 190

Pro Gly Phe Glu Pro Val Glu Glu Thr Ser Ser Asn Gln Ser Ile Asp

195 200 205

Phe Gly Ile Gln Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu

210 215 220

Ser Ser Ala Leu Asn Tyr Val Lys Gln Phe Thr Gly Phe His Glu Phe

225 230 235 240

Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn

245 250 255

Ser Thr Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Thr Val Leu Leu Pro Met Asn

260 265 270

Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu

275 280 285

Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Leu Gln His Leu Ala Leu Met Ser Asn

290 295 300

Asp Ile Phe Lys Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Ile Gly

305 310 315 320

Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Ser Asn Leu

325 330 335

Lys Lys Arg Val Gly Asp Val Leu Asn Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys

340 345 350

Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Lys Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu

355 360 365

Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu

370 375 380

Ile Ile Gln Arg Val Gly Cys Met Leu Lys Asp Asp Glu Gly Lys Glu

385 390 395 400

Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu

405 410 415

Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ile Lys Arg

420 425 430

Thr Ala

<210> 85

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-CaHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 85

atgggcacca tagaaaccca aaccgggttt aaattagttg ggttcaacaa cttcgtccga

60

accaacccaa aatcagaccg gttcaaagtg aaacgtttcc accacgtcga attttggtgc

120

cccgacgcaa ccaacaccgc acgccgcttc tcatggggac tcggaatgcc tatcgtagct

180

aaatccgacc tctctaccgg aaatcaaact cacgcttcct atctcctccg ctccggcgac

240

ctcaatttcc tcttcaccgc cgcttattcc ccatcaattt ctctttctgc tcctcatcca

300

accgcctcaa ttccatcttt ctccgcaccc acctccttcg ccttctccgc ctcccacggc

360

cttggcgtcc gcgctgtcgc aatcgaagtc gacgacgccg aattcgccta cacaacaagc

420

gtaaaccacg gcgcgatccc gtcgtctcct cccgtcgtcc tcgacaaccg cgtcaaactc

480

gctgaagttc aactctacgg cgacgtcgtt ttgcgttatg tcagttacaa cgatccgatc

540

gaaacctcaa accctaaccc taaccactgg ttcctccctg gcttcgaacc agtagaagaa

600

acatcctcta accaatcaat cgacttcgga atccaacgac tagaccacgc cgtcggaaac

660

gtaccggaac tttcatcagc actgaattac gtgaaacaat tcactggttt tcacgaattc

720

gccgaattca cagcggaaga cgttggaacg agtgagagtg ggttgaactc aacagtacta

780

gcgaacaatg aagaaacggt tttgcttccg atgaacgaac cggtttacgg taccaaaaga

840

aagagtcaga tacaaactta tttggaacac aacgaaggtg ctgggttaca gcatttagca

900

ttgatgtcaa atgatatatt caagacattg agagagatga ggaagagaag tggtattggt

960

ggatttgagt ttatgccttc accaccacca acttattata gtaatttgaa gaaacgtgtt

1020

ggtgatgttt tgaatgatga acagattaag gagtgtgagg agcttgggat tctggttgat

1080

aaagatgatc agggtactct gcttcagatt gctactaagc ctgttggaga taggccaacc

1140

atatttatag agataattca gagagttgga tgcatgctca aggatgatga agggaaggag

1200

taccaaaagg gagggtgtgg aggctttggt aaaggaaact tctcagagct tttcaaatcc

1260

attgaagaat atgagaagac tttggaaata aaaagaaccg catga

1305

<210> 86

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-CaHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 86

atgggcacaa ttgagacaca gaccggtttc aagctcgtgg gcttcaacaa tttcgttcgc

60

accaatccta agtccgatcg cttcaaggtg aagagattcc accatgttga gttctggtgc

120

cccgacgcca ctaacacagc taggcgcttc tcttggggcc ttggaatgcc aatcgttgcc

180

aagtccgatt tgtctaccgg caatcaaact cacgctagct acctcctgag atcaggagac

240

ctcaacttcc tgttcaccgc cgcttacagc ccatcaattt ccctttctgc cccacaccca

300

accgctagca tccctagctt ctcagccccc acttcattcg ccttctccgc ttctcatggt

360

ttgggcgtgc gcgccgttgc tattgaggtt gatgacgccg agttcgctta caccactagc

420

gtgaatcacg gtgccatccc ttcctctcca cctgtggttc ttgataacag agtgaagctt

480

gctgaggttc agttgtacgg cgatgtggtt ttgcgctacg tgtcctacaa tgaccccatt

540

gagacttcta accctaatcc caaccattgg ttcctcccag gcttcgagcc tgtggaggag

600

acaagctcaa accagtccat tgatttcggt atccaaagac tggaccacgc cgtgggcaat

660

gttcctgagc tctcctctgc tctgaactac gttaagcaat tcacaggctt ccatgagttc

720

gccgagttca cagctgagga tgtgggaacc agcgagtcag gtctcaatag cacagtgctg

780

gctaacaatg aggagaccgt tcttttgccc atgaacgagc cagtgtacgg aactaagagg

840

aagtcacaga ttcaaacata ccttgagcac aatgagggag ccggtttgca gcatcttgct

900

ttgatgtcca acgacatttt caagaccctt cgcgagatga gaaagaggtc tggaatcggc

960

ggattcgagt tcatgccatc cccaccacca acttactact caaatctcaa gaagagagtg

1020

ggcgatgttc tgaacgacga gcaaattaag gagtgcgagg agcttggaat cttggtggat

1080

aaggatgacc agggtactct cctgcaaatc gctacaaagc cagttggcga caggcctact

1140

attttcatcg agattatcca gcgcgtgggc tgcatgctga aggatgacga gggaaaggag

1200

taccaaaagg gtggctgcgg aggtttcggc aagggaaact tctccgagct cttcaagtct

1260

attgaggagt acgagaagac cctggagatc aagaggactg cctga

1305

<210> 87

<211> 440

<212> ПРТ

<213> BnHPPD Аминокислотная последовательность (Brassica napus)

<400> 87

Met Gly His Glu Asn Ala Ala Val Cys Glu Thr Gln Gln His Asp Asp

1 5 10 15

Ala Ala Ser Pro Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Ser Lys Phe Val Arg

20 25 30

Lys Asn Pro Lys Ser Asp Lys Phe Lys Val Lys Arg Phe His His Ile

35 40 45

Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Val Ser Arg Arg Phe Ser Trp

50 55 60

Gly Leu Gly Met Arg Phe Ser Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn

65 70 75 80

Met Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Thr Ser Gly Asp Leu Arg Phe Leu

85 90 95

Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Leu Ser Ala Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Ser Ala Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Asp His Ala Ser Cys Arg Ser

115 120 125

Phe Phe Ser Ser His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Ile Glu Val

130 135 140

Glu Asp Ala Glu Ser Ala Phe Ser Ile Ser Val Ala Asn Gly Ala Val

145 150 155 160

Pro Ser Ser Pro Pro Asn Val Leu Asn Gly Ala Val Thr Ile Ala Glu

165 170 175

Val Lys Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Tyr Asn

180 185 190

Gly Thr Val Ser Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ser Val Asp Asp Thr Ser

195 200 205

Ser Phe Pro Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly

210 215 220

Asn Val Pro Glu Leu Gly Pro Ala Leu Thr Tyr Leu Ala Gly Phe Thr

225 230 235 240

Gly Phe His Gln Phe Ala Glu Phe Thr Ala Asp Asp Val Gly Thr Ala

245 250 255

Glu Ser Gly Leu Asn Ser Ala Val Leu Ala Asn Asn Asp Glu Met Val

260 265 270

Leu Leu Pro Ile Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln

275 280 285

Ile Gln Thr Phe Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Leu Gln His Leu

290 295 300

Ala Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys

305 310 315 320

Arg Ser Gly Val Gly Gly Phe Asp Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr

325 330 335

Tyr Tyr Lys Asn Leu Lys Lys Arg Val Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu

340 345 350

Gln Ile Glu Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp

355 360 365

Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Leu Gly Asp Arg Pro

370 375 380

Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Val Gly Cys Met Lys Arg Asp

385 390 395 400

Glu Glu Gly Lys Val Tyr Gln Ser Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys

405 410 415

Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr

420 425 430

Leu Glu Ala Lys Gln Leu Val Gly

435 440

<210> 88

<211> 1323

<212> ДНК

<213> BnHPPD Аминокислотная последовательность (Brassica napus)

<400> 88

atggggcacg aaaacgccgc cgtttgcgaa actcagcagc acgacgacgc tgcgtcgcct

60

ggattcaagc tcgtcggatt ctccaagttc gtgaggaaga atccaaagtc cgacaagttc

120

aaggtaaagc gcttccacca catcgagttc tggtgcgggg acgccaccaa cgtctcccgc

180

cgcttctcgt ggggactagg catgcgattc tccgccaaat ccgatctctc caccggaaac

240

atggttcacg cctcctacct actcacctcc ggcgacctcc gattcctctt caccgctccc

300

tactctccct ctctctccgc cggcgaagct caaccgtccg ctacagcctc aatcccatcg

360

ttcgatcacg cttcttgccg ctccttcttc tcttcgcacg gactcggcgt gagagccgta

420

gcgatcgaag tcgaagacgc tgagtcagca ttctcaatca gcgtagcaaa cggcgccgtt

480

ccttcctccc ctcctaacgt cctcaacgga gccgttacga tcgcggaagt taaactatac

540

ggagacgtcg tcctccgtta cgttagttat tataacggaa ccgttagttt cctccccgga

600

tttgaatctg ttgacgatac gtcgtcgttt ccgctagatt acggtatacg ccgtctcgac

660

cacgcggtgg gaaacgtccc cgagctcggc ccagctttaa cttacctcgc ggggttcacc

720

ggcttccacc agttcgcgga gttcactgca gacgacgtgg gaacagccga gagcggattg

780

aactcggctg tgctagccaa caacgacgag atggttctgt tgccgataaa cgagccggtt

840

cacgggacga agaggaagag ccagatccag acgtttcttg agcacaacga aggagccggg

900

ctgcagcatt tggctctgat gagcgaagat atattcagga cgctgaggga gatgaggaag

960

aggagcggcg ttggagggtt cgacttcatg ccttctcctc cgcctactta ttacaagaat

1020

ctcaagaaaa gggttggaga tgtgcttagt gaggagcaga ttgaggagtg tgaggagttg

1080

gggattcttg tggatagaga tgatcagggg acgttgcttc agatctttac gaaaccactt

1140

ggtgacaggc cgacgatatt tatagagata atacagagag tgggatgcat gaagagagat

1200

gaggaaggga aggtttacca gagtggagga tgtggtgggt ttggtaaagg taacttctct

1260

gagctcttta agtctattga agagtatgag aagacacttg aagccaaaca gcttgtgggt

1320

tga

1323

<210> 89

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BnHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 89

atgggccacg agaatgccgc tgtgtgcgag acccagcaac atgatgacgc cgcttctccc

60

ggattcaagc tcgttggttt cagcaagttc gtgaggaaga acccaaagtc tgataagttc

120

aaggtgaagc gcttccacca tattgagttc tggtgcggag acgccaccaa tgttagcagg

180

cgcttctcat ggggccttgg aatgcgcttc tcagccaagt ccgatttgtc tactggcaac

240

atggtgcacg ctagctacct cctgacatca ggagacctca gattcctgtt caccgctcca

300

tacagcccat cactttctgc tggagaggct cagccttctg ctaccgctag catcccctca

360

ttcgatcacg cttcctgccg ctctttcttc tcctctcatg gtctgggcgt gagagccgtt

420

gctattgagg ttgaggacgc cgagtctgct ttctctatca gcgtggccaa cggtgctgtt

480

cctagctcac cacctaacgt gcttaacggc gccgttacta ttgctgaggt gaagctttac

540

ggcgatgtgg ttttgcgcta cgtgtcctac tacaacggca ctgtgtcatt cttgccaggt

600

ttcgagtccg tggatgacac atcctctttc cctctcgatt acggcatcag aaggctggac

660

cacgccgtgg gtaacgttcc tgagcttggc cccgccctta cctacttggc tggtttcact

720

ggcttccatc aattcgccga gttcacagct gatgacgttg gcaccgctga gtccggactt

780

aactctgccg ttttggctaa caatgacgag atggtgcttt tgccaattaa tgagcctgtt

840

catggcacca agaggaagag ccagatccaa actttccttg agcacaatga gggagccggt

900

ttgcagcatc ttgctttgat gtcagaggat attttcagga cactccgcga gatgcgcaag

960

agatccggtg tgggcggatt cgacttcatg ccatctcccc cacctaccta ctacaagaac

1020

ctcaagaagc gcgtgggcga tgttctgagc gaggagcaaa ttgaggagtg cgaggagctc

1080

ggtatcctgg ttgatagaga tgaccagggc actctcctgc aaattttcac aaagcccctc

1140

ggcgacaggc caactatttt catcgagatt atccagagag tgggctgcat gaagagggac

1200

gaggagggaa aggtttacca atccggtggc tgcggaggtt tcggcaaggg aaatttctcc

1260

gagctgttca agtctatcga ggagtacgag aagacactcg aggctaagca gctggtgggc

1320

tga

1323

<210> 90

<211> 440

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-BnHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 90

Met Gly His Glu Asn Ala Ala Val Cys Glu Thr Gln Gln His Asp Asp

1 5 10 15

Ala Ala Ser Pro Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Ser Lys Phe Val Arg

20 25 30

Lys Asn Pro Lys Ser Asp Lys Phe Lys Val Lys Arg Phe His His Ile

35 40 45

Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Val Ser Arg Arg Phe Ser Trp

50 55 60

Gly Leu Gly Met Arg Phe Ser Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn

65 70 75 80

Met Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Thr Ser Gly Asp Leu Arg Phe Leu

85 90 95

Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Leu Ser Ala Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Ser Ala Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Asp His Ala Ser Cys Arg Ser

115 120 125

Phe Phe Ser Ser His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Ile Glu Val

130 135 140

Glu Asp Ala Glu Ser Ala Phe Ser Ile Ser Val Ala Asn Gly Ala Val

145 150 155 160

Pro Ser Ser Pro Pro Asn Val Leu Asn Gly Ala Val Thr Ile Ala Glu

165 170 175

Val Lys Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Tyr Asn

180 185 190

Gly Thr Val Ser Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ser Val Asp Asp Thr Ser

195 200 205

Ser Phe Pro Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly

210 215 220

Asn Val Pro Glu Leu Gly Pro Ala Leu Thr Tyr Leu Ala Gly Phe Thr

225 230 235 240

Gly Phe His Gln Phe Ala Glu Phe Thr Ala Asp Asp Val Gly Thr Ala

245 250 255

Glu Ser Gly Leu Asn Ser Ala Val Leu Ala Asn Asn Asp Glu Met Val

260 265 270

Leu Leu Pro Ile Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln

275 280 285

Ile Gln Thr Phe Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Leu Gln His Leu

290 295 300

Ala Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys

305 310 315 320

Arg Ser Gly Val Gly Gly Phe Asp Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr

325 330 335

Tyr Tyr Lys Asn Leu Lys Lys Arg Val Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu

340 345 350

Gln Ile Glu Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp

355 360 365

Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Leu Gly Asp Arg Pro

370 375 380

Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Val Gly Cys Met Lys Arg Asp

385 390 395 400

Glu Glu Gly Lys Val Tyr Gln Ser Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys

405 410 415

Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr

420 425 430

Leu Glu Ala Lys Gln Leu Val Gly

435 440

<210> 91

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BnHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 91

atggggcacg aaaacgccgc cgtttgcgaa actcagcagc acgacgacgc tgcgtcgcct

60

ggattcaagc tcgtcggatt ctccaagttc gtgaggaaga atccaaagtc cgacaagttc

120

aaggtaaagc gcttccacca catcgagttc tggtgcgggg acgccaccaa cgtctcccgc

180

cgcttctcgt ggggactagg catgcgattc tccgccaaat ccgatctctc caccggaaac

240

atggttcacg cctcctacct actcacctcc ggcgacctcc gattcctctt caccgctccc

300

tactctccct ctctctccgc cggcgaagct caaccgtccg ctacagcctc aatcccatcg

360

ttcgatcacg cttcttgccg ctccttcttc tcttcgcacg gactcggcgt gagagccgta

420

gcgatcgaag tcgaagacgc tgagtcagca ttctcaatca gcgtagcaaa cggcgccgtt

480

ccttcctccc ctcctaacgt cctcaacgga gccgttacga tcgcggaagt taaactatac

540

ggagacgtcg tcctccgtta cgttagttat tataacggaa ccgttagttt cctccccgga

600

tttgaatctg ttgacgatac gtcgtcgttt ccgctagatt acggtatacg ccgtctcgac

660

cacgcggtgg gaaacgtccc cgagctcggc ccagctttaa cttacctcgc ggggttcacc

720

ggcttccacc agttcgcgga gttcactgca gacgacgtgg gaacagccga gagcggattg

780

aactcggctg tgctagccaa caacgacgag atggttctgt tgccgataaa cgagccggtt

840

cacgggacga agaggaagag ccagatccag acgtttcttg agcacaacga aggagccggg

900

ctgcagcatt tggctctgat gagcgaagat atattcagga cgctgaggga gatgaggaag

960

aggagcggcg ttggagggtt cgacttcatg ccttctcctc cgcctactta ttacaagaat

1020

ctcaagaaaa gggttggaga tgtgcttagt gaggagcaga ttgaggagtg tgaggagttg

1080

gggattcttg tggatagaga tgatcagggg acgttgcttc agatcgctac gaaaccactt

1140

ggtgacaggc cgacgatatt tatagagata atacagagag tgggatgcat gaagagagat

1200

gaggaaggga aggtttacca gagtggagga tgtggtgggt ttggtaaagg taacttctct

1260

gagctcttta agtctattga agagtatgag aagacacttg aagccaaaca gcttgtgggt

1320

tga

1323

<210> 92

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BnHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 92

atgggccacg agaatgccgc tgtgtgcgag acccagcaac atgatgacgc cgcttctccc

60

ggattcaagc tcgttggttt cagcaagttc gtgaggaaga acccaaagtc tgataagttc

120

aaggtgaagc gcttccacca tattgagttc tggtgcggag acgccaccaa tgttagcagg

180

cgcttctcat ggggccttgg aatgcgcttc tcagccaagt ccgatttgtc tactggcaac

240

atggtgcacg ctagctacct cctgacatca ggagacctca gattcctgtt caccgctcca

300

tacagcccat cactttctgc tggagaggct cagccttctg ctaccgctag catcccctca

360

ttcgatcacg cttcctgccg ctctttcttc tcctctcatg gtctgggcgt gagagccgtt

420

gctattgagg ttgaggacgc cgagtctgct ttctctatca gcgtggccaa cggtgctgtt

480

cctagctcac cacctaacgt gcttaacggc gccgttacta ttgctgaggt gaagctttac

540

ggcgatgtgg ttttgcgcta cgtgtcctac tacaacggca ctgtgtcatt cttgccaggt

600

ttcgagtccg tggatgacac atcctctttc cctctcgatt acggcatcag aaggctggac

660

cacgccgtgg gtaacgttcc tgagcttggc cccgccctta cctacttggc tggtttcact

720

ggcttccatc aattcgccga gttcacagct gatgacgttg gcaccgctga gtccggactt

780

aactctgccg ttttggctaa caatgacgag atggtgcttt tgccaattaa tgagcctgtt

840

catggcacca agaggaagag ccagatccaa actttccttg agcacaatga gggagccggt

900

ttgcagcatc ttgctttgat gtcagaggat attttcagga cactccgcga gatgcgcaag

960

agatccggtg tgggcggatt cgacttcatg ccatctcccc cacctaccta ctacaagaac

1020

ctcaagaagc gcgtgggcga tgttctgagc gaggagcaaa ttgaggagtg cgaggagctc

1080

ggtatcctgg ttgatagaga tgaccagggc actctcctgc aaattgctac aaagcccctc

1140

ggcgacaggc caactatttt catcgagatt atccagagag tgggctgcat gaagagggac

1200

gaggagggaa aggtttacca atccggtggc tgcggaggtt tcggcaaggg aaatttctcc

1260

gagctgttca agtctatcga ggagtacgag aagacactcg aggctaagca gctggtgggc

1320

tga

1323

<210> 93

<211> 451

<212> ПРТ

<213> HaHPPD Аминокислотная последовательность (Helianthus annuus)

<400> 93

Met Gly Thr Glu Ala Thr Val Ala Ala Val Val Ala Gly Asp Glu Ser

1 5 10 15

Asp His Pro Thr Ser Ala Phe Lys Leu Val Gly Phe Lys Asn Phe Ile

20 25 30

Arg Thr Asn Pro Met Ser Asp Lys Phe Thr Val Lys Asn Phe His His

35 40 45

Ile Glu Phe Trp Cys Ser Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg Arg Phe Ser

50 55 60

Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Ile Phe Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly

65 70 75 80

Asn Ser Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly His Leu Asn Phe

85 90 95

Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile Ser Pro Thr Thr Thr Thr

100 105 110

Ala Ser Ile Pro Thr Phe Ser His Ser Ala Ser Arg His Phe Thr Ala

115 120 125

Thr His Gly Leu Ala Val Arg Ala Ile Ala Val Glu Val Glu Asp Ala

130 135 140

Glu Thr Ala Phe Ala Val Ser Val Ala Asn Gly Ala Lys Pro Ser Ser

145 150 155 160

Pro Pro Val Thr Leu Gly His Asn Asp Val Val Leu Ser Glu Val Lys

165 170 175

Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Lys Asn Asn Thr

180 185 190

Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asp Asn Asp Asn Tyr Ile Phe Leu Pro Gly

195 200 205

Phe Glu Ala Met Asp Lys Thr Ser Ser Phe Gln Glu Leu Asp Tyr Gly

210 215 220

Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro

225 230 235 240

Ala Val Asp Tyr Val Lys Ser Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu

245 250 255

Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val

260 265 270

Val Leu Ala Cys Asn Ser Glu Met Val Leu Ile Pro Met Asn Glu Pro

275 280 285

Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His

290 295 300

Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Ala Ser Glu Asp Ile

305 310 315 320

Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Val Gly Gly Phe

325 330 335

Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Arg Asn Leu Lys Ser

340 345 350

Arg Ala Gly Asp Val Leu Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys Glu Glu

355 360 365

Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile

370 375 380

Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile

385 390 395 400

Gln Arg Val Gly Cys Met Val Lys Asp Asp Glu Gly Lys Val Gln Gln

405 410 415

Lys Ala Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe

420 425 430

Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ala Arg Ser Thr Thr

435 440 445

Ala Ala Ala

450

<210> 94

<211> 1356

<212> ДНК

<213> HaHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Helianthus annuus)

<400> 94

atgggaacgg aagctaccgt cgccgccgtc gtcgccggag atgaatccga tcaccccacc

60

tccgccttca agcttgtagg cttcaaaaac ttcatccgta ccaaccccat gtcggacaaa

120

ttcaccgtca aaaacttcca ccacatcgag ttctggtgct ccgacgccac caacaccgcc

180

cgccgcttct cctggggcct cggcatgccc atcatcttca aatccgatct ctccaccggc

240

aactccaccc acgcctccta tctcctccgc tccggccacc tcaacttcct cttcaccgcc

300

ccttattccc cctccatctc ccccaccacc accaccgctt ccatccccac cttctcccac

360

tccgcctccc gccacttcac cgctacccac ggtctcgccg tccgcgccat cgccgttgaa

420

gtcgaagacg ccgaaaccgc cttcgccgtt agcgtcgcta acggcgccaa accctcgtct

480

cccccagtca ccctcggtca caacgacgtc gtgttgtcag aagttaaatt atacggcgac

540

gtcgttttgc gttatgttag ttacaaaaat aatactaata acaataataa caatgataat

600

gataattata tatttttgcc tggatttgaa gctatggaca aaacgtcgtc gtttcaggag

660

ctagactacg gcatccgccg gctcgatcac gcggtgggga acgtgccgga gctagctcca

720

gcggtggact atgtgaaatc tttcaccggg tttcacgagt tcgctgagtt cactgctgag

780

gacgttggaa cgagtgaaag cgggctcaac tcggtggttt tagcgtgtaa cagtgagatg

840

gttttgatac cgatgaacga gccagtgtac gggacgaaga ggaagagtca gatacagacg

900

tatttggagc ataatgaagg ggctggggtg cagcatttgg cgttggctag tgaggatata

960

tttaggactt tgagagagat gaggaaacgg agtggggttg gggggtttga gtttatgccg

1020

tctccgccac ctacttatta taggaatttg aagagtcgag cgggcgatgt gttgtcggat

1080

gagcagatta aggagtgtga agagttgggg atattggtgg atagagatga tcaggggact

1140

ttgcttcaga tttttactaa gcctgtgggt gataggccga cgatattcat agagataata

1200

caaagagtag ggtgcatggt aaaggatgat gaaggaaagg tgcagcagaa ggcagggtgt

1260

ggagggtttg gcaaagggaa cttctcggag ctttttaaat ctattgagga atatgagaag

1320

acacttgaag caagaagcac cactgctgct gcataa

1356

<210> 95

<211> 1356

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-HaHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 95

atgggcactg aggctacagt ggccgctgtg gttgccggag atgagtccga ccatccaaca

60

tctgctttca agctggttgg cttcaagaac ttcattagaa ccaatcctat gtccgataag

120

ttcactgtga agaacttcca ccatatcgag ttctggtgct ccgacgctac caatactgcc

180

aggcgcttct cttggggact tggtatgcct attatcttca agtccgattt gtctaccgga

240

aacagcactc atgcttcata cctcctgagg tccggtcacc ttaatttctt gttcactgcc

300

ccctactccc catctattag ccctaccact acaaccgctt ctatccccac attctcacac

360

tccgcctcta ggcatttcac tgctactcat ggacttgccg ttcgcgctat tgctgtggag

420

gttgaggacg ccgagaccgc tttcgccgtg agcgttgcta acggtgccaa gccctcctct

480

ccacctgtga ctcttggcca caatgatgtg gttctttccg aggtgaagtt gtacggagac

540

gtggttttgc gctacgtgtc ctacaagaac aatactaaca ataacaataa caatgataac

600

gacaattaca ttttccttcc aggtttcgag gctatggata agacaagctc attccaggag

660

cttgattacg gtatcagaag gttggaccat gccgtgggca acgttcctga gttggctccc

720

gccgtggatt acgttaagtc attcactggc ttccacgagt tcgctgagtt cacagccgag

780

gacgttggaa ccagcgagtc aggtctcaac tccgtggttc tggcttgcaa ttctgagatg

840

gtgctcattc ctatgaacga gcctgtttac ggaacaaagc gcaagagcca gatccaaacc

900

tacctggagc ataatgaggg cgccggagtt caacacctcg ctctggcctc agaggacatc

960

ttcaggacac tccgcgagat gcgcaagaga agcggtgtgg gcggattcga gttcatgcca

1020

tcacccccac ctacctacta cagaaacctc aagagcaggg ctggcgatgt gctgtcagac

1080

gagcagatta aggagtgcga ggagctcgga atcctggttg atcgcgatga ccagggtact

1140

cttttgcaaa ttttcacaaa gcccgtgggc gaccgcccaa ccattttcat cgagattatc

1200

caaagagtgg gatgcatggt taaggatgac gagggcaagg tgcagcaaaa ggctggatgc

1260

ggtggcttcg gcaagggcaa tttcagcgag ctcttcaagt caatcgagga gtacgagaag

1320

actctggagg ccagatctac tacagccgct gcctga

1356

<210> 96

<211> 451

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-HaHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 96

Met Gly Thr Glu Ala Thr Val Ala Ala Val Val Ala Gly Asp Glu Ser

1 5 10 15

Asp His Pro Thr Ser Ala Phe Lys Leu Val Gly Phe Lys Asn Phe Ile

20 25 30

Arg Thr Asn Pro Met Ser Asp Lys Phe Thr Val Lys Asn Phe His His

35 40 45

Ile Glu Phe Trp Cys Ser Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg Arg Phe Ser

50 55 60

Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Ile Phe Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly

65 70 75 80

Asn Ser Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly His Leu Asn Phe

85 90 95

Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile Ser Pro Thr Thr Thr Thr

100 105 110

Ala Ser Ile Pro Thr Phe Ser His Ser Ala Ser Arg His Phe Thr Ala

115 120 125

Thr His Gly Leu Ala Val Arg Ala Ile Ala Val Glu Val Glu Asp Ala

130 135 140

Glu Thr Ala Phe Ala Val Ser Val Ala Asn Gly Ala Lys Pro Ser Ser

145 150 155 160

Pro Pro Val Thr Leu Gly His Asn Asp Val Val Leu Ser Glu Val Lys

165 170 175

Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Lys Asn Asn Thr

180 185 190

Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asp Asn Asp Asn Tyr Ile Phe Leu Pro Gly

195 200 205

Phe Glu Ala Met Asp Lys Thr Ser Ser Phe Gln Glu Leu Asp Tyr Gly

210 215 220

Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro

225 230 235 240

Ala Val Asp Tyr Val Lys Ser Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu

245 250 255

Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val

260 265 270

Val Leu Ala Cys Asn Ser Glu Met Val Leu Ile Pro Met Asn Glu Pro

275 280 285

Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His

290 295 300

Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Ala Ser Glu Asp Ile

305 310 315 320

Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Val Gly Gly Phe

325 330 335

Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Arg Asn Leu Lys Ser

340 345 350

Arg Ala Gly Asp Val Leu Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys Glu Glu

355 360 365

Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile

370 375 380

Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile

385 390 395 400

Gln Arg Val Gly Cys Met Val Lys Asp Asp Glu Gly Lys Val Gln Gln

405 410 415

Lys Ala Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe

420 425 430

Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ala Arg Ser Thr Thr

435 440 445

Ala Ala Ala

450

<210> 97

<211> 1356

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-HaHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 97

atgggaacgg aagctaccgt cgccgccgtc gtcgccggag atgaatccga tcaccccacc

60

tccgccttca agcttgtagg cttcaaaaac ttcatccgta ccaaccccat gtcggacaaa

120

ttcaccgtca aaaacttcca ccacatcgag ttctggtgct ccgacgccac caacaccgcc

180

cgccgcttct cctggggcct cggcatgccc atcatcttca aatccgatct ctccaccggc

240

aactccaccc acgcctccta tctcctccgc tccggccacc tcaacttcct cttcaccgcc

300

ccttattccc cctccatctc ccccaccacc accaccgctt ccatccccac cttctcccac

360

tccgcctccc gccacttcac cgctacccac ggtctcgccg tccgcgccat cgccgttgaa

420

gtcgaagacg ccgaaaccgc cttcgccgtt agcgtcgcta acggcgccaa accctcgtct

480

cccccagtca ccctcggtca caacgacgtc gtgttgtcag aagttaaatt atacggcgac

540

gtcgttttgc gttatgttag ttacaaaaat aatactaata acaataataa caatgataat

600

gataattata tatttttgcc tggatttgaa gctatggaca aaacgtcgtc gtttcaggag

660

ctagactacg gcatccgccg gctcgatcac gcggtgggga acgtgccgga gctagctcca

720

gcggtggact atgtgaaatc tttcaccggg tttcacgagt tcgctgagtt cactgctgag

780

gacgttggaa cgagtgaaag cgggctcaac tcggtggttt tagcgtgtaa cagtgagatg

840

gttttgatac cgatgaacga gccagtgtac gggacgaaga ggaagagtca gatacagacg

900

tatttggagc ataatgaagg ggctggggtg cagcatttgg cgttggctag tgaggatata

960

tttaggactt tgagagagat gaggaaacgg agtggggttg gggggtttga gtttatgccg

1020

tctccgccac ctacttatta taggaatttg aagagtcgag cgggcgatgt gttgtcggat

1080

gagcagatta aggagtgtga agagttgggg atattggtgg atagagatga tcaggggact

1140

ttgcttcaga ttgctactaa gcctgtgggt gataggccga cgatattcat agagataata

1200

caaagagtag ggtgcatggt aaaggatgat gaaggaaagg tgcagcagaa ggcagggtgt

1260

ggagggtttg gcaaagggaa cttctcggag ctttttaaat ctattgagga atatgagaag

1320

acacttgaag caagaagcac cactgctgct gcataa

1356

<210> 98

<211> 1356

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-HaHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 98

atgggcactg aggctacagt ggccgctgtg gttgccggag atgagtccga ccatccaaca

60

tctgctttca agctggttgg cttcaagaac ttcattagaa ccaatcctat gtccgataag

120

ttcactgtga agaacttcca ccatatcgag ttctggtgct ccgacgctac caatactgcc

180

aggcgcttct cttggggact tggtatgcct attatcttca agtccgattt gtctaccgga

240

aacagcactc atgcttcata cctcctgagg tccggtcacc ttaatttctt gttcactgcc

300

ccctactccc catctattag ccctaccact acaaccgctt ctatccccac attctcacac

360

tccgcctcta ggcatttcac tgctactcat ggacttgccg ttcgcgctat tgctgtggag

420

gttgaggacg ccgagaccgc tttcgccgtg agcgttgcta acggtgccaa gccctcctct

480

ccacctgtga ctcttggcca caatgatgtg gttctttccg aggtgaagtt gtacggagac

540

gtggttttgc gctacgtgtc ctacaagaac aatactaaca ataacaataa caatgataac

600

gacaattaca ttttccttcc aggtttcgag gctatggata agacaagctc attccaggag

660

cttgattacg gtatcagaag gttggaccat gccgtgggca acgttcctga gttggctccc

720

gccgtggatt acgttaagtc attcactggc ttccacgagt tcgctgagtt cacagccgag

780

gacgttggaa ccagcgagtc aggtctcaac tccgtggttc tggcttgcaa ttctgagatg

840

gtgctcattc ctatgaacga gcctgtttac ggaacaaagc gcaagagcca gatccaaacc

900

tacctggagc ataatgaggg cgccggagtt caacacctcg ctctggcctc agaggacatc

960

ttcaggacac tccgcgagat gcgcaagaga agcggtgtgg gcggattcga gttcatgcca

1020

tcacccccac ctacctacta cagaaacctc aagagcaggg ctggcgatgt gctgtcagac

1080

gagcagatta aggagtgcga ggagctcgga atcctggttg atcgcgatga ccagggtact

1140

cttttgcaaa ttgctacaaa gcccgtgggc gaccgcccaa ccattttcat cgagattatc

1200

caaagagtgg gatgcatggt taaggatgac gagggcaagg tgcagcaaaa ggctggatgc

1260

ggtggcttcg gcaagggcaa tttcagcgag ctcttcaagt caatcgagga gtacgagaag

1320

actctggagg ccagatctac tacagccgct gcctga

1356

<210> 99

<211> 435

<212> ПРТ

<213> MsHPPD Аминокислотная последовательность (Medicago sativa)

<400> 99

Met Ala Ile Glu Thr Glu Thr Gln Thr Gln Thr Gly Phe Lys Leu Val

1 5 10 15

Gly Phe Lys Asn Phe Val Arg Ala Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Lys

20 25 30

Val Lys Arg Phe His His Val Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr Asn

35 40 45

Thr Ala Arg Arg Phe Ser His Gly Leu Gly Met Pro Ile Val Ala Lys

50 55 60

Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Gln Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg

65 70 75 80

Ser Gly Asp Leu Asn Phe Leu Phe Ser Ala Ala Tyr Ser Pro Ser Ile

85 90 95

Ser Leu Ser Ser Pro Ser Ser Thr Ala Ala Ile Pro Thr Phe Ser Ala

100 105 110

Ser Asn Cys Phe Ser Phe Ser Ala Ser His Gly Leu Ala Val Arg Ala

115 120 125

Val Ala Val Glu Val Glu Asp Ala Glu Leu Ala Phe Thr Thr Ser Val

130 135 140

Asn Asn Gly Ala Ile Pro Ser Ser Pro Pro Val Ile Leu Glu Asn His

145 150 155 160

Val Lys Leu Ala Glu Val Arg Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr

165 170 175

Val Ser Tyr Asn Asp Pro Asn Pro Asn Gln Asn Pro Asn Leu Leu Phe

180 185 190

Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Asp Glu Ser Ser Asn Ser Ser Leu

195 200 205

Asp Phe Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu

210 215 220

Leu Ser Ser Ala Val Lys Tyr Val Lys Asp Phe Thr Gly Phe His Glu

225 230 235 240

Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu

245 250 255

Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Thr Val Leu Leu Pro Met

260 265 270

Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Glu Thr Tyr

275 280 285

Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Leu Gln His Leu Ala Leu Lys Ser

290 295 300

Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Val

305 310 315 320

Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Val Thr Tyr Tyr Arg Asn

325 330 335

Leu Lys Asn Arg Val Gly Asp Val Leu Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu

340 345 350

Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu

355 360 365

Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Ile Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile

370 375 380

Glu Ile Ile Gln Arg Val Gly Cys Met Leu Lys Asp Glu Glu Gly Lys

385 390 395 400

Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser

405 410 415

Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Thr Arg

420 425 430

Arg Thr Ala

435

<210> 100

<211> 1308

<212> ДНК

<213> MsHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Medicago sativa)

<400> 100

atggccatcg aaacagaaac tcaaacccaa accgggttca aactagttgg gttcaagaac

60

ttcgtccgag ccaatccaaa atcagaccgg ttcaaagtaa aacgcttcca ccatgttgag

120

ttctggtgca ccgacgcaac aaacaccgca cgccgtttct ctcacggact cggaatgccg

180

attgtcgcta aatcagacct ctccaccgga aatcaaactc acgcctccta tctcctccgc

240

tccggtgacc tcaacttcct cttctccgcc gcttattccc cttccatttc tctctcctca

300

ccttcctcaa ctgccgcaat ccccactttc tccgcatcca attgtttctc cttctccgct

360

tcccacggcc tcgccgtccg tgctgttgct gttgaagtcg aagacgccga actggctttc

420

accaccagcg taaacaacgg tgccattcca tcgtctcctc cagttatcct cgaaaaccac

480

gtcaaactgg ccgaagttcg tctctacggc gacgttgttc tacgttacgt cagttacaac

540

gacccgaacc caaaccagaa tccgaacctg ctcttcctcc ctggttttga acgtgtatca

600

gatgaatcat ctaattcatc gttagatttc ggaatccggc gactagacca tgccgttgga

660

aatgtaccgg agctttcatc cgctgtgaaa tacgtgaaag atttcaccgg atttcatgaa

720

tttgctgagt ttacagcgga agacgttgga acgagtgaga gtggattaaa ctcagtggtg

780

ttagctaaca atgaagaaac agtgttgctt ccgatgaatg aaccggttta tggaacaaag

840

aggaagagtc aaatagaaac gtatttggaa cataatgaag gtgctgggtt acaacatttg

900

gcattgaagt ctgaggatat atttaggaca ttgagggaaa tgagaaagag aagtggtgtt

960

ggtgggtttg agtttatgcc ttctcctccg gtcacttatt atcgtaattt gaagaatcgc

1020

gttggcgatg ttttgagtga tgaacagatt aaggagtgtg aagagcttgg gattttggtt

1080

gatagagatg atcagggtac tctgcttcag atttttacca agcctattgg agataggcca

1140

accatattta tagagataat tcagagagtt ggatgcatgc tcaaggacga agaagggaag

1200

gagtatcaaa agggaggatg tgggggcttt ggaaaaggaa acttctcgga gcttttcaaa

1260

tccattgaag agtatgagaa gactttggaa actagaagaa ctgcatga

1308

<210> 101

<211> 1308

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-MsHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 101

atggccattg agacagagac ccagactcaa acaggcttca agcttgttgg attcaagaac

60

ttcgtgcgcg ctaatccaaa gagcgatcgc ttcaaggtta agagattcca ccatgtggag

120

ttctggtgca ctgacgccac caacactgct aggcgcttct cacacggcct cggaatgcct

180

atcgttgcca agagcgatct gtcaacagga aaccagaccc atgcttccta cctcctgagg

240

tctggtgacc ttaatttctt gttctccgcc gcttactccc catctattag cttgtcctct

300

cctagctcaa ctgccgctat ccccacattc tcagcctcca attgcttctc tttcagcgct

360

tcacatggac ttgctgtgcg cgctgtggct gttgaggtgg aggatgccga gctggctttc

420

accacttctg ttaacaatgg cgccattccc tcctctccac ctgtgatcct tgagaaccat

480

gttaagcttg ctgaggtgag attgtacgga gatgtggttt tgcgctacgt gtcctacaat

540

gaccctaacc ccaatcaaaa ccctaatctt ttgttcctcc ccggattcga gagggtgtct

600

gacgagagct caaactcctc tcttgatttc ggcattagaa ggttggacca cgccgttgga

660

aatgtgccag agctgagctc agctgtgaag tatgtgaagg atttcacagg attccatgag

720

ttcgccgagt tcaccgctga ggacgtgggt acttccgagt ctggcctcaa cagcgtggtt

780

ctggctaaca atgaggagac cgttctcctg cctatgaacg agcctgtgta cggtactaag

840

agaaagagcc agattgagac atacctcgag cacaacgagg gtgccggcct gcaacatctc

900

gctctgaagt cagaggatat cttcagaacc ctcagggaga tgaggaagcg ctccggtgtt

960

ggcggattcg agttcatgcc ttctccccca gtgacttact acaggaacct taagaatcgc

1020

gttggcgatg tgttgtccga cgagcagatt aaggagtgcg aggagctcgg tatcctggtt

1080

gatagggatg accagggcac acttttgcaa attttcacca agcccatcgg cgaccgccca

1140

accattttca tcgagattat ccagagagtg ggatgcatgc tgaaggacga ggagggcaag

1200

gagtaccaaa agggtggctg cggaggtttc ggaaagggta acttcagcga gcttttcaag

1260

tcaatcgagg agtacgagaa gacattggag acccgcagaa ctgcctga

1308

<210> 102

<211> 435

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-MsHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 102

Met Ala Ile Glu Thr Glu Thr Gln Thr Gln Thr Gly Phe Lys Leu Val

1 5 10 15

Gly Phe Lys Asn Phe Val Arg Ala Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Lys

20 25 30

Val Lys Arg Phe His His Val Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr Asn

35 40 45

Thr Ala Arg Arg Phe Ser His Gly Leu Gly Met Pro Ile Val Ala Lys

50 55 60

Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Gln Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg

65 70 75 80

Ser Gly Asp Leu Asn Phe Leu Phe Ser Ala Ala Tyr Ser Pro Ser Ile

85 90 95

Ser Leu Ser Ser Pro Ser Ser Thr Ala Ala Ile Pro Thr Phe Ser Ala

100 105 110

Ser Asn Cys Phe Ser Phe Ser Ala Ser His Gly Leu Ala Val Arg Ala

115 120 125

Val Ala Val Glu Val Glu Asp Ala Glu Leu Ala Phe Thr Thr Ser Val

130 135 140

Asn Asn Gly Ala Ile Pro Ser Ser Pro Pro Val Ile Leu Glu Asn His

145 150 155 160

Val Lys Leu Ala Glu Val Arg Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr

165 170 175

Val Ser Tyr Asn Asp Pro Asn Pro Asn Gln Asn Pro Asn Leu Leu Phe

180 185 190

Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Asp Glu Ser Ser Asn Ser Ser Leu

195 200 205

Asp Phe Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu

210 215 220

Leu Ser Ser Ala Val Lys Tyr Val Lys Asp Phe Thr Gly Phe His Glu

225 230 235 240

Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu

245 250 255

Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Thr Val Leu Leu Pro Met

260 265 270

Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Glu Thr Tyr

275 280 285

Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Leu Gln His Leu Ala Leu Lys Ser

290 295 300

Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Val

305 310 315 320

Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Val Thr Tyr Tyr Arg Asn

325 330 335

Leu Lys Asn Arg Val Gly Asp Val Leu Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu

340 345 350

Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu

355 360 365

Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Ile Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile

370 375 380

Glu Ile Ile Gln Arg Val Gly Cys Met Leu Lys Asp Glu Glu Gly Lys

385 390 395 400

Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser

405 410 415

Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Thr Arg

420 425 430

Arg Thr Ala

435

<210> 103

<211> 1308

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-MsHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 103

atggccatcg aaacagaaac tcaaacccaa accgggttca aactagttgg gttcaagaac

60

ttcgtccgag ccaatccaaa atcagaccgg ttcaaagtaa aacgcttcca ccatgttgag

120

ttctggtgca ccgacgcaac aaacaccgca cgccgtttct ctcacggact cggaatgccg

180

attgtcgcta aatcagacct ctccaccgga aatcaaactc acgcctccta tctcctccgc

240

tccggtgacc tcaacttcct cttctccgcc gcttattccc cttccatttc tctctcctca

300

ccttcctcaa ctgccgcaat ccccactttc tccgcatcca attgtttctc cttctccgct

360

tcccacggcc tcgccgtccg tgctgttgct gttgaagtcg aagacgccga actggctttc

420

accaccagcg taaacaacgg tgccattcca tcgtctcctc cagttatcct cgaaaaccac

480

gtcaaactgg ccgaagttcg tctctacggc gacgttgttc tacgttacgt cagttacaac

540

gacccgaacc caaaccagaa tccgaacctg ctcttcctcc ctggttttga acgtgtatca

600

gatgaatcat ctaattcatc gttagatttc ggaatccggc gactagacca tgccgttgga

660

aatgtaccgg agctttcatc cgctgtgaaa tacgtgaaag atttcaccgg atttcatgaa

720

tttgctgagt ttacagcgga agacgttgga acgagtgaga gtggattaaa ctcagtggtg

780

ttagctaaca atgaagaaac agtgttgctt ccgatgaatg aaccggttta tggaacaaag

840

aggaagagtc aaatagaaac gtatttggaa cataatgaag gtgctgggtt acaacatttg

900

gcattgaagt ctgaggatat atttaggaca ttgagggaaa tgagaaagag aagtggtgtt

960

ggtgggtttg agtttatgcc ttctcctccg gtcacttatt atcgtaattt gaagaatcgc

1020

gttggcgatg ttttgagtga tgaacagatt aaggagtgtg aagagcttgg gattttggtt

1080

gatagagatg atcagggtac tctgcttcag attgctacca agcctattgg agataggcca

1140

accatattta tagagataat tcagagagtt ggatgcatgc tcaaggacga agaagggaag

1200

gagtatcaaa agggaggatg tgggggcttt ggaaaaggaa acttctcgga gcttttcaaa

1260

tccattgaag agtatgagaa gactttggaa actagaagaa ctgcatga

1308

<210> 104

<211> 1308

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-MsHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 104

atggccattg agacagagac ccagactcaa acaggcttca agcttgttgg attcaagaac

60

ttcgtgcgcg ctaatccaaa gagcgatcgc ttcaaggtta agagattcca ccatgtggag

120

ttctggtgca ctgacgccac caacactgct aggcgcttct cacacggcct cggaatgcct

180

atcgttgcca agagcgatct gtcaacagga aaccagaccc atgcttccta cctcctgagg

240

tctggtgacc ttaatttctt gttctccgcc gcttactccc catctattag cttgtcctct

300

cctagctcaa ctgccgctat ccccacattc tcagcctcca attgcttctc tttcagcgct

360

tcacatggac ttgctgtgcg cgctgtggct gttgaggtgg aggatgccga gctggctttc

420

accacttctg ttaacaatgg cgccattccc tcctctccac ctgtgatcct tgagaaccat

480

gttaagcttg ctgaggtgag attgtacgga gatgtggttt tgcgctacgt gtcctacaat

540

gaccctaacc ccaatcaaaa ccctaatctt ttgttcctcc ccggattcga gagggtgtct

600

gacgagagct caaactcctc tcttgatttc ggcattagaa ggttggacca cgccgttgga

660

aatgtgccag agctgagctc agctgtgaag tatgtgaagg atttcacagg attccatgag

720

ttcgccgagt tcaccgctga ggacgtgggt acttccgagt ctggcctcaa cagcgtggtt

780

ctggctaaca atgaggagac cgttctcctg cctatgaacg agcctgtgta cggtactaag

840

agaaagagcc agattgagac atacctcgag cacaacgagg gtgccggcct gcaacatctc

900

gctctgaagt cagaggatat cttcagaacc ctcagggaga tgaggaagcg ctccggtgtt

960

ggcggattcg agttcatgcc ttctccccca gtgacttact acaggaacct taagaatcgc

1020

gttggcgatg tgttgtccga cgagcagatt aaggagtgcg aggagctcgg tatcctggtt

1080

gatagggatg accagggcac acttttgcaa attgctacca agcccatcgg cgaccgccca

1140

accattttca tcgagattat ccagagagtg ggatgcatgc tgaaggacga ggagggcaag

1200

gagtaccaaa agggtggctg cggaggtttc ggaaagggta acttcagcga gcttttcaag

1260

tcaatcgagg agtacgagaa gacattggag acccgcagaa ctgcctga

1308

<210> 105

<211> 434

<212> ПРТ

<213> BvHPPD Аминокислотная последовательность (Beta vulgaris)

<400> 105

Met Gly Thr Leu Ser Pro Gln Pro Gln Thr Ser Pro Ser Gln Phe Lys

1 5 10 15

Leu Val Gly Tyr Ser Asn Phe Ile Arg Val Asn Pro Leu Ser Asp Leu

20 25 30

Phe Pro Val Lys Arg Phe His His Val Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala

35 40 45

Thr Asn Val Ser Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Val

50 55 60

Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Val His Ala Ser Tyr Leu

65 70 75 80

Leu Arg Ser Gly Glu Leu His Phe Leu Phe Thr Ser Pro Tyr Ser Pro

85 90 95

Ser Leu Ser Ser Pro Ser Ser Ala Thr Ile Pro Thr Phe Ser Phe Ser

100 105 110

Leu Phe Thr Ser Phe Leu Thr Ser His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val

115 120 125

Ala Val Glu Val Gln Asp Ala Glu Ala Ala Phe His Ile Ser Val Ser

130 135 140

Asn Gly Ala Ser Pro Val Ser Pro Pro Ile Arg Leu His Asp Gly Val

145 150 155 160

Val Leu Ser Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val

165 170 175

Ser Thr Ser Ser Val Val Asp Gly Ile Phe Leu Pro Gly Phe Glu Glu

180 185 190

Met Leu Gly Glu Ser Ser Phe Gln Glu Leu Asp Phe Gly Leu Arg Arg

195 200 205

Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Ile Glu

210 215 220

Tyr Val Lys Lys Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Thr

225 230 235 240

Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Ala Val Val Ala

245 250 255

Asn Asn Asp Glu Thr Val Leu Phe Pro Met Asn Glu Pro Val Tyr Gly

260 265 270

Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly

275 280 285

Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Trp Thr

290 295 300

Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Leu Gly Gly Phe Glu Phe Met

305 310 315 320

Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Arg Asn Leu Arg Asn Arg Ala Ala

325 330 335

Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Met Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile

340 345 350

Leu Val Asp Lys Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys

355 360 365

Pro Ile Gly Asp Arg Pro Thr Met Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Ile

370 375 380

Gly Cys Met Met Lys Asp Glu Glu Gly Lys Val Tyr Gln Lys Gly Gly

385 390 395 400

Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile

405 410 415

Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Arg Lys Pro Ile Ala Asp Thr Asn

420 425 430

Ala Thr

<210> 106

<211> 1305

<212> ДНК

<213> BvHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Beta vulgaris)

<400> 106

atgggaactc tcagtccaca accacaaacc tcaccttcac aattcaagct cgttggctat

60

tccaacttca tccgcgtcaa cccactctcc gaccttttcc ccgtcaaacg cttccaccac

120

gtcgagttct ggtgcggcga cgccaccaac gtctctcgtc gtttctcatg gggtctcggc

180

atgcccatcg tcgcaaaatc cgatctctcc actggtaact ccgtccatgc ttcttatctc

240

cttcgttcag gcgaacttca tttcctcttc acttcccctt actctccttc tctctcctct

300

ccttcttccg ccaccatccc caccttctct ttctctctct tcacctcctt cctcacctcc

360

catggcctcg ctgtccgcgc cgtcgctgtt gaagtccaag acgctgaggc cgcctttcat

420

attagtgtct ccaatggagc ttccccagtt tctccaccaa tacgcctaca tgatggggtt

480

gttttatccg aggttcactt atacggcgac gttgttctac gctatgttag tactagttct

540

gttgttgatg ggatttttct ccctgggttt gaggaaatgt taggggaatc atcgtttcaa

600

gagcttgatt tcgggttaag aaggttagac catgctgtag gaaatgtacc tgagcttgct

660

cctgctattg agtatgttaa gaagtttact gggtttcatg agtttgctga gtttactact

720

gaggatgttg ggacgagtga gagtgggttg aattcagctg ttgtggcgaa taatgatgag

780

actgttttgt ttcctatgaa tgagccggtg tatgggacga agaggaagag tcagatacag

840

acttatttgg agcataatga gggagctggt gtgcagcatt tggcattgat gagtgaggat

900

atattttgga ctctaaggga gatgaggaag agaagtggac ttggtgggtt tgagtttatg

960

ccgtcgccgc ctccgacgta ttaccggaac cttaggaatc gagctgctga tgttttgagt

1020

gaggagcaga tgaaagaatg tgaggaattg gggattttgg tggataagga tgatcagggt

1080

actctacttc agatcttcac taagcctatt ggagacaggc caactatgtt cattgagatt

1140

atccaaagaa tcggatgcat gatgaaagat gaagaaggca aggtgtacca aaagggcggt

1200

tgcggaggat ttggaaaggg aaacttttca gagctcttta aatcgatcga ggagtatgag

1260

aagacactcg aacgcaaacc cattgcagat acaaatgcta catga

1305

<210> 107

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BvHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 107

atgggtactc tgtccccaca gccacaaaca tccccttctc agttcaagct tgttggctac

60

agcaacttca ttcgcgtgaa tccactttca gatttgttcc ctgttaagag attccaccat

120

gtggagttct ggtgcggcga cgccaccaac gttagcaggc gcttctcatg gggcctggga

180

atgccaatcg ttgccaagag cgatctttca actggcaatt ccgtgcacgc ttcttacctc

240

ctgcgctccg gagagctcca tttcctgttc acatctcctt acagcccctc actgtcctct

300

cccagctcag ccacaattcc aaccttctcc ttctctcttt tcaccagctt cttgacttca

360

cacggactcg ccgtgagagc cgtggctgtt gaggtgcagg atgctgaggc cgctttccat

420

attagcgttt caaacggtgc ttcccctgtg tctccaccta tcaggctgca cgatggagtg

480

gttctgtccg aggttcatct ttacggtgac gtggttcttc gctacgtgtc tacttcctct

540

gtggttgacg gcattttctt gcccggattc gaggagatgc tcggcgagag ctcattccaa

600

gagttggatt tcggccttag aaggttggac cacgccgttg gaaatgtgcc agagctcgcc

660

cctgctatcg agtatgtgaa gaagttcacc ggattccatg agttcgctga gttcaccact

720

gaggatgtgg gtacctccga gtctggcttg aactctgccg tggttgctaa caatgacgag

780

acagttctct tccccatgaa tgagccagtg tacggtacca agaggaagag ccagattcaa

840

acttacctcg agcacaacga gggtgccggc gttcagcatc tcgctctgat gtcagaggat

900

atcttctgga ccttgagaga gatgcgcaag agaagcggac tcggcggatt cgagttcatg

960

ccttcacccc cacctactta ctacaggaac ctgaggaatc gcgccgctga cgttctttcc

1020

gaggagcaga tgaaggagtg cgaggagctc ggtatcctgg tggataagga tgaccagggc

1080

acacttttgc aaattttcac caagcctatc ggcgacagac ccacaatgtt cattgagatt

1140

atccagagga tcggatgcat gatgaaggat gaggagggca aggtgtacca aaagggtggc

1200

tgcggaggtt tcggaaaggg taacttctcc gagttgttca agtctattga ggagtacgag

1260

aagaccctcg agcgcaagcc aatcgccgac actaatgcta catga

1305

<210> 108

<211> 434

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-BvHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 108

Met Gly Thr Leu Ser Pro Gln Pro Gln Thr Ser Pro Ser Gln Phe Lys

1 5 10 15

Leu Val Gly Tyr Ser Asn Phe Ile Arg Val Asn Pro Leu Ser Asp Leu

20 25 30

Phe Pro Val Lys Arg Phe His His Val Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala

35 40 45

Thr Asn Val Ser Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Pro Ile Val

50 55 60

Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Val His Ala Ser Tyr Leu

65 70 75 80

Leu Arg Ser Gly Glu Leu His Phe Leu Phe Thr Ser Pro Tyr Ser Pro

85 90 95

Ser Leu Ser Ser Pro Ser Ser Ala Thr Ile Pro Thr Phe Ser Phe Ser

100 105 110

Leu Phe Thr Ser Phe Leu Thr Ser His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val

115 120 125

Ala Val Glu Val Gln Asp Ala Glu Ala Ala Phe His Ile Ser Val Ser

130 135 140

Asn Gly Ala Ser Pro Val Ser Pro Pro Ile Arg Leu His Asp Gly Val

145 150 155 160

Val Leu Ser Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val

165 170 175

Ser Thr Ser Ser Val Val Asp Gly Ile Phe Leu Pro Gly Phe Glu Glu

180 185 190

Met Leu Gly Glu Ser Ser Phe Gln Glu Leu Asp Phe Gly Leu Arg Arg

195 200 205

Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Ile Glu

210 215 220

Tyr Val Lys Lys Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Thr

225 230 235 240

Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Ala Val Val Ala

245 250 255

Asn Asn Asp Glu Thr Val Leu Phe Pro Met Asn Glu Pro Val Tyr Gly

260 265 270

Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly

275 280 285

Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Trp Thr

290 295 300

Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly Leu Gly Gly Phe Glu Phe Met

305 310 315 320

Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Arg Asn Leu Arg Asn Arg Ala Ala

325 330 335

Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Met Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile

340 345 350

Leu Val Asp Lys Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys

355 360 365

Pro Ile Gly Asp Arg Pro Thr Met Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Ile

370 375 380

Gly Cys Met Met Lys Asp Glu Glu Gly Lys Val Tyr Gln Lys Gly Gly

385 390 395 400

Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile

405 410 415

Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Arg Lys Pro Ile Ala Asp Thr Asn

420 425 430

Ala Thr

<210> 109

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BvHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 109

atgggaactc tcagtccaca accacaaacc tcaccttcac aattcaagct cgttggctat

60

tccaacttca tccgcgtcaa cccactctcc gaccttttcc ccgtcaaacg cttccaccac

120

gtcgagttct ggtgcggcga cgccaccaac gtctctcgtc gtttctcatg gggtctcggc

180

atgcccatcg tcgcaaaatc cgatctctcc actggtaact ccgtccatgc ttcttatctc

240

cttcgttcag gcgaacttca tttcctcttc acttcccctt actctccttc tctctcctct

300

ccttcttccg ccaccatccc caccttctct ttctctctct tcacctcctt cctcacctcc

360

catggcctcg ctgtccgcgc cgtcgctgtt gaagtccaag acgctgaggc cgcctttcat

420

attagtgtct ccaatggagc ttccccagtt tctccaccaa tacgcctaca tgatggggtt

480

gttttatccg aggttcactt atacggcgac gttgttctac gctatgttag tactagttct

540

gttgttgatg ggatttttct ccctgggttt gaggaaatgt taggggaatc atcgtttcaa

600

gagcttgatt tcgggttaag aaggttagac catgctgtag gaaatgtacc tgagcttgct

660

cctgctattg agtatgttaa gaagtttact gggtttcatg agtttgctga gtttactact

720

gaggatgttg ggacgagtga gagtgggttg aattcagctg ttgtggcgaa taatgatgag

780

actgttttgt ttcctatgaa tgagccggtg tatgggacga agaggaagag tcagatacag

840

acttatttgg agcataatga gggagctggt gtgcagcatt tggcattgat gagtgaggat

900

atattttgga ctctaaggga gatgaggaag agaagtggac ttggtgggtt tgagtttatg

960

ccgtcgccgc ctccgacgta ttaccggaac cttaggaatc gagctgctga tgttttgagt

1020

gaggagcaga tgaaagaatg tgaggaattg gggattttgg tggataagga tgatcagggt

1080

actctacttc agatcgctac taagcctatt ggagacaggc caactatgtt cattgagatt

1140

atccaaagaa tcggatgcat gatgaaagat gaagaaggca aggtgtacca aaagggcggt

1200

tgcggaggat ttggaaaggg aaacttttca gagctcttta aatcgatcga ggagtatgag

1260

aagacactcg aacgcaaacc cattgcagat acaaatgcta catga

1305

<210> 110

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-BvHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 110

atgggtactc tgtccccaca gccacaaaca tccccttctc agttcaagct tgttggctac

60

agcaacttca ttcgcgtgaa tccactttca gatttgttcc ctgttaagag attccaccat

120

gtggagttct ggtgcggcga cgccaccaac gttagcaggc gcttctcatg gggcctggga

180

atgccaatcg ttgccaagag cgatctttca actggcaatt ccgtgcacgc ttcttacctc

240

ctgcgctccg gagagctcca tttcctgttc acatctcctt acagcccctc actgtcctct

300

cccagctcag ccacaattcc aaccttctcc ttctctcttt tcaccagctt cttgacttca

360

cacggactcg ccgtgagagc cgtggctgtt gaggtgcagg atgctgaggc cgctttccat

420

attagcgttt caaacggtgc ttcccctgtg tctccaccta tcaggctgca cgatggagtg

480

gttctgtccg aggttcatct ttacggtgac gtggttcttc gctacgtgtc tacttcctct

540

gtggttgacg gcattttctt gcccggattc gaggagatgc tcggcgagag ctcattccaa

600

gagttggatt tcggccttag aaggttggac cacgccgttg gaaatgtgcc agagctcgcc

660

cctgctatcg agtatgtgaa gaagttcacc ggattccatg agttcgctga gttcaccact

720

gaggatgtgg gtacctccga gtctggcttg aactctgccg tggttgctaa caatgacgag

780

acagttctct tccccatgaa tgagccagtg tacggtacca agaggaagag ccagattcaa

840

acttacctcg agcacaacga gggtgccggc gttcagcatc tcgctctgat gtcagaggat

900

atcttctgga ccttgagaga gatgcgcaag agaagcggac tcggcggatt cgagttcatg

960

ccttcacccc cacctactta ctacaggaac ctgaggaatc gcgccgctga cgttctttcc

1020

gaggagcaga tgaaggagtg cgaggagctc ggtatcctgg tggataagga tgaccagggc

1080

acacttttgc aaattgctac caagcctatc ggcgacagac ccacaatgtt cattgagatt

1140

atccagagga tcggatgcat gatgaaggat gaggagggca aggtgtacca aaagggtggc

1200

tgcggaggtt tcggaaaggg taacttctcc gagttgttca agtctattga ggagtacgag

1260

aagaccctcg agcgcaagcc aatcgccgac actaatgcta catga

1305

<210> 111

<211> 447

<212> ПРТ

<213> NtHPPD Аминокислотная последовательность (Nicotiana tabacum)

<400> 111

Met Gly Lys Leu Glu Thr Val Thr Thr Thr Ser Ala Ala Ala Ala Asp

1 5 10 15

Asp Ser Ser Glu Leu Thr Thr Asn Phe Lys Leu Val Gly Phe Lys Asn

20 25 30

Phe Ile Arg Thr Asn Pro Arg Ser Asp Phe Phe Ser Val Lys Ser Phe

35 40 45

His His Ile Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg Arg

50 55 60

Phe Ser Trp Ser Leu Gly Met Pro Ile Ala Ala Lys Ser Asp Leu Ser

65 70 75 80

Thr Gly Asn Ser Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Pro Val Ser Gly

85 90 95

Ser Leu Gln Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile Ser Thr

100 105 110

Pro Ser Ser Ala Ala Ile Pro Ser Phe Ser Thr Ser Thr His Arg Ser

115 120 125

Phe Thr Thr Thr His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Leu Glu Val

130 135 140

Glu Asn Ala Tyr Thr Ala Phe Ser Ala Ser Val Ser Arg Gly Ala Lys

145 150 155 160

Pro Met Phe Glu Pro Val Thr Ile Asp Glu Gln Val Ala Met Ala Glu

165 170 175

Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Leu Lys

180 185 190

Asp Ala Asp Asn Leu Val Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ala Met Asp Glu

195 200 205

Thr Ala Ser Tyr Lys Glu Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His

210 215 220

Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Gly Pro Val Val Asp Tyr Ile Lys

225 230 235 240

Arg Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val

245 250 255

Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Asp

260 265 270

Glu Thr Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg

275 280 285

Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val

290 295 300

Gln His Leu Ala Leu Val Thr Glu Asp Ile Phe Lys Thr Leu Thr Glu

305 310 315 320

Met Arg Lys Arg Ser Gly Val Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro

325 330 335

Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys Asn Leu Lys Asn Arg Ala Gly Asp Val Leu

340 345 350

Ser Asp Glu Gln Ile Leu Ala Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp

355 360 365

Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly

370 375 380

Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met

385 390 395 400

Leu Lys Asp Gly Lys Gly Gln Val Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly

405 410 415

Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Arg Ser Ile Glu Glu Tyr

420 425 430

Glu Lys Thr Leu Glu Ala Lys Gln Ala Asn Gln Val Ala Ala Ala

435 440 445

<210> 112

<211> 1344

<212> ДНК

<213> NtHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Nicotiana tabacum)

<400> 112

atgggcaaat tagaaactgt caccaccacc tctgctgccg ctgccgatga ctcatcggag

60

ctgaccacca atttcaagct agtgggtttc aagaatttta ttcgaaccaa tccccgttcc

120

gattttttct ccgttaaaag cttccatcac atagaatttt ggtgcggcga tgctaccaat

180

acggctcgcc gtttctcttg gtctctcggg atgccaattg cagctaaatc cgacctctcc

240

actggaaact ccgttcacgc ttcgtacctc ctccgtcccg tttcaggttc gcttcagttc

300

ctcttcactg ctccttattc gccgtctatt tcgacgccgt catctgcagc catccccagt

360

ttctctactt ccacacaccg ctcttttacg acaactcacg ggctcggcgt ccgtgccgtt

420

gctttggaag tggagaatgc ttacacggcg ttctctgcga gtgtttcacg tggggcgaaa

480

cccatgtttg aacctgtgac tattgatgaa caagtcgcta tggctgaagt tcacttatac

540

ggcgacgtcg ttttgcggtt tgtgagctat ctgaaagatg cggacaacct cgttttcctc

600

ccaggtttcg aggccatgga tgaaacagca tcatacaaag aactagatta tgggattcgc

660

cggctggacc atgctgttgg gaatgtgccg gagctgggtc ctgtagtgga ttatatcaag

720

cgctttacgg ggtttcatga attcgccgag ttcacagctg aagatgttgg gactgctgag

780

agcgggctga actctatggt cctggcaaac aatgacgaaa cagtgctgct tccgttgaat

840

gagccggttt atggaaccaa aaggaagagt caaattcaaa cgtatttaga gcacaatgaa

900

ggggcaggag tgcaacattt agctttggtt acagaggata tatttaaaac attgacggaa

960

atgaggaaaa ggagtggagt tgggggtttt gaattcatgc cttcacctcc gcctacttat

1020

tataagaatt tgaagaatag ggcaggggat gtactgagtg atgaacagat tctggcttgc

1080

gaagaattgg gaatattagt ggatagggat gatcagggga ccctgctaca gatattcacc

1140

aagcctgtgg gggacaggcc aacaatattt atagaaataa ttcagagaat cggttgcatg

1200

ctcaaagacg gaaaaggtca ggtgtatcag aagggcggct gtggaggctt cggaaaggga

1260

aacttttcag agctctttag atccatcgaa gaatatgaga agacgcttga agccaaacaa

1320

gctaatcaag ttgctgctgc ttga

1344

<210> 113

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-NtHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 113

atgggcaagc tggagacagt gaccactaca tcagccgctg ccgctgatga ctcctctgag

60

ctcaccacta acttcaagct ggttggattc aagaacttca ttaggaccaa tcctcgctcc

120

gatttcttct ctgtgaagag cttccaccat atcgagttct ggtgcggtga cgccacaaac

180

accgctaggc gcttctcctg gtctttgggt atgccaattg ccgctaagtc agatctctcc

240

acaggcaatt ctgttcacgc cagctacctc ctgaggcctg tgagcggctc actccagttc

300

ctgttcacag ctccatactc cccttctatt agcaccccta gctcagccgc tatcccctca

360

ttctccactt ctacacaccg ctccttcaca accactcatg gcttgggagt gagagctgtt

420

gccctcgagg ttgagaatgc ttacactgcc ttcagcgctt cagtgtccag aggtgccaag

480

cccatgttcg agccagttac aatcgatgag caagtggcta tggccgaggt tcatctttac

540

ggcgacgtgg ttttgaggtt cgtttcttac ctcaaggatg ccgacaacct tgtgttcttg

600

cccggcttcg aggccatgga tgagactgct agctacaagg agctggatta cggaattaga

660

aggcttgacc acgctgtggg aaatgttcct gagttgggtc ccgtggttga ctacatcaag

720

cgcttcactg gattccatga gttcgccgag ttcacagctg aggatgttgg taccgccgag

780

tcaggcctta actccatggt gttggctaac aatgacgaga cagttctttt gccattgaat

840

gagcctgtgt acggcaccaa gagaaagtct cagattcaaa cttacctcga gcacaacgag

900

ggtgccggcg tgcagcatct tgctttggtt accgaggata tcttcaagac cctgactgag

960

atgcgcaaga gatcaggagt gggcggattc gagttcatgc catccccacc tcccacttac

1020

tacaagaacc ttaagaatag ggccggcgat gtgctgagcg acgagcagat tcttgcttgc

1080

gaggagctcg gcatcctggt tgatcgcgat gaccagggaa ctctcctgca aattttcaca

1140

aagcccgtgg gagacagacc aaccattttc atcgagatta tccaaaggat cggttgcatg

1200

ctcaaggacg gaaagggtca ggtttaccaa aagggtggct gcggaggttt cggcaaggga

1260

aacttctctg agctgttccg cagcattgag gagtacgaga agactcttga ggccaagcag

1320

gctaatcaag tggccgctgc ctga

1344

<210> 114

<211> 447

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-NtHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 114

Met Gly Lys Leu Glu Thr Val Thr Thr Thr Ser Ala Ala Ala Ala Asp

1 5 10 15

Asp Ser Ser Glu Leu Thr Thr Asn Phe Lys Leu Val Gly Phe Lys Asn

20 25 30

Phe Ile Arg Thr Asn Pro Arg Ser Asp Phe Phe Ser Val Lys Ser Phe

35 40 45

His His Ile Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg Arg

50 55 60

Phe Ser Trp Ser Leu Gly Met Pro Ile Ala Ala Lys Ser Asp Leu Ser

65 70 75 80

Thr Gly Asn Ser Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Pro Val Ser Gly

85 90 95

Ser Leu Gln Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile Ser Thr

100 105 110

Pro Ser Ser Ala Ala Ile Pro Ser Phe Ser Thr Ser Thr His Arg Ser

115 120 125

Phe Thr Thr Thr His Gly Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Leu Glu Val

130 135 140

Glu Asn Ala Tyr Thr Ala Phe Ser Ala Ser Val Ser Arg Gly Ala Lys

145 150 155 160

Pro Met Phe Glu Pro Val Thr Ile Asp Glu Gln Val Ala Met Ala Glu

165 170 175

Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Leu Lys

180 185 190

Asp Ala Asp Asn Leu Val Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ala Met Asp Glu

195 200 205

Thr Ala Ser Tyr Lys Glu Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His

210 215 220

Ala Val Gly Asn Val Pro Glu Leu Gly Pro Val Val Asp Tyr Ile Lys

225 230 235 240

Arg Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val

245 250 255

Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Asp

260 265 270

Glu Thr Val Leu Leu Pro Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg

275 280 285

Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val

290 295 300

Gln His Leu Ala Leu Val Thr Glu Asp Ile Phe Lys Thr Leu Thr Glu

305 310 315 320

Met Arg Lys Arg Ser Gly Val Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro

325 330 335

Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys Asn Leu Lys Asn Arg Ala Gly Asp Val Leu

340 345 350

Ser Asp Glu Gln Ile Leu Ala Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp

355 360 365

Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly

370 375 380

Asp Arg Pro Thr Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met

385 390 395 400

Leu Lys Asp Gly Lys Gly Gln Val Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly

405 410 415

Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Arg Ser Ile Glu Glu Tyr

420 425 430

Glu Lys Thr Leu Glu Ala Lys Gln Ala Asn Gln Val Ala Ala Ala

435 440 445

<210> 115

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-NtHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 115

atgggcaaat tagaaactgt caccaccacc tctgctgccg ctgccgatga ctcatcggag

60

ctgaccacca atttcaagct agtgggtttc aagaatttta ttcgaaccaa tccccgttcc

120

gattttttct ccgttaaaag cttccatcac atagaatttt ggtgcggcga tgctaccaat

180

acggctcgcc gtttctcttg gtctctcggg atgccaattg cagctaaatc cgacctctcc

240

actggaaact ccgttcacgc ttcgtacctc ctccgtcccg tttcaggttc gcttcagttc

300

ctcttcactg ctccttattc gccgtctatt tcgacgccgt catctgcagc catccccagt

360

ttctctactt ccacacaccg ctcttttacg acaactcacg ggctcggcgt ccgtgccgtt

420

gctttggaag tggagaatgc ttacacggcg ttctctgcga gtgtttcacg tggggcgaaa

480

cccatgtttg aacctgtgac tattgatgaa caagtcgcta tggctgaagt tcacttatac

540

ggcgacgtcg ttttgcggtt tgtgagctat ctgaaagatg cggacaacct cgttttcctc

600

ccaggtttcg aggccatgga tgaaacagca tcatacaaag aactagatta tgggattcgc

660

cggctggacc atgctgttgg gaatgtgccg gagctgggtc ctgtagtgga ttatatcaag

720

cgctttacgg ggtttcatga attcgccgag ttcacagctg aagatgttgg gactgctgag

780

agcgggctga actctatggt cctggcaaac aatgacgaaa cagtgctgct tccgttgaat

840

gagccggttt atggaaccaa aaggaagagt caaattcaaa cgtatttaga gcacaatgaa

900

ggggcaggag tgcaacattt agctttggtt acagaggata tatttaaaac attgacggaa

960

atgaggaaaa ggagtggagt tgggggtttt gaattcatgc cttcacctcc gcctacttat

1020

tataagaatt tgaagaatag ggcaggggat gtactgagtg atgaacagat tctggcttgc

1080

gaagaattgg gaatattagt ggatagggat gatcagggga ccctgctaca gatagctacc

1140

aagcctgtgg gggacaggcc aacaatattt atagaaataa ttcagagaat cggttgcatg

1200

ctcaaagacg gaaaaggtca ggtgtatcag aagggcggct gtggaggctt cggaaaggga

1260

aacttttcag agctctttag atccatcgaa gaatatgaga agacgcttga agccaaacaa

1320

gctaatcaag ttgctgctgc ttga

1344

<210> 116

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-NtHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 116

atgggcaagc tggagacagt gaccactaca tcagccgctg ccgctgatga ctcctctgag

60

ctcaccacta acttcaagct ggttggattc aagaacttca ttaggaccaa tcctcgctcc

120

gatttcttct ctgtgaagag cttccaccat atcgagttct ggtgcggtga cgccacaaac

180

accgctaggc gcttctcctg gtctttgggt atgccaattg ccgctaagtc agatctctcc

240

acaggcaatt ctgttcacgc cagctacctc ctgaggcctg tgagcggctc actccagttc

300

ctgttcacag ctccatactc cccttctatt agcaccccta gctcagccgc tatcccctca

360

ttctccactt ctacacaccg ctccttcaca accactcatg gcttgggagt gagagctgtt

420

gccctcgagg ttgagaatgc ttacactgcc ttcagcgctt cagtgtccag aggtgccaag

480

cccatgttcg agccagttac aatcgatgag caagtggcta tggccgaggt tcatctttac

540

ggcgacgtgg ttttgaggtt cgtttcttac ctcaaggatg ccgacaacct tgtgttcttg

600

cccggcttcg aggccatgga tgagactgct agctacaagg agctggatta cggaattaga

660

aggcttgacc acgctgtggg aaatgttcct gagttgggtc ccgtggttga ctacatcaag

720

cgcttcactg gattccatga gttcgccgag ttcacagctg aggatgttgg taccgccgag

780

tcaggcctta actccatggt gttggctaac aatgacgaga cagttctttt gccattgaat

840

gagcctgtgt acggcaccaa gagaaagtct cagattcaaa cttacctcga gcacaacgag

900

ggtgccggcg tgcagcatct tgctttggtt accgaggata tcttcaagac cctgactgag

960

atgcgcaaga gatcaggagt gggcggattc gagttcatgc catccccacc tcccacttac

1020

tacaagaacc ttaagaatag ggccggcgat gtgctgagcg acgagcagat tcttgcttgc

1080

gaggagctcg gcatcctggt tgatcgcgat gaccagggaa ctctcctgca aattgctaca

1140

aagcccgtgg gagacagacc aaccattttc atcgagatta tccaaaggat cggttgcatg

1200

ctcaaggacg gaaagggtca ggtttaccaa aagggtggct gcggaggttt cggcaaggga

1260

aacttctctg agctgttccg cagcattgag gagtacgaga agactcttga ggccaagcag

1320

gctaatcaag tggccgctgc ctga

1344

<210> 117

<211> 455

<212> ПРТ

<213> CsHPPD Аминокислотная последовательность (Cucumis sativus)

<400> 117

Met Gly Lys Glu Ala Asp Phe Pro Arg Ala Pro Ser Glu Ala Thr Asp

1 5 10 15

Gly Gly Ala Thr Ala Ser Gln Ser Glu Phe Glu Leu Gln Gly Phe Asp

20 25 30

Asn Phe Ile Arg Thr Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Lys Val Lys Arg

35 40 45

Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr Asn Val Ala Arg

50 55 60

Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Gln Ile Val Ala Lys Ser Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Gly Asn Met Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly His

85 90 95

Leu Cys Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile Ala Ala Ala

100 105 110

Gln Asn Leu Thr Pro Ala Ser Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Asp His

115 120 125

Ser Val Cys Arg Ser Phe Ser Gly Thr His Gly Phe Gly Ala Arg Ala

130 135 140

Ile Ala Leu Glu Val Glu Asp Ala Glu Ile Ala Phe Arg Thr Ser Val

145 150 155 160

Ala His Gly Ala Lys Pro Ser Cys Pro Pro Ile Val Leu Glu Asn Arg

165 170 175

Ala Val Leu Ser Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr

180 185 190

Ile Ser Tyr Lys Asn Pro Val Ser Gly Asp Asn Gly Glu Asn Lys Pro

195 200 205

Asp Glu Trp Phe Leu Pro Lys Phe Glu Ala Met Glu Glu Thr Ala Ser

210 215 220

Phe Pro Leu Asp Phe Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn

225 230 235 240

Val Pro Glu Leu Gly Pro Ala Val Ser Tyr Leu Lys Gly Phe Thr Gly

245 250 255

Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu

260 265 270

Ser Gly Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Met Val Leu

275 280 285

Leu Pro Ile Asn Glu Pro Val Phe Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile

290 295 300

Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala

305 310 315 320

Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg

325 330 335

Ser Ser Val Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr

340 345 350

Tyr Lys Asn Leu Lys Ser Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Asp Glu Gln

355 360 365

Ile Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Lys Asp Asp Gln

370 375 380

Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr

385 390 395 400

Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Leu Gly Cys Met Met Lys Asp Glu

405 410 415

Glu Gly Lys Ala Phe Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly

420 425 430

Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu

435 440 445

Glu Ala Lys Arg Val Ser Glu

450 455

<210> 118

<211> 1368

<212> ДНК

<213> CsHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Cucumis sativus)

<400> 118

atggggaaag aggccgattt tcctagagct ccgtcggagg cgactgacgg cggcgctact

60

gcttcccagt cggagtttga gcttcaagga ttcgacaact ttattcgtac caatccgaaa

120

tcggatcggt ttaaggttaa gcggttccat catattgagt tctggtgtac cgacgctacc

180

aatgttgctc ggagattctc ctggggactt ggtatgcaga ttgtggctaa atcggatctc

240

tctaccggga atatgactca tgcttcttat ctcctccgtt ccggccacct ttgctttctc

300

ttcaccgcac cttattcgcc ttccattgcc gccgctcaaa accttactcc ggcatccact

360

gcttcaatcc ctagtttcga ccattccgtc tgccgttcct tctccggtac ccatggattt

420

ggcgctcgag caatcgctct tgaggttgaa gacgctgaga tcgccttcag aaccagcgtc

480

gcacacggtg cgaaaccttc gtgtcctccg attgttctcg aaaatcgcgc tgtactttca

540

gaagttcatt tgtatggcga tgttgttttg cgttacatta gctacaaaaa ccctgtgtct

600

ggcgataatg gcgagaataa accagacgaa tggttcttgc cgaaattcga ggccatggag

660

gaaactgctt catttccgct tgatttcggg attcgaagac tggatcatgc agtcggaaat

720

gtgccggagt tgggaccggc ggtgtcttac ttgaaaggct tcactggatt tcacgagttt

780

gcagaattca cggcggagga tgtggggacg agtgagagcg gattgaattc gatggttctg

840

gcaaacaatg aggaaatggt tctgctaccg ataaacgagc cggtttttgg gacgaagcga

900

aagagccaaa tacagacgta tttggagcac aacgaaggag caggagttca gcacttggca

960

ttgatgagtg aggatatttt cagaaccttg agggagatga ggaaacgaag tagcgtcggt

1020

ggatttgagt tcatgccgtc gccgccgcca acatattaca agaatttgaa gagcagggcg

1080

ggtgatgtgc tgacggatga gcagattaag gagtgtgaag aattggggat tctggtggat

1140

aaagatgatc aaggaacttt gcttcagatc ttcaccaagc ccgtgggaga taggcctacc

1200

atatttattg agataattca gagattggga tgcatgatga aggatgaaga ggggaaagca

1260

tttcagaaag gagggtgtgg tggctttgga aaaggaaact tctccgagct tttcaaatcc

1320

attgaagaat atgagaagac acttgaagcc aaacgagttt cggaataa

1368

<210> 119

<211> 1368

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-CsHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 119

atgggcaagg aggctgattt ccctagagct ccatctgagg ctactgacgg cggagctact

60

gccagccagt cagagttcga gcttcaaggc ttcgataact tcattagaac taatcctaag

120

tctgacagat tcaaggtgaa gaggttccac catatcgagt tctggtgcac cgatgccact

180

aacgttgcta ggcgcttcag ctggggtctt ggcatgcaga ttgtggccaa gagcgacttg

240

tcaacaggaa atatgaccca cgcttcatac ctcctgagat ccggtcatct ctgcttcctg

300

ttcacagccc cttactcccc ctctattgcc gctgcccaaa accttactcc cgcctccaca

360

gcttctatcc caagcttcga tcactcagtt tgcaggagct tctcaggcac tcatggattc

420

ggtgctcgcg ccattgcttt ggaggttgag gacgccgaga tcgctttcag gacatctgtt

480

gctcatggtg ctaagccaag ctgcccacct attgtgcttg agaacagagc tgtgctctcc

540

gaggttcatc tgtacggaga tgtggttttg aggtacatct catacaagaa tcctgtttcc

600

ggagataacg gtgaaaataa gccagacgag tggttcctgc ctaagttcga ggccatggag

660

gagaccgctt cattccccct cgatttcggc attagaaggc tggaccacgc cgtgggaaat

720

gttccagagc ttggtcctgc tgtgtcctac ttgaagggct tcactggatt ccatgagttc

780

gccgagttca cagctgagga tgttggtacc tccgagtctg gccttaactc tatggtgttg

840

gccaacaatg aggagatggt tcttttgccc attaatgagc cagtgttcgg aaccaagagg

900

aagtctcaga tccaaactta cctcgagcac aacgagggcg ccggagtgca gcatcttgct

960

ttgatgagcg aggacatctt caggaccctg cgcgagatgc gcaagagatc ctctgttggt

1020

ggcttcgagt tcatgccttc acccccacct acatactaca agaatctcaa gtcccgcgct

1080

ggagatgttc tgaccgacga gcaaattaag gagtgcgagg agcttggtat cttggtggat

1140

aaggatgacc agggcactct cctgcaaatt ttcacaaagc ctgttggtga ccgccccaca

1200

attttcatcg agattatcca gagactcggc tgcatgatga aggacgagga gggaaaggcc

1260

ttccaaaagg gaggttgcgg cggattcggc aagggcaact tctctgagct cttcaagagc

1320

atcgaggagt acgagaagac cctggaggct aagcgcgtga gcgagtga

1368

<210> 120

<211> 455

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-CsHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 120

Met Gly Lys Glu Ala Asp Phe Pro Arg Ala Pro Ser Glu Ala Thr Asp

1 5 10 15

Gly Gly Ala Thr Ala Ser Gln Ser Glu Phe Glu Leu Gln Gly Phe Asp

20 25 30

Asn Phe Ile Arg Thr Asn Pro Lys Ser Asp Arg Phe Lys Val Lys Arg

35 40 45

Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Thr Asp Ala Thr Asn Val Ala Arg

50 55 60

Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met Gln Ile Val Ala Lys Ser Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Gly Asn Met Thr His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly His

85 90 95

Leu Cys Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro Ser Ile Ala Ala Ala

100 105 110

Gln Asn Leu Thr Pro Ala Ser Thr Ala Ser Ile Pro Ser Phe Asp His

115 120 125

Ser Val Cys Arg Ser Phe Ser Gly Thr His Gly Phe Gly Ala Arg Ala

130 135 140

Ile Ala Leu Glu Val Glu Asp Ala Glu Ile Ala Phe Arg Thr Ser Val

145 150 155 160

Ala His Gly Ala Lys Pro Ser Cys Pro Pro Ile Val Leu Glu Asn Arg

165 170 175

Ala Val Leu Ser Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr

180 185 190

Ile Ser Tyr Lys Asn Pro Val Ser Gly Asp Asn Gly Glu Asn Lys Pro

195 200 205

Asp Glu Trp Phe Leu Pro Lys Phe Glu Ala Met Glu Glu Thr Ala Ser

210 215 220

Phe Pro Leu Asp Phe Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn

225 230 235 240

Val Pro Glu Leu Gly Pro Ala Val Ser Tyr Leu Lys Gly Phe Thr Gly

245 250 255

Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ser Glu

260 265 270

Ser Gly Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Glu Glu Met Val Leu

275 280 285

Leu Pro Ile Asn Glu Pro Val Phe Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile

290 295 300

Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala

305 310 315 320

Leu Met Ser Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg

325 330 335

Ser Ser Val Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr

340 345 350

Tyr Lys Asn Leu Lys Ser Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Asp Glu Gln

355 360 365

Ile Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Lys Asp Asp Gln

370 375 380

Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr

385 390 395 400

Ile Phe Ile Glu Ile Ile Gln Arg Leu Gly Cys Met Met Lys Asp Glu

405 410 415

Glu Gly Lys Ala Phe Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly

420 425 430

Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu

435 440 445

Glu Ala Lys Arg Val Ser Glu

450 455

<210> 121

<211> 1368

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-CsHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 121

atggggaaag aggccgattt tcctagagct ccgtcggagg cgactgacgg cggcgctact

60

gcttcccagt cggagtttga gcttcaagga ttcgacaact ttattcgtac caatccgaaa

120

tcggatcggt ttaaggttaa gcggttccat catattgagt tctggtgtac cgacgctacc

180

aatgttgctc ggagattctc ctggggactt ggtatgcaga ttgtggctaa atcggatctc

240

tctaccggga atatgactca tgcttcttat ctcctccgtt ccggccacct ttgctttctc

300

ttcaccgcac cttattcgcc ttccattgcc gccgctcaaa accttactcc ggcatccact

360

gcttcaatcc ctagtttcga ccattccgtc tgccgttcct tctccggtac ccatggattt

420

ggcgctcgag caatcgctct tgaggttgaa gacgctgaga tcgccttcag aaccagcgtc

480

gcacacggtg cgaaaccttc gtgtcctccg attgttctcg aaaatcgcgc tgtactttca

540

gaagttcatt tgtatggcga tgttgttttg cgttacatta gctacaaaaa ccctgtgtct

600

ggcgataatg gcgagaataa accagacgaa tggttcttgc cgaaattcga ggccatggag

660

gaaactgctt catttccgct tgatttcggg attcgaagac tggatcatgc agtcggaaat

720

gtgccggagt tgggaccggc ggtgtcttac ttgaaaggct tcactggatt tcacgagttt

780

gcagaattca cggcggagga tgtggggacg agtgagagcg gattgaattc gatggttctg

840

gcaaacaatg aggaaatggt tctgctaccg ataaacgagc cggtttttgg gacgaagcga

900

aagagccaaa tacagacgta tttggagcac aacgaaggag caggagttca gcacttggca

960

ttgatgagtg aggatatttt cagaaccttg agggagatga ggaaacgaag tagcgtcggt

1020

ggatttgagt tcatgccgtc gccgccgcca acatattaca agaatttgaa gagcagggcg

1080

ggtgatgtgc tgacggatga gcagattaag gagtgtgaag aattggggat tctggtggat

1140

aaagatgatc aaggaacttt gcttcagatc gctaccaagc ccgtgggaga taggcctacc

1200

atatttattg agataattca gagattggga tgcatgatga aggatgaaga ggggaaagca

1260

tttcagaaag gagggtgtgg tggctttgga aaaggaaact tctccgagct tttcaaatcc

1320

attgaagaat atgagaagac acttgaagcc aaacgagttt cggaataa

1368

<210> 122

<211> 1368

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-CsHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 122

atgggcaagg aggctgattt ccctagagct ccatctgagg ctactgacgg cggagctact

60

gccagccagt cagagttcga gcttcaaggc ttcgataact tcattagaac taatcctaag

120

tctgacagat tcaaggtgaa gaggttccac catatcgagt tctggtgcac cgatgccact

180

aacgttgcta ggcgcttcag ctggggtctt ggcatgcaga ttgtggccaa gagcgacttg

240

tcaacaggaa atatgaccca cgcttcatac ctcctgagat ccggtcatct ctgcttcctg

300

ttcacagccc cttactcccc ctctattgcc gctgcccaaa accttactcc cgcctccaca

360

gcttctatcc caagcttcga tcactcagtt tgcaggagct tctcaggcac tcatggattc

420

ggtgctcgcg ccattgcttt ggaggttgag gacgccgaga tcgctttcag gacatctgtt

480

gctcatggtg ctaagccaag ctgcccacct attgtgcttg agaacagagc tgtgctctcc

540

gaggttcatc tgtacggaga tgtggttttg aggtacatct catacaagaa tcctgtttcc

600

ggagataacg gtgaaaataa gccagacgag tggttcctgc ctaagttcga ggccatggag

660

gagaccgctt cattccccct cgatttcggc attagaaggc tggaccacgc cgtgggaaat

720

gttccagagc ttggtcctgc tgtgtcctac ttgaagggct tcactggatt ccatgagttc

780

gccgagttca cagctgagga tgttggtacc tccgagtctg gccttaactc tatggtgttg

840

gccaacaatg aggagatggt tcttttgccc attaatgagc cagtgttcgg aaccaagagg

900

aagtctcaga tccaaactta cctcgagcac aacgagggcg ccggagtgca gcatcttgct

960

ttgatgagcg aggacatctt caggaccctg cgcgagatgc gcaagagatc ctctgttggt

1020

ggcttcgagt tcatgccttc acccccacct acatactaca agaatctcaa gtcccgcgct

1080

ggagatgttc tgaccgacga gcaaattaag gagtgcgagg agcttggtat cttggtggat

1140

aaggatgacc agggcactct cctgcaaatt gctacaaagc ctgttggtga ccgccccaca

1200

attttcatcg agattatcca gagactcggc tgcatgatga aggacgagga gggaaaggcc

1260

ttccaaaagg gaggttgcgg cggattcggc aagggcaact tctctgagct cttcaagagc

1320

atcgaggagt acgagaagac cctggaggct aagcgcgtga gcgagtga

1368

<210> 123

<211> 447

<212> ПРТ

<213> StHPPD Аминокислотная последовательность (Solanum tuberosum)

<400> 123

Met Gly Lys Gln Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala

1 5 10 15

Asp Asp Gln Gln Leu Pro Ala Asp Ile Glu Asp Lys Tyr Lys Leu Val

20 25 30

Gly Phe Asn Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Arg Ser Asp Leu Phe Asn

35 40 45

Val Lys Arg Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn

50 55 60

Thr Ala Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Leu Pro Ile Ala Ala Lys

65 70 75 80

Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg

85 90 95

Ser Ser Ser Ser Gln Leu Gln Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro

100 105 110

Ala Ile Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ser Ile Pro Thr Phe Ser Val Ser

115 120 125

Ser His Arg Ser Phe Thr Glu Thr His Gly Leu Gly Val Arg Ala Ile

130 135 140

Ala Leu Glu Val Glu Asn Ser Arg Leu Ala Phe Ser Thr Cys Val Ser

145 150 155 160

His Gly Ala Lys Pro Val Ser Glu Pro Val Ile Leu Asn Asp Glu Val

165 170 175

Val Ile Ser Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val

180 185 190

Ser Phe Leu Lys Asp Ser Asn Arg Phe Val Phe Leu Pro Gly Phe Glu

195 200 205

Leu Val Glu Gly Ala Gln Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His

210 215 220

Ala Val Gly Asn Val Pro Gln Leu Gly Pro Val Val Glu Tyr Ile Lys

225 230 235 240

Ser Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val

245 250 255

Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Asp

260 265 270

Glu Thr Val Leu Phe Pro Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg

275 280 285

Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val

290 295 300

Gln His Leu Ala Leu Val Thr Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu

305 310 315 320

Met Arg Lys Arg Ser Gly Ile Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro

325 330 335

Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys Asn Leu Lys Ser Arg Ala Gly Asp Ile Leu

340 345 350

Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp

355 360 365

Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly

370 375 380

Asp Arg Pro Thr Ile Phe Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met

385 390 395 400

Leu Gln Asn Ala Glu Gly Glu Leu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly

405 410 415

Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr

420 425 430

Glu Lys Thr Leu Glu Ala Lys Gln Asn Thr Gln Val Ala Ile Ala

435 440 445

<210> 124

<211> 1344

<212> ДНК

<213> StHPPD-01 Нуклеотидная последовательность(Solanum tuberosum)

<400> 124

atgggcaaac aagccgccac cgccaccgcc actgccaccg ccaccgccga tgaccaacaa

60

ctccccgccg acattgaaga taaatataag ctagtgggtt tcaacaattt cgttcgtact

120

aatccccgtt cagatttatt caatgttaaa cgcttccatc acattgaatt ttggtgcggc

180

gacgctacca atactgctcg tcgcttttct tggggtctcg gtttgccaat tgctgctaaa

240

tctgatcttt ctactggaaa ctccgtccat gcttcttatc ttcttcgttc ttcttcttcc

300

caacttcaat tccttttcac tgctccttat tcccctgcta tctctacccc ttcttcttca

360

tcaattccaa ctttctccgt ctcttctcac cgatccttca cggaaaccca cggactcggt

420

gtgagagcaa tagcattgga agttgaaaat tcgcgtttgg ctttctcgac ctgtgtttct

480

catggggcaa aacccgtttc ggaaccagta attttgaatg atgaagttgt gatttcggaa

540

gttcatctct acggcgacgt cgttttgcgg tttgtgagtt ttctgaaaga ttcgaataga

600

tttgtttttc ttccgggttt tgaattggtg gagggagccc aacttgacta tggtattcgc

660

cggctggacc acgccgtagg gaatgtcccg cagctgggtc ccgttgttga gtatatcaaa

720

agctttaccg ggtttcatga atttgcggag tttacagctg aggatgttgg gacagctgag

780

agtgggctga attctgtggt gttggcaaac aatgatgaaa ctgttttgtt tccgctgaat

840

gaaccggtgt atgggactaa aaggaagagt caaattcaga cgtatttgga gcacaatgaa

900

ggggcagggg tgcagcattt agcattggta actgaggata tatttagaac tttgagggaa

960

atgaggaaaa ggagtggtat tgggggattt gagtttatgc cttcgcctcc tccgacgtat

1020

tataagaatt tgaagagcag ggcaggggat atactgagcg atgagcaaat aaaggaatgt

1080

gaagaattgg ggattttggt ggatagggat gatcagggga ctctgcttca gatattcaca

1140

aagcctgtag gggataggcc cacaattttt ctcgaaataa tccagagaat agggtgcatg

1200

ctgcaaaacg cggaaggtga gctttatcag aagggtggat gtggaggctt tggcaaggga

1260

aatttctcag agctctttaa atccatcgaa gaatatgaaa agacacttga agctaaacaa

1320

aacactcaag ttgccattgc ttga

1344

<210> 125

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-StHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 125

atgggaaagc aagctgctac tgctactgct acagctaccg ctactgccga tgaccagcaa

60

cttccagctg atattgagga caagtacaag ttggtgggtt tcaacaattt cgttagaact

120

aaccctaggt ccgatctctt caatgtgaag aggttccacc atattgagtt ctggtgcggt

180

gacgctacaa atactgctag gcgcttctct tggggacttg gactgccaat tgctgctaag

240

agcgatctgt caaccggcaa ttccgttcac gcctcttacc tcctgaggtc ctctagctca

300

cagctccaat tcctgttcac tgctccatac agccctgcca tttcaacacc ttcctctagc

360

tcaatcccca ccttctccgt gtcctctcac cgctctttca ctgagacaca tggtctgggc

420

gtgcgcgcta tcgcccttga ggttgagaac tccagattgg ctttctccac ctgcgtttct

480

cacggagcca agcccgtgag cgagccagtt attcttaatg acgaggtggt tatctcagag

540

gtgcatcttt acggcgatgt ggttttgagg ttcgtttcct tcctcaagga ctctaaccgc

600

ttcgtgttcc ttccaggatt cgagttggtt gagggtgctc agctcgatta cggcattaga

660

aggctggacc acgccgtggg aaatgttcct caactgggtc ccgtggttga gtacatcaag

720

agcttcacag gattccatga gttcgctgag ttcaccgccg aggatgtggg tactgctgag

780

agcggcctca actcagtggt tctggccaac aatgacgaga ccgtgctttt cccattgaat

840

gagcctgttt acggcactaa gaggaagtca cagattcaaa cataccttga gcacaacgag

900

ggagctggtg tgcagcatct tgccttggtt acagaggata ttttcaggac cttgcgcgag

960

atgcgcaaga gatccggcat cggcggattc gagttcatgc cttctccacc tcccacttac

1020

tacaagaatc tcaagagccg cgctggagat attctgtcag acgagcaaat caaggagtgc

1080

gaggagctcg gtattctggt ggatagagat gaccagggca ctcttttgca aatcttcaca

1140

aagcccgttg gcgacagacc aacaattttc ctcgagatta tccagaggat cggctgcatg

1200

cttcaaaacg ctgagggaga gttgtaccag aagggtggct gcggaggttt cggcaaggga

1260

aatttcagcg agctcttcaa gtcaattgag gagtacgaga agaccctgga ggccaagcag

1320

aacactcaag tggctatcgc ctga

1344

<210> 126

<211> 447

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-StHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 126

Met Gly Lys Gln Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala

1 5 10 15

Asp Asp Gln Gln Leu Pro Ala Asp Ile Glu Asp Lys Tyr Lys Leu Val

20 25 30

Gly Phe Asn Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Arg Ser Asp Leu Phe Asn

35 40 45

Val Lys Arg Phe His His Ile Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn

50 55 60

Thr Ala Arg Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Leu Pro Ile Ala Ala Lys

65 70 75 80

Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg

85 90 95

Ser Ser Ser Ser Gln Leu Gln Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Pro

100 105 110

Ala Ile Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ser Ile Pro Thr Phe Ser Val Ser

115 120 125

Ser His Arg Ser Phe Thr Glu Thr His Gly Leu Gly Val Arg Ala Ile

130 135 140

Ala Leu Glu Val Glu Asn Ser Arg Leu Ala Phe Ser Thr Cys Val Ser

145 150 155 160

His Gly Ala Lys Pro Val Ser Glu Pro Val Ile Leu Asn Asp Glu Val

165 170 175

Val Ile Ser Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val

180 185 190

Ser Phe Leu Lys Asp Ser Asn Arg Phe Val Phe Leu Pro Gly Phe Glu

195 200 205

Leu Val Glu Gly Ala Gln Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His

210 215 220

Ala Val Gly Asn Val Pro Gln Leu Gly Pro Val Val Glu Tyr Ile Lys

225 230 235 240

Ser Phe Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val

245 250 255

Gly Thr Ala Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Asp

260 265 270

Glu Thr Val Leu Phe Pro Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg

275 280 285

Lys Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val

290 295 300

Gln His Leu Ala Leu Val Thr Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu

305 310 315 320

Met Arg Lys Arg Ser Gly Ile Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro

325 330 335

Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys Asn Leu Lys Ser Arg Ala Gly Asp Ile Leu

340 345 350

Ser Asp Glu Gln Ile Lys Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp

355 360 365

Arg Asp Asp Gln Gly Thr Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly

370 375 380

Asp Arg Pro Thr Ile Phe Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met

385 390 395 400

Leu Gln Asn Ala Glu Gly Glu Leu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly

405 410 415

Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr

420 425 430

Glu Lys Thr Leu Glu Ala Lys Gln Asn Thr Gln Val Ala Ile Ala

435 440 445

<210> 127

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-StHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 127

atgggcaaac aagccgccac cgccaccgcc actgccaccg ccaccgccga tgaccaacaa

60

ctccccgccg acattgaaga taaatataag ctagtgggtt tcaacaattt cgttcgtact

120

aatccccgtt cagatttatt caatgttaaa cgcttccatc acattgaatt ttggtgcggc

180

gacgctacca atactgctcg tcgcttttct tggggtctcg gtttgccaat tgctgctaaa

240

tctgatcttt ctactggaaa ctccgtccat gcttcttatc ttcttcgttc ttcttcttcc

300

caacttcaat tccttttcac tgctccttat tcccctgcta tctctacccc ttcttcttca

360

tcaattccaa ctttctccgt ctcttctcac cgatccttca cggaaaccca cggactcggt

420

gtgagagcaa tagcattgga agttgaaaat tcgcgtttgg ctttctcgac ctgtgtttct

480

catggggcaa aacccgtttc ggaaccagta attttgaatg atgaagttgt gatttcggaa

540

gttcatctct acggcgacgt cgttttgcgg tttgtgagtt ttctgaaaga ttcgaataga

600

tttgtttttc ttccgggttt tgaattggtg gagggagccc aacttgacta tggtattcgc

660

cggctggacc acgccgtagg gaatgtcccg cagctgggtc ccgttgttga gtatatcaaa

720

agctttaccg ggtttcatga atttgcggag tttacagctg aggatgttgg gacagctgag

780

agtgggctga attctgtggt gttggcaaac aatgatgaaa ctgttttgtt tccgctgaat

840

gaaccggtgt atgggactaa aaggaagagt caaattcaga cgtatttgga gcacaatgaa

900

ggggcagggg tgcagcattt agcattggta actgaggata tatttagaac tttgagggaa

960

atgaggaaaa ggagtggtat tgggggattt gagtttatgc cttcgcctcc tccgacgtat

1020

tataagaatt tgaagagcag ggcaggggat atactgagcg atgagcaaat aaaggaatgt

1080

gaagaattgg ggattttggt ggatagggat gatcagggga ctctgcttca gatagctaca

1140

aagcctgtag gggataggcc cacaattttt ctcgaaataa tccagagaat agggtgcatg

1200

ctgcaaaacg cggaaggtga gctttatcag aagggtggat gtggaggctt tggcaaggga

1260

aatttctcag agctctttaa atccatcgaa gaatatgaaa agacacttga agctaaacaa

1320

aacactcaag ttgccattgc ttga

1344

<210> 128

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-StHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 128

atgggaaagc aagctgctac tgctactgct acagctaccg ctactgccga tgaccagcaa

60

cttccagctg atattgagga caagtacaag ttggtgggtt tcaacaattt cgttagaact

120

aaccctaggt ccgatctctt caatgtgaag aggttccacc atattgagtt ctggtgcggt

180

gacgctacaa atactgctag gcgcttctct tggggacttg gactgccaat tgctgctaag

240

agcgatctgt caaccggcaa ttccgttcac gcctcttacc tcctgaggtc ctctagctca

300

cagctccaat tcctgttcac tgctccatac agccctgcca tttcaacacc ttcctctagc

360

tcaatcccca ccttctccgt gtcctctcac cgctctttca ctgagacaca tggtctgggc

420

gtgcgcgcta tcgcccttga ggttgagaac tccagattgg ctttctccac ctgcgtttct

480

cacggagcca agcccgtgag cgagccagtt attcttaatg acgaggtggt tatctcagag

540

gtgcatcttt acggcgatgt ggttttgagg ttcgtttcct tcctcaagga ctctaaccgc

600

ttcgtgttcc ttccaggatt cgagttggtt gagggtgctc agctcgatta cggcattaga

660

aggctggacc acgccgtggg aaatgttcct caactgggtc ccgtggttga gtacatcaag

720

agcttcacag gattccatga gttcgctgag ttcaccgccg aggatgtggg tactgctgag

780

agcggcctca actcagtggt tctggccaac aatgacgaga ccgtgctttt cccattgaat

840

gagcctgttt acggcactaa gaggaagtca cagattcaaa cataccttga gcacaacgag

900

ggagctggtg tgcagcatct tgccttggtt acagaggata ttttcaggac cttgcgcgag

960

atgcgcaaga gatccggcat cggcggattc gagttcatgc cttctccacc tcccacttac

1020

tacaagaatc tcaagagccg cgctggagat attctgtcag acgagcaaat caaggagtgc

1080

gaggagctcg gtattctggt ggatagagat gaccagggca ctcttttgca aatcgctaca

1140

aagcccgttg gcgacagacc aacaattttc ctcgagatta tccagaggat cggctgcatg

1200

cttcaaaacg ctgagggaga gttgtaccag aagggtggct gcggaggttt cggcaaggga

1260

aatttcagcg agctcttcaa gtcaattgag gagtacgaga agaccctgga ggccaagcag

1320

aacactcaag tggctatcgc ctga

1344

<210> 129

<211> 441

<212> ПРТ

<213> SlHPPD Аминокислотная последовательность (Solanum

lycopersicum)

<400> 129

Met Gly Lys Gln Ala Ala Ala Ala Ala Asp Asp Gln Gln Leu Pro Gly

1 5 10 15

Asp Ile Glu Asp Lys Phe Lys Leu Val Gly Phe Asn His Phe Val Arg

20 25 30

Thr Asn Pro Arg Ser Asp Phe Phe Thr Val Lys Arg Phe His His Ile

35 40 45

Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg Arg Phe Ser Trp

50 55 60

Gly Leu Gly Leu Pro Ile Ala Ala Ile Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn

65 70 75 80

Ser Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Ser Ser Ser Ser Gln Leu

85 90 95

Gln Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Ser Ala Ile Ser Thr Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Ile Pro Thr Phe Ser Val Ser Ser His Arg Ser Phe Thr

115 120 125

Ala Thr His Gly Leu Gly Val Arg Ala Ile Ala Leu Glu Val Glu Asn

130 135 140

Ser Arg Leu Ala Phe Ser Thr Cys Val Ala His Gly Ala Lys Pro Val

145 150 155 160

Ser Glu Pro Val Ile Leu Asn Asp Glu Val Val Ile Ala Glu Val His

165 170 175

Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Phe Leu Lys Asp Ser

180 185 190

Asn Cys Phe Val Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ser Val Glu Gly Ala Gln

195 200 205

Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro

210 215 220

Glu Leu Gly Pro Val Val Glu Tyr Ile Lys Ser Phe Thr Gly Phe His

225 230 235 240

Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly

245 250 255

Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Asp Glu Thr Val Leu Phe Pro

260 265 270

Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr

275 280 285

Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Val

290 295 300

Thr Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly

305 310 315 320

Ile Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys

325 330 335

Asn Leu Lys Thr Arg Ala Gly Asp Ile Leu Ser Asp Glu Gln Ile Gln

340 345 350

Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr

355 360 365

Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe

370 375 380

Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Leu Lys Asn Glu Glu Gly

385 390 395 400

Glu Leu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe

405 410 415

Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ala

420 425 430

Lys Gln Asn Thr Gln Val Ala Ile Ala

435 440

<210> 130

<211> 1326

<212> ДНК

<213> SlHPPD-01 Нуклеотидная последовательность (Solanum

lycopersicum)

<400> 130

atgggcaaac aagccgctgc cgccgccgat gaccaacaac tccccggcga cattgaagat

60

aaattcaagc tagtgggttt caaccatttt gtccgtacta atccccgttc agatttcttc

120

actgttaaac gcttccatca cattgaattt tggtgcggcg acgctaccaa tactgctcgt

180

cgcttttcat ggggtctcgg tttgccaatt gctgctatat ctgatctttc tactggaaac

240

tccgtccatg cttcttatct tcttcgttct tcttcttcgt cccaacttca attccttttc

300

actgctcctt attcctctgc tatctctacc tcttcttctg catcaattcc aactttctct

360

gtttcttccc accgatcctt cacggctacc cacgggctcg gtgtgagagc aatagcattg

420

gaagttgaaa attcgcgttt ggctttctcg acctgtgttg ctcatggggc aaaacccgtt

480

tcggaaccag tcattttgaa tgatgaagtt gtgattgccg aagttcatct ctacggcgac

540

gtcgttttgc ggtttgtgag ttttctcaaa gattcgaatt gcttcgtttt tcttccaggc

600

tttgaatcag ttgagggagc ccaacttgac tatggtattc gccggctgga ccacgctgta

660

gggaatgtcc cggagctggg tccggttgta gagtatatca aaagctttac tgggtttcat

720

gaatttgcgg agtttaccgc tgaggatgtt gggacagctg agagtgggct gaattctgtg

780

gtgttggcaa acaatgatga aactgttttg tttccgctga atgaaccggt gtatggcact

840

aaaaggaaga gtcaaattca gacgtatttg gagcacaatg aaggggcagg ggtgcagcat

900

ttagctttgg taactgagga tatatttaga actttgaggg aaatgaggaa aaggagtgga

960

attgggggat ttgaattcat gccatcgcct cccccgacgt attataaaaa tttgaaaacc

1020

agggcagggg atatactgag tgatgagcaa atacaggaat gtgaagaatt ggggatcttg

1080

gtggataggg atgatcaggg gactctgctt cagatattca caaagcctgt aggggatagg

1140

cctacaattt ttctcgaaat aattcagaga atagggtgca tgctgaaaaa cgaggaagga

1200

gagctttatc agaagggtgg atgtggaggc ttcggaaagg gaaatttctc agagctcttt

1260

aaatccatcg aagaatatga aaagacactt gaagctaaac aaaacactca agtagcgatt

1320

gcttga

1326

<210> 131

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SlHPPD-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 131

atgggcaagc aagctgctgc tgctgctgat gaccagcaac tccctggaga tattgaggac

60

aagttcaagc tggtgggttt caaccacttc gttagaacaa atcccaggag cgatttcttc

120

accgtgaaga ggttccacca tatcgagttc tggtgcggag acgctaccaa cactgccagg

180

cgcttctcat ggggcctcgg actgcccatt gctgccatct ccgatctctc tacaggtaat

240

agcgttcatg cttcatacct cctgcgctcc tctagctcat cccagctcca attcctgttc

300

accgctccct actctagcgc catttccact tcatcctctg ctagcatccc aacattctca

360

gtgagctcac acagatcttt cacagccacc catggtttgg gcgtgcgcgc tattgccctc

420

gaggttgaga actccagact ggctttctct acctgcgttg ctcacggcgc caagccagtg

480

tccgagcctg ttattctgaa tgacgaggtg gttatcgccg aggtgcatct ctacggagat

540

gtggttctga ggttcgttag cttccttaag gactcaaact gcttcgtgtt ccttccagga

600

ttcgagtccg ttgagggtgc tcagcttgat tacggcatta gaaggttgga ccacgccgtg

660

ggaaatgttc ccgagttggg tccagtggtt gagtacatca agtctttcac tggcttccat

720

gagttcgctg agttcactgc cgaggatgtg ggtacagctg agtccggcct taactctgtg

780

gttttggcca acaatgacga gacagtgctt ttccctttga atgagcccgt ttacggaacc

840

aagcgcaaga gccagatcca aacttacctc gagcacaacg agggagctgg tgtgcaacat

900

cttgccttgg ttaccgagga tattttcagg actctgcgcg agatgcgcaa gagaagcggt

960

atcggcggat tcgagttcat gccttcacca cctcccactt actacaagaa tcttaagaca

1020

agagctggcg atattttgtc agacgagcag atccaagagt gcgaggagct cggtattctg

1080

gtggataggg atgaccaggg cacacttttg caaatcttca ccaagccagt tggcgacagg

1140

cctactattt tcctcgagat tatccagcgc atcggctgca tgctcaagaa cgaggaggga

1200

gagctgtacc aaaagggtgg ctgcggaggt ttcggcaagg gaaatttctc cgagcttttc

1260

aagtctattg aggagtacga gaagaccttg gaggccaagc agaacactca agtggctatc

1320

gcctga

1326

<210> 132

<211> 441

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность-SlHPPDm-F372A Аминокислотная

последовательность

<400> 132

Met Gly Lys Gln Ala Ala Ala Ala Ala Asp Asp Gln Gln Leu Pro Gly

1 5 10 15

Asp Ile Glu Asp Lys Phe Lys Leu Val Gly Phe Asn His Phe Val Arg

20 25 30

Thr Asn Pro Arg Ser Asp Phe Phe Thr Val Lys Arg Phe His His Ile

35 40 45

Glu Phe Trp Cys Gly Asp Ala Thr Asn Thr Ala Arg Arg Phe Ser Trp

50 55 60

Gly Leu Gly Leu Pro Ile Ala Ala Ile Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn

65 70 75 80

Ser Val His Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Ser Ser Ser Ser Gln Leu

85 90 95

Gln Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ser Ser Ala Ile Ser Thr Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Ile Pro Thr Phe Ser Val Ser Ser His Arg Ser Phe Thr

115 120 125

Ala Thr His Gly Leu Gly Val Arg Ala Ile Ala Leu Glu Val Glu Asn

130 135 140

Ser Arg Leu Ala Phe Ser Thr Cys Val Ala His Gly Ala Lys Pro Val

145 150 155 160

Ser Glu Pro Val Ile Leu Asn Asp Glu Val Val Ile Ala Glu Val His

165 170 175

Leu Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Phe Leu Lys Asp Ser

180 185 190

Asn Cys Phe Val Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ser Val Glu Gly Ala Gln

195 200 205

Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val Gly Asn Val Pro

210 215 220

Glu Leu Gly Pro Val Val Glu Tyr Ile Lys Ser Phe Thr Gly Phe His

225 230 235 240

Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly

245 250 255

Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Asp Glu Thr Val Leu Phe Pro

260 265 270

Leu Asn Glu Pro Val Tyr Gly Thr Lys Arg Lys Ser Gln Ile Gln Thr

275 280 285

Tyr Leu Glu His Asn Glu Gly Ala Gly Val Gln His Leu Ala Leu Val

290 295 300

Thr Glu Asp Ile Phe Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Lys Arg Ser Gly

305 310 315 320

Ile Gly Gly Phe Glu Phe Met Pro Ser Pro Pro Pro Thr Tyr Tyr Lys

325 330 335

Asn Leu Lys Thr Arg Ala Gly Asp Ile Leu Ser Asp Glu Gln Ile Gln

340 345 350

Glu Cys Glu Glu Leu Gly Ile Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Thr

355 360 365

Leu Leu Gln Ile Ala Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Ile Phe

370 375 380

Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Leu Lys Asn Glu Glu Gly

385 390 395 400

Glu Leu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe

405 410 415

Ser Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Tyr Glu Lys Thr Leu Glu Ala

420 425 430

Lys Gln Asn Thr Gln Val Ala Ile Ala

435 440

<210> 133

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SlHPPDm-F372A-01 Нуклеотидная

последовательность

<400> 133

atgggcaaac aagccgctgc cgccgccgat gaccaacaac tccccggcga cattgaagat

60

aaattcaagc tagtgggttt caaccatttt gtccgtacta atccccgttc agatttcttc

120

actgttaaac gcttccatca cattgaattt tggtgcggcg acgctaccaa tactgctcgt

180

cgcttttcat ggggtctcgg tttgccaatt gctgctatat ctgatctttc tactggaaac

240

tccgtccatg cttcttatct tcttcgttct tcttcttcgt cccaacttca attccttttc

300

actgctcctt attcctctgc tatctctacc tcttcttctg catcaattcc aactttctct

360

gtttcttccc accgatcctt cacggctacc cacgggctcg gtgtgagagc aatagcattg

420

gaagttgaaa attcgcgttt ggctttctcg acctgtgttg ctcatggggc aaaacccgtt

480

tcggaaccag tcattttgaa tgatgaagtt gtgattgccg aagttcatct ctacggcgac

540

gtcgttttgc ggtttgtgag ttttctcaaa gattcgaatt gcttcgtttt tcttccaggc

600

tttgaatcag ttgagggagc ccaacttgac tatggtattc gccggctgga ccacgctgta

660

gggaatgtcc cggagctggg tccggttgta gagtatatca aaagctttac tgggtttcat

720

gaatttgcgg agtttaccgc tgaggatgtt gggacagctg agagtgggct gaattctgtg

780

gtgttggcaa acaatgatga aactgttttg tttccgctga atgaaccggt gtatggcact

840

aaaaggaaga gtcaaattca gacgtatttg gagcacaatg aaggggcagg ggtgcagcat

900

ttagctttgg taactgagga tatatttaga actttgaggg aaatgaggaa aaggagtgga

960

attgggggat ttgaattcat gccatcgcct cccccgacgt attataaaaa tttgaaaacc

1020

agggcagggg atatactgag tgatgagcaa atacaggaat gtgaagaatt ggggatcttg

1080

gtggataggg atgatcaggg gactctgctt cagatagcta caaagcctgt aggggatagg

1140

cctacaattt ttctcgaaat aattcagaga atagggtgca tgctgaaaaa cgaggaagga

1200

gagctttatc agaagggtgg atgtggaggc ttcggaaagg gaaatttctc agagctcttt

1260

aaatccatcg aagaatatga aaagacactt gaagctaaac aaaacactca agtagcgatt

1320

gcttga

1326

<210> 134

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность-SlHPPDm-F372A-02 Нуклеотидная

последовательность

<400> 134

atgggcaagc aagctgctgc tgctgctgat gaccagcaac tccctggaga tattgaggac

60

aagttcaagc tggtgggttt caaccacttc gttagaacaa atcccaggag cgatttcttc

120

accgtgaaga ggttccacca tatcgagttc tggtgcggag acgctaccaa cactgccagg

180

cgcttctcat ggggcctcgg actgcccatt gctgccatct ccgatctctc tacaggtaat

240

agcgttcatg cttcatacct cctgcgctcc tctagctcat cccagctcca attcctgttc

300

accgctccct actctagcgc catttccact tcatcctctg ctagcatccc aacattctca

360

gtgagctcac acagatcttt cacagccacc catggtttgg gcgtgcgcgc tattgccctc

420

gaggttgaga actccagact ggctttctct acctgcgttg ctcacggcgc caagccagtg

480

tccgagcctg ttattctgaa tgacgaggtg gttatcgccg aggtgcatct ctacggagat

540

gtggttctga ggttcgttag cttccttaag gactcaaact gcttcgtgtt ccttccagga

600

ttcgagtccg ttgagggtgc tcagcttgat tacggcatta gaaggttgga ccacgccgtg

660

ggaaatgttc ccgagttggg tccagtggtt gagtacatca agtctttcac tggcttccat

720

gagttcgctg agttcactgc cgaggatgtg ggtacagctg agtccggcct taactctgtg

780

gttttggcca acaatgacga gacagtgctt ttccctttga atgagcccgt ttacggaacc

840

aagcgcaaga gccagatcca aacttacctc gagcacaacg agggagctgg tgtgcaacat

900

cttgccttgg ttaccgagga tattttcagg actctgcgcg agatgcgcaa gagaagcggt

960

atcggcggat tcgagttcat gccttcacca cctcccactt actacaagaa tcttaagaca

1020

agagctggcg atattttgtc agacgagcag atccaagagt gcgaggagct cggtattctg

1080

gtggataggg atgaccaggg cacacttttg caaatcgcta ccaagccagt tggcgacagg

1140

cctactattt tcctcgagat tatccagcgc atcggctgca tgctcaagaa cgaggaggga

1200

gagctgtacc aaaagggtgg ctgcggaggt ttcggcaagg gaaatttctc cgagcttttc

1260

aagtctattg aggagtacga gaagaccttg gaggccaagc agaacactca agtggctatc

1320

gcctga

1326

<210> 135

<211> 504

<212> ПРТ

<213> AhHPPD Аминокислотная последовательность (Arachis hypogaea)

<400> 135

Met Ala Thr Ala Tyr Thr Tyr Ala His Ala Val Thr Tyr Cys Asn Ser

1 5 10 15

Gln His Asn Pro Pro Ile Ile Pro Ile Leu Ser Thr Asn Gln His Pro

20 25 30

Pro Arg Val Thr Leu Pro Ser Ser Ile Pro His Phe Ile Ser Thr Ile

35 40 45

Thr Thr Phe Asn Leu Lys His Phe Pro Ser His Ser Leu His Thr Val

50 55 60

Met Val Thr Gln Thr Gln Gln Asn Ala Pro Ser Ser Ser Pro Glu Leu

65 70 75 80

Gly Phe Lys Leu Val Gly Phe Lys Asn Phe Val Arg Thr Asn Pro Lys

85 90 95

Ser Asp Arg Phe Lys Val Ile Arg Phe His His Val Glu Phe Trp Cys

100 105 110

Thr Asp Ala Thr Asn Thr Ala Ser Arg Phe Ser Trp Gly Leu Gly Met

115 120 125

Pro Ile Val Ala Lys Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ala Val His Ala

130 135 140

Ser Tyr Leu Leu Arg Ser Gly Asp Leu Asn Phe Leu Phe Ser Ala Pro

145 150 155 160

Tyr Ser Ala Ser Ile Ala Gly Asp Gly Ala Ser Ala Ser Phe Pro Ser

165 170 175

Phe Ser Ala Ser Asp Cys His Ser Phe Ala Ala Lys His Gly Leu Ala

180 185 190

Val Arg Ala Val Ala Ile Glu Val Glu Asp Ala Ser Ala Ala Phe Ser

195 200 205

Ala Ser Val Ala Asn Gly Ala Lys Pro Val Ser Pro Ala Val Leu Leu

210 215 220

Asp Asn Ser Val Gly Phe Ala Glu Val His Leu Tyr Gly Asp Val Val

225 230 235 240

Leu Arg Tyr Ile Ser Tyr Ser Ala Pro Thr Arg Glu Ser Asn Leu Asn

245 250 255

Pro Thr Leu Arg Phe Leu Pro Gly Phe Glu Ala Val Glu Ala Asp Ser

260 265 270

Ser Phe Pro Glu Leu Asp Tyr Gly Ile Arg Arg Leu Asp His Ala Val

275 280 285

Gly Asn Val Pro Glu Leu Ala Pro Ala Val Asn Tyr Leu Lys Lys Phe

290 295 300

Thr Gly Phe His Glu Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr

305 310 315 320

Ser Glu Ser Gly Leu Asn Ser Val Val Leu Ala Ser Asn Asp Glu Met