ПРИМЕНЕНИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩЕЙ ИНГИБИТОР ERRγ В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА, ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ЭФФЕКТА Российский патент 2024 года по МПК A61K31/495 A61K31/4412 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к применению композиции для усиления противоопухолевого эффекта, включающей в качестве активного ингредиента ингибитор эстроген-связанного рецептора гамма (ERRγ), и, более конкретно, к фармацевтической композиции для ингибирования устойчивости рака печени к сорафенибу и усиления противоопухолевого эффекта, включающей ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента, способу лечения устойчивого к сорафенибу рака печени с его использованием. Кроме того, оно относится к набору для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, в котором ERRγ используется в качестве биомаркера для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, и к способу предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени с его использованием.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Одной из основных причин смерти в Корее являются злокачественные новообразования (рак). Согласно статистике причин смерти, опубликованной Национальным статистическим управлением, уровень смертности от рака печени в 2016 году составил 21,5 на 100000 человек, что уступает только смертности от рака легких (Hepatocellular Carcinoma Treatment Guidelines, Korean Liver Cancer Society, 2018).

Основным способом лечения рака печени является резекция печени, которая представляет собой основной терапевтический метод лечения пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой, ограниченной печенью без цирроза (Lang Н., Liver resection for hepatocellular carcinoma in non-cirrhotic liver without underlying viral hepatitis. Br J Surg. 2005 Feb. 92(2): 198-202), но его можно рассматривать в первую очередь, когда ожидается, что остаточная функция печени будет достаточной даже при наличии цирроза (Capussotti L, Muratore A, Massucco Р, Ferrero A, Polastri R, Bouzari H Major liver resections for hepatocellular carcinoma on cirrhosis: early and long-term outcomes. Liver Transpl., 2004 Feb, 10 (2 Suppl 1): S64-8), и только 30-40% пациентов с диагнозом на ранней стадии можно лечить хирургическим путем.

При наличии внепеченочных метастазов в местные лимфатические узлы, легкие и т.п. или при инвазии сосудов печени пациентов лечат с использованием мультикиназного ингибитора сорафениба (Nexavar®). В этом случае степень повышения выживаемости в клинической практике не соответствует ожидаемому уровню, и рак рецидивирует в течение 6 мес.Таким образом, продолжаются попытки по преодолению этого заболевания (Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, et al., Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma. N Engl J Med 2008; 359: 378-390).

Тем временем проводятся исследования метаболизма рака и разработка новых лекарственных средств, чтобы преодолеть ограничения существующих противоопухолевых препаратов или направленных терапевтических агентов, а также изучить метаболические характеристики рака путем исследования специфического метаболического контроля раковых клеток, отличных от нормальных клеток (Vander Heiden MG. Targeting cancer metabolism: a therapeutic window opens. Nat Rev Drug Discov 2011; 10: 671-684).

ДОКУМЕНТ УРОВНЯ ТЕХНИКИ

Патентный документ

Патентный документ 1: публикация патента Кореи No. 10-1704533

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая задача

Соответственно, авторы настоящего изобретения обнаружили, что ингибитор ERRγ ингибирует устойчивость рака печени к сорафенибу и эффективно ингибирует пролиферацию рака печени. Таким образом, настоящее изобретение было создано на основе этого обнаружения.

Соответственно, одна из задач настоящего изобретения заключается в предложении фармацевтической композиции для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающей ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении фармацевтической композиции для ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающей ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении фармацевтической композиции для предупреждения или лечения рака печени, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа скрининга вещества, которое усиливает лечение устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего обработку клеток рака печени, устойчивых к сорафенибу, веществом-кандидатом и оценку активности или экспрессии ERRγ в клетках.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении набора для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего агент для измерения уровня мРНК гена эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или белка, экспрессируемого из него.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, для определения того проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предоставления информации, необходимой для определения терапевтического способа для пациента с раком печени, включающего следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа диагностики или лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение другого терапевтического агента против рака печени, отличного от сорафениба, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающего введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предупреждения или лечения рака печени, включающего введение ингибитора ERRγ и сорафениба пациенту с раком печени.

Однако технические задачи, которые должны быть решены в настоящем изобретении, не ограничиваются вышеописанными техническими задачами, и поэтому следует понимать, что технические задачи, которые не описаны в данном описании, станут очевидными для специалистов в данной области техники из подробного описания изобретения.

Техническое решение

Для решения вышеуказанных задач в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предложен агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или усилении лечения устойчивого к сорфенибу рака печени.

В данном отношении, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающая ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение ингибитора ERRγ для предупреждения, облегчения состояния или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения агент для ингибирования активности белка ERRγ может представлять собой обратный агонист или антагонист против ERRγ, или антитело или аптамер, способные специфически связываться с ERRγ, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения обратный агонист против ERRγ может представлять собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, но не ограничивается соединением, при условии что оно является обратным агонистом против ERRγ, который проявляет действие, эквивалентное данному соединению:

[Формула 1]

В соответствии с другим воплощением настоящего изобретения агент для ингибирования экспрессии гена ERRγ может быть выбран из группы, состоящей из микроРНК, миРНК (малая интерферирующая РНК), кшРНК (короткая шпилечная РНК) и антисмыслового олигонуклеотида, все из которых специфически связываются с мРНК данного гена, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в ингибировании устойчивости к сорафенибу при предупреждении или лечении рака печени.

В данном отношении, согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающая ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение ингибитора ERRγ для ингибирования устойчивости рака печени к сорафенибу.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена композиция, включающая агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или лечении рака печени.

В данном отношении, согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения рака печени, включающая ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения рака печени, включающий введение субъекту композиции, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение композиции, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов, для предупреждения, улучшения состояния или усиления лечения рака печени.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения композиция может повышать лекарственную чувствительность рака печени к сорафенибу или может усиливать противоопухолевый эффект сорафениба в отношении рака печени, но настоящее изобретение этим не ограничивается.

Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения композицию можно вводить одновременно с сорафенибом, отдельно или последовательно, но настоящее изобретение этим не ограничивается.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ скрининга вещества, усиливающего лечение устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий обработку клеток рака печени, устойчивого к сорафенибу, веществом-кандидатом и оценку активности или экспрессии ERRγ в этих клетках.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен набор для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий агент для измерения уровня мРНК гена эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или белка, экспрессируемого из него.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения агент для измерения уровня мРНК гена может включать пару праймеров, зонд или антисмысловой нуклеотид, который специфически связывается с данным геном, но настоящее изобретение этим не ограничивается.

Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения агент для измерения уровня белка может включать антитело или аптамер, специфичные для данного белка, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения набор может включать набор для ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией), набор для конкурентной ОТ-ПЦР, набор для ОТ-ПЦР в реальном времени, набор ДНК-чипов или набор белковых чипов, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, для определения того проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предоставления информации, необходимой для определения терапевтического способа для пациента с раком печени, включающий следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ диагностики или лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение другого терапевтического агента против рака печени, отличного от сорафениба, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Согласно одному воплощению настоящего изобретения биологический образец может включать ткань печени, клетки печени, цельную кровь, плазму, сыворотку или кровь, но настоящее изобретение ими не ограничивается.

Благоприятные эффекты

Согласно настоящему изобретению ингибитор эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) обладает эффектом повышения чувствительности к противоопухолевому препарату сорафенибу, ингибирования пролиферации устойчивых к сорафенибу клеток рака печени и значительного уменьшения размера рака печени. Таким образом, ожидается, что настоящее изобретение будет эффективно использовано в качестве фармацевтической композиции для лечения распространенного рака печени, устойчивого к сорафенибу. Кроме того, с помощью способа предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению можно прогнозировать терапевтическую реакцию пациентов с раком печени на сорафениб и тем самым определять терапевтическую стратегию для каждого пациента на основе результатов прогнозирования, таким образом обеспечивая эффективное лечение рака печени.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1А-1В представляют собой диаграммы, показывающие результаты конструирования клеточной линии рака печени, проявляющей устойчивость к сорафенибу (Huh7: клеточная линия рака печени; Huh7-R: устойчивая к сорафенибу клеточная линия рака печени; SK-Hep: клеточная линия рака печени; SK-Hep-R: устойчивая к сорафенибу клеточная линия рака печени).

Фиг. 2А и 2Б представляют собой диаграммы, показывающие, что орфанный ядерный рецептор ERRγ увеличивается в клеточных линиях рака печени, устойчивых к сорафенибу Huh7-R (Фиг. 2А) и SK-Hep-R (Фиг. 2Б).

Фиг. 3А и 3Б представляют собой диаграммы, показывающие результаты лечения устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени Huh7-R (Фиг. 3А) и SK-Hep-R (Фиг. 3Б) соединением (DN200434) формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, что указывает на увеличение количества реакционноспособных форм кислорода (ROS) в каждой из устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени.

Фиг. 4А и 4Б представляют собой диаграммы, показывающие, что устойчивые к сорафенибу клеточные линии рака печени Huh7-R (Фиг. 4А) и SK-Hep-R (Фиг. 4Б), которые не оказывали противоопухолевого эффекта при обработке клеточных линий только сорафенибом, снижали пролиферацию клеток при одновременной обработке клеточных линий соединением формулы 1 (DN200434) и сорафенибом.

Фиг. 5А представляет собой изображение, показывающее, что размер опухоли заметно уменьшается в животной модели (ксенотрансплантат), полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контрольной группой (группа, получавшая только сорафениб).

Фиг. 5Б представляет собой график, показывающий, что масса опухоли заметно снижается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб).

Фиг. 5В представляет собой диаграмму, показывающую, что объем опухоли значительно уменьшается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (Huh7-R-Con; группа, получавшая только сорафениб).

Фиг. 5Г представляет собой диаграмму, показывающую отсутствие изменений массы тела между группами в результате эксперимента с использованием животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R.

Фиг. 6А представляет собой изображение, показывающее, что размер опухоли значительно уменьшается в животной модели (ксенотрансплантат), полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб).

Фиг. 6Б представляет собой график, показывающий, что масса опухоли значительно уменьшается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб).

Фиг. 6В представляет собой диаграмму, показывающую, что объем опухоли заметно уменьшается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (Huh7-R-Con; группа, получавшая только сорафениб).

Фиг. 6Г представляет собой диаграмму, показывающую отсутствие изменений массы тела между группами в результате эксперимента с использованием животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R.

Наилучший способ осуществления изобретения

В настоящем изобретении предложен агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или усилении лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.

В данном отношении, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающая в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в ингибировании устойчивости к сорафенибу при предупреждении или лечении рака печени.

В данном отношении, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающая в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложена композиция, включающая агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или лечении рака печени.

В данном отношении, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения рака печени, включающая в качестве активных ингредиентов агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, и сорафениб.

Как используют в данном описании, термин «рак печени» относится к первичной злокачественной опухоли, возникающей преимущественно в печени. В патологическом (анамнестическом) аспекте первичная злокачественная опухоль включает различные типы первичного рака печени, такие как гепатоцеллюлярная карцинома, холангиокарцинома, гепатобластома и гемангиосаркома. Среди них гепатоцеллюлярная карцинома и холангиокарцинома составляют большинство случаев первичного рака печени.

В настоящем изобретении рак печени может представлять собой гепатоцеллюлярную карциному (НСС), но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Как используют в данном описании, термин «усиление лечения» относится ко всем типам действий для улучшения или благоприятного изменения симптомов устойчивого к сорафенибу рака печени путем введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению после того, как рак печени приобрел устойчивость к сорафенибу.

Как используют в данном описании, термин «лечение» относится ко всем типам действий по улучшению или благоприятному изменению симптомов рака печени путем введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению до или после того, как рак печени приобрел устойчивость к сорафенибу.

В настоящем изобретении фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может повышать чувствительность лекарственного средства к сорафенибу или может усиливать противоопухолевый эффект сорафениба в отношении рака печени, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения клеточная линия Huh7-SR или SK-Hep-R была сконструирована в качестве устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени, и было подтверждено, что эстроген-связанный рецептор γ (ERRγ) в качестве орфанного ядерного рецептора значительно увеличивается в клеточной линии рака печени, приобретающей устойчивость к сорафенибу (см. Пример 1).

Также согласно одному воплощению настоящего изобретения было подтверждено, что при обработке устойчивых к сорафенибу клеток рака печени соединением (DN200434) формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, ROS увеличивается. Кроме того, было подтверждено, что устойчивые к сорафенибу клетки рака печени, которые не оказывали противоопухолевого эффекта при обработке клеточных линий только сорафенибом, снижали пролиферацию клеток при одновременной обработке клеточных линий соединением (DN200434) формулы 1 и сорафенибом. В результате было подтверждено, что соединение формулы 1 повышает чувствительность к сорафенибу посредством ингибирования активности ERRγ, тем самым проявляя эффект преодоления лекарственной устойчивости (см. Пример 2).

Кроме того, согласно одному воплощению настоящего изобретения было подтверждено, что при измерении изменения размера массы, образованной после введения соединения формулы 1 в комбинации с сорафенибом, на животной модели, полученной из устойчивого к сорафенибу рака печени, размер рака печени заметно снижается по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб) (см. Пример 3).

В настоящем изобретении агент для ингибирования активности белка ERRγ может представлять собой обратный агонист или антагонист против ERRγ, или антитело или аптамер, способные специфически связываться с ERRγ, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Как используют в данном описании, термин «обратный агонист» или «антагонист» относится к молекуле, способной прямо или опосредованно снижать биологическую активность рецептора, и включает молекулы, способные снижать действие лиганда при использовании в сочетании с лигандом рецептора, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Как используют в данном описании, термин «антитело» относится к белковой молекуле, способной специфически связываться с антигенным участком белковой или пептидной молекулы. В этом случае белок, кодируемый маркерным геном, может быть получен путем клонирования каждого гена в вектор экспрессии в соответствии с общепринятым способом, и такое антитело может быть получено из полученного белка с использованием общепринятого способа.

Как используют в данном описании, термин «аптамер» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая обладает связывающей активностью в отношении заранее определенной молекулы-мишени. Аптамер может представлять собой РНК, ДНК, модифицированную нуклеиновую кислоту или их смесь и может быть в линейной или циклической форме. В общем, химический синтез и массовое производство могут быть проще, поскольку нуклеотидная последовательность, составляющая аптамер, становится короче, и известно, что аптамер имеет большое преимущество с точки зрения затрат, легко химически модифицируется и демонстрирует превосходную стабильность in vivo и низкую токсичность.

Обратный агонист и антагонист могут представлять собой соединение.

В настоящем изобретении обратный агонистом против ERRγ может представлять собой соединение формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, но настоящее изобретение не ограничивается этим:

[Формула 1]

Как используют в данном описании, термин «фармацевтически приемлемый» подходит для использования при контакте с тканями субъекта (например человека), поскольку соотношение польза/риск является разумным без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергических реакций или других проблем или осложнений. В этом случае данный термин относится к соединению или композиции, которые находятся в компетенции здравого медицинского суждения.

Соединение по настоящему изобретению можно использовать в форме фармацевтически приемлемой соли. В этом случае в качестве соли можно использовать соль присоединения кислоты, образованную фармацевтически приемлемой свободной кислотой.

Соль присоединения кислоты может быть получена из неорганических кислот, таких как соляная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, азотная кислота или фосфорная кислота, и алифатических моно- и дикарбоксилатов, фенилзамещенных алканоатов, гидроксиалканоатов и алкандиоатов, и нетоксичных органических кислот, таких как ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты и т.п.

Такая фармацевтически нетоксичная соль включает сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, фторид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капрат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себацинат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексан-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитро бензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, терефталат, бензолсульфонат, толуолсульфонат, хлорбензолсульфонат, ксилолсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, β-гидроксибутират, гликолят, малат, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат или манделат.

Соль присоединения кислоты по настоящему изобретению может быть получена обычным способом, например, путем растворения соединения формулы 1 в водном растворе кислоты и осаждения соли в смешивающемся с водой органическом растворителе, таком как метанол, этанол, ацетон или ацетонитрил. Кроме того, соль присоединения кислоты может быть получена путем выпаривания растворителя или избытка кислоты из смеси и сушки смеси или путем отфильтровывания осажденной соли отсасыванием.

Кроме того, фармацевтически приемлемая соль металла может быть получена с использованием основания. Соль щелочного или щелочноземельного металла получают, например, растворением соединения формулы 1 в избытке раствора гидроксида щелочного металла или гидроксида щелочноземельного металла, фильтрованием нерастворившейся соли соединения и упариванием и сушкой фильтрата. В этом случае может быть фармацевтически подходящим получение соли натрия, калия или кальция в качестве соли металла. Соль серебра, соответствующую соли металла, получают реакцией соли щелочного металла или щелочноземельного металла с подходящей солью серебра (например, нитратом серебра).

Все изомеры, гидраты и сольваты, которые можно получить обычными способами, а также их фармацевтически приемлемые соли, могут быть включены в объем соединения по настоящему изобретению.

В настоящем изобретении агент для ингибирования экспрессии гена ERRγ может быть выбран из группы, состоящей из микроРНК, миРНК, кшРНК и антисмыслового олигонуклеотида, все из которых специфически связываются с мРНК гена, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Как используют в данном описании, термины «микроРНК», «миРНК» и «кшРНК» относятся к молекулам нуклеиновых кислот, которые в основном связываются с мРНК, транскрибируемой с гена-мишени, чтобы опосредовать РНК-интерференцию или молчание генов, тем самым ингибируя трансляцию мРНК. Поскольку микроРНК, миРНК и кшРНК могут ингибировать экспрессию гена-мишени на уровне трансляции, их можно использовать в эффективном методе нокдауна гена или методе генной терапии.

Как используют в данном описании, термин «антисмысловой олигонуклеотид» относится к ДНК или РНК или их производным, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты, комплементарную конкретной последовательности мРНК. В этом случае антисмысловой олигонуклеотид может связываться с комплементарной последовательностью мРНК, тем самым ингибируя трансляцию мРНК в белок.

Между тем, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать соответствующий носитель, эксципиент и/или разбавитель, обычно используемые для приготовления фармацевтической композиции в дополнение к активному ингредиенту. Кроме того, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в форме пероральных составов, таких как порошки, гранулы, таблетки, капсулы, суспензии, эмульсии, сиропы, аэрозоли и т.п., препаратов для наружного применения, суппозиториев и стерильных растворов для инъекций, и могут быть использованы в соответствии с обычными методами.

Носитель, эксципиент и разбавитель, которые могут быть включены в композицию, включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральные масла и т.п. При приготовлении композиции, композицию можно изготовить с использованием разбавителя или эксципиента, такого как наполнитель, разбавитель, связующее вещество, смачивающее вещество, разрыхлитель, поверхностно-активное вещество и т.п., обычно используемые в данной области техники.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят в фармацевтически эффективном количестве. В настоящем изобретении термин «фармацевтически эффективное количество» относится к количеству, достаточному для лечения заболевания при разумном соотношении польза/риск, применимом к медикаментозному лечению, и эффективный уровень дозы может быть определен в зависимости от типа и тяжести заболевания пациента, активности лекарственного средства, чувствительности к лекарственному средству, времени введения, пути введения и скорости выведения, периода лечения, факторов, включающих одновременно используемые лекарственные средства, и других факторов, хорошо известных в области медицины.

В настоящем изобретении фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена одновременно с сорафенибом, отдельно или последовательно, а также может быть введена в виде одной или нескольких доз.

Принимая во внимание все вышеперечисленные факторы, важно вводить количество, которое может обеспечить максимальный эффект при минимальном количестве без каких-либо побочных эффектов, что может определить специалист в данной области техники. В частности, эффективное количество фармацевтической композиции по настоящему изобретению может варьировать в зависимости от возраста, пола, состояния и массы тела пациента, абсорбции активного ингредиента в организме, скорости инактивации и скорости выведения, типа заболевания и одновременно применяемых препаратов.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена субъекту различными путями введения. Например, фармацевтическую композицию можно вводить путем перорального введения, интраназального введения, трансбронхиального введения, артериальной инъекции, внутривенной инъекции, подкожной инъекции, внутримышечной инъекции или внутрибрюшинной инъекции. Суточная доза может быть введена один или несколько раз в сутки.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен способ предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.

В частности, предложен способ предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении также предложен способ ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.

В частности, предложен способ ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающий введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен способ предупреждения или лечения рака печени, включающий введение субъекту композиции, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.

В частности, предложен способ предупреждения или лечения рака печени, включающий введение ингибитора ERRγ и сорафениба пациенту с раком печени.

В способе по настоящему изобретению рак печени может представлять собой устойчивый к сорафенибу рак печени, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Как используют в данном описании, термин «субъект» относится к субъекту, нуждающемуся в предупреждении, лечении, усилении лечения заболевания или подавлении устойчивости при заболевании. Например, субъект может включать людей или млекопитающих, включая приматов, отличных от человека, мышей, собак, кошек, лошадей, овец и крупного рогатого скота.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении также предложен способ скрининга вещества, усиливающего лечение устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий (а) обработку клеток с устойчивым к сорафенибу раком печени веществом-кандидатом; и (б) оценку активности или экспрессии ERRγ в клетках. Вещество, способное ингибировать активность или экспрессию ERRγ в клетках устойчивого к сорафенибу рака печени, может быть отобрано таким способом и может быть использовано в качестве усилителя или адъюванта для лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен набор для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени.

В частности, набор для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени включает агент для измерения уровня мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него.

В настоящем изобретении термин «диагностика» означает подтверждение наличия или характеристик патологического состояния. В настоящем изобретении диагностика заключается в определении наличия или возникновения устойчивого к сорафенибу рака печени путем измерения уровня мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него.

Используемый в настоящем изобретении термин «агент для измерения уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или его белка» относится к молекуле, которую можно использовать для проверки уровня экспрессии гена ERRγ или белка, кодируемого таким геном. В этом случае агент предпочтительно может представлять собой пару праймеров, зонд или антисмысловой нуклеотид, все из которых специфически связываются с геном ERRγ, или может представлять собой антитело или аптамер, специфичные для белка, кодируемого геном ERRγ.

В настоящем изобретении термин «праймер» относится к короткой последовательности нуклеиновой кислоты, имеющей свободную 3'-гидроксильную группу, то есть к короткой последовательности нуклеиновой кислоты, которая может образовывать пару оснований с комплементарной матрицей и служит исходной точкой для копирования матрицы. В настоящем изобретении ПЦР-амплификацию можно проводить с использованием смысловых и антисмысловых праймеров маркерного полинуклеотида по настоящему изобретению для скрининга пациентов с устойчивым к сорафенибу раком печени на уровень продукции желаемого продукта. Условия ПЦР, длина смыслового и антисмыслового праймеров могут быть модифицированы на основе того, что известно в данной области техники.

Используемый в настоящем изобретении термин «зонд» относится к фрагменту нуклеиновой кислоты, такому как РНК или ДНК, соответствующему от нескольких оснований до нескольких сотен оснований, которые могут специфически связываться с мРНК и могут быть помечены для определения наличия/отсутствия специфической мРНК. Зонд может быть изготовлен в виде олигонуклеотидного зонда, одноцепочечного ДНК-зонда, двухцепочечного ДНК-зонда, РНК-зонда и т.п. В настоящем изобретении гибридизацию можно проводить с использованием зонда, комплементарного полинуклеотиду ERRγ по настоящему изобретению, для скрининга пациентов с устойчивым к сорафенибу раком печени на основе степени гибридизации. Выбор подходящих зондов и условий гибридизации можно модифицировать на основе того, что известно в данной области техники.

Праймеры или зонды по настоящему изобретению могут быть химически синтезированы с использованием метода с твердой подложкой на основе фосфорамидита или других хорошо известных методов. Такие последовательности нуклеиновых кислот также могут быть модифицированы с использованием ряда способов, известных в данной области техники. Неограничивающие примеры таких модификаций включают метилирование, инкапсуляцию, замену одного или более гомологов природного нуклеотида и межнуклеотидные модификации, такие как модификации незаряженных связей (например, метилфосфонат, фосфотриэфир, фосфорамидат, карбамат и т.д.) или заряженных связей (например, фосфоротиоат, фосфородитиоат и т.д.).

Нуклеотидную последовательность агента для измерения уровня экспрессии гена ERRγ, используемого в настоящем изобретении, интерпретируют как включающую последовательность, которая проявляет существенную идентичность с последовательностью, специфически связывающейся с геном ERRγ, с учетом мутаций, обладающих биологически эквивалентной активностью. Термин «существенная идентичность» относится к последовательности, которая демонстрирует идентичность по меньшей мере на 60%, более конкретно идентичность на 70%, еще более конкретно идентичность на 80% и наиболее конкретно идентичность на 90%, при выравнивании конкретной последовательности и любых других последовательностей до максимально возможного соответствия и анализе выровненной последовательности с использованием алгоритма, обычно используемого в данной области техники.

В наборе по настоящему изобретению термины «антитело» и «аптамер» являются такими же, как описано для фармацевтической композиции, и поэтому их описание будет опущено.

Набор по настоящему изобретению можно использовать для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени путем проверки уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или уровня экспрессии белка, кодируемого этим геном, или использовать для прогнозирования терапевтического ответа на сорафениб.

Поскольку набор по настоящему изобретению можно использовать для прогнозирования терапевтического ответа на сорафениб, этот набор также можно использовать для предсказания прогноза у пациентов с раком печени.

В настоящем изобретении термин «прогнозирование» относится к процессу предсказания медицинских последствий заранее, а для целей настоящего изобретения означает предположение об устойчивости пациентов с раком печени к сорафенибу.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения набор может представлять собой набор для ОТ-ПЦР, набор для конкурентного ОТ-ПЦР, набор для ОТ-ПЦР в реальном времени, набор ДНК-чипов или набор белковых чипов, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения набор для измерения уровня экспрессии мРНК гена ERRγ может представлять собой набор, включающий основные элементы, необходимые для проведения ОТ-ПЦР. В дополнение к каждой паре праймеров, специфичных для маркерного гена, набор для ОТ-ПЦР содержит пробирки или другие подходящие контейнеры, реакционный буфер, дезоксинуклеотиды (дНТФ), Taq-полимеразу и обратную транскриптазу, ДНКазу, ингибитор РНКазы, DEPC-воду, стерильную воду и т.п.

Набор по настоящему изобретению может включать набор для выделения нуклеиновой кислоты (например, тотальной РНК) из жидкости, клеток или ткани организма, флуоресцентное вещество для мечения, фермент и среду для амплификации нуклеиновых кислот, инструкции по применению, и тому подобное.

В соответствии с другим воплощением настоящего изобретения набор по настоящему изобретению может представлять собой набор для обнаружения ERRγ, включающий основные элементы, необходимые для использования ДНК-чипа. Набор ДНК-чипов может включать субстрат, к которому в качестве зонда присоединена кДНК, соответствующая гену или его фрагменту, и субстрат может включать кДНК, соответствующую гену количественного контроля или его фрагменту.

Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения набор для измерения уровня экспрессии белка, кодируемого ERRγ, по настоящему изобретению может включать субстрат для иммунологического обнаружения антитела, подходящий буферный раствор, вторичное антитело, меченное хромогенным ферментом или флуоресцентным веществом, хромогенный субстрат и т.п. В этом случае в качестве подложки могут быть использованы нитроцеллюлозная мембрана, 96-луночный планшет, синтезированный из поливиниловой смолы, 96-луночный планшет, синтезированный из полистирольной смолы, и предметное стекло. В качестве хромогенного фермента можно использовать пероксидазу и щелочную фосфатазу. FITC (флуоресцеин-изотиоцианат), RITC (родамин-изотиоцианат) и т.п. могут быть использованы в качестве флуоресцентного материала, a ABTS (2,2'-азино-бис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)), OPD (орто-фенилендиамин), ТМВ (тетраметилбензидин) и тому подобное можно использовать в качестве хромогенного субстрата.

Набор по настоящему изобретению может быть составлен таким образом, чтобы дополнительно включать композицию, раствор или устройство, содержащее один или более других компонентов, подходящих для метода анализа.

В соответствии с еще одним аспектом, в настоящем изобретении предложен способ предоставления информации для диагностики устойчивого к сорфенибу рака печени.

Более конкретно, способ предоставления информации для диагностики устойчивого к сорфенибу рака печени включает: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, для определения того проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

В настоящем изобретении термин «биологический образец» относится к ткани (ткани печени), клеткам (клетки печени), цельной крови, плазме, сыворотке, крови, слюне, синовиальной жидкости, моче, мокроте, лимфатической жидкости, спинномозговой жидкости, образцам аутопсии тканей (головной мозг, кожа, лимфатические узлы, спинной мозг и т.п.), супернатанте клеточной культуры или разорванных эукариотических клетках, которые имеют различные уровни экспрессии и/или активности ERRγ в качестве маркера устойчивого к сорафенибу рака печени. Кроме того, биологический образец включает образцы, полученные из метастатических поражений, а также из первичных раковых поражений. В этом случае активность или уровень экспрессии ERRγ можно определить в состоянии, в котором эти биологические образцы подвергались манипуляциям или не подвергались манипуляциям.

В способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению биологический образец на стадии (а) может быть получен с использованием конкретного метода, известного специалистам в данной области техники. Например, биологический образец может быть получен от позвоночного, в частности от млекопитающего, и предпочтительно может быть получен от пациента с раком печени, для проверки того, проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу. В данном случае пациент с раком печени представляет собой человека. Биопсия ткани часто используется для получения репрезентативного фрагмента опухолевой ткани. Альтернативно, опухолевые клетки могут быть получены непрямым путем в виде ткани или жидкости, о которых известно или предполагается, что они содержат представляющие интерес опухолевые клетки.

В настоящем изобретении термин «измерение уровня экспрессии мРНК» относится к процессу подтверждения наличия и уровня экспрессии мРНК гена ERRγ в биологическом образце и может быть определен путем измерения количества мРНК. Методы анализа для этого включают ОТ-ПЦР, конкурентную ОТ-ПЦР, ОТ-ПЦР в реальном времени, метод защиты от РНКаз, нозерн-блоттинг или технологию ДНК-чипов, но настоящее изобретение ими не ограничивается.

В настоящем изобретении термин «измерение уровня экспрессии белка» относится к процессу подтверждения наличия и уровня экспрессии белка, экспрессируемого из гена ERRγ, в биологическом образце. В этом случае количество белка можно определить с помощью антитела, специфически связывающегося с белком, экспрессируемым из данного гена. Методы анализа для этого включают Вестерн-блоттинг, твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммуноанализ (РИА), радиальную иммунодиффузию, иммунодиффузию Оухтерлони, реактивный иммуноэлектрофорез, иммуногистохимическое окрашивание, анализ иммунопреципитации, анализ связывания комплемента, иммунофлюоресценцию, иммунохроматографию, анализ сортировки активируемых флуоресценцией клеток (анализ FACS), технологию белковых чипов и т.п., но настоящее изобретение не ограничивается этим.

В способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению пациент с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени, может быть пациентом с гепатоцеллюлярной карциномой (НСС) или аденокарциномой печени, не проявляющим устойчивый к сорафенибу рак печени, но настоящее изобретение не ограничивается этим.

В способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению уровень экспрессии гена ERRγ может быть измерен на уровне мРНК или на уровне белка, и выделение мРНК или белка из биологического образца может быть осуществлено с использованием процесса, известного в данной области техники. Способ анализа для измерения уровня мРНК и способ анализа для измерения уровня белка являются такими, как описано выше.

С помощью способа предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению можно прогнозировать терапевтический ответ пациентов с раком печени на сорафениб и определять стратегию лечения для каждого пациента на основе результатов прогнозирования, тем самым делая возможным эффективное лечение рака печени.

Таким образом, согласно еще одному аспекту, в настоящем изобретении предложен способ предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, включающий измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени.

Более конкретно, способ предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, может включать: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

В соответствии со способом предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, при подтверждении устойчивости к сорафенибу у пациента с раком печени, эффект лечения рака печени может быть индуцирован применением других известных терапевтических агентов для лечения рака печени, отличных от сорафениба.

Следовательно, в соответствии с еще одним аспектом, в настоящем изобретении предложен способ диагностики и лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.

Более конкретно, способ диагностики и лечения устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению включает: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение другого терапевтического агента против рака печени, отличного от сорафениба, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).

Конкретные детали способа предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, и/или способа диагностики и лечения устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению являются такими, как описано выше в способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, и его описание будет опущено.

Следует понимать, что термины и слова, использованные в описании и прилагаемой формуле изобретения, не следует толковать как ограничивающиеся общими и словарными значениями, а интерпретировать на основе значений и понятий, соответствующих техническим аспектам настоящего изобретения, на основе принципа, согласно которому авторы настоящего изобретения могут надлежащим образом определить концепции терминов для наилучшего описания настоящего изобретения.

Далее представлены предпочтительные варианты осуществления для понимания настоящего изобретения. Однако следует понимать, что следующие примеры предназначены только для лучшего понимания настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Осуществление изобретения

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРИМЕРЫ

Общие экспериментальные методы

Авторы настоящего изобретения провели эксперименты с использованием устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени (клеточные линии Huh7-SR и SK-Hep-R) и животной модели, полученной из клеточной линии рака печени (ксенотрансплантат). Чтобы определить влияние синтетического соединения DN200434, которое является обратным агонистом против ERRγ, на пролиферацию клеток рака печени и образование ROS, ROS измеряли с использованием подсчета клеток и диацетата 2',7-дихлорфлуоресцина (DCF-DA). Наконец, после того, как клеточная линия рака печени, устойчивая к сорафенибу, была введена крысам, чтобы вызвать образование устойчивого к сорафенибу рака печени, изменения в размере рака печени были подтверждены в группе, которой вводили обратный агонист против ERRγ (DN200434) и сорафениб, и группе, которой вводили контрольный препарат.

Пример 1

Конструирование клеточной линии рака печени, устойчивой к сорафенибу, и подтверждение повышенной экспрессии ERRγ

Клеточные линии гепатокарциномы [клетки Huh7 (Korea Cell Line Bank (KCLB) №60104), клетки SK-Hep (АТСС® HTB-52TM)] подвергали непрерывному воздействию сорафениба (постепенно увеличивая до 10 мкМ) для конструирования устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени (клеточные линии Huh7-SR и SK-Hep-R). Чтобы оценить гибель раковых клеток с помощью FACS, сначала клеточную линию рака инкубировали в аннексине, связанном с FITC, и йодиде пропидия (PI) в течение 15 минут, а затем измеряли связывание аннексина и PI с помощью проточной цитометрии для получения данных с использованием проточного цитометра BD Accuri С6 (BD Biosciences) и анализировали с помощью программы анализа Accuri С6 (BD Biosciences)/программного обеспечения FlowJo (FlowJo, LLC). Гибель клеточной линии рака оценивали с использованием антитела к расщепленной каспазе-3 (Cell Signaling Technology). Как показано на Фиг. 1А-1В, было подтверждено, что гибель клеток под действием сорафениба не увеличивалась в обеих устойчивых к сорафенибу клеточных линиях рака печени (например, клеточных линиях Huh7-SR и SK-Hep-R).

Кроме того, был проведен Вестерн-блоттинг для подтверждения профиля экспрессии орфанного ядерного рецептора ERRγ в клеточных линиях Huh7-SR и SK-Hep-R. В результате было подтверждено, что экспрессия ERRγ значительно увеличилась в обеих из двух клеточных линий рака печени, устойчивых к сорафенибу, как показано на Фиг. 2А и 2Б.

Пример 2

Исследование влияния орфанного ядерного рецептора ERRγ на устойчивый к сорафенибу рак печени

Чтобы исследовать влияние соединения (DN200434) формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, на образование ROS в клетках рака печени, устойчивых сорафенибу, эффект измеряли с помощью FACS с использованием 2',7'-дихлоргидрофлуоресцеина диацетата (H2-DCF-DA, Lrvitrogen, США) в качестве зонда ROS. Лекарственно-устойчивые клетки обрабатывали сорафенибом (10 мкМ) и соединением DN200434 (12 мкМ) в течение 24 часов и к клеткам добавляли 10 мкМ Н2-DCF-DA. Затем клетки инкубировали в течение 30 минут, промывали PBS и собирали данные с помощью проточного питометра BD AccuriTM С6 (BD Bioscience, США) и анализировали с помощью программы анализа AccuriTM С6 (BD Bioscience, США). Для определения количества клеток клеточную линию рака печени, устойчивую к сорафенибу, обрабатывали соединением DN200434 (12 мкМ) в комбинации с сорафенибом (10 мкМ) и окрашивали трипановым синим, после чего количество клеток измеряли с помощью гемоцитометра.

В результате, как показано на Фиг. 3А и 3Б, было подтверждено, что увеличение ROS под действием соединения DN200434 наблюдалось как в клеточных линиях Huh7-SR, так и в SK-Hep-R, которые представляют собой устойчивые к сорафинибу клеточные линии рака печени. Как показано на Фиг. 4А и 4Б, было подтверждено, что пролиферация устойчивых к сорафенибу клеток рака печени, которая не подвергалась воздействию при лечении только сорафенибом, значительно снижалась при одновременном введении DN200434 формулы 1. На основании результатов, описанных выше, было подтверждено, что DN200434 может преодолевать лекарственную устойчивость путем ингибирования активности ERRγ и повышения чувствительности к сорафенибу.

Пример 3

Подтверждение противоопухолевого эффекта в животной модели с устойчивым к сорфенибу раком печени

Устойчивую к сорафенибу клеточную линию рака печени Huh7-R вводили мышам для конструирования животной модели рака печени, устойчивого к сорафенибу (ксенотрансплантат). После этого вводили обратный агонист ERRγ (например, DN200434 (формула 1)) в комбинации с сорафенибом и измеряли изменение размера образовавшейся массы. В этом случае в качестве сравнительного контроля использовали группу, в которой животную модель с устойчивым к сорафенибу раком печени лечили только сорафенибом.

В результате, как показано на Фиг. 5А-5В, было подтверждено, что размер, масса и объем опухоли значительно уменьшились в группе, в которой соединение DN200434 формулы 1, являющееся обратным агонистом против ERRγ, вводили в комбинации с сорафенибом в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, по сравнению с контролем. В этом случае, как видно из Фиг. 5Г, было подтверждено отсутствие различий в изменении массы тела между экспериментальной и контрольной группами.

Животную модель, полученную из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, конструировали таким же образом, как описано выше, и эффект совместного введения соединения DN200434 формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, и сорафениба был подтвержден.

Аналогично, как показано на Фиг. 6А-6В, было подтверждено, что размер опухоли, масса и объем рака печени заметно уменьшились в группе, в которой соединение DN200434 вводили в комбинации с сорафенибом, даже в модели животных, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, по сравнению с контролем. Как видно из Фиг. 6Г, было подтверждено отсутствие различий в изменении массы тела между экспериментальной и контрольной группами.

Суммируя результаты Примеров 1-3, было подтверждено, что экспрессия ERRγ значительно увеличивалась при раке печени, устойчивом к сорафенибу. Кроме того, в ходе экспериментов было подтверждено, что DN200434, являющийся обратным агонистом против ERRγ формулы 1, увеличивает внутриклеточные ROS, ингибирует пролиферацию устойчивых к сорафенибу клеток рака печени и повышает чувствительность к сорафенибу. Кроме того, также было подтверждено, что пролиферация рака значительно снижалась по сравнению с контролем в эксперименте на животных с использованием клеточной линии рака печени, устойчивой к сорафенибу. Приведенные выше результаты доказывают, что ERRγ играет важную роль в лекарственной устойчивости рака печени и эффективен при лечении распространенного лекарственно-устойчивого рака печени, когда активность ERRγ ингибируется с помощью DN200434, который является обратным агонистом ERRγ.

Вышеприведенное описание настоящего изобретения дано только в качестве иллюстрации, и специалистам в области техники, к которой относится настоящее изобретение, должно быть понятно, что могут быть сделаны различные изменения и модификации, не отступая от технической сущности и объема настоящего изобретения. Следовательно, следует понимать, что вышеупомянутые воплощения даны только в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения во всех аспектах.

Группа изобретений относится к области фармацевтической промышленности, а именно к применению фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора гамма (ERRγ), а также к способу лечения устойчивого к сорафенибу рака печени. Применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль [Формула 1]

. Применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), для ингибирования устойчивости рака печени к сорафенибу, где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль. Применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных ингредиентов агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), и сорафениб, для предупреждения или лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль. Способ лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение агента, способного ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), пациенту, определенному как пациент с устойчивым к сорафенибу раком печени, где способ включает следующие стадии: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение пациенту указанного агента в эффективном количестве, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б), где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль. Использование группы изобретений обеспечивает решение проблемы преодоления лекарственной устойчивости сорафениба для усиления его противоопухолевого действия благодаря использованию агента, который способен ингибировать активность белка ERRγ или экспрессии его гена и тем самым повышать восприимчивость раковых клеток печени к сорафенибу. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 пр.

1. Применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени,

где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль

2. Применение по п. 1, где композиция повышает лекарственную чувствительность рака печени к сорафенибу или усиливает противоопухолевый эффект сорафениба в отношении рака печени.

3. Применение по п. 1, где композицию вводят одновременно с сорафенибом, отдельно или последовательно.

4. Применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), для ингибирования устойчивости рака печени к сорафенибу,

где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль

5. Применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных ингредиентов агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), и сорафениб, для предупреждения или лечения устойчивого к сорафенибу рака печени,

где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль

6. Способ лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение агента, способного ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ), пациенту, определенному как пациент с устойчивым к сорафенибу раком печени, где способ включает следующие стадии:

(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;

(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и

(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение пациенту указанного агента в эффективном количестве, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б),

где агент для ингибирования активности белка ERRγ представляет собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль

7. Способ по п. 6, где биологический образец содержит ткань печени, клетки печени, цельную кровь, плазму, сыворотку или кровь.