КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ГЛИКОЗИЛИРОВАННУЮ СТЕВИЮ И ОБЛАДАЮЩАЯ УЛУЧШЕННЫМ КАЧЕСТВОМ СЛАДОСТИ Российский патент 2024 года по МПК A23L27/30 A23L9/00 C12N9/10 

Область техники

Настоящее изобретение относится к композиции подсластителя, включающей гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С, составу для получения подсластителя, способу получения подсластителя с использованием побочного продукта стевиолгликозида и к способу улучшения качества сладости.

Предшествующий уровень техники

В ответ на опасения относительно заболеваний, вызванных избыточным потреблением сахара современными людьми и рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по снижению потребления сахара в развитых странах активно обсуждаются политические меры по сокращению потребления сахара, и на рынке постоянно разрабатываются заменители сахара. В связи с этим, стевия, которая в последнее время получила значительное внимание в качестве заменителя сахара, представляет собой натуральный подсластитель высокой интенсивности, имеющий сладость в 200-300 раз больше, чем сахар, и, как сообщалось, не содержит калорий и не вызывает побочных эффектов в организме человека, и, таким образом, была одобрена возможность ее применения в качестве заместителя сахара.

Известно, что среди имеющихся в продаже подсластителей из стевии ребаудиозид А высокой степени чистоты с чистотой от 95% до 97% имеет самую высокую коммерческую ценность. Однако для получения стевии высокой степени чистоты, высокоинтенсивного подсластителя, требуется процесс кристаллизации, и компоненты, имеющие низкое качество сладости, содержатся в больших количествах в жидкофазном побочном продукте, образующемся при отделении твердого вещества. Компоненты побочного продукта обычно представляют собой стевиозид, ребаудиозид С и тому подобное. Так как коммерческая ценность побочного продукта является низкой из-за сильного горького вкуса, побочный продукт сушат для использования в качестве недорогого удобрения или корма для животных или продают по низкой цене.

С целью решения таких задач были предприняты попытки искусственно увеличивать содержание ребаудиозида А и получать ребаудиозид А в большом количестве посредством селекции растения, включающего высокое содержание ребаудиозида А (публикация заявки на патент США №2009-0214753). Однако, так как эти способы не могут обеспечивать достаточную эффективность и имеют ограничения с точки зрения затрат и качества, существует потребность в способе сокращения производства побочного продукта посредством повышения эффективности производства подсластителей из стевии или в способе повышения коммерческой ценности побочного продукта.

Описание изобретения

Техническая задача

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что композиция гликозилированной стевии, имеющая конкретное соотношение состава, может быть получена посредством применения культурального бульона Lactobacillus mali в виде неочищенной ферментативной жидкости к побочному продукту, полученному в процессе производства стевиола, и подтвердили, что композиция гликозилированной стевии, имеющая конкретное соотношение состава, может быть использована в качестве продукта с высокой добавленной стоимостью с улучшенным качеством сладости.

Техническое решение

Цель настоящего изобретения заключается в предложении композиции подсластителя, включающей гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С.

Другая цель настоящего изобретения заключается в предложении состава для получения подсластителя, включающего побочный продукт стевиолгликозид.

Другая цель настоящего изобретения заключается в предложении способа получения композиции подсластителя, включающего гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С.

Другая цель настоящего изобретения заключается в предложении способа улучшения качества сладости.

Другая цель настоящего изобретения заключается в предложении применения для получения композиции подсластителя.

Другая цель настоящего изобретения заключается в предложении применения для улучшения качества сладости.

Полезные эффекты

В случае использования способа улучшения качества сладости и способа получения подсластителя, композиция подсластителя, имеющая конкретное соотношение состава, может быть получена с использованием побочного продукта, полученного в процессе производства стевиола. Кроме того, так как композиция подсластителя, имеющая конкретное соотношение состава, и композиция для получения подсластителя имеют превосходное качество сладости, их можно использовать для изготовления продуктов с высокой добавленной стоимостью, таких как пищевые продукты и корма, в различных областях промышленности.

Краткое описание графических материалов

На ФИГ. 1-3 показаны результаты ВЭЖХ композиций, включающих гликозилированные стевиолгликозиды, полученные из побочных продуктов стевиолгликозида.

Лучший вариант

Далее в данном документе настоящее изобретение будет описано подробно. При этом, в настоящем изобретении каждое из объяснений и примерных воплощений, раскрытых здесь, может быть применено к другим объяснениям и примерным воплощениям. Кроме того, в настоящем изобретении все комбинации различных факторов, раскрытые в данном описании изобретения, относятся к объему настоящего изобретения. Кроме того, объем настоящего изобретения не должен ограничиваться конкретным описанием, предложенным ниже.

В одном аспекте настоящего изобретения предлагается композиция подсластителя, включающая гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С. Конкретно, композиция подсластителя включает от 5 до 30 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 5 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя.

Композиция подсластителя может иметь улучшенное качество сладости по сравнению с имеющимся в продаже ребаудиозидом А высокой чистоты, конкретно, композиция подсластителя может иметь улучшенное качество сладости по сравнению с ребаудиозидом А, имеющим чистоту 95% или более, и, более конкретно, улучшение качества сладости может включать улучшенную сладость, уменьшенный неприятный привкус, и/или уменьшенный неприятный запах, но без ограничения этим.

Композиция подсластителя может иметь конкретное соотношение состава при помощи однокомпонентной реакции посредством обработки типичного побочного продукта стевиолгликозида тралсглюкозилазой, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культуру микроорганизма или Lactobacillus mali, но без ограничения этим.

Композиция подсластителя может дополнительно включать кофактор, способный улучшать стабильность композиции подсластителя, но без ограничения этим Примеры кофактора могут включать ион металла, соль металла, эксципиент и консервант, но без ограничения ими.

Гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С представляют собой гликозилированные стевиолгликозиды в которых глюкозу связывают с ребаудиозидом А, стевиозидом и ребаудиозидом С, которые представляют собой стевиолгликозиды, соответственно.

В настоящем изобретении «стевиолгликозид» представляет собой натуральный подсластитель и может быть представлен Формулой 1 ниже.

Формула 1

В Формуле 1 в R₁ посредством β-связи может быть связан водород (Н) или могут быть связаны от 1-3 молекул глюкозы, и в R₂ может быть связана посредством β-связи одна молекула глюкозы, ксилозы и рамнозы и посредством β-связи могут быть связаны с ним 0-2 молекулы глюкозы, но без ограничения этим.

Стевиолгликозид может включать по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из стевиозида, рубузозида, дулькозида А, ребаудиозида А, ребаудиозида С, ребаудиозида D, ребаудиозида Е, ребаудиозида F и ребаудиозида М, но без ограничения этим.

Эти стевиолгликозиды могут быть модифицированы в гликозилированные стевиолгликозиды в присутствии неочищенной ферментативной жидкости, имеющей активность трансгликозилирования, трансгликозилазы, где трансглюкозилаза включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего ее, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali и донора глюкозы, но без ограничения этим.

В настоящем изобретении термин «донор глюкозы» относится к любому из олигомеров или полимеров глюкозы и их циклических форм, участвующих в реакциях по переносу одной или более молекул глюкозы к стевиолгликозиду в присутствии трансглюкозилазы, и конкретно может представлять собой сахар, но без ограничения этим.

В настоящем изобретении, так как «ребаудиозид А», «стевиозид» и «ребаудиозид С" представляют собой стевиолгликозиды, они могут иметь структурные характеристики Формулы 1, приведенной выше. Конкретно, ребаудиозид А может быть представлен Формулой 2 ниже, стевиозид может быть представлен Формулой 3 ниже и ребаудиозид С может быть представлен Формулой 4 или 5 ниже.

Формула 2

Формула 3

Формула 4

Формула 5

В настоящем изобретении «гликозилированный стевиолгликозид» может представлять собой продукт, в котором глюкоза добавляется к стевиолгликозиду.

Гликозилированный стевиолгликозид может быть в форме, в которой 1-4 молекулы глюкозы добавляют к сайту 19-ОН (-ОН C₁₉ в случае, когда R₁ Формулы 1 представляет собой Н) посредством α-связи, более конкретно, добавляют к глюкозе, конъюгированной с сайтом 19-ОН стевиолгликозид а посредством α-(1,6) связи, но без ограничения этим.

Гликозилированный ребаудиозид А может быть, например, в форме, в которой глюкозу добавляют в положение C₆ глюкозы, конъюгированной с сайтом С19 посредством α-(1,6) связи, и может представлять собой 6-О-α-D-глюкопираноза-β-D-глюкопиранозиловый эфир 13-[(2-O-β-D-глюкопиранозил-3-O-β-D-глюкопиранозил-β-D-глюкопиранозил)окси]энт-каур-16-ен-19-оиковой кислоты, как показано в формуле 6, но без ограничения этим.

Гликозилированный стевиозид может быть, например, в форме, в которой глюкоза добавляется в положение С₆ глюкозы, конъюгированной с сайтом С19 посредством α-(1,6) связи, более конкретно, 6-О-α-D-глюкопиранозил-β-D-глюкопиранозиловый эфир 13-[(2-O-β-D-глюкопиранозил-β-D-глюкопиранозил)окси]энт-каур-16-ен-19-оиковой кислоты, как показано в Формуле 7, но без ограничения этим.

Формула 6

Формула 7

Гликозилированный стевиолгликозид может быть получен с использованием сахара и стевиолгликозида в качестве субстратов посредством добавления глюкозы к стевиолгликозиду с помощью трансглюкозилазы, где трансглюкозилаза включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего такую последовательность, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali, но без ограничения этим.

«Гликозилированный ребаудиозид А» может представлять собой продукт, в котором глюкозу добавляют к ребаудиозиду А, «гликозилированный стевиозид» может представлять собой продукт, в котором глюкозу добавляют к стевиозиду, и «гликозилированный ребаудиозид С» может представлять собой продукт, в котором глюкозу добавляют к ребаудиозиду С.

Гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С могут представлять собой продукты, в которые глюкоза добавляется посредством конъюгации глюкозы с сайтом 19-ОН посредством α-(1,6) связи, но без ограничения этим.

Гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С могут включать от 1 до 4 молекул глюкозы, но без ограничения этим.

Конкретно, композиция подсластителя может включать гликозилированный ребаудиозид А в количестве от 5 до 30 масс. частей, от 6 до 30 масс. частей, от 7 до 30 масс. частей, от 8 до 30 масс. частей, от 9 до 30 масс. частей, от 10 до 30 масс. частей, от 11 до 30 масс. частей, масс. от 11,33 до 30 масс. частей, от 12 до 30 масс. частей, от 13 до 30 масс. частей, от 13,09 до 30 масс. частей, от 14 до 30 масс. частей, от 14,4 до 30 масс. частей, от 5 до 28 масс. частей, от 6 до 28 масс. частей, от 7 до 28 масс. частей, от 8 до 28 масс. частей, от 9 до 28 масс. частей, от 10 до 28 масс. частей, от 11 до 28 масс. частей, от 11,33 до 28 масс. частей, от 12 до 28 масс. частей, от 13 до 28 масс. частей, от 13,09 до 28 масс. частей, от 14 до 28 масс. частей, от 14,4 до 28 масс. частей, от 5 до 20 масс. частей, от 6 до 20 масс. частей, от 7 до 20 масс. частей, от 8 до 20 масс. частей, от 9 до 20 масс. частей, от 10 до 20 масс. частей, от 11 до 20 масс. частей, от 11,33 до 20 масс. частей, от 12 до 20 масс. частей, от 13 до 20 масс. частей, от 13,09 до 20 масс. частей, от 14 до 20 масс. частей, от 14,4 до 20 масс. частей, от 5 до 15 масс. частей, от 6 до 15 масс. частей, от 7 до 15 масс. частей, от 8 до 15 масс. частей, от 9 до 15 масс. частей, от 10 до 15 масс. частей, от 5 до 15 масс. частей, от 6 до 15 масс. частей, 7 до 15 масс. частей, от 8 до 15 масс. частей, от 9 до 15 масс. частей, от 10 до 15 масс. частей, от 11 до 15 масс. частей, от 11,33 до 15 масс. частей, от 12 до 15 масс. частей, от 13 до 15 масс. частей, от 13,09 до 15 масс. частей, от 5 до 14,4 масс. частей, от 6 до 14,4 масс. частей, от 7 до 14,4 масс. частей, от 8 до 14,4 масс. частей, от 9 до 14,4 масс. частей, от 10 до 14,4 масс. частей, от 11 до 14,4 масс. частей, от 11,33 до 14,4 масс. частей, от 12 до 14,4 масс. частей, от 13 до 14,4 масс. частей, от 13,09 до 14,4 масс. частей, от 5 до 13,09 масс. частей, от 6 до 13,09 масс. частей, от 7 до 13,09 масс. частей, 8 до 13,09 масс. частей, от 9 до 13,09 масс. частей, от 10 до 13,09 масс. частей, от 11 до 13,09 масс. частей, или от 11,33 до 13,09 масс. частей в расчете на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

Композиция подсластителя может включать гликозилированный стевиозид в количестве от 5 до 30 масс. частей, от 6 до 30 масс. частей, от 7 до 30 масс. частей, от 8 до 30 масс. частей, от 9 до 30 масс. частей, от 10 до 30 масс. частей, от 11 до 30 масс. частей, от 11,41 до 30 масс. частей, от 12 до 30 масс. частей, от 13 до 30 масс. частей, от 14 до 30 масс. частей, от 15 до 30 масс. частей, от 16 до 30 масс. частей, от 17 до 30 масс. частей, от 18 до 30 масс. частей, от 19 до 30 масс. частей, от 20 до 30 масс. частей, от 20,12 до 30 масс. частей, от 21 до 30 масс. частей, от 22 до 30 масс. частей, от 23 до 30 масс. частей, от 24 до 30 масс. частей, от 25 до 30 масс. частей, от 26 до 30 масс. частей, от 26,6 до 30 масс. частей, от 5 до 27 масс. частей, от 6 до 27 масс. частей, от 7 до 27 масс. частей, от 8 до 27 масс. частей, от 9 до 27 масс. частей, от 10 до 27 масс. частей, от 11 до 27 масс. частей, от 11,41 до 27 масс. частей, от 12 до 27 масс. частей, от 13 до 27 масс. частей, от 14 до 27 масс. частей, от 15 до 27 масс. частей, от 16 до 27 масс. частей, от 17 до 27 масс. частей, от 18 до 27 масс. частей, от 19 до 27 масс. частей, от 20 до 27 масс. частей, от 20,12 до 27 масс. частей, от 5 до 26,6 масс. частей, от 6 до 26,6 масс. частей, от 7 до 26,6 масс. частей, от 8 до 26,6 масс. частей, 9 до 26,6 масс. частей, от 10 до 26,6 масс. частей, от 11 до 26,6 масс. частей, от 11,41 до 26,6 масс. частей, от 12 до 26,6 масс. частей, от 13 до 26,6 масс. частей, от 14 до 26,6 масс. частей, от 15 до 26,6 масс. частей, от 16 до 26,6 масс. частей, от 17 до 26,6 масс. частей, от 18 до 26,6 масс. частей, от 19 до 26,6 масс. частей, от 20 до 26,6 масс. частей, от 20,12 до 26,6 масс. частей, от 5 до 25 масс. частей, от 6 до 25 масс. частей, от 7 до 25 масс. частей, от 8 до 25 масс. частей, от 9 до 25 масс. частей, от 10 до 25 масс. частей, от 11 до 25 масс. частей, 11,41 до 25 масс. частей, от 12 до 25 масс. частей, от 13 до 25 масс. частей, от 14 до 25 масс. частей, от 15 до 25 масс. частей, от 16 до 25 масс. частей, от 17 до 25 масс. частей, от 18 до 25 масс. частей, от 19 до 25 частей по вес, от 20 до 25 масс. частей, от 5 до 20,12 масс. частей, от 6 до 20,12 масс. частей, от 7 до 20,12 масс. частей, от 8 до 20,12 масс. частей, от 9 до 20,12 масс. частей, от 10 до 20,12 масс. частей, от 11 до 20,12 масс. частей, от 11,41 до 20,12 масс. частей, от 12 до 20,12 масс. частей, от 13 до 20,12 масс. частей, от 14 до 20,12 масс. частей, от 15 до 20,12 масс. частей, от 16 до 20,12 масс. частей, от 17 до 20,12 масс. частей, от 18 до 20,12 масс. частей, от 19 до 20,12 масс. частей или от 20 до 20,12 масс. частей из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

Композиция подсластителя может включать гликозилированный ребаудиозид С в количестве от 5 до 20 масс. частей, от 6 до 20 масс. частей, от 7 до 20 масс. частей, от 7,12 до 20 масс. частей, от 8 до 20 масс. частей, от 9 до 20 масс. частей, от 9,26 до 20 масс. частей, от 10 до 20 масс. частей, от 10,24 до 20 масс. частей, от 5 до 15 масс. частей, от 6 до 15 масс. частей, от 7 до 15 масс. частей, от 7,12 до 15 масс. частей, от 8 до 15 масс. частей, от 9 до 15 масс. частей, от 9,26 до 15 масс. частей, от 10 до 15 масс. частей, от 10,24 до 15 масс. частей, от 5 до 11 масс. частей, от 6 до 11 масс. частей, от 7 до 11 масс. частей, от 7,12 до 11 масс. частей, от 8 до 11 масс. частей, от 9 до 11 масс. частей, от 9,26 до 11 масс. частей, от 10 до 11 масс. частей, от 10,24 до 11 масс. частей, от 5 до 10,24 масс. частей, от 6 до 10,24 масс. частей, от 7 до 10,24 масс. частей, от 7,12 до 10,24 масс. частей, от 8 до 10,24 масс. частей, от 9 до 10,24 масс. частей, от 9,26 до 10,24 масс. частей, от 10 до 10,24 масс. частей, от 5 до 10 масс. частей, от 6 до 10 масс. частей, от 7 до 10 масс. частей, от 7,12 до 10 масс. частей, от 8 до 10 масс. частей, от 9 до 10 масс. частей, от 9,26 до 10 масс. частей, от 5 до 9,26 масс. частей, от 6 до 9,26 масс. частей, 7 до 9,26 масс. частей, от 7,12 до 9,26 масс. частей, от 8 до 9,26 масс. частей, или от 9 до 9,26 масс. частей из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

В конкретном воплощении композиция подсластителя может дополнительно включать гликозилированный ребаудиозид F, гликозилированный дулькозид А или гликозилированный рубузозид, но без ограничения этим.

В настоящем изобретении «гликозилированный ребаудиозид F» представляет собой тип гликозилированного стевиолгликозида, в котором глюкозу добавляют к «ребаудиозиду F».

В настоящем изобретении «ребаудиозид F», в качестве типа стевиолгликозида, может иметь структурные характеристики Формулы 1 и может быть представлен Формулой 8 ниже.

Формула 8

В настоящем изобретении «гликозилированный дулькозид А» представляет собок тип гликозилированного стевиолгликозида, в котором глюкозу добавляют к «дулькозиду А».

В настоящем изобретении «дулькозид А», в качестве типа стевиолгликозида, может иметь структурные характеристики Формулы 1 и может быть представлен Формулой 9 ниже.

Формула 9

В настоящем изобретении «гликозилированный рубузозид» представляет собой тип гликозилированного стевиолгликозида, в котором глюкозу добавляют к «рубузозиду».

В настоящем изобретении «рубузозид», в качестве типа стевиолгликозида, может иметь структурные характеристики Формулы 1 и может быть представлен Формулой 10 ниже.

Формула 10

Композиция подсластителя может дополнительно включать по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из гликозилированного ребаудиозида F в количестве от 0,5 до 3 масс. частей, гликозилированного дулькозида А в количестве от 0,5 до 3 масс. частей и гликозилированного рубузозида в количестве от 0,5 до 5 масс. частей из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

Конкретно, композиция подсластителя может включать гликозилированный ребаудиозид F в количестве от 0,5 до 3 масс. частей, от 0,5 до 2 масс. частей, от 0,5 до 1,5 масс. частей, от 1 до 3 масс. частей, от 1 до 2 масс. частей или от 1,03 до 1,5 масс. частей из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

Композиция подсластителя может включать гликозилированный дулькозид А в количестве от 0,5 до 3 масс. частей, от 0,5 до 2 масс. частей, от 0,5 до 1,93 масс. частей, от 0,5 до 1,23 масс. частей, от 1 до 3 масс. частей, от 1 до 2 масс. частей, от 1 до 1,93 масс. частей., от 1 до 1,23 масс. частей, от 1,08 до 3 масс. частей, от 1,08 до 1,93 масс. частей, от 1,08 до 1,23 масс. частей или от 1,23 до 1,93 масс. частей в расчете на 100 масс. частей композиции подсластителя, без ограничения этим.

Композиция подсластителя может включать гликозилированный рубузозид в количестве от 0,5 до 5 масс. частей, от 0,5 до 4 масс. частей, от 0,5 до 3 масс. частей, от 0,5 до 2,42 масс. частей, от 0,5 до 1,52 масс. частей, от 1 до 5 масс. частей, от 1 до 4 масс. частей, от 1 до 3 масс. частей, от 1 до 2,42 масс. частей, от 1 до 1,52 масс. частей, от 1,27 до 5 масс. частей, от 1,27 до 4 масс. частей, от 1,27 до 3 масс. частей, от 1,27 до 2,42 масс. частей, от 1,27 до 1,52 масс. частей, от 1,52 до 5 масс. частей, от 1,52 до 4 масс. частей, от 1,52 до 3 масс. частей, или от 1,52 до 2,42 масс. частей в расчете на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

«Стевиолгликозид» и «гликозилированный стевиолгликозид» представляют собой такие, как описано выше.

Гликозилированный стевиолгликозид, гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид, гликозилированный ребаудиозид С или композиция подсластителя, включающая их, могут быть получены из побочного продукта стевиолгликозида.

Гликозилированный стевиолгликозид, гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид, гликозилированный ребаудиозид С или композиция подсластителя могут быть получены с использованием транс глюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего эту последовательность, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali, конкретно, посредством обработки стевиолгликозида побочным продуктом, полученный при приготовлении стевии с помощью трансглюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий эту последовательность, или культуру микроорганизма или Lactobacillus mali, но без ограничения этим.

Способ использования культурального бульона Lactobacillus mali раскрыт в публикации с открытым исходным кодом корейского патента №10-2019-0072471, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей ее полноте. Культуральный бульон Lactobacillus mali можно использовать в качестве неочищенного фермента, и он может включать трансглюкозилазу, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 1 может быть получена из Lactobacillus mali, но без ограничения этим.

В настоящем изобретении «побочный продукт стевиолгликозида» может представлять собой побочный продукт, образованный в процессе производства стевии, и его тип, соотношение состава, содержание и производитель не ограничиваются, пока может быть приготовлена композиция подсластителя. Конкретно, тип побочного продукта стевиолгликозида не ограничивается особым образом, пока может быть приготовлена композиция подсластителя посредством обработки трансглюкозилазой, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, или микроорганизмом, экспрессирующим ее или культурой микроорганизма или Lactobacillus mali.

Конкретно, побочный продукт стевиолгликозида может включать по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из стевиозида, рубузозида, дулькозида А, ребаудиозида А, ребаудиозида С, ребаудиозида D, ребаудиозида Е, ребаудиозида F и ребаудиозида М, без ограничения этим.

Побочный продукт стевиолгликозида может представлять собой жидкофазный побочный продукт, из которого выделяют кристаллизованный ребаудиозид А, и может включать ребаудиозид А в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 30 масс. частей на 100 масс. частей побочного продукта, но без ограничения этим. Побочный продукт стевиолгликозида может включать стевиозид в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 45 масс. частей, большее 0 масс. частей и равном или менее 43,1 масс. частей, или более 0 масс. частей и равном или менее 32 масс. частей, масс. частей из расчета на 100 масс. частей побочного продукта или включают ребаудиозид С в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 12 масс. частей, или более 0 масс. частей и равном или менее 11 масс. частей из расчета на 100 масс. частей побочного продукта, но без ограничения этим.

Побочный продукт стевиолгликозида может представлять собой побочный продукт, полученный в процессе производства стевии, и может включать ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении от 1,5 до 2,5: от 1,5 до 6:1, но без ограничения этим.

В настоящем изобретении термин «трансглюкозилаза» относится к ферменту, который переносит глюкозу от донора глюкозы к акцептору глюкозы. Конкретно, трансгликозилаза может иметь применение в получении гликозилированного стевиолгликозида посредством переноса глюкозы от донора глюкозы к стевиолгликозиду.

Трансглюкозилаза может представлять собой фермент, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. Трансглюкозилаза, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, может представлять собой фермент, полученный из микроорганизма, принадлежащего к роду Lactobacillus, конкретно фермент, полученный из Lactobacillus mali, без ограничения этим.

Степень превращения трансглюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, из стевиолгликозида в гликозилированный стевиолгликозид, может составлять 50% или более, конкретно 60% или более, более конкретно 70% или более, даже более конкретно 80% или более, и наиболее конкретно 90% или более, но без ограничения этим.

Трансглюкозилаза, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культура микроорганизма или Lactobacillus mali, могут расщеплять сахар до глюкозы и избирательно связывать от 1 до 4 молекул глюкозы со стевиолгликозидом посредством α-связи, используя сахар и стевиолгликозид в качестве субстратов, но без ограничения этим.

Трансглюкозилаза, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культура микроорганизма или Lactobacillus mali, могут продуцировать композицию подсластителя, включающую гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С, используя сахар и побочный продукт стевии в качестве субстратов, где композиция подсластителя может включать от 5 до 30 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида, и от 5 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, но без ограничения этим.

Кроме того, трансглюкозилаза, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культура микроорганизма или Lactobacillus mali, могут продуцировать композицию подсластителя, дополнительно включающую гликозилированный ребаудиозид F, используя сахар и побочный продукт стевии в качестве субстратов, но без ограничения этим.

Фермент, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, можно использовать взаимозаменяемо с ферментом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, ферментом, по существу состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, или ферментом, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.

В настоящем изобретении, хотя трансглюкозилаза определяется как фермент, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, будет очевидно, что любой фермент можно рассматривать в качестве трансглюкозилазы по настоящему изобретению, пока фермент имеет активность, идентичную или эквивалентную активности фермента, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, по существу состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, или состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1. Например, трансглюкозилаза по настоящему изобретению может представлять собой белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 80%, 90%, 95% или 97% гомологии или идентичности с SEQ ID NO: 1.

То есть, в настоящем изобретении, хотя описано выражение «фермент, полипептид или белок, включающий аминокислотную последовательность установленной SEQ ID NO» или «фермент, полипептид или белок, состоящий из аминокислотной последовательности установленной SEQ ID NO», очевидно, что любой белок, имеющий аминокислотную последовательность, включающую делецию, модификацию, замену, или добавление одной или нескольких аминокислот, можно использовать в настоящем изобретении, пока белок имеет активность, идентичную или эквивалентную активности полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO. Например, очевидно, что «полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1», может принадлежать «полипептиду, состоящему из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1», пока активность является идентичной или эквивалентной.

При использовании в данном документе термин «гомология» или «идентичность» относится к степени соответствия между двумя заданными аминокислотными последовательностями или нуклеотидными последовательностями и может быть выражен в виде процента. Термины гомология и идентичность часто можно использовать как взаимозаменяемые.

Гомология последовательностей или идентичность консервативных полинуклеотидов или полипептидов может быть определена с использованием стандартного алгоритма выравнивания и штрафов за разрыв по умолчанию, установленных программой, используемой вместе с ним. По существу, гомологичные или идентичные последовательности могут гибридизоваться друг с другом по меньшей мере приблизительно на 50%, 60%, 70%, 80%, или 90% всей последовательности или по всей длине в умеренных или очень жестких условиях. Очевидно, что полинуклеотиды, включающие вырожденный кодон вместо кодона, также можно рассматривать при гибридизации.

Гомология, сходство или идентичность между двумя полинуклеотидными или полипептидными последовательностями может быть определена с использованием любого компьютерного алгоритма, известного в данной области техники, например программы «FASTA» с использованием параметров по умолчанию, введенных Pearson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444. Альтернативно, гомология, сходство или идентичность могут быть определены с использованием алгоритма Нидлмана-Вунша (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453), реализованного в программе Needleman пакета EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277) (версия 5.0.0 или более поздняя) (включая пакет программ GCG (Devereux J. et al., Nucleic Acids Research 12: 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, FASTA (Atschul S.F. et al., J MOLEC BIOL 215: 403 (1990)); Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, ed., Academic Press, San Diego, 1994, and CARILLO et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073). Например, гомология, сходство или идентичность могут быть определены с помощью BLAST из информационной базы данных Национального центра биотехнологии или ClustalW.

Гомология, сходство или идентичность между полинуклеотидами или полипептидами может быть определена путем сравнения информации о последовательностях с использованием компьютерной программы GAP, представленной Needleman et al., (1970), J Mol Biol. 48: 443, раскрытой Smith and Waterman, Adv. Appl. Math (1981) 2: 482. Вкратце, программа GAP определяет сходство в виде количества выровненных символов (т.е. нуклеотидов или аминокислот), которые похожи, деленного на общее количество символов в более короткой из двух последовательностей. Параметры по умолчанию для программы GAP могут включать в себя: (1) двоичную матрицу сравнения (содержащую значение 1 для идентичностей и 0 для неидентичностей) и взвешенную матрицу сравнения Gribskov et al. (1986), Nucl. Acids Res. 14: 6745, как описано Schwartz and Dayhoff, eds., Atlas Of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, pp. 353-358 (1979) (или матрица замещения EDNAFULL (версия EMBOSS NCBI NUC4.4)); (2) штраф 3,0 за каждый пробел и дополнительный штраф 0,10 за каждый символ в каждом пробеле (или штраф за открытие пробела 10 и штраф за расширение пробела 0,5); и (3) отсутствие штрафа за конечные пробелы.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается композиция для получения подсластителя, включающая побочный продукт стевиолгликозида и трансглюкозилазу, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культуру микроорганизма или Lactobacillus mali. Конкретно, подсластитель включает от 5 до 30 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 5 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей подсластителя.

Композиция для получения подсластителя по настоящему раскрытию может дополнительно включать кофактор, способный повышать эффективность переноса глюкозы к стевиолгликозиду или улучшать стабильность композиции подсластителя, но без ограничения этим. Примеры кофактора могут включать ион металла, соль металла, эксципиент и консервант, не ограничиваясь ими.

Композиция для получения подсластителя может включать трансглюкозилазу, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культуру микроорганизма или Lactobacillus mali, но без ограничения этим.

«Побочный продукт стевиолгликозида», «гликозилированный ребаудиозид А», «гликозилированный стевиозид» и «гликозилированный ребаудиозид С» представляют собой такие, как описано выше.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения композиции подсластителя, включающий взаимодействие побочного продукта стевиолгликозида с трансглюкозилазой, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизмом, экспрессирующим ее, или культурой микроорганизма или Lactobacillus mali в присутствии донора глюкозы. Конкретно, композиция подсластителя включает от 5 до 30 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 5 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя.

В конкретном воплощении побочный продукт стевиолгликозида может включать по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из стевиозида, рубузозида, дулькозида А, ребаудиозида А, ребаудиозида С, ребаудиозида D, ребаудиозида Е, ребаудиозида F и ребаудиозида М, без ограничения этим.

Побочный продукт стевиолгликозида представляет собой побочный продукт, образующимся в процессе производства стевии, и может включать ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении от 1,5 до 2,5: от 1,5 до 6:1, но без ограничения этим.

«Донор глюкозы», «побочный продукт стевиолгликозида», «гликозилированный ребаудиозид А», «гликозилированный стевиозид», «гликозилированный ребаудиозид С» и «композиция подсластителя» представляют собой такие, как описано выше.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ улучшения качества сладости, включающий взаимодействие побочного продукта стевиолгликозида с трансглюкозилазой, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизмом, экспрессирующим ее, или культурой микроорганизма или Lactobacillus mali в присутствии донора глюкозы. Конкретно, подсластитель, обладающий улучшенным качеством сладости, включает гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С. Подсластитель включает от 5 до 30 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей подсластителя.

«Донор глюкозы», «побочный продукт стевиолгликозида», «трансглюкозилаза», «гликозилированный ребаудиозид А», «гликозилированный стевиозид» и «гликозилированный ребаудиозид С» представляют собой такие, как описано выше.

В одном аспекте настоящего изобретения предложено применение побочного продукта стевиолгликозида и трансглюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего ее, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali, для получения композиции подсластителя, в которой композиция подсластителя содержит от 5 до 30 частей по массы гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 5 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя.

«Побочный продукт стевиолгликозида», «трансглюкозилаза» и «композиция подсластителя» представляют собой такие, как описано выше.

В одном аспекте настоящего изобретения предложено применение побочного продукта стевиолгликозида и трансглюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего ее, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali, для улучшения качества сладости, где подсластитель содержит от 5 до 30 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 5 до 30 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 5 до 20 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей подсластителя.

«Побочный продукт стевиолгликозида» и «трансглюкозилаза» представляют собой такие, как описано выше.

Принцип изобретения

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие Примеры. Однако следующие Примеры представлены только для иллюстрации настоящего изобретения, и объем настоящего изобретения не ограничивается ими.

Пример получения 1: Получение композиции подсластителя, включающей гликозилированный стевиолгликозид

Побочный продукт процесса производства стевиолгликозида получали от производителя стевиолгликозида в Китае и использовали в качестве сырья для приготовления композиции подсластителя. Конкретно, было подтверждено, что полученный побочный продукт включал ребаудиозид A (Reb А), стевиозид (STV), ребаудиозид С (Reb С) и другие стевиолгликозиды (ребаудиозид F, дулькозид А и рубузозид). С целью получения композиции подсластителя с использованием побочного продукта в качестве неочищенной ферментативной жидкости использовали культуральный бульон Lactobacillus mali, который представляет собой молочнокислую бактерию. Композиция подсластителя, включающая гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С, получали, используя способ добавления глюкозы, полученной из сахара, к стевиолгликозиду посредством трансгликозилирующей активности неочищенной ферментативной жидкости. Структуры гликозилированного ребаудиозида А, гликозилированного стевиозида и гликозилированного ребаудиозида С проиллюстрированы в Формулах 2-7, соответственно, и конкретные условия ферментативной реакции показаны в Таблице 1 ниже.

Способ использования культурального бульона Lactobacillus mali в качестве неочищенного фермента раскрыт в опубликованной в открытом доступе публикации корейского патента №10-2019-0072471, которая включена в данное описание изобретения посредством ссылки во всей ее полноте. Неочищенная ферментативная жидкость содержит трансгликозилазу, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

Для анализа количеств стевиолгликозидов и гликозилированных стевиолгликозидов до и после ферментативной реакции выполняли высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ). Стевиолгликозиды, подвергнутые анализу ВЭЖХ, представляли собой ребаудиозид А, стевиозид, ребаудиозид С, рубузозид и дулькозид А, и гликозилированные стевиолгликозиды, подвергнутые ВЭЖХ, представляли собой гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С. Результаты анализа ВЭЖХ показаны на ФИГ. 1-3.

В результате было подтверждено, что количества компонентов и степени конверсии представляли собой такие, как показано в Таблице 2 ниже и на ФИГ. 1-3 до ферментативной реакции и через 24 часа после ферментативной реакции. Также было подтверждено, что стевиолгликозиды, такие как ребаудиозид A (Reb А), стевиозид (STV) и ребаудиозид С (Reb С), содержащиеся в сырье, были преобразованы со степенью конверсии около 94% посредством трансгликозилирования с помощью ферментативной реакции, чтобы таким образом получать композицию подсластителя, включающую гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С

Вместе с тем, типы и содержание стевиолгликозидов в полученной композиции через 24 часа после ферментативной реакции показаны в Таблицах 3-5 ниже. Композиция, полученная с использованием побочного продукта Компании А, показана в Таблице 3, композиция, полученная с использованием побочного продукта Компании В, показана в Таблице 4 ниже, и композиция, полученная с использованием побочного продукта Компании С, показана в Таблице 5 ниже.

Пример 1: Сенсорный тест композиции подсластителя

Композиции подсластителей, включающие гликозилированные стевиолгликозиды, оценивали органолептическим способом в сравнении с ребаудиозидом А высокой чистоты, известным в данной области техники. Конкретно, тесты на вкусовые предпочтения выполняли на композициях подсластителей из Таблиц 3-5, приготовленных в Примере получения 1 выше, и имеющимся в продаже ребаудиозиде А (чистота 97%), и сравнивали и оценивали результаты. В конце, посредством регулировки содержания сахара, получали образцы с одинаковым содержанием сахара по шкале Брикса 10°, и в тестировании вкуса принимали участие 30 человек. Предпочтения, вкус и неприятный запах оценивали, используя 9-балльную шкалу, и результаты, преобразованные в 5-балльную шкалу, приведены в Таблице 6 ниже.

В результате было подтверждено, что композиция подсластителя, включающая гликозилированный стевиолгликозид, имеющая конкретное соотношение состава Примера получения 1, повышала предпочтение сладости примерно в 1,4 раза, снижала неприятный привкус/неприятный запах на 1/2 и повышала общее предпочтение примерно в 2 раза по сравнению с ребаудиозидом А, имеющим чистоту 97%.

Эти результаты показывают, что композиция гликозилированной стевии, имеющая определенное соотношение состава, может быть получена в одностадийном процессе, используя процесс получения стевиолгликозидов с культуральным бульоном Lactobacillus mali в качестве неочищенной ферментативной жидкости, и композиция гликозилированной стевии, имеющая конкретный состав, может быть использована для приготовления продукта с более высокой добавленной стоимостью и с улучшенным качеством сладости.

Приведенное выше описание настоящего изобретения предлагается с целью иллюстрации, и специалистам в данной области техники должно быть понятно, что могут быть произведены различные изменения и модификации без изменения технической концепции и существенных признаков настоящего изобретения. Таким образом, ясно, что описанные выше воплощения являются иллюстративными во всех аспектах и не ограничивают настоящее изобретение. Таким образом, объем изобретения определяется не подробным описанием, а посредством формулы изобретения и ее эквивалентов, и все изменения в пределах объема формулы изобретения и ее эквивалентов должны истолковываться как включенные в изобретение.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> CJ CheilJedang Corporation

<120> КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ГЛИКОЛИЗИРОВАННУЮ СТЕВИЮ И ИМЕЮЩАЯ

УЛУЧШЕННОЕ КАЧЕСТВО СЛАДОСТИ

<130> OPA21306

<150> KR 10-2020-0160304

<151> 2020-11-25

<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 734

<212> PRT

<213> Lactobacillus mali

<400> 1

Met Asp Gln Met Val Leu Glu Thr Gln Gln Trp Leu Asn Lys Thr Tyr

1 5 10 15

Gly Gly Val Ser Gly Phe Gly Ser Val Thr Glu Asp Gly Leu Thr Gly

20 25 30

Trp Gly Thr Val Tyr Gly Leu Thr Arg Ala Leu Gln His Glu Leu Gly

35 40 45

Ile Thr Gly Leu Val Asn Asn Phe Gly Pro Thr Ser Lys Gln Lys Phe

50 55 60

Asn Asn Ile Ala Lys Thr Ile Val Val Gly Tyr Thr Gly Asn Ile Ala

65 70 75 80

Tyr Ile Ile Gln Gly Gly Phe Trp Cys Lys Gly Ile Thr Pro Gly Glu

85 90 95

Phe Asp Gly Lys Phe Ser Ala Asp Thr Ala Ser Ala Val Thr Thr Met

100 105 110

Lys Thr Lys Ala Gly Leu Ala Asp Thr Ser Ser Ser Val Asp Gly Asn

115 120 125

Phe Met Ala Ala Leu Leu Asn Met Ser Ser Phe Asp Leu Leu Thr Gly

130 135 140

Gly Asp Ser Lys Val Arg Glu Met Gln Gln Gln Leu Asn His Asp Tyr

145 150 155 160

Leu Ala Tyr Thr Gly Ile Leu Pro Cys Asp Gly Ile Tyr Gln Arg Asp

165 170 175

Thr Asn Ser Ala Leu Ile Tyr Ala Leu Gln Ala Glu Glu Lys Ile Ser

180 185 190

Thr Ser Val Ala Thr Gly Ala Tyr Gly Ala Thr Thr Lys Lys Asp Thr

195 200 205

Pro Thr Val Lys Glu Gly Thr Thr Asn Asn Phe Val Arg Ile Leu Gln

210 215 220

Trp Gly Leu Tyr Val Asn Asn Lys Ala Tyr Thr Gly Ala Phe Asp Gly

225 230 235 240

Val Tyr Asp Ser Ala Val Val Ala Ala Val Lys Glu Phe Glu Glu Thr

245 250 255

Met Ala Leu Asp Ser Thr Asp Gly Thr Ser Ala Gly Val Asp Ile Phe

260 265 270

Met Ser Leu Leu Thr Ser Ala Gly Asn Pro Asp Arg Ser Ala Ile Ala

275 280 285

Cys Asp Thr Ser Tyr Gln Leu Asn Ala Thr Arg Val Ala Thr Leu Lys

290 295 300

Asn Ala Gly Tyr Ser Ile Val Gly Arg Tyr Leu Thr Gly Thr Val Gly

305 310 315 320

Ser Gly Thr Ser Glu Arg Ala Lys Asn Leu Thr Thr Asp Glu Ile Thr

325 330 335

Ala Ile Thr Thr Gly Gly Leu Lys Ile Phe Pro Ile Tyr Gln Asp Gly

340 345 350

Ala Ser Asp Lys Glu Ala Tyr Phe Thr Ala Ala Gln Gly Lys Thr Asp

355 360 365

Gly Thr Lys Ala Val Tyr Ala Ala Gln Asp Leu Gly Phe Lys Glu Gly

370 375 380

Val Val Ile Tyr Phe Ala Val Asp Ala Asp Ile Gln Ala Gly Asp Ile

385 390 395 400

Ala Gly Ser Ala Lys Val Tyr Phe Glu Ala Leu Tyr Asp Ile Val Thr

405 410 415

Ser Tyr Gly Tyr Glu Val Gly Ile Tyr Gly Thr Arg Asn Val Ser Ala

420 425 430

Thr Ile Ile Ser Ala Gly Leu Ala Thr Lys Ala Phe Ile Ser Asp Met

435 440 445

Ser Thr Gly Tyr Ser Gly Asn Leu Gly Tyr Ser Ile Pro Asp Glu Trp

450 455 460

Ala Phe Asp Gln Phe Ser Glu Ile Ser Ile Gly Asp Phe Ala Ile Asp

465 470 475 480

Lys Asp Ala Thr Thr Ser Ala Arg Glu Thr Ala Thr Gly Ser Phe Gly

485 490 495

Val Gly Gly Glu Ser Gly Tyr Gly Asn Ala Glu Asp Leu Ala Lys Ile

500 505 510

Asn Thr Ile Ile Asp Ala Leu Ser Gln Lys Lys Asn Phe Ser Tyr Leu

515 520 525

Ser Gly Leu Lys Ile Glu Lys Thr Ser Lys Glu Tyr Glu Ile Pro Gly

530 535 540

Phe Ala Val Asp Phe Tyr Val Gln Val Lys Phe Glu Ala Ser Val Ser

545 550 555 560

Glu Pro Gly Asp Asn Val Gly Val Val Tyr Asn Val Ser Asn Gly Lys

565 570 575

Phe Glu Ser Asp Phe Thr Asp Thr Ile Ala Gly Val Val Ala Leu Ser

580 585 590

Asp Glu Ile Asn Lys Glu Asp Ile Asn Ser Ala Leu Thr Glu Leu Ser

595 600 605

Ser Leu Ile Asn Asn Gly Gln Ile Trp Val Glu Pro Val Thr Lys Gly

610 615 620

Ser Asp Ala Gly Ile Ala Leu His Ile Lys Ser Thr Phe Asp His Thr

625 630 635 640

Leu Asp Ser Gly Glu Thr Ile Glu Leu Glu Tyr Glu Ile Ile Ile Asp

645 650 655

Glu Ile Phe His Lys Ile Glu Val Val Pro Thr Gly Val Pro Asn Thr

660 665 670

Thr Ala Asn Asp Tyr Asn Ser Leu Phe Pro Asn Gly Ile Lys Glu Phe

675 680 685

Val Gly Phe Ser Ile Val Ala Gly Leu Ala Thr Gly Gly Ile Tyr Tyr

690 695 700

Val Val Thr Ala Val Gly Ala Thr Ala Ala Val Val Thr Thr Ser Ile

705 710 715 720

Leu Ala Leu Ile Ala Leu Leu Lys Asn Asn Asp Thr Gly Val

725 730

<---

Изобретение относится к пищевой промышленности и биотехнологии и представляет собой композицию подсластителя, включающую гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С, а также состав для приготовления подсластителя, способ приготовления подсластителя с использованием побочного продукта стевиолгликозида и способ улучшения качества сладости. Изобретение позволяет получить композицию подсластителя с превосходным качеством сладости, ее можно использовать для изготовления продуктов с высокой добавленной стоимостью, таких как пищевые продукты и корма. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл., 1 пр.

1. Композиция подсластителя, содержащая гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С, где композиция подсластителя содержит от 11 до 15 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 11 до 27 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 11 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя.

2. Композиция подсластителя по п.1, где гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С находятся в форме, в которой глюкоза связана и добавлена к ним посредством глюкозы, конъюгированной с сайтом 19-OH посредством α-(1,6) связи.

3. Композиция подсластителя по п.2, где гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид и гликозилированный ребаудиозид С содержат от 1 до 4 молекул глюкозы.

4. Композиция подсластителя по п.1, обладающая улучшенным качеством сладости по сравнению с ребаудиозидом А, имеющим чистоту 95% или более.

5. Композиция подсластителя по п.3, дополнительно содержащая по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из гликозилированного ребаудиозида F в количестве от 0,5 до 3 масс. частей, гликозилированного дулькозида А в количестве от 0,5 до 3 масс. частей и гликозилированного рубузозида в количестве от 0,5 до 5 масс. частей из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя.

6. Композиция для получения подсластителя, содержащего от 11 до 15 масс.частей гликозилированного ребаудиозида А, от 11 до 27 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 11 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, где указанная композиция содержит побочный продукт стевиолгликозида и трансглюкозилазу, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизм, экспрессирующий ее, или культуру микроорганизма или Lactobacillus mali, где побочный продукт стевиолгликозида содержит ребаудиозид А в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 30 масс. частей на 100 масс. частей побочного продукта, где побочный продукт стевиолгликозида представляет собой побочный продукт, полученный в процессе производства стевии, и содержит ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении 1,5-2,5 : 1,5-6 : 1.

7. Способ получения композиции подсластителя, содержащей от 11 до 15 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 11 до 27 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 11 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, включающий:

взаимодействие побочного продукта стевиолгликозида с трансглюкозилазой, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизмом, экспрессирующим ее, или культурой микроорганизма или Lactobacillus mali, в присутствии донора глюкозы, где побочный продукт стевиолгликозида содержит ребаудиозид А в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 30 масс. частей на 100 масс. частей побочного продукта, где побочный продукт стевиолгликозида представляет собой побочный продукт, полученный в процессе производства стевии, и содержит ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении 1,5-2,5 : 1,5-6 : 1.

8. Способ по п.7, где побочный продукт стевиолгликозида представляет собой жидкофазный побочный продукт, из которого выделяют кристаллизованный ребаудиозид А.

9. Способ по п.7, где донор глюкозы представляет собой сахар.

10. Способ улучшения качества сладости подсластителя, включающий:

взаимодействие побочного продукта стевиолгликозида с трансглюкозилазой, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизмом, экспрессирующим ее, или культурой микроорганизма или Lactobacillus mali, в присутствии донора глюкозы, где указанный подсластитель, имеющий улучшенное качество сладости, содержит гликозилированный ребаудиозид А, гликозилированный стевиозид, и гликозилированный ребаудиозид С, где подсластитель содержит от 11 до 15 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 11 до 27 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 11 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей подсластителя, где побочный продукт стевиолгликозида содержит ребаудиозид А в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 30 масс. частей на 100 масс. частей побочного продукта, где побочный продукт стевиолгликозида представляет собой побочный продукт, полученный в процессе производства стевии, и содержит ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении 1,5-2,5 : 1,5-6 : 1.

11. Применение композиции, содержащей побочный продукт стевиолгликозида и трансглюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего ее, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali для получения композиции подсластителя, где указанная композиция подсластителя содержит от 11 до 15 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 11 до 27 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 11 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей композиции подсластителя, где побочный продукт стевиолгликозида содержит ребаудиозид А в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 30 масс. частей на 100 масс. частей побочного продукта, где побочный продукт стевиолгликозида представляет собой побочный продукт, полученный в процессе производства стевии, и содержит ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении 1,5-2,5 : 1,5-6 : 1.

12. Применение композиции, содержащей побочный продукт стевиолгликозида и трансглюкозилазы, включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, микроорганизма, экспрессирующего ее, или культуры микроорганизма или Lactobacillus mali для улучшения качества сладости подсластителя, где подсластитель содержит от 11 до 15 масс. частей гликозилированного ребаудиозида А, от 11 до 27 масс. частей гликозилированного стевиозида и от 7 до 11 масс. частей гликозилированного ребаудиозида С из расчета на 100 масс. частей подсластителя, где побочный продукт стевиолгликозида содержит ребаудиозид А в количестве более 0 масс. частей и равном или менее 30 масс. частей на 100 масс. частей побочного продукта, где побочный продукт стевиолгликозида представляет собой побочный продукт, полученный в процессе производства стевии, и содержит ребаудиозид А, стевиозид и ребаудиозид С в массовом соотношении 1,5-2,5 : 1,5-6 : 1.