Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая и способ изготовления вакцины Российский патент 2024 года по МПК A61K39/12 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к производству и применению биологических препаратов для специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней.

Проблема репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) остается актуальной в большинстве стран мира с развитым свиноводством, являясь эндемичным заболеванием, охватившим практически все страны, включая Россию, США, Китай, страны Западной Европы, приносящее большие экономические потери [1]. Ущерб от заболевания складывается из потерь животных, вызванных нарушением репродуктивной функции, характеризующейся поздними абортами, преждевременными родами, прохолостами свиноматок, рождением мёртвых, мумифицированных, нежизнеспособных поросят, гибелью новорожденных и заболеваемостью поросят отъёмышей и свиней. В результате, свиноводческие хозяйства недополучают поросят, привесов, а также несут затраты на ветеринарно-санитарные и оздопровительные мероприятия.

В России впервые клиническое проявление РРСС установлено в 1990 году, а официально заболевание регистрируется с 1993 года [2, 3, 4].

Анализ проводимых в отношении РРСС мероприятий в мире показывает, что они сводятся, как к профилактической вакцинации животных, которая с каждым годом охватывает все большее поголовье свиней, так и контролю за передвижением животных, как внутри страны, так и за ее пределами, а также постоянным проведением диагностических исследований в популяции свиней.

Вакцинопрофилактика РРСС с использованием живых и инактивированных вакцин до сих пор остается ведущим и основным звеном в профилактике этого заболевания, как в нашей стране, так и за рубежом. Доказано, что применение вакцин против РРСС снижает частоту клинического проявления болезни, особенно репродуктивной формы заболевания, и позволяет повысить продуктивность откормочного поголовья за счет увеличения привесов и сокращения сроков откорма.

Необходимо отметить, что преимущество живых вакцин состоит в том, что специфические антитела вырабатываются быстрее (на 7-10 сутки) в достаточном количестве, тем самым вакцину можно использовать в неблагополучном хозяйстве для купирования вспышки. Кроме того, такие вакцины являются более экономичными в производстве, а также, для их хранения и транспортировки требуется относительно мало места в холодильных установках. В связи с этим, разработка и совершенствование эффективности применяемых средств специфической профилактики РРСС является актуальной задачей для развития отечественного свиноводства.

В материалах зарубежных и отечественных источниках представлено много штаммов вируса РРСС, используемых при производстве живых вакцин. Некоторые штаммы были выделены в 90-х годах, находятся в международных коллекциях микроорганизмов. И не доступны для отечественных производителей вакцин. Много вакцин состоят из штаммов американской генетической линии [5, 6, 7, 8].

Известна вакцина содержащая штаммы вируса РРСС, которые депонированы под регистрационными номерами ЕСАСС 04102703, ЕСАСС 04102702 и ЕСАСС 04102704 [9].

Известна вакцина против РРСС из штамма «PRRS-1SBC», где в качестве стабилизатора при лиофилизации используют смесь сахарозы, пептона, желатозы и трис-НCl буфера [10].

Помимо вышеупомянутой вакцины в мире разработаны и существуют препараты живых вакцин, такие как Юнистрейн® РРСС, производства США [11], Порцилис® PRRS [12] производства Нидерланды и Репроцик® РРСС EU [13] производства Германия, однако штаммовый состав этих вакцин имеет неопределенное происхождение, работы по клиническим испытаниям, биостатистика проведены для генетических линий свинопоголовья стран-разработчиков, и в значительной степени отличается от штаммов, циркулирующих на территории РФ. Немаловажным моментом является и цена импортных препаратов, в настоящий момент многие вакцины, не доступны к приобретению. Вакцина против РРСС живая культуральная сухая изготавливается из актуального, эпизоотически значимого для РФ, штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней первого субгенотипа, и обладает более чем в 10 раз более низкой себестоимостью.

ФГБУ «ВНИИЗЖ» имеет большой опыт в разработке живых вакцин, и в т.ч. против репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Так в 2004 году была разработана вирусвакцина РРСС (сухая культуральная против репродуктивно-респираторного синдрома свиней), которая изготавливается из штамма БД вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней 2 американского типа вируса.

Общим недостатком известных вакцин против РРСС является их относительно низкая противоэпизоотическая эффективность для Российской Федерации, обусловленная тем, что штаммы вируса РРСС, используемые для их изготовления, обладают антигенными и иммунобиологическими отличиями по сравнению с аналогичными характеристиками эпизоотических изолятов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, выделенных на территории РФ.

В связи с этим проблема создания вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой, обладающей высокой иммуногенной активностью и безвредностью, продолжает оставаться актуальной и является основным направлением текущих исследований.

В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины против РРСС живой культуральной сухой, создающей напряженный иммунитет в короткие сроки у привитых животных против циркулирующего на территории России эпизоотического вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней паневропейского подтипа.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала отечественных вакцин против РРСС живых культуральных сухих, обладающих антигенной, иммуногенной активностью и безвредностью, создающих напряженный иммунитет у привитых животных против циркулирующего на территории РФ эпизоотического вируса РРСС, кроме того имеющих непревзойденное значение для импортозамещения, а также обеспечения биологической и пищевой безопасности РФ.

Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой и способ изготовления вакцины, охарактеризованной следующей совокупностью признаков, отраженных ниже.

Разработанная вакцина в 1,0 см³ препарата содержит следующие основные компоненты: - активное вещество в виде аттенуированного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе, с биологической активностью, не менее 10^5,75 lgТЦД₅₀/см³, в количестве 75,0-80,0 мас.%, - целевая добавка, в качестве защитной среды, содержащая 50%-ный раствор сахарозы, 10%-ный раствор желатина и 20%-ный раствор ГЛА в соотношении 1,3:0,5:2,0 соответственно, в количестве 25,0-20,0 мас.%; в объемном соотношении и в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность антигена в организме животных после введения им целевого препарата.

Штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, полученный путем серийного пассирования на перевиваемых культурах клеток не свиного происхождения депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером № 460-деп/23-10 ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Для получения вируса, обладающего оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали перевиваемую культуру клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки).

Для изготовления вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой в качестве чувствительной биологической системы используют перевиваемую культуру клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки).

В качестве активного вещества используют вирусную суспензию лиофилизированного аттенуированного штамма «Борз» вируса РРСС с титром инфекционной активности не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³. Для заражения культуры клеток MARK-145 используют вирус с титром инфекционной активности не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³ в дозе 7 мл/матрас (клинский). Внесенную вирусную суспензию экспонируют на монослое культуры клеток MARK-145 в термостате в течение часа при (37±0,5)°С. Культивирование вируса проводят в течение 3-4 суток при указанной температуре. При поражении вирусом площади монослоя не менее 80% (округление и появление светопреломляющего эффекта) проводят сбор вируса.

Для изготовления вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой используют антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса РРСС, полученного в перевиваемой культуре клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки) с титром инфекционной активности не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³. Вакцину против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живую культуральную сухую получают путем смешивания антигенного материала из аттенуированного штамма «Борз» вируса РРСС и целевой добавки в соотношении, мас.%, 75,0:25,0÷80,0:20,0 соответственно. В качестве целевой добавки используют растворы сахарозы, желатозы и гидролизата лактальбумина.

Содержание антигенного материала и целевой добавки в прививной дозе вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой в соотношении, мас.%, 75,0:25,0÷80,0:20,0 является оптимальным, так как обеспечивает оптимальную протективную иммунную активность антигена в организме иммунизированного животного после введения им целевого препарата.

Полученную вакцину фасуют во флаконы по 2,0 см³, замораживают при температуре минус 50°С и подвергают лиофильному высушиванию.

Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая сухая, расфасованная во флаконы, представляет собой однородную пористую массу цилиндрической формы светло-желтого цвета, растворяющуюся в течение 1-1,5 минут в физиологическом (изотоническом) растворе.

Полученный препарат подвергают контролю на стерильность, специфичность и иммунобиологическую активность в соответствии с показателями, установленными стандартом организации-изготовителя.

Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:

1. Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая.

2. Активное вещество в виде антигенного материала из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в эффективном количестве.

3. Целевая добавка.

Существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества она содержит антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью, в эффективном количестве.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:

1. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе.

2. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе культуру клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки).

3. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе культуру клеток MARK-145 с инфекционной активностью не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³.

4. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе перевиваемой культуры клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки) с инфекционной активностью не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 75,0 80,0 мас.%.

5. Из целевых добавок защитная среда.

6. Защитная среда в количестве 20,0 25,0 мас.%.

7. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки) с инфекционной активностью не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³, и защитная среда в соотношении, мас.%

Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней 75,0-80,0 Защитная среда 20,0-25,0

Предлагаемое изобретение расширяет арсенал вакцин против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живых культуральных сухих, обладающих высокой антигенной и иммуногенной активностью и обеспечивающих эффективную защиту восприимчивых животных от эпизоотического возбудителя репродуктивно-респираторного синдрома свиней, циркулирующего на территории России.

Достижение технического результата от использования предлагаемой вакцины объясняется тем, что в качестве активного вещества она содержит аттенуированный штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Штамм «Борз» обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью.

Экспериментально подтверждена возможность его использования в составе вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней обеспечивает получение эффективной вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней, создающей защиту восприимчивых животных от возбудителя репродуктивно-респираторного синдрома свиней, циркулирующего на территории России.

Сущность изобретения пояснена на графических материалах, на которых представлено:

Фиг.1 - Графическое изображение местоположения вакцинного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней по белку ORF7;

Фиг.2 - Графическое изображение местоположения вакцинного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней по белку ORF5.

Штамм «Борз» вируса РРСС характеризуется следующими признаками и свойствами:

Морфологические свойства

Данный штамм относится к семейству Arteriviridae, роду Betaarterivirus, виду Betaarterivirus suid 1, тип 1, подтип 1. RNA-геномный, обладает морфологическими признаками, характерными для вируса РРСС.

Вирионы вируса РРСС представляют сферические или аморфные частицы диаметром от 45 до 100 нм с ядром, заполняющим 3/4 вириона диаметром 25-35 нм. Длина генома РРСС составляет приблизительно 15000 нуклеотидов, которые кодируют как структурные, так и неструктурные белки. Неструктурные белки кодируются двумя открытыми рамками считывания (ORF)- ORF1a и ORF1b, которые расположены на конце 5`генома. Неструктурные белки были идентифицированы как основные белки, ответственные за ингибирование иммунного ответа, в частности за ингибирование выработки интерферона I типа. Структурные белки кодируются открытыми рамками считывания 2-7 на конце 3`вируса. На данный момент известно восемь структурных белков, пять из которых являются гликопротеинами: GP2, E, GP3, GP4, GP5 белок ORF5a, белки М и N. Вирусный нуклеокапсид образует N-белок. Структурные белки GP2, GP3, GP4, GP5 и М вызывают выработку нейтрализующих антител.

Антигенные свойства

Штамм «Борз» вируса РРСС стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не обладает гемагглютинирующими свойствами. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител, выявляемых в иммуноферментном анализе (ИФА) или реакции нейтрализации (РН).

Хемо и генотаксономическая характеристика

Оригинальность штамма подтверждена нуклеотидным секвенированием генов N (ОРС7) и GP5 (ОРС5) (фиг. 1 и фиг. 2). Идентификацию и специфичность штамма определяют методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) и нуклеотидного секвенирования.

Нуклеотидное секвенирование гена ОРС5 подтвердило, что штамм «Борз» относится к европейскому генотипу вируса РРСС. Сравнение выведенных из нуклеотидных последовательностей ОРС5 аминокислотных последовательностей белка G5 показало, что штамм «Борз» отличается от штамма Lelystad по двум аминокислотным остаткам (а.о.). Двадцатый а.о. у штамма «КПР-96» представлен фенилаланином, а у штамма Lelystad лейцином, в 37 позиции белка G5 у штаммов «КПР-96» и Lelystad находятся аспаргин и аспаргиновая кислота, соответственно.

Физические свойства

Масса вириона от 49х10³ Da до 55х10³ Da. Плавучая плотность в градиенте хлористого цезия 1,18-1,2 г/мл.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм «Борз» вируса РРСС чувствителен к детергентам и органическим растворителям, таким как эфир, хлороформ, формальдегид, а также к ультрафиолетовому облучению и гамма-облучению. Наиболее стабилен при pH 6,8-7,4. При 60°С инактивируется через 10 минут. Низкие температуры его консервируют, в замороженном виде вирус сохраняется несколько лет.

Дополнительные признаки и свойства:

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - апатогенен для свиней.

Вирулентность - авирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Биотехнологические характеристики

Штамм «Борз» вируса РРСС репродуцируется в перевиваемой культуре клеток: MARK-145 - (культура клеток почки макаки-резус).

Штамм «Борз» обладает следующими биологическими свойствами: размножается с цитопатическим эффектом; безопасен для свиней; не реверсибелен (6 последовательных пассажей вакцинного вируса на без молозивных поросятах); не вызывает персистенции у привитых свиней и не определяется в крови через 7-10 дней после вакцинации; через 14 дней после иммунизации создает напряженный иммунитет, свободен от контаминации вирусами, бактериями, грибами и микоплазмами; длительно хранится в сухом и нативном виде при температуре минус (50,0±1,0)°C.

По мнению заявителя, предлагаемая вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, изготовленная из штамма «Борз», соответствует условиям патентоспособности «новизна» и «изобретательский уровень».

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исследования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Получение вируссодержащей суспензии/антигена из штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней.

Репродукцию вируса РРСС штамма «Борз» проводили на монослойной перевиваемой линии клеток MARC-145. Культуру клеток выращивали на соответствующих питательных средах с добавлением сыворотки КРС до 10%. Перед внесением вируса клеточный монослой однократно промывали раствором Хенкса. Монослой инфицировали вирусом в дозе 0,01-0,1 ТЦД₅₀ на клетку. Адсорбцию вируса проводили при (37,0±0,5)°С в течение часа. После этого в сосуды с инфицированным монослоем вносили среду Игла с добавлением фетальной сыворотки КРС в конечной концентрации до 5%, рН-7,2-7,4. Культивирование вируса проводили при (37,0±0,5)°С в течение 96-144 часов. Размножение вируса в культуре клеток определяли по характерному ЦПД. Флаконы, в которых наблюдали ЦПД с поражением 80% клеточного монослоя замораживали при минус (20,0±1,0)°С. Вирусную суспензию получали двукратным замораживанием-оттаиванием инфицированного монослоя, с последующим освобождением от клеточного дейтрита путем центрифугирования при 1500-2000 об/мин в течение 30 минут при температуре (6±2)°С. Полученный вируссодержащий материал/антиген использовали для приготовления вакцинных образцов.

Биологические свойства вирусного сырья штамма «Борз», полученного на перевиваемой линии клеток MARC-145 оценивали по следующим показателям:

- отсутствие бактериальной и грибковой контаминации (ГОСТ 28085);

- специфичность и отсутствие вирусной контаминации (ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15);

- инфекционная активность;

Для определения отсутствия бактериальной и грибковой контаминации вирусной суспензии из штамма «Борз» использовали питательные среды Сабуро, мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) и среду Китта-Тароцци. Все используемые бактериальные среды были проверены на ростовые свойства согласно ГОСТ 28085-89. Для испытания из трех флаконов (отдельно из каждого) с культуральным вирусом отбирали по 1 см³ вируссодержащего материала в 4 пробирки с тиогликолевой средой.

Пробирки инкубировали при разных температурных режимах. По две пробирки с содержимым из каждого флакона выдерживали в термостате при температуре (37,0±0,5)°C, одну при (30,0±0,5)°C, одну при (22,0±0,5)°C. Через 7 суток из 3 пробирок, инкубируемых при (37,0±0,5)°C, делали пересев на следующие бактериальные среды: агар и жидкую среду Сабуро, МПБ и МПА, среду Китта-Тароцци и сахарный бульон. В среду Китта-Тароцци вносили по 1 см³, а в остальные по 0,5 см³ исследуемого материала и выдерживали в течение 7 суток при температуре (37,0±0,5)°C, со средой Сабуро при температуре (22,0±0,5)°C.

Все пробирки подвергались ежедневному визуальному контролю в течение 14 суток. На всех средах с высевами и пересевами роста бактериальной и грибковой микрофлоры не наблюдалось.

Контроль контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15). Вирусную культуральную суспензию замораживали при температуре минус 20°С и после размораживания центрифугировали 10 мин при 200 g (500 об/мин). Надосадочную жидкость в объеме по 1,0 см³ вносили в 2 пробирки с полужидкой средой Кагана (объем полужидкой среды Кагана в пробирке 10,0 см³) и инкубировали в течение 7 сут при температуре (37,0±0,5)°С. По окончании срока инкубации проводили второй пассаж на таком же количестве пробирок с полужидкой средой и в двух чашках Петри с твердой средой Кагана (толщина твердой среды 0,5-0,7 см). Количество пассажей должно быть не менее двух. Рост микоплазм на жидких и твердых питательных средах отсутствовал.

Определение отсутствия вирусной контаминации проводили путем исследования вирусной суспензии методом ПЦР на наличие генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, и отсутствие посторонних геномов вирусов:

- болезни Ауески (БА);

- парвовирусной инфекции свиней (ПВИС);

- классической чумы свиней (КЧС);

- гриппа свиней (ВГС);

- M. hyopneumoniae.

В результате проведенных исследований в пробах вирусной суспензии обнаружен только геном вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, соответствующий штамму «Борз». Геномы вирусов БА, ПВИС, КЧС, ВГС, а также возбудителя M. hyopneumoniae не обнаружены.

Определение инфекционной активности проводили методом титрования, в культуре клеток MARK-145, в трех повторностях. Для этого готовили десятикратное разведение вируса с 10^-1 по 10^-7 на питательной среде Игла с добавлением фетальной сыворотки до 5%. Каждое из разведений вируса вносили по 1 см³ в 4 пенициллиновых флакона с монослоем клеток (предварительно отмытых средой Хенкса), начиная с наибольшего. Инфицированные и контрольные культуры клеток инкубировали при температуре (37,0±0,5)°С. Цитопатическое действие вируса учитывали ежедневно, окончательный учет результатов проводили через 144 ч. Титр вируса рассчитывали по методу Спирмена-Кербера. Результаты титрования считали достоверными при сохранении монослоя в контроле. Производственная серия антигена из штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней считается пригодной для изготовления вакцины, если она соответствует следующим требованиям: титр инфекционной активности после репродукции в монослое клеток не менее 5,75 lg ТЦД₅₀/мл и отсутствие контаминации.

Пример 2. Изготовление экспериментальной серии вакцины на основе штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой

Для лиофилизации вирусную суспензию/антиген из штамма «Борз», полученную по примеру 1 стабилизировали, используя защитную среду в соотношении 75% вируссодержащего материала и 25% стабилизатора, расфасовали по 4,0 см³ во флаконы соответствующей вместимости, замораживали при динамике минимум 24 ч при температуре минус 60°С и сублимационно высушивали 48 ч при режимах глубокого вакуума: сушка без подогрева первые 3 ч, режим с нагревом 29 ч и досушивание с подогревом 12-16 ч при температуре 24-27°С.

Экспериментальные серии вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой хранили при температуре (6±2)°С и использовали при дальнейшей работе.

Пример 3. Изучение стабильности свойств вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой

Проводили изучение вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (полученной в примере 2) по следующим показателям:

- внешний вид;

- отсутствие бактериальной и грибковой контаминации (ГОСТ 28085);

- специфичность и отсутствие вирусной контаминации (ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15);

- инфекционная активность;

- безвредность и ареактогенность;

- антигенная активность и длительность иммунитета.

При осмотре внешнего вида вакцина имеет вид сухой однородной пористой массы светло-бежевого цвета. Примесей в препарате не обнаружено. Флаконы герметично укупорены, сколов и трещин нет.

Определение отсутствия бактериальной и грибковой контаминации проводили как описано в пример 1. Для этого содержимое 3 флаконов вакцины, полученных в примере 2, растворяли внесением в каждый флакон стерильного физиологического (изотонического) раствора по 4,0 см³ до исходного объема и объединяли в общую пробу. Во всех посевах на питательные среды исследуемых проб экспериментальной серии вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой рост бактериальной и грибной микрофлоры отсутствует.

Контроль контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15), как описано в примере 1. Рост микоплазм на жидких и твердых средах отсутствовал.

Определение специфичности проводили путем определения специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней через 21 день после однократной вакцинации поросят экспериментальной вакциной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой, полученной в пример 2, согласно проекту инструкции по применению на поросятах-сосунах и супоросных свиноматках, и отсутствием специфических антител к возбудителям:

- болезни Ауески (БА);

- парвовирусной инфекции свиней (ПВИС);

- классической чумы свиней (КЧС);

- гриппа свиней (ВГС);

- M. hyopneumoniae.

Полученные сыворотки крови исследовали методом ИФА и РТГА на наличие специфических антител против возбудителей:

- вируса КЧС с использованием коммерческого набора «Classical Swine Fever Virus (CSFV) Antibody Test Kit» (IDEXX), значение s/p<40 специфические антитела отсутствуют, значение s/p>50 наличие специфических антител;

- вируса РРСС с использованием коммерческого набора «Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit» (IDEXX), значение s/p<0,4 специфические антитела отсутствуют, значение s/p≥0,4 наличие специфических антител;

- вируса ПВИС с использованием коммерческого «Набора для серодиагностики ПВИС в РТГА» производства ФГБУ «ВНИИЗЖ», значение ≥1:256 наличие специфических антител, менее 1:256 отсутствие специфических антител;

- вируса болезни Ауески с использованием коммерческого набора «HerdChek PPV gB Antibody Test Kit» (IDEXX), значение s/p<100 специфические антитела отсутствуют, значение s/p>100 наличие специфических антител;

- ВГС с использованием коммерческих наборов ИФА HerdChek Swine Influenza H1N1 Antibody Test Kits (IDEXX Laboratories, USA) на наличие антител к вирусу гриппа свиней подтипов H1N1), значение s/p<0,4 специфические антитела отсутствуют, значение s/p≥0,4 наличие специфических антител;

- M. hyopneumoniae с использованием набора фирмы Chekit, значение s/p>30 наличие специфических антител, s/p ≤ 30 отсутствие специфических антител.

В результате проведенных исследований, в пробах сывороток крови, полученных через 21 сутки после вакцинации, выявлены только специфические антитела к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Специфические антитела к вирусам БА, ПВИС, КЧС, ВГС а также возбудителя M. hyopneumoniae не обнаружены. Результаты испытаний представлены в таблице 1.

Влияние параметра рН растворителя на инфекционную активность вакцины. Инфекционную активность образцов вакцины, полученной в примере 2, определяли методом титрования в культуре клеток MARC-145, где содержимое флаконов растворяли внесением в каждый флакон физиологического раствора с параметрами рН 6,0-6.4; 6,5-6,8; 7,0-7,5 и 7,6-8,0. Титрование исследуемых проб проводилось в трех повторностях по стандартной методике, титр вируса рассчитывали по методу Спирмена-Кербера в модификации Ашмарина-Воробъева [14].

Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая - растворенная в физиологическом растворе с параметром рН 5,5-6,5 имела инфекционную активность 5,1 lg ТЦД₅₀/см³. С параметром рН 6,5-6,9 имела инфекционную активность 5,4-5,25 lg ТЦД₅₀/см³. Вакцина, растворенная в физиологическом растворе с параметром рН 7,0-7,4 имела инфекционную активность 5,8 lg ТЦД₅₀/см³. Данные по влиянию рН разбавителя на инфекционную активность вакцины представлены в таблица 2.

Безвредность вакцины, полученной в примере 2, проверялась на лабораторных животных, а реактогенность на поросятах.

Для определения безвредности на лабораторных животных белые мыши рандомно были разделены на 2 группы (опытная и контрольная) по 10 голов в каждой. Первой группе белых мышей препарат вакцину вводили в объеме 0,5 см³, содержащей в дозе 4,0 lg ТЦД₅₀. Для проведения исследований вакцину растворяли в стерильном растворе натрия хлорида 0,9% изотоническом. Для этого шприцом в 3 флакона с вакциной вносили 4,0 см³ растворителя. Тщательно перемешивали путем пропускания раствора несколько раз через шприц. После полного растворения препарата, полученный концентрированный раствор переносили в стерильную емкость, куда соблюдая правила асептики, был внесен растворитель из расчета 21,0 см³ на 1 флакон вакцины (50 прививных по 0,5 см³ доз во флаконе).

Приготовленный препарат вводили белым мышам подкожно в область спины. Период наблюдений за белыми мышами составлял 10 суток. Вакцину считали безвредной, если в течение срока наблюдения все лабораторные животные оставались живы и клинически здоровыми. По истечении срока наблюдения в месте подкожного введения вакцины локальные изменения отсутствовали, все мыши опытной группы остались живы. Вторая группа белых мышей не подвергалась испытаниям и использовалась в качестве контроля.

Реактогенность изучали на поросятах, которых рандомно разделили на 2 группы (опытная и контрольная), по 5 голов в каждой. Поросятам опытной группы препарат- вакцину вводили в объеме 2,0 см³, содержащей в дозе 4,0 lg ТЦД_50. Для проведения исследований вакцину растворяли, для этого шприцом в 3 флакона с вакциной вносили 4,0 см³ растворителя. Тщательно перемешивали путем пропускания раствора несколько раз через шприц. После полного растворения препарата, полученный концентрированный раствор переносили в стерильную емкость, куда соблюдая правила асептики, был внесен растворитель из расчета 96,0 см³ на 1 флакон вакцины (50 прививных доз во флаконе). Приготовленный препарат вводили поросятам внутримышечно в области верхней трети шеи однократно. Наблюдение за животными продолжили в течение 14 суток после введения вакцины. Контрольная группа свиней, взятая в опыт, не подвергалась испытаниям, использовалась в качестве сравнения.

Ежедневный осмотр показал, что все поросята, которых использовали в опытных и контрольной группах оставались клинически здоровыми и живыми в течение всего срока наблюдения. Угнетения, изменения пищевых привычек и клинических отклонений не наблюдали. По истечению 14-ти суток поросята опытной группы подвергалась вскрытию, которое показало отсутствие каких-либо патологоанатомических изменений в месте введения вакцины.

Вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая безвредная для лабораторных животных и ареактогенна для естественно-восприимчивых животных свиней.

Для определения длительности иммунитета после применения вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой использовали 14 свиней: 9 голов поросят и 2 головы ремонтных свиноматок (опытная группа) и 3 головы поросят (контрольная группа).

Поросят и ремонтных свинок прививали однократно в область верхней трети шеи, в прививном объеме 2 см³, согласно проекту инструкции по применению.

Для проведения исследований вакцину растворяли в стерильном растворе натрия хлорида 0,9% изотоническом.

Пробы сыворотки крови от животных отбирали до вакцинации и через каждые 30 дней после (в течении 6 месяцев окончание эксперимента). Все пробы сывороток крови были исследованы с применением набора «Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit» (IDEXX), в котором значение s/p<0,4 специфические антитела отсутствуют, значение s/p≥0,4 отмечается наличие специфических антител.

Все животные до вакцинации были серонегативны к вирусу РРСС. Специфические антитела к вирусу РРСС выявили через 1 мес. после иммунизации у 100% поросят и ремонтных свиноматок, среднее значение s/p по группе составляло - 0,63. Положительная динамика накопления специфических антител к вирусу РРСС наблюдалась до 4-го месяца, в котором среднее значение s/p составляло 0,7 по группе. На пятый месяц после вакцинации, у 100% животных из опытной группы, специфические титры антител к вирусу РРСС имели положительные значения s/p, и в среднем составили 0,4 (минимальное пороговое значение). К шестому месяцу после вакцинации, только у 45 % животных из опытных групп, специфические антитела выявляли в значимых значениях s/p, которые в среднем по группе составляло 0,39.

Таким образом, в ходе проведенных исследований экспериментально было доказано, что однократная иммунизация вакциной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой поросят и ремонтных свиноматок, вызывает формирование иммунитета, который сохраняется не менее 4 месяцев. В то же время, необходимо отметить, что у контрольной группы животных, находившихся в одном боксе с опытной группой на всем протяжении отбора проб крови, для исследования на наличие специфических антител к вирусу РРСС, результаты ИФА были отрицательными. Результаты опыта по изучению длительности иммунитета после однократной вакцинации представлены в таблице 3.

Пример 4. Определение антигенной активности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой на поросятах, полученных от вакцинированных свиноматок.

В исследовании использовали 3 свиноматок первого триместра супоросности, серонегативных к вирусу РРСС, которых вакцинировали вакциной, полученной в примере 2 в первом триместре супоросности в прививном объеме 2 см³ внутримышечно в верхнюю треть шеи. Для проведения исследований вакцину растворяли в стерильном растворе натрия хлорида 0,9% изотоническом. Отбор проб сыворотки крови у свиноматок проводили до вакцинации, через 14 и 21 день после вакцинации. Кровь отбирали из хвостовой вены.

Свиноматки опоросились на 113-114 день после осеменения. От которых был получен приплод 10, 12 и 13 поросят, соответственно. Все свиноматки принесли живых здоровых, без патологий поросят. Результаты изучения антигенной активности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой в ИФА на супоросных свиноматках, вакцинированных в первом триместре представлены в таблице 4.

Через 21 день всех поросят рандомно разделили на три группы по 10 голов в каждой, а также, контрольная группа - 5 голов. Вакцину вводили поросятам, полученным от вакцинированных свиноматок, однократно на 21 день в прививном объеме 2 см³ внутримышечно в верхнюю треть шеи. Отбор проб сыворотки крови от поросят проводили на 10 и 21 сутки жизни до вакцинации, и через 14, 28 и 36 дней после вакцинации. Кровь отбирали из краниальной полой вены. На 10 сутки жизни у всех поросят в ИФА выявляли колостральные антитела к вирусу РРСС в средних по группам значениях s/p от 0,65 до 0,71, которые снижались к 21 дню жизни до 0,26-0,31 соответственно. Через 14, 28 и 36 дней после вакцинации, проявилась положительная динамика в определении специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней. В то время как у животных контрольной группы наблюдалась отрицательная динамика выявления специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней к концу опыта. Ежедневный осмотр показал, что все поросята, которых использовали в опыте оставались клинически здоровыми и живыми. Какого-либо угнетения, изменения пищевых привычек и клинических отклонений не наблюдали. По результатам исследований сделано заключение, что вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая безвредна и антигенноактивна для поросят, полученных от вакцинированных свиноматок, и подвергшихся иммунизации в возрасте 21 день. Результаты исследования по уровню колострального и вакцинного иммунитета у поросят представлены в таблице 5.

Пример 5. Изучение эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой на свинокомплексах.

Проведены испытания эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой, полученной в примере 2, на свинокомплексе №1, насчитывающем 35000 голов свиней, в котором наблюдали аборты у свиноматок, сопровождающиеся мертворождением, а также высокий уровень смертности у поросят сосунов. Изучение безвредности и иммуногенности вакцины (предлагаемое изобретение) проводили одновременно.

Для проведения испытания были сформированы сопоставимые по возрасту, упитанности и количеству группы животных, сформированные в 2 основных группы поросят не старше 23-25 суточного возраста контрольная и опытная. Вакцину применяли внутримышечно в область верхней трети шеи животным опытной группы в терапевтической дозе - 2,0 см³ однократно. В течение 14 суток после введения препарата за животными велось клиническое наблюдение, с целью учета отклонений в поведении и состоянии животных. После вакцинации в опытной группе в течение 7 суток проводили термометрию у 25 голов, при этом температура тела у животных была в пределах физиологической нормы от 38,2 до 40,1°С.

Результаты изучения эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой на поросятах группы отъёма, представленные в таблице 6 свидетельствуют о том, что в опытной группе (вакцинированные сектора) за период доращивания количество заболевших, вынужденно убитых и сданных на санитарный брак было меньше, по сравнению с контрольной группой. Среднесуточные привесы в опытной группе были выше в среднем на 8 грамм. Анализ заболеваемости показал, что в опытной группе большую часть заболевших составляли животные с нарушением функций желудочно-кишечного тракта и травмами, в то время как в контрольной группе с респираторными нарушениями.

Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая (предлагаемое изобретение) вводился также свиноматкам до 45-50 дней супоросности, в соответствии с прилагаемым проектом инструкции, внутримышечно в область верхней трети шеи в терапевтической дозе - 2,0 см³ однократно. Вакцинация репродуктивного поголовья позволила значительно снизить количество абортов, уровень мертворождений, а также позволило повысить количество и сохранность приплода.

Эффективность вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая (предлагаемое изобретение) изучена на свинокомплексе №2. Заболевание в основном проявлялось в респираторной форме на подсосных поросятах. Общий уровень заболевших доходил до 80%, а падежа до 25% (табл. 7).

Для проведения испытаний были сформированы опытная и контрольная группы из поросят 1-3 суточного возраста, сопоставимые по возрасту, физиологическому состоянию и количеству. Поросят вакцинировали, начиная с первых дней жизни. В 28-ом дневном возрасте поросята были переведены в группу доращивания, слабые и отстающие в росте/весе животные выбраковывались. Результаты испытания вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая (предлагаемое изобретение) на поросятах в свинокомплексе №2 представлены в таблице 7, из которых видно, что в опытной группе заболеваемость и смертность были ниже чем в контрольной (не вакцинированные поросята). Сохранность за период доращивания также была выше у привитых животных 92,9% против 82,7 % в контрольной группе.

В результате экспериментов подтверждена эффективность вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой из штамма «Борз» (предлагаемое изобретение) для специфической профилактики свиней.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:

- вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;

- вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, изготовленная на основе штамма «Борз» репродуктивно-респираторного синдрома свиней в соответствии с предлагаемым изобретение, расширяет арсенал вакцин против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живых культуральных сухих, обладающих высокой иммуногенной активностью и безвредностью, создающих напряженный иммунитет у привитых животных, против циркулирующего на территории РФ эпизоотического вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение: «Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая и способ изготовления вакцины»:

1. Аборты свиноматок невыясненной этиологии в Курской области / А.Л. Семенихин, И.Ф. Вишняков, В.А. Седов [и др.] // Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол.: матер. науч. конф. ВНИИВВиМ.-Покров,1992.-С.244-246.

2. Репродуктивно - респираторный синдром свиней (“синее ухо”) / В.А. Мищенко, В.М. Авилов, В.М. Захаров [и др.] // Ветеринария.-1994.-№9.-С.22-24.

3. Comparative analysis of routes of immunization of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine in a heterologous virus challenge study/ Kang Ouyang1, Jagadish Hiremath1, Basavaraj Binjawadagi1, [et al] // Veterinary Reseach, 2016, p.47-45.

4. Christianson W.T., Joo H.S. Porcine reproductive and respiratory syndrome: A review // Swine Health and Production.-1994.-V2,№2.-P.10-28.

5. Патент РСТ №93/07898; А 61 к 39/12, G 01 N 33/569, C 12 n 7/00; 29.04.93

6. Патент US546778, С 12 N 7/00, 19.12.95 г.

7. Патент US5587164: А 61 К 39/00, 39/12, 39/38,39/193; 24.12.96 г.

8. Патент US5866401; С 12 N 7/08, 7/01, 7/00, 7/02, 02.02.99 г.

9. Патент РСТ 2007130801, А 61К 39/12, С12N 7/00; 20.07.2006

10. Патент RU2779552 С1, 08.09.2022

11. https://vetfarmgarant.ru/catalog/svinovodstvo/yunistreyn-rrss/

12. https://vetprod.ru/portsilis-prrs - :~:text=%D0%96%D0%B8%D0%B2%D0%B0%D1%8F%20%D0%B2%D0%B0%D0%BA%D1%86%D0%B8%D0%BD%D0%B0%20%D0%B2%20%D1%84%D0%BE%D1%80%D0%BC%D0%B5%20%D0%BB%D0%B8%D0%BE%D1%84%D0%B8%D0%BB%D0%B8%D0%B7%D0%B0%D1%82%D0%B0,%D0%B1%D0%B5%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%BE%20%D0%B4%D0%BE%20%D1%81%D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%BB%D0%BE%2D%D0%B6%D0%B5%D0%BB%D1%82%D0%BE%D0%B3%D0%BE%20%D1%86%D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%B0.

13. https://www.boehringer-ingelheim.com/ru/veterinarnykh-preparatov/veterinarnye-preparaty/reprocikrrrss-eu

14. Ashmarin I.P., Vorob’ev A.A. [Statistical Methods in Microbiological Research]. Leningrad: “Medgiz” [Leningrad divi- sion]; 1962. 180 p.

Таблица 1

Специфичность и отсутствие вирусной контаминации к возбудителям ПВИС,

болезни Ауески, КЧС, ВГС, M. hyopneumoniae экспериментальной вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение)

Подсвинок Пробы сывороток крови Уровень антител в ИФА и РТГА
до и через 21 сутки после введения вакцины (*) КЧС РРСС ПВИС болезнь Ауески ВГС M. hyopneumoniae 1 до иммунизации 0 (-) 0,07 (-) 1:32 (-) 10 (-) 0,09 (-) 3 (-) через 21 сут после имунизации 0 (-) 1,17 (+) 1:64 (-) 12 (-) 0,12 (-) 4 (-) 2 до иммунизации 0 (-) 0,04 (-) 1:64 (-) 14 (-) 0,12 (-) 2 (-) через 21 сут после имунизации 0 (-) 1,29 (+) 1:64 (-) 18 (-) 0,14 (-) 5 (-) 3 до иммунизации 0 (-) 0,06 (-) 1:64 (-) 21 (-) 0,1 (-) 3 (-) через 21 сут после имунизации 0 (-) 0,94 (+) 1:128 (-) 19 (-) 0,13 (-) 6 (-)

Примечание: «(-)» - результат отрицательный;

«(+)» - результат положительный

*-интерпретация результата

Таблица 2

Определение инфекционной активности экспериментальных образцов вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) разведенной в 0,9% физиологическом растворе с различными показателям рН

n=2

Повтор
ность № пробы Показатель рН Инфекционная
активность, lg ТЦД₅₀/см³ Средний
результат по группе №1 1 5,5-6,5 5,0 5,1±0,1 2 5,25 3 5,0 1 6,5-6,9 5,5 5,25±0,2 2 5,25 3 5,0 1 7,0-7,4 6,0 5,8±0,2 2 5,75 3 5,75 №2 1 5,5-6,5 5,0 5,0±0,2 2 5,25 3 4,75 1 6,5-6,9 5,5 5,4±0,2 2 5,5 3 5,25 1 7,0-7,4 5,75 5,8±0,1 2 5,75 3 6,0

Таблица 3

Результаты изучения длительности иммунитета

после однократного введения вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение)

Группа
животных №
животного Уровень специфических антител к вирусу РРСС до и каждый мес. после вакцинации в ИФА, s/p до иммун. 1 мес 2 мес 3 мес 4 мес 5 мес 6 мес Ремонтные свиноматки 1 0,01(-) 0,61(+) 0,88(+) 1,0(+) 0,73(+) 0,44(+) 0,35(-) 2 0,04(-) 0,57(+) 0,78(+) 0,85(+) 0,68(+) 0,51(+) 0,42(+) поросята 3 0,07(-) 0,65(+) 0,78(+) 1,0(+) 0,69(+) 0,41(+) 0,28(-) 4 0,04(-) 0,64(+) 0,85(+) 0,95(+) 0,73(+) 0,4(+) 0,36(-) 5 0,08(-) 0,66(+) 0,87 (+) 0,93(+) 0,66(+) 0,57(+) 0,4(+) 6 0,07(-) 0,57(+) 0,78(+) 1,0(+) 0,78(+) 0,51(+) 0,42(+) 7 0,02(-) 0,64(+) 0,83(+) 1,1(+) 0,69(+) 0,44(+) 0,37(-) 8 0,03(-) 0,64(+) 0,8(+) 1,13(+) 0,79(+) 0,57(+) 0,48(+) 9 0,1(-) 0,57(+) 0,78(+) 0,85(+) 0,72(+) 0,51(+) 0,42(+) 10 0,06(-) 0,77(+) 0,93(+) 1,11(+) 0,88(+) 0,53(+) 0,37(-) 11 0,1(-) 0,63(+) 0,9(+) 1,0(+) 0,69(+) 0,55(+) 0,44(+) количество проб исследов
/положит. 11/0 11/11 11/11 11/11 11/11 11/11 11/6 среднее значение по группе, М±S 0,06±0,01 0,63± 0,07 0,85± 0,08 0,9±
0,1 0,7± 0,1 0,4±
0,1 0,39± 0,14 контроль 12 0,07(-) 0,04(-) 0,08(-) 0,06 (-) 0,07(-) 0,08(-) 0,06 (-) 13 0,1(-) 0,06(-) 0,08(-) 0,06 (-) 0,08 (-) 0,07(-) 0,06 (-) 14 0,08(-) 0,08(-) 0,07(-) 0,09 (-) 0,08 (-) 0,08(-) 0,08 (-) количество проб исследов
/положит. 3/0 3/0 3/0 3/0 3/0 3/0 3/0

Примечание: значение ИФА: s/p < 0,4 специфические антитела отсутствуют,

s/p ≥ 0,4 наличие специфических антител;

Таблица 4

Антигенная активность вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) на супоросных свиноматках, вакцинированных в первом триместре

№
свиноматки Уровень специфических антител в ИФА до и через 14, 21 день после вакцинации (s/p) Родилось поросят до вакцин. 14 дней 21 день 1 0,34 0,63 0,72 12 2 0,19 0,58 0,87 13 3 0,28 0,67 0,83 10

Таблица 5

Результаты исследования колострального и вакцинального иммунитета у поросят, полученных от привитых вакциной (предлагаемое изобретение) свиноматок

Повторность №
п/п Уровень специфических антител в ИФА до и через 36 дней после вакцинации, (s/p) 10 дней от рождения 21* день от рождения 14 дней после вакцин. 28 дней после вакцин. 36 дней после вакцин. 1 1 0,75 0,41 0,46 0,63 0,75 2 0,72 0,43 0,44 0,58 0,88 3 0,69 0,37 0,48 0,62 0,74 4 0,74 0,24 0,52 0,63 0,91 5 0,75 0,26 0,57 0,75 0,87 6 0,79 0,17 0,53 0,68 0,78 7 0,76 0,38 0,49 0,57 0,81 8 0,53 0,29 0,52 0,66 0,92 9 0,78 0,16 0,47 0,61 0,85 10 0,66 0,24 0,43 0,54 0,83 Среднее значение 0,71 ±0,07 0,31 ±0,08 0,49 ±0,05 0,62 ±0,03 0,83 ±0,06 2 11 0,64 0,16 0,53 0,59 0,71 12 0,73 0,27 0,47 0,62 0,82 13 0,61 0,35 0,46 0,53 0,74 14 0,64 0,31 0,52 0,64 0,86 15 0,57 0,24 0,59 0,65 0,79 16 0,62 0,12 0,56 0,72 0,91 17 0,77 0,41 0,43 0,64 0,83 18 0,53 0,25 0,47 0,56 0,69 19 0,76 0,19 0,48 0,67 0,87 20 0,69 0,4 0,42 0,59 0,85 Среднее значение 0,65 ±0,06 0,27 ±0,04 0,49 ±0,07 0,62 ±0,06 0,81 ±0,03 3 21 0,74 0,27 0,48 0,73 0,92 22 0,62 0,41 0,43 0,59 0,83 23 0,64 0,34 0,42 0,62 0,87 24 0,75 0,27 0,48 0,71 0,94 25 0,69 0,22 0,51 0,68 0,85 26 0,62 0,38 0,51 0,65 0,87 27 0,57 0,25 0,49 0,72 0,91 28 0,63 0,19 0,54 0,71 0,94 29 0,57 0,32 0,47 0,61 0,98 30 0,65 0,27 0,53 0,67 0,79 Среднее значение 0,71 ±0,04 0,31 ±0,06 0,54 ±0,04 0,73 ±0,05 0,98 ±0,07 Контроль 31 0,67 0,26 0,12 0,08 0,1 32 0,53 0,35 0,18 0,1 0,09 33 0,66 0,24 0,11 0,07 0,09 34 0,68 0,18 0,09 0,07 0,06 35 0,72 0,27 0,15 0,12 0,08 Среднее значение 0,65 ±0,06 0,26 ±0,03 0,11 ±0,02 0,09 ±0,02 0,08 ±0,04

Примечание: Значение ИФА s/p < 0,4 специфические антитела отсутствуют,

s/p ≥ 0,4 наличие специфических антител;

* - после отбора крови проведена вакцинация

Таблица 6

Результаты эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) на поросятах группы отъёма на свинокомплексе №1

№ п/п Показатели Опытная группа Контрольная группа 1 Количество животных 1250 1158 2 Возраст (дней) 23-25 23-25 3 Передано на доращивание (гол) 1250 1158 4 Средний вес головы, кг 7,3±0,1 7,2±0,15 5 Валовый привес группы, г 9325 8440 6 Среднесуточный привес, г 218,2±8,5 210,2±9,2 7 Заболело голов, % 134 166 10,7 14,3 8 Вынуждено убито голов, % 50 66 4,2 5,7 9 Санитарный брак голов, % 74 76 5,9 6,6 10 Передано на откорм, голов 992 850 11 Сохранность в период доращивания, % 92,3% 83,4

Таблица 7

Результаты эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) на поросятах группы подсоса на свинокомплексе №2

№
п/п Показатели Опытная группа Контрольная группа 1 Количество животных 240 255 2 Возраст (дней) 1-3 1-3 3 Заболело голов, % 57 89 23,7 35,2 4 Вынуждено убито голов, % 7 27 2,9 10,4 5 Санитарный брак голов, % 10 17 4,1 6,7 6 Среднесуточный привес, г 195±4,5 168±6,2 7 Сохранность в период доращивания, % 92,9% 82,7

Изобретение относится к области вирусологии и биотехнологии. Описана вакцина, произведенная из культуральной жидкости клеток MARC-145 - культура клеток макаки-резус, инфицированной аттенуированным штаммом «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней 1 генотипа - европейский тип, с добавлением защитной среды в эффективном соотношении. Вакцина безопасна и ареактогенна, обладает высокой антигенной активностью, создает напряженный иммунитет в короткие сроки у привитых животных против циркулирующего на территории России эпизоотического штамма вируса РРСС паневропейского подтипа. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 7 табл., 14 пр.

1. Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, содержащая активное вещество и защитную среду, в качестве активного вещества она содержит вирусный антиген из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней вида Betaarterivirus suid 1 генотипа 1, депонированный во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №460 – деп /23-10 – ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ», с инфекционной активностью не менее 10^5,75 lg ТЦД₅₀/см³, в эффективном количестве не менее 75,0–80,0 мас.%, и защитную среду 20,0–25,0 мас.%.

2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит защитную среду, содержащую 20%-ный гидролизат лактоальбумина - 62,5 мас.%, 50%-ную сахарозу - 25 мас.% и 10%-ный раствор желатозы - 12,5%, в эффективном количестве.

3. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит аттенуированный штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе в перевиваемой культуре клеток почки макаки-резус MARC-145.