Способ приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин Российский патент 2024 года по МПК A61K35/64 A61K35/646 A61P17/02 

Изобретение относится к области техники биомедицинских материалов, а именно к способу приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, способ лечения может быть использован как в практическом здравоохранении, так в производстве косметических средств.

Уровень техники

Известно регенерирующее противовоспалительное средство, представляющее собой водный раствор активного начала - коменовой кислоты и вспомогательного вещества - натрия гидрокарбоната, при следующем соотношении компонентов, мас. %:

коменовая кислота 1-2, преимущественно 1 и 2

натрия гидрокарбонат 0,55-1,1

вода для инъекций до 100,

регенерирующее противовоспалительное средство при этом оно дополнительно содержит примесь коменовой кислоты - бензилкоменовую кислоту - в количестве не более 2,5% в пересчете на коменовую кислоту, также известны способы лечения хориоретинальных дистрофий различной этиологии, заключающийся в том, что пациенту вводят регенерирующее средство парабульбарно в дозе от 10 до 20 мг (в пересчете на коменовую кислоту) один раз в сутки в течение 10 дней; курс лечения повторяют 2-3 раза в год, пациенту вводят регенерирующее средство в один или оба глаза, пациенту вводят регенерирующее средство внутривенно в дозе до 350 мг в сутки (в пересчете на коменовую кислоту) в течение 10 дней, курс лечения проводят 1-3 раза в год с перерывом в 3-6 мес. (см. пат.RU №2362554, МПК А61К 31/351, А61К 9/08, А61Р 29/00, опубл. 27.07.2009 г., бюл. №21).

Недостатком данного изобретения является его невысокая эффективность, а также то, что регенерирующее средство - синтетическое не пептидной природы.

Известен способ приготовления порошка натурального белка шелка паука, включающий помещенный очищенный натуральный шелк паука в раствор гидроксида натрия, прокипяченный, промытый горячей водой и высушенный вымораживанием; смешанный лиофилизированный шелк паука, полученный на первом этапе, с раствором муравьиной кислоты, нагретый для реакции, собранная надосадочную жидкость центрифугированием и высушенная вымораживанием, чтобы получить натуральный белковый порошок шелка паука; способ приготовления разновидности белкового порошка из натурального шелка паука по п. 1, при этом соотношение расхода натурального шелка паука на описанной первой стадии и раствора гидроксида натрия составляет 1 г: 200-400 мл.; способ приготовления разновидности порошка натурального белка шелка паука по п. 1, при этом массовая доля раствора гидроксида натрия на первой стадии составляет 0,5%-2,0%; способ приготовления порошка натурального белка шелка паука по п. 1, при этом температура горячей воды на первой стадии составляет 60-90°С; способ приготовления порошка натурального белка шелка паука по п. 1, при этом лиофилизация на первой стадии: помещение его в холодильник при -80° на 8-12 часов, а затем помещение на 3-5 суток в лиофилизатор; способ приготовления своеобразного белкового порошка натурального шелка паука по п. 1, при этом соотношение дозировок лиофилизированного шелка паука и раствора муравьиной кислоты на второй стадии составляет 1 г: 40-70 мл.; способ приготовления разновидности порошка натурального белка шелка паука по п. 1, при этом массовая доля раствора муравьиной кислоты на описанной второй стадии составляет 80-100%; способ приготовления порошка натурального белка шелка паука по п. 1, при этом температура реакции нагревания на второй стадии составляет 45-65°С, а время реакции нагревания составляет 8-12 часов; способ приготовления порошка натурального белка шелка паука по п. 1, при этом параметры процесса центрифугирования на второй стадии: центробежная сила 7500-17500×g, температура 5-20°С, время центрифугирования 5-15 мин., сушка: замораживание в холодильнике при температуре -80°С в течение 8-12 часов, а затем сушка вымораживанием в сублимационной сушилке (см. пат.CN №1 10028569, МПК С07К 14/435, С07К 1/14, опубл. 19.07.2019 г., вид публ. А, Ведомство Китай).

Недостатком данного способа является получение порошка, а не раствора, а также лишь частичное растворение паутины в надосадочной жидкости.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является способ приготовления раствора соединения фиброина шелка и серицина, включающий следующие этапы:

A) помещение шелка в теплую воду для предварительной обработки, затем помещение его в воду с температурой 65-95°С для обработки и сушку для получения первоначально обработанного шелка, температура теплой воды 35-60°С;

B) обработку первоначально обработанного шелка в нейтральном солевом растворе и повторную очистку полученного раствора соединения фиброина шелка с серицином с получением раствора соединения фиброина шелка с серицином;

Нейтральный солевой раствор представляет собой 8-10 М водный раствор бромида лития, а соотношение исходно обработанного шелка к водному раствору бромида лития составляет 1 г:(20-30) мл.

Способ приготовления по п. 1, при этом время предварительной обработки составляет 1-10 мин.

Способ подготовки по п. 1, при этом после предварительной обработки он дополнительно включает: стирку и обезвоживание предварительно обработанного шелка в воде при температуре 25-30°С после его извлечения.

Способ приготовления по п. 1, при этом на этапе А) время обработки в воде при температуре 65-95°С составляет 1-8 часов.

Способ приготовления по п. 1, при этом на этапе А) отношение шелка к теплой воде составляет 1 г: (40-60) мл, а отношение предварительно обработанного шелка к воде составляет 1 г: (40-60) мл.

Способ подготовки по п. 1, при этом на этапе А) перед сушкой после обработки также включают: стирку обработанного шелка в воде при температуре 25-30°С и последующее обезвоживание; при сушке принимают 40°С.60°С сушка горячим воздухом.

Способ приготовления по п. 1, при этом на этапе Б) температура обработки составляет 50-80°С.

Способ приготовления по п. 1, при этом способ описанной очистки, в частности:

Полученный раствор комплекса фиброина и серицина шелка переливают в диализный мешок с отсечкой по молекулярной массе 10-50 кДа и помещают в деионизированную воду для непрерывного диализа на 1-3 дня (см. пат. CN №111875691, МПК С07К 14/435, С07К 1/14, опубл. 03.1 1.2020 г., вид публ. В, Ведомство Китай).

Недостатком данного изобретения является получение общего раствора фиброина шелка и серицина, а не отдельных растворов серицина и фиброина шелка.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, обладающего высокими регенераторными свойствами, гемо-, гисто-, цитосовместимостью, низкой иммуногенностью, уменьшающей образование келлоидного рубца и косметического деффекта, с возможностью точного расчета при использовании и приготовлении конечных косметических и медицинских средств.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к созданию способа приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, который объединяет свойства шелка паука и шелкопряда в одном растворе, способный повысить их совместный регенераторный потенциал, снизить образование келлоидных рубцов, ускорить регенерацию покровной ткани, снизить косметический дефект тканей при глубоких повреждениях.

Технический результат достигается с помощью способа приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, включающего вытягивание и измельчение коконов шелкопрядов, при этом дополнительно очищают от серицина 8-ми молярным раствором мочевины температурой 60°С в течение 30 минут с получением раствора серицина в мочевине, далее производят промывку шелка, сушку шелка при температуре 60°С в течение 3-х часов или при комнатной температуре в течение 10 часов, следующим этапом приготавливают раствор 1:2:8 СаС12:EtOH:H2O и растворяют в нем высушенный шелк в течение 2 часов при 75°С, затем проводят центрифугирование раствора для осаждения нерастворенных частиц, диализ раствора в 20-кратном объеме воды при+4°С, при этом полученный раствор серицина и мочевины подвергают диализу, паутину нарезают на кусочки размером 1-2 мм и растворяют в концентрированной трифтор-уксусной кислоте (ТФУ) для получения белка спидроина, далее фторированную паутину для очистки подвергают диализу против воды, очищенные растворы фиброина, серицина, спидроина высушивают в лиофильной сушилке, полученные белки смешивают в соотношении спидроин:фиброин:серицин 0,05:0,25:1 и разбавляют дистилированной водой, причем для стабилизации добавляют бета-циклодекстрин, в соотношении к белкам 1:1, и гиалуроновую кислоту, 2% от общей массы раствора, при этом конечный раствор имеет следующий состав:

белок спидроин 0,05% (+-0,01%)

белок фиброин 0,25% (+-0,1%)

белок серицин 1%(+-0,5%)

бета-циклодекстрин 1,3% (+-0,2%)

бензоат натрия 0,013% (+-0,2%)

вода 97,387% (+-7,45%).

Сущность способа приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, заключается в следующем.

Приготовление раствора фиброина: на первом этапе нити шелка вытягивают из кокона и измельчают для лучшего контакта с промывающим/растворяющим агентом. На втором этапе шелковые нити обрабатывают 8-ми молярным раствором мочевины для удаления с поверхности белка серицина в течение 30 минут при 60°С.На третьем этапе шелк промывают водой до нейтрального рН, воду после промывки также сохраняют для выделения серицина и далее промывают горячей водой 60-90°С до достижения нейтрального рН. На четвертом этапе шелк высушивают при 60°С в течение 3 часов до постоянной массы или 10 часов при комнатной температуре. На пятом этапе высушенный шелк 5% растворяют в тройном растворителе СаС12:CH2OH:H2O с молярным соотношением 1:2:8 в течение 2 часов при 75°С.На шестом этапе полученный раствор центрифугируют при 300 об/мин в течение 10 минут для удаления нерастворенного шелка. На седьмом этапе раствор очищают путем диализа против дистиллированной воды с отсечкой по молекулярной массе 3-6 кДа в течение 48 часов при температуре 4°С. Далее полученный раствор замораживают в морозильной камере и лиофилизируют для получения порошка. Приготовление раствора спидроина: волокна паутины нарезают на кусочки размером 1-2 мм, для растворения шелка паука используют трифторуксусную кислоту (ТФУ): 20 мг высушенных шелковых волокон диспергируют в 1 мл растворителя ТФУ при постоянном перемешивании со скоростью 500 об/мин при комнатной температуре. Далее раствор фторированного шелка паука (18 мг/мл) осторожно переносят в диализную мембрану (Zellu Trans Dialysis Tube T4, Scienova GmbH, диаметр пор 12-14 кДа). Далее образец закрепляют на лабораторном штативе и помещают во внешнюю камеру буферного раствора. Состав буферной системы следующий: 400 мл деионизированной воды, 41,05 г CH3COONa (500 ммоль) и 11,7 г NaCl (200 ммоль). Диализ проводят в течение 5 дней при комнатной температуре при осторожном перемешивании буферной системы. Постоянную идентификацию рН проводят с помощью рН-метра ST3100-B, а оценку наличия ионов фтора - с помощью СаС12 качественные реакции. Обновление буфера проводят каждые 6 ч со второго дня до окончания диализа на пятый день. Конечный рН растворов белков шелка был равен 7. Значения рН внешней камеры и внутри диализной мембраны наблюдают каждые 6 часов. Буферную систему обновляют каждые 2 ч в течение первых двух суток эксперимента и оставляют на ночь.

Получение серицина: полученный раствор серицина и мочевины собирают в отдельную колбу для очистки. Воду после промывки шелка также сохраняют для выделения серицина. Далее раствор подвергают диализу против дистиллированной воды с отсечкой по молекулярной массе 3-6 кДа в течение 48 часов при комнатной температуре. Полученный раствор замораживают и лиофилизируют.Полученные белки смешивают в соотношении спидроин:фиброин:серицин 0.05:0.25:1. Для стабилизации белков в растворе добавляют бета-циклодекстрин в массовом соотношении к белкам 1:1. В качестве консерванта используют бензоат натрия составляющий 1/100 от массы белка в смеси. Также добавляют гиалуроновая кислота, которая служит в качестве дополнительного стабилизатора в количестве 2% от общей массы раствора.

Итоговые концентрации компонентов в растворе составляют: Серицин: 1% Спидроин: 0,05% Фиброин: 0,25% Бета-циклодекстрин: 1,3% Бензоат натрия: 0,013% Гиалуроновая кислота: 2% Вода: 95,387%. Итоговый раствор планируют добавлять как активный компонент в различные косметические и лечебные мази, кремы с дальнейшим нанесение их на поврежденный участок для ускорения регенерации. Конечный раствор: без запаха, прозрачный, рН 5,5-6.

Краткое описание чертежей и иных материалов

На фиг. 1 дан способ приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, тест пролиферации белка серицина, табл.1.

На фиг. 2, то же, график пролиферации клеток, диаграмма 1.

На фиг. 3, то же, МТТ-анализ после 24 ч инкубации, диаграмма 2.

На фиг. 4, то же, МТТ-анализ после 48 ч инкубации, диаграмма 3.

На фиг. 5, то же, график зависимости стабильности раствора от дикстрина, график 1.

На фиг. 6, то же, график зависимости стабильности раствора от дикстрина, график 2.

На фиг. 7, то же, тест пролиферации белка серицина, табл.2.

На фиг. 8, то же, график пролифирации клеток 96 часов, диаграмма 4.

На фиг. 9, то же, МСК крысы + белок 0,1 мг на хитозановой пленке, фото 1.

На фиг. 10, то же, МСК крысы + белок 0,5 мг на хитозановой пленке, фото 2.

На фиг. 11, то же, контроль MSC без белка, график 3.

На фиг. 12, то же, шелк паука 300 мкл, график 4.

На фиг. 13, то же, электрофоретический анализ коммерчески доступных порошков серицина и пептидов шелка, рис. 1.

На фиг. 14, то же, спектрофотометрический анализ коммерчески доступных растворов пептидов шелка концентрация 200 мг/мл и серицина, график 5.

На фиг. 15, то же, спектрофотометрический анализ коммерчески доступных растворов пептидов шелка концентрация 140 мг/мл и серицина, график 6.

На фиг. 16, то же, электрофоретический анализ растворов пептидов паутины, рис. 2.

На фиг. 17, то же, электрофоретический анализ 2-х компонентного раствора, содержащего серицин и фиброин, рис. 3.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного осуществления способа приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин.

Эксперименты были проведены на клеточной линии HPF (фибробласты). Клеточное культивирование: HPF fibroblast cells were cultured in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 50 mg/mL gentamicin. Cells were incubated at 37°C in a 5% CО2 humidified incubator.

Клетки высеивались в 24-луночные планшеты по 25.000 клеток/лунка. Были оставлены на ночь в инкубаторе при 37°С в 5% СО2. (рабочий объем лунки - 500 мкл). Были подготовлены образцы различной концентрации - 0,5, 0,25, 0,1 мас %. Исходные растворы были предоставлены в концентрации 5 мас %, для разбавления растворов использовалась клеточная среда DMEM. Итоговый объем всех образцов различных концентраций - 500 мкл. Клеточная среда в 24-луночных планшетах была заменена на растворы белков различных концентраций в DMEM. Планшеты были оставлены на 24 и 48 часов в инкубаторе при 37°С в 5% CO2. (Технические повторности - 2). 24 часа были проанализированы с помощью МТТ анализа. 48 часов были проанализированы с помощью проточной цитометрии. Подсчет живых клеток в каждой из экспериментальных лунок. После 24 ч. инкубации бы сделан МТТ - анализ, где подсчитали, что процент выживаемость у всех клеток находится в пределах одинаковых значений вне зависимости от концентрации белка. В следствии этого был сделан вывод, что нужно вести подсчет с помощью проточной цитометрии. На анализе проточной цитометрии после 48 ч. инкубации видно, что пролиферация (оценочная концентрация клеток) выше всего у фиброина с добавлением бета-циклодекстрина в соотношении 1:1 в концентрации 0,1 мас %. Соответственно, это процентное соотношение 0,1 мас % белка с бета-цеклодекстрином добавляется в 1%, 3%, 5% предложенного раствора. При добавлении декстрина улучшается стабильность раствора и для уменьшения седиментации и агрегации белковых молекул было решено добавлять 0,01% 6-декстрина, который стабилизирует молекулы и позволяет белкам с низкой массой не агрегировать в растворе, добавление 1% гиалуроновой кислоты позволяет увеличить вязкость раствора в результате чего пептиды длительно не агрегируют в растворе. Смещение показателей графика в левую сторону свидетельствует о положительном результате. При концентрации серицина 100 мкг/мг (1%) замечено значительное увеличение пролиферации клеток исследуемой группы по сравнению с контролем Проведение испытаний безопасности и эффективности раствора с белком паутины пауков птицеедов на клеточных культурах.

Проведены испытания безопасности и эффективности средства на клеточных культурах с белком паутины пауков. Ускоренная регенерация была подтверждена на проведенных испытаниях. Были взяты мезенхимальные стволовые клетки (далее МСК) крысы. МСК высевались на 12-ти луночный планшет по 50 т. Для ведения культуры на протяжении 3-х дней готовились образцы: контроль, добавление белка паутины 0,1 и 0,5 мг. Средой для исследуемых клеток являлась подложка из хитозана для анализа пролиферации.

Далее к этим клеткам добавлялись разные концентрации белка паутины, а именно 0,5 мг и 0,1 мг, а также группа контроля с той же подложкой, но без добавления белка. Через 7 дней после заморозки по стандартному протоколу, клетки промывались фосфатно-солевым буфером, окрашивались EtBr (этидиум бромид) и считались на цитометре Beckman.

Исследования показали, что добавление на клеточные культуры белка паутины в 1.5-2 раза ускоряют пролиферацию клеток. Исследования показали, что процент мертвых клеток равен приблизительно 71%, в тоже время процент живых клеток равен 28%. Исследования показали, что выживаемость клеток в данной группе равна приблизительно 76%. Данные результаты свидетельствуют о благоприятном воздействии протеинов паутины на исследуемые клетки, а также минимальном токсическом воздействии. Таким образом, доказано, что белки паутины пауков-птицеедов обладают минимальным токсическим действием. Они не только повышают пролиферации клеточной культуры, указывая на перспективные возможности к регенерации, но также обладают свойствами, повышающими выживаемость клеток.

В лунки 1-5 внесено 50 мкл, 15 мкл,10 мкл, 5 мкл, 3 мкл раствора серицина (концентрация 140 мг/мл), соответственно. В лунки 6-12 внесено 3 мкл, 5 мкл, 10 мкл, 15 мкл, 50 мкл раствора пептидов шелка (концентрация 200 мг/мл), соответственно. Черным квадратом выделена область, на который видны следовые количества белка серицина. М - белковый маркер (Thermo Scientific №26614), а цифры 50, 25 и 10 соответствуют молекулярному весу (кДа) полос белкового маркера.

Образцы 1 -6 на левой электрофореграмме отражают наличие пептидов паутины молекулярной массы 15 кДа и 20 кДа в водном растворе. Черные стрелки указывают на положение мажорных белков в растворах. М - белковый маркер (Thermo Scientific №26614). Образец 1 правой панели - 20 мкл 2-компонентного раствора (концентрация серицина 1%, фиброина - 0,25%), образец 2 - 20 мкл раствора фиброина (концентрация 0,25%). М контрольные белки с известной молекулярной массой (50 кДа, 17кДа и 15 кДа).

Таким образом, в отличие от коммерческих растворов «Высококачественная натуральная шелковая серициновая пудра косметического класса» и «99% маленький натуральный пептид активного шелка, пептид протеина фиброина, порошок серицина» (производство Китай), оптимально - подобранная формула предложенного раствора позволяет не только достигать положительных эффектов таких как увеличение пролиферации клеток для восстановления поврежденной ткани благодаря активации сигнальных путей NF-κВ, питание и увлажнение кожи, активация ангиогенеза в поврежденном участке, но и за счет стабилизированных молекул белка увеличивается вязкость раствора и снижается шанс агрегации белков.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- увеличение пролиферации клеток для восстановления поврежденной ткани благодаря активации сигнальных путей NF-κB;

- активация ангиогенеза в поврежденном участке;

- снижение образования келлоидных рубцов;

- ускорение регенерации покровной ткани;

- снижение косметического дефекта тканей при глубоких повреждениях.

Изобретение относится к области техники биомедицинских материалов, а именно к способу приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин. Способ приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, включающий вытягивание и измельчение коконов шелкопрядов, отличающийся тем, что дополнительно очищают от серицина 8-молярным раствором мочевины температурой 60°С в течение 30 минут с получением раствора серицина в мочевине, далее производят промывку шелка, сушку шелка при температуре 60°С в течение 3-х часов или при комнатной температуре в течение 10 часов, следующим этапом приготавливают раствор 1:2:8 СаСl₂:EtOH:H₂O и растворяют в нем высушенный шелк в течение 2 часов при 75°С, затем проводят центрифугирование раствора для осаждения нерастворенных частиц, диализ раствора в 20-кратном объеме воды при +4°С, при этом полученный раствор серицина и мочевины подвергают диализу, паутину нарезают на кусочки размером 1-2 мм и растворяют в концентрированной трифторуксусной кислоте (ТФУ) для получения белка спидроина, далее фторированную паутину для очистки подвергают диализу против воды, очищенные растворы фиброина, серицина, спидроина высушивают в лиофильной сушилке, полученные белки смешивают в соотношении спидроин:фиброин:серицин 0,05:0,25:1 и разбавляют дистилированной водой, причем для стабилизации добавляют бета-циклодекстрин, в соотношении к белкам 1:1, в качестве консерванта используют бензоат натрия, составляющий 1/100 от массы белка, и добавляют в качестве стабилизатора гиалуроновую кислоту в количестве 2% от общей массы раствора, при этом конечный раствор имеет следующий состав: белок спидроин 0,05%, белок фиброин 0,25%, белок серицин 1%, бета-циклодекстрин 1,3%, бензоат натрия 0,013%, гиалуроновая кислота 2%, вода 95,387%. Изобретение позволяет получить регенерирующий раствор, содержащий фиброин, спидроин и серицин, объединить свойства шелка паука и шелкопряда в одном растворе, повысить их совместный регенераторный потенциал, снизить образование келоидных рубцов, ускорить регенерацию покровной ткани, снизить косметический дефект тканей при глубоких повреждениях. 17 ил.

Способ приготовления регенерирующего раствора, содержащего белки паутины пауков спидроин, фиброин, серицин, включающего вытягивание и измельчение коконов шелкопрядов, отличающийся тем, что дополнительно очищают от серицина 8-молярным раствором мочевины температурой 60°С в течение 30 минут с получением раствора серицина в мочевине, далее производят промывку шелка, сушку шелка при температуре 60°С в течение 3-х часов или при комнатной температуре в течение 10 часов, следующим этапом приготавливают раствор 1:2:8 СаСl₂:EtOH:H₂O и растворяют в нем высушенный шелк в течение 2 часов при 75°С, затем проводят центрифугирование раствора для осаждения нерастворенных частиц, диализ раствора в 20-кратном объеме воды при +4°С, при этом полученный раствор серицина и мочевины подвергают диализу, паутину нарезают на кусочки размером 1-2 мм и растворяют в концентрированной трифторуксусной кислоте (ТФУ) для получения белка спидроина, далее фторированную паутину для очистки подвергают диализу против воды, очищенные растворы фиброина, серицина, спидроина высушивают в лиофильной сушилке, полученные белки смешивают в соотношении спидроин:фиброин:серицин 0,05:0,25:1 и разбавляют дистилированной водой, причем для стабилизации добавляют бета-циклодекстрин, в соотношении к белкам 1:1, в качестве консерванта используют бензоат натрия, составляющий 1/100 от массы белка, и добавляют в качестве стабилизатора гиалуроновую кислоту в количестве 2% от общей массы раствора, при этом конечный раствор имеет следующий состав:

белок спидроин 0,05%

белок фиброин 0,25%

белок серицин 1%

бета-циклодекстрин 1,3%

бензоат натрия 0,013%

гиалуроновая кислота 2%

вода 95,387%.