ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТА ЛАДАННИКА В КАЧЕСТВЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНЕЙ ПЕЧЕНИ Российский патент 2024 года по МПК A61K36/185 A61K9/20 A61P1/16 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатопротекторным средствам, и может быть использовано для лечения болезней печени.

Среди гастрозаболеваний заслуживает внимание среди исследователей и пациентов - Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) и холестатические заболевания печени.

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) включает в себя стеатоз, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) и цирроз печени (ЦП). В основе патогенеза НАЖБП лежит инсулинорезистентность (ИР) и гиперинсулинемия. Исключением является вторичная, или «специфическая», НАЖБП, развитие которой связано с воздействием конкретных токсинов, лекарственных препаратов или осложненным течением заболеваний других органов и систем.

Распространенность НАЖБП варьирует в разных странах: в среднем она наблюдается у 20-33% взрослого населения. В Российской Федерации частота выявления НАЖБП в 2007 г. составила 27,0%, а в 2014 г. - 37,1% (прирост более 10%), в результате чего она заняла первое место среди заболеваний печени - 71,6%.

В 2014 г. опубликованы результаты проспективного популяционного исследования, в которое были включены 5000 жителей г. Москвы в возрасте от 18 до 75 лет, выбранные случайным образом в рамках проекта «Проверь свою печень».

Распространенность диффузных заболеваний печени в исследованной выборке (n=4768) была следующей: НАЖБП 7,4% (n=352), алкогольная болезнь печени 6,9% (n=329), гепатит С 6,7% (n=322), гепатит В 1,9% (n=91), лекарственное поражение печени 0,82% (n=39), холестатические заболевания печени 0,69% (n=33), аутоиммунный гепатит (АИГ) 0,78% (n=37), другие заболевания печени 5,4% (n=258). [В.Т. Ивашкин, Клинические рекомендации по диагностике и лечению неалкогольной жировой болезни печени Российского общества по изучению печени и Российской гастроэнтерологической ассоциации/ Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, Том 26, № 2 (2016), с.24-42].

К лекарственным средствам, улучшающим функцию печени, относятся препараты, содержащие адеметионин, эссенциальные фосфолипиды, Л-орнитин-Л-аспартат, урсодезоксихолиевую кислоту, различные растительные компоненты.

Известен препарат Урсосан^®, содержащий в качестве активного начала урсодезоксихолиевую кислоту. Препарат сравнения Урсосан^® (МНН - урсодезоксихолевая кислота) зарегистрирован на территории РФ и используется для терапии неосложненной желчнокаменной болезни (билиарный сладж; растворение холестериновых желчных камней при функционирующем желчном пузыре; профилактика рецидивов камнеобразования после холецистэктомии); хронических гепатитов различного генеза (в т.ч. токсические, лекарственные); холестатических заболеваний печени различного генеза, в т.ч. первичный билиарный цирроз (при отсутствии признаков декомпенсации), первичный склерозирующий холангит, кистозный фиброз (муковисцидоз); неалкогольной жировой болезни печени, в т.ч. неалкогольный стеатогепатит; алкогольной болезни печени; хронических вирусных гепатитов; дискинезии желчевыводящих путей; билиарного рефлюкс-гастрита и рефлюкс-эзофагита. Препарат имеет статус рецептурного.

Техническим результатом изобретения является создание эффективного средства для терапевтического лечения болезней печени.

Технический результат достигается тем, что предложено применение экстракта ладанника в дозе от 253 до 506 мг/кг в качестве гепатопротекторного средства для терапевтического лечения болезней печени, выбранных из группы, включающей фиброз, неалкогольную жировую болезнь печени, холестатическую болезнь печени.

Существует вариант, в котором болезни печени выбраны из группы, включающей фиброз, неалкогольная жировая болезнь печени, холестаз.

Существует вариант, в котором гепатопротекторное средство представляет собой таблетку.

Существует вариант, в котором таблетка содержит 18% экстракта ладанника.

Неожиданно авторами было обнаружено, что экстракт ладанника очень важен и эффективен для лечения патологий печени.

Фармакологические исследования терапевтической эффективности экстракта ладанника относительно болезни печени в литературе не описаны.

Согласно данному изобретению, применяемые лекарственные препараты могут быть приготовлены известным способом с использованием одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей. Ниже приведены примеры осуществления изобретения, а также методики и результаты лабораторных исследований для подтверждения заявленного технического результата.

Пример 1. Применения экстракта ладанника в качестве активного компонента средства при лечении неалкогольной жировой болезни печени (НЖБП).

Данные предоставлены из отчета, в котором отражены результаты экспериментальных исследований сравнительной эффективности испытуемого средства - таблетки, содержащие экстракт ладанника 18 % (в 3-х дозах), в сравнении с референтным препаратом Урсосан^® (в терапевтической дозе) при внутрижелудочном введении мышам самцам на модели НЖБП, вызванной внутрибрюшинным еженедельным введением 5% масляного раствора четыреххлористого углерода на фоне высокожировой диеты.

В качестве тест-системы были выбраны мыши самцы линии C57BL/6 (125 животных). В процессе эксперимента проводилось моделирование НЖБП при помощи внутрибрюшинного введения четыреххлористого углерода на фоне высокожировой диеты. Испытуемый препарат и препарат сравнения вводили животным внутрижелудочно 1 раз в день в течение 90 дней в виде суспензий. Животные из контрольной группы аналогичным образом получали контрольное вещество - воду очищенную. Расчет дозировок препаратов для введения животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз для крысы и человека в зависимости от массы тела по E.J. Freireich (1966).

Моделирование НЖБП проводилось путем еженедельного внутрибрюшинного введения четыреххлористого углерода в дозе 0,1 мл раствора 4-хлористого углерода в 1,9 мл миндального масла (2 мл раствора/кг) на фоне высокожировой диеты.

Таблетки, содержащие экстракт ладанника, и Урсосан® вводились животным ежедневно (1 раз в день) внутрижелудочно в виде суспензий в течение 90 дней. Контрольным группам животных аналогичным образом вводилось контрольное вещество - вода очищенная. Данный путь введения аналогичен пути введения испытуемого препарата человеку. На протяжении этого периода проводился клинический осмотр.

На 30, 60 и 90-й день после начала введения у части животных были осуществлены импедансометрия, взятие крови для биохимического анализа, а также эвтаназия опытных животных с последующим извлечением тимуса, печени и бедренной мышцы для гистологического анализа.

На протяжении 90 суток от начала введения препаратов наблюдалась гибель животных. Общая смертность по группам указана в Таблице 1.

Таблица 1. Общая смертность мышей самцов при внутрижелудочном введении испытуемого средства, препарата сравнения и контрольного вещества при НЖБП Номер группы Вещество Доза мг/кг Количество павших животных / количество в группе 1 Интакт - 9/25 2 Патология без лечения - 10/25 3 Таблетки с экстрактом
ладанника 253 8/25 4 Таблетки с экстрактом ладанника 350 8/25 5 Таблетки с экстрактом
ладанника 506 11/25 6 Урсосан^® 150 13/25

Наибольшая смертность животных наблюдалась в группе препарата сравнения - Урсосан^® (группа № 6). Меньше всего животных погибло на дозах 253 мг/кг и 350 мг/кг испытуемого средства. Гибель животных в группе интакта связана с фоновой патологией печени (фиброз) у животных, что далее указано в гистологии.

Средние значения показателей импедансометрии животных приведены в Таблице средних значений №2.

Таблица средних значений 2. Влияние ежедневного (1 раз в день в течение 90 дней) внутрижелудочного введения испытуемого средства, препарата сравнения и контрольного вещества при НЖБП на показатели импедансометрии мышей-самцов (M±SD) Показатели Группа №1 Группа №2 Группа №3 Группа №4 Группа №5 Группа №6 Вода очищенная НЖБП НЖБП + таблетки с экстрактом ладанника НЖБП + таблетки с экстрактом ладанника НЖБП + таблетки с экстрактом ладанника НЖБП + Урсосан^® Доза, мг/кг - - 253 350 506 150 30-й день Количество животных, n n=6 n=6 n=6 n=6 n=6 n=6 TBW, % 62,13±0,07 60,54±13,13 55,34±8,50 55,35±8,51 56,65±8,74 60,47±8,53 TBW, мл 13,05±1,57 12,71±2,76 11,62±1,79 11,63±1,77 11,89±1,84 12,70±1,79 ECF, % 44,75±2,00 45,10±10,52 42,52±4,70 42,52±4,70 41,62±7,30 43,40±4,58 ECF, мл 5,81±0,44 5,47±0,91 4,88±0,38 4,88±0,38 4,87±0,59 5,46±0,44 ICF, % 55,25±2,00 54,91±10,52 57,48±4,70 57,48±4,70 58,38±7,30 56,60±4,58 ICF, мл 7,24±1,14 7,19±2,46 6,74±1,57 6,73±1,57 7,02±1,76 7,24±1,55 FFM, % 84,87±10,00 82,70±17,93 75,61±11,61 75,60±11,60 77,39±11,94 82,65±11,63 FFM, г 17,82±2,15 17,37±3,77 14,38±2,82 14,38±2,82 16,25±2,51 17,35±2,45 FM, % 15,13±10,00 17,30±17,93 24,39±11,61 24,39±11,61 22,62±11,94 17,38±11,65 FM, г 3,18±2,15 3,63±3,77 5,12±2,44 5,12±2,43 4,75±2,51 3,65±2,45 BMI 4,29±0 4,18±0,92 4,77±0,62 4,78±0,61 5,69±0,35 4,61±0,62 60-й день Количество животных, n n=5 n=5 n=5 n=5 n=5 n=3 TBW, % 59,23±6,00 51,82±7,00 42,21±8,00 42,22±8,05 52,33±5,00 57,68±5,00 TBW, мл 9,97±1,53 7,29±1,18 5,50±1,34 5,51±1,32 7,58±0,91 8,53±1,16 ECF, % 37,76±7,00 40,08±6,00 47,67±4,00 47,71±3,91 42,49±9,00 50,11±3,00 ECF, мл 3,78±0,99 2,90±0,47 2,61±0,66 2,62±0,65 3,18±0,50 4,26±0,51 ICF, % 62,24±7,00 59,92±6,00 52,22±4,00 52,24±4,11 57,51±9,00 49,89±3,00 ICF, мл 6,19±1,11 4,39±0,96 2,89±0,75 2,91±0,76 4,40±1,06 4,27±0,75 FFM, % 80,91±8,00 70,79±10,00 57,66±11,00 57,69±11,21 71,50±7,00 78,80±7,00 FFM, г 13,62±2,08 9,95±1,61 7,51±1,83 7,58±1,82 10,38±1,23 11,64±1,58 FM, % 19,09±8,00 29,21±10,00 42,34±11,00 42,35±10,98 28,50±7,00 21,20±7,00 FM, г 3,22±1,36 4,13±1,47 5,59±2,03 6,21±2,11 4,14±1,03 3,12±1,00 BMI 4,15±0,87 4,17±0,57 3,70±0,80 3,92±0,91 3,43±0,31 3,50±0,32 90-й день Количество животных, n n=5 n=4 n=6 n=4 n=3 n=3 TBW, % 56,65±7,00 57,56±4,00 55,24±5,00 55,23±5,01 52,60±8,00 63,53±8,00 TBW, мл 12,93±0,77 9,96±3,16 9,73±1,26 9,71±1,27 10,60±0,95 11,08±1,89 ECF, % 41,09±4,00 45,04±4,00 44,83±5,00 44,87±5,01 44,17±3,00 42,51±7,00 ECF, мл 5,29±0,28 4,42±1,02 4,37±0,76 4,34±0,76 4,66±0,10 4,62±0,12 ICF, % 58,91±4,00 54,97±4,00 55,17±5,00 55,19±5,50 55,83±3,00 57,49±7,00 ICF, мл 7,64±0,97 5,55±2,16 5,36±0,83 5,36±0,99 5,94±0,91 6,46±1,80 FFM, % 77,39±10,00 78,63±6,00 75,46±7,00 75,73±7,1 71,86±11,0 86,78±11,00 FFM, г 17,67±1,05 13,61±4,32 13,29±1,72 13,48±1,82 14,48±1,30 15,14±2,58 FM, % 21,81±10,00 21,37±6,00 24,54±7,00 24,66±7,02 28,14±11,00 13,22±11,00 FM, г 5,35±2,73 3,52±0,56 4,40±1,59 4,52±1,59 5,85±2,90 2,26±1,83 BMI 5,45±0,48 4,17±0,13 4,33±0,67 4,57±0,83 5,65±0,50 4,12±0,33

Все показатели находились в пределах физиологической нормы и отличия от контроля были статистически незначимы.

Средние значения биохимических показателей сыворотки крови животных приведены в Таблице средних значений №3 (самцы).

Таблица средних значений 3. Влияние ежедневного (1 раз в день в течение 90 дней) внутрижелудочного введения испытуемого средства, препарата сравнения и контрольного вещества при НЖБП на биохимические показатели крови мышей-самцов (M±SD) Показатели Группа №1 Группа №2 Группа №3 Группа №4 Группа №5 Группа №6 Вода очищенная НЖБП НЖБП + таблетки с экстрактом ладанника НЖБП + таблетки с экстрактом ладанника НЖБП + таблетки с экстрактом ладанника НЖБП + Урсосан^® Доза, мг/кг - - 253 350 506 150 30-й день Количество животных, n n=6 n=6 n=6 n=6 n=6 n=6 ALT, МЕ/л 182,58±82,65 119,13±31,91 159,78±44,18 159,79±44,21 162,22±93,56 112,32±15,03 AST,МЕ/л 262,42±106,59 151,48±50,13 578,80±95,99 578,85±95,63 259,60±66,65 259,56±85,73 ЩФ, МЕ/л 239,75±86,97 184,57±41,70 229,63±58,02 229,64±58,41 177,08±76,72 187,73±25,17 Холестерин общий, мМ/л 1,81±0,30 1,86±0,26 2,17±0,33 2,17±0,36 1,71±0,20 1,33±0,10 ТГц, мМ/л 1,03±0,38 0,64±0,22 0,63±0,10 0,63±0,11 0,61±0,27 0,79±0,16 60-й день Количество животных, n n=5 n=5 n=5 n=5 n=5 n=3 ALT, МЕ/л 77,05±1,81 168,60±174,28 338,20±176,75 338,22±176,57 150,52±88,09 435,13±181,31 AST,МЕ/л 232,80±104,60 306,65±37,15 354,73±48,42 354,81±48,43 281,92±99,76 582,13±79,99 ЩФ, МЕ/л 193,80±56,27 393,98±123,67 372,65±168,05 372,65±168,56 273,55±98,13 453,95±82,52 Холестерин общий, мМ/л 1,26±0,23 1,44±0,37 2,24±0,85 2,25±0,82 2,00±0,49 0,91±0,57 ТГц, мМ/л 0,96±0,29 0,34±0,06 0,76±0,32 0,76±0,31 0,54±0,12 - 90-й день Количество животных, n n=5 n=4 n=6 n=5 n=3 n=3 ALT, МЕ/л 157,40±33,21 164,50±129,00 128,32±31,05 128,32±31,08 83,63±22,67 142,47±84,10 AST,МЕ/л 266,82±118,29 309,15±140,33 309,50±92,03 309,52±92,04 176,43±7,09 248,83±103,08 Билирубин 3,03±0,44 1,74±1,21 1,75±0,95 1,75±0,97 3,49±1,13 3,02±1,14 ЩФ, МЕ/л 184,92±28,75 263,08±111,32 244,28±65,71 244,29±65,72 212,57±74,10 190,07±49,80 Холестерин общий, мМ/л 1,24±0,15 1,82±0,46 1,66±0,34 1,66±0,35 2,54±0,31 2,27±0,73 ТГц, мМ/л 0,01±0,01 0,05±0,06 0,02±0,02 0,02±0,02 0,07±0,06 0,18±0,24

Все отличия от контроля были статистически незначимы.

По данным вскрытия и макроскопического исследования изучаемых органов различий между опытными группами, получавшими суспензии испытуемого препарата и суспензии препарата сравнения внутрижелудочно и контрольными группами животных, не установлено.

Тимус имел треугольную форму, беловатый цвет и умеренно плотную консистенцию.

Форма и величина печени некоторых животных осталась без изменений. Поверхность печени гладкая, однородная темно-красной окраски. Ткань печени на разрезе была темно-красной. Капсула печени была тонкой, прозрачной. Консистенция печени имела обычную плотность. Однако у некоторых животных из группы НЖБП без лечения и опытных групп наблюдалась зернистость печени.

В ходе исследования выявлено, что таблетки, содержащие экстракт ладанника 18%, обладает выраженным дозазависимым гепатотропным (гепатопротекторным) действием, сравнимым, а в некоторых случаях превосходящим (в том числе по влиянию на твердую конечную точку) препарат сравнения Урсосан^®.

Пример 2. Применения экстракта ладанника в качестве активного компонента средства при лечении холестаза.

Данные предоставлены из отчета, в котором отражены результаты экспериментальных исследований сравнительной эффективности испытуемого средства - таблетки, содержащие экстракт ладанника 18% (в 3-х дозах), в сравнении с референтным препаратом Урсосан^® (в терапевтической дозе) при внутрижелудочном введении мышам самцам на модели патологии желчевыводящих путей, вызванной внутрижелудочным введением (через день в течение 20 дней) масляного раствора альфа-нафтилизотиоцианата (АНИТ).

В качестве тест-системы были выбраны мыши самцы линии C57BL/6 (95 животных). В процессе эксперимента проводилось моделирование холестаза при помощи внутрижелудочного введения альфа-нафтилизотиоцианата. Испытуемый препарат и препарат сравнения вводили животным внутрижелудочно 1 раз в день в течение 30 дней в виде суспензий. Животные из контрольной группы аналогичным образом получали контрольное вещество - воду очищенную. Расчет дозировок препаратов для введения животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз для крысы и человека в зависимости от массы тела по E.J. Freireich (1966).

Моделирование патологии желчевыводящих путей проводилось путем внутрижелудочного введения каждому животному опытных групп 0,5 мл масляного раствора альфа-нафтилизотиоцианата в дозе 2 мг/кг/день (в течение 10 введений до достижения дозы 20 мг/кг. Данная доза была выбрана из-за высокой токсичности альфа-нафтилизотиоцианата, который в дозах, превышающих 20 мг/кг, при однократном введении вызывает острый холестаз и фиброз).

Таблетки, содержащие экстракт ладанника 18% и Урсосан^® вводились животным ежедневно (1 раз в день) внутрижелудочно в виде суспензий в течение 30 дней. Контрольным группам животных аналогичным образом вводилось контрольное вещество - вода очищенная. Данный путь введения аналогичен пути введения испытуемого препарата человеку. На протяжении этого периода проводился клинический осмотр.

На 31-й день после начала введения у 10-ти животных из группы были осуществлены взятие крови для биохимического анализа, а также эвтаназия опытных животных с последующим извлечением печени и желчного пузыря для гистологического анализа.

Средние значения биохимических показателей сыворотки крови животных приведены в Таблице средних значений №4 (самцы).

Таблица средних значений 4. Влияние ежедневного (1 раз в день в течение 30 дней) внутрижелудочного введения испытуемого средства, препарата сравнения и контрольного вещества при холестазе на биохимические показатели крови мышей-самцов (M±SD) Показатели Группа №1 Группа №2 Группа №3 Группа №4 Группа №5 Группа №6 Вода очищенная Холестаз Холестаз + таблетки с экстрактом ладанника ТД Холестаз + таблетки с экстрактом ладанника ТД Холестаз + таблетки с экстрактом ладанника 2 ТД Холестаз + Урсосан^® Доза, мг/кг - - 253 350 506 150 Количество животных, n n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 ALT, МЕ/л 94,89±34,94 103,64±28,49 73,52±28,20 73,52±28,22 73,17±23,49 95,37±27,24 AST, МЕ/л 212,39±6,63 389,33±38,76 179,76±68,35 179,76±68,45 190,24±26,43 207,34±84,97 ЩФ, МЕ/л 158,13±34,36 167,04±29,66 141,40±30,74 141,40±30,75 170,28±27,26 194,10±54,25 Холестерин общий, мМ/л 1,38±0,23 1,36±0,29 1,46±0,29 1,46±0,29 1,50±0,18 1,53±0,29 Общий белок, г/л 51,04±5,05 51,48±3,99 49,60±1,21 49,60±1,22 51,16±2,91 49,17±2,98 Альбумин, г/л 35,24±1,84 33,98±2,54 34,16±1,29 34,17±1,30 38,12±2,63 36,37±1,52 Билирубин, мкмоль/л 1,68±0,54 1,26±0,35 2,15±0,97 2,16±0,98 1,29±0,50 1,47±0,61 ТГц, мМ/л 0,84±0,27 0,96±0,40 0,87±0,21 0,88±0,22 0,85±0,13 0,96±0,12

Все отличия от контроля были статистически незначимы, за исключением показателя AST, МЕ/л, существенно повышенного при моделировании патологии и пришедшего в норму при лечении обеими дозами испытуемого средства (таблетки с экстрактом ладанника) и Урсосан^®, подобная тенденция наблюдалась и по показателю ALT, МЕ/л, где таблетки, содержащие экстракт ладанника 18% были несколько эффективнее референсного препарата.

По данным вскрытия и макроскопического исследования изучаемых органов различий между опытными группами, получавшими суспензии испытуемого средства и суспензии препарата сравнения внутрижелудочно и контрольными группами животных, не установлено.

Форма и величина печени некоторых животных осталась без изменений. Поверхность печени гладкая, однородная темно-красной окраски. Ткань печени на разрезе была темно-красной. Капсула печени была тонкой, прозрачной. Консистенция печени имела обычную плотность. Однако у некоторых животных из группы патологии без лечения и опытных групп наблюдалась зернистость печени.

В ходе исследований выявлено, что таблетки, содержащие экстракт ладанника 18%, оказывают наиболее активное действие при холецистите, обладая менее выраженным эффектом при внутрипеченочном холестазе.

Анализ показателей абсолютной массы внутренних органов мышей самцов статистически значимых различий между группами не выявил, и массы внутренних органов находились в пределах физиологической нормы.

Признаков токсического влияния исследуемого средства на организм животных, сопровождавшихся изменением показателей относительной и абсолютной массы внутренних органов, выявлено не было.

Приведенные выше экспериментальные данные свидетельствуют о том, что заявляемое изобретение может быть с высокой степенью надежности использовано как при терапевтическом лечении болезней печени, так и, как полагают авторы, при профилактики болезней печени.

Изобретение относится к области медицины, а именно к применению экстракта ладанника в дозе от 253 мг/кг до 506 мг/кг в качестве гепатопротекторного средства для терапевтического лечения холестатической болезни печени и неалкогольной жировой болезни печени. Применение экстракта ладанника в дозе от 253 мг/кг до 506 мг/кг в качестве гепатопротекторного средства для терапевтического лечения холестатической болезни печени и неалкогольной жировой болезни печени. Указанное изобретение предоставляет эффективное средство для терапевтического лечения указанных болезней печени. 1 з.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

1. Применение экстракта ладанника в дозе от 253 мг/кг до 506 мг/кг в качестве гепатопротекторного средства для терапевтического лечения холестатической болезни печени и неалкогольной жировой болезни печени.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что гепатопротекторное средство выполнено в виде таблетки.