Элективная питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa Российский патент 2024 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и является элективной питательной средой, которая может быть использована в лабораторной практике при выделении Pseudomonas aeruginosa из клинического материала, пищевых продуктов и объектов окружающей среды. Питательная среда содержит в качестве азотистой питательной основы и источника витаминов пептон ферментативный сухой для бактериологических целей, дрожжевой экстракт для бактериологических целей; калий хлористый и магний сернокислый семиводный; в качестве антиоксиданта - натрий сернистокислый безводный; этакридин лактат (риванол), моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) в качестве ингибиторов роста посторонней микрофлоры; агар-агар микробиологический, воду дистиллированную.

Род Pseudomonas имеет в своем составе более 100 видов, которые присутствуют, в основном, в почве и воде. Только малое их количество могут вызывать заболевания у животных и человека (Lorenz A. et al., 2016) [12]. Синегнойная палочка - Pseudomonas aeruginosa один из лидирующих возбудителей оппортунистических инфекций. Она служит причиной многих гнойно-воспалительных заболеваний, пневмоний и септического шока благодаря полирезистентности к антибиотикам и антибактериальным препаратам. По сравнению с другими микробами P. aeruginosa обладает слабо выраженной способностью к утилизации углеводов (Шепелин А.П. с соавт., 2017) [10]. Ее универсальный обмен веществ позволяет использрвать в качесве источников питания различные вещества (углеводы, антимикробные препараты, детергенты, дезинфектанты и др.), тем самым, обеспечивая возможность занимать различные экологические ниши (Лазарева А.В. с соавт., 2017) [2].

Предлагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии. Выделение P. aeruginosa достигается путем применения элективной питательной среды, которая может быть использована в лабораторной практике при выделении синегнойной палочки из клинического материала, пищевых продуктов и объектов окружающей среды.

В основе предлагаемого способа лежит применение питательной среды, которая содержит в %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей 0,5 - 1,5;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей 0,05 - 0,5;

3. Калий хлористый - 0,05-0,2;

4. Магний сернокислый семиводный - 0,08-0,3;

5. Натрий сернистокислый безводный - 0,01-1,5;

6. Этакридин лактат (риванол) - 0,005-0,04;

7.Моно4-1,1,3,3 -тетраметилбу тил фениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,1-0,4;

8. Агар-агар микробиологический - 0,8-1,5;

9. Вода дистиллированная - до 100%, рН готовой среды рН 7,2±0,3.

Существует ряд питательных сред с элективными свойствами для выделения P.aeruginosa, применение которых регламентировано MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала» [5], MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях» [6], МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний» [8]. Их принцип действия основан на создании благоприятных условий для обнаружения и роста синегнойной палочки путем введения различных селективных добавок (в частности, иргазан, цетилпиридиний хлористый), а также использования возможности роста Р. aeruginosa при 42°С. В состав этих сред добавляются соли калия и магния, которые позволяют выявлять продукцию различных пигментов - пиоцианинов и пиовердинов (Visca P. et al., 2007) [14], (Maha М. et al., 2019) [13].

Известен способ выделения P. aeruginosa с помощью селективной среды [9], следующего состава (г/л):

1. L-глутамат натрия - 5,0-6,0;

2. L-пролин - 2,0-2,5;

3. Маннитол - 5,0-6,0;

4. Осалмид (CAS 526-18-1) - 1,0-1,2;

5. Диметилсульфоксид - 10-12 мл;

6. Натрий сернокислый - 2,0;

7. Магний сернокислый - 0,1;

8. Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,5;

9. Калий фосфорнокислый двузамещенный - 2,0;

10. Агар микробиологический - 12,0;

Вода дистиллированная - до 1 литра.

рН 7,2±0,2. Все составляющие (кроме раствора осалмида в диметилсульфоксиде) растворяют при нагревании, кипятят 5 мин, добавляют осалмид, разливают в стерильные чашки Петри. Посевы инкубируют при 42°С 24 ч. Принадлежность бактерий к виду P. aeruginosa определяют по наличию выросших колоний или газона бактерий. Данное изобретение не предусмотрено для применения в медицинской микробиологии. Питательная среда, применяемая в указанном выше способе, не может быть подвергнута процессу стерилизации одним из доступных в лабораторной практике методом - автоклавированием, а также является полностью синтетической.

Недостатком известной среды является то, что она не может храниться в готовом виде более одного месяца. Также синтетические питательные среды не могут обеспечить питательные потребности большинства штаммов микроорганизмов в частности P. aeruginosa. Таким образом, назначение указанной среды не совпадает с назначением (решением задач) предлагаемой нами.

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosas [11]. Настоящее изобретение является питательной средой для выделения P. aeruginosa из различного биологического материала и объектов окружающей среды следующего состава (г/л):

1. Панкреатический гидролизат рыбной муки - 20,0±3,0;

2. Калий сернокислый - 7,6±0,76;

3. Магний сернокислый 7-водный - 2,4±2,4;

4. Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,0±0,1;

5. Калий фосфорнокислый двузамещенный - 1,0±0,1;

6. Фенозан-кислота - 0,025±0,0025;

7. Бутилгидрокситолуол - 0,075±0,0075;

8. N-цетилпиридиний хлористый 1-водный - 0,2±0,05;

9. Агар бактериологический - 9,0±2,0;

10. Натрий углекислый - 0,2±0,05;

вода дистиллированная - 1000 мл. Среда стерилизуется кипячением до полного расплавления агара. Штаммы P. aeruginosa формируют на ней плоские, слизистые в R-форме колонии с образованием лимонно-желтого пигмента при посеве по 0,1 мл из разведения 10^-6 микробных кл/мл, а микробы-ассоцианты {Escherichia coli, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus) не растут из разведений 10^-3 и 10^-1 микробных кл/мл. Несмотря на высокие биологические показатели, сбалансированность своего состава, данная питательная среда является дорогостоящей. Это можно объяснить содержанием в ней трех компонентов: N-цетилпиридиния хлористого 1-водного (ЦПХ), фенозан-кислоты и бутилгидрокситолуола (последние компоненты используются в качестве антиоксидантов). Срок хранения этой среды в готовом для применения виде - около 10 суток, что является весьма малым.

Таким образом, в связи с необходимостью стандартизации исследования материала на наличие синегнойной палочки, расширения перечня выявляемых патогенов и сокращения сроков получения результатов анализа несомненным является потребность в новой селективной среде.

Технической задачей предлагаемого изобретения является выделение чистой культуры P. aeruginosa из клинического материала, пищевых продуктов и объектов окружающей среды путем применения элективной питательной среды, содержащей в своем составе экономически более выгодные ингредиенты и характеризующейся более длительным сроком хранения в готовом для применения виде.

Технический результат достигается путем обнаружения и идентификации P. aeruginosa в клиническом материале, объектах окружающей среды. Для этих целей применяется питательная среда, содержащая в качестве факторов элективности этакридин лактат (риванол) и моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100), а также вещества, позволяющие выявить пигментообразование у данного микроорганизма.

Таким образом, состав среды, содержащей (в %):

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей 0,07-0,15;

2. Дрожжевой экстракт для бактериологических целей 0,01-0,05;

3. Калий хлористый (ЧДА, ХЧ) - 0,007-0,015;

4. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,08-0,02;

5. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,002-0,011;

6. Этакридин лактат (риванол) - 0,001- 0,004;

7. Моно4-(1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,001 - 0,004;

8. Агар-агар микробиологический - 0,08-0,13;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл.

рН 7,2±0,3.

Колонии округлые, плосковыпуклые, гладкие, полупрозрачные, желтого цвета с образованием пигмента зеленого цвета вокруг них.

Способ приготовления элективной питательной среды осуществляется по следующей технологии.

В стеклянную термостойкую посуду вносят навески пептона сухого ферментативного для бактериологических целей, дрожжевого экстракта сухого для бактериологических целей, калия хлористого, агар-агара. Добавляют дистиллированную воду до 1000 мл. Устанавливают рН 8,2 при помощи 20% водного раствора гидроокиси натрия и 12% водного раствора соляной кислоты. Варят в паровом стерилизаторе текучим паром в течение 45-65 минут или кипятят на электроплитке при постоянном помешивании, не допуская пригорания агаровых частиц, в течение 2-3 минут после полного растворения агара. Фильтруют в случае образования осадка. Затем при помощи 12% водного раствора соляной кислоты, 20% водного раствора гидроокиси натрия доводят рН до 7,2±0,3. После этого измеряют объем при помощи мерного цилиндра и добавляют необходимые количества магния сернокислого семиводного, этакридина лактата (риванола), моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфенилового эфира полиэтиленгликоля (Тритона Х-100) в приготовляемую питательную среду с последующим перемешиванием до их полного растворения.

Питательную среду разливают в стерильные флаконы вместимостью 250 и 450 мл по 200 и 400 мл соответственно, укупоривают при помощи резиновых пробок и алюминиевых колпачков, стерилизуют при 110°С (0,5 атм.) 20 минут в паровом стерилизаторе (автоклаве) и после стерилизации оставляют остывать. Проведенные исследования показали, что стерильная питательная среда может храниться в герметически закрытых флаконах в сухом темном месте при температуре от 2 до 8°С в течение 12 мес.

После остывания находящуюся во флаконах питательную среду расплавляют на водяной бане до однородного содержимого флаконов. Затем флаконы с ней асептично при помощи ножниц освобождают от алюминиевых колпачков и резиновых пробок, меняя последние на стерильные ватно-марлевые. Далее осуществляют асептично розлив питательной среды в стерильные чашки Петри по 20-30 мл и оставляют застывать на ровной поверхности. Цвет питательной среды - желтый. Было показано, что готовая питательная среда, разлитая в чашки Петри может храниться не более 30 дней при температуре от 2 до 8°С.

Качество предлагаемого способа выделения P. aeruginosa проверяют следующим образом.

Перед проверкой качества предлагаемого способа тест-штаммы Р. aeruginosa АТСС 27853, P. aeruginosa Р-5810, P. aeruginosa 8633, Р. aeruginosa 8642, Е. coli 18, К. pneumoniae 3454, К. pneumoniae 3361, S. aureus АТСС 25925, P. vulgaris НХ19 (222) подготавливают к контролю в соответствии с требованиями МУК 4.2.2316-08 [7].

Пример 1

Для приготовления среды используют препараты в следующих концентрациях %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 0,5%;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,05%;

3. Калий хлористый - 0,07%;

4. Агар-агар микробиологический - 0,8%;

5. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,08%;

6. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,01%;

7. Этакридин лактат (риванол) - 0,0055%;

8. Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100)- 0,1%;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл

рН 7,2±0,3.

Наборы данных реагентов помещают в чистую 2-х литровую колбу.

Подщелачивают при помощи 20% раствора гидроокиси натрия до рН 8,2. Смесь кипятят на электроплитке при постоянном помешивании, не допуская пригорания агаровых частиц, в течение 2-3 минут после полного растворения агара или в паровом стерилизаторе (в режиме текучего пара) в течение 45 - 65 мин. Фильтруют в случае образования осадка через ватно-марлевый фильтр. Затем добавляют натрий сернистокислый безводный - 0,01%, магний сернокислый семиводный - 0,08%, этакридин лактат (риванол) - 0,0055%, моно4-1,1,3,3-тетраметилбутил) фениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,1%, перемешивают до полного растворения ингредиентов, избегая пенообразования. Доводили рН до 7,2±0,3 при помощи 12% водного раствора соляной кислоты, 20% водного раствора гидроокиси натрия. Полученную элективную питательную среду разливают в чистые флаконы для крови и кровезаменителей вместимостью 250 мл по 200 мл или во флаконы для крови и кровезаменителей вместимостью 450 мл по 400 мл. Флаконы герметично укупоривают резиновыми пробками, завальцовывали колпачками алюминиевыми медицинскими и стерилизовали в паровом стерилизаторе (автоклаве) при 110°С (0,5 атм.) и после стерилизации оставляют застывать. После застывания находящуюся во флаконах питательную среду расплавляли на водяной бане (до однородного содержимого флаконов). Затем флаконы с ней асептично при помощи ножниц освобождали от алюминиевых колпачков и резиновых пробок, меняя последние на стерильные ватно-марлевые. Далее осуществляют асептично розлив питательной среды в стерильные чашки Петри по 20-30 мл и оставляют застывать на ровной поверхности. Цвет полученной питательной среды - желтый.

Для контроля качества полученной элективной питательной среды испольют тест-штаммы P. aeruginosa АТСС 27853, P. aeruginosa Р-5810, Р. aeruginosa 8633, P. aeruginosa 8642, Е. coli 18, К. pneumoniae 3454, К. pneumoniae 3361, S. aureus АТСС 25925, P. vulgaris НХ19 (222), хранящиеся и и подготовленные к посеву согласно МУК 4.2.2316-08 [7]. Суточную культуру каждого из них суспендируют в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия, забуференного 1/150 М калий-натрий фосфатным буфером рН (7,1±0,1) до концентрации 1 × 10⁹ м.к./мл по стандартному образцу мутности ОСО-42-28-85П (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России). Приготовленные взвеси тест-штаммов P. aeruginosa АТСС 27853, P. aeruginosa Р-5810, Р. aeruginosa 8633, P. aeruginosa 8642 последовательно разводят в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия, забуференного 1/150 М калий-натрий фосфатным буфером рН (7,1±0,1) с десятикратным интервалом до разведения 10^-6 (1000 м.к./мл). Взвеси тест-штаммов, используемые в качестве микробов-ассоциантов: Е. coli 18, К. pneumoniae 3454, К. pneumoniae 3361, S. aureus АТСС 25923 также разводят с десятикратным интервалом последовательно до разведений 10^-2 (1000000 м.к./мл) и до 10^-3 (1000000 м.к./мл) - P. vulgaris НХ19 (222).

Посев тест-штаммов осуществляют по 0,1 мл из разведений каждого из них с последующей инкубацией при (42±1)°С в течение 18-24 ч, затем проводили учет результатов.

Как видно из таблицы 1, осуществление предлагаемого способа при применении среды указанного состава не соответствует требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях», МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний», т.к. присутствует рост микробов-ассоциантов. Искомый микроорганизм выявить было практически невозможно.

Пример 2

Для приготовления среды используют препараты в следующих концентрациях %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 0,7%;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,1%;

3. Калий хлористый - 0,08%;

4. Агар-агар микробиологический - 0,9%;

5. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,1%;

6. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,03%;

7. Этакридин лактат (риванол) - 0,011%;

8. Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,12%;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл

РН 7,2±0,3.

В ходе приготовления и испытания среды использованы методические приемы, как в примере 1.

Как видно из таблицы 1, осуществление предлагаемого способа при применении среды указанного состава не соответствует требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях», МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний», т.к. присутствует рост микробов-ассоциантов. Искомый микроорганизм было затруднительно выявить из-за слабого пигментообразования.

Пример 3

Для приготовления среды используют препараты в следующих концентрациях %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 0,8%;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,2%;

3. Калий хлористый - 0,09%;

4. Агар-агар микробиологический - 1%;

5. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,12%;

6. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,03%;

7. Этакридин лактат (риванол) - 0,02%;

8. Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,16%;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл

рН 7,2±0,3.

В ходе приготовления и испытания среды использованы методические приемы, как в примере 1.

Как видно из таблицы 1, осуществление предлагаемого способа при применении среды указанного состава соответствует требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях», МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний» и позволяет выявлять Pseudomonas aeruginosae.

Пример 4

Для приготовления среды используют препараты в следующих концентрациях %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 1%;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,3%;

3. Калий хлористый - 0,1%;

4. Агар-агар микробиологический - 1,1%;

5. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,15%;

6. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,07%;

7. Этакридин лактат (риванол) - 0,0275%;

8. Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,2%;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл

рН 7,2±0,3.

В ходе приготовления и испытания среды использованы методические приемы, как в примере 1.

Как видно из таблицы 1, осуществление предлагаемого способа при применении среды указанного состава соответствует требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях», МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний» и позволяет выявлять Pseudomonas aeruginosae.

Пример 5

Для приготовления среды используют препараты в следующих концентрациях %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 1,2%;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,4%;

3. Калий хлористый - 0,15%;

4. Агар-агар микробиологический - 1,3%;

5. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,25%;

6. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,1%;

7. Этакридин лактат (риванол) - 0,0315%;

8. Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,32%;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл

рН 7,2±0,3.

В ходе приготовления и испытания среды использованы методические приемы, как в примере 1.

Как видно из таблицы 1, осуществление предлагаемого способа при применении среды указанного состава не соответствует требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)», МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний». Происходит снижение значений диаметра колоний и показателя прорастания (из посевной дозы 100 м.к.) элективной питательной среды в отношении использованных для контроля штаммов Р. Aeruginosa.

Пример 6

Для приготовления среды используют препараты в следующих концентрациях %:

1. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 1,5%;

2. Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,5%;

3. Калий хлористый - 0,2%;

4. Агар-агар микробиологический - 1,5%;

5. Магний сернокислый семиводный (ЧДА, ХЧ) - 0,03%;

6. Натрий сернистокислый безводный (ЧДА, ХЧ) - 0,15%;

7. Этакридин лактат (риванол) - 0,04%;

8. Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) - 0,4%;

9. Вода дистиллированная - 1000 мл

рН 7,2±0,3.

В ходе приготовления и испытания среды использованы методические приемы, как в примере 1.

Осуществление предлагаемого способа при применении среды указанного состава не соответствует требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях», МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний». Происходит снижение значений диаметра колоний и показателя прорастания (из посевной дозы 100 м.к.) элективной питательной среды в отношении использованных для контроля штаммов P. aeruginosa за счет возрастания содержания ингибиторов и повышения плотности агарового геля.

Как видно из представленных в таблице 1 данных, осуществление предлагаемого способа выделения P. aeruginosa с применением сред, составленных по примерам №1, №2, №5 и №6 не удовлетворяет требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала» [5], MP «Обнаружение и идентификация P. aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)» [6], МУК 4.2.3115-13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний» [8]. Осуществление указанного выше способа с применением сред, состав которых приведен в примерах №3 и №4. удовлетворяет требованиям MP «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», MP «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)», МУК 4.2.3115-13. Использование среды, указанной в примере №3, является экономически более выгодным.

Источники информации

1. Алешня В.В., Алексанина Н.В., Журавлев П.В. Питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa из водных объектов. Патент РФ №RU2710160, Опубл. 24.12.2019.

2. Лазарева, А.В. Pseudomonas aeruginosa: патогенность, патогенез и патология. /А.В. Лазарева, И.В. Чеботарь, О.А. Крыжановская, В.И. Чеботарь, Н.А. Маянский. // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2015.Т.17.-№3.-С. 170-186.

3. Логинов О.Н., Силищев Н.К., Коршунова Т.Ю., Четвериков СП., Асабина Е.А. Питательная среда для культивирования бактерий рода Pseudomonas. Патент РФ №RU23030601, Опубл. 20.07.2007. Бюл. №20.

4. Мальцева Н.Н., Воробьева О.Н., Тараско А.Д., Алексеев A.M., Панченко В.А., Старцева В.А. Способ идентификации синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa. Патент РФ №RU2540501, Опубл. 10.02.2015. Бюл. №4.

5. Методические рекомендации: Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала (утверждены зам. начальника Главного управления лечебно-профилактической помощи Минздрава СССР 17.01.1983). М.: МЗ СССР, 1984. - 18 с.

6. Методические рекомендации: Выделение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях) (утверждены начальником ГУКИ МЗ СССР 24.05.1984). М.: МЗ СССР, 1985. - 22 с.

7. Методические указания: Методы контроля бактериологических питательных сред: МУК 4.2.2316 - 08 (утверждены Главным санитарным врачом Российской Федерации 18.01.2008) М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008. - 52 с.

8. Методические указания: 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний: МУК 4.2.3115-13 (утверждены Главным санитарным врачом Российской федерации 21.10.2013). М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014. - 39 с.

9. Сиволодский Е.П. Способ выделения и идентификации бактерий Pseudomonas aeruginosa. Патент РФ №RU2658435, Опубл. 21.06.2018.

10. Шепелин, А.П. Определение специфической активности питательных сред для Pseudomonas aeruginosa. / А.П. Шепелин, А.Б. Сергеева, О.В. Полосенко // Бактериология. 2017. Т. 2. - №1. - С. 54-60.

11. Шепелин А.П., Марчихина И.И., Полосенко О.В., Шолохова Л.П. Питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa. Патент РФ №RU 2709136, Опубл. 16.12.2019. Бюл. №35.

12. Lorenz, A. Insights into host-pathogen interactions from state-of-the-art animal models of respiratory Pseudomonas aeruginosa infections / A. Lorenz, V. Pawar, S. Haussler, S. Weiss // FEBS Letters. - 2016. Vol.590, №21.-P. 3941-3959.

13. Maha, M.K. Pyocyanin and Biofilm Formulation in Pseudomonas aeruginosa Isolated from Burn Infections Baghdad, Iraq / M.K. Maha, Marjiani M.F. // Jordan J. of Biol. Sci. - 2019. Vol.12. №l.-P. 31-35.

14. Visca, P. Iron-regulated Salicylate Synthesis by Pseudomonas spp./ P. Visca, A. Ciervo, V. Sanfilippo, N. Orsi // J. of Gen. Microbiol. - 1993. №139. -P. 1995-2001.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду, содержащую в качестве азотистой питательной основы и источника витаминов пептон ферментативный сухой для бактериологических целей, дрожжевой экстракт для бактериологических целей; калий хлористый и магний сернокислый семиводный; в качестве антиоксиданта - натрий сернистокислый безводный; этакридин лактат (риванол), моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля (Тритон Х-100) в качестве ингибиторов роста посторонней микрофлоры; агар-агар микробиологический, воду дистиллированную. Изобретение позволяет получить элективную питательную среду с более длительным сроком хранения. 1 табл., 6 пр.

Селективная питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa, сухая, содержащая питательную основу, пептон сухой ферментативный для бактериологических целей, дрожжевой экстракт сухой - для бактериологических целей, калий хлористый, агар-агар микробиологический, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит магний сернокислый семиводный, натрий сернистокислый безводный, этакридин лактат риванол, моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля Тритон Х-100, агар-агар микробиологический при следующем соотношении компонентов, %:

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 0,5-1,5;

Дрожжевой экстракт сухой для бактериологических целей - 0,05-0,5;

Калий хлористый - 0,05-0,2;

Агар-агар микробиологический - 0,8-1,5;

Магний сернокислый семиводный ЧДА, ХЧ - 0,08-0,3;

Натрий сернистокислый безводный ЧДА, ХЧ - 0,01-1,5;

Этакридин лактат риванол - 0,005-0,04;

Моно4-1,1,3,3-тетраметилбутилфениловый эфир полиэтиленгликоля

Тритон Х-100 - 0,1-0,4;

Вода дистиллированная - 1000 мл;

pH 7,2 ± 0,3.