Показать метаданные Скрыть метаданные

(19)

(11)

2 829 327

(13)

(51)

МПК

A61K47/60(2017-01-01)

C07K14/55(2006-01-01)

A61P35/00(2006-01-01)

(21) (22)

Заявка

2021125506, 2020-02-05

(24)

Дата начала отсчета патента

2020-02-05

(22)

дата подачи заявки

2020-02-05

(45)

опубликовано

2024-10-30

(72)

авторы

Птацин, ДжеродКаффаро, Каролина Е.Милла, Маркос

(73)

патентообладатели

Синторкс, Инк.

(56)

Документы, цитированные в отчете о поиске

US 20140328791 A1, 06.11.2014US 20060269515 A1, 30.11.2006US 20170260137 A1, 14.09.2017.

КОНЪЮГАТЫ IL-2 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K47/60 C07K14/55 A61P35/00

Описание патента на изобретение RU2829327C2

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА

[0001] Настоящая заявка заявляет приоритет предварительной заявки на патент США номер 62/802191, поданной 06 февраля 2019 г., предварительной заявки на патент США номер 62/847844, поданной 14 мая 2019 г., предварительной заявки на патент США номер 62/870581, поданной 03 июля 2019 г., предварительной заявки на патент США номер 62/899035, поданной 11 сентября 2019 г., и предварительной заявки на патент США номер 62/940173 поданной 25 ноября 2019 г., из которых все включены посредством ссылки во всей своей полноте.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0001.1] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате с кодировкой ASCII и настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте. Копия указанного файла с кодировкой ASCII, созданная 4 февраля 2020 г., имеет название 46085-729_601_SL.txt, и ее размер составляет 124806 байтов.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Отдельные популяции Т-клеток модулируют иммунную систему для поддержания иммунного гомеостаза и толерантности. Например, регуляторные Т (Treg)-клетки предотвращают несоответствующие ответы иммунной системы посредством предотвращения патологической аутореактивности, в то время как цитотоксические Т-клетки нацеливаются на инфицированные клетки и/или раковые клетки и уничтожают их. В некоторых случаях модуляция различных популяций Т-клеток обеспечивает вариант лечения заболевания или признака.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которой по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (I),

формула (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 10 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 15 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 25 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 35 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 40 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 45 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 50 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 60 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69 и L72, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из F42, E62 и P65, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой K35, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой F42, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой F44, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой K43, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой E62, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой P65, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой R38, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой T41, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой E68, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой Y45, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой V69, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 представляет собой L72, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[0004] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (I),

формула (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

X имеет структуру

;

[0005] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 15-19, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II), или формулы (III), или смеси формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

X имеет структуру

; или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_PEG] представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II),

формула (II), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 16, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 17, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (III),

формула (III); или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 16, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 17, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. Иллюстративная структура группы метокси-PEG показана в структуре mPEG-DBCO на схеме 1 примера 2.

[0006] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 15 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 25 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 35 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 40 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 45 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 60 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18 и 19, при этом [AzK_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа, где группа PEG представляет собой группу метокси-PEG, линейную группу метокси-PEG или разветвленную группу метокси-PEG.

[0007] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 20-24, где [AzK_PEG5kD] имеет структуру формулы (II), или формулы (III), или смеси формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

; или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_PEG5kD] имеет структуру формулы (II),

формула (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором [AzK_PEG5kD] имеет структуру формулы (III),

[0008] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 25-29, где [AzK_PEG30kD] имеет структуру формулы (II) или формулы (III) или представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_PEG30kD] имеет структуру формулы (II),

[0009] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 15-19, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

X имеет структуру

; или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG] в конъюгате IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG] в конъюгате IL-2, составляет менее чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[0010] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 20-24, где [AzK_PEG5kD] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0011] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 25-29, где [AzK_PEG30kD] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0012] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 40-44, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV), или формулы (V), или смеси формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_L1_PEG] представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV),

формула (IV), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (V),

[0013] формула (V), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 15 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 25 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 35 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 40 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 45 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 60 кДа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей под SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43 и 44, при этом [AzK_L1_PEG] содержит группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа, где группа PEG представляет собой группу метокси-PEG, линейную группу метокси-PEG или разветвленную группу метокси-PEG.

[0014] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 45-49, где [AzK_L1_PEG5kD] имеет структуру формулы (IV), или формулы (V), или смеси формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

; или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, при этом [AzK_L1_PEG5kD] имеет структуру формулы (IV),

формула (V), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[0015] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 50-54, где [AzK_L1_PEG30kD] имеет структуру формулы (IV) или формулы (V) или представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором [AzK_L1_PEG30kD] имеет структуру формулы (IV),

формула (V), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[0016] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 40-44, где [Azk_L1_PEG] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

X имеет структуру

; или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG] в конъюгате IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG] в конъюгате IL-2, составляет менее чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[0017] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 45-49, где [AzK_L1_PEG5kD] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0018] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 50-54, где [AzK_L1_PEG30kD] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

[0019] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII),

формула (VI),

формула (VII),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

X имеет структуру , или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K34. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F41. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F43. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K42. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E61. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение P64. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение R37. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение T40. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E67. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение Y44. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение V68. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формул (VI) и (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (VI) к количеству структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (VI) к количеству структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (VI) к количеству структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0020] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546.

[0021] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, и 1249.

[0022] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0023] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0024] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0025] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтон до приблизительно 200000 дальтон, или от приблизительно 2000 дальтон до приблизительно 150000 дальтон, или от приблизительно 3000 дальтон до приблизительно 125000 дальтон, или от приблизительно 4000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 80000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 65000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 100000 дальтон, приблизительно 125000 дальтон, приблизительно 150000 дальтон, приблизительно 175000 дальтон или приблизительно 200000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VI) или (VII) или смесью (VI) и (VII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон или приблизительно 50000 дальтон.

[0026] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX),

формула (VIII),

формула (IX),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

X имеет структуру , или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K34. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F41. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F43. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K42. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E61. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение P64. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение R37. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение T40. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E67. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение Y44. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение V68. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формул (VIII) и (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (VIII) к количеству структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (VIII) к количеству структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (VIII) к количеству структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0027] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546.

[0028] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0029] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0030] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0031] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формулы (VIII) и (IX) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0032] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтон до приблизительно 200000 дальтон, или от приблизительно 2000 дальтон до приблизительно 150000 дальтон, или от приблизительно 3000 дальтон до приблизительно 125000 дальтон, или от приблизительно 4000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 80000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 65000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 100000 дальтон, приблизительно 125000 дальтон, приблизительно 150000 дальтон, приблизительно 175000 дальтон или приблизительно 200000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (VIII) или (IX) или смесью (VIII) и (IX), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон или приблизительно 50000 дальтон.

[0033] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI),

формула (X),

формула (XI),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями показаны ковалентные связи с аминокислотными остатками в SEQ ID NO: 3, которые не заменены, или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[0034] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает только (S).

[0035] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (X) и (XI) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (X) и (XI) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K34. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F41. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F43. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K42. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E61. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение P64. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение R37. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение T40. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E67. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение Y44. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение V68. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (X) и (XI) или смеси формул (X) и (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (X) к количеству структуры формулы (XI), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (X) к количеству структуры формулы (XI), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (X) к количеству структуры формулы (XI), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0036] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (VI) и (VII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546.

[0037] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (X) и (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0038] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (X) и (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0039] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (X) и (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0040] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (X) и (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0041] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтон до приблизительно 200000 дальтон, или от приблизительно 2000 дальтон до приблизительно 150000 дальтон, или от приблизительно 3000 дальтон до приблизительно 125000 дальтон, или от приблизительно 4000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 80000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 65000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 100000 дальтон, приблизительно 125000 дальтон, приблизительно 150000 дальтон, приблизительно 175000 дальтон или приблизительно 200000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (X) или (XI) или смесью (X) и (XI), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон или приблизительно 50000 дальтон.

[0042] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII),

формула (XII),

формула (XIII),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

[0043] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает только (S).

[0044] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K34. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F41. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F43. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K42. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E61. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение P64. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение R37. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение T40. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E67. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение Y44. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение V68. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XII) и (XIII) или смеси формул (XII) и (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XII) к количеству структуры формулы (XIII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XII) к количеству структуры формулы (XIII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XII) к количеству структуры формулы (XIII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0045] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546.

[0046] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0047] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0048] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0049] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XII) и (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0050] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтон до приблизительно 200000 дальтон, или от приблизительно 2000 дальтон до приблизительно 150000 дальтон, или от приблизительно 3000 дальтон до приблизительно 125000 дальтон, или от приблизительно 4000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 80000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 65000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 100000 дальтон, приблизительно 125000 дальтон, приблизительно 150000 дальтон, приблизительно 175000 дальтон или приблизительно 200000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XII) или (XIII) или смесью (XII) и (XIII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон или приблизительно 50000 дальтон.

[0051] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV),

формула (XIV),

формула (XV),

где

m представляет собой целое число от 0 до 20;

p представляет собой целое число от 0 до 20;

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

[0052] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает только (S).

[0053] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) составляет от 0 до 20, или от 0 до 18, или от 0 до 16, или от 0 до 14, или от 0 до 12, или от 0 до 10, или от 0 до 9, или от 0 до 8, или от 0 до 7, или от 0 до 6, или от 0 до 5, или от 0 до 4, или от 0 до 3, или от 0 до 2. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 0. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 2. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 4. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 5. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 6. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 7. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 8. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 9. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 10. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 11. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 12. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 13. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 14. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 15. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 16. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 17. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 18. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 19. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 20.

[0054] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) составляет от 0 до 20, или от 0 до 18, или от 0 до 16, или от 0 до 14, или от 0 до 12, или от 0 до 10, или от 0 до 9, или от 0 до 8, или от 0 до 7, или от 0 до 6, или от 0 до 5, или от 0 до 4, или от 0 до 3, или от 0 до 2. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 0. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 2. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 4. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 5. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 6. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 7. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 8. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 9. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 10. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 11. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 12. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 13. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 14. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 15. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 16. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 17. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 18. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 19. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором p в соединениях формул (XIV) и (XV) равняется 20.

[0055] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575.

[0056] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m представляет собой целое число от 0 до 6, p представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m представляет собой целое число от 1 до 6, p представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m представляет собой целое число от 2 до 6, p представляет собой целое число от 2 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m представляет собой целое число от 2 до 4, p представляет собой целое число от 2 до 4, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 1, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 3, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 4, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 5, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 6, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 7, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 8, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 9, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 10, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 11, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 11, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137.

[0057] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K34. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F41. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F43. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K42. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E61. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение P64. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение R37. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение T40. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E67. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение Y44. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение V68. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XIV) и (XV) или смеси формул (XIV) и (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XIV) к количеству структуры формулы (XV), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XIV) к количеству структуры формулы (XV), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XIV) к количеству структуры формулы (XV), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0058] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546.

[0059] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0060] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0061] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0062] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XIV) и (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0063] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтон до приблизительно 200000 дальтон, или от приблизительно 2000 дальтон до приблизительно 150000 дальтон, или от приблизительно 3000 дальтон до приблизительно 125000 дальтон, или от приблизительно 4000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 80000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 65000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 100000 дальтон, приблизительно 125000 дальтон, приблизительно 150000 дальтон, приблизительно 175000 дальтон или приблизительно 200000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон или приблизительно 50000 дальтон.

[0064] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, m представляет собой целое число от 0 до 6, p представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0065] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где m представляет собой целое число от 0 до 6, p представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0066] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где m представляет собой целое число от 0 до 6, p представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0067] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XIV) или (XV) или смесью (XIV) и (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где m представляет собой целое число от 0 до 6, p представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XIV) и (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0068] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII),

формула (XVI),

формула (XVII),

где

m представляет собой целое число от 0 до 20;

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

[0069] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает только (S).

[0070] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) составляет от 0 до 20, или от 0 до 18, или от 0 до 16, или от 0 до 14, или от 0 до 12, или от 0 до 10, или от 0 до 9, или от 0 до 8, или от 0 до 7, или от 0 до 6, или от 0 до 5, или от 0 до 4, или от 0 до 3, или от 0 до 2. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 0. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 2. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 4. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 5. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 6. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 7. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 8. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 9. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 10. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 11. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 12. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 13. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 14. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 15. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 16. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 17. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 18. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 19. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором m в соединениях формул (XVI) и (XVII) равняется 20.

[0071] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575.

[0072] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m представляет собой целое число от 2 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m представляет собой целое число от 2 до 4, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 1, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 3, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 4, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 5, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 7, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 8, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 9, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 10, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 11, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 12, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137.

[0073] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 выбрано из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K34. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F41. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение F43. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение K42. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E61. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение P64. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение R37. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение T40. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение E67. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение Y44. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение V68. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором положение структуры формул (XVI) и (XVII) или смеси формул (XVI) и (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 под SEQ ID NO: 3 представляет собой положение L71. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XVI) к количеству структуры формулы (XVII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XVI) к количеству структуры формулы (XVII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет более чем 1:1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором отношение количества структуры формулы (XVI) к количеству структуры формулы (XVII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-2, составляет менее чем 1:1.

[0074] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68 и L71, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, и 4546.

[0075] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0076] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0077] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0078] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором n в соединениях формул (XVI) и (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0079] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтон до приблизительно 200000 дальтон, или от приблизительно 2000 дальтон до приблизительно 150000 дальтон, или от приблизительно 3000 дальтон до приблизительно 125000 дальтон, или от приблизительно 4000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 80000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 70000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 65000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон, или от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 7000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 8500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 9500 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 15000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 50000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 45000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 40000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 35000 дальтон, или от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 30000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 100000 дальтон, приблизительно 125000 дальтон, приблизительно 150000 дальтон, приблизительно 175000 дальтон или приблизительно 200000 дальтон. В данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента PEG составляет приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон или приблизительно 50000 дальтон.

[0080] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из F41, F43, K42, E61 и P64, m представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[0081] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, выбран из E61 и P64, и где m представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[0082] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой E61, и где m представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0083] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (XVI) или (XVII) или смесью (XVI) и (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 3, который заменен, представляет собой P64, и где m представляет собой целое число от 0 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, в котором в соединениях формул (XVI) и (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[0084] В данном документе описаны фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество IL-конъюгата, описанного в данном документе, и одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

[0085] В данном документе описаны способы лечения рака у субъекта, включающие введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-2, описанного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, рак у субъекта выбран из почечноклеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), классической лимфомы Ходжкина (cHL), первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы (PMBCL), уротелиальной карциномы, рака с микросателлитной нестабильностью, рака с микросателлитной стабильностью, рака желудка, рака шейки матки, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), меланомы, мелкоклеточного рака легкого (SCLC), эзофагеального, глиобластомы, мезотелиомы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака предстательной железы, кастрационно-резистентного рака предстательной железы, метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы, метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы с дефектами ответа на повреждение ДНК (DDR), рака мочевого пузыря, рака яичника, опухолей со средней или низкой мутационной нагрузкой, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC), плоскоклеточного рака кожи (SCSC), опухолей с низким уровнем экспрессии PD-L1 или без таковой, опухолей, распространяющихся системно в печень и CNS за пределы их первичного анатомического участка происхождения, и диффузной В-крупноклеточной лимфомы. В данном документе описаны способы лечения рака у субъекта, включающие введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-2, описанного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, рак у субъекта представляет собой холангиокарциному. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, рак у субъекта выбран из почечноклеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), уротелиальной карциномы и меланомы. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в 4 недели, один раз в 5 недель, один раз в 6 недель, один раз в 7 недель или один раз в 8 недель. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю или один раз в две недели. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в две недели. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 2, степени 3 или степени 4 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 2 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 3 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 4 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к потере сосудистого тонуса у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к экстравазации белков плазмы и жидкости во внесосудистое пространство у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к развитию гипотонии и снижения перфузии органа у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к нарушению функции нейтрофилов у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не не приводит к снижению хемотаксиса в организме субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не ассоциировано с повышенным риском диссеминированной инфекции у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, диссеминированная инфекция представляет собой сепсис или бактериальный эндокардит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, диссеминированная инфекция представляет собой сепсис. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, диссеминированная инфекция представляет собой бактериальный эндокардит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, субъекта лечат от любых предшествующих бактериальных инфекций перед введением конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, субъекта лечат антибактериальным средством, выбранным из оксациллина, нафциллина, ципрофлоксацина и ванкомицина, перед введением конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не усугубляет проявлений уже существующего или возникшего впервые аутоиммунного заболевания или воспалительного нарушения у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не усугубляет проявлений уже существующего или возникшего впервые аутоиммунного заболевания аутоиммунного заболевания у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не усугубляет проявлений уже существующего или возникшего впервые воспалительного нарушения у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта выбрано из болезни Крона, склеродермии, тироидита, воспалительного артрита, сахарного диабета, окулобульбарной миастении гравис, серповидного IgA-гломерулонефрита, холецистита, церебрального васкулита, синдрома Стивенса-Джонсона и буллезного пемфигоида. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой болезнь Крона. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой склеродермию. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой тироидит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой воспалительный артрит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой сахарный диабет. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой окулобульбарную миастению гравис. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой серповидный серповидный IgA-гломерулонефрит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой холецистит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой церебральный васкулит. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой синдром Стивенса-Джонсона. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой буллезный пемфигоид. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению изменений психического статуса, затруднения речи, корковой слепоты, атаксии конечностей или нескоординированной походки, галлюцинаций, возбуждения, заторможенности или комы у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению судорог у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, имеющим подтвержденное судорожное нарушение. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров степени 2, степени 3 или степени 4 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров степени 2 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров степени 3 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров степени 4 у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к снижению среднего артериального давления крови у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению гипотонии у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит у субъекта к снижению систолического давления крови ниже 90 мм рт. ст. или к снижению на 20 мм рт. ст. от исходного систолического давления после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению отека у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к нарушению функции почек или печени у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению эозинофилии у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 500 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 500 на мкл - 1500 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 1500 на мкл - 5000 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 5000 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые уже проходят курс лечения психотропными лекарственными средствами.

[0086] В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые уже проходят курс лечения нефротоксическими, миелотоксическими, кардиотоксическими или гепатотоксическими лекарственными средствами. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые уже проходят курс лечения аминогликозидами, с использованием цитотоксической химиотерапии, доксорубицином, метотрексатом или аспарагиназой. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые проходят курсы лечения комбинированными препаратами, содержащими противоопухолевые средства. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, противоопухолевое средство выбрано из дакарбазина, цисплатина, тамоксифена и интерферона-альфа. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений степени 4 у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, одно или несколько нежелательных явлений степени 4 выбраны из гипотермии, шока, брадикардии, желудочковой экстрасистолии, ишемии миокарда, обморока, кровоизлияния, предсердной аритмии, флебита, AV-блокады второй степени, эндокардита, выпота в перикард, периферической гангрены, тромбоза, нарушения коронарной артерии, стоматита, тошноты и рвоты, отклонения от нормы биохимических показателей функции печени, желудочно-кишечного кровоизлияния, гематемезиса, геморрагического поноса, желудочно-кишечного нарушения, прободения кишечника, панкреатита, анемии, лейкопении, лейкоцитоза, гипокальцемии, повышения уровня щелочной фосфатазы, повышения концентрации азота мочевины в крови (BUN), гиперурикемии, повышения небелкового азота (NPN), респираторного ацидоза, сонливости, возбуждения, нейропатии, параноидной реакции, судороги, большого эпилептического припадка, делирия, астмы, отека легких, гипервентиляции, гипоксии, кровохаркания, гиповентиляции, пневмоторакса, мидриаза, нарушения функции зрачков, нарушения функции почек, почечной недостаточности и острого канальцевого некроза. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 группе субъектов не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений степени 4 у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-2 субъектам. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, одно или несколько нежелательных явлений степени 4 выбраны из гипотермии, шока, брадикардии, желудочковой экстрасистолии, ишемии миокарда, обморока, кровоизлияния, предсердной аритмии, флебита, AV-блокады второй степени, эндокардита, выпота в перикард, периферической гангрены, тромбоза, нарушения коронарной артерии, стоматита, тошноты и рвоты, отклонения от нормы биохимических показателей функции печени, желудочно-кишечного кровоизлияния, гематемезиса, геморрагического поноса, желудочно-кишечного нарушения, прободения кишечника, панкреатита, анемии, лейкопении, лейкоцитоза, гипокальцемии, повышения уровня щелочной фосфатазы, повышения концентрации азота мочевины в крови (BUN), гиперурикемии, повышения небелкового азота (NPN), респираторного ацидоза, сонливости, возбуждения, нейропатии, параноидной реакции, судороги, большого эпилептического припадка, делирия, астмы, отека легких, гипервентиляции, гипоксии, кровохаркания, гиповентиляции, пневмоторакса, мидриаза, нарушения функции зрачков, нарушения функции почек, почечной недостаточности и острого канальцевого некроза. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 группе субъектов не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-2 субъектам, где одно или несколько нежелательных явлений выбраны из язвы двенадцатиперстной кишки, некроза кишечника, миокардита, суправентрикулярной тахикардии, постоянной или проходящей слепоты, вторичной по отношению к невриту зрительного нерва, транзиторной ишемической атаки, менингита, церебрального отека, перикардита, аллергического интерстициального нефрита и трахеопищеводной фистулы. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 группе субъектов не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-2 субъектам, где одно или несколько нежелательных явлений выбраны из злокачественной гипертермии, остановки сердца, инфаркта миокарда, легочной эмболии, инсульта, прободения кишечника, печеночной или почечной недостаточности, тяжелой депрессии, приводящей к суициду, легочного отека, остановки дыхания, дыхательной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к продуцированию нейтрализующих антител к конъюгату IL-2. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение конъюгата IL-2 субъекту обеспечивает повышение количества периферических CD8+ T- и NK-клеток у субъекта без повышения количества периферических CD4+ регуляторных T-клеток у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение конъюгата IL-2 субъекту обеспечивает повышение количества периферических CD8+ T- и NK-клеток у субъекта без повышения количества периферических эозинофилов у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение конъюгата IL-2 субъекту обеспечивает повышение количества внутриопухолевых CD8+ T- и NK-клеток у субъекта без повышения количества внутриопухолевых CD4+ регуляторных T-клеток у субъекта. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не требует наличия отделения интенсивной терапии или квалифицированных специалистов в области сердечно-легочной медицины или интенсивной терапии. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не требует наличия отделения интенсивной терапии. В некоторых вариантах осуществления способа лечения рака, описанного в данном документе, введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не требует наличия квалифицированных специалистов в области сердечно-легочной медицины или интенсивной терапии.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0087] Новые признаки настоящего изобретения конкретно изложены в прилагаемой формуле изобретения. Признаки и преимущества настоящего изобретения станут более понятными из следующего подробного описания, в котором изложены иллюстративные варианты осуществления, в которых используются принципы настоящего изобретения, и прилагаемых графических материалов.

[0088] На фиг. 1 показаны иллюстративные неприродные аминокислоты. Эта фиг. адаптирована из фиг. 2 из Young et al., "Beyond the canonical 20 amino acids: expanding the genetic lexicon," J. of Biological Chemistry 285(15): 11039-11044 (2010).

[0089] На фиг. 2A - фиг. 2B показаны иллюстративные неприродные аминокислоты. На фиг. 2A показаны иллюстративные производные лизина. На фиг. 2B показаны иллюстративные производные фенилаланина.

[0090] На фиг. 3A-фиг. 3D показаны иллюстративные неприродные аминокислоты. Эти неприродные аминокислоты (UAA) генетически закодированы в белках (фиг. 3A - UAA № 1-42; фиг. 3B - UAA № 43-89; фиг. 3C - UAA № 90-128; фиг. 3D - UAA № 129-167). Фиг. 3A-3D адаптированы из таблицы 1 из Dumas et al., Chemical Science 2015, 6, 50-69.

[0091] На фиг. 4A-фиг. 4C показан анализ поверхностного плазмонного резонанса (SPR) нативных конъюгатов IL-2, P65_30 кДа, P65_5 кДа, E62_30 кДа, E62_5 кДа и F42_30 кДа PEG. На фиг. 4A показан анализ SPR вариантов IL-2, связывающихся с иммобилизированным IL-2 Rα. На фиг. 4B показан анализ SPR вариантов IL-2, связывающихся с иммобилизированным IL-2 Rβ. На фиг. 4C показан анализ SPR рекомбинантного IL-2 и варианта IL-2 F42_30 кДа, связывающихся с иммобилизированным IL-2 Rα и IL-2 Rβ.

[0092] На фиг. 5A-фиг. 5F показана иллюстративная кривая зависимости доза-ответ для варианта IL-2 для передачи сигнала pSTAT5 в популяциях первичных клеток LRS человека. Фиг. 5A: нативный IL-2; фиг. 5B: P65_30 кДа; фиг. 5C: K64_30 кДа; фиг. 5D: K43_30 кДа; фиг. 5E: K35_30 кДа, и фиг. 5F: F42_30 кДа.

[0093] На фиг. 6A-C показано, что PEG и замена остатков способствуют фармакологии вариантов IL-2 без альфа-цепи. Фиг. 6A: нативный IL-2; фиг. 6B: E62K; фиг. 6C: E62_30 кДа.

[0094] На фиг. 7 показано, что фармакология вариантов IL-2 без альфа-цепи не зависит от размера PEG.

[0095] На фиг. 8 показаны профили изменения среднего (± SD) концентрации в плазме крови cо временем после введения однократной внутривенной болюсной дозы альдеслейкина (IL-2), E62_5, E62_30 и P65_30 мышам C57BL/6.

[0096] На фиг. 9 показано изменение процентного содержания pSTAT5+ CD8+ Т-клеток в зависимости от времени среди клеток периферической крови после обработки с помощью введения однократной внутривенной болюсной дозы P65_30 или альдеслейкина мышам C57BL/6.

[0097] На фиг. 10A - фиг. 10C показано процентное содержание CD8+ Т-клеток (фиг. 10A), NK-клеток (фиг. 10B) и CD4+ Treg-клеток (фиг. 10C) в популяции PBMC после обработки с помощью однократной внутривенной болюсной дозы P65_30 или альдеслейкина (IL-2). Кровь отбирали посредством пункции сердца в указанные моменты времени, и популяцию иммунных клеток оценивали с помощью проточной цитометрии. Каждая точка данных представляет собой среднее значение для 3 повторностей в каждый момент времени ± SEM.

[0098] На фиг. 11A - фиг. 11B показаны различия между P65_30 и IL-2 (альдеслейкином) при стимуляции пролиферации CD8+CD44+ T-клеток памяти в популяции CD3+ клеток после обработки с помощью однократной внутривенной болюсной дозы P65_30 или альдеслейкина (IL-2). Кровь отбирали посредством пункции сердца в указанные моменты времени, и популяцию иммунных клеток оценивали с помощью проточной цитометрии. Данные анализировали с использованием непарного t-критерия Стьюдента *** Означает P-значения < 0,001. На фиг. 11A показана пролиферация CD8+ CD44+ T-клеток памяти через 72, 96 и 120 часов. На фиг. 11B показан результат анализа методом проточной цитометрии этих клеток в момент времени 120 ч.

[0099] На фиг. 12A - фиг. 12B показано повышение уровня инфильтрующих опухоль лимфоцитов (TIL) в зависимости от времени у мышей C57Bl6, несущих сингенные опухоли B16F10, после обработки с помощью однократной внутривенной болюсной дозы P65_30. На фиг. 12A показано процентное содержание NK-, CD8+ T- и CD4+ Treg-клеток у животных, которых обрабатывали с помощью P65_30, по сравнению с таковым у животных, которых не обрабатывали (среда-носитель) в день 5 обработки. На фиг. 12B показано соотношение CD8+/CD4+ Treg-клеток у животных, которых обрабатывали с помощью P65_30 и контроля (среды-носителя). Данные анализировали с использованием непарного t-критерия Стьюдента *** Означает P-значения < 0,001.

[00100] На фиг. 13A - фиг. 13B показаны уровни IL-2, TNF-α, IFNγ, IL-5 и IL-6 в плазме крови мыши после обработки с помощью однократной внутривенной болюсной дозы P65_30 или альдеслейкина (IL-2) при повышающихся уровнях (0,01-5 мг/кг). Концентрацию каждого цитокина в плазме крови определяли посредством ELISA (Abcam, Кембридж, Великобритания). Для каждой дозы мышей группировали N=3 и образцы собирали через 4, 34 и 72 часа после введения дозы. На фиг. 13A показаны уровни цитокина для животных, которым вводили дозу альдеслейкина, а на фиг. 13B - для животных, которым вводили дозу P65_30.

[00101] На фиг. 14 показаны количества белых кровяных клеток, лимфоцитов и эозинофилов (среднее ± SD) после введения однократной внутривенной дозы P65_30 кДа самцам яванских макак.

[00102] На фиг. 15A - фиг. 15B показаны кривые зависимости доза-ответ иллюстративного варианта IL-2 для передачи сигнала pSTAT5 в первичной клетке человека, полученной с помощью LRS (фиг. 15A), и ответ в виде пролиферации в популяциях CTLL-2 мыши (фиг. 15B).

[00103] На фиг. 16A - фиг. 16B показано, что соединения PEG IL-2 могут специфически увеличивать популяции иммунных клеток ex vivo в первичных лимфоцитах по сравнению с нормальным контролем IL-2. На фиг. 16A показана экспансия иммунных клеток после обработки с помощью IL-2 (контроля). На фиг. 16B показана экспансия иммунных клеток после обработки с помощью P65_30 кДа.

[00104] На фиг. 17A - фиг. 17B показаны сенсограммы ответов связывания для rhIL-2 (рекомбинантного интерлейкина-2, фиг. 17A) и синтетического конъюгата IL-2_P65[AzK_L1_PEG 30 кДа]-1 (фиг. 17B) на поверхностях альфа-цепи IL-2R. Не выявляли существенный ответ связывания для IL-2_P65[AzK_L1_PEG 30 кДа]-1 при данных условиях.

[00105] На фиг. 17C - фиг. 17D показаны сенсограммы связывания образцов rhIL-2 (рекомбинантного интерлейкина-2 человека, фиг. 17C) и синтетического конъюгата IL-2_P65[AzK_L1_PEG 30 кДа]-1 (фиг. 17D) с поверхностями бета-цепей IL-2R.

[00106] На фиг. 18 показана стратегия гейтирования для сортирования клеток в отношении Treg с помощью проточной цитометрии. Клетки сначала гейтировали по синглетам с использованием FSC-A с помощью FSC-H, чтобы исключить любые агрегаты или дублеты (гейт синглетов 1^-я панель). В данном гейте клетки гейтировали по среднему - высокому прямому рассеянию (FSC-A) и боковому рассеянию (SSC-A), чтобы исключить красные кровяные клетки, дебрис и гранулоциты (гейт лимфоцитов, 2^-я панель). Затем Т-клетки гейтировали как CD3+, CD56/16-негативную популяцию, 3^-я панель. NK-клетки идентифицировали как CD3-негативную, CD56/16-высокую популяцию, 3^-я панель. Затем Т-клетки сортировали на CD4+ Т-клетки и CD8+ Т-клетки (4^ая панель). Затем Treg гейтировали из CD4+ Т-клеток как CD25^{высокую} x C127^низкую популяцию, 5^-я панель.

[00107] На фиг. 19 показана стабильность соединения IL-2_P65 [AzK_L1_PEG 30 кДа]-1 в сыворотке крови человека при трех концентрациях до 168 часов, что описано в примере 15.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[00108] Цитокины включают семейство белков передачи сигналов в клетке, таких как хемокины, интерфероны, интерлейкины, лимфокины, факторы некроза опухоли и другие факторы роста, участвующие в гомеостазе врожденных и адаптивных иммунных клеток. Цитокины продуцируются клетками иммунной системы, такими как макрофаги, В-лимфоциты, Т-лимфоциты и тучные клетки, эндотелиальными клетками, фибробластами и различными стромальными клетками. В некоторых случаях цитокины модулируют баланс между гуморальным и клеточным иммунными ответами.

[00109] Интерлейкины представляют собой сигнальные белки, которые модулируют развитие и дифференцировку Т- и В-лимфоцитов, клеток моноцитарной линии дифференцировки, нейтрофилов, базофилов, эозинофилов, мегакариоцитов и гемопоэтических клеток. Интерлейкины продуцируются хелперными CD4 Т- и В-лимфоцитами, моноцитами, макрофагами и эндотелиальными клетками и другими тканевыми резидентами.

[00110] Интерлейкин 2 (IL-2) представляет собой плейотропный цитокин 1 типа, структура которого содержит пучок из четырех α-спиралей с молекулярной массой 15,5 кДа. Форма-предшественник IL-2 имеет длину 153 аминокислотных остатка, при этом первые 20 аминокислот образуют сигнальный пептид, а остатки 21-153 образуют зрелую форму. IL-2 продуцируется главным образом CD4+ T-клетками после стимуляции антигеном и в меньшей степени CD8+ клетками, натуральными киллерными (NK) клетками и натуральными киллерными (NKT) Т-клетками, активированными дендритными клетками (DC) и тучными клетками. Передача сигнала IL-2 происходит посредством взаимодействия со специфическими комбинациями субъединиц рецептора IL-2 (IL-2R), IL-2Rα (также известного как CD25), IL-2Rβ (также известного как CD122) и IL-2Rγ (также известного как CD132). Взаимодействие IL-2 с IL-2Rα образует комплекс рецептора IL-2 "с низкой аффинностью" с K_d, составляющей приблизительно 10^-8 M. Взаимодействие IL-2 с IL-2Rβ и IL-2Rγ образует комплекс рецептора IL-2 "с промежуточной аффинностью" с K_d, составляющей приблизительно 10^-9 M. Взаимодействие IL-2 со всеми тремя субъединицами IL-2Rα, IL-2Rβ и IL-2Rγ образует комплекс рецептора IL-2 "с высокой аффинностью" с K_d, составляющей приблизительно >10^-11 M.

[00111] В некоторых случаях передача сигнала IL-2 посредством комплекса IL-2Rαβγ "с высокой аффинностью" модулирует активацию и пролиферацию регуляторных Т-клеток. Регуляторные Т-клетки или CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ регуляторные T-клетки (Treg) опосредуют поддержание иммунного гомеостаза путем подавления эффекторных клеток, таких как CD4⁺ Т-клетки, CD8⁺ Т-клетки, В-клетки, NK-клетки и NKT-клетки. В некоторых случаях Treg-клетки образуются в тимусе (tTreg-клетки) или индуцируется их образование из Т-клеток, не подвергавшихся воздействию, на периферии (pTreg-клетки). В некоторых случаях Treg-клетки считаются медиатором периферической толерантности. И действительно, в одном исследовании перенос CD25-истощенных периферических CD4⁺ Т-клеток вызывал ряд аутоиммунных заболеваний у "голых" мышей, тогда как совместный перенос CD4⁺CD25⁺ Т-клеток подавлял развитие аутоиммунитета (Sakaguchi, et al., "Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25)," J. Immunol. 155(3): 1151-1164 (1995)). Увеличение популяции Treg-клеток подавляет пролиферацию эффекторных Т-клеток и подавляет аутоиммунные и противоопухолевые ответы Т-клеток.

[00112] Передача сигнала IL-2 через комплекс IL-2Rβγ "с промежуточной аффинностью" модулирует активацию и пролиферацию CD8⁺ эффекторных T-клеток (Teff), NK-клеток и NKT-клеток. CD8⁺ Teff-клетки (также известные как цитотоксические Т-клетки, Тс-клетки, цитотоксические Т-лимфоциты, CTL, Т-киллерные клетки, цитолитические Т-клетки, Tcon или Т-клетки-киллеры) представляют собой Т-лимфоциты, которые распознают и уничтожают поврежденные клетки, раковые клетки и клетки, инфицированные патогенами. NK- и NKT-клетки представляют собой типы лимфоцитов, которые, подобно CD8⁺ Teff-клеткам, нацеливаются на раковые клетки и клетки, инфицированные патогенами.

[00113] В некоторых случаях передача сигнала IL-2 используется для модуляции ответов Т-клеток, и, следовательно, для лечения рака. Например, IL-2 вводят в высоких дозах, чтобы вызвать экспансию популяций Teff-клеток для лечения рака. Однако высокие дозы IL2, кроме того, приводят к сопутствующей стимуляции Treg-клеток, которые ослабляют противоопухолевые иммунные ответы. Высокие дозы IL-2 также вызывают токсические нежелательные явления, опосредованные вовлечением клеток, экспрессирующих альфа-цепь IL-2R, в сосудистую сеть, включая врожденные иммунные клетки 2 типа (ILC-2), эозинофилы и эндотелиальные клетки. Это приводит к эозинофилии, повышенной проницаемости капилляров и синдрому повышенной проницаемости сосудов VLS).

[00114] Терапия на основе адоптивных клеток позволяет врачам эффективно использовать собственные иммунные клетки пациента для борьбы с такими заболеваниями, как пролиферативное заболевание (например, рак), а также с инфекционным заболеванием. В одном неограничивающем примере Т-лимфоциты могут быть взяты у пациента, реконструированы для нацеливания на конкретный антиген на поверхности злокачественных клеток и повторно введены в организм пациента для специфического нацеливания на злокачественные клетки. Кроме того, виды терапии на основе адоптивных клеток обеспечивают устойчивый ответ в организме, сигнализируя иммунным клеткам о росте и делении спустя долгое время после повторного введения реконструированных клеток в иммунную систему пациента.

[00115] В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе раскрывается способ селективной активации отдельной (отдельных) популяции (популяций) лимфоцитов (например, CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, NK-клеток или NKT-клеток) посредством передачи сигналов цитокин/цитокиновый рецептор. В некоторых случаях цитокин предусматривает интерлейкин, интерферон или фактор некроза опухоли. В некоторых случаях цитокин представляет собой конъюгат цитокина, например, конъюгат интерлейкина, конъюгат интерферона или конъюгат фактора некроза опухоли. В дополнительных случаях в данном документе описаны фармацевтические композиции и наборы, содержащие один или несколько конъюгатов цитокина, описанных в данном документе.

[00116] В некоторых вариантах осуществления в данном документе также описан способ селективной активации популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, NK-клеток и/или NKT-клеток посредством передачи сигналов IL-2/IL-2R. В некоторых случаях IL-2 является конъюгатом IL-2, который взаимодействует с комплексом IL-2Rβγ "с промежуточной аффинностью", необязательно с такой же эффективностью, что и комплекс IL-2Rαβγ, и с ослабленным взаимодействием IL-2Rα по сравнению с IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления, кроме того, в данном документе описаны способы лечения рака с применением конъюгата IL-2, описанного в данном документе. В дополнительных вариантах осуществления в данном документе описаны фармацевтические композиции и наборы, которые содержат один или несколько конъюгатов IL-2, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2 содержат конъюгирующие фрагменты (например, PEG), которые способствуют увеличению или уменьшению "скорости клиренса" или периода полужизни в плазме крови у субъекта, не влияя на фармакокинетику, включая желаемые взаимодействия цитокин-рецептор и экспансию иммунных клеток.

[00117] В некоторых вариантах осуществления в данном документе раскрываются реагенты, которые можно использовать для разработки терапевтических средств на основе адоптивных клеток, предусматривающих клетки, сконструированные для экспрессии модифицированных цитокинов, которые приводят к селективным взаимодействиям цитокин-рецептор и экспансии иммунных клеток. В некоторых вариантах осуществления реагенты содержат конструкцию на основе нуклеиновой кислоты, кодирующую конъюгаты IL-2, описанные выше. Также раскрываются терапевтические средства на основе адоптивных клеток, содержащие конъюгаты IL-2, описанные выше, которые могут быть применимы для лечения пролиферативного или инфекционного заболевания, описанного в данном документе.

[00118] В некоторых вариантах осуществления в данном документе раскрываются композиции, которые приводят к селективным взаимодействиям цитокин-рецептор и экспансии иммунных клеток. В некоторых вариантах осуществления реагенты содержат конструкцию на основе нуклеиновой кислоты, кодирующую конъюгаты IL-2, описанные выше. Также раскрываются фармацевтические композиции, содержащие конъюгаты IL-2, описанные выше, которые могут быть применимы для лечения пролиферативного или инфекционного заболевания, описанного в данном документе.

Конъюгаты цитокина

[00119] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты цитокина. В некоторых случаях цитокин предусматривает интерлейкины, фактор некроза опухоли, интерферон, хемокин, лимфокин или фактор роста. В некоторых случаях цитокин представляет собой интерлейкин. В некоторых случаях цитокин представляет собой интерферон. В дополнительных случаях цитокин представляет собой фактор некроза опухоли. В других случаях цитокин представляет собой фактор роста.

[00120] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат интерлейкина. Иллюстративные интерлейкины включают без ограничения интерлейкин 2 (IL-2).

Конъюгаты IL-2

[00121] В данном документе описаны полипептиды, показанные в таблице 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2, описанные в данном документе, представлены в качестве примера в таблице 20.

[00122] Таблица 20

Название Последовательность SEQ ID NO: IL-2
(Homo sapiens)
(зрелая форма) APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT 1 IL-2
(Homo sapiens)
(предшественник)
№ доступа в NCBI: AAB46883.1 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT 2 альдеслейкин PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 3 IL-2_C125S APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 4 IL-2_P65X APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKXLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 5 IL-2_E62X APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEXLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 6 IL-2_F42X APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTXKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 7 IL-2_K43X APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFXFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 8 IL-2_K35X APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPXLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 9 IL-2_P65[AzK] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 10 IL-2_E62[AzK] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 11 IL-2_F42[AzK] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 12 IL-2_K43[AzK] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 13 IL-2_K35[AzK] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 14 IL-2_P65[AzK_PEG] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_PEG]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 15 IL-2_E62[AzK_PEG] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_PEG]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 16 IL-2_F42[AzK_PEG] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_PEG]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 17 IL-2_K43[AzK_PEG] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_PEG]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 18 IL-2_K35[AzK_PEG] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_PEG]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 19 IL-2_P65[AzK_PEG5kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_PEG5kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 20 IL-2_E62[AzK_PEG5kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_PEG5kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 21 IL-2_F42[AzK_PEG5kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_PEG5kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 22 IL-2_K43[AzK_PEG5kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_PEG5kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 23 IL-2_K35[AzK_PEG5kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_PEG5kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 24 IL-2_P65[AzK_PEG30kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_PEG30kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 25 IL-2_E62[AzK_PEG30kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_PEG30kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 26 IL-2_F42[AzK_PEG30kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_PEG30kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 27 IL-2_K43[AzK_PEG30kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_PEG30kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 28 IL-2_K35[AzK_PEG30kD] APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_PEG30kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 29 IL-2_P65X-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKXLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 30 IL-2_E62X-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEXLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 31 IL-2_F42X-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTXKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 32 IL-2_K43X-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFXFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 33 IL-2_K35X-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPXLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 34 IL-2_P65[AzK]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 35 IL-2_E62[AzK]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 36 IL-2_F42[AzK]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 37 IL-2_K43[AzK]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 38 IL-2_K35[AzK]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 39 IL-2_P65[AzK_L1_PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_L1_PEG]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 40 IL-2_E62[AzK_ L1_PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_L1_PEG]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 41 IL-2_F42[AzK_ L1_PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_L1_PEG]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 42 IL-2_K43[AzK_ L1_PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_L1_PEG]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 43 IL-2_K35[AzK_ L1_PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_L1_PEG]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 44 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_L1_PEG5kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 45 IL-2_E62[AzK_ L1_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_L1_PEG5kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 46 IL-2_F42[AzK_ L1_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_L1_PEG5kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 47 IL-2_K43[AzK_ L1_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_L1_PEG5kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 48 IL-2_K35[AzK_ L1_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_L1_PEG5kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 49 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_L1_PEG30kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 50 IL-2_E62[AzK_ L1_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_L1_PEG30kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 51 IL-2_F42[AzK_ L1_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_L1_PEG30kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 52 IL-2_K43[AzK_ L1_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_L1_PEG30kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 53 IL-2_K35[AzK_ L1_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_L1_PEG30kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 54 IL-2_P65[AzK_L1_PEG]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_L1_PEG]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 55 IL-2_E62[AzK_ L1_PEG]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_L1_PEG]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 56 IL-2_F42[AzK_ L1_PEG]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_L1_PEG]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 57 IL-2_K43[AzK_ L1_PEG]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_L1_PEG]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 58 IL-2_K35[AzK_ L1_PEG]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_L1_PEG]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 59 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG5kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_L1_PEG5kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 60 IL-2_E62[AzK_ L1_PEG5kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_L1_PEG5kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 61 IL-2_F42[AzK_ L1_PEG5kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_L1_PEG5kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 62 IL-2_K43[AzK_ L1_PEG5kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_L1_PEG5kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 63 IL-2_K35[AzK_ L1_PEG5kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_L1_PEG5kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 64 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_L1_PEG30kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 65 IL-2_E62[AzK_ L1_PEG30kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_L1_PEG30kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 66 IL-2_F42[AzK_ L1_PEG30kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_L1_PEG30kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 67 IL-2_K43[AzK_ L1_PEG30kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_L1_PEG30kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 68 IL-2_K35[AzK_ L1_PEG30kD]-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_L1_PEG30kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 69 IL-2_P65[AzK_PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_PEG]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 70 IL-2_E62[AzK_ PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_PEG]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 71 IL-2_F42[AzK_ PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_PEG]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 72 IL-2_K43[AzK_ PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_PEG]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 73 IL-2_K35[AzK_ PEG]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_PEG]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 74 IL-2_P65[AzK_ PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_PEG5kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 75 IL-2_E62[AzK_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_PEG5kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 76 IL-2_F42[AzK_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_PEG5kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 77 IL-2_K43[AzK_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_PEG5kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 78 IL-2_K35[AzK_PEG5kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_PEG5kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 79 IL-2_P65[AzK_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK[AzK_PEG30kD]LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 80 IL-2_E62[AzK_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE[AzK_PEG30kD]LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 81 IL-2_F42[AzK_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK_PEG30kD]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 82 IL-2_K43[AzK_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF[AzK_PEG30kD]FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 83 IL-2_K35[AzK_PEG30kD]-1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[AzK_PEG30kD]LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT 84

X=сайт, содержащий неприродную аминокислоту.

[AzK] = N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (структура которого раскрывается как соединение 90 на фиг. 3C). Соединение имеет регистрационный номер по реферативному журналу "Chemical Abstracts" 1167421-25-1.

[AzK_PEG] = N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно конъюгированный с PEG с помощью DBCO-опосредованной клик-химии с образованием соединения, содержащего структуру формулы (II) или формулы (III). Например, если указано, PEG 5 кДа обозначает линейную цепь полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 5-килодальтон, кэппированную метоксигруппой. Соотношение региоизомеров, образующихся в результате клик-реакции, составляет приблизительно 1:1 или более чем 1:1. Термин "DBCO" означает химический фрагмент, содержащий дибензоциклооктиновую группу, такой как содержащий соединение mPEG-DBCO, показанное на схеме 1 примера 2. Иллюстративная структура группы метокси-PEG показана в структуре mPEG-DBCO на схеме 1 примера 2

[AzK_L1_PEG] = N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно конъюгированный с PEG с помощью DBCO-опосредованной клик-химии с образованием соединения, содержащего структуру формулы (IV) или формулы (V). Например, если указано, PEG 5 кДа обозначает линейную цепь полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 5-килодальтон, кэппированную метоксигруппой. Соотношение региоизомеров, образующихся в результате клик-реакции, составляет приблизительно 1:1 или более чем 1:1. Термин "DBCO" означает химический фрагмент, содержащий дибензоциклооктиновую группу, такой как содержащий соединение mPEG-DBCO, показанное на схеме 1 примера 2.

[00123] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-2, модифицированные в положении аминокислоты. В некоторых случаях модификация относится к природной аминокислоте. В некоторых случаях модификация относится к неприродной аминокислоте. В некоторых случаях в данном документе описан выделенный и модифицированный полипептид IL-2, который содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях полипептид IL-2 представляет собой выделенный и очищенный IL-2 млекопитающего, например, белок IL-2 грызунов или человеческий белок IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 представляет собой человеческий белок IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 1. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 2. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 2. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 3. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 3. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 3. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 4. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 4. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 4. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 5. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 5. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 5. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 6. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 6. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 6. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 7. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 7. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 7. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 8. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 8. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 8. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 9. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 9. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 9. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 10. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 10. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 10. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 13. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 13. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 13. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 14. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 14. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 14. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 15. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 15. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 15. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 16. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 16. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 16. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 17. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 17. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 17. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 18. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 18. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 18. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 19. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 19. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 20. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 20. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 21. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 21. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 22. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 22. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 24. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 24. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 25. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 25. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 25. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 26. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 26. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 27. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 27. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 27. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 28. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 28. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 29. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 29. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 29. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 30. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 30. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 30. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 31. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 31. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 31. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 32. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 32. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 32. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 33. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 33. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 33. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 34. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 34. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 34. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 35. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 36. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 36. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 36. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 37. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 38. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 38. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 38. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 39. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 39. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 39. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 40. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 40. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 42. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 42. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 42. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 43. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 43. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 43. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 44. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 44. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 44. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 45. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 45. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 45. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 46. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 46. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 46. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 47. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 47. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 47. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 49. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 49. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 49. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 50. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 50. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 50. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 51. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 51. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 51. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 52. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 52. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 52. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 53. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 53. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 53. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 54. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 54. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 54. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 55. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 55. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 55. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 56. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 56. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 56. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 57. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 57. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 57. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 58. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 58. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 58. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 59. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 59. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 59. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 60. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 60. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 60. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 61. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 61. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 61. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 62. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 62. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 62. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 63. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 63. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 63. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 64. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 64. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 64. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 65. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 65. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 65. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 66. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 66. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 66. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 67. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 67. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 67. В дополнительных случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 68. В дополнительных случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 68. В дополнительных случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 68. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 69. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 69. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 69. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 70. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 70. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 70. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 71. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 71. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 71. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 72. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 72. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 72. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 73. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 73. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 73. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 74. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 74. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 74. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 75. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 75. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 75. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 76. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 76. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 76. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 77. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 77. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 77. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 78. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 78. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 78. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 79. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 79. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 79. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 80. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 80. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 80. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 81. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 81. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 81. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 82. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 82. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 82. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 83. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 83. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 83. В некоторых случаях полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 84. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит последовательность под SEQ ID NO: 84. В некоторых случаях полипептид IL-2 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 84.

[00124] В некоторых случаях полипептид IL-2 представляет собой усеченный вариант. В некоторых случаях усечение представляет собой N-концевую делецию. В других случаях усечение представляет собой С-концевую делецию. В дополнительных случаях усечение включает как N-концевую, так и C-концевую делеции. Например, усечение может представлять собой делецию по меньшей мере или приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или большего количества остатков либо с N-конца, либо с С-конца, либо с обоих концов. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или больше остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 2 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 3 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 4 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 5 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 6 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 7 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 8 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 9 остатков. В некоторых случаях полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию из по меньшей мере или приблизительно 10 остатков.

[00125] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 представляет собой функционально активный фрагмент. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130 или 1-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 10-133, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 20-133, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 30-133, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 10-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 20-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 1-130, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 1-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1.

[00126] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, который содержит выделенный, очищенный и модифицированный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется сниженной аффинностью в отношении субъединицы α-рецептора IL-2 (IL-2Rα) по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с аминокислотным остатком, который взаимодействует с IL-2Rα (например, на границе контакта IL-2/IL-2Rα). В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с аминокислотным остатком, который располагается проксимально по отношению к границе контакта IL-2/IL-2Rα (например, на расстоянии приблизительно 5 Å, приблизительно 10 Å, приблизительно 15 Å или приблизительно 20 Å от границы контакта IL-2/IL-2Rα). В контексте данного документа остатки, образующие границу контакта IL-2/ IL-2Rα, включают остатки IL-2, которые обеспечивают гидрофобные взаимодействия, водородные связи или ионные взаимодействия с остатками из субъединицы IL-2Rα.

[00127] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с аминокислотным остатком, выбранным из положения аминокислоты Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, или A112, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, и A112. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из N33, P34, K35, T37, R38, M39, T41, F42, K43, F44, Y45, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, и A112. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из R38 и K64. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из E61, E62 и E68. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K35. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T37. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой R38. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T41. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой F42. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K43. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой F44. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Y45. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E61. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E62. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K64. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E68. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой P65. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой V69. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L72. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L72. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой D109.

[00128] В некоторых случаях конъюгат IL-2 дополнительно содержит дополнительную мутацию. В некоторых случаях дополнительная мутация находится в положении аминокислоты, выбранном из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В таких случаях аминокислота конъюгирована с дополнительным конъюгирующим фрагментом для увеличения периода полужизни в сыворотке крови, стабильности или их комбинации. В качестве альтернативы перед связыванием с дополнительным конъюгирующим фрагментом аминокислоту сначала подвергают мутации в природную аминокислоту, такую как лизин, цистеин, гистидин, аргинин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, серин, треонин или тирозин, или в неприродную аминокислоту.

[00129] В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности модифицированного полипептида IL-2 по отношению к субъединице α-рецептора IL-2 (IL-2Rα) по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа без модификации неприродной аминокислоты (например, с полипептидом IL-2 дикого типа) составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях снижение аффинности превышает 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 100%.

[00130] В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности модифицированного полипептида IL-2 по отношению к субъединице α-рецептора IL-2 (IL-2Rα) по сравнению с эквивалентным полипептидом IL-2 без модификации неприродной аминокислоты (например, с полипептидом IL-2 дикого типа) является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является более чем 1000-кратным.

[00131] В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 не взаимодействует с IL-2Rα. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно конъюгирован с конъюгирующим фрагментом. В некоторых случаях конъюгат IL-2 не взаимодействует с IL-2Rα.

[00132] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2βγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между эффективностью в передаче сигнала первого рецептора и эффективностью в передаче сигнала второго рецептора является менее чем 10-кратным. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2βγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между эффективностью в передаче сигнала первого рецептора и эффективностью в передаче сигнала второго рецептора является менее чем 5-кратным. В некоторых случаях различие является менее чем 9-кратным, менее чем 8-кратным, менее чем 7-кратным, менее чем 6-кратным, менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 является частичным агонистом, например агонистом, который активирует рецептор (например, комплекс передачи сигнала IL-2βγ или комплекс передачи сигнала IL-2αβγ), но характеризуется лишь частичной эффективностью в отношении рецептора по сравнению с полным агонистом. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 является полным агонистом, например агонистом, который активирует рецептор (например, комплекс передачи сигнала IL-2βγ или комплекс передачи сигнала IL-2αβγ) с максимальным ответом.

[00133] В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала измеряют с помощью значения EC50. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 обеспечивает первое значение EC50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2βγ и второе значение EC50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между первым значением EC50 и вторым значением EC50 является менее чем 10-кратным. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 обеспечивает первое значение EC50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2βγ и второе значение EC50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между первым значением EC50 и вторым значением EC50 является менее чем 5-кратным. В некоторых случаях различие является менее чем 9-кратным, менее чем 8-кратным, менее чем 7-кратным, менее чем 6-кратным, менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным.

[00134] В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала измеряют с помощью значения ED50. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 обеспечивает первое значение ED50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2βγ и второе значение ED50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между первым значением ED50 и вторым значением ED50 является менее чем 10-кратным. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 обеспечивает первое значение ED50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2βγ и второе значение ED50 для активации комплекса передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между первым значением ED50 и вторым значением ED50 является менее чем 5-кратным. В некоторых случаях различие является менее чем 9-кратным, менее чем 8-кратным, менее чем 7-кратным, менее чем 6-кратным, менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным.

[00135] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент является связанным с N-концом или C-концом полипептида IL-2, либо непосредственно, либо опосредованно через линкерный пептид. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент (например, полимер, белок или пептид) генетически слит с IL-2 на N-конце или C-конце IL-2 и либо непосредственно, либо опосредованно через линкерный пептид. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с N-концевым или C-концевым аминокислотным остатком. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с реакционноспособной группой, которая связана с N-концевым или C-концевым аминокислотным остатком.

[00136] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 со сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rα способен обеспечивать размножение популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и T-клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT). В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент нарушает или блокирует связывание IL-2 с IL-2Rα.

[00137] В некоторых случаях активация популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) посредством комплекса IL-2Rβγ модифицированным полипептидом IL-2 обеспечивает сохранение значительной эффективности активации указанной популяции клеток по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях активация модифицированным полипептидом IL-2 эквивалентна активации полипептидом IL-2 дикого типа. В других случаях активация модифицированным полипептидом IL-2 превышает активацию полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 комплексу IL-2Rβγ выше, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа комплексу IL-2Rβγ. В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 по меньшей мере в 1 раз выше, чем соответствующая эффективность полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 выше в приблизительно или в по меньшей мере 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 15 раз, 20 раз, 25 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 60 раз, 70 раз, 80 раз, 90 раз, 100 раз, 150 раз, 200 раз, 300 раз, 400 раз, 500 раз, 1000 раз или больше, чем соответствующая эффективность полипептида IL-2 дикого типа. В таких случаях доза или концентрация модифицированного полипептида IL-2, используемая для достижения уровня активации популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT), подобного уровню полипептида IL-2 дикого типа, ниже дозы или концентрации, используемой для полипептида IL-2 дикого типа.

[00138] В некоторых вариантах осуществления активация популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) посредством комплекса IL-2Rβγ модифицированным полипептидом IL-2 обеспечивает сохранение значительной эффективности активации указанной популяции клеток полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 комплексу IL-2Rβγ ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа комплексу IL-2Rβγ. В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 ниже в приблизительно или в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз или 50 раз, чем соответствующая эффективность полипептида IL-2 дикого типа.

[00139] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ является улучшенной эффективностью по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ является ухудшенной эффективностью по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ, и при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 1 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 2 раза или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 5 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 10 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 20 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 50 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 100 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 500 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 1000 раз или больше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 выше эффективности рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ, а эффективность в передаче сигнала второго рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже эффективности рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ. В некоторых случаях эффективности передачи сигнала обоих рецепторов ниже соответствующих им показателей эффективности полипептида IL-2 дикого типа. В других случаях эффективности передачи сигнала обоих рецепторов выше соответствующих им показателей эффективности полипептида IL-2 дикого типа.

[00140] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 снижает токсическое нежелательное явление у субъекта, которому вводят конъюгат IL-2. Иллюстративные токсические нежелательные явления включают эозинофилию, повышенную проницаемость капилляров и синдром повышенной проницаемости сосудов (VLS). В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает частоту возникновения токсического нежелательного явления у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает тяжесть токсического нежелательного явления у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин.

[00141] В некоторых случаях токсическое нежелательное явление представляет собой эозинофилию. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает частоту возникновения эозинофилии у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает тяжесть эозинофилии у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин.

[00142] В некоторых случаях токсическое нежелательное явление представляет собой повышенную проницаемость капилляров. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает частоту возникновения повышенной проницаемости капилляров у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает тяжесть повышенной проницаемости капилляров у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин.

[00143] В некоторых случаях токсическое нежелательное явление представляет собой VLS. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает частоту возникновения VLS у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин. В некоторых случаях конъюгат IL-2 снижает тяжесть VLS у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят IL-2 дикого типа или альдеслейкин.

[00144] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 1 часа, 2 часов, 3 часов, 4 часов, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 1 часа, 2 часов, 3 часов, 4 часов, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов или больше. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 1 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 2 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 3 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 4 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 5 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 6 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 7 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 8 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 9 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 10 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 12 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 18 часов. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим более 24 часов.

[00145] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 2 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 3 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 4 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 5 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 6 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 7 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 8 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 9 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 10 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 12 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 18 часа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 24 часа.

[00146] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим от приблизительно 1 часа до приблизительно 7 дней, от приблизительно 12 часов до приблизительно 7 дней, от приблизительно 18 часов до приблизительно 7 дней, от приблизительно 24 часов до приблизительно 7 дней, от приблизительно 1 часа до приблизительно 5 дней, от приблизительно 12 часов до приблизительно 5 дней, от приблизительно 24 часов до приблизительно 5 дней, от приблизительно 2 дней до приблизительно 5 дней или от приблизительно 2 дней до приблизительно 3 дней.

[00147] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, составляющим от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов.

[00148] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется таким периодом полужизни в плазме крови, который способен обеспечивать пролиферацию и/или размножение CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и Т-клетки памяти, NK-клетки, NKT-клетки или их комбинации, но не оказывать вредного воздействия, такого как апоптоз.

[00149] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, например, на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше по сравнению с IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, например, на по меньшей мере на 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше по сравнению с IL-2 дикого типа.

[00150] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, например, от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов по сравнению с IL-2 дикого типа.

[00151] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, например, на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше по сравнению с альдеслейкином. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, например, на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше по сравнению с альдеслейкином.

[00152] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, например, от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов по сравнению с альдеслейкином.

[00153] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови с пониженной токсичностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше, с пониженной токсичностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше, с пониженной токсичностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов с пониженной токсичностью. В некоторых случаях пониженная токсичность понижена в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз или больше по сравнению с IL-2 дикого типа. В некоторых случаях пониженная токсичность понижена на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или больше по сравнению с IL-2 дикого типа.

[00154] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови с пониженной токсичностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше, с пониженной токсичностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови, составляющим по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше, с пониженной токсичностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2 характеризуется увеличенными периодом полужизни в плазме крови от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов с пониженной токсичностью. В некоторых случаях пониженная токсичность понижена в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз или больше по сравнению с альдеслейкином. В некоторых случаях пониженная токсичность понижена на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или больше по сравнению с альдеслейкином.

[00155] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит конъюгирующий фрагмент, при этом размер (например, объем или длина) конъюгирующего фрагмента обеспечивает повышение стабильности в плазме крови, но не снижает эффективность. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента увеличивает период полужизни в плазме крови на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента увеличивает период полужизни в плазме крови на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента обеспечивает увеличение периода полужизни в плазме крови от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента снижает эффективность на менее чем 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или меньше по сравнению с альдеслейкином.

[00156] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит конъюгирующий фрагмент, при этом размер (например, объем или длина) конъюгирующего фрагмента обеспечивает повышение стабильности в плазме крови и эффективность. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента увеличивает период полужизни в плазме крови на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или больше. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента увеличивает период полужизни в плазме крови на по меньшей мере 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часов, 18 часов, 24 часа или больше. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента обеспечивает увеличение периода полужизни в плазме крови от приблизительно 1 часа до приблизительно 18 часов, от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 2 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 4 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 12 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 10 часов, от приблизительно 6 часов до приблизительно 8 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 18 часов, от приблизительно 8 часов до приблизительно 12 часов или от приблизительно 8 часов до приблизительно 10 часов. В некоторых случаях размер конъюгирующего фрагмента дополнительно повышает эффективность на более чем 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200% или больше по сравнению с альдеслейкином.

[00157] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, ковалентно присоединенную к конъюгирующему фрагменту, при этом неприродная аминокислота расположена в участке 35-107, и при этом участок 35-107 соответствует остаткам K35-Y107 в последовательности под SEQ ID NO: 1.

[00158] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан белок, связывающий βγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rβγ), где аффинность связывания в отношении α-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rα) у указанного связывающего белка меньше, чем у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, где аффинность связывания в отношении α-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rα) у указанного связывающего белка меньше, чем у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан белок, связывающий βγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rβγ), где аффинность связывания в отношении α-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rα) у указанного связывающего белка меньше, чем у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях указанный связывающий белок представляет собой модифицированный полипептид IL-2 или его функционально активный фрагмент, где модифицированный полипептид IL-2 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях по меньшей мере один неприродная аминокислота расположена в участке 35-107, и при этом участок 35-107 соответствует остаткам K35-Y107 в последовательности под SEQ ID NO: 1.

[00159] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию, и IL-2Rβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rα, и где сниженную аффинность связывания сравнивают с аффинностью связывания между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к сайту мутации. В некоторых случаях сайт мутации содержит аминокислоту, мутированную в природную аминокислоту. В некоторых случаях сайт мутации содержит аминокислоту, мутированную в остаток цистеина. В других случаях сайт мутации содержит аминокислоту, мутированную в остаток лизина.

[00160] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rα, и где сниженную аффинность связывания сравнивают с аффинностью связывания между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте.

[00161] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной эффективностью рецепторной передачи сигнала к IL-2Rα, и где сниженную эффективность рецепторной передачи сигнала сравнивают с эффективностью рецепторной передачи сигнала между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте.

[00162] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и Т-клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), который селективно обеспечивает размножение CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, NK-клеток, NKТ-клеток или их комбинации в клеточной популяции, где указанный активатор содержит модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну мутацию. В некоторых случаях мутация представляет собой мутацию в природную аминокислоту. В других случаях мутация представляет собой мутацию в неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и Т-клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), который селективно обеспечивает размножение CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, NK-клеток, NKТ-клеток или их комбинации в клеточной популяции, где указанный активатор содержит модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях указанный активатор обеспечивает экспансию CD4+ регуляторных Т-клеток (Treg) на менее чем 20%, 15%, 10%, 5%, 1% или менее чем 0,1% при контакте указанного активатора с указанной популяцией CD3+ клеток по сравнению с размножением CD4+ Treg-клеток в популяции CD3+ клеток при контакте с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях указанный активатор не обеспечивает размножение Treg-клеток в указанной клеточной популяции. В некоторых случаях указанная клеточная популяция представляет собой in vivo клеточную популяцию. В некоторых случаях указанная клеточная популяция представляет собой in vitro клеточную популяцию. В некоторых случаях указанная клеточная популяция представляет собой ex vivo клеточную популяцию.

[00163] В некоторых случаях в данном документе также описан способ размножения популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT), включающий приведение в контакт указанной клеточной популяции с терапевтически эффективным количеством активатора CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и Т-клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), при этом указанный активатор содержит модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну мутацию, за счет чего обеспечивается размножение популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных Т-клеток (NKT). В некоторых случаях мутация представляет собой мутацию в природную аминокислоту. В других случаях мутация представляет собой мутацию в неприродную аминокислоту. В некоторых случаях в данном документе также описан способ размножения популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT), включающий приведение в контакт указанной клеточной популяции с терапевтически эффективным количеством активатора CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и Т-клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), при этом указанный активатор содержит модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, за счет чего обеспечивается размножение популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных Т-клеток (NKT).

[00164] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в положении K35, соответствующем положению остатка 35 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα

[00165] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке T37, соответствующем положению 37 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00166] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с аминокислотным остатком, выбранным из положения аминокислоты P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, и T113. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95 и Q126. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из K8, K9 и H16. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из Q22, N26, N88 и Q126. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из E15, D20, D84 и E95. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из L12, L19 и M23. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из Q22 и N26. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K8. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K9. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Q11. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L12. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E15. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой H16. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L18. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L19. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой D20. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Q22. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой M23. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой N26. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой R81. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой D84. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой S87. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой N88. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой V91. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой I92. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L94. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E95. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E116. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой N119. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой R120. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T123. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой A125. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Q126. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой S127. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой S130. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T131. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L132. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T133.

[00167] В некоторых случаях конъюгат IL-2 дополнительно содержит дополнительную мутацию. В таких случаях аминокислота конъюгирована с дополнительным конъюгирующим фрагментом для увеличения периода полужизни в сыворотке крови, стабильности или их комбинации. В качестве альтернативы перед связыванием с дополнительным конъюгирующим фрагментом аминокислоту сначала подвергают мутации в природную аминокислоту, такую как лизин, цистеин, гистидин, аргинин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, серин, треонин или тирозин, или в неприродную аминокислоту.

[00168] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется сниженной аффинностью связывания с субъединицей рецептора IL-2 β (IL-2Rβ), субъединицей рецептора IL-2 γ (IL-2Rγ) или их комбинацией комплекса IL-2Rαβγ по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях сниженная аффинность конъюгата IL-2 в отношении субъединицы рецептора IL-2 β (IL-2Rβ), субъединицы рецептора IL-2 γ (IL-2Rγ) или их комбинации по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или более чем 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях снижение аффинности превышает 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 100%.

[00169] В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности связывания конъюгата IL-2 с субъединицей рецептора IL-2 β (IL-2Rβ), субъединицей рецептора IL-2 γ (IL-2Rγ) или их комбинацией по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является более чем 1000-кратным.

[00170] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется сниженным рекрутингом субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ. В некоторых случаях сниженный рекрутинг сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rγ эквивалентным полипептидом IL-2, не содержащим неприродную аминокислоту (например, полипептидом IL-2 дикого типа). В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или более чем 99% по сравнению с эквивалентным полипептидом IL-2 без модификации неприродной аминокислоты. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 70%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ составляет приблизительно 100%. В некоторых случаях конъюгат IL-2 дополнительно характеризуется повышением рекрутинга субъединицы IL-2Rα.

[00171] В некоторых вариантах осуществления снижение рекрутинга субъединцы IL-2Rγ является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше по сравнению с эквивалентным полипептидом IL-2 без модификации неприродной аминокислоты (например, с полипептидом IL-2 дикого типа). В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях конъюгат IL-2 дополнительно характеризуется повышением рекрутинга субъединицы IL-2Rα.

[00172] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 характеризуется повышением рекрутинга субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2. В некоторых случаях сниженный рекрутинг сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rα эквивалентным полипептидом IL-2, не содержащим неприродную аминокислоту (например, полипептидом IL-2 дикого типа). В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или более 99% по сравнению с эквивалентным полипептидом IL-2 без модификации неприродной аминокислоты. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 70%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет более чем 99%. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα составляет приблизительно 100%. В некоторых случаях конъюгат IL-2 дополнительно характеризуется снижением рекрутинга субъединицы IL-2Rβ и/или субъединицы IL-2Rγ.

[00173] В некоторых вариантах осуществления повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше по сравнению с эквивалентным полипептидом IL-2 без модификации неприродной аминокислоты (например, с полипептидом IL-2 дикого типа). В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα является более чем 1000-кратным. В некоторых случаях конъюгат IL-2 дополнительно характеризуется снижением рекрутинга субъединицы IL-2Rβ и/или субъединицы IL-2Rγ.

[00174] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 описанного в данном документе характеризуется снижением эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше к IL-2Rβγ по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 20-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 40-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 200-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 400-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала является приблизительно 1000-кратным.

[00175] В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала измеряют с помощью значения EC50. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала приводит к повышению EC50. В некоторых случаях повышение EC50 является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа.

[00176] В некоторых случаях эффективность рецепторной передачи сигнала измеряют с помощью значения ED50. В некоторых случаях снижение эффективности рецепторной передачи сигнала приводит к повышению ED50. В некоторых случаях повышение ED50 является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа.

[00177] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2, описанный в данном документе, характеризуется расширенным терапевтическим окном по сравнению с терапевтическим окном полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях расширенное терапевтическое окно обусловлено снижением связывания между полипептидом IL-2 и βγ-рецептором интерлейкина 2 (IL-2Rβγ), снижением эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ, снижением рекрутинга субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ или повышением рекрутинга субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 не характеризуется ухудшенной активацией αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ).

[00178] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2βγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ, и при этом различие между эффективностью в передаче сигнала первого рецептора и эффективностью в передаче сигнала второго рецептора является по меньшей мере 1-кратным. В некоторых случаях различие является по меньшей мере 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 20-кратным, 30-кратным, 40-кратным, 50-кратным, 60-кратным, 70-кратным, 80-кратным, 90-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или большим. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора меньше эффективности в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора меньше эффективности в передаче сигнала второго рецептора в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или больше. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 характеризуется более низкой эффективностью рецепторной передачи сигнала к комплексу передачи сигнала IL-2βγ, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 в по меньшей мере 1 раз ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже в по меньшей мере 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 200 раз или 500 раз, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях и эффективность в передаче сигнала первого рецептора, и эффективность в передаче сигнала второго рецептора ниже соответствующих эффективностей полипептида IL-2 дикого типа, но эффективность в передаче сигнала первого рецептора ниже эффективности в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых случаях различие между эффективностью в передаче сигнала первого рецептора и эффективностью в передаче сигнала второго рецептора увеличивает терапевтическое окно для модифицированного полипептида IL-2.

[00179] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент ухудшает или блокирует эффективность рецепторной передачи сигнала IL-2 с IL-2Rβγ или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ.

[00180] В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 с понижением эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ способен обеспечивать размножение CD4+ регуляторных Т-клеток (Treg).

[00181] В некоторых вариантах осуществления пролиферация CD4+ Treg-клеток комплексом модифицированный IL-2/IL-2Rαβγ эквивалентна или превышает таковую у полипептида IL-2 дикого типа.

[00182] В некоторых вариантах осуществления комплекс IL-2/IL-2Rαβγ индуцирует пролиферацию CD4+ Treg-клеток в популяцию, чего достаточно для модуляции течения заболевания в животной модели.

[00183] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан белок, связывающий αβγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где эффективность рецепторной передачи сигнала для βγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) у указанного связывающего белка меньше таковой у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях указанный связывающий белок представляет собой модифицированный полипептид IL-2 или его функционально активный фрагмент, где модифицированный полипептид IL-2 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту.

[00184] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан белок, связывающий αβγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ указанным связывающим белком меньше такового у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях указанный связывающий белок представляет собой модифицированный полипептид IL-2 или его функционально активный фрагмент, где модифицированный полипептид IL-2 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту.

[00185] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан белок, связывающий αβγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где аффинность связывания в отношении βγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) у указанного связывающего белка меньше таковой у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В таких случаях указанный связывающий белок представляет собой модифицированный полипептид IL-2 или его функционально активный фрагмент, где модифицированный полипептид IL-2 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту.

[00186] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rαβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rαβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной эффективностью рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ, и где сниженную эффективность рецепторной передачи сигнала сравнивают с аффинностью связывания между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rβγ. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте.

[00187] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rαβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rαβγ, где рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ указанным модифицированным полипептидом IL-2 меньшее такового у полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте.

[00188] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rαβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rαβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rβγ, и где сниженную аффинность связывания сравнивают с аффинностью связывания между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан комплекс IL-2/IL-2Rαβγ, содержащий модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rαβγ, где рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ указанным модифицированным полипептидом IL-2 меньшее такового у полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте.

[00189] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан активатор CD4+ Treg-клеток, который селективно обеспечивает размножение CD4+ Treg-клеток в клеточной популяции, где указанный активатор содержит модифицированный полипептид IL-2, содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях указанный активатор обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток на менее чем 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, или 0,1% в популяции CD3+ клеток при контакте указанного активатора с указанной популяцией CD3+ клеток по сравнению с размножением CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток в популяции CD3+ клеток при контакте с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях указанная клеточная популяция представляет собой in vivo клеточную популяцию. В некоторых случаях указанная клеточная популяция представляет собой in vitro клеточную популяцию. В некоторых случаях указанная клеточная популяция представляет собой ex vivo клеточную популяцию.

[00190] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке R38, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00191] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке T41, соответствующем положению 41 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00192] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке F42, соответствующем положению 42 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00193] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке K43, соответствующем положению 43 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00194] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке F44, соответствующем положению 44 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00195] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке Y45, соответствующем положению 45 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00196] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E60, соответствующем положению 60 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00197] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E61, соответствующем положению 61 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00198] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E62, соответствующем положению 62 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00199] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке K64, соответствующем положению 64 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00200] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке P65, соответствующем положению 65 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00201] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E68, соответствующем положению 68 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00202] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке V69, соответствующем положению 69 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00203] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке N71, соответствующем положению 71 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00204] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке L72, соответствующем положению 72 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00205] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке M104, соответствующем положению 104 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00206] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в C105, соответствующем положению 105 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00207] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке Y107, соответствующем положению 107 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет и не оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

Предшественники конъюгата цитокина

[00208] В данном документе описаны предшественники конъюгата цитокина, содержащие мутантный цитокин (такой как IL-2), в котором одна или несколько аминокислот были мутированы из аминокислоты дикого типа. Такие предшественники часто применяют в раскрытых в данном документе способах для лечения заболеваний или состояний. В некоторых вариантах осуществления предшественник цитокина не конъюгирован. Такие мутации различным образом включают добавления, делеции или замены. В некоторых вариантах осуществления мутация включает замену другой природной аминокислотой. В некоторых случаях мутантный цитокин содержит мутацию в положении аминокислоты Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, или A112, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, и A112. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из N33, P34, K35, T37, R38, M39, T41, F42, K43, F44, Y45, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, и A112. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из R38 и K64. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из E61, E62 и E68. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K35. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T37. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой R38. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой T41. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой F42. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K43. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой F44. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Y45. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E61. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E62. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой K64. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E68. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой P65. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой V69. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L72. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой L72. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой D109. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит конъюгирующий фрагмент, где конъюгирующий фрагмент присоединяется к мутантному сайту в мутантном цитокине.

[00209] Мутантные цитокины, описанный в данном документе, часто содержат одну или несколько мутаций в природные аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и по меньшей мере одну мутацию. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62K. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62C. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62A. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62I. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62L. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62Y. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62W. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62N. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62R. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62D. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62Q. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62G. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62H. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62M. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62F. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62P. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62S. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62T. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию E62V.

[00210] В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и по меньшей мере одну мутацию. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65K. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65C. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65A. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65I. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65L. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65Y. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65W. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65N. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65R. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65D. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65Q. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65G. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65H. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65M. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65F. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65E. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65S. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65T. В некоторых вариантах осуществления мутантный цитокин содержит SEQ ID NO:1 и мутацию P65V.

Слитые белки или пептиды

[00211] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина, описанный в данном документе, содержит цитокин (например, IL-2 или другой цитокин), который слит с пептидом или белком (слияние). В некоторых вариантах осуществления пептид или белок представляет собой антитело или фрагмент антитела. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина, описанный в данном документе, содержит цитокин (например, IL-2 или другой цитокин), который слит с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых вариантах осуществления цитокин, описанный в данном документе, слит с несколькими белками или пептидами. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина содержит слитую конструкцию на основе цитокина и белка или пептида и по меньшей мере один конъюгирующий фрагмент. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент, мышиное антитело или его связывающий фрагмент, химерное антитело или его связывающий фрагмент, моноклональное антитело или его связывающий фрагмент, моновалентный Fab', бивалентный Fab₂, F(ab)'₃-фрагменты, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантитело, миниантитело, наноантитело, триантитело, тетраантитело, гумаантитело, дисульфид-стабилизированный белок Fv (dsFv), однодоменное антитело (sdAb), Ig NAR, верблюжье антитело или его связывающий фрагмент, биспецифическое антитело или его связывающий фрагмент или их химически модифицированное производное. Такие слитые белки в некоторых случаях получают прямо посредством трансляции. В некоторых вариантах осуществления слитые конструкции получают с использованием химического или другого способа ферментативного лигирования. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина содержит слитый пептид или белок, присоединенный посредством линкера. В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой пептид. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина содержит пептид или белок, слитые на N-конце. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина содержит пептид или белок, слитый на С-конце. В некоторых случаях цитокин, слитый с пептидом или белком, дополнительно конъюгирован с одним или несколькими конъюгирующими фрагментами, описанными ниже.

[00212] В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с scFv, бис-scFv, (scFv)₂, dsFv или слияние с sdAb. В некоторых случаях слияние предусматривает scFv. В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с бис-scFv. В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с (scFv)₂. В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с dsFv. В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с sdAb. В некоторых случаях цитокин, слитый с scFv, бис-scFv, (scFv)₂, dsFv или sdAb, дополнительно конъюгирован с одним или несколькими конъюгирующими фрагментами, описанными ниже.

[00213] В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с Fc-частью антитела, например, IgG, IgA, IgM, IgE или IgD. В некоторых случаях конъюгат цитокина предусматривает слияние с Fc-частью IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄). В некоторых случаях цитокин, слитый с Fc-частью, дополнительно конъюгирован с одним или несколькими конъюгирующими фрагментами, описанными ниже.

[00214] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) слит с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях полипептид цитокина слит с гуманизированным антителом или его связывающим фрагментом, мышиным антителом или его связывающим фрагментом, химерным антителом или его связывающим фрагментом, моноклональным антителом или его связывающим фрагментом, моновалентным Fab', бивалентным Fab₂, F(ab)'₃-фрагментами, одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантителом, миниантителом, наноантителом, триантителом, тетраантителом, гумаантителом, дисульфид-стабилизированным белком Fv (dsFv), однодоменным антителом (sdAb), Ig NAR, верблюжьим антителом или его связывающим фрагментом, биспецифическим антителом или его связывающим фрагментом или их химически модифицированным производным. В дополнительных случаях полипептида цитокина слит с Fc-частью антитела. В дополнительных случаях полипептида цитокина слит с Fc-частью IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄). В некоторых случаях цитокин, слитый с антителом или его связывающими фрагментами, дополнительно конъюгирован с одним или несколькими конъюгирующими фрагментами, описанными ниже.

[00215] В некоторых случаях полипептид IL-2 слит с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях полипептид IL-2 слит с гуманизированным антителом или его связывающим фрагментом, мышиным антителом или его связывающим фрагментом, химерным антителом или его связывающим фрагментом, моноклональным антителом или его связывающим фрагментом, моновалентным Fab', бивалентным Fab₂, F(ab)'₃-фрагментами, одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантителом, миниантителом, наноантителом, триантителом, тетраантителом, гумаантителом, дисульфид-стабилизированным белком Fv (dsFv), однодоменным антителом (sdAb), Ig NAR, верблюжьим антителом или его связывающим фрагментом, биспецифическим антителом или его связывающим фрагментом или их химически модифицированным производным. В дополнительных случаях полипептид IL-2 слит с Fc-частью антитела. В дополнительных случаях полипептид IL-2 слит с Fc-частью IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄). В некоторых случаях полипептид IL-2, слитый с антителом или его связывающими фрагментами, дополнительно конъюгирован с одним или несколькими конъюгирующими фрагментами, описанными ниже.

Природные и неприродные аминокислоты

[00216] В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток, описанный в данном документе (например, в цитокине, таком как IL-2), мутирован в лизин, цистеин, гистидин, аргинин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, серин, треонин или тирозин до связывания (или осуществлением реакции) с конъюгирующим фрагментом. Например, боковая цепь лизина, цистеина, гистидина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, серина, треонина или тирозина может связываться с конъюгирующим фрагментом, описанным в данном документе. В некоторых случаях аминокислотный остаток мутирован в цистеин, лизин или гистидин. В некоторых случаях аминокислотный остаток мутирован в цистеин. В некоторых случаях аминокислотный остаток мутирован в лизин. В некоторых случаях аминокислотный остаток мутирован в гистидин. В некоторых случаях аминокислотный остаток мутирован в тирозин. В некоторых случаях аминокислотный остаток мутирован в триптофан. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота не конъюгирована с конъюгирующим фрагментом. В некоторых вариантах осуществления цитокин, описанный в данном документе, содержит неприродную аминокислоту, где цитокин конъюгирован с белком, при этом точка присоединения не представляет собой неприродную аминокислоту.

[00217] В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток, описанный в данном документе (например, в цитокине, таком как IL-2), мутирован в неприродную аминокислоту до связывания с конъюгирующим фрагментом. В некоторых случаях мутация в неприродную аминокислоту предотвращает или минимизирует ответ иммунной системы на аутоантиген. Используемый в данном документе термин "неприродная аминокислота" или "неканоническая аминокислота" относится к аминокислоте, отличной от 20 аминокислот, которые встречаются природе в белке. Неограничивающие примеры неприродных аминокислот включают п-ацетил-L-фенилаланин, п-йод-L-фенилаланин, п-метоксифенилаланин, O-метил-L-тирозин, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргилфенилаланин, L-3-(2-нафтил)аланин, 3-метилфенилаланин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-дофу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-боронфенилаланин, O-пропаргилтирозин, L-фосфосерин, фосфоносерин, фосфонотирозин, п-бромфенилаланин, селеноцистеин, п-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, N6-(2-азидоэтокси)-карбонил-L-лизин (AzK, химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3С), неприродный аналог аминокислоты тирозина; неприродный аналог аминокислоты глутамина; неприродный аналог аминокислоты фенилаланина; неприродный аналог аминокислоты серина; неприродный аналог аминокислоты треонина; аминокислоту, замещенную алкилом, арилом, ацилом, азидо-, циано-, галогеном, гидразином, гидразидом, гидроксилом, алкенилом, алкинилом, эфиром, тиолом, сульфонилом, селено-, сложным эфиром, тиокислотой, боратом, боронатом, фосфо-, фосфоно-, фосфином, гетероциклом, еноном, имином, альдегидом, гидроксиламином, кето- или амино- или их комбинацию; аминокислоту с фотоактивируемым кросс-линкером; спин-меченую аминокислоту; флуоресцентную аминокислоту; связывающуюся с металлом аминокислоту; металлсодержащую аминокислоту; радиоактивную аминокислоту; фотоэкранированную и/или фотоизомеризуемую аминокислоту; аминокислоту, содержащую биотин или аналог биотина; кетосодержащую аминокислоту; аминокислоту, содержащую полиэтиленгликоль или полиэфир; аминокислоту, замещенную тяжелым атомом; химически расщепляемую или фоторасщепляемую аминокислоту; аминокислоту с удлиненной боковой цепью; аминокислоту, содержащую токсичную группу; замещенную сахаром аминокислоту; аминокислоту, содержащую углерод-связанный сахар; редокс-активную аминокислоту; а-гидрокси-содержащую кислоту; аминотиокислоту; α,α-двухзамещенную аминокислоту; β-аминокислоту; циклическую аминокислоту, отличную от пролина или гистидина, и ароматическую аминокислоту, отличную от фенилаланина, тирозина или триптофана.

[00218] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит селективную реакционноспособную группу или реакционноспособную группу для сайт-селективного мечения целевого полипептида. В некоторых случаях химия представляет собой биортогональную реакцию (например, биосовместимые и селективные реакции). В некоторых случаях химия представляет собой Cu(I)-катализируемую или "не требующую участия меди" алкин-азидную реакцию образования триазолов, лигирование по Штаудингеру, реакцию Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями (IEDDA), "фото-клик"-химию или опосредованный металлом процесс, такой как метатезис олефинов и кросс-сочетание Сузуки-Мияуры или Соногаширы.

[00219] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит фотореактивную группу, которая сшивается при облучении, например, УФ.

[00220] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включает фотоэкранированную аминокислоту.

[00221] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой пара-замещенное, мета-замещенное или орто-замещенное производное аминокислоты.

[00222] В некоторых случаях неприродная аминокислота включает п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), п-йод-L-фенилаланин, O-метил-L-тирозин, п-метоксифенилаланин, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргилфенилаланин, L-3-(2-нафтил)аланин, 3-метилфенилаланин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-допу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, L-фосфосерин, фосфоносерин, фосфонотирозин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин или изопропил-L-фенилаланин.

[00223] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 3-аминотирозин, 3-нитротирозин, 3,4-дигидроксифенилаланин или 3-йодтирозин.

[00224] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой фенилселеноцистеин.

[00225] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой бензофенон-, кетон-, йодид-, метокси-, ацетил-, бензоил- или азид-содержащее производное фенилаланина.

[00226] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой бензофенон-, кетон-, йодид-, метокси-, ацетил-, бензоил- или азид-содержащее производное лизина.

[00227] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит ароматическую боковую цепь.

[00228] В некоторых случаях неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь.

[00229] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит азидогруппу.

[00230] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит группу акцепторов Михаэля. В некоторых случаях группы акцепторов Михаэля включают ненасыщенный фрагмент, способный к образованию ковалентной связи в реакции 1,2-присоединения. В некоторых случаях группы акцепторов Михаэля включают электронодефицитные алкены или алкины. В некоторых случаях группы акцепторов Михаэля включают без ограничения альфа-, бета-ненасыщенные кетоны, альдегиды, сульфоксиды, сульфоны, нитрилы, имины или ароматические соединения.

[00231] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой дегидроаланин.

[00232] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит альдегидную или кетонную группу.

[00233] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, содержащее альдегидную или кетонную группу.

[00234] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, содержащее один или несколько атомов O, N, Se или S в бета-, гамма- или дельта-положении. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, содержащее атомы O, N, Se или S в гамма-положении.

[00235] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, в котором эпсилон-атом N заменен на атом кислорода.

[00236] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, которое не является встречающимся в природе посттрансляционно модифицированным лизином.

[00237] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой аминокислоту, содержащую боковую цепь, в которой шестой атом от альфа-положения содержит карбонильную группу. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой аминокислоту, содержащую боковую цепь, в которой шестой атом от альфа-положения содержит карбонильную группу, а пятый атом от альфа-положения представляет собой азот. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой аминокислоту, содержащую боковую цепь, в которой седьмой атом от альфа-положения представляет собой атом кислорода.

[00238] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное серина, содержащее селен. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой селеносерин (2-амино-3-гидроселенопропановую кислоту). В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-оксопропил)амино)этил)селанил)пропановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит селен, где окисление селена приводит к образованию неприродной аминокислоты, содержащей алкен.

[00239] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит циклооктинильную группу.

[00240] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит трансциклооктенильную группу.

[00241] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит норборненильную группу.

[00242] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит циклопропенильную группу.

[00243] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит диазириновую группу.

[00244] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит тетразиновую группу.

[00245] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, в котором азот боковой цепи карбамилирован. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, в котором азот боковой цепи ацилирован. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-Boc-N6-метиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-ацетиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой пирролизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-трифторацетиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(бензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(п-йодбензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(п-нитробензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-пролиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(циклопентилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(циклопентанкарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(тетрагидрофуран-2-карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(3-этинилтетрагидрофуран-2-карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((проп-2-ин-1-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(2-азидоциклопентилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(2-азидоэтокси)-карбонил-лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(2-нитробензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(2-циклооктинилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(2-аминобут-3-иноил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-((2-аминобут-3-иноил)окси)гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(аллилоксикарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(бутенил-4-оксикарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(пентенил-5-оксикарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бут-3-ин-1-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((пент-4-ин-1-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(тиазолидин-4-карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-8-оксононановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-8-оксооктановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(2-оксоацетил)лизин.

[00246] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-пропиониллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-бутириллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(бут-2-еноил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((спиро[2.3]гекс-1-ен-5-илметокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(((4-(1-(трифторметил)циклопроп-2-ен-1-ил)бензил)окси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илметокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой цистеиниллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((1-(6-нитробензо[d][1,3]диоксол-5-ил)этокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((2-(3-метил-3H-диазирин-3-ил)этокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((3-(3-метил-3H-диазирин-3-ил)пропокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((мета-нитробензилокси)-N6-метилкарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бицикло[6.1.0]нон-4-ин-9-илметокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((циклогепт-3-ен-1-илокси)карбонил)-L-лизин.

[00247] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-3-(((((бензилокси)карбонил)амино)метил)селанил)пропановую кислоту.

[00248] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью перепрофилированного стоп-кодона амбер, стоп-кодона опал или стоп-кодона охра.

[00249] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью 4-нуклеотидного кодона.

[00250] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью перепрофилированного редкого смыслового кодона.

[00251] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью синтетического кодона, содержащего неприродную нуклеиновую кислоту.

В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин с помощью ортогональной модифицированной пары синтетаза/тРНК. Такие ортогональные пары содержат неприродную синтетазу, которая способна загружать неприродную тРНК неприродной аминокислотой, при этом минимизируя загрузку а) других эндогенных аминокислот на неприродную тРНК и b) неприродных аминокислот на другие эндогенные тРНК. Такие ортогональные пары содержат тРНК, которые способны загружаться неприродной синтетазой, избегая при этом загрузки a) другими эндогенными аминокислотами с помощью эндогенных синтетаз. В некоторых вариантах осуществления такие пары идентифицированы у различных организмов, таких как бактерии, дрожжи, археи или люди. В некоторых вариантах осуществления ортогональная пара синтетаза/тРНК содержит компоненты из одного организма. В некоторых вариантах осуществления ортогональная пара синтетаза/тРНК содержит компоненты из двух различных организмов. В некоторых вариантах осуществления ортогональная пара синтетаза/тРНК содержит компоненты, которые до модификации способствуют трансляции двух различных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную аланинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную аргининсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную аспарагинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную синтетазу аспарагиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную цистеинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную глутаминсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную синтетазу глутаминовой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированный аланин глицин. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную гистидинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную лейцинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную изолейцинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную лизинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную метионинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную фенилаланинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную пролинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную серинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную треонинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную триптофансинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную тирозинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную валинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную фосфосеринсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК аланина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК аргинина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК аспарагина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК аспарагиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК цистеина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК глутамина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК глутаминовой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированный аланин глицин. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК гистидина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК лейцина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК изолейцина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК лизина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК метионина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК фенилаланина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК пролина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК серина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК треонина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК триптофана. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК тирозина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК валина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК представляет собой модифицированную тРНК фосфосерина.

[00252] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью пары аминоацил(aaRS или RS)-тРНК-синтетаза-тРНК. Иллюстративные пары aaRS-тРНК включают без ограничения пары aaRS/тРНК Methanococcus jannaschii (Mj-Tyr), пары TyrRS E. coli (Ec-Tyr)/тРНК_CUA B. stearothermophilus, пары LeuRS (Ec-Leu) E. coli/тРНК_CUA B. stearothermophilus и пары пирролизил-тРНК. В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, в полипептид IL) с помощью пары RS/тРНК Mj-Tyr. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать с помощью пары RS/тРНК Mj-Tyr, включают без ограничения пара-замещенные производные фенилаланина, такие как п-аминофенилаланин и п-метоксифенилаланин; мета-замещенные производные тирозина, такие как 3-аминотирозин, 3-нитротирозин, 3,4-дигидроксифенилаланин и 3-йодтирозин; фенилселеноцистеин; п-боронфенилаланин и о-нитробензилтирозин.

[00253] В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью пары Ec-Tyr/тРНК_CUA или Ec-Leu/тРНК_CUA. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать с помощью пары Ec-Tyr/тРНК_CUA или Ec-Leu/тРНК_CUA, включают без ограничения производные фенилаланина, содержащие заместители, представляющие собой бензофенон, кетон, йодид или азид; O-пропаргилтирозин; α-аминокаприловую кислоту, O-метилтирозин, O-нитробензилцистеин и 3-(нафталин-2-иламино)-2-аминопропановую кислоту.

[00254] В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью пары пирролизил-тРНК. В некоторых случаях PylRS получают из архебактерии, например, из метаногенной архебактерии. В некоторых случаях PylRS получают из Methanosarcina barkeri, Methanosarcina mazei или Methanosarcina acetivorans. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать с помощью пары пирролизил-тРНК, включают без ограничения амид- и карбамат-замещенные лизины, такие как 2-амино-6-((R)-тетрагидрофуран-2-карбоксамидо)гексановая кислота, N-ε-_D-пролил-_L-лизин и N-ε-циклопентилоксикарбонил-_L-лизин; N-ε-акрилоил-_L-лизин; N-ε-[(1-(6-нитробензо[d][1,3]диоксол-5-ил)этокси)карбонил]-_L-лизин и N-ε-(1-метилциклопро-2-ен-карбоксамидо)лизин. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2, раскрываемые в данном документе, могут быть получены путем применения Pyl тРНК M. mazei, которая селективно нагружается неприродной аминокислотой, такой как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), с помощью пирролизил-тРНК-синтетазы M. barkeri (Mb PylRS). Специалистам в данной области техники известны и другие способы, как, например, способы, раскрытые в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647.

[00255] В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин, описанный в данном документе (например, полипептид IL), с помощью синтетазы, раскрытой в US 9988619 и US 9938516. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать с помощью таких синтетаз, включают пара-метилазидо-L-фенилаланин, замещенные аралкилом, гетероциклилом, гетероаралкилом неприродные аминокислоты и другие. В некоторых вариантах осуществления такие UAA включают пиридил, пиразинил, пиразолил, триазолил, оксазолил, тиазолил, тиофенил или другой гетероцикл. Такие аминокислоты в некоторых вариантах осуществления включают азиды, тетразины или другую химическую группу, способную к конъюгации с партнером по сочетанию, таким как водорастворимый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления такие синтетазы экспрессируются и применяются для встраивания UAA в цитокины in vivo. В некоторых вариантах осуществления такие синтетазы применяются для встраивания UAA в цитокины с применением бесклеточной системы трансляции.

[00256] В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин, описанный в данном документе (например, полипептид IL), с помощью встречающейся в природе синтетазы. В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин с помощью организма, который является ауксотрофным по одной или нескольким аминокислотам. В некоторых вариантах осуществления синтетазы, соответствующие ауксотрофной аминокислоте, способны загружать соответствующую тРНК неприродной аминокислотой. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота представляет собой селеноцистеин или его производное. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота представляет собой селенометионин или его производное. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота представляет собой ароматическую аминокислоту, где ароматическая аминокислота включает арилгалогенид, такой как йодид. В вариантах осуществления неприродная аминокислота структурно подобна ауксотрофной аминокислоте.

[00257] В некоторых случаях неприродная аминокислота включает неприродную аминокислоту, показанную на фиг. 1.

[00258] В некоторых случаях неприродная аминокислота включает производное или аналог лизина или фенилаланина. В некоторых случаях неприродная аминокислота включает производное лизина или аналог лизина. В некоторых случаях неприродная аминокислота включает пирролизин (Pyl). В некоторых случаях неприродная аминокислота включает производное фенилаланина или аналог фенилаланина. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой неприродную аминокислоту, описанную в Wan, et al., "Pyrrolysyl-tRNA synthetase: an ordinary enzyme but an outstanding genetic code expansion tool," Biocheim Biophys Aceta 1844(6): 1059-4070 (2014). В некоторых случаях неприродная аминокислота включает неприродную аминокислоту, показанную на фиг. 2 (например, фиг. 2A и фиг. 2B).

[00259] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включает неприродную аминокислоту, показанную на фиг. 3A - фиг. 3D (адаптированы из таблицы 1 из Dumas et al., Chemical Science 2015, 6, 50-69).

[00260] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота, встроенная в цитокин, описанный в данном документе (например, полипептид IL), раскрывается в US 9840493, US 9682934, US 2017/0260137, US 9938516 или US 2018/0086734. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать с помощью таких синтетаз, включают пара-метилазидо-L-фенилаланин, аралкил, гетероциклил и гетероаралкил, а также неприродные аминокислоты, представляющие собой производные лизина. В некоторых вариантах осуществления такие UAA включают пиридил, пиразинил, пиразолил, триазолил, оксазолил, тиазолил, тиофенил или другой гетероцикл. Такие аминокислоты в некоторых вариантах осуществления включают азиды, тетразины или другую химическую группу, способную к конъюгации с партнером по сочетанию, таким как водорастворимый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления UAA включает азид, присоединенный к ароматическому фрагменту посредством алкильного линкера. В некоторых вариантах осуществления алкильный линкер представляет собой линкер C₁-C₁₀. В некоторых вариантах осуществления UAA включает тетразин, присоединенный к ароматическому фрагменту посредством алкильного линкера. В некоторых вариантах осуществления UAA включает тетразин, присоединенный к ароматическому фрагменту посредством аминогруппы. В некоторых вариантах осуществления UAA включает тетразин, присоединенный к ароматическому фрагменту посредством алкиламиногруппы. В некоторых вариантах осуществления UAA включает азид, присоединенный к концевому азоту (например, N6 из производного лизина, или N5, N4 или N3 из производного, содержащего более короткую алкильную боковую цепь) боковой цепи аминокислоты посредством алкильной цепи. В некоторых вариантах осуществления UAA включает тетразин, присоединенный к концевому азоту боковой цепи аминокислоты посредством алкильной цепи. В некоторых вариантах осуществления UAA включает азид или тетразин, присоединенный к амиду посредством алкильного линкера. В некоторых вариантах осуществления UAA представляет собой азид- или тетразинсодержащий карбамат или амид 3-аминоаланина, серина, лизина или их производного. В некоторых вариантах осуществления такие UAA встраивают в цитокины in vivo. В некоторых вариантах осуществления такие UAA встраивают в цитокины в бесклеточной системе.

Конъюгирующие фрагменты

[00261] В определенных вариантах осуществления в данном документе раскрываются конъюгирующие фрагменты, которые связаны с одним или несколькими цитокинами (например, интерлейкинами, IFN или TNF), описанными выше. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент представляет собой молекулу, которая нарушает взаимодействие цитокина с его рецептором. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент представляет собой любую молекулу, которая при связывании с цитокином позволяет конъюгату цитокина модулировать иммунный ответ. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан с цитокином посредством ковалентной связи. В некоторых случаях описанный в данном документе цитокин присоединен к конъюгирующему фрагменту с помощью триазольной группы. В некоторых случаях описанный в данном документе цитокин присоединен к конъюгирующему фрагменту с помощью дигидропиридазиновой или пиридазиновой группы. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер. В других случаях конъюгирующий фрагмент включает белок или его связывающий фрагмент. В дополнительных случаях конъюгирующий фрагмент включает пептид. В дополнительных случаях конъюгирующий фрагмент включает нуклеиновую кислоту. В дополнительных случаях конъюгирующий фрагмент включает небольшую молекулу. В дополнительных случаях конъюгирующий фрагмент включает биоконъюгат (например, агонист TLR, такой как агонист TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 или TLR9; или синтетический лиганд, такой как Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, поли I:C, поли A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA или флагеллин). В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент увеличивает время полужизни в сыворотке крови и/или улучшает стабильность. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент снижает взаимодействие цитокина с одним или несколькими доменами или субъединицами рецептора цитокина. В дополнительных случаях конъюгирующий фрагмент блокирует взаимодействие цитокина с одним или несколькими доменами или субъединицами своего (своих) когнатного (когнатных) рецептора (рецепторов) цитокина. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе конъюгаты цитокина содержат несколько конъюгирующих фрагментов. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент присоединен к неприродной или природной аминокислоте в пептиде цитокина. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина содержит конъюгирующий фрагмент, присоединенный к природной аминокислоте. В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина присоединен к неприродной аминокислоте в пептиде цитокина. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент присоединен к N- или C-концевой аминокислоте пептида цитокина. В данном документе раскрыты различные комбинации сайтов, например, первый конъюгирующий фрагмент присоединен к неприродной или природной аминокислоте в пептиде цитокина, а второй конъюгирующий фрагмент присоединен к N- или C-концевой аминокислоте пептида цитокина. В некоторых вариантах осуществления один конъюгирующий фрагмент присоединен к нескольким остаткам пептида цитокина (например, к петле). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент присоединен как к N-, так и к C-концевой аминокислоте пептида цитокина.

Водорастворимые полимеры

[00262] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгирующий фрагмент представляет собой водорастворимый полимер. В некоторых случаях водорастворимый полимер является непептидным, нетоксическим и биологически совместимым. В контексте данного документа вещество считается биологически совместимым, если полезные эффекты, связанные с применением вещества отдельно или вместе с другим веществом (например, активным средством, таким как фрагмент цитокина) в сочетании с живыми тканями (например, при введении пациенту), превосходят любые вредные эффекты по оценке клинициста, например, врача, токсиколога или специалиста по клинической разработке. Кроме того, в некоторых случаях водорастворимый полимер является неиммуногенным. В некоторых случаях вещество считается неиммуногенным, если предполагаемое применение вещества in vivo не вызывает нежелательный иммунный ответ (например, антителообразование) или, если иммунный ответ возникает, то такой ответ не считается клинически значимым или важным по оценке клинициста, например, врача, токсиколога или специалиста по клинической разработке.

[00263] В некоторых случаях водорастворимый полимер характеризуется наличием от приблизительно 2 до приблизительно 300 концов. Иллюстративные водорастворимые полимеры включают без ограничения поли(алкиленгликоли), такие как полиэтиленгликоль ("PEG"), поли(пропиленгликоль) ("PPG"), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля и т. п., поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт) (PVA), полиакриламид (PAAm), поли(N-(2-гидроксипропил)метакриламид) (PHPMA), полиметилакриламид (PDAAm), полифосфазен, полиоксазолины ("POZ") (которые описаны в WO 2008/106186), поли(N-акрилоилморфолин) и комбинации любых из вышеперечисленных.

[00264] В некоторых случаях водорастворимый полимер не ограничен конкретной структурой. В некоторых случаях водорастворимый полимер является линейным (например, кэппированным на конце, например, алкокси-PEG или бифункциональный PEG), разветвленным или многолучевым (например, раздвоенный PEG или PEG, присоединенный к ядру полиола), характеризуется дендритным (или звездчатым) строением, каждый с одной или несколькими разрушаемыми связями или без них. Более того, внутренняя структура водорастворимого полимера может быть организована в виде любого количества различных повторяющихся паттернов и может быть выбрана из группы, состоящей из гомополимера, чередующегося сополимера, статистического сополимера, блок-сополимера, чередующегося триполимера, статистического триполимера и блок-триполимера.

[00265] В некоторых случаях водорастворимый полимер представлен длиной повторяющихся полимерных звеньев, например, числом n звеньев полиэтиленгликоля. В некоторых случаях водорастворимый полимер имеет структуру

, где волнистой линией показано присоединение к линкеру, реакционноспособной группе или неприродной аминокислоте, и n составляет 1-5000. В некоторых случаях водорастворимый полимер имеет структуру

, где волнистой линией показано присоединение к линкеру, реакционноспособной группе или неприродной аминокислоте, "Cap" представляет собой кэппирующую группу (например, такую как -OCH₃, -O(C₁-C₆алкил), -SMe, -S(C₁-C₆алкил), -CO₂H, -CO₂(C₁-C₆алкил), -CONH₂, -CONH(C₁-C₆алкил), -CON(C₁-C₆алкил)₂, -NH₂, -SH или OH), и n составляет 1-5000. В некоторых вариантах осуществления n составляет 100-2000, 200-1000, 300-750, 400-600, 450-550, 400-2000, 750-3000 или 100-750. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет по меньшей мере 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или по меньшей мере 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет не более 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или не более 1000. В некоторых вариантах осуществления n представлен как средняя длина водорастворимого полимера.

[00266] В некоторых вариантах осуществления средневесовая молекулярная масса водорастворимого полимера в конъюгате IL-2 составляет от приблизительно 100 дальтон до приблизительно 150000 дальтон. Иллюстративные диапазоны включают, например, средневесовые молекулярные массы в диапазоне от более 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от более 10000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 53000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 25000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 29000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 35000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон и в диапазоне от приблизительно 40000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон.

[00267] Иллюстративные средневесовые молекулярные массы водорастворимого полимера включают значения, составляющие приблизительно 100 дальтон, приблизительно 200 дальтон, приблизительно 300 дальтон, приблизительно 400 дальтон, приблизительно 500 дальтон, приблизительно 600 дальтон, приблизительно 700 дальтон, приблизительно 750 дальтон, приблизительно 800 дальтон, приблизительно 900 дальтон, приблизительно 1000 дальтон, приблизительно 1500 дальтон, приблизительно 2000 дальтон, приблизительно 2200 дальтон, приблизительно 2500 дальтон, приблизительно 3000 дальтон, приблизительно 4000 дальтон, приблизительно 4400 дальтон, приблизительно 4500 дальтон, приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 5500 дальтон, приблизительно 6000 дальтон, приблизительно 7000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 8000 дальтон, приблизительно 9000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 11000 дальтон, приблизительно 12000 дальтон, приблизительно 13000 дальтон, приблизительно 14000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 22500 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 55000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 65000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон и приблизительно 75000 дальтон. Также можно применять разветвленные варианты водорастворимого полимера (например, разветвленный водорастворимый полимер с молекулярным весом 40000 дальтон, состоящий из двух полимеров с молекулярным весом 20000 дальтон), имеющие общий молекулярный вес любого из вышеперечисленных. В одном или нескольких вариантах осуществления конъюгат не будет содержать каких-либо фрагментов PEG, присоединенных, непосредственно или опосредованно, к PEG, имеющему средневесовой молекулярный вес менее чем приблизительно 6000 дальтон.

[00268] Как правило, PEG будут содержать ряд мономеров (OCH₂CH₂) [или мономеров (CH₂CH₂O), в зависимости от того, как определяется PEG]. Применяемое в данном документе количество повторяющихся звеньев обозначается индексом "n" в "(OCH₂CH₂)_n". Таким образом, значение (n) обычно попадает в один или несколько из следующих диапазонов: от 2 до приблизительно 3400, от приблизительно 100 до приблизительно 2300, от приблизительно 100 до приблизительно 2270, от приблизительно 136 до приблизительно 2050, от приблизительно 225 до приблизительно 1930, от приблизительно 450 до приблизительно 1930, от приблизительно 1200 до приблизительно 1930, от приблизительно 568 до приблизительно 2727, от приблизительно 660 до приблизительно 2730, от приблизительно 795 до приблизительно 2730, от приблизительно 795 до приблизительно 2730, от приблизительно 909 до приблизительно 2730 и от приблизительно 1200 до приблизительно 1900. Для любого данного полимера, для которого известен молекулярный вес, можно определить количество повторяющихся звеньев (т.е. "n"), разделив общий средневесовой молекулярный вес полимера на молекулярный вес повторяющегося мономера.

[00269] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер представляет собой полимер, кэппированный на конце, то есть полимер, имеющий по меньшей мере один конец, кэппированный относительно инертной группой, такой как низшая C_1-6алкоксигруппа или гидроксильная группа. Когда полимер представляет собой PEG, например, можно применять метокси-PEG (обычно называемый mPEG), который является линейной формой PEG, где один конец полимера представляет собой метокси(-OCH₃)-группу, тогда как другой конец представляет собой гидроксил или другую функциональную группу, которая необязательно может быть химически модифицирована.

[00270] В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является линейной или разветвленной группой PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является группой метокси-PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной или разветвленной группой метокси-PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной или разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой от приблизительно 100 дальтон до приблизительно 150000 дальтон. Иллюстративные диапазоны включают, например, средневесовые молекулярные массы в диапазоне от более 5000 дальтон до приблизительно 100000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 6000 дальтон до приблизительно 90000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 10000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от более 10000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 20000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 53000 дальтон до приблизительно 85000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 25000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 29000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон, в диапазоне от приблизительно 35000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон и в диапазоне от приблизительно 40000 дальтон до приблизительно 120000 дальтон. Иллюстративные средневесовые молекулярные массы для группы PEG включают значения, составляющие приблизительно 100 дальтон, приблизительно 200 дальтон, приблизительно 300 дальтон, приблизительно 400 дальтон, приблизительно 500 дальтон, приблизительно 600 дальтон, приблизительно 700 дальтон, приблизительно 750 дальтон, приблизительно 800 дальтон, приблизительно 900 дальтон, приблизительно 1000 дальтон, приблизительно 1500 дальтон, приблизительно 2000 дальтон, приблизительно 2200 дальтон, приблизительно 2500 дальтон, приблизительно 3000 дальтон, приблизительно 4000 дальтон, приблизительно 4400 дальтон, приблизительно 4500 дальтон, приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 5500 дальтон, приблизительно 6000 дальтон, приблизительно 7000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 8000 дальтон, приблизительно 9000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 11000 дальтон, приблизительно 12000 дальтон, приблизительно 13000 дальтон, приблизительно 14000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 22500 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 55000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 65000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 75000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 95000 дальтон и приблизительно 100000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой PEG со средней молекулярной массой, раскрытой выше. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой, раскрытой выше. В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является линейной или разветвленной группой PEG с определенной молекулярной массой ± 10%, или 15%, или 20%, или 25%. Например, в объем настоящего изобретения включены конъюгаты IL-2, содержащие группу PEG, имеющую молекулярную массу 30000 Да ± 3000 Да, или 30000 Да ± 4500 Да, или 30000 Да ± 6000 Да.

[00271] В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является линейной или разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной или разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 5500 дальтон, приблизительно 6000 дальтон, приблизительно 7000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 8000 дальтон, приблизительно 9000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 11000 дальтон, приблизительно 12000 дальтон, приблизительно 13000 дальтон, приблизительно 14000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 22500 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 55000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 65000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 75000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 95000 дальтон и приблизительно 100000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной или разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной или разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон.

[00272] В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 5500 дальтон, приблизительно 6000 дальтон, приблизительно 7000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 8000 дальтон, приблизительно 9000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 11000 дальтон, приблизительно 12000 дальтон, приблизительно 13000 дальтон, приблизительно 14000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 22500 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 55000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 65000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 75000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 95000 дальтон и приблизительно 100000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 5000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 10000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 20000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 30000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 50000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является линейной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является линейной группой метокси-PEG с определенной молекулярной массой ± 10%, или 15%, или 20%, или 25%. Например, в объем настоящего изобретения включены конъюгаты IL-2, содержащие линейную группу метокси-PEG, имеющую молекулярную массу, составляющую 30000 Да ± 3000 Да, или 30000 Да ± 4500 Да, или 30000 Да ± 6000 Да.

[00273] В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой от приблизительно 5000 дальтон до приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 5500 дальтон, приблизительно 6000 дальтон, приблизительно 7000 дальтон, приблизительно 7500 дальтон, приблизительно 8000 дальтон, приблизительно 9000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 11000 дальтон, приблизительно 12000 дальтон, приблизительно 13000 дальтон, приблизительно 14000 дальтон, приблизительно 15000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 22500 дальтон, приблизительно 25000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 35000 дальтон, приблизительно 40000 дальтон, приблизительно 45000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон, приблизительно 55000 дальтон, приблизительно 60000 дальтон, приблизительно 65000 дальтон, приблизительно 70000 дальтон, приблизительно 75000 дальтон, приблизительно 80000 дальтон, приблизительно 90000 дальтон, приблизительно 95000 дальтон и приблизительно 100000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой, составляющей приблизительно 5000 дальтон, приблизительно 10000 дальтон, приблизительно 20000 дальтон, приблизительно 30000 дальтон, приблизительно 50000 дальтон или приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 5000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 10000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 20000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 30000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 50000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG является разветвленной группой метокси-PEG со средней молекулярной массой приблизительно 60000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления группа PEG, содержащаяся в конъюгатах IL-2, раскрываемых в данном документе, является разветвленной группой метокси-PEG с определенной молекулярной массой ± 10%, или 15%, или 20%, или 25%. Например, в объем настоящего изобретения включены конъюгаты IL-2, содержащие разветвленную группу метокси-PEG, имеющую молекулярную массу, составляющую 30000 Да ± 3000 Да, или 30000 Да ± 4500 Да, или 30000 Да ± 6000 Да.

[00274] В некоторых вариантах осуществления иллюстративные водорастворимые полимеры включают без ограничения линейный или разветвленный дискретный PEG (dPEG) от Quanta Biodesign, Ltd, линейные, разветвленные или раздвоенные PEG от Nektar Therapeutics и Y-образные производные PEG от JenKem Technology.

[00275] В некоторых вариантах осуществления полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанного в данном документе, конъюгирован с водорастворимым полимером, выбранным из поли(алкиленгликолей), с таким как полиэтиленгликоль ("PEG"), поли(пропиленгликоль) ("PPG"), сополимерый этиленгликоля и пропиленгликоля и т. п., поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт) (PVA), полиакриламид (PAAm), полиметилакриламид (PDAAm), поли(N-(2-гидроксипропил)метакриламид) (PHPMA), полифосфазен, полиоксазолины ("POZ"), поли(N-акрилоилморфолин) и их комбинация. В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с PEG (например, пегилирован). В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с PPG. В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с POZ. В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с PVP.

[00276] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2, описанный в данном документе, конъюгирован с водорастворимым полимером, выбранным из поли(алкиленгликоли), с таким как полиэтиленгликоль ("PEG"), поли(пропиленгликоль) ("PPG"), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля и т. п., поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт) (PVA), полиакриламид (PAAm), полиметилакриламид (PDAAm), поли(N-(2-гидроксипропил)метакриламид) (PHPMA), полифосфазен, полиоксазолины ("POZ"), поли(N-акрилоилморфолин) и их комбинация. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PEG (например, пегилирован). В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PPG. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с POZ. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PVP.

[00277] В некоторых случаях водорастворимый полимер включает полиглицерин (PG). В некоторых случаях полиглицерин представляет собой гиперразветвленный PG (HPG) (например, как описано в Imran, et al. "Influence of architecture of high molecular weight linear and branched polyglycerols on their biocompatibility and biodistribution," Biomaterials 33:9135-9147 (2012)). В других случаях полиглицерин представляет собой линейный PG (LPG). В дополнительных случаях полиглицерин представляет собой полуфункциональный PG, линейно-блочно-гиперразветвленный PG (например, как описано в Wurm et. Al., "Squaric acid mediated synthesis and biological activity of a library of linear and hyperbranched poly(glycerol)-protein conjugates," Biomacromolecules 13:1161-1171 (2012)) или PG с функциональными боковыми цепями (например, как описано в Li, et. al., "Synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials for bioconjugation," Bioconjugate Chem. 20:780-789 (2009).

[00278] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанный в данном документе, конъюгирован с PG, например, HPG, LPG, полуфункциональным PG, линейно-блочно-гиперразветвленным PG или PG с функциональными боковыми цепями. В некоторых случаях цитокин представляет собой полипептид IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PG, полуфункциональным PG, линейно-блочно-гиперразветвленным PG.

[00279] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер представляет собой разрушаемую синтетическую альтернативу PEG. Иллюстративные разрушаемые синтетические альтернативы PEG включают без ограничения поли[олиго(этиленгликоль)метилметакрилат] (POEGMA); производные PEG с модифицированным остовом, полученные с помощью полимеризации телехелатных или функционализированных с обоих концов макромономеров на основе PEG; производные PEG, включающие сомономеры, содержащие разрушаемую связь, такие как сополимер [(этиленоксида) и (метилeнэтиленоксида)][P(EO-co-MEO)], циклические ацетали кетена, такие как 5,6-бензо-2-метилен-1,3-диоксепан (BMDO), 2-метилeн-1,3-диоксепан (MDO) и 2-метилeн-4-фенил-1,3-диоксолан (MPDL), сополимеризованные с OEGMA; или поли(этиленоксид) с привитым поли(ε-капролактоном) (PCL-g-PEO).

[00280] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанный в данном документе, конъюгирован с разрушаемым синтетическим альтернативным PEG, таким как, например, POEGM; с производными PEG с модифицированным остовом, полученными с помощью полимеризации телехелатных или функционализированных с обоих концов макромономеров на основе PEG; P(EO-co-MEO); циклическими ацеталями кетена, такими как BMDO, MDO и MPDL, сополимеризованные с OEGMA; или PCL-g-PEO. В некоторых случаях цитокин представляет собой полипептид IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с разрушаемым синтетическим альтернативным PEG, таким как, например, POEGM; с производными PEG с модифицированным остовом, полученными с помощью полимеризации телехелатных или функционализированных с обоих концов макромономеров на основе PEG; P(EO-co-MEO); циклическими ацеталями кетена, такими как BMDO, MDO и MPDL, сополимеризованные с OEGMA; или PCL-g-PEO.

[00281] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает поли(цвиттер-ионы). Иллюстративные поли(цвиттер-ионы) включают без ограничения поли(сульфобетаинметакрилат) (PSBMA), поли(карбоксибетаинметакрилат) (PCBMA) и поли(2-метакрилоилоксиэтилфосфорилхолин) (PMPC). В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанный в данном документе, конъюгирован с поли(цвиттер-ионом), таким как PSBMA, PCBMA или PMPC. В некоторых случаях цитокин представляет собой полипептид IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с поли(цвиттер-ионом), таким как PSBMA, PCBMA или PMPC.

[00282] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает поликарбонат. Иллюстративные поликарбонаты включают без ограничения пентафторфенил-5-метил-2-оксо-1,3-диоксан-5-карбоксилат (MTC-OC₆F₅). В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанный в данном документе, конъюгирован с поликарбонатом, таким как MTC-OC₆F₅. В некоторых случаях цитокин представляет собой полипептид IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с поликарбонатом, таким как MTC-OC₆F₅.

[00283] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает гибрид полимеров, такой как, например, гибрид полимеров поликарбонат/PEG, конъюгат полимера пептид/белок или гидроксилсодержащий и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер (например, гидроксилсодержащий и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер PEG). В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанный в данном документе, конъюгирован с гибридом полимеров, таким как гибрид полимеров поликарбонат/РEG, конъюгат пептид/белок-полимер или гидроксилсодержащий и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер (например, гидроксилсодержащий и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер PEG). В некоторых случаях цитокин представляет собой полипептид IL-2. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с гибридом полимеров, таким как гибрид полимеров поликарбонат/РEG, конъюгат пептид/белок-полимер или гидроксилсодержащий и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер (например, гидроксилсодержащий и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер PEG).

[00284] В некоторых случаях водорастворимый полимер включает полисахарид. Иллюстративные полисахариды включают без ограничения декстран, полисиаловую кислоту (PSA), гиалуроновую кислоту (HA), амилозу, гепарин, гепарансульфат (HS), декстрин или гидроксиэтилкрахмал (HES). В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с полисахаридом. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с декстраном. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PSA. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с HA. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с амилозой. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с гепарином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с HS. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с декстрином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с HES.

[00285] В некоторых случаях водорастворимый полимер включает гликан. Иллюстративные классы гликанов включают N-связанные гликаны, O-связанные гликаны, гликолипиды, O-GlcNAc и гликозаминогликаны. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с гликаном. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с N-связанными гликанами. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с O-связанными гликанами. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с гликолипидами. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с O-GlcNAc. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с гликозаминогликанами.

[00286] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полимер полиоксазолина. Полимер полиоксазолина представляет собой линейный синтетический полимер и, как и PEG, характеризуется низкой полидисперсностью. В некоторых случаях полимер полиоксазолин представляет собой полидисперсный полимер полиоксазолин, имеющий среднюю молекулярную массу. В некоторых случаях средний молекулярная масса полимера полиоксазолина составляет, например, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 10,000, 12,000, 20,000, 35,000, 40,000, 50,000, 60,000, 100,000, 200,000, 300,000, 400,000, или 500,000 Да. В некоторых случаях полимер полиоксазолина предусматривает поли(2-метил-2-оксазолин) (PMOZ), поли(2-этил-2-оксазолин) (PEOZ) или поли(2-пропил-2-оксазолин) (PPOZ). В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с полимером полиоксазолином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с полимером полиоксазолином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PMOZ. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PEOZ. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с PPOZ.

[00287] В некоторых случаях водорастворимый полимер включает собой полимер на основе полиакриловой кислоты. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с полимером на основе полиакриловой кислоты. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с полимером на основе полиакриловой кислоты.

[00288] В некоторых случаях водорастворимый полимер включает полиамин. Полиамин представляет собой органический полимер, содержащий две или более первичные аминогруппы. В некоторых вариантах осуществления полиамин включает разветвленный полиамин, линейный полиамин или циклический полиамин. В некоторых случаях полиамин представляет собой низкомолекулярный линейный полиамин. Иллюстративные полиамины включают путресцин, кадаверин, спермидин, спермин, этилендиамин, 1,3-диаминопропан, гексаметилендиамин, тетраэтилметилендиамин и пиперазин. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с полиамином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с полиамином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с путресцином, кадаверином, спермидином, спермином, этилендиамином, 1,3-диаминопропаном, гексаметилендиамином, тетраэтилметилендиамином или пиперазином.

[00289] В некоторых случаях водорастворимый полимер описан в патентах США №№ 7744861, 8273833 и 7803777. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с линкером, описанным в патентах США №№ 7744861, 8273833 или 7803777. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с линкером, описанным в патентах США №№ 7744861, 8273833 или 7803777.

Липиды

[00290] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгирующий фрагмент представляет собой липид. В некоторых случаях липид представляет собой жирную кислоту. В некоторых случаях жирная кислота представляет собой насыщенную жирную кислоту. В других случаях жирная кислота представляет собой ненасыщенную жирную кислоту. Иллюстративные жирные кислоты включают без ограничения жирные кислоты, содержащие от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых случаях липид связывается с одним или несколькими белками сыворотки крови, тем самым повышая стабильность в сыворотке крови и/или время полужизни в сыворотке крови.

[00291] В некоторых вариантах осуществления липид конъюгирован с IL-2. В некоторых случаях липид представляет собой жирную кислоту, например, насыщенную жирную кислоту или ненасыщенную жирную кислоту. В некоторых случаях жирная кислота содержит от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых случаях жирная кислота содержит приблизительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 26 атомов углерода в длину. В некоторых случаях жирная кислота предусматривает капроновую кислоту (гексановую кислоту), энантовую кислоту (гептановую кислоту), каприловую кислоту (октановую кислоту), пеларгоновую кислоту (нонановую кислоту), каприновую кислоту (декановую кислоту), ундециловую кислоту (ундекановую кислоту), лауриновую кислоту (додекановую кислоту), тридециловую кислоту (тридекановую кислоту), миристиновую кислоту (тетрадекановую кислоту), пентадециловую кислоту (пентадекановую кислоту), пальмитиновую кислоту (гексадекановую кислоту), маргариновую кислоту (гептадекановую кислоту), стеариновую кислоту (октадекановую кислоту), нонадециловую кислоту (нонадекановую кислоту), арахидиновую кислоту (эйкозановую кислоту), генейкозиловую кислоту (генейкозановую кислоту), бегеновую кислоту (докозановую кислоту), трикозиловую кислоту (трикозановую кислоту), лигноцериновую кислоту (тетракозановую кислоту), пентакозиловую кислоту (пентакозановую кислоту) или церотовую кислоту (гексакозановую кислоту).

[00292] В некоторых вариантах осуществления липидный конъюгат IL-2 повышает стабильность в сыворотке крови и/или время полужизни в сыворотке крови.

Белки

[00293] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгирующий фрагмент представляет собой белок или его связывающий фрагмент. Иллюстративные белки включают альбумин, трансферрин или транстиретин. В некоторых случаях белок или его связывающий фрагмент включает предусматривает антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых случаях конъюгат цитокина содержит белок или его связывающий фрагмент. В некоторых случаях конъюгат IL-2, содержащий белок или его связывающий фрагмент, характеризуется увеличенным временем полужизни в сыворотке крови и/или повышенной стабильностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2, содержащий белок или его связывающий фрагмент, характеризуется сниженным взаимодействием IL-2 с одной или несколькими субъединицами IL-2R. В дополнительных случаях белок или его связывающий фрагмент блокирует взаимодействие IL-2 с одной или несколькими субъединицами IL-2R.

[00294] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой альбумин. Альбумин представляет собой семейство водорастворимых глобулярных белков. Обычно он обнаруживается в плазме крови, составляя приблизительно 55-60% от всех белков плазмы крови. Человеческий сывороточный альбумин (HSA) представляет собой полипептид из 585 аминокислот, в котором третичная структура разделена на три домена: домен I (аминокислотные остатки 1-195), домен II (аминокислотные остатки 196-383) и домен III (аминокислотные остатки 384-585). Каждый домен дополнительно содержит сайт связывания, который способен обратимо или необратимо взаимодействовать с эндогенными лигандами, такими как длинно- и среднецепочечные жирные кислоты, билирубин или гемин, или экзогенными соединениями, такими как гетероциклические или ароматические соединения.

[00295] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с альбумином. В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с человеческим сывороточным альбумином (HSA). В дополнительных случаях полипептид цитокина конъюгирован с функциональным фрагментом альбумина.

[00296] В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с альбумином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с человеческим сывороточным альбумином (HSA). В дополнительных случаях полипептид IL-2 конъюгирован с функциональным фрагментом альбумина.

[00297] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой трансферрин. Трансферрин представляет собой полипептид из 679 аминокислот, который имеет размер приблизительно 80 кДа и содержит два сайта связывания Fe³⁺, один из которых находится в N-концевом домене, а другой - в C-концевом домене. В некоторых случаях человеческий трансферрин характеризуется временем полужизни, составляющим приблизительно 7-12 дней.

[00298] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с трансферрином. В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с человеческим трансферрином. В дополнительных случаях полипептид цитокина конъюгирован с функциональным фрагментом трансферрина.

[00299] В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с трансферрином. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с человеческим трансферрином. В дополнительных случаях полипептид IL-2 конъюгирован с функциональным фрагментом трансферрина.

[00300] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой транстиретин (TTR). Транстиретин представляет собой транспортный белок, расположенный в сыворотке крови и спинномозговой жидкости, который транспортирует тиреоидный гормон тироксин (T₄) и ретинол-связывающий белок, связанный с ретинолом.

[00301] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с транстиретином (посредством одного из его концов или посредством внутреннего шарнирного участка). В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с функциональным фрагментом транстиретина.

[00302] В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с транстиретином (посредством одного из его концов или посредством внутреннего шарнирного участка). В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с функциональным фрагментом транстиретина.

[00303] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент, мышиное антитело или его связывающий фрагмент, химерное антитело или его связывающий фрагмент, моноклональное антитело или его связывающий фрагмент, моновалентный Fab', бивалентный Fab₂, F(ab)'₃-фрагменты, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантитело, миниантитело, наноантитело, триантитело, тетраантитело, гумаантитело, дисульфид-стабилизированный белок Fv (dsFv), однодоменное антитело (sdAb), Ig NAR, верблюжье антитело или его связывающий фрагмент, биспецифическое антитело или его связывающий фрагмент или их химически модифицированное производное.

[00304] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит scFv, бис-scFv, (scFv)₂, dsFv или sdAb. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит scFv. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит бис-scFv. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит (scFv)₂. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит dsFv. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит sdAb.

[00305] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит Fc-часть антитела, например, IgG, IgA, IgM, IgE или IgD. В некоторых случаях фрагмент содержит Fc-часть IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄).

[00306] В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях полипептид цитокина конъюгирован с гуманизированным антителом или его связывающим фрагментом, мышиным антителом или его связывающим фрагментом, химерным антителом или его связывающим фрагментом, моноклональным антителом или его связывающим фрагментом, моновалентным Fab', бивалентным Fab₂, F(ab)'₃-фрагментами, одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантителом, миниантителом, наноантителом, триантителом, тетраантителом, гумаантителом, дисульфид-стабилизированным белком Fv (dsFv), однодоменным антителом (sdAb), Ig NAR, верблюжьим антителом или его связывающим фрагментом, биспецифическим антителом или его связывающим фрагментом или их химически модифицированным производным. В дополнительных случаях полипептид цитокина конъюгирован с Fc-частью антитела. В дополнительных случаях полипептид цитокина конъюгирован с Fc-частью IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄).

[00307] В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с гуманизированным антителом или его связывающим фрагментом, мышиным антителом или его связывающим фрагментом, химерным антителом или его связывающим фрагментом, моноклональным антителом или его связывающим фрагментом, моновалентным Fab', бивалентным Fab₂, F(ab)'₃-фрагментами, одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантителом, миниантителом, наноантителом, триантителом, тетраантителом, гумаантителом, дисульфид-стабилизированным белком Fv (dsFv), однодоменным антителом (sdAb), Ig NAR, верблюжьим антителом или его связывающим фрагментом, биспецифическим антителом или его связывающим фрагментом или их химически модифицированным производным. В дополнительных случаях полипептид IL-2 конъюгирован с Fc-частью антитела. В дополнительных случаях полипептид IL-2 конъюгирован с Fc-частью IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄).

[00308] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 конъюгирован с водорастворимым полимером (например, PEG) и антителом или его связывающим фрагментом. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент, мышиное антитело или его связывающий фрагмент, химерное антитело или его связывающий фрагмент, моноклональное антитело или его связывающий фрагмент, моновалентный Fab', бивалентный Fab₂, F(ab)'₃-фрагменты, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантитело, миниантитело, наноантитело, триантитело, тетраантитело, гумаантитело, дисульфид-стабилизированный белок Fv (dsFv), однодоменное антитело (sdAb), Ig NAR, верблюжье антитело или его связывающий фрагмент, биспецифическое антитело или его связывающий фрагмент или их химически модифицированное производное. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают scFv, бис-scFv, (scFv)₂, dsFv или sdAb. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают scFv. В некоторых случаях антитело или его связывающий фрагмент направляет конъюгат IL-2 к представляющей интерес целевой клетке, а водорастворимый полимер повышает его стабильность и/или время полужизни в сыворотке крови.

[00309] В некоторых случаях один или несколько конъюгатов полипептида IL-2 и водорастворимого полимера (например, PEG) дополнительно связаны с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях соотношение конъюгата IL-2 и антитела составляет приблизительно 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1 или 12:1. В некоторых случаях соотношение конъюгата IL-2 и антитела составляет приблизительно 1:1. В других случаях соотношение конъюгата IL-2 и антитела составляет приблизительно 2:1, 3:1 или 4:1. В дополнительных случаях соотношение конъюгата IL-2 и антитела составляет приблизительно 6:1 или выше.

[00310] В некоторых вариантах осуществления один или несколько конъюгатов полипептида IL-2 и водорастворимого полимера (например, PEG) непосредственно связаны с антителом или его связывающими фрагментами. В других случаях конъюгат IL-2 опосредованно связан с антителом или его связывающими фрагментами посредством линкера. Иллюстративные линкеры включают гомобифункциональные линкеры, гетеробифункциональные линкеры, линкеры на основе малеимида, бесследные линкеры, саморасщепляющиеся линкеры, спейсеры и т.п.

[00311] В некоторых вариантах осуществления антитело или его связывающие фрагменты прямо или опосредованно связаны с частью полипептида IL-2 в конъюгате полипептида IL-2 и водорастворимого полимера (например, PEG). В таких случаях сайт конъюгации антитела с полипептидом IL-2 располагается в сайте, который не будет препятствовать связыванию полипептида IL-2 с IL-2Rβγ. В дополнительных случаях сайт конъюгации антитела с полипептидом IL-2 располагается в участке, который частично блокирует связывание полипептида IL-2 с IL-2Rβγ. В дополнительных случаях сайт конъюгации антитела с полипептидом IL-2 располагается в сайте, который будет препятствовать или еще больше препятствовать связыванию полипептида IL-2 с IL-2Rα. В других вариантах осуществления антитело или его связывающие фрагменты прямо или опосредованно связаны с частью водорастворимого полимера в конъюгате полипептида IL-2 и водорастворимого полимера (например, PEG).

Пептиды

[00312] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгирующий фрагмент представляет собой пептид. В некоторых случаях пептид представляет собой неструктурированный пептид. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с пептидом. В некоторых случаях конъюгат IL-2, содержащий пептид, характеризуется увеличенным временем полужизни в сыворотке крови и/или повышенной стабильностью. В некоторых случаях конъюгат IL-2, содержащий пептид, характеризуется сниженным взаимодействием IL-2 с одной или несколькими субъединицами IL-2R. В дополнительных случаях пептид блокирует взаимодействие IL-2 с одной или несколькими субъединицами IL-2R.

[00313] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент представляет собой пептид XTEN™ (Amunix Operating Inc.), а модификация называется XTENилированием. XTENилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей пептид XTEN™ (Amunix Operating Inc.), длинный неструктурированный гидрофильный пептид, содержащий в разном процентном соотношении шесть аминокислот: Ala, Glu, Gly, Ser и Thr. В некоторых случаях пептид XTEN™ выбирают на основе таких свойств как экспрессия, генетическая стабильность, растворимость, устойчивость к агрегации, увеличенное время полужизни, повышенная эффективность и/или повышенная активность in vitro в комбинации с представляющим интерес полипептидом. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с пептидом XTEN. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с пептидом XTEN.

[00314] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент представляет собой богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP), а модификация называется HAPилированием. HAPилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP). В некоторых случаях полимер HAP содержит повторяющийся мотив (Gly₄Ser)_n (SEQ ID NO: 85) и иногда его длина составляет приблизительно 50, 100, 150, 200, 250, 300 или больше. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с HAP. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с HAP.

[00315] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой полипептид PAS, и модификация называется PASизированием. PASилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид PAS. Полипептид PAS представляет собой гидрофильный незаряженный полипептид, состоящий из остатков Pro, Ala и Ser. В некоторых случаях длина полипептида PAS составляет по меньшей мере приблизительно 100, 200, 300, 400, 500 или 600 аминокислот. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с полипептидом PAS. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с полипептидом PAS.

[00316] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой эластин-подобный полипептид (ELP), и модификация называется ELPилированием. ELPилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей эластин-подобный полипептид (ELP). ELP содержит повторяющийся мотив VPGxG (SEQ ID NO: 86), в котором x представляет собой любую аминокислоту за исключением пролина. В некоторых случаях полипептид цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) конъюгирован с ELP. В некоторых случаях полипептид IL-2 конъюгирован с ELP.

[00317] В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент представляет собой пептид CTP. Пептид CTP предусматривает пептид из 31 аминокислотного остатка, а именно FQSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ (SEQ ID NO: 87), в котором S* обозначает сайты O-гликозилирования (OPKO). В некоторых случаях пептид CTP генетически слит с полипептидом цитокина (например, полипептидом IL-2). В некоторых случаях полипептид цитокина (например, полипептид IL-2) конъюгирован с пептидом CTP.

[00318] В некоторых вариантах осуществления цитокин (например, полипептид IL-2) модифицирован посредством глутамилирования. Глутамилирование (или полиглутамилирование) представляет собой обратимую посттрансляционную модификацию глутамата, при которой γ-карбоксильная группа глутамата образует подобную пептидной связь с аминогруппой свободного глутамата, в котором α-карбоксильная группа переходит в полиглутаматную цепь.

[00319] В некоторых вариантах осуществления цитокин (например, полипептид IL-2) модифицирован с помощью полимера желатин-подобного белка (GLK). В некоторых случаях полимер GLK содержит несколько повторов Gly-Xaa-Yaa, где Xaa и Yaa преимущественно содержат пролин и 4-гидроксипролин соответственно. В некоторых случаях полимер GLK дополнительно содержит аминокислотные остатки Pro, Gly, Glu, Qln, Asn, Ser и Lys. В некоторых случаях длина полимера GLK составляет приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 остатков или больше.

Дополнительные конъюгирующие фрагменты

[00320] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит внеклеточный биомаркер. В некоторых случаях внеклеточный биомаркер представляет собой опухолевый антиген. В некоторых случаях иллюстративный внеклеточный биомаркер предусматривает CD19, PSMA, B7-H3, B7-H6, CD70, CEA, CSPG4, EGFRvIII, EphA3, EpCAM, EGFR, ErbB2 (HER2), FAP, FRα, GD2, GD3, Lewis-Y, мезотелин, Muc1, Muc16, ROR1, TAG72, VEGFR2, CD11, Gr-1, CD204, CD16, CD49b, CD3, CD4, CD8 и B220. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент связан или конъюгирован с цитокином (например, IL-2). В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент является генетически слитым, например на N-конце или C-конце, с цитокином (например, IL-2).

[00321] В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит молекулу с посттрансляционной модификацией. В некоторых случаях примеры посттрансляционной модификации включают миристоилирование, пальмитоилирование, изопренилирование (или пренилирование) (например, фарнезилирование или геранилгеранилирование), глипирование, ацилирование (например, O-ацилирование, N-ацилирование, S-ацилирование), алкилирование (например, дополнительными алкильными группами, такими как метильные или этильные группы), амидирование, гликозилирование, гидроксилирование, йодирование, добавление нуклеотидов, окисление, фосфорилирование, сукцинилирование, сульфатирование, гликозилирование, карбамилирование, глутамилирование или дезамидирование. В некоторых случаях цитокин (например, IL-2) модифицирован посредством посттрансляционной модификации, такой как миристоилирование, пальмитоилирование, изопренилирование (или пренилирование) (например, фарнезилирование или геранилгеранилирование), глипирование, ацилирование (например, O-ацилирование, N-ацилирование, S-ацилирование), алкилирование (например, дополнительными алкильными группами, такими как метильные или этильные группы), амидирование, гликозилирование, гидроксилирование, йодирование, добавление нуклеотидов, окисление, фосфорилирование, сукцинилирование, сульфатирование, гликозилирование, карбамилирование, глутамилирование или дезамидирование.

Конъюгация

Линкеры

[00322] В некоторых вариантах осуществления применимые функциональные реакционноспособные группы для конъюгации или связывания конъюгирующего фрагмента с полипептидом цитокина (например, полипептидом IL-2), описанным в данном документе, включают, например, линкеры нулевого или более высокого порядка. В некоторых случаях неприродная аминокислота, встроенная в описанный в данном документе интерлейкин, содержит функциональную реакционноспособную группу. В некоторых случаях линкер содержит функциональную реакционноспособную группу, которая реагирует с неприродной аминокислотой, встроенной в описанный в данном документе интерлейкин. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит функциональную реакционноспособную группу, которая реагирует с неприродной аминокислотой, встроенной в описанный в данном документе интерлейкин. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит функциональную реакционноспособную группу, которая реагирует с линкером (необязательно предварительно присоединенным к пептиду цитокина), описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит реакционноспособную группу, которая вступает в реакцию с природной аминокислотой в пептиде цитокина, описанном в данном документе. В некоторых случаях линкеры более высокого порядка предусматривают бифункциональные линкеры, такие как гомобифункциональные линкеры или гетеробифункциональные линкеры. Иллюстративные гомобифункциональные линкеры включают без ограничения реагент Ломанта, представляющий собой дитиобис(сукцинимидилпропионат) DSP, 3'3'-дитиобис(сульфосукцинимидилпропионат (DTSSP), дисукцинимидилсуберат (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберат (BS), дисукцинимидилтартрат (DST), дисульфосукцинимидилтартрат (сульфо-DST), этиленгликобис(сукцинимидилсукцинат) (EGS), дисукцинимидилглутарат (DSG), N, N'-дисукцинимидилкарбонат (DSC), диметиладипимидат (DMA), диметилпимелимидат (DMP), диметилсуберимидат (DMS), диметил-3,3'-дитиобиспропионимидат (DTBP), 1,4-ди-3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо)бутан (DPDPB), бисмалеимидогексан (BMH), арилгалогенид-содержащее соединение (DFDNB), такое как, например, 1,5-дифтор-2,4-динитробензол или 1,3-дифтор-4,6-динитробензол, 4,4'-дифтор-3,3'-динитрофенилсульфон (DFDNPS), бис-[β-(4-азидосалициламидо)этил]дисульфид (BASED), формальдегид, глутаральдегид, 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир, дигидразид адипиновой кислоты, карбогидразид, о-толуидин, 3,3′-диметилбензидин, бензидин, α,α′-п-диаминодифенил, дийод-п-ксилолсульфоновую кислоту, N, N′-этилен-бис(йодацетамид) или N, N′-гексаметилен-бис(йодацетамид).

[00323] В некоторых вариантах осуществления бифункциональный линкер предусматривает гетеробифункциональный линкер. Иллюстративный гетеробифункциональный линкер включает без ограничения аминореактивные и сульфгидрильные кросс-линкеры, такие как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (sPDP), длинноцепочечный N-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионат (LC-sPDP), водорастворимый длинноцепочечный N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (сульфо-LC-sPDP), сукцинимидилоксикарбонил-α-метил-α-(2-пиридилдитио)толуол (sMPT), сульфосукцинимидил-6-[α-метил-α-(2-пиридилдитио)толуамидо]гексаноат (сульфо-LC-sMPT), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (sMCC), сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-sMCC), сложный эфир м-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимида (MBs) сложный эфир м-малеимидобензоил-N-гидроксисульфосукцинимида (сульфо-MBs), N-сукцинимидил(4-йодактеил)аминобензоат (sIAB), сульфосукцинимидил(4-йодактеил)аминобензоат (сульфо-sIAB), сукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (sMPB), сульфосукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (сульфо-sMPB), сложный эфир N-(γ-малеимидобутирилокси)сукцинимида (GMBs), сложный эфир N-(γ-малеимидобутирилокси)сульфосукцинимида (сульфо-GMBs), сукцинимидил-6-((йодацетил)амино)гексаноат (sIAX), сукцинимидил-6-[6-(((йодацетил)амино)гексаноил)амино]гексаноат (sIAXX), сукцинимидил-4-(((йодацетил)амино)метил)циклогексан-1-карбоксилат (sIAC), сукцинимидил-6-(((((4-йодацетил)амино)метил)циклогексан-1-карбонил)амино)гексаноат (sIACX), п-нитрофенилйодацетат (NPIA), карбонил-реактивные и сульфгидрил-реактивные кросс-линкеры, такие как гидразид 4-(4-N-малеимидофенил)масляной кислоты (MPBH), 4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилгидразид-8 (M₂C₂H), 3-(2-пиридилдитио)пропионилгидразид (PDPH), аминореактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как N-гидроксисукцинимидил-4-азидосалициловая кислота (NHs-AsA), N-гидроксисульфосукцинимидил-4-азидосалициловая кислота (сульфо-NHs-AsA), сульфосукцинимидил-(4-азидосалициламидо)гексаноат (сульфо-NHs-LC-AsA), сульфосукцинимидил-2-(п-азидосалициламидо)этил-1,3'-дитиопропионат (sAsD), N-гидроксисукцинимидил-4-азидобензоат (HsAB), N-гидроксисульфосукцинимидил-4-азидобензоат (сульфо-HsAB), N-сукцинимидил-6-(4'-азидо-2'-нитрофениламино)гексаноат (sANPAH), сульфосукцинимидил-6-(4'-азидо-2'-нитрофениламино)гексаноат (сульфо-sANPAH), N-5-азидо-2-нитробензоилоксисукцинимид (ANB-NOs), сульфосукцинимидил-2-(м-азидо-о-нитробензамидо)-этил-1,3'-дитиопропионат (sAND), N-сукцинимидил-4-(4-азидофенил)-1,3'-дитиопропионат (sADP), N-сульфосукцинимидил-(4-азидофенил)-1,3'-дитиопропионат (сульфо-sADP), сульфосукцинимидил-4-(п-азидофенил)бутират (сульфо-sAPB), сульфосукцинимидил-2-(7-азидо-4-метилкумарин-3-ацетамид)этил-1,3'-дитиопропионат (sAED), сульфосукцинимидил-7-азидо-4-метилкумарин-3-ацетат (сульфо-sAMCA), п-нитрофенилдиазопируват (ρNPDP), п-нитрофенил-2-диазо-3,3,3-трифторпропионат (PNP-DTP), сульфгидрил-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как 1-(п-азидосалициламидо)-4-(йодацетамидо)бутан (AsIB), N-[4-(п-азидосалициламидо)бутил]-3′-(2′-пиридилдитио)пропионамид (APDP), бензофенон-4-йодацетамид, бензофенон-4-малеимид, карбонил-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как п-азидобензоилгидразид (ABH), карбоксилат-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как 4-(п-азидосалициламидо)бутиламин (AsBA) и аргинин-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как п-азидофенилглиоксаль (APG).

[00324] В некоторых случаях реакционноспособная функциональная группа предусматривает нуклеофильную группу, которая реагирует с электрофильной группой, присутствующей на связывающем фрагменте (например, на конъюгирующем фрагменте или на IL-2). Иллюстративные электрофильные группы включают карбонильные группы, такие как альдегидная, кетонная, карбонильная группа карбоновой кислоты, сложного эфира, амида, енона, ацилгалогенида или ангидрида кислоты. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная функциональная группа представляет собой альдегидную группу. Иллюстративные нуклеофильные группы включают гидразидную, оксимную, амино, гидразинную, тиосемикарбазонную, гидразинкарбоксилатную и арилгидразидную. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота, встроенная в описанный в данном документе интерлейкин, содержит электрофильную группу.

[00325] В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой расщепляемый линкер. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой дипептидный линкер. В некоторых вариантах осуществления дипептидный линкер представляет собой валин-цитруллин (Val-Cit), фенилаланин-лизин (Phe-Lys), валин-аланин (Val-Ala) и валин-лизин (Val-Lys). В некоторых вариантах осуществления дипептидный линкер представляет собой валин-цитруллин.

[00326] В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой пептидный линкер, содержащий, например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или больше аминокислот. В некоторых случаях пептид линкер содержит не более 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или меньше аминокислот. В дополнительных случаях пептидный линкер содержит приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот.

[00327] В некоторых вариантах осуществления линкер содержит саморасщепляющийся линкерный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления саморасщепляющийся линкерный фрагмент включает п-аминобензиловый спирт (PAB), п-аминобензилоксикарбонил (PABC) или их производные или аналоги. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит дипептидный линкерный фрагмент и саморасщепляющийся линкерный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления саморасщепляющийся линкерный фрагмент является таким, как описано в патенте США № 9089614 и заявке согласно WIPO № WO2015038426.

[00328] В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой глюкуронид. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой расщепляемый кислотой линкер. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый кислотой линкер представляет собой гидразин. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой восстанавливаемый линкер.

[00329] В некоторых вариантах осуществления линкер содержит малеимидную группу. В некоторых случаях малеимидную группу также называют малеимидным спейсером. В некоторых случаях малеимидная группа дополнительно содержит капроновую кислоту, образующую малеимидокапроил (mc). В некоторых случаях линкер содержит малеимидокапроил (mc). В некоторых случаях линкер представляет собой малеимидокапроил (mc). В других случаях малеимидная группа включает малеимидометильную группу, такую как сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (sMCC) или сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-sMCC), описанные выше.

[00330] В некоторых вариантах осуществления малеимидная группа представляет собой самостабилизирующийся малеимид. В некоторых случаях в самостабилизирующемся малеимиде применяется диаминопропионовая кислота (DPR) для встраивания основной аминогруппы, смежной с малеимидом, для обеспечения внутримолекулярного катализа гидролиза тиосукцинимидного кольца, тем самым устраняя малеимид в ходе реакции элиминирования посредством обратной реакции Михаэля. В некоторых случаях самостабилизирующийся малеимид представляет собой малеимидную группу, описанную в Lyon, et al., "Self-hydrolyzing maleimides improve the stability and pharmacological properties of antibody-drug conjugates," Nat. Biotechnol. 32(10):1059-1062 (2014). В некоторых случаях линкер содержит самостабилизирующийся малеимид. В некоторых случаях линкер представляет собой самостабилизирующийся малеимид.

Химия конъюгации

[00331] Различные реакции конъюгации применяют для конъюгации линкеров, конъюгирующих фрагментов и неприродных аминокислот, встроенных в пептиды цитокина, описанные в данном документе. Такие реакции конъюгации часто совместимы с водными условиями, такие как "биоортогональные" реакции. В некоторых вариантах осуществления реакции конъюгации опосредуются химическими реагентами, такими как катализаторы, свет или реакционноспособные химические группы, обнаруженные на линкерах, конъюгирующих фрагментах или в неприродных аминокислотах. В некоторых вариантах осуществления реакции конъюгации опосредуются ферментами. В некоторых вариантах осуществления применяемая в данном документе реакция конъюгации описана в Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123. В некоторых вариантах осуществления применяемая в данном документе реакция конъюгации описана в Chen, X.; Wu. Y-W. Org. Biomol. Chem. 2016, 14, 5417.

[00332] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, реакция конъюгации включает реакцию кетона или альдегида с нуклеофилом. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию кетона с аминооксигруппой с образованием оксима. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию кетона с арильной или гетероариламиногруппой с образованием имина. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию альдегида с арильной или гетероариламиногруппой с образованием имина. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации приводит к получению пептида цитокина, содержащего линкер или конъюгирующий фрагмент, присоединенный посредством оксима. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию Пикте-Шпенглера альдегида или кетона с нуклеофилом, представляющим собой триптамин. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию Пикте-Шпенглера с гидразином. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает лигирование по Пикте-Шпенглеру.

[00333] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию азида и фосфина (лигирование по Штаудингеру). В некоторых вариантах осуществления фосфин представляет собой арилфосфин. В некоторых вариантах осуществления арилфосфин содержит группу сложного ортоэфира. В некоторых вариантах осуществления фосфин характеризуется структурой метил-2-(дифенилфосфанил)бензоата. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации приводит к получению пептида цитокина, содержащего линкер или конъюгирующий фрагмент, присоединенный посредством ариламида. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации приводит к получению пептида цитокина, содержащего линкер или конъюгирующий фрагмент, присоединенный посредством амида.

[00334] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию 1,3-диполярного циклоприсоединения. В некоторых вариантах осуществления реакция 1,3-диполярного циклоприсоединения включает реакцию азида и фосфина ("клик"-реакцию). В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации катализируется медью. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации приводит к получению пептида цитокина, содержащего линкер или конъюгирующий фрагмент, присоединенный посредством триазола. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию азида с напряженным олефином. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию азида с напряженным алкином. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию азида с циклоалкином, например, OCT, DIFO, DIFBO, DIBO, BARAC, TMTH или другим напряженным циклоалкином, структуры которого показаны в Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123. В некоторых вариантах осуществления реакция 1,3-диполярного циклоприсоединения катализируется светом ("фотоклик"). В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию концевой аллильной группы с тетразолом на свету. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию концевой алкинильной группы с тетразолом на свету. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию O-аллиламинокислоты с тетразином на свету. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию O-аллилтирозина с тетразином на свету.

[00335] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает

, где X представляет собой положение в конъюгате IL-2, содержащем неприродную аминокислоту, такую как в любой из последовательности под SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33 и 34. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент содержит водорастворимый полимер. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа предусматривает алкин или азид. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает

, где X представляет собой положение в конъюгате IL-2, содержащем неприродную аминокислоту, такую как в любой из последовательности под SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33 и 34. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации, описанная в данном документе, приводит к получению варианта IL-2 из таблицы 20.

[00336] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, реакция конъюгации, описанная в данном документе, предусматривает реакцию циклоприсоединения между азидным фрагментом, таким как фрагмент, содержащийся в белке, содержащем аминокислотный остаток, полученный из N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизина (AzK), и напряженным циклоалкином, таким как полученный из DBCO, который представляет собой химический фрагмент, содержащий группу дибензоциклооктина. Группы PEG, содержащие фрагмент DBCO, являются коммерчески доступными или могут быть получены способами, известными специалистам в данной области техники.

[00337] С помощью реакций конъюгации, таких как клик-реакция, описанных в данном документе, можно создавать один региоизомер или смесь региоизомеров. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 2:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1,5:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1,2:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1,1:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет более чем 1:1.

[00338] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, имеющие структуру формулы (I),

формула (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа и 50 кДа; и

X представляет собой положение аминокислоты рекомбинантного человеческого IL-2, где положение аминокислоты относится к положениям в SEQ ID NO: 1; или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 40 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой K35. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой F42. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой K43. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой E62. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой P65. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой R38. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой T41. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой E68. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой Y45. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X представляет собой V69. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X выбран из K35, F42, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45 и V69. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (I) X выбран из F42, K43, E62 и P65. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под любым из SEQ ID NO: 5-84. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит SEQ ID NO: 15-29. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит SEQ ID NO: 40-54. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит SEQ ID NO: 55-69. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит SEQ ID NO: 70-84. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 34. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 38. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 42. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 43. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 44. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 46. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 48. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 50. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 51. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 52. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 53. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 61. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 69. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 70. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 71. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 75. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 76. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 83. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (I) содержит последовательность под SEQ ID NO: 84.

[00339] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, имеющие структуру формулы (II),

формула (II),

где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа и 30 кДа; и

X представляет собой положение аминокислоты, характеризующееся структурой

рекомбинантного человеческого IL-2, выбранное из F42, K43, E62 и P65, где положение аминокислоты соответствует положениям в SEQ ID NO: 1.

[00340] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, имеющие структуру формулы (III),

формула (III),

где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа и 30 кДа; и

X представляет собой положение аминокислоты, характеризующееся структурой

рекомбинантного человеческого IL-2, выбранное из F42, K43, E62 и P65, где аминокислота соответствует положениям в SEQ ID NO: 1.

[00341] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III)

группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение K43 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение К43 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение E62 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение Е62 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение P65 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение Р65 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2, и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение K43 рекомбинантного человеческого IL-2, и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) X представляет собой положение E62 рекомбинантного человеческого IL-2, и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) положение P65 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) положение K43 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) положение E62 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (II) или формулы (III) положение P65 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под любым из SEQ NO: 3-29 и 70-84. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 70. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 71. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 75. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 76. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 83. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (II) или формулы (III) содержит последовательность под SEQ ID NO: 84.

[00342] В данном документе описаны фармацевтические композиции формулы (I), формулы (II) или формулы (III). В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции формулы (I), формулы (II) или формулы (III) содержат последовательность, предусматривающую любой из SEQ ID NO: 3-29 и 70-84. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции формулы (I), формулы (II) или формулы (III) содержат последовательность, предусматривающую любой из SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции формулы (I), формулы (II) или формулы (III) содержат последовательность, предусматривающую любой из SEQ ID NO: 4.

[00343] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, имеющие структуру формулы (IV),

формула (IV),

где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа и 30 кДа; и

X представляет собой положение аминокислоты, характеризующееся структурой

[00344] В данном документе описаны конъюгаты IL-2, имеющие структуру формулы (V),

формула (V),

где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа и 30 кДа; и

X представляет собой положение аминокислоты, характеризующееся структурой

[00345] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V)

группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение K43 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение К43 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение E62 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение Е62 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение P65 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, и X представляет собой положение Р65 рекомбинантного человеческого IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2, и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение K43 рекомбинантного человеческого IL-2, и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) X представляет собой положение E62 рекомбинантного человеческого IL-2, и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) положение P65 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) положение F42 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) положение K43 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) положение E62 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-2 формулы (IV) или формулы (V) положение P65 рекомбинантного человеческого IL-2 и W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под любым из SEQ ID NO: 3, 4, 40-69. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 42. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 43. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 44. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 46. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 48. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 50. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 51. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 52. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 53. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 61. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 формулы (IV) или формулы (V) содержит последовательность под SEQ ID NO: 69.

[00346] В данном документе описаны фармацевтические композиции формулы (I), формулы (IV) или формулы (V). В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции формулы (I), формулы (IV) или формулы (V) содержат последовательность, предусматривающую любую из SEQ ID NO: 3, 4 и 40-69. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции формулы (I), формулы (IV) или формулы (V) содержат последовательность, предусматривающую SEQ ID NO: 3.

[00347] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию циклоприсоединения с обращенными электронными требованиями, включающую диен и диенофил. В некоторых вариантах осуществления диен включает тетразин. В некоторых вариантах осуществления диенофил включает алкен. В некоторых вариантах осуществления диенофил включает алкин. В некоторых вариантах осуществления алкин представляет собой напряженный алкин. В некоторых вариантах осуществления алкен представляет собой напряженный диен. В некоторых вариантах осуществления алкин представляет собой транс-циклооктин. В некоторых вариантах осуществления алкин представляет собой циклооктен. В некоторых вариантах осуществления алкен представляет собой циклопропен. В некоторых вариантах осуществления алкен представляет собой фторциклопропен. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации приводит к образованию пептида цитокина, присоединенного к линкеру или конъюгирующему фрагменту посредством 6-членного кольцевого гетероцикла, содержащего два атома азота в кольце.

[00348] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию метатезиса олефинов. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию алкена и алкина с рутениевым катализатором. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию двух алкенов с рутениевым катализатором. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию двух алкинов с рутениевым катализатором. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию алкена или алкина с рутениевым катализатором и аминокислотой, содержащей аллильную группу. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию алкена или алкина с рутениевым катализатором и аминокислотой, содержащей аллилсульфид или селенид. В некоторых вариантах осуществления рутениевый катализатор представляет собой катализатор Ховейды-Граббса 2-гопоколения. В некоторых вариантах осуществления реакция метатезиса олефинов включает реакцию одного или нескольких напряженных алкенов или алкинов.

[00349] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию кросс-сочетания. В некоторых вариантах осуществления реакции кросс-сочетания включают катализаторы на основе переходных металлов, таких как иридий, золото, рутений, родий, палладий, никель, платина, или катализатор на основе другого переходного металла, и один или несколько лигандов. В некоторых вариантах осуществления катализаторы на основе переходных металлов являются водорастворимыми. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию кросс-сочетания Сузуки-Мияуры. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию арилгалогенида (или трифлата, или тозилата), арил- или алкенилбороновой кислоты и палладиевого катализатора. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию кросс-сочетания Соногаширы. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию арилгалогенида (или трифлата, или тозилата), алкина и палладиевого катализатора. В некоторых вариантах осуществления реакции перекрестного сочетания приводят к присоединению линкера или конъюгирующего фрагмента к пептиду цитокина посредством углерод-углеродной связи.

[00350] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию снятия защиты или "освобождения" реакционноспособной группы перед конъюгацией. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает освобождение реакционноспособной группы с помощью света с последующей реакцией конъюгации. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа защищена аралкильным фрагментом, содержащим одну или несколько нитрогрупп. В некоторых вариантах осуществления освобождение реакционноспособной группы приводит к образованию свободного амина, сульфида или другой реакционноспособной группы. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает освобождение реакционноспособной группы с помощью катализатора на основе переходного металла с последующей реакцией конъюгации. В некоторых вариантах осуществления катализатор на основе переходного металла содержит палладий и один или несколько лигандов. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа защищена аллильным фрагментом. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа защищена аллильным карбаматом. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа защищена пропаргильным фрагментом. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа защищена пропаргилкарбаматом. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа защищена диенофилом, где воздействие диена (такого как тетразин) приводит к снятию защиты с реакционноспособной группы.

[00351] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает лиганд-направленную реакцию, где лиганд (необязательно), присоединенный к реакционноспособной группе), обеспечивает сайт конъюгации между реакционноспособной группой и пептидом цитокина. В некоторых вариантах осуществления лиганд отщепляется в ходе или после реакции пептида цитокина с реакционноспособной группой. В некоторых вариантах осуществления сайт конъюгации пептида цитокина представляет собой природную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления сайт конъюгации пептида цитокина представляет собой лизин, цистеин или серин. В некоторых вариантах осуществления сайт конъюгации пептида цитокина представляет собой неприродную аминокислоту, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа включает уходящую группу, такую как бедная электронами арильная или гетероарильная группа. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа предусматривает уходящую группу, такую как бедная электронами алкильная группа, которая замещается пептидом цитокина. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию улавливающего радикалы средства с химическим радикалом. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию присоединения окислительного радикала. В некоторых вариантах осуществления улавливающее радикалы средство представляет собой ариламин. В некоторых вариантах осуществления химический радикал представляет собой тирозильный радикал. В некоторых вариантах осуществления химические радикалы генерируются рутениевым катализатором (таким как [Ru(bpy)₃]) и светом.

[00352] Ферментативные реакции необязательно применяются для описанных в данном документе реакций конъюгации. Примеры ферментативных конъюгаций включают конъюгацию, опосредованную SortA, конъюгацию, опосредованную TG, или конъюгацию, опосредованную FGE. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает лигирование нативного белка (NPL) по концевой 1-амино-2-тиогруппе с тиоэфиром с образованием амидной связи.

[00353] В данном документе описаны различные реакции конъюгации для осуществления реакции линкера или конъюгирующего фрагмента с пептидом цитокина, где реакция происходит с природной ("канонической") аминокислотой в пептиде цитокина. В некоторых вариантах осуществления природная аминокислота обнаруживается в положении конъюгации, находящемся в последовательности дикого типа, или, в качестве альтернативы, положение было мутировано. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации предусматривает образование дисульфидной связи в остатке цистеина. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию Михаэля 1,4-присоединения цистеина или лизина. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации предусматривает лигирование цианобензотиазола с цистеином. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает сшивание с ацетоновым фрагментом, таким как 1,3-дихлор-2-пропионон. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает 1,4-присоединение по Михаэлю к дегидроаланину, образованному в реакции цистеина с O-мезитиленсульфонилгидроксиламином. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию тирозина с триазолиндионом (TAD) или производным TAD. В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации включает реакцию триптофана с карбеноидом родия.

Способы применения

Пролиферативные заболевания или состояния

[00354] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения пролиферативного заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата цитокина (например, конъюгата IL-2), описанного в данном документе. В некоторых случаях конъюгат цитокина содержит SEQ ID NO: 5-84. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 15-29. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 40-54. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 55-69. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 70-84. В некоторых случаях конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, где конъюгат IL-2 характеризуется сниженной аффинностью по отношению к субъединице α-рецептора IL-2 (IL-2Rα) по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, который связывается с выделенным и очищенным полипептидом IL-2 в положении аминокислоты, выбранном из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105 и Y107, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях конъюгат IL-2 предпочтительно взаимодействует с субъединицами IL-2Rβ и IL-2Rβγ с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых случаях комплекс IL-2/IL-2Rβγ стимулирует и/или усиливает размножение CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и Т-клеток памяти, NK-клеток и/или NKТ-клеток. В дополнительных случаях размножение Teff-клеток сдвигает соотношение Teff:Treg в сторону популяции Teff. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2, содержащий мутацию в остатке F42, где остаток соответствует положению 42 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00355] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения пролиферативного заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата цитокина (например, конъюгата IL-2), описанного в таблице 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 1-84. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 15-29. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 40-54. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 55-69. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 70-84. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит структуру формулы (I). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит структуру формулы (II). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит структуру формулы (III). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит структуру формулы (IV). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит структуру формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 34. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 38. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 42. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 43. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 44. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 46. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 48. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 50. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 51. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 52. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 53. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 61. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 69. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 70. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 71. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 75. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 76. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 83. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит SEQ ID NO: 84.

[00356] В некоторых вариантах осуществления пролиферативное заболевание или состояние представляет собой рак. В некоторых случаях рак представляет собой солидную опухоль. Иллюстративные солидные опухоли включают без ограничения рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланому, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой метастатический рак. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой рецидивирующий или рефрактерный рак. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой кастрационно-резистентный рак предстательной железы, метастатический кастрационно-резистентный рак предстательной железы или метастатический кастрационно-резистентный рак предстательной железы с дефектами ответа на повреждение ДНК (DDR).

[00357] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанный в данном документе, вводят нуждающемуся в этом субъекту для лечения солидной опухоли. В таких случаях у субъекта имеется рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланома, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой метастатический рак. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой рецидивирующий или рефрактерный рак. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой кастрационно-резистентный рак предстательной железы, метастатический кастрационно-резистентный рак предстательной железы или метастатический кастрационно-резистентный рак предстательной железы с дефектами ответа на повреждение ДНК (DDR).

[00358] В некоторых случаях конъюгат IL-2, описанный в данном документе, вводят нуждающемуся в этом субъекту для лечения солидной опухоли. В таких случаях у субъекта имеется рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланома, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака мочевого пузыря. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака молочной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения колоректального рака. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака пищевода. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака головы и шеи. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака почки. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака легкого. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения меланомы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака яичника. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака поджелудочной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рака предстательной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения кастрационно-резистентного рака предстательной железы, метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы или метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы с дефектами ответа на повреждение ДНК (DDR).

[00359] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения метастатического рака. В некоторых случаях метастатический рак включает метастатический рак мочевого пузыря, метастатический рак кости, метастатический рак головного мозга, метастатический рак молочной железы, метастатический колоректальный рак, метастатический рак пищевода, метастатический рак глаза, метастатический рак головы и шеи, метастатического рак почки, метастатический рак легкого, метастатическую меланому, метастатический рак яичника, метастатический рак поджелудочной железы или метастатический рак предстательной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения метастатического рака мочевого пузыря, метастатического рака кости, метастатического рака головного мозга, метастатического рака молочной железы, метастатического колоректального рака, метастатического рака пищевода, метастатического рака глаза, метастатического рака головы и шеи, метастатического рака почки, метастатического рака легкого, метастатической меланомы, метастатического рака яичника, метастатического рака поджелудочной железы или метастатического рака предстательной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения кастрационно-резистентного рака предстательной железы, метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы или метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы с дефектами ответа на повреждение ДНК (DDR).

[00360] В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рецидивирующего или рефрактерного рака. В некоторых случаях рецидивирующий или рефрактерный рак включает рецидивирующий или рефрактерный рак мочевого пузыря, рецидивирующий или рефрактерный рак кости, рецидивирующий или рефрактерный рак головного мозга, рецидивирующий или рефрактерный рака молочной железы, рецидивирующий или рефрактерный колоректальный рак, рецидивирующий или рефрактерный рак пищевода, рецидивирующий или рефрактерный рак глаза, рецидивирующий или рефрактерный рака головы и шеи, рецидивирующий или рефрактерный рак почки, рецидивирующий или рефрактерный рака легкого, рецидивирующую или рефрактерную меланому, рецидивирующий или рефрактерный рака яичника, рецидивирующий или рефрактерный рака поджелудочной железы или рецидивирующий или рефрактерный рака предстательной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рецидивирующего или рефрактерного рака мочевого пузыря, рецидивирующего или рефрактерного рак кости, рецидивирующего или рефрактерного рака головного мозга, рецидивирующего или рефрактерного рака молочной железы, рецидивирующего или рефрактерного колоректального рака, рецидивирующего или рефрактерного рак пищевода, рецидивирующего или рефрактерного рака глаза, рецидивирующего или рефрактерного рака головы и шеи, рецидивирующего или рефрактерного рака почки, рецидивирующего или рефрактерного рака легкого, рецидивирующей или рефрактерной меланомы, рецидивирующего или рефрактерного рака яичника, рецидивирующего или рефрактерного рака поджелудочной железы или рецидивирующего или рефрактерного рака предстательной железы.

[00361] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой ранее не леченный рак. В таких случаях ранее не леченный рак представляет рак, ранее не леченный с помощью терапии. В некоторых случаях ранее не леченный рак представляет собой солидную опухоль, такую как рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланома, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения ранее не леченной солидной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту конъюгата цитокина (например, конъюгата IL-2), описанного в данном документе.

[00362] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование включает лейкоз, лимфому или миелому. В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой T-клеточное злокачественное новообразование. В других случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой B-клеточное злокачественное новообразование. Иллюстративные гематологические злокачественные новообразования включают без ограничения хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), фолликулярную лимфому (FL), диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому (DLBCL), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемию Вальденстрема, множественную миелому, экстранодальную В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, нодальную В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, лимфому Беркитта, В-клеточную неберкиттовскую лимфому высокой степени злокачественности, первичную медиастинальную B-клеточную лимфому (PMBL), иммунобластную крупноклеточную лимфому, В-лимфобластную лимфому из клеток-предшественников, пролимфоцитарный В-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарную лимфому, лимфому из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточную миелому, плазмоцитому, медиастинальную (тимическую) крупноклеточную В-клеточную лимфому, внутрисосудистую крупноклеточную В-клеточную лимфому, первичную эффузионную лимфому или лимфоматоидный гранулематоз.

[00363] В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой метастатический рак. В некоторых случаях метастатический рак представляет собой метастатическое T-клеточное злокачественное новообразование или метастатическое B-клеточное злокачественное новообразование.

[00364] В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рецидивирующий или рефрактерный рак. В некоторых случаях рецидивирующий или рефрактерный рак представляет собой рецидивирующее или рефрактерное T-клеточное злокачественное новообразование или рецидивирующее или рефрактерное В-клеточное злокачественное новообразование.

[00365] В некоторых случаях цитокин (например, интерлейкин, IFN или TNF), описанный в данном документе, вводят нуждающемуся в этом субъекту для лечения гематологического злокачественного новообразования. В некоторых случаях у субъекта имеется T-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется В-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (SLL), фолликулярная лимфома (FL), диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома (DLBCL), лимфома из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемия Вальденстрема, множественная миелома, экстранодальная В-клеточная лимфома из клеток краевой зоны, нодальная В-клеточная лимфома из клеток краевой зоны, лимфома Беркитта, В-клеточная неберкиттовская лимфома высокой степени злокачественности, первичная медиастинальная B-клеточная лимфома (PMBL), иммунобластная крупноклеточная лимфома, В-лимфобластная лимфома из клеток-предшественников, пролимфоцитарный В-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарная лимфома, лимфома из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточная миелома, плазмоцитома, медиастинальная (тимическая) крупноклеточная В-клеточная лимфома, внутрисосудистая крупноклеточная В-клеточная лимфома, первичная эффузионная лимфома или лимфоматоидный гранулематоз.

[00366] В некоторых случаях описанный в данном документе конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту для лечения гематологического злокачественного новообразования. В некоторых случаях у субъекта имеется T-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется В-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (SLL), фолликулярная лимфома (FL), диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома (DLBCL), лимфома из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемия Вальденстрема, множественная миелома, экстранодальная В-клеточная лимфома из клеток краевой зоны, нодальная В-клеточная лимфома из клеток краевой зоны, лимфома Беркитта, В-клеточная неберкиттовская лимфома высокой степени злокачественности, первичная медиастинальная B-клеточная лимфома (PMBL), иммунобластная крупноклеточная лимфома, В-лимфобластная лимфома из клеток-предшественников, пролимфоцитарный В-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарная лимфома, лимфома из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточная миелома, плазмоцитома, медиастинальная (тимическая) крупноклеточная В-клеточная лимфома, внутрисосудистая крупноклеточная В-клеточная лимфома, первичная эффузионная лимфома или лимфоматоидный гранулематоз. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения CLL. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения SLL. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения FL. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения DLBCL. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения MCL. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения макроглобулинемии Вальденстрема. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения множественной миеломы. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения лимфомы Беркитта.

[00367] В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения метастатического гематологического злокачественного новообразования. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения метастатического T-клеточного злокачественного новообразования. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения метастатического B-клеточного злокачественного новообразования. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения метастатического хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (SLL), фолликулярной лимфомы (FL), диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы (DLBCL), лимфомы из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемии Вальденстрема, множественной миеломы, экстранодальной В-клеточной лимфомы из клеток краевой зоны, нодальной В-клеточной лимфомы из клеток краевой зоны, лимфомы Беркитта, В-клеточной неберкиттовской лимфомы высокой степени злокачественности, первичной медиастинальной B-клеточной лимфомы (PMBL), иммунобластной крупноклеточной лимфомы, В-лимфобластной лимфомы из клеток-предшественников, пролимфоцитарного В-клеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы, лимфомы из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточной миеломы, плазмоцитомы, медиастинальной (тимической) крупноклеточной В-клеточной лимфомы, внутрисосудистой крупноклеточной В-клеточной лимфомы, первичной эффузионной лимфомы или метастатического лимфоматоидного гранулематоза.

[00368] В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рецидивирующего или рефрактерного гематологического злокачественного новообразования. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рецидивирующего или рефрактерного T-клеточного злокачественного новообразования. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рецидивирующего или рефрактерного В-клеточного злокачественного новообразования. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту для лечения рецидивирующего или рефрактерного хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (SLL), фолликулярной лимфомы (FL), диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы (DLBCL), лимфомы из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемии Вальденстрема, множественной миеломы, экстранодальной В-клеточной лимфомы из клеток краевой зоны, нодальной В-клеточной лимфомы из клеток краевой зоны, лимфомы Беркитта, В-клеточной неберкиттовской лимфомы высокой степени злокачественности, первичной медиастинальной B-клеточной лимфомы (PMBL), иммунобластной крупноклеточной лимфомы, В-лимфобластной лимфомы из клеток-предшественников, пролимфоцитарного В-клеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы, лимфомы из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточной миеломы, плазмоцитомы, медиастинальной (тимической) крупноклеточной В-клеточной лимфомы, внутрисосудистой крупноклеточной В-клеточной лимфомы, первичной эффузионной лимфомы или лимфоматоидного гранулематоза.

Дополнительные терапевтические средства

[00369] В некоторых вариантах осуществления субъекту дополнительно вводят дополнительное терапевтическое средство. В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно с конъюгатом цитокина (например, конъюгатом IL-2). В других случаях дополнительное терапевтическое средство и конъюгат IL-2 вводят последовательно, например, конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят перед дополнительным терапевтическим средством или конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят после введения дополнительного терапевтического средства.

[00370] В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство включает химиотерапевтическое средство, иммунотерапевтическое средство, средство для таргетной терапии, лучевую терапию или их комбинацию. Иллюстративные дополнительные терапевтические средства включают без ограничения алкилирующие средства, такие как альтретамин, бусульфан, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, циклофосфамид, дакарбазин, ломустин, мелфалан, оксалаплатин, темозоломид или тиотепа; антиметаболиты, такие как 5-фторурацил (5-FU), 6-меркаптопурин (6-MP), капецитабин, цитарабин, флоксуридин, флударабин, гемцитабин, гидроксимочевина, метотрексат или пеметрексед; антрациклины, такие как даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин или идарубицин; ингибиторы топоизомеразы I, такие как топотекан или иринотекан (СРТ-11); ингибиторы топоизомеразы II, такие как этопозид (VP-16), тенипозид или митоксантрон; ингибиторы митоза, такие как доцетаксел, эстрамустин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин или винорелбин; или кортикостероиды, такие как преднизон, метилпреднизолон или дексаметазон.

[00371] В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство включает терапию первой линии. Применяемый в данном документе термин "терапия первой линии" включает первичное лечение субъекта с раком. В некоторых случаях рак представляет собой первичный рак. В других случаях рак представляет собой метастатический или рецидивирующий рак. В некоторых случаях терапия первой линии включает химиотерапию. В других случаях лечение первой линии включает лучевую терапию. Квалифицированный специалист легко поймет, что разные способы лечения первой линии могут быть применимы к различным типам рака.

[00372] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с дополнительным терапевтическим средством, выбранным из алкилирующего средства, такого как альтретамин, бусульфан, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, циклофосфамид, дакарбазин, ломустин, мелфалан, оксалаплатин, темозоломид или тиотепа; антиметаболита, такого как 5-фторурацил (5-FU), 6-меркаптопурин (6-MP), капецитабин, цитарабин, флоксуридин, флударабин, гемцитабин, гидроксимочевина, метотрексат или пеметрексед; антрациклина, такого как даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин или идарубицин; ингибитора топоизомеразы I, такого как топотекан или иринотекан (СРТ-11); ингибитора топоизомеразы II, такого как этопозид (VP-16), тенипозид или митоксантрон; ингибитора митоза, такого как доцетаксел, эстрамустин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин или винорелбин; или кортикостероида, такого как преднизон, метилпреднизолон или дексаметазон.

[00373] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2), описанный в данном документе, вводят с ингибитором фермента поли-АДФ-рибозополимеразы (PARP). Иллюстративные ингибиторы PARP включают без ограничения олапариб (AZD-2281, Lynparza®, от Astra Zeneca), рукапариб (PF-01367338, Rubraca®, от Clovis Oncology), нирапариб (MK-4827, Zejula®, от Tesaro), талазопариб (BMN-673, от BioMarin Pharmaceutical Inc.), велипариб (ABT-888, от AbbVie), CK-102 (ранее CEP 9722, от Teva Pharmaceutical Industries Ltd.), E7016 (от Eisai), инипариб (BSI 201, от Sanofi) и памипариб (BGB-290, от BeiGene). В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят в комбинации с ингибитором PARP, таким как олапариб, рукапариб, нирапариб, талазопариб, велипариб, СК-102, E7016, инипариб или памипариб.

[00374] В некоторых случаях описанный в данном документе конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с ингибитором контрольных точек иммунного ответа. Иллюстративные ингибиторы контрольных точек иммунного ответа включают

[00375] ингибиторы PD-L1, такие как MPDL3280A (RG7446) от Genentech, мышиное антитело к PD-L1, клон 10F.9G2 (номер по каталогу BE0101) от BioXcell, моноклональное антитело к PD-L1 MDX-1105 (BMS-936559) и BMS-935559 от Bristol-Myer's Squibb, MSB0010718C, мышиное антитело к PD-L1, клон 29E.2A3, MEDI4736 от AstraZeneca, атезолизумаб (также известный как Tecentriq®), бавелизумаб (также известный как Imfinzi®) и авелумаб (также известный как Bavencio®);

[00376] ингибиторы PD-L2, такие как AMP-224 (амплиммун) от GlaxoSmithKline и rHIgM12B7;

[00377] ингибиторы PD-1, такие как мышиное антитело PD-1, клон J43, (номер по каталогу BE0033-2) от BioXcell, мышиное антитело к PD-1, клон RMP1-14, (номер по каталогу BE0146) от BioXcell, мышиное антитело к PD-1, клон EH12, мышиное антитело к PD-1, MK-3475 (Keytruda, пембролизумаб, ламбролизумаб) от Merck, антитело к PD-1 от AnaptysBio, известное как ANB011, антитело MDX-1 106 (ONO-4538), моноклональное антитело ниволумаб на основе человеческого IgG4 (Opdivo®, BMS-936558, MDX1106) от Bristol-Myers Squibb, AMP-514 и AMP-224 от AstraZeneca, цемиплимаб от Regeneron и пидилизумаб (CT-011) от CureTech Ltd;

[00378] ингибиторы CTLA-4, такие как антитело ипилимумаб к CTLA-4 (также известное как Yervoy®, MDX-010, BMS-734016 и MDX-101) от Bristol Myers Squibb, антитело к CTLA4, клон 9H10, от Millipore, тремелимумаб (CP-675,206, тицилимумаб) от Pfizer и антитело к CTLA4, клон BNI3, от Abcam;

[00379] ингибиторы LAG3, такие как антитело к Lag-3, клон eBioC9B7W, (C9B7W) от eBioscience, антитело LS-B2237 к Lag3 от LifeSpan Biosciences, IMP321 (ImmuFact) от Immutep, антитело к Lag3 BMS-986016 и химерное антитело к LAG-3 A9H12;

[00380] ингибиторы B7-H3, такие как MGA271;

[00381] ингибиторы KIR, такие как лирилумаб (IPH2101);

[00382] ингибиторы CD137, такие как урелумаб (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), PF-05082566 (к 4-1BB, PF-2566, Pfizer) или XmAb-5592 (Xencor);

[00383] ингибиторы PS, такие как бавитуксимаб;

[00384] а также ингибиторы, такие как антитело или его фрагменты (например, моноклональное антитело, человеческое, гуманизированное или химерное антитело), молекулы для RNAi или небольшие молекулы к TIM3, CD52, CD30, CD20, CD33, CD27, OX40, GITR, ICOS, BTLA (CD272), CD160, 2B4, LAIR1, TIGHT, LIGHT, DR3, CD226, CD2 или SLAM.

[00385] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят в комбинации с пембролизумабом, ниволумабом, тремелимумабом или ипилимумабом.

[00386] В некоторых случаях описанный в данном документе конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с антителом, таким как алемтузумаб, трастузумаб, ибритумомаб тиуксетан, брентуксимаб ведотин, адо-трастузумаб эмтанзин или блинатумомаб.

[00387] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с дополнительным терапевтическим средством, выбранным из агониста рецептора. В некоторых случаях агонист рецептора включает лиганд Toll-подобного рецептора (TLR). В некоторых случаях лиганд TLR включает TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 или TLR9. В некоторых случаях лиганд TLR включает синтетический лиганд, такой как, например, Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, поли I:C, поли A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA или флагеллин. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с одним или несколькими агонистами TLR, выбранными из TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 и TLR9. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с одним или несколькими агонистами TLR, выбранными из Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, поли I:C, поли A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA и флагеллина.

[00388] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют в сочетании с терапией, заключающейся в адоптивном переносе Т-клеток (ACT). В одном варианте осуществления ACT включает идентификацию аутологичных Т-лимфоцитов у субъекта, например, с противоопухолевой активностью, размножение аутологичных Т-лимфоцитов in vitro и последующую реинфузию размноженных Т-лимфоцитов субъекту. В другом варианте осуществления ACT включает применение аллогенных Т-лимфоцитов, например, с противоопухолевой активностью, размножение Т-лимфоцитов in vitro и последующую инфузию размноженных аллогенных Т-лимфоцитов субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2), описанный в данном документе, используют в сочетании с аутологичными Т-лимфоцитами в качестве части ACT-терапии. В других случаях описанный в данном документе конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют в сочетании с аллогенными Т-лимфоцитами в качестве части ACT-терапии. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят одновременно с ACT-терапией нуждающемуся в этом субъекту. В других случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят последовательно с АСТ-терапией нуждающемуся в этом субъекту.

[00389] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют для ex vivo активации и/или размножения аутологичных и/или аллогенных Т-клеток при переносе. В таких случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют для активации и/или размножения образца, содержащего аутологичные и/или аллогенные Т-клетки, и конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) необязательно удаляют из образца до введения образца нуждающемуся в этом субъекту.

[00390] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с вакциной. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют в комбинации с онколитическим вирусом. В таких случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) действует как стимулирующее средство для модуляции иммунного ответа. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют с онколитическим вирусом как часть адъювантной терапии. Иллюстративные онколитические вирусы включают T-Vec (Amgen), G47Δ (Todo ≡et al.), JX-594 (Sillajen), CG0070 (Cold Genesys) и реолизин (Oncolytics Biotech). В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют в комбинации с онколитическим вирусом, таким как T-Vec, G47Δ, JX-594, CG0070 или реолизин.

[00391] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят в комбинации с лучевой терапией.

[00392] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят в комбинации с хирургическим вмешательством.

Патогенные инфекции

[00393] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения патогенной инфекции у нуждающегося в этом субъекта который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата цитокина (например, конъюгата IL-2), описанного в данном документе. В некоторых случаях конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, где конъюгат IL-2 характеризуется сниженной аффинностью по отношению к субъединице α-рецептора IL-2 (IL-2Rα) по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, который связывается с выделенным и очищенным полипептидом IL-2 в положении аминокислоты, выбранном из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105 и Y107, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях конъюгат IL-2 преимущественно взаимодействует с субъединицей IL-2Rβ и IL-2Rβγ с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ, который стимулирует и/или усиливает размножение CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, NK-клеток и/или NKТ-клеток. В дополнительных случаях конъюгат IL-2 облегчает распознавание патогенного очага CD8+ T-клетками. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2, содержащий мутацию в остатке F42, где остаток соответствует положению 42 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00394] В некоторых вариантах осуществления патогенная инфекция представляет собой вирусную инфекцию, при которой после лечения посредством противовирусной терапии вирусного резервуара (например, покоящиеся CD4+ Т-клетки) сохраняется в получавшем лечение хозяине. В таких случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2), описанный в данном документе, индуцирует распознавание вирусного резервуара CD8+ Т-клетками (или цитотоксическими Т-клетками). В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют как монотерапию для перенаправления CD8+ Т-клеток на инфицированные покоящиеся клетки с целью их устранения. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) используют в комбинации с дополнительной терапией для перенаправления CD8+ Т-клеток на инфицированные покоящиеся клетки с целью их устранения. Иллюстративная дополнительная терапия включает препараты для противовирусного лечения, такие как ацикловир, бривудин, докосанол, фамцикловир, фоскарнет, идоксуридин, пенцикловир, трифлуридин, валацикловир и прителивир.

[00395] В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой ДНК-вирус, или РНК-вирус. ДНК-вирусы включают вирусы, содержащие однонитевые (он) ДНК, вирусы, содержащие двухнитевые (дн) ДНК, или ДНК-вирусы, которые содержат участки онДНК и днДНК. РНК-вирусы включают вирусы, содержащие однонитевые (он) РНК, вирусы, содержащие двухнитевые (дн) РНК. В некоторых случаях онРНК-вирусы дополнительно подразделяют на вирусы с положительно-смысловой РНК или вирусы с отрицательно-смысловой РНК.

[00396] Иллюстративные днДНК-вирусы включают вирусы из семейства Myoviridae, Podoviridae, Siphoviridae, Alloherpesviridae, Herpesviridae, Malacoherpesviridae, Lipothrixviridae, Rudiviridae, Adenoviridae, Ampullaviridae, Ascoviridae, Asfaviridae, Baculoviridae, Bicaudaviridae, Clavaviridae, Corticoviridae, Fuselloviridae, Globuloviridae, Guttaviridae, Hytrosaviridae, Iridoviridae, Marseilleviridae, Mimiviridae, Nimaviridae, Pandoraviridae, Papillomaviridae, Phycodnaviridae, Plasmaviridae, Polydnaviruses, Polyomaviridae, Poxviridae, Sphaerolipoviridae, и Tectiviridae.

[00397] Иллюстративные онДНК-вирусы включают вирусы из семейства Anelloviridae, Bacillariodnaviridae, Bidnaviridae, Circoviridae, Geminiviridae, Inoviridae, Microviridae, Nanoviridae, Parvoviridae, и Spiraviridae.

[00398] Иллюстративные ДНК-вирусы, которые содержат участки онДНК и днДНК, включают вирусы из группы Pleolipoviruses. В некоторых случаях Рleolipoviruses включают Haloarcula hispanica pleomorphic virus 1, Halogeometricum pleomorphic virus 1, Halorubrum pleomorphic virus 1, Halorubrum pleomorphic virus 2, Halorubrum pleomorphic virus 3, и Halorubrum pleomorphic virus 6.

[00399] Иллюстративные днДНК-вирусы включают из семейства Birnaviridae, Chrysoviridae, Cystoviridae, Endornaviridae, Hypoviridae, Megavirnaviridae, Partitiviridae, Picobirnaviridae, Reoviridae, Rotavirus, и Totiviridae.

[00400] Иллюстративные положительно-смысловые онРНК-вирусы включают вирусы из семейства Alphaflexiviridae, Alphatetraviridae, Alvernaviridae, Arteriviridae, Astroviridae, Barnaviridae, Betaflexiviridae, Bromoviridae, Caliciviridae, Carmotetraviridae, Closteroviridae, Coronaviridae, Dicistroviridae, Flaviviridae, Gammaflexiviridae, Iflaviridae, Leviviridae, Luteoviridae, Marnaviridae, Mesoniviridae, Narnaviridae, Nodaviridae, Permutotetraviridae, Picornaviridae, Potyviridae, Roniviridae, Retroviridae, Secoviridae, Togaviridae, Tombusviridae, Tymoviridae, и Virgaviridae.

[00401] Иллюстративные отрицательно-смысловые онРНК-вирусы включают вирусы из семейства Arenaviridae, Bornaviridae, Bunyaviridae, Filoviridae, Nyamiviridae, Ophioviridae, Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, и Rhabdoviridae.

[00402] В некоторых вариантах осуществления патогенная инфекция вызвана вирусом лейкоза Абельсона, вирусом мышиного лейкоза Абельсона, вирусом Абельсона, вирусом острого ларинготрахеобронхита, вирусом реки Аделаиды, группой аденоассоциированного вируса, аденовирусом, вирусом африканской болезни лошадей, вирусом африканской лихорадки свиней, вирусом ВИЧ, парвовирусом алеутской болезни норок, альфаретровирусом, альфавирусом, вирусом, родственным ALV, вирусом Амапари, афтовирусом, аквареовирусом, арбовирусом, арбовирусом C, арбовирусом группы A, арбовирусом группы B, группой аренавирусов, вирусом аргентинской геморрагической лихорадки, вирусом аргентинской геморрагической лихорадки, артеривирусом, астровирусом, группой герпевируса Ателин, вирусом болезни Ауески, аура-вирусом, вирусом болезни Аусдук, лиссавирусом австралийских летучих мышей, авиаденовирусом, вирусом эритробластоза птиц, вирусом инфекционного бронхита птиц, вирусом лейкемии птиц, вирусом лейкоза птиц, вирусом лимфоматоза птиц, вирусом миелобластоза птиц, парамиксовирусом птиц, вирусом пневмочумы птиц, вирусом ретикулоэндотелиоза птиц, вирусом саркомы птиц, группой ретровирусов птиц типа С, авигепаднавирусом, авипоксвирусом, вирусом В, вирусом В19, вирусом Бабанки, герпесвирусом бабуинов, бакуловирусом, вирусом леса Барма, вирусом Бебару, вирусом Берримах, бетаретровирусом, бирнавирусом, вирусом Биттнера, вирусом ВК, вирусом канала Блек Крик, вирусом блютанг, вирусом боливийской геморрагической лихорадки, вирусом болезни Вома, вирусом пограничной болезни овец, борнавирусом, вирусом герпеса крупного рогатого скота 1, вирусом герпеса крупного рогатого скота 2, бычьим коронавирусом, вирусом бычьей эфемерной лихорадки, бычьим вирусом иммунодефицита, вирусом бычьей лейкемии, вирусом бычьего лейкоза, вирусом бычьего мамиллита, бычьим папилломавирусом, вирусом бычьего папулезного стоматита, бычьим парвовирусом, бычьим синцитиальным вирусом, бычьим онковирусом типа С, вирусом бычьей диареи, вирусом Багги-Крик, группой палочковидных вирусов, надгруппой вирусов Буньямвера, буньявирусом, вирусом лимфомы Беркитта, вирусом лихорадки Бвамба, вирусом CA, калицивирусом, вирусом калифорнийского энцефалита, вирусом оспы верблюдов, вирусом оспы канареек, вирусом герпеса собак, коронавирусом собак, вирусом чумы собак, герпесвирусом собак, мелким вирусом собак, парвовирусом собак, вирусом Кано Дельгатидо, вирусом козьего артрита, вирусом козьего энцефалита, вирусом герпеса коз, каприпоксвирусом, кардиовирусом, герпесвирусом свинковых грызунов 1, герпевирусом Cercopithecidae 1, герпевирусом мартышковых 1, герпевирусом мартышковых 2, вирусом Чандипура, вирусом Чангинола, вирусом, вызывающим болезнь у проточного сома, вирусом Шарлевиль, вирусом ветряной оспы, вирусом чикунгунья, вирусом герпеса шимпанзе, реовирусом голавля, вирусом кеты, вирусом Кокал, реовирусом кижуча, вирусом коитальной экзантемы, вирусом колорадской клещевой лихорадки, колтивирусом, вирусом Колумбия SK, вирусом, острые респираторные заболевания, вирусом контагиозной эктимы, вирусом контагиозного пустулезного дерматита, коронавирусом, вирусом летучих мышей, вирусом насморка, вирусом оспы коров, вирусом Коксаки, CPV (вирусом цитоплазматического полиэдроза), вирусом паралича сверчка, вирусом конго-крымской геморрагической лихорадки, вирусом псевдокрупа, Cryptovirus, циповирусом, цитомегаловирусом, группой цитомегаловирусов, вирусом цитоплазматического полиэдроза, папилломавирусом оленей, дельтаретровирусом, вирусом Денге, денсовирусом, депендовирусом, вирусом Дхори, вирусом diploma, вирусом дрозофилы С, вирусом гепатита В уток, вирусом гепатита 1 уток, вирусом гепатита 2 уток, дуовирусом, вирусом Дувенхаге, вирусом деформации крыла DWV, вирусом восточного энцефаломиелита лошадей, вирусом восточного энцефаломиелита лошадей, вирусом ЕВ, вирусом Эбола, вирусом, подобным вирусу Эбола, вирусом группы ECHO, ECHO-вирусом, ECHO-вирусом 10, ECHO-вирусом 28, ECHO-вирусом 9, вирусом эктромелии, вирусом ЕЕЕ, вирусом EIA, вирусом EIA, вирусом энцефалита, вирусом группы энцефаломиокардита, вирусом энцефаломиокардита, энтеровирусом, вирусом, повышающим уровень ферментов, вирусом, повышающим уровень ферментов (LDH), вирусом эпидемической геморрагической лихорадки, вирусом эпизоотической геморрагической болезни, вирусом Эпштейна-Барра, вирусом герпеса лошадей 1, вирусом герпеса лошадей 4, вирусом герпеса лошадей 2, вирусом, вызывающим аборт у кобыл, вирусом артериита лошадей, вирусом энцефалоза лошадей, вирусом инфекционной анемии лошадей, морбилливирусом лошадей, вирусом ринопневмонии лошадей, риновирусом лошадей, вирусом Эубенангу, папилломавирусом лося, вирусом Европейской чумы свиней, вирусом Эверглейдса, вирусом Eyach, вирусом герпеса кошачьих 1, калицивирусом кошек, вирусом фибросаркомы кошек, вирусом герпеса кошек, вирусом иммунодефицита кошек, вирусом кошачьего инфекционного перитонита, вирусом лейкоза/саркомы кошек, вирусом лейкоза кошек, вирусом панлейкопении кошек, парвовирусом кошек, вирусом саркомы кошек, синцитиальный вирусом кошек, филовирусом, вирусом Фландерс, флавивирусом, вирусом ящура, вирусом Форт Морган, хантавирусом Фор Корнерс, аденовирусом кур 1, вирусом оспы кур, вирусом Френда, гаммаретровирусом, вирусом гепатита GB, вирусом GB, немецкий вирусом кори, вирусом Гета, вирусом лейкоза гиббонов, вирусом железистой лихорадки, вирусом оспы коз, вирусом золотистого синца, вирусом Гономета, парвовирусом гусей, вирусом гранулеза, вирусом Гросса, вирусом гепатита В земляных белок, арбовирусом группы А, вирусом Гуанарито, цитомегаловирусом морских свинок, вирусом типа С морских свинок, вирусом Хантаан, хантавирусом, реовирусом моллюска, вирусом фибромы кроликов, HCMV (цитомегаловирусом человека), вирусом гемадсорбции 2, японским гемагглютинирующим вирусом, вирусом геморрагической лихорадки, вирусом хендра, генипаравирусами, гепаднавирусом, вирусом гепатита А, группа вирусов гепатита В, вирусом гепатита С, вирусом гепатита D, вирусом гепатита дельта, вирусом гепатита Е, вирусом гепатита F, вирусом гепатита G, вирусом гепатита, не относящимся к А и В, вирусом гепатита, вирусом гепатита (не относящимся к человеку), реовирусом гепатоэнцефаломиелита 3, гепатовирусом, вирусом гепатита В цапли, вирусом герпеса В, вирусом простого герпеса, вирусом простого герпеса 1, вирусом простого герпеса 2, герпесвирусом, герпесвирусом 7, герпесвирусом ателес, герпесвирусом человека, герпесвирусной инфекцией, вирусом герпеса саймири, Herpesvirus suis, Herpesvirus varicellae, вирусом Хайлендс-Джи, рабдовирусом Хирам, вирусом холеры свиней, аденовирусом человека 2, альфагерпевирусом человека 1, альфагерпевирусом человека 2, альфагерпевирусом человека 3, лимфотропным вирусом человека В, бета-герпесвирусом человека 5, коронавирусом человека, группой цитомегаловируса человека, спумавирусом человека, гамма-герпесвирусом человека 4, гамма-герпесвирусом человека 6, вирусом гепатита А человека, группой герпесвирусов человека 1, группой герпесвирусов человека 2, группой герпесвирусов человека 3, группой герпесвирусов человека 4, герпесвирусом человека 6, герпесвирусом человека 8, вирусом иммунодефицита человека, вирусом иммунодефицита человека 1, вирусом иммунодефицита человека 2, папилломавирусом человека, вирусом Т-клеточного лейкоза человека, вирусом Т-клеточного лейкоза человека I, вирусом Т-клеточного лейкоза человека II, вирусом Т-клеточного лейкоза человека III, вирусом Т-клеточной лимфомы человека I, вирусом Т-клеточной лимфомы человека II, лимфотропным вирусом Т-клеток человека типа 1, лимфотропным вирусом Т-клеток человека типа 2, лимфотропным вирусом Т-клеток человека I, лимфотропным вирусом Т-клеток человека II, лимфотропным вирусом Т-клеток человека III, ихновирусом, вирусом детского гастроэнтерита, вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, вирусом инфекционного гематопоэтического некроза, вирусом инфекционного панкреатического некроза, вирусом гриппа А, вирусом гриппа В, вирусом гриппа С, вирусом гриппа D, вирусом гриппа рг8, вирусом радужности насекомых, вирусом насекомых, иридовирусом, японским вирусом В, вирусом японского энцефалита, вирусом JC, вирусом лихорадки Хунин, герпесвирусом, ассоциированным с саркомой Капоши, вирусом Кемерово, вирусом крыс Килхэм, вирусом Кламат, вирусом Колонго, вирусом корейской геморрагической лихорадки, вирусом кумба, вирусом болезни Кьясанурского леса, вирусом Кызылагач, вирусом Ла-Кросс, вирусом, повышающим уровень лактатдегидрогеназы, вирусом лактатдегидрогеназы, вирусом Лагос Бат, вирусом Лангур, парвовирусом кролика, вирусом лихорадки Ласса, вирусом Ласса, латентным вирусом крыс, вирусом LCM, вирусом Лики, лентивирусом, лепорипоксвирусом, вирусом лейкоза, лейковирусом, вирусом нодулярного дерматита, вирусом, ассоциированным с лимфаденопатией, лимфокриптовирусом, вирусом лимфоцитарного хориоменингита, группой вирусов лимфопролиферативной болезни, вирусом Мачупо, вирусом бульбарного паралича, группа онковирусов типа В млекопитающих, ретровирусами типа В млекопитающих, ретровирусами типа С млекопитающих, ретровирусами типа D млекопитающих, вирусом опухолей молочных желез, вирусом Мапуэра, вирусом, вызывающим "марбургскую болезнь", вирусом, подобным вирусу вызывающему "марбургскую болезнь", вирусом обезьян Мэйзена-Пфейзера, мастаденовирусом, вирусом Майаго, вирусом ME, вирусом кори, вирусом Менангл, вирусом Менго, менговирусом, вирусом Миддельбург, вирусом ложной коровьей оспы, вирусом энтерита норок, мелкий вирусом мышей, вирусом, связанным с MLV, вирусом ММ, вирусом Мокола, Molluscipoxvirus, вирусом контагиозного моллюска, вирусом обезьян В, вирусом оспы обезьян, Mononegavirales, Morbillivirus, вирусом летучих мышей горы Элгон, мышиным цитомегаловирусом, вирусом мышиного энцефаломиелита, вирусом мышиного гепатита, мышиным вирусом К, вирусом мышиного лейкоза, вирусом мышиной опухоли молочных железы, мышиным мелким вирусом, вирусом мышиной пневмонии, вирусом мышиного полиомиелита, мышиным полиомавирусом, вирусом мышиной саркомы, вирусом оспы мышей, мозамбикским вирусом, вирусом Мукамбо, вирусом болезни слизистых оболочек, вирусом эпидемического паротита, бета-герпевирусом мышиных 1, цитомегаловирусом мышиных 2, группой цитомегаловирусов мышиных, вирусом мышиного энцефаломиелита, вирусом гепатита мышей, вирусом мышиного лейкоза, вирусом мышиных, вызывающий узелки, мышиным полиомавирусом, вирусом саркомы мышей, Muromegalovirus, вирусом энцефалита долины Муррея, вирусом миксомы, миксовирусом, мультиформным миксовирусом, миксовирусом паротита, вирусом болезни найробианских овец, найровирусом, Nanimavirus, вирусом Нарива, вирусом Ндумо, вирусом Нитлинг, вирусом Нельсон Бей, нейротропным вирусом, аренавирусом Нового Света, вирусом пневмонита новорожденных, вирусом болезни Ньюкасла, вирусом Нипа, нецитопатогенным вирусом, вирусом Norwalk, вирусом ядерного полиэдроза (NPV), вирусом “nipple neck”, вирусом о'Нъонг-нъонг, вирусом Окельбо, онкогенным вирусом, онкогенной вирусоподобной частицей, онкорнавирусом, орбивирусом, вирусом Orf, вирусом Оропуч, ортогепаднавирусом, ортомиксовирусом, ортопоксвирусом, ортореовирусом, вирусом Орунго, папилломавирусом овец, вирусом катаральной лихорадки овец, герпесвирусом трехполосого дурукули, вирусом Пальям, папилломавирусом, Papillomavirus sylvilagi, паповавирусом, вирусом парагриппа, вирусом парагриппа типа 1, вирусом парагриппа типа 2, вирусом парагриппа типа 3, вирусом парагриппа типа 4, парамиксовирусом, парапоксвирусом, вирусом паравакцины, парвовирусом, парвовирусом В19, группой парвовирусов, пестивирусом, флебовирусом, вирусом чумы тюленей, пикоднавирусом, пикорнавирусом, цитомегаловирусом свиней и вирусом оспы голубей, вирусом Пири, вирусом Пиксуна, вирусом пневмонии мышей, пневмовирусом, вирусом полиомиелита, полиовирусом, полиднавирусом, полиэдрическим вирусом, вирусом полиомы, полиомавирусом, бычьим полиомавирусом, полиомавирусом мартышек, полиомавирусом человека 2, полиомавирусом макаков 1, полиомавирусом мышиных 1, полиомавирусом мышиных 2, полиомавирусом бабуинов 1, полиомавирусом бабуинов 2, полиомавирусом кролика, герпесвирусом орангутанов 1, вирусом эпидемической диареи свиней, вирусом гемагглютинирующего энцефаломиелита свиней, парвовирусом свиней, вирусом трансмиссивного гастроэнтерита свиней, вирусом типа С свиней, поксвирусом, Poxvirus, Poxvirus variolae, вирусом Проспект Хилл, провирусом, вирусом псевдооспы коров, вирусом псевдобешенства, вирусом psittacinepox, вирусом quailpox, вирусом фибромы кроликов, вакуолизирующим вирусом почек кролика, папилломавирусом кролика, вирусом бешенства, парвовирусом енота, вирусом оспы енота, вирусом Раникхет, цитомегаловирусом крыс, парвовирусом крыс, крысиным вирусом, вирусом Раушер, рекомбинантным вирусом коровьей оспы, рекомбинантным вирусом, реовирусом, реовирусом 1, реовирусом 2, реовирусом 3, вирусом типа С рептилий, вирусом респираторной инфекции, респираторно-синцитиальным вирусом, респираторным вирусом, вирусом ретикулоэндотелиоза, Rhabdovirus, Rhabdovirus carpia, Rhadinovirus, Rhinovirus, Rhizidiovirus, вирусом лихорадки долины Рифт, вирусом Райли, вирусом чумы, РНК-содержащим онкогенным вирусом, вирусом Росс-Ривер, ротавирусом, вирусом кори, вирусом саркомы Рауса, вирусом краснухи, вирусом кори, рубивирусом, вирусом русского осеннего энцефалита, вирусом обезьян SA 11, вирусом SA2, вирусом Сабиа, вирусом Сагияма, Saimirine herpesvirus 1, вирусом слюнных желез, группой вирусов флеботомной лихорадки, вирусом Санджимба, вирусом SARS, SDAV (вирусом сиалодакриоаденита), вирусом оспы тюленей, вирусом леса Семлики, вирусом Сеул, вирусом оспы овец, вирусом фибромы Шоупа, папилломавирусом Шоупа, вирусом пенистости обезьян, вирусом гепатита А обезьян, вирусом иммунодефицита обезьян и человека, вирусом иммунодефицита обезьян, вирусом парагриппа обезьян, лимфотропным Т-клеточным вирусом обезьян, вирусом обезьян, вирусом обезьян 40, Simplexvirus, вирусом Син Номбре, вирусом Синдбис, вирусом натуральной оспы, вирусов южно-американской гемморагической лихорадки, вирусом оспы воробьев, спумавирусом, вирусом фибромы белок, ретровирусом беличьей обезьяны, группой вирусов SSV 1, STLV (лимфотропным Т-клеточным вирусом обезьян) I типа, STLV (лимфотропным Т-клеточным вирусом обезьян) II типа, STLV (лимфотропным Т-клеточным вирусом обезьян) III типа, вирусом папулезного стоматита, субмаксиллярным вирусом, вирусом псевдобешенства 1, вирусом псевдобешенства 2, Suipoxvirus, вирусом болотной лихорадки, вирусом оспы свиней, вирусом мышиной лейкемии, вирусом TAC, вирусом комплекса Такарибе, вирусом Такарибе, вирусом Tanapox, вирусом Taterapox, реовирусом линя, вирусом энцефаломиелита Тейлера, вирусом Тейлера, вирусом Тогото, вирусом Тхоттапалаям, вирусом клещевого энцефалита, вирусом Тиоман, тогавирусом, торовирусом, вирусом опухоли, вирусом Тупайя, вирусом ринотрахеита индюков, вирусом оспы индюков, ретровирусов типа С, онковирусом типа D, группов ретровирусов типа D, рабдовирусом язвенной болезни, вирусом Уна, группой вирусов Уукуниеми, вирусом осповакцины, вакуолизирующим вирусом, вирусом ветряной оспы, Varicellovirus, вирусом Varicola, основным вирусом натуральной оспы, вирусом натуральной оспы, вирусом болезни Уасингишу, вирусом VEE, вирусом венесуэльского энцефалита лошадей, вирусом венесуэльского энцефаломиелита лошадей, вирусом венесуэльской геморрагической лихорадки, вирусом везикулярного стоматита, везикуловирусом, вилюйским вирусом, ретровирусом гадюки, вирусом геморрагической септицемии, вирусом Висна-маеди, вирусом Висна, вирусом оспы полевок, VSV (вирусом везикулярного стоматита), вирусом Валлал, вирусом Варрего, вирусом пипилломы, вирусом WEE, вирусом Западного Нила, вирусом западного энцефалита лошадей, вирусом западного энцефаломиелита лошадей, вирусом Ватароа, вирусом зимней рвоты, вирусом гепатита В лесного сурка, вирусом саркомы шерстистой обезьяны, вирусом раневой опухоли, вирусом WRSV, вирусом опухоли обезьяны Яба, вирусом Яба, Yatapoxvirus, вирусом желтой лихорадки и вирусом Yug Bogdanovac.

[00403] В некоторых вариантах осуществления патогенная инфекция вызвана ретровирусом. Иллюстративные ретровирусы включают без ограничения вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусы T-клеточного лейкоза человека (HTLV), вирус лейкоза мышей Молони (MuLV), вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV), вирусы лейкоза и саркомы птиц или вирус обезьян Мэйзена-Пфейзера.

[00404] В некоторых вариантах осуществления конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) описанного в данном документе вводят субъекту с ретровирусной инфекцией или в латентном периоде для уменьшения количества и/или устранения инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя. В некоторых случаях ретровирус включает вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусы T-клеточного лейкоза человека (HTLV), вирус лейкоза мышей Молони (MuLV), вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV), вирусы лейкоза и саркомы птиц или вирус обезьян Мэйзена-Пфейзера. В некоторых случаях конъюгат цитокина перенаправляет CD8+ Т-клетки на распознавание и устранение инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя.

[00405] В некоторых случаях конъюгат цитокина представляет собой конъюгат IL-2. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту с ретровирусной инфекцией или в латентном периоде для уменьшения количества и/или устранения инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя. В некоторых случаях ретровирус включает вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусы T-клеточного лейкоза человека (HTLV), вирус лейкоза мышей Молони (MuLV), вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV), вирусы лейкоза и саркомы птиц или вирус обезьян Мэйзена-Пфейзера. В некоторых случаях конъюгат IL-2 перенаправляет CD8+ Т-клетки на распознавание и устранение инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя. В дополнительных случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту в комбинации с антиретровирусной терапией.

В некоторых вариантах осуществления ретровирус представляет собой ВИЧ. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2), описанный в данном документе, вводят субъекту, у которого имеется синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), или в латентном периоде для уменьшения количества и/или устранения ВИЧ-инфицированных клеток (например, CD4+ Т-клеток), которые находятся в стадии покоя. В некоторых случаях конъюгат цитокина представляет собой конъюгат IL-2. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту в комбинации с антиретровирусной терапией. Иллюстративная антиретровирусная терапия ВИЧ включает: (a) нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI), такие как абакавир, эмтрицитабин, ламивудин, тенофовир дизопроксила фумарат и зидовудин; (b) ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI), такие как эфавиренц, этравирин, невирапин или рилпивирин; (c) ингибиторы протеазы (PI), такие как атазанавир, дарунавир, фосампренавир, ритонавир, саквинавир и типранавир; (d) ингибиторы слияния, такие как энфувиртид; (e) агонисты CCR5, такие как маравирок; (f) ингибиторы интегразы, такие как долутегравир и ралтегравир; (g) ингибиторы пост-прикрепления, такие как ибализумаб; (h) фармакокинетические усилители, такие как кобицистат; и (i) коктейли, такие как абакавир и лимивудин; абакавир, долутегравир и лимивудин; абакавир, лимивудин и зидовудин; атазанавир и кобицистат; биктегравир, эмтрицитабин и тенофовира алафенамид; дарунавир и кобицистат; долутегравир и рилпивирин; эфавиренц, эмтрицитабин и тенофовира дизопроксила фумарат; эфавиренц, лимивудин и тенофовира дизопроксила фумарат; эфавиренц, лимивудин и тенофовира дизопроксила фумарат; элвитегравир, кобицистат, эмтрицитабин и тенофовира алафенамид фумарат; элвитегравир, кобицистат, эмтрицитабин и тенофовира дизопроксил фумарат; эмтрицитабин, рилпивирин и тенофовира алафенамид; эмтрицитабин, рилпивирин и тенофовира дизопроксил фумарат; эмтрицитабин и тенофовира алафенамид; эмтрицитабин и тенофовира дизопроксил фумарат; лимивудин и тенофовира дизопроксил фумарат; лимивудин и зидовудин; а также лопинавир и ритонавир.

[00406] В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту в комбинации с противовирусной терапией, такой как нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI), такие как абакавир, эмтрицитабин, ламивудин, тенофовира дизопроксил фумарат и зидовудин; ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI), такие как эфавиренц, этравирин, невирапин или рилпивирин; ингибиторы протеазы (PI), такие как атазанавир, дарунавир, фосампренавир, ритонавир, саквинавир и типранавир; ингибиторы слияния, такие как энфувиртид; агонисты CCR5, такие как маравирок; ингибиторы интегразы, такие как долутегравир и ралтегравир; ингибиторы пост-прикрепления, такие как ибализумаб; фармакокинетические усилители, такие как кобицистат; или коктейли, такие как абакавир и лимивудин; абакавир, долутегравир и лимивудин; абакавир, лимивудин и зидовудин; атазанавир и кобицистат; биктегравир, эмтрицитабин и тенофовира алафенамид; дарунавир и кобицистат; долутегравир и рилпивирин; эфавиренц, эмтрицитабин и тенофовира дизопроксил фумарат; эфавиренц, лимивудин и тенофовира дизопроксил фумарат; эфавиренц, лимивудин и тенофовира дизопроксил фумарат; элвитегравир, кобицистат, эмтрицитабин и тенофовира алафенамид фумарат; элвитегравир, кобицистат, эмтрицитабин и тенофовира дизопроксил фумарат; эмтрицитабин, рилпивирин и тенофовира алафенамид; эмтрицитабин, рилпивирин и тенофовира дизопроксил фумарат; эмтрицитабин и тенофовира алафенамид; эмтрицитабин и тенофовира дизопроксил фумарат; лимивудин и тенофовира дизопроксил фумарат; лимивудин и зидовудин; а также лопинавир и ритонавир.

[00407] В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой вирус гепатита, например, гепатита A, B, C, D или E. В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2), описанный в данном документе, вводят субъекту с инфекционным гепатитом или в латентном периоде для уменьшения количества и/или устранения инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя. В некоторых случаях конъюгат цитокина перенаправляет CD8+ Т-клетки на распознавание и устранение инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя.

[00408] В некоторых случаях конъюгат цитокина представляет собой конъюгат IL-2. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту с инфекционным гепатитом или в латентном периоде для уменьшения количества и/или устранения инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя. В некоторых случаях конъюгат IL-2 перенаправляет CD8+ Т-клетки на распознавание и устранение инфицированных клеток, которые находятся в стадии покоя. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту в комбинации с противовирусной терапией. Иллюстративная противовирусная терапия гепатита включает рибавирин; ингибиторы протеазы NS3/4A, такие как паритапревир, симепревир и гразопревир; ингибиторы протеазы NS5A, такие как ледипасвир, омбитасвир, элбасвир и даклатасвир; NS5B нуклеотидные/нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы полимеразы, такие как софосбувир и дасабавир; а также комбинации, такие как ледипасвир-софосбувир, дасабавир-омбитасвир-паритапревир-ритонавир; элбасвир-гразопревир, омбитасвир-паритапревир-ритонавир, софосбувир-велпатасвир, софосбувир-велпатасвир-воксилапревир и глекапревир-пибрентасвир; а также интерфероны, такие как пег-интерферон альфа-2a, пег-интерферон альфа-2b и интерферон альфа-2b. В некоторых случаях e конъюгат IL-2 вводят субъекту в комбинации с противовирусной терапией, такой как рибавирин; ингибиторы протеазы NS3/4A, такие как паритапревир, симепревир и гразопревир; ингибиторы протеазы NS5A, такие как ледипасвир, омбитасвир, элбасвир и даклатасвир; NS5B нуклеотидные/нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы полимеразы, такие как софосбувир и дасабавир; а также комбинации, такие как ледипасвир-софосбувир, дасабавир-омбитасвир-паритапревир-ритонавир; элбасвир-гразопревир, омбитасвир-паритапревир-ритонавир, софосбувир-велпатасвир, софосбувир-велпатасвир-воксилапревир и глекапревир-пибрентасвир; а также интерфероны, такие как пег-интерферон альфа-2a, пег-интерферон альфа-2b и интерферон альфа-2b.

Аутоиммунное заболевание или нарушение

[00409] В некоторых вариантах осуществления в данном документе также описан способ лечения аутоиммунного заболевания или нарушения у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата цитокина (например, конъюгата IL-2), описанного в данном документе. В некоторых случаях конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, где конъюгат IL-2 характеризуется сниженной аффинностью в отношении субъединицы рецептора IL-2 β (IL-2Rβ), субъединицы рецептора IL-2 γ (IL-2Rγ) или их комбинации по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых случаях конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, который связывается с выделенным и очищенным полипептидом IL-2 в аминокислотном остатке, выбранном из P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133,, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях аминокислотный остаток выбран из K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133. В некоторых случаях аминокислотный остаток выбран из K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95 и Q126. В некоторых случаях конъюгат IL-2 взаимодействует с комплексом IL-2Rαβγ, но со сниженной аффинностью в отношении субъединиц IL-2Rβ и IL-2Rγ, или он будет уменьшать рекрутинг субъединицы IL-2R γ в комплекс IL-2/IL-2Rβ. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2 сохраняет аффинность связывания в отношении IL-2Rα по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В таких случаях комплекс IL-2/IL-2Rαβγ стимулирует или усиливает размножение CD4+ Treg-клеток. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-2 обеспечивает повышение дозы, требующейся для активации Teff- и/или NK-клеток посредством комплекса IL-2Rβγ, с расширением тем самым диапазонов дозы для активации Treg-клеток посредством комплекса IL-2Rαβγ (или с расширением терапевтического окна IL-2 для активации Treg-клеток посредством комплекса IL-2Rαβγ).

[00410] В некоторых случаях аутоиммунное заболевание или нарушение включает очаговую алопецию, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, миастению гравис, рассеянный склероз, пемфигус/пемфигоид, пернициозную анемию, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермию, синдром Шегрена, системную красную волчанку, тироидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера.

[00411] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF) вводят субъекту, у которого имеется очаговая алопеция, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, миастения гравис, рассеянный склероз, пемфигус/пемфигоид, пернициозная анемия, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермия, синдром Шегрена, системная красная волчанка, тироидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера.

[00412] В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется очаговая алопеция, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, миастения гравис, рассеянный склероз, пемфигус/пемфигоид, пернициозная анемия, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермия, синдром Шегрена, системная красная волчанка, тироидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется диабет 1 типа. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется болезнь Грейвса. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется рассеянный склероз. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется псориаз. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется ревматоидный артрит. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется синдром Шегрена. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется системная красная волчанка. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется увеит. В некоторых случаях конъюгат IL-2 вводят субъекту, у которого имеется гранулематоз Вегенера.

[00413] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят субъекту для лечения реакции "трансплантат против хозяина" (GVHD).

[00414] В некоторых вариантах осуществления субъекту дополнительно вводят дополнительное терапевтическое средство. В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно с конъюгатом цитокина (например, конъюгатом IL-2). В других случаях дополнительное терапевтическое средство и конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят последовательно, например, конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят перед дополнительным терапевтическим средством или конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят после введения дополнительного терапевтического средства.

[00415] Иллюстративные дополнительные терапевтические средства для лечения аутоиммунного заболевания или нарушения включают без ограничения кортикостероиды, такие как преднизон, будесонид или преднизолон; ингибиторы кальциневрина, такие как циклоспорин или такролимус; ингибиторы mTOR, такие как сиролимус или эверолимус; ингибиторы IMDH, такие как азатиоприн, лефлуномид или микофенолат; биологические средства, такие как абацепт, адалимумаб, анакинра, цертолизумаб, этанерцепт, голимумаб, инфликсимаб, иксекизумаб, натализумаб, ритуксимаб, секукинумаб, тоцилизумаб, устекинумаб или ведолизумаб; а также моноклональные антитела, такие как басиликсимаб, даклизумаб или муромонаб.

[00416] В некоторых случаях конъюгат цитокина (например, конъюгат IL-2) вводят с дополнительным терапевтическим средством, выбранным из кортикостероида, такого как преднизон, будесонид или преднизолон; ингибитора кальциневрина, такого как циклоспорин или такролимус; ингибитора mTOR, такого как сиролимус или эверолимус; ингибитора IMDH, такого как азатиоприн, лефлуномид или микофенолат; биологического средства, такого как абацепт, адалимумаб, анакинра, цертолизумаб, этанерцепт, голимумаб, инфликсимаб, иксекизумаб, натализумаб, ритуксимаб, секукинумаб, тоцилизумаб, устекинумаб или ведолизумаб; а также моноклонального антитела, такого как басиликсимаб, даклизумаб или муромонаб.

Разработка средств для адоптивной клеточной терапии

[00417] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются способы получения композиции для адоптивной клеточной терапии, применимой для лечения заболевания или патологического состояния, описанного в данном документе (например, пролиферативного заболевания или патологического состояния, патогенной инфекции и/или аутоиммунного заболевания или состояния), у нуждающегося в этом субъекта, включающие a) обеспечение иммунных клеток, получаемых от нуждающегося в этом субъекта; b) конструирование иммунных клеток для экспрессии модифицированного полипептида IL-2, конъюгата IL-2, белка, связывающего IL-2Rβγ, или активатора иммунной клетки, где иммунная клетка включает CD4+ хелперную клетку, CD8+ эффекторную наивную и клетку памяти, CD8+ цитотоксическую T-клетку, супрессорную T-клетку, натуральную киллерную (NK) клетку или натуральную киллерную T-клетку (NKT). В некоторых вариантах осуществления иммунную клетку конструируют для дополнительной экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR). В некоторых вариантах осуществления стадия (b) конструирования включает приведение в контакт иммунных клеток, полученных от субъекта, с вектором (например, полинуклеотидной последовательностью), кодирующим модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, или активатор иммунной клетки. В некоторых случаях вектор содержит изделия, раскрываемые в данном документе. В некоторых случаях способы получения средства для адоптивной клеточной терапии клеток осуществляют с использованием наборов, раскрываемых в данном документе. В некоторых вариантах осуществления субъекта подвергают лечению с помощью средства для адоптивной клеточной терапии путем введения терапевтически эффективного количества средства для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях у субъекта диагностировано заболевание или патологическое состояние. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии является эффективным для лечения заболевания или патологического состояния у субъекта. В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает пролиферативное заболевание (например, рак). В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает патогенную инфекцию. В некоторых случаях заболевание или патологическое состояние включает аутоиммунное заболевание, представляет собой рак, такой как описанный в данном документе.

[00418] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются способы получения композиции для адоптивной клеточной терапии, применимой для лечения заболевания или патологического состояния, описанного в данном документе (например, пролиферативного заболевания или патологического состояния, патогенной инфекции и/или аутоиммунного заболевания или состояния), у нуждающегося в этом субъекта, включающие a) обеспечение иммунных клеток, получаемых от нуждающегося в этом субъекта; b) приведение иммунных клеток в контакт с модифицированным полипептидом IL-2, конъюгатом IL-2, белком, связывающим IL-2Rβγ, или активатором иммунной клетки, где иммунная клетка включает CD4+ хелперную клетку, CD8+ эффекторную наивную и клетку памяти, CD8+ цитотоксическую T-клетку, супрессорную T-клетку, натуральную киллерную (NK) клетку или натуральную киллерную T-клетку (NKT). В некоторых вариантах осуществления иммунную клетку конструируют для дополнительной экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR). В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, или активатор иммунной клетки содержит изделия, раскрываемые в данном документе. В некоторых случаях способы получения средства для адоптивной клеточной терапии клеток осуществляют с использованием наборов, раскрываемых в данном документе. В некоторых вариантах осуществления субъекта подвергают лечению с помощью средства для адоптивной клеточной терапии путем введения терапевтически эффективного количества средства для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях у субъекта диагностировано заболевание или патологическое состояние. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии является эффективным для лечения заболевания или патологического состояния у субъекта. В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает пролиферативное заболевание (например, рак). В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает патогенную инфекцию. В некоторых случаях заболевание или патологическое состояние включает аутоиммунное заболевание, представляет собой рак, такой как описанный в данном документе.

[00419] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению 42 в SEQ ID NO: 1, и содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да.

[00420] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению 65 в SEQ ID NO: 1, и содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да.

[00421] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению 62 в SEQ ID NO: 1, и содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да.

[00422] В некоторых случаях молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения процесса изготовления полипептида IL-2 или конъюгата IL-2 в качестве реагента для средств, предназначенных для адоптивной клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG улучшает растворимость полипептида IL-2 или конъюгата IL-2. В некоторых случаях молекулярная масса PEG улучшает процесс очистки при изготовлении средства для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях молекулярная масса PEG улучшает стабильность полипептида IL-2 или конъюгата IL-2.

[00423] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются способы лечения аутоиммунного заболевания или нарушения у нуждающегося в этом субъекта, которые включают введение субъекту средства для адоптивной клеточной терапии, описанного в данном документе. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии разрабатывают с использованием способов, описанных в данном документе. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии вводят субъекту в дополнение к конъюгату цитокина (например, конъюгату IL-2), описанному в данном документе. В некоторых случаях конъюгат цитокина вводят перед средством для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях конъюгат цитокина вводят после средства для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии является эффективным для обеспечения размножения популяции иммунных клеток у субъекта (например, популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, NK-клеток и/или NKT-клеток, популяции Treg-клеток).

[00424] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются способы лечения патогенной инфекции у нуждающегося в этом субъекта, которые включают введение субъекту терапевтически эффективного количества средства для адоптивной клеточной терапии, описанного в данном документе. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии разрабатывают с использованием способов, описанных в данном документе. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии вводят субъекту в дополнение к конъюгату цитокина (например, конъюгату IL-2), описанному в данном документе. В некоторых случаях конъюгат цитокина вводят перед средством для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях конъюгат цитокина вводят после средства для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии является эффективным для обеспечения размножения популяции иммунных клеток у субъекта (например, популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, NK-клеток и/или NKT-клеток, популяции Treg-клеток).

[00425] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются способы лечения пролиферативного заболевания или нарушения (например, рака) у нуждающегося в этом субъекта, которые включают введение субъекту средства для адоптивной клеточной терапии, описанного в данном документе. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии разрабатывают с использованием способов, описанных в данном документе. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии вводят субъекту в дополнение к конъюгату цитокина (например, конъюгату IL-2), описанному в данном документе. В некоторых случаях конъюгат цитокина вводят перед средством для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях конъюгат цитокина вводят после средства для адоптивной клеточной терапии. В некоторых случаях средство для адоптивной клеточной терапии является эффективным для обеспечения размножения популяции иммунных клеток у субъекта (например, популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, NK-клеток и/или NKT-клеток, популяции Treg-клеток).

Способы размножения популяций клеток

[00426] В некоторых вариантах осуществления в данном документе дополнительно описаны способы размножения популяций лимфоцитов, например, популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, NK-клеток и/или NKT-клеток, или способы размножения популяции Treg-клеток. В некоторых случаях способ включает приведение в контакт клетки с конъюгатом цитокина, описанным в данном документе, и взаимодействие цитокина с рецептором цитокина с образованием комплекса, где комплекс стимулирует размножение отдельной популяции лимфоцитов.

[00427] В некоторых случаях способ размножения популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) предусматривает приведение в контакт популяции клеток с выделенным и модифицированным полипептидом IL-2, описанным выше, в течение времени, достаточного для индуцирования образования комплекса с IL-2Rβ, за счет чего обеспечивается стимуляция размножения популяции Teff- и/или NK-клеток. В некоторых случаях способ размножения популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, NK-клеток и/или NKT-клеток предусматривает (a) приведение в контакт популяции клеток с конъюгатом IL-2, описанным в данном документе; и (b) обеспечение взаимодействия IL-2 с субъединицами IL-2Rβ и IL-2Rγ с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ; где конъюгат IL-2 характеризуется сниженной аффинностью в отношении субъединицы IL-2Rα, и где комплекс IL-2/IL-2Rβγ стимулирует размножение CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, NK-клеток и/или NKТ-клеток. Как описано выше, конъюгат IL-2 содержит выделенный и очищенный полипептид IL-2 и конъюгирующий фрагмент, который связывается с выделенным и очищенным полипептидом IL-2 в положении аминокислоты, выбранном из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105 и Y107, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72 и Y107. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из R38 и K64. В некоторых случаях положение аминокислоты выбрано из E61, E62 и E68. В некоторых случаях положение аминокислоты представляет собой E62.

[00428] В некоторых случаях конъюгат IL-2 обеспечивает размножение CD4+ регуляторных Т-клеток (Treg) на менее чем 20%, 15%, 10%, 5% или 1% в клеточной популяции. В некоторых случаях конъюгат IL-2 не обеспечивает размножение CD4+ Treg-клеток в клеточной популяции. В некоторых случаях соотношение Teff-клеток и Treg-клеток в клеточной популяции после инкубации с выделенным и модифицированным полипептидом IL-2 составляет по меньшей мере 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1 или 100:1. В некоторых случаях соотношение Teff-клеток и Treg-клеток в клеточной популяции после инкубации с выделенным и модифицированным полипептидом IL-2 составляет приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1 или 100:1.

[00429] В некоторых случаях время, достаточное для индуцирования образования комплекса с IL-2Rβ, составляет по меньшей мере 5 минут, 10 минут, 15 минут, 20 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней или 7 дней. В некоторых случаях время, достаточное для индуцирования образования комплекса с IL-2Rβ, составляет приблизительно 5 минут, 10 минут, 15 минут, 20 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 18 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней или 7 дней.

[00430] В некоторых случаях способ представляет собой in vivo способ.

[00431] В некоторых случаях способ представляет собой in vitro способ.

[00432] В некоторых случаях способ представляет собой ex vivo способ.

Получение полипептида цитокина

[00433] В некоторых случаях полипептиды цитокина (например, интерлейкина, IFN или TNF), описанные в данном документе, содержащие либо мутацию природной аминокислоты, либо мутацию неприродной аминокислоты, получают рекомбинантно или синтезируют химическим способом. В некоторых случаях полипептиды цитокина (например, IL-2), описанные в данном документе, получают рекомбинантно, например, либо в системе клеток-хозяев, либо в бесклеточной системе.

[00434] В некоторых случаях полипептиды цитокина (например, IL-2) получают рекомбинантно с применением системы клеток-хозяев. В некоторых случаях клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку (например, клетку млекопитающего, клетки насекомых, дрожжевые клетки или растительную клетку), прокариотическую клетку (например, грамположительную бактерию или грамотрицательную бактерию). В некоторых случаях эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего. В некоторых случаях клетка-хозяин млекопитающего является стабильной линией клеток или линией клеток, которая содержит встроенный представляющий интерес генетический материал в свой собственный геном и обладает способностью экспрессировать продукт генетического материала после многих поколений клеточного деления. В других случаях клетка-хозяин млекопитающего представляет собой транзиентную линию клеток или линию клеток, которая не содержит встроенный представляющий интерес генетический материал в свой собственный геном и не обладает способностью экспрессировать продукт генетического материала после многих поколений клеточного деления.

[00435] Иллюстративные клетки-хозяева млекопитающих включают линию клеток 293T, линию клеток 293A, линию клеток 293FT, клетки 293F, клетки 293 H, клетки A549, клетки MDCK, клетки CHO DG44, клетки CHO-S, клетки CHO-K1, клетки Expi293F™, линию клеток Flp-In™ T-REx™ 293, линию клеток Flp-In™-293, линию клеток Flp-In™-3T3, линию клеток Flp-In™-BHK, линию клеток Flp-In™-CHO, линию клеток Flp-In™-CV-1, линию клеток Flp-In™-Jurkat, клетки FreeStyle™ 293-F, клетки FreeStyle™ CHO-S, линию клеток GripTite™ 293 MSR, линию клеток GS-CHO, клетки HepaRG™, линию клеток T-REx™ Jurkat, клетки Per.C6, линию клеток T-REx™-293, линию клеток T-REx™-CHO и линию клеток T-REx™-HeLa.

[00436] В некоторых вариантах осуществления эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина насекомого. Иллюстративная клетка-хозяин насекомого включает клетки S2 Drosophila, клетки Sf9, клетки Sf21, клетки High Five™ и клетки expresSF+®.

[00437] В некоторых вариантах осуществления эукариотическая клетка-хозяин представляет собой дрожжевую клетку-хозяина. Иллюстративные дрожжевые клетки-хозяева включают такие штаммы дрожжей Pichia pastoris, как GS115, KM71H, SMD1168, SMD1168H и X-33, и такой штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, как INVSc1.

[00438] В некоторых вариантах осуществления эукариотическая клетка-хозяин представляет собой растительную клетку-хозяина. В некоторых случаях растительные клетки включают клетку водоросли. Иллюстративные линии растительных клеток включают штаммы из Chlamydomonas reinhardtii 137c или Synechococcus elongatus PPC 7942.

[00439] В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой прокариотическую клетку-хозяина. Иллюстративные прокариотические клетки-хозяева включают BL21, Mach1™, DH10B™, TOP10, DH5α, DH10Bac™, OmniMax™, MegaX™, DH12S™, INV110, TOP10F', INVαF, TOP10/P3, ccdB Survival, PIR1, PIR2, Stbl2™, Stbl3™ или Stbl4™.

[00440] В некоторых случаях подходящие молекулы полинуклеиновой кислоты или векторы для получения полипептида IL-2, описанного в данном документе, включают любые подходящие векторы, полученные из либо эукариотического, либо прокариотического источника. Иллюстративные молекулы полинуклеиновой кислоты или векторы включают векторы из бактерий (например, E. coli), насекомых, дрожжей (например, Pichia pastoris), водорослей или источника, представляющего собой млекопитающее. Бактериальные векторы включают, например, pACYC177, pASK75, ряд векторов pBAD, ряд векторов pBADM, ряд векторов pET, ряд векторов pETM, ряд векторов pGEX, pHAT, pHAT2, pMal-c2, pMal-p2, ряд векторов pQE, pRSET A, pRSET B, pRSET C, ряд pTrcHis2, pZA31-Luc, pZE21-MCS-1, pFLAG ATS, pFLAG CTS, pFLAG MAC, pFLAG Shift-12c, pTAC-MAT-1, pFLAG CTC или pTAC-MAT-2.

[00441] Векторы насекомых включают, например, pFastBac1, pFastBac DUAL, pFastBac ET, pFastBac HTa, pFastBac HTb, pFastBac HTc, pFastBac M30a, pFastBact M30b, pFastBac, M30c, pVL1392, pVL1393, pVL1393 M10, pVL1393 M11, pVL1393 M12, такие векторы FLAG, как pPolh-FLAG1 или pPolh-MAT 2, или такие векторы MAT, как pPolh-MAT1 или pPolh-MAT2.

[00442] Дрожжевые векторы включают, например, вектор Gateway®pDEST™ 14, вектор Gateway®pDEST™ 15, вектор Gateway®pDEST™ 17, вектор Gateway®pDEST™ 24, вектор Gateway®pYES-DEST52, вектор доставки pBAD-DEST49 Gateway®, вектор pAO815 Pichia, вектор pFLD1 Pichi pastoris, вектор pGAPZA, B & C Pichia pastoris, вектор pPIC3.5K Pichia, вектор pPIC6 A, B & C Pichia, вектор pPIC9K Pichia, pTEF1/Zeo, дрожжевой вектор pYES2, дрожжевой вектор pYES2/CT, дрожжевой вектор pYES2/NT A, B & C или дрожжевой вектор pYES3/CT.

[00443] Векторы водорослей включают, например, вектор pChlamy-4 или вектор MCS.

[00444] Векторы млекопитающих включают, например, векторы транзиентной экспрессии или векторы стабильной экспрессии. Иллюстративные векторы транзиентной экспрессии млекопитающих включают p3xFLAG-CMV 8, pFLAG-Myc-CMV 19, pFLAG-Myc-CMV 23, pFLAG-CMV 2, pFLAG-CMV 6a, b,c, pFLAG-CMV 5,1, pFLAG-CMV 5a, b,c, p3xFLAG-CMV 7,1, pFLAG-CMV 20, p3xFLAG-Myc-CMV 24, pCMV-FLAG-MAT1, pCMV-FLAG-MAT2, pBICEP-CMV 3 или pBICEP-CMV 4. Иллюстративные векторы стабильной экспрессии млекопитающих включают pFLAG-CMV 3, p3xFLAG-CMV 9, p3xFLAG-CMV 13, pFLAG-Myc-CMV 21, p3xFLAG-Myc-CMV 25, pFLAG-CMV 4, p3xFLAG-CMV 10, p3xFLAG-CMV 14, pFLAG-Myc-CMV 22, p3xFLAG-Myc-CMV 26, pBICEP-CMV 1 или pBICEP-CMV 2.

[00445] В некоторых случаях для получения полипептида цитокина (например, IL-2), описанного в данном документе, используют бесклеточную систему. В некоторых случаях бесклеточная система содержит смесь цитоплазматических и/или ядерных компонентов из клетки и подходит для синтеза нуклеиновых кислот in vitro. В некоторых случаях в бесклеточной системе применяют компоненты прокариотических клеток. В других случаях в бесклеточной системе применяют компоненты эукариотических клеток. Синтез нуклеиновых кислот достигается в бесклеточной системе, например, на основе клетки дрозофилы, яйца Xenopus, архей или клеток HeLa. Иллюстративные бесклеточные системы включают систему на основе экстракта S30 E. coli, систему S30 E. coli T7 или PURExpress®, XpressCF и XpressCF+.

[00446] Бесклеточные системы трансляции содержат разные компоненты, как, например, плазмиды, мРНК, ДНК, тРНК, синтетазы, факторы высвобождения, рибосомы, белки-шапероны, факторы инициации и элонгации трансляции, природные и/или неприродные аминокислоты и/или другие компоненты, применяемые для экспрессии белка. Такие компоненты необязательно модифицируют для повышения выхода, увеличения скорости синтеза, повышения соответствия белкового продукта или встраивания неприродных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления цитокины, описанные в данном документе, синтезируют с применением бесклеточных систем трансляции, описанных в US 8778631; US 2017/0283469; US 2018/0051065; US 2014/0315245; или US 8778631. В некоторых вариантах осуществления бесклеточные системы трансляции включают модифицированные факторы высвобождения или даже удаление одного или нескольких факторов высвобождения из системы. В некоторых вариантах осуществления бесклеточные системы трансляции содержат пониженную концентрацию протеазы. В некоторых вариантах осуществления бесклеточные системы трансляции содержат модифицированные тРНК с переназначенными кодонами, применяемыми для кодирования неприродных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления синтетазы, описанные в данном документе, предназначенные для встраивания неприродных аминокислот, применяют в бесклеточных системах трансляции. В некоторых вариантах осуществления тРНК предварительно загружают неприродными аминокислотами с применением ферментативных или химических способов перед добавлением в бесклеточную систему трансляции. В некоторых вариантах осуществления компоненты для бесклеточной системы трансляции получают из модифицированных организмов, таких как модифицированные бактерии, дрожжи или другой организм.

[00447] В некоторых вариантах осуществления полипептид цитокина (например, IL-2) получают в виде циркулярно пермутированной формы либо с помощью системы экспрессии хозяина, либо с помощью бесклеточной системы.

Получение полипептида цитокина, содержащего неприродную аминокислоту

[00448] В настоящем изобретении можно использовать ортогональный или расширенный генетический код, в котором один или несколько конкретных кодонов, присутствующих в последовательности нуклеиновой кислоты полипептида цитокина (например, IL-2), предназначены для кодирования неприродной аминокислоты, чтобы ее можно было генетически встроить в цитокин (например, IL-2) с использованием ортогональной пары тРНК-синтетаза/тРНК. Ортогональная пара тРНК-синтетаза/тРНК способна загружать тРНК неприродной аминокислотой и способна встраивать эту неприродную аминокислоту в полипептидную цепь в ответ на кодон.

[00449] В некоторых случаях кодон представляет собой амбер-кодон, охра-кодон, опал-кодон или квадруплетный кодон. В некоторых случаях кодон соответствует ортогональной тРНК, которая будет применяться для переноса неприродной аминокислоты. В некоторых случаях кодон представляет собой амбер-кодон. В других случаях кодон представляет собой ортогональный кодон.

[00450] В некоторых случаях кодон представляет собой квадруплетный кодон, который может декодироваться ортогональной рибосомой ribo-Q1. В некоторых случаях квадруплетный кодон является таким, как показано в Neumann, et al., "Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome," Nature, 464(7287): 441-444 (2010).

[00451] В некоторых случаях кодон, применяемый в настоящем изобретении, представляет собой перекодированный кодон, например, синонимичный кодон или редкий кодон, который заменен альтернативным кодоном. В некоторых случаях перекодированный кодон является таким, как описано в Napolitano, et al., "Emergent rules for codon choice elucidated by editing rare argine codons in Escherichia coli," PNAS, 113(38): E5588-5597 (2016). В некоторых случаях перекодированный кодон является таким, как описано в Ostrov et al., "Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome," Science 353(6301): 819-822 (2016).

[00452] В некоторых случаях используют неприродные нуклеиновые кислоты, что приводит к встраиванию одной или нескольких неприродных аминокислот в цитокин (например, IL-2). Иллюстративные неприродные нуклеиновые кислоты включают без ограничения урацил-5-ил, гипоксантин-9-ил (I), 2-аминоаденин-9-ил, 5-метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил- и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-пропил- и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинилурацил и цитозин, 6-азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин, а также 3-деазагуанин и 3-деазааденин. Определенные неприродные нуклеиновые кислоты, такие как 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2-замещенные пурины, N-6-замещенные пурины, O-6-замещенные пурины, 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил, 5-пропинилцитозин, 5-метилцитозин, те, которые повышают стабильность образования дуплекса, универсальные нуклеиновые кислоты, гидрофобные нуклеиновые кислоты, разнородные нуклеиновые кислоты, нуклеиновые кислоты с увеличенным размером, фторированные нуклеиновые кислоты, 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2-, N-6- и О-6-замещенные пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. 5-Метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил, другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил, 5-галогенцитозин, 5-пропинил(-C≡C-CH₃)-урацил, 5-пропинилцитозин, другие алкинильные производные пиримидиновых нуклеиновых кислот, 6-азоурацил, 6-азоцитозин, 6-азотимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности 5-бром, 5-трифторметил, другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин, 7-метиладенин, 2-F-аденин, 2-аминоаденин, 8-азагуанин, 8-азааденин, 7-деазагуанин, 7-деазааденин, 3-деазагуанин, 3-деазааденин, трициклические пиримидины, феноксазинцитидин ([5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3Н)-он), фенотиазинцитидин (1Н-пиримидо[5,4-b][1,4]бензотиазин-2(3H)-он), G-зажимы, феноксазинцитидин (например, 9-(2-аминоэтокси)-H-пиримидо[5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3H)-он), карбазолцитидин (2H-пиримидо[4,5-b]индол-2-он), пиридоиндолцитидин (H-пиридо[3',2':4,5]пирроло[2,3-d]пиримидин-2-он), те, в которых пуриновое или пиримидиновое основание заменено другими гетероциклами, 7-деазааденин, 7-деазагуанозин, 2-аминопиридин, 2-пиридон, азацитозин, 5-бромцитозин, бромурацил, 5-хлорцитозин, хлорированный цитозин, циклоцитозин, цитозин-арабинозид, 5-фторцитозин, фторпиримидин, фторурацил, 5,6-дигидроцитозин, 5-йодоцитозин, гидроксимочевина, йодоурацил, 5-нитроцитозин, 5-бромурацил, 5-хлорурацил, 5-фторурацил и 5-йодоурацил, 2-аминоаденин, 6-тиогуанин, 2-тиотимин, 4-тиотимин, 5-пропинилурацил, 4-тиоурацил, N4-этилцитозин, 7-деазагуанин, 7-деаза-8-азагуанин, 5-гидроксицитозин, 2'-дезоксиуридин, 2-амино-2'-дезоксиаденозин и те, которые описаны в патентах США №№ 3687808; 4845205; 4910300; 4948882; 5093232; 5130302; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121; 5596091; 5614617; 5645985; 5681941; 5750692; 5763588; 5830653 и 6005096; WO 99/62923; Kandimalla et al., (2001) Bioorg. Med. Chem. 9:807-813; The Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; и Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke and Lebleu Eds., CRC Press, 1993, 273-288. Дополнительные модификации оснований можно найти, например, в патенте США № 3687808; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; и Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, страницы 289-302, Crooke and Lebleu ed., CRC Press, 1993.

[00453] Неприродные нуклеиновые кислоты, содержащие различные гетероциклические основания и различные сахарные фрагменты (и аналоги сахаров), доступны в данной области техники, и нуклеиновые кислоты в некоторых случаях содержат одно или несколько гетероциклических оснований, отличных от основных пяти компонентов-оснований встречающихся в природе нуклеиновых кислот. Например, гетероциклическое основание включает в некоторых случаях урацил-5-ильные, цитозин-5-ильные, аденин-7-ильные, аденин-8-ильные, гуанин-7-ильные, гуанин-8-ильные, 4-аминопирроло[2.3-d]пиримидин-5-ильные, 2-амино-4-оксопироло[2, 3-d]пиримидин-5-ильные, 2-амино-4-оксопирроло[2.3-d]пиримидин-3-ильные группы, где пурины присоединены к сахарному фрагменту нуклеиновой кислоты через положение 9, пиримидины через положение 1, пирролопиримидины через положение 7 и пиразолопиримидины через положение 1.

[00454] В некоторых вариантах осуществления аналоги нуклеотидов также модифицированы в фосфатном фрагменте. Модифицированные фосфатные фрагменты включают без ограничения фрагменты с модификацией в связи между двумя нуклеотидами и включают, например, фосфоротиоат, хиральный фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфотриэфир, аминоалкилфосфотриэфир, метил- и другие алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонат и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты. Следует понимать, что эти фосфатные или модифицированные фосфатные связи между двумя нуклеотидами образованы посредством 3'-5'-связи или 2'-5'-связи, и связь характеризуется инвертированной полярностью, такой как с 3'-5' на 5'-3' или с 2'-5' на 5'-2'. Также включены различные соли, смешанные соли и формы свободных кислот. Во многих патентах США описывается как получать и применять нуклеотиды, содержащие модифицированные фосфаты, и они включают без ограничения 3687808; 4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361 и 5625050.

[00455] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеиновые кислоты включают 2',3'-дидезокси-2',3'-дидегидронуклеозиды (PCT/US2002/006460), 5'-замещенные производные ДНК и РНК (PCT/US2011/033961; Saha et al., J. Org Chem., 1995, 60, 788-789; Wang et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1999, 9, 885-890; и Mikhailov et al., Nucleosides & Nucleotides, 1991, 10(1-3), 339-343; Leonid et al., 1995, 14(3-5), 901-905; и Eppacher et al., Helvetica Chimica Acta, 2004, 87, 3004-3020; PCT/JP2000/004720; PCT/JP2003/002342; PCT/JP2004/013216; PCT/JP2005/020435; PCT/JP2006/315479; PCT/JP2006/324484; PCT/JP2009/056718; PCT/JP2010/067560), или 5'-замещенные мономеры, полученные в виде монофосфата с модифицированными основаниями (Wang et al., Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids, 2004, 23 (1 & 2), 317-337).

[00456] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеиновые кислоты включают модификации в 5'-положении и 2'-положении сахарного кольца (PCT/US94/02993), например, 5'-CH₂-замещенные 2'-O-защищенные нуклеозиды (Wu et al., Helvetica Chimica Acta, 2000, 83, 1127-1143 и Wu et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 921-924). В некоторых случаях неприродные нуклеиновые кислоты включают нуклеозидные димеры с амидной связью, полученные для встраивания в олигонуклеотиды, где 3'-связанный нуклеозид в димере (от 5' к 3') содержит 2'-OCH₃ и 5'-(S)-CH₃ (Mesmaeker et al., Synlett, 1997, 1287-1290). Неприродные нуклеиновые кислоты могут содержать 2'-замещенные 5'-CH₂ (или O) модифицированные нуклеозиды (PCT/US92/01020). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-метиленфосфонатные мономеры ДНК и РНК, а также димеры (Bohringer et al., Tet. Lett., 1993, 34, 2723-2726; Collingwood et al., Synlett, 1995, 7, 703-705; и Hutter et al., Helvetica Chimica Acta, 2002, 85, 2777-2806). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-фосфонатные мономеры, имеющие 2'-замещение (US2006/0074035), и другие модифицированные 5'-фосфонатные мономеры (WO1997/35869). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-модифицированные метиленфосфонатные мономеры (EP614907 и EP629633). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать аналоги 5'- или 6'-фосфонатных рибонуклеозидов, содержащие гидроксильную группу в 5'- и/или 6'-положении (Chen et al., Phosphorus, Sulfur and Silicon, 2002, 777, 1783-1786; Jung et al., Bioorg. Med. Chem., 2000, 8, 2501-2509; Gallier et al., Eur. J. Org. Chem., 2007, 925-933; и Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19(8), 1029-1033). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-фосфонатные дезоксирибонуклеозидные мономеры и димеры, имеющие 5'-фосфатную группу (Nawrot et al., Oligonucleotides, 2006, 16(1), 68-82). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать нуклеозиды, имеющие 6'-фосфонатную группу, в которой 5'- или/и 6'-положение является незамещенным или замещенным тио-трет-бутильной группой (SC(CH₃)₃) (и ее аналогами); метиленаминогруппой (CH₂NH₂) (и ее аналогами) или цианогруппой (CN) (и ее аналогами) (Fairhurst et al., Synlett, 2001, 4, 467-472; Kappler et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 1030-1038; Kappler et al., J. Med. Chem., 1982, 25, 1179-1184; Vrudhula et al., J. Med. Chem., 1987, 30, 888-894; Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19, 1371-1377; Geze et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105(26), 7638-7640; и Hampton et al., J. Am. Chem. Soc, 1973, 95(13), 4404-4414).

[00457] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеиновые кислоты также содержат модификации сахарного фрагмента. В некоторых случаях нуклеиновые кислоты содержат один или несколько нуклеозидов, где сахарная группа была модифицирована. Такие нуклеозиды с модифицированным сахаром способны придавать повышенную стабильность в отношении нуклеаз, повышенную аффинность связывания или некоторые другие полезные биологические свойства. В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты содержат химически модифицированный фрагмент рибофуранозного кольца. Примеры химически модифицированных рибофуранозных колец включают без ограничения добавление замещающих групп (включая 5'- и/или 2'-замещающие группы, соединение мостиком двух атомов кольца с образованием бициклических нуклеиновых кислот (BNA), замену атома кислорода рибозильного кольца на S, N(R) или C(R₁)(R₂) (R=H, C₁-C₁₂-алкил или защитную группу); и их комбинации. Примеры химически модифицированных сахаров можно найти в WO2008/101157, US2005/0130923 и WO2007/134181.

[00458] В некоторых случаях модифицированная нуклеиновая кислота содержит модифицированные сахара или аналоги сахаров. Таким образом, в дополнение к рибозе и дезоксирибозе сахарный фрагмент может представлять собой пентозу, дезоксипентозу, гексозу, дезоксигексозу, глюкозу, арабинозу, ксилозу, ликсозу или циклопентильную группу, представляющую собой "аналог" сахара. Сахар может быть в пиранозильной или фуранозильной форме. Сахарный фрагмент может представлять собой фуранозид рибозы, дезоксирибозы, арабинозы или 2'-O-алкилрибозы, и сахар может быть присоединен к соответствующим гетероциклическим основаниям либо в [альфа], либо в [бета]-аномерной конфигурации. Модификации сахара включают без ограничения аналоги 2'-алкокси-РНК, аналоги 2'-амино-РНК, 2'-фтор-ДНК и 2'-алкокси- или химеры амино-РНК/ДНК. Например, модификация сахара может включать 2'-O-метилуридин или 2'-O-метилцитидин. Модификации сахара включают 2'-O-алкилзамещенные дезоксирибонуклеозиды и 2'-O-этиленгликоль-подобные рибонуклеозиды. Известно получение этих сахаров или аналогов сахаров и соответствующих "нуклеозидов", где такие сахара или аналоги присоединены к гетероциклическому основанию (основанию нуклеиновой кислоты). Модификации сахара также могут быть получены и объединены с другими модификациями.

[00459] Модификации сахарного фрагмента включают природные модификации рибозы и дезоксирибозы, а также неприродные модификации. Модификации сахара включают без ограничения следующие модификации в 2'-положении: OH; F; O-, S- или N-алкил; O-, S- или N-алкенил; O-, S- или N-алкинил; или O-алкил-O-алкил, где алкил, алкенил и алкинил могут представлять собой замещенный или незамещенный C₁-C₁₀алкил или C₂-C₁₀алкенил и алкинил. 2'-Модификации сахара также включают без ограничения -O[(CH₂)_nO]_m CH₃, -O(CH₂)_nOCH₃, -O(CH₂)_nNH₂, -O(CH₂)_nCH₃, -O(CH₂)_nONH₂ и -O(CH₂)_nON[(CH₂)n CH₃)]₂, где n и m равняются от 1 до приблизительно 10.

[00460] Другие модификации в 2'-положении включают без ограничения низший C₁-C₁₀алкил, замещенный низший алкил, алкарил, аралкил, O-алкарил, O-аралкил, SH, SCH₃, OCN, Cl, Br, CN, CF₃, OCF₃, SOCH₃, SO₂ CH₃, ONO₂, NO₂, N₃, NH₂, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, расщепляющую РНК группу, репортерную группу, интеркалятор, группу для улучшения фармакокинетических свойств олигонуклеотида или группу для улучшения фармакодинамических свойств олигонуклеотида, а также другие заместители с аналогичными свойствами. Аналогичные модификации также могут быть осуществлены в других положениях в сахаре, в частности в 3'-положении сахара в 3'-концевом нуклеотиде или в 2'-5'-связанных олигонуклеотидах и в 5'-положении 5'-концевого нуклеотида. Модифицированные сахара также включают сахара, которые содержат модификации в мостиковом кислороде кольца, такие как CH₂ и S. Нуклеотиды с аналогами сахаров также могут содержать миметики сахаров, такие как циклобутильные фрагменты вместо пентофуранозильного сахара. Существует множество патентов США, в которых описывается получение таких модифицированных структур сахаров, и в которых подробно излагается и описывается ряд модификаций оснований, например, патенты США №№ 4981957; 5118800; 5319080; 5359044; 5393878; 5446137; 5466786; 5514785; 5519134; 5567811; 5576427; 5591722; 5597909; 5610300; 5627053; 5639873; 5646265; 5658873; 5670633; 4845205; 5130302; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5,457,187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121, 5596091; 5614617; 5681941 и 5700920, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[00461] Примеры нуклеиновых кислот, имеющих модифицированные сахарные фрагменты, включают без ограничения нуклеиновые кислоты, содержащие замещающие группы, представляющие собой 5'-винильную, 5'-метильную (R или S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH₃ и 2'-O(CH₂)₂OCH₃. Заместитель в 2'-положении также может быть выбран из аллила, амино, азидо, тио, O-аллила, O-(C₁-C_1Oалкила), OCF₃, O(CH₂)₂SCH₃, O(CH₂)₂-O-N(R_m)(R_n) и O-CH₂-C(=O)-N(R_m)(R_n), где каждый R_m и R_n независимо представляет собой H или замещенный или незамещенный C₁-C₁₀алкил.

[00462] В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, описанные в данном документе, включают одну или несколько бициклических нуклеиновых кислот. В определенных таких вариантах осуществления бициклическая нуклеиновая кислота содержит мостик между 4'- и 2'-атомами рибозильного кольца. В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, предусмотренные в данном документе, включают одну или несколько бициклических нуклеиновых кислот, где мостик содержит 4'-2'-бициклическую нуклеиновую кислоту. Примеры таких 4'-2'-бициклических нуклеиновых кислот включают без ограничения одну из формул: 4'-(CH₂)-O-2' (LNA); 4'-(CH₂)-S-2'; 4'-(CH₂)₂-O-2' (ENA); 4'-CH(CH₃)-O-2' и 4'-CH(CH₂OCH₃)-O-2' и их аналоги (см. патент США № 7399845); 4'-C(CH₃)(CH₃)-O-2' и ее аналоги (см. WO2009/006478, WO2008/150729, US2004/0171570, патент США № 7427672, Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 209, 74, 118-134 и WO2008/154401). Также см., например: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1-7; Oram et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США №№ 4849513; 5015733; 5118800; 5118802; 7053207; 6268490; 6770748; 6794499; 7034133; 6525191; 6670461 и 7399845; международные публикации №№ WO2004/106356, WO1994/14226, WO2005/021570, WO2007/090071 и WO2007/134181; публикации патентов США №№ US2004/0171570, US2007/0287831 и US2008/0039618; предварительные заявки на патент США №№ 60/989574, 61/026995, 61/026998, 61/056564, 61/086,231, 61/097787 и 61/099844; и международные заявки на патент №№ PCT/US2008/064591, PCT US2008/066154, PCT US2008/068922 и PCT/DK98/00393.

[00463] В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты включают связанные нуклеиновые кислоты. Нуклеиновые кислоты могут быть связаны вместе с применением любой связи между нуклеиновыми кислотами. Два основных класса групп, связывающих между собой нуклеиновые кислоты, определяются наличием или отсутствием атома фосфора. Типичные фосфорсодержащие связи между нуклеиновыми кислотами включают без ограничения фосфодиэфирные, фосфотриэфирные, метилфосфонатные, фосфорамидатные и фосфоротиоатные (P=S). Типичные не содержащие фосфор группы, связывающие между собой нуклеиновые кислоты, включают без ограничения метиленметилимино (-CH₂-N(CH₃)-O-CH₂-), тиодиэфирную (-O-C(O)-S-), тионокарбаматную (-O-C(O)(NH)-S-); силоксановую (-O-Si(H)₂-O-) и N, N*-диметилгидразиновую (-CH₂-N(CH₃)-N(CH₃)). В определенных вариантах осуществления связи между нуклеиновыми кислотами, имеющие хиральный атом, можно получать в виде рацемической смеси, в виде отдельных энантиомеров, например, алкилфосфонатов и фосфоротиоатов. Неприродные нуклеиновые кислоты могут содержать одну модификацию. Неприродные нуклеиновые кислоты могут содержать несколько модификаций в одном из фрагментов или между различными фрагментами.

[00464] Модификации фосфата остова в нуклеиновой кислоте включают без ограничения метилфосфонат, фосфоротиоат, фосфорамидат (мостиковый или не мостиковый), фосфотриэфир, фосфородитиоат, фосфодитиоат и боранофосфат и могут применяться в любой комбинации. Другие нефосфатные связи также можно применять.

[00465] В некоторых вариантах осуществления модификации остова (например, метилфосфонатные, фосфоротиоатные, фосфорамидатные и фосфородитиоатные межнуклеотидные связи) могут придавать иммуномодулирующую активность модифицированной нуклеиновой кислоте и/или повышать ее стабильность in vivo.

[00466] В некоторых случаях производное фосфора (или модифицированная фосфатная группа) присоединена к сахару или фрагменту аналога сахара и может представлять собой монофосфат, дифосфат, трифосфат, алкилфосфонат, фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфорамидат или т. п. Иллюстративные полинуклеотиды, содержащие модифицированные фосфатные связи или нефосфатные связи, можно найти в Peyrottes et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24: 1841-1848; Chaturvedi et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24:2318-2323; и Schultz et al., (1996) Nucleic Acids Res. 24:2966-2973; Matteucci, 1997, "Oligonucleotide Analogs: an Overview" в Oligonucleotides as Therapeutic Agents, (Chadwick and Cardew, ed.) John Wiley and Sons, New York, NY; Zon, 1993, "Oligonucleoside Phosphorothioates" в Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties, Humana Press, pp. 165-190; Miller et al., 1971, JACS 93:6657-6665; Jager et al., 1988, Biochem. 27:7247-7246; Nelson et al., 1997, JOC 62:7278-7287; патенте США № 5453496 и Micklefield, 2001, Curr. Med. Chem. 8: 1157-1179.

[00467] В некоторых случаях модификация остова включает замену фосфодиэфирной связи альтернативным фрагментом, таким как анионная, нейтральная или катионная группа. Примеры таких модификаций включают анионную межнуклеозидную связь; модификацию фосфорамидата от N3' к P5'; боранофосфатную ДНК; проолигонуклеотиды; нейтральные межнуклеозидные связи, такие как метилфосфонаты; ДНК с амидной связью; метиленовые(метилимино) связи; формацетальные и тиоформацетальные связи; остовы, содержащие сульфонильные группы; морфолиновые олигонуклеотиды; пептидные нуклеиновые кислоты (PNA) и положительно заряженные дезоксирибонуклеиновые гуанидиновые (DNG) олигонуклеотиды (Micklefield, 2001, Current Medicinal Chemistry 8: 1157-1179). Модифицированная нуклеиновая кислота может содержать химерный или смешанный остов, содержащий одну или несколько модификаций, например, комбинацию фосфатных связей, такую как комбинация фосфодиэфирных и фосфоротиоатных связей.

[00468] Заместители для фосфата включают, например, короткоцепочечные алкильные или циклоалкильные межнуклеозидные связи, смешанные гетероатомные и алкильные или циклоалкильные межнуклеозидные связи, или одну или несколько короткоцепочечных гетероатомных или гетероциклических межнуклеозидных связей. К ним относятся те, которые имеют морфолиновые связи (образованные частично из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматные остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфонамидные остовы; амидные остовы и другие, имеющие смешанные части компонентов N, O, S и CH₂. Во многих патентах США раскрыто, как получать и применять эти типы заменителей фосфата, и они включают без ограничения патенты США №№ 5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 5264562; 5264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5610289; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439. Также следует понимать, что при замене нуклеотида можно заменять как сахарный, так и фосфатный фрагменты нуклеотида, например, с помощью связи амидного типа (аминоэтилглицин) (PNA). В патентах США №№ 5539082; 5714331 и 5719262 описывается, как получать и применять молекулы PNA, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки. См. также Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500. Также возможно связать другие типы молекул (конъюгатов) с нуклеотидами или аналогами нуклеотидов, чтобы усилить, например, поглощение клеткой. Конъюгаты могут быть химически связаны с нуклеотидом или аналогами нуклеотидов. Такие конъюгаты включают без ограничения липидные фрагменты, такие как холестериновый фрагмент (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), холиновую кислоту (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), простой тиоэфир, например, гексил-S-тритилтиол (Manoharan et al., Ann. KY. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), тиохолестерин (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), алифатическую цепь, например, додекандиоловые или ундециловые остатки (Saison-Behmoaras et al., EM5OJ, 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), фосфолипид, например, ди-гексадецил-рац-глицерин или 1-ди-O-гексадецил-рац-глицеро-S-H-фосфонат триэтиламмония (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), цепь полиамина или полиэтиленгликоля (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973) или адамантануксусную кислоту (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), пальмитиловый фрагмент (Mishra et al., Biochem. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237) или октадециламиновый или гексиламинокарбонилоксихолестериновый фрагмент (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937). Во множестве патентов США описывается получение таких конъюгатов, и они включают без ограничения патенты США №№ 4828979; 4948882; 5218105; 5525465; 5541313; 5545730; 5552538; 5578717, 5580731; 5580731; 5591584; 5109124; 5118802; 5138045; 5414077; 5486603; 5512439; 5578718; 5608046; 4587044; 4605735; 4667025; 4762779; 4789737; 4824941; 4835263; 4876335; 4904582; 4958013; 5082830; 5112963; 5214136; 5082830; 5112963; 5214136; 5245022; 5254469; 5258506; 5262536; 5272250; 5292873; 5317098; 5371241, 5391723; 5416203, 5451463; 5510475; 5512667; 5514785; 5565552; 5567810; 5574142; 5585481; 5587371; 5595726; 5597696; 5599923; 5599928 и 5688941.

[00469] В некоторых случаях неприродные нуклеиновые кислоты дополнительно образуют неприродные пары оснований. Иллюстративные неприродные нуклеотиды, способные к образованию неприродной пары оснований ДНК или РНК (UBP) в условиях in vivo, включают без ограничения TPT3, dTPT3, 5SICS, d5SICS, NaM, dNaM, CNMO, dCNMO и их комбинации.

[00470] В некоторых случаях неприродные нуклеиновые кислоты дополнительно образуют неприродные пары оснований. Иллюстративные неприродные нуклеотиды, способные к образованию неприродной пары оснований ДНК или РНК (UBP) в условиях in vivo включают без ограничения SICS, d5SICS, NAM, dNaM и их комбинации. Другие примеры неприродных нуклеотидов, способных к образованию неприродных UBP, которые можно использовать для получения конъюгатов IL-2, раскрываемых в данном документе, можно найти в Dien et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:16115-16123; Feldman et al., J Am Chem Soc, 2017, 139:11427-11433; Ledbetter et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:758-765; Dhami et al., Nucleic Acids Res. 2014, 42:10235-10244; Malyshev et al., Nature, 2014, 509:385-388; Betz et al., J Am Chem Soc., 2013, 135:18637-18643; Lavergne et al., J Am Chem Soc. 2013, 135:5408-5419 и Malyshev et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:12005-12010. В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды включают:

[00471] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, которые могут быть использованы для получения конъюгатов IL-2, раскрываемых в данном документе, могут быть получены из соединения формулы,

, где R₂ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, метокси, метантиола, метанселено, галогена, циано и азидо; и

волнистой линией показана связь с рибозилом или 2'-дезоксирибозилом, где 5'-гидрокси-группа рибозильного или 2'-дезоксирибозильного фрагмента находится в свободной форме или необязательно связана с группой монофосфата, дифосфата или трифосфата.

[00472] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, которые могут быть использованы для получения конъюгатов IL-2, раскрываемых в данном документе, могут быть получены из , , , , и . В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, которые могут быть использованы для получения конъюгатов IL-2, раскрываемых в данном документе, включают , , , , и или их соли.

[00473] В некоторых вариантах осуществления неприродная пара оснований генерирует неприродную аминокислоту, описанную в Dumas et al., "Designing logical codon reassignment - Expanding the chemistry in biology," Chemical Science, 6: 50-69 (2015).

[00474] Клетку-хозяина, в которую вводят раскрытые в данном документе конструкции или векторы, культивируют или поддерживают в подходящей среде таким образом, что продуцируются тРНК, тРНК-синтетаза и представляющий интерес белок. Среда также содержит неприродную (неприродные) аминокислоту (аминокислоты), так что в представляющий интерес белок встраивается (встраиваются) неприродная (неприродные) аминокислота(аминокислоты). В некоторых вариантах осуществления нуклеозидтрифосфатный переносчик (NTT) из бактерии, растения или водоросли также присутствует в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2, раскрываемые в данном документе, получают путем использования клетки-хозяина, которая экспрессирует NTT. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидный нуклеозидтрифосфатный переносчик, используемый в клетке-хозяине, может быть выбран из TpNTT1, TpNTT2, TpNTT3, TpNTT4, TpNTT5, TpNTT6, TpNTT7, TpNTT8 (T. pseudonana), PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, PtNTT6 (P. tricornutum), GsNTT (Galdieria sulphuraria), AtNTT1, AtNTT2 (Arabidopsis thaliana), CtNTT1, CtNTT2 (Chlamydia trachomatis), PamNTT1, PamNTT2 (Protochlamydia amoebophila), CcNTT (Caedibacter caryophilus), RpNTT1 (Rickettsia prowazekii). В некоторых вариантах осуществления NTT выбран из PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5 и PtNTT6. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT1. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT2. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT3. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT4. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT5. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT6. Другие NTT, которые могут быть использованы, раскрыты в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; Malyshev et al. Nature 2014 (509(7500), 385-388; и Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317-1322.

[00475] Ортогональная пара тРНК-синтетаза/тРНК загружает тРНК неприродной аминокислотой и встраивает неприродную аминокислоту в полипептидную цепь в ответ на кодон. Иллюстративные пары aaRS-тРНК включают без ограничения пары aaRS/тРНК Methanococcus jannaschii (Mj-Tyr), пары TyrRS E. coli (Ec-Tyr)/тРНК_CUA B. stearothermophilus, пары LeuRS (Ec-Leu) E. coli/тРНК_CUA B. stearothermophilus и пары пирролизил-тРНК. Другие пары aaRS-тРНК, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, включают полученные из M. mazei, описанные в Feldman et al., J Am Chem Soc., 2018 140:1447-1454 и Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317-1322.

[00476] В некоторых вариантах осуществления представлены способы получения конъюгатов IL-2, раскрываемых в данном документе, в клеточной системе, которая экспрессирует NTT и тРНК-синтетазу. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, NTT выбран из PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5 и PtNTT6, а тРНК-синтетаза выбрана из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus и M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT1, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT2, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT3, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT3, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT4, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT5, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT6, а тРНК-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei.

[00477] Полипептид цитокина (например, IL-2), содержащий неприродную (неприродные) аминокислоту (аминокислоты), получают посредством введения в клетку-хозяина описанных в данном документе конструкций на основе нуклеиновых кислот, содержащих тРНК и тРНК-синтетазу и включающих представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты с одним или несколькими ортогональными (стоп-)кодонами в рамке считывания. Клетку-хозяина подвергают воздействию физиологического раствора, содержащего неприродную (неприродные) аминокислоту (аминокислоты), и затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, которые обеспечивают экспрессию кодирующей последовательности представляющего интерес белка. Неприродная (неприродные) аминокислота (аминокислоты) встраивается (встраиваются) в полипептидную цепь в ответ на кодон. Например, одна или несколько неприродных аминокислот встраиваются в полипептид цитокина (например, IL-2). В качестве альтернативы две или более неприродных аминокислот могут быть встроены в полипептид цитокина (например, IL-2) в двух или более сайтах белка.

[00478] В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2, раскрываемые в данном документе, могут быть получены в клетке, такой как E. coli, содержащей (a) нуклеозидтрифосфатный переносчик PtNTT2 (включающий усеченный вариант, в котором первые 65 аминокислотных остатков полноразмерного белка удалены), (b) плазмиду, содержащую двухнитевый олигонуклеотид, который кодирует вариант IL-2, имеющий требуемую аминокислотную последовательность, и который содержит неприродную пару оснований, содержащую первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид, для обеспечения кодона в требуемом положении, в которое будет встроена неприродная аминокислота, такая как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), (c) плазмиду, кодирующую тРНК, которая получена из M. mazei и которая содержит неприродный нуклеотид, для обеспечения распознаваемого антикодона (к кодону варианта IL-2) вместо своей нативной последовательности, и (d) плазмиду, кодирующую полученную из M. barkeri пирролизил-тРНК-синтетазу (Mb PylRS), которая может представлять собой ту же плазмиду, которая кодирует тРНК, или другую плазмиду. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетка дополнена дезоксириботрифосфатами, содержащими одно или несколько неприродных оснований. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетка дополнена риботрифосфатами, содержащими одно или несколько неприродных оснований. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетки дополнены одной или несколькими неприродными аминокислотами, такими как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK). В некоторых вариантах осуществления двухнитевой олигонуклеотид, который кодирует аминокислотную последовательность требуемого варианта IL-2, содержит кодон AXC, например, в положении 35, 42, 43, 62 или 65 последовательности, которая кодирует белок под SEQ ID NO: 4 (IL-2_C125S), или в положении 34, 41, 42, 61 или 64 последовательности, которая кодирует белок под SEQ ID NO: 3 (альдеслейкин), где X представляет собой неприродный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления клетка дополнительно содержит плазмиду, которая может представлять собой плазмиду экспрессии белка или другую плазмиду, которая кодирует ген ортогональной тРНК из M. mazei, которая содержит AXC-соответствующий антикодон GYT вместо своей нативной последовательности, где Y представляет собой неприродный нуклеотид, который является комплементарным и может быть таким же или отличаться от неприродного нуклеотида в кодоне. В некоторых вариантах осуществления неприродный нуклеотид в кодоне отличается от неприродного нуклеотида и комплементарен неприродному нуклеотиду в антикодоне. В некоторых вариантах осуществления неприродный нуклеотид в кодоне является таким же, как неприродный нуклеотид в антикодоне. В некоторых вариантах осуществления первый и второй неприродные нуклеотиды неприродной пары оснований в двухнитевом олигонуклеотиде могут быть получены из , и . В некоторых вариантах осуществления первый и второй неприродные нуклеотиды неприродной пары оснований в двухнитевом олигонуклеотиде могут быть получены из и . В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают , и или их соли. В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают и или их соли. В некоторых вариантах осуществления мРНК, полученная из двухнитевого олигонуклеотида, содержащего первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид, может содержать кодон, содержащий неприродный нуклеотид, полученный из , и . В некоторых вариантах осуществления тРНК M. mazei может содержать антикодон, содержащий неприродный нуклеотид, который распознает кодон, содержащие неприродный нуклеотид мРНК. Антикодон в тРНК M. mazei может содержать неприродный нуклеотид, полученный из , и . В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления тРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления тРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления тРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из , а тРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из , а тРНК содержит неприродный нуклеотид, полученный из . Клетку-хозяина культивируют в среде, содержащей соответствующие питательные вещества и дополненной (a) трифосфатами дезоксирибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, которые необходимы для репликации плазмиды (плазмид), кодирующей (кодирующих) ген цитокина, содержащий кодон, (b) трифосфатами рибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, необходимых для транскрипции (i) мРНК, соответствующей кодирующей последовательности цитокина и содержащей кодон, содержащий одно или несколько неприродных оснований, и (ii) тРНК, содержащей антикодон, содержащий одно или несколько неприродных оснований, и (c) неприродной (неприродными) аминокислотой (аминокислотами), подлежащими встраиванию в полипептидную последовательность представляющего интерес цитокина. Затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, обеспечивающих экспрессию представляющего интерес белка.

[00479] В некоторых случаях кодон, содержащий неприродное основание, и антикодон, содержащий неприродное основание, может быть выбран из следующих пар, где каждый X и Y содержит основание, независимо выбранное из группы, состоящей из , , , , , , , , , , , , и , где R₂ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, метокси, метантиола, метанселено, галогена, циано и азидо; и в каждом случае волнистой линией показана связь с рибозилом, если X и Y включают мРНК или тРНК, или с 2'-дезоксирибозилом, если X и Y включают ДНК.

Кодон (мРНК) Антикодон (тРНК) UUX YAA или XAA UGX YCA или XCA CGX YCG или XCG AGX YCU или XCU GAX YUC или XUC CAX YUG или XUG GXU AYC CXU AYG GXG CYC AXG CYU GXC GYC AXC GYU GXA UYC CXC GYG UXC GYA AUX YAU или XAU CUX XAG или YAG GUX XAC или YAC UAX XUA или YUA GGX XCC или YCC

[00480] Полученный в результате белок, содержащий одну или несколько неприродных аминокислот, например Azk, который экспрессируется, может быть очищен способами, известными специалистам в данной области техники, а затем может быть обеспечена его реакция с алкином, таким как DBCO, содержащим цепь PEG с требуемой средней молекулярной массой, как раскрывается в данном документе, в условиях, известных специалистам в данной области техники, с получением конъюгатов IL-2, раскрываемых в данном документе. Специалистам в данной области техники известны и другие способы, как, например, способы, раскрытые в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647, WO 2015157555, WO 2015021432, WO 2016115168, WO 2017106767, WO 2017223528, WO 2019014262, WO 2019014267, WO 2019028419 и WO2019/028425.

[00481] В качестве альтернативы полипептид цитокина (например, IL-2), содержащий неприродную (неприродные) аминокислоту (аминокислоты), получают посредством введения в клетку-хозяина описанных в данном документе конструкций на основе нуклеиновых кислот, содержащих тРНК и аминоацил-тРНК-синтетазу и содержащих представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты с одним или несколькими ортогональными (стоп-)кодонами в рамке считывания. Клетку-хозяина культивируют в среде, содержащей соответствующие питательные вещества и дополненной (a) трифосфатами дезоксирибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, необходимых для репликации плазмиды (плазмид), кодирующей (кодирующих) ген цитокина, содержащий новый кодон и антикодон, (b) трифосфатами рибонуклеозидов, необходимыми для транскрипции мРНК, соответствующей (i) последовательности цитокина, содержащей кодон, и (ii) ортогональной тРНК, содержащей антикодон, и (c) неприродной (неприродными) аминокислотой (аминокислотами). Затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, обеспечивающих экспрессию представляющего интерес белка. Неприродная (неприродные) аминокислота (аминокислоты) встраивается (встраиваются) в полипептидную цепь в ответ на неприродный кодон. Например, одна или несколько неприродных аминокислот встраиваются в полипептид цитокина (например, IL-2). В качестве альтернативы две или более неприродных аминокислот могут быть встроены в полипептид цитокина (например, IL-2) в двух или более сайтах белка.

[00482] После того, как цитокин (например, IL-2) со встроенной (встроенными) неприродной (неприродными) аминокислотой (аминокислотами) был получен в клетке-хозяине, его можно извлечь из нее с применением различных методик, известных из уровня техники, включая ферментативный, химический и/или осмотический лизис и физическое разрушение. Полипептид цитокина (например, IL-2) может быть очищен посредством стандартных методик, известных из уровня техники, таких как препаративная ионообменная хроматография, хроматография гидрофобного взаимодействия, аффинная хроматография, или посредством любой другой подходящей методики, известной специалистам в данной области техники.

[00483] Подходящие клетки-хозяева могут включать бактериальные клетки (например, E. coli, BL21(DE3)), но наиболее подходящими клетками-хозяевами являются эукариотические клетки, например, клетки насекомых (например, дрозофилы, такой как Drosophila melanogaster), дрожжевые клетки, клетки нематод (например, C. elegans), мышей (например, Mus musculus) или клетки млекопитающих (такие как клетки яичника китайского хомяка (СНО), или клетки COS, клетки 293T человека, клетки HeLa, клетки NIH 3T3 и клетки эритролейкоза мыши (MEL)), или клетки человека, или другие эукариотические клетки. Другие подходящие клетки-хозяева известны специалистам в данной области техники. Соответственно, клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, такую как клетка человека, или клетку насекомого. В некоторых вариантах осуществления подходящие клетки-хозяева включают E. coli.

[00484] Другими подходящими клетками-хозяевами, которые в целом можно использовать в вариантах осуществления настоящего изобретения, являются клетки, упомянутые в разделе "Примеры". Векторную ДНК можно вводить в клетки-хозяева с помощью обычных методик трансформации или трансфекции. Применяемые в данном документе термины "трансформация" и "трансфекция" предназначены для обозначения множества хорошо известных методик введения молекулы чужеродной нуклеиновой кислоты (например, ДНК) в клетку-хозяина, включая совместное осаждение фосфатом кальция или хлоридом кальция, опосредованную DEAE-декстраном трансфекцию, липофекцию или электропорацию. Подходящие способы трансформации или трансфекции клеток-хозяев хорошо известны из уровня техники.

[00485] При создании линий клеток обычно предпочтительно получать стабильные линии клеток. Например, известно, что в случае стабильной трансфекции клеток млекопитающих в зависимости от применяемых вектора экспрессии и методики трансфекции только небольшая часть клеток может интегрировать чужеродную ДНК в свой геном. Для идентификации и отбора этих интегрантов в клетки-хозяева вместе с представляющим интерес геном обычно вводят ген, который кодирует селектируемый маркер (например, для устойчивости к антибиотикам). Предпочтительные селектируемые маркеры включают маркеры, которые придают устойчивость к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие селектируемый маркер, можно вводить в клетку-хозяина в том же векторе или можно вводить в отдельном векторе. Клетки, стабильно трансфицированные введенной молекулой нуклеиновой кислоты, можно идентифицировать посредством отбора с лекарственным средством (например, клетки, которые содержат встроенный ген селектируемого маркера, выживут, тогда как другие клетки погибают).

[00486] В одном варианте осуществления описанные в данном документе конструкции интегрируют в геном клетки-хозяина. Преимущество стабильной интеграции состоит в том, что достигается однородность между отдельными клетками или клонами. Еще одно преимущество состоит в возможности осуществления отбора лучших продуцентов. Соответственно, необходимо создать стабильные линии клеток. В другом варианте осуществления описанными в данном документе конструкциями трансфицируют клетку-хозяина. Преимущество трансфекции клетки-хозяина конструкциями состоит в том, что выход белка может быть максимизирован. В одном аспекте описана клетка, содержащая конструкцию на основе нуклеиновой кислоты или вектор, описанный данном документе.

[00487] Если несколько неприродных аминокислот должны быть встроены в полипептид цитокина (например, IL-2), следует понимать, что несколько кодонов необходимо будет встроить в кодирующую последовательность нуклеиновой кислоты в требуемых положениях таким образом, чтобы пары тРНК-синтетаза/тРНК могли контролировать встраивание неприродных аминокислот в ответ на кодон (кодоны). По меньшей мере 1, 2, 3, 4 или более нуклеиновых кислот, кодирующих кодон, могут быть встроены в представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты.

[00488] Когда требуется встроить более чем один тип неприродной аминокислоты в один представляющий интерес белок можно применять вторую или дополнительную ортогональную пару тРНК-тРНК синтетаза для встраивания второй или дополнительной неприродной аминокислоты; соответственно, указанная вторая или дополнительная ортогональная пара тРНК-тРНК синтетаза распознает другой кодон в нуклеиновой кислоте, кодирующей представляющий интерес белок, так что две или более неприродных аминокислот могут быть специфически встроены в различные определенные сайты в белке на одной стадии изготовления. Следовательно, в определенных вариантах осуществления можно применять две или более ортогональных пар тРНК-тРНК синтетаза.

[00489] После того, как цитокин (например, IL-2) со встроенной (встроенными) неприродной (неприродными) аминокислотой (аминокислотами) был получен в клетке-хозяине, его можно извлечь из нее с применением различных методик, известных из уровня техники, включая ферментативный, химический и/или осмотический лизис и физическое разрушение. Полипептид цитокина (например, IL-2) можно очищать с применением стандартных методик, известных из уровня техники, таких как препаративная хроматография, аффинная очистка или любая другая подходящая методика.

[00490] Подходящие клетки-хозяева могут включать бактериальные клетки (например, E. coli, BL21(DE3)), но наиболее подходящими клетками-хозяевами являются эукариотические клетки, например, клетки насекомых (например, дрозофилы, такой как Drosophila melanogaster), дрожжевые клетки, клетки нематод (например, C. elegans), мышей (например, Mus musculus) или клетки млекопитающих (такие как клетки яичника китайского хомяка (СНО), или клетки COS, клетки 293T человека, клетки HeLa, клетки NIH 3T3 и клетки эритролейкоза мыши (MEL)), или клетки человека, или другие эукариотические клетки. Другие подходящие клетки-хозяева известны специалистам в данной области техники. Соответственно, клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, такую как клетка человека, или клетку насекомого.

[00491] Другими подходящими клетками-хозяевами, которые в целом можно использовать в вариантах осуществления настоящего изобретения, являются клетки, упомянутые в разделе "Примеры". Векторную ДНК можно вводить в клетки-хозяева с помощью обычных методик трансформации или трансфекции. Применяемые в данном документе термины "трансформация" и "трансфекция" предназначены для обозначения множества хорошо известных методик введения молекулы чужеродной нуклеиновой кислоты (например, ДНК) в клетку-хозяина, включая совместное осаждение фосфатом кальция или хлоридом кальция, опосредованную DEAE-декстраном трансфекцию, липофекцию или электропорацию. Подходящие способы трансформации или трансфекции клеток-хозяев хорошо известны из уровня техники.

[00492] При создании линий клеток обычно предпочтительно получать стабильные линии клеток. Например, известно, что в случае стабильной трансфекции клеток млекопитающих в зависимости от применяемых вектора экспрессии и методики трансфекции только небольшая часть клеток может интегрировать чужеродную ДНК в свой геном. Для идентификации и отбора этих интегрантов в клетки-хозяева вместе с представляющим интерес геном обычно вводят ген, который кодирует селектируемый маркер (например, для устойчивости к антибиотикам). Предпочтительные селектируемые маркеры включают маркеры, которые придают устойчивость к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие селектируемый маркер, можно вводить в клетку-хозяина в том же векторе или можно вводить в отдельном векторе. Клетки, стабильно трансфицированные введенной молекулой нуклеиновой кислоты, можно идентифицировать посредством отбора с лекарственным средством (например, клетки, которые содержат встроенный ген селектируемого маркера, выживут, тогда как другие клетки погибают).

[00493] В одном варианте осуществления описанные в данном документе конструкции интегрируют в геном клетки-хозяина. Преимущество стабильной интеграции состоит в том, что достигается однородность между отдельными клетками или клонами. Еще одно преимущество состоит в возможности осуществления отбора лучших продуцентов. Соответственно, необходимо создать стабильные линии клеток. В другом варианте осуществления описанными в данном документе конструкциями трансфицируют клетку-хозяина. Преимущество трансфекции клетки-хозяина конструкциями состоит в том, что выход белка может быть максимизирован. В одном аспекте описана клетка, содержащая конструкцию на основе нуклеиновой кислоты или вектор, описанный данном документе.

Фармацевтические композиции и составы

[00494] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию и составы, описанные в данном документе, вводят субъекту посредством нескольких путей введения, включая без ограничения парентеральный, пероральный, буккальный, ректальный, подъязычный или трансдермальный пути введения. В некоторых случаях парентеральное введение включает внутривенное, подкожное, внутримышечное, интрацеребральное, интраназальное, внутриартериальное, внутрисуставное, внутрикожное, интравитреальное, внутрикостную инфузию, интраперитонеальное или интратекальное введение. В некоторых случаях фармацевтическую композицию составляют для местного введения. В других случаях фармацевтическую композицию составляют для системного введения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композицию и составы, описанные в данном документе, вводят субъекту посредством внутривенного, подкожного, внутримышечного введений. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композицию и составы, описанные в данном документе, вводят субъекту посредством внутривенного введения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композицию и составы, описанные в данном документе, вводят субъекту посредством введения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композицию и составы, описанные в данном документе, вводят субъекту посредством внутримышечного введения.

[00495] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы включают без ограничения водные жидкие дисперсии, самоэмульгирующиеся дисперсии, твердые растворы, липосомные дисперсии, аэрозоли, твердые лекарственные формы, порошки, составы немедленного высвобождения, составы контролированного высвобождения, быстроплавкие составы, таблетки, капсулы, пилюли, составы замедленного высвобождения, составы пролонгированного высвобождения, составы импульсного высвобождения, составы в виде множества частиц (например, составы в виде наночастиц) и составы смешанного немедленного и контролированного высвобождения.

[00496] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы содержат носитель или материалы-носители, выбранные на основе совместимости с композицией, раскрытой в данном документе, и характеристик профиля высвобождения желаемой лекарственной формы. Иллюстративные материалы-носители включают, например, связующие вещества, суспендирующие средства, разрыхляющие средства, наполнители, поверхностно-активные вещества, солюбилизаторы, стабилизаторы, смазывающие средства, смачивающие средства, разбавители и т. п. Фармацевтически совместимые материалы-носители включают без ограничения аравийскую камедь, желатин, коллоидный диоксид кремния, глицерофосфат кальция, лактат кальция, мальтодекстрин, глицерин, силикат магния, поливинилпирролидон (PVP), холестерин, сложные эфиры холестерина, казеинат натрия, соевый лецитин, таурохолевую кислоту, фосфатидилхолин, хлорид натрия, трикальцийфосфат, дикалийфосфат, целлюлозу и конъюгаты целлюлозы, сахара, стеароиллактилат натрия, каррагинан, моноглицерид, диглицерид, прежелатинизированный крахмал и т. п. См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995), Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975, Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980, и Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999).

[00497] В некоторых случаях фармацевтическую композицию составляют в виде иммунолипосомы, которая содержит совокупность конъюгатов IL-2, прямо или опосредованно связанных с липидным бислоем липосом. Иллюстративные липиды включают без ограничения жирные кислоты; фосфолипиды; стерины, такие как холестерины; сфинголипиды, такие как сфингомиелин; гликосфинголипиды, такие как ганглиозиды, глобозиды и цереброзиды; амины поверхностно-активных веществ, такие как стеарил-, олеил- и линолеиламины. В некоторых случаях липид включает катионный липид. В некоторых случаях липид включает фосфолипид. Иллюстративные фосфолипиды включают без ограничения фосфатидную кислоту ("PA"), фосфатидилхолин ("PC"), фосфатидилглицерин ("PG"), фосфатидилэтаноламин ("PE"), фосфатидилинозитол ("PI") и фосфатидилсерин ("PS"), сфингомиелин (включая сфингомиелин головного мозга), лецитин, лизолецитин, лизофосфатидилэтаноламин, цереброзиды, диарахидоилфосфатидилхолин ("DAPC"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилхолин ("DDPC"), диелаидоилфосфатидилхолин ("DEPC"), дилауроилфосфатидилхолин ("DLPC"), дилинолеоилфосфатидилхолин, димиристоилфосфатидилхолин ("DMPC"), диолеоилфосфатидилхолин ("DOPC"), дипальмитоилфосфатидилхолин ("DPPC"), дистеароилфосфатидилхолин ("DSPC"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилхолин ("POPC"), диарахидоилфосфатидилглицерин ("DAPG"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилглицерин ("DDPG"), диелаидоилфосфатидилглицерин ("DEPG"), дилауроилфосфатидилглицерин ("DLPG"), дилинолеоилфосфатидилглицерин, димиристоилфосфатидилглицерин ("DMPG"), диолеоилфосфатидилглицерин ("DOPG"), дипальмитоилфосфатидилглицерин ("DPPG"), дистеароилфосфатидилглицерин ("DSPG"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилглицерин ("POPG"), диарахидоилфосфатидилэтаноламин ("DAPE"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилэтаноламин ("DDPE"), диелаидоилфосфатидилэтаноламин ("DEPE"), дилауроилфосфатидилэтаноламин ("DLPE"), дилинолеоилфосфатидилэтаноламин, димиристоилфосфатидилэтаноламин ("DMPE"), диолеоилфосфатидилэтаноламин ("DOPE"), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин ("DPPE"), дистеароилфосфатидилэтаноламин ("DSPE"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилэтаноламин ("POPE"), диарахидоилфосфатидилинозитол ("DAPI"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилинозитол ("DDPI"), диелаидоилфосфатидилинозитол ("DEPI"), дилауроилфосфатидилинозитол ("DLPI"), дилинолеоилфосфатидилинозитол, димиристоилфосфатидилинозитол ("DMPI"), диолеоилфосфатидилинозитол ("DOPI"), дипальмитоилфосфатидилинозитол ("DPPI"), дистеароилфосфатидилинозитол ("DSPI"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилинозитол ("POPI"), диарахидоилфосфатидилсерин ("DAPS"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилсерин ("DDPS"), диелаидоилфосфатидилсерин ("DEPS"), дилауроилфосфатидилсерин ("DLPS"), дилинолеоилфосфатидилсерин, димиристоилфосфатидилсерин ("DMPS"), диолеоилфосфатидилсерин ("DOPS"), дипальмитоилфосфатидилсерин ("DPPS"), дистеароилфосфатидилсерин ("DSPS"), 1-пальмитоил-2-олеоил-фосфатидилсерин ("POPS"), диарахидоилсфингомиелин, дидеканоилсфингомиелин, диелаидоилсфингомиелин, дилауроилсфингомиелин, дилинолеоилсфингомиелин, димиристоилсфингомиелин, сфингомиелин, диолеоилсфингомиелин, дипальмитоилсфингомиелин, дистеароилсфингомиелин и 1-пальмитоил-2-олеоилсфингомиелин.

[00498] В некоторых случаях фармацевтические составы дополнительно содержат средства для доведения pH или буферные средства, которые включают кислоты, такие как уксусная, борная, лимонная, молочная, фосфорная и соляная кислоты, основания, такие как гидроксид натрия, фосфат натрия, борат натрия, цитрат натрия, ацетат натрия, лактат натрия и трис-гидроксиметиламинометан, и буферы, такие как цитрат/декстроза, бикарбонат натрия и хлорид аммония. Такие кислоты, основания и буферы включают в количестве, необходимом для поддержания pH композиции в приемлемом диапазоне.

[00499] В некоторых случаях фармацевтический состав содержит одну или несколько солей в количестве, необходимом для приведения осмоляльности композиции в приемлемый диапазон. Такие соли включают соли, содержащие катионы натрия, калия или аммония и анионы хлорида, цитрата, аскорбата, бората, фосфата, бикарбоната, сульфата, тиосульфата или бисульфита, подходящие соли включают хлорид натрия, хлорид калия, тиосульфат натрия, бисульфит натрия и сульфат аммония.

[00500] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы включают без ограничения сахара, такие как трегалоза, сахароза, маннит, мальтоза, глюкоза, или соли, такие как фосфат калия, цитрат натрия, сульфат аммония, и/или другие средства, такие как гепарин, предназначенные для повышения растворимости и стабильности полипептидов in vivo.

[00501] В некоторых случаях фармацевтические составы дополнительно содержат разбавитель, который применяют для стабилизации соединений, поскольку они способны обеспечить более стабильную среду. Соли, растворенные в буферных растворах (которые также способны обеспечивать контроль или поддержание pH), применяют в качестве разбавителей в данной области техники, включая без ограничения забуференный фосфатом раствор хлорида натрия. В некоторых случаях разбавители увеличивают объем композиции для облегчения прессования или для создания достаточного объема для однородной смеси для заполнения капсул. Такие соединения могут включать, например, лактозу, крахмал, маннит, сорбит, декстрозу, микрокристаллическую целлюлозу, такую как Avicel®, двухосновный фосфат кальция, дикальция фосфат дигидрат, трикальция фосфат, кальция фосфат, безводную лактозу, высушенную распылением лактозу, предварительно желатинизированный крахмал, прессуемый сахар, такой как Di-Pac® (Amstar), маннит, гидроксипропилметилцеллюлозу, стеарат ацетата гидроксипропилметилцеллюлозы, разбавители на основе сахарозы, кондитерский сахар, одноосновный моногидрат сульфата кальция, дигидрат сульфата кальция, тригидрат лактата кальция, декстраты, гидролизованные сухие вещества зерновых, амилозу, порошковую целлюлозу, карбонат кальция, глицин, каолин, маннит, хлорид натрия, инозит, бентонит и т. п. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2, раскрываемые в данном документе, могут быть использованы в фармацевтических составах, содержащих гистидин, сорбит и полисорбат 80 или любую комбинацию, что дает стабильный состав, и могут вводиться нуждающимся в этом субъектам. В одном варианте осуществления конъюгаты IL-2, раскрываемые в данном документе, могут быть представлены в виде готового лекарственного продукта в подходящем контейнере, таком как флакон, в следующем виде: конъюгат IL-2 (от приблизительно 2 мг до приблизительно 10 мг); L-гистидин (от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 2 мг); L-гистидина гидрохлорид (от приблизительно 1 мг до приблизительно 2 мг); сорбит (от приблизительно 20 мг до приблизительно 80 мг) и полисорбат 80 (от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 0,2 мг); с достаточным количеством воды для инъекции для обеспечения жидкого состава, подходящего для применения в раскрываемых способах.

[00502] В некоторых случаях фармацевтические составы включают разрыхляющие средства или разрыхлители для облегчения распределения или разрыхления вещества. Термин "разрыхление" включает и растворение, и диспергирование лекарственной формы при контакте с желудочно-кишечным соком. Примеры разрыхляющих средств включают крахмал, например, натуральный крахмал, такой как кукурузный крахмал или картофельный крахмал, предварительно желатинизированный крахмал, такой как National 1551 или Amijel®, или натрий-крахмалгликолят, такой как Promogel® или Explotab®, целлюлозу, такую как продукт из древесины, кристаллическую метилцеллюлозу, например, Avicel®, Avicel® PH101, Avicel®PH102, Avicel® PH105, Elcema® P100, Emcocel®, Vivacel®, Ming Tia® и Solka-Floc®, метилцеллюлозу, кроскармеллозу или сшитую целлюлозу, такую как сшитая натрий-карбоксиметилцеллюлоза (Ac-Di-Sol®), сшитая карбоксиметилцеллюлоза или сшитая кроскармеллоза, сшитый крахмал, такой как натрия крахмалгликолят, сшитый полимер, такой как кросповидон, сшитый поливинилпиролидон, альгинат, такой как альгиновая кислота или соль альгиновой кислоты, такая как альгинат натрия, глину, такую как Veegum® HV (алюмосиликат магния), камедь, такую как агар, гуаровая камедь, камедь рожкового дерева, камедь карайи, пектин или трагакантовая камедь, натрия крахмалгликолят, бентонит, натуральную губку, поверхностно-активное вещество, смолу, такую как катионообменная смола, пульпу цитрусовых, натрия лаурилсульфат, натрия лаурилсульфат в комбинации с крахмалом и т. п.

[00503] В некоторых случаях фармацевтические составы включают наполнители, такие как лактоза, карбонат кальция, фосфат кальция, двухосновный фосфат кальция, сульфат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, порошок целлюлозы, декстроза, декстраты, декстран, крахмалы, предварительно желатинизированный крахмал, сахароза, ксилит, лактит, маннит, сорбит, хлорид натрия, полиэтиленгликоль и т. п.

[00504] Смазывающие средства и скользящие вещества также необязательно включают в фармацевтические составы, описанные в данном документе, для предупреждения, снижения или подавления адгезии или трения материалов. Иллюстративные смазывающие средства включают, например, стеариновую кислоту, гидроксид кальция, тальк, стеарилфумарат натрия, углеводород, такой как минеральное масло, или гидрогенизированное растительное масло, такое как гидрогенизированное соевое масло (Sterotex®), высшие жирные кислоты и их соли щелочных металлов и щелочноземельных металлов, таких как алюминия, кальция, магния, цинка, стеариновую кислоту, стеараты натрия, глицерин, тальк, воски, Stearowet®, борную кислоту, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия, лейцин, полиэтиленгликоль (например, PEG-4000) или метоксиполиэтиленгликоль, такой как Carbowax™, олеат натрия, бензоат натрия, глицерилбегенат, полиэтиленгликоль, лаурилсульфат магния или натрия, коллоидный диоксид кремния, такой как Syloid™, Cab-O-Sil®, крахмал, такой как кукурузный крахмал, кремнийорганическое масло, поверхностно-активное вещество и т. п.

[00505] Пластификаторы включают соединения, используемые для размягчения микроинкапсулируемого материала или пленочных покрытий, чтобы сделать их менее хрупкими. Подходящие пластификаторы включают, например, полиэтиленгликоли, такие как PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 1450, PEG 3350 и PEG 800, стеариновую кислоту, пропиленгликоль, олеиновую кислоту, триэтилцеллюлозу и триацетин. Пластификаторы также могут функционировать в качестве диспергирующих средств или смачивающих средств.

[00506] Солюбилизаторы включают такие соединения, как триацетин, триэтилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, лаурилсульфат натрия, доккузат натрия, витамин E TPGS, диметилацетамид, N-метилпирролидон, N-гидроксиэтилпирролидон, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилциклодекстрины, этанол, н-бутанол, изопропиловый спирт, холестерин, соли желчных кислот, полиэтиленгликоль 200-600, гликофурол, транскутол, пропиленгликоль, диметилизосорбид и т. п.

[00507] Стабилизаторы включают такие как любые антиоксидантные средства, буферы, кислоты, консерванты и т. п. Иллюстративные стабилизаторы включают гидрохлорид L-аргинина, трометамин, альбумин (человеческий), лимонную кислоту, бензиловый спирт, фенол, дигидрат динатрия бифосфата, пропиленгликоль, метакрезол или м-крезол, ацетат цинка, полисорбат-20 или Tween® 20, или трометамол.

[00508] Суспендирующие средства включают такие соединения, как поливинилпирролидон, например, поливинилпирролидон K12, поливинилпирролидон K17, поливинилпирролидон K25 или поливинилпирролидон K30, coполимер винилпирролидона и винилацетата (S630), полиэтиленгликоль, например, полиэтиленгликоль может иметь молекулярную массу от приблизительно 300 до приблизительно 6000, или от приблизительно 3350 до приблизительно 4000, или от приблизительно 7000 до приблизительно 5400, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлозы ацетат стеарат, полисорбат-80, гидроксиэтилцеллюлоза, альгинат натрия, камеди, такие как, например, трагакантовая камедь и акациевая камедь, гуаровая камедь, ксантаны, в том числе ксантановая камедь, сахара, целлюлозные соединения, такие как, например, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, полисорбат-80, альгинат натрия, полиэтоксилированный сорбитан монолаурат, полиэтоксилированный сорбитан монолаурат, повидон и т. п.

[00509] Поверхностно-активные вещества включают такие соединения, как лаурилсульфат натрия, докузат натрия, Tween 60 или 80, триацетин, витамин E TPGS, сорбитанмоноолеат, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат, полисорбаты, полаксомеры, соли желчных кислот, глицерилмоностеарат, сополимеры этиленоксида и пропиленоксида, например, Pluronic® (BASF) и т.п. Дополнительные поверхностно-активные вещества включают полиоксиэтиленовые глицериды жирных кислот и растительных масел, например, полиоксиэтиленовое (60) гидрогенизированное касторовое масло, а также алкиловые эфиры и алкилфениловые эфиры полиоксиэтилена, например, октоксинол 10, октоксинол 40. Иногда поверхностно-активные вещества включают для повышения физической стабильности или для других целей.

[00510] Средства, повышающие вязкост, включают, например, метилцеллюлозу, ксантановую камедь, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозы ацетат стеарат, гидроксипропилметилцеллюлозы фталат, карбомер, поливиниловый спирт, альгинаты, акациевую камедь, хитозаны и их комбинации.

[00511] Смачивающие средства включают такие соединения, как олеиновая кислота, глицерилмоностеарат, сорбитан моноолеат, сорбитан монолаурат, триэтаноламин олеат, полиоксиэтилен сорбитан моноолеат, полиоксиэтилен сорбитан монолаурат, докузат натрия, олеат натрия, натрия лаурилсульфат, докузат натрия, триацетин, Tween 80, витамин E TPGS, соли аммония и т. п.

Терапевтические режимы

[00512] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе фармацевтические композиции вводят для терапевтических применений. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят один раз в день, два раза в день, три раза в день или более. Фармацевтическую композицию вводят ежедневно, каждый день, через день, пять дней в неделю, один раз в неделю, через неделю, две недели в месяц, три недели в месяц, один раз в месяц, два раза в месяц, три раза в месяц или более. Фармацевтическую композицию вводят в течение по меньшей мере 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 18 месяцев, 2 лет, 3 лет или более.

[00513] В случае, когда состояние пациента действительно улучшается, по усмотрению врача введение композиции осуществляется непрерывно, альтернативно, дозу подлежащей введению композиции временно снижают или временно приостанавливают на определенный период времени (т.е. "перерыв в применении лекарственного средства"). В некоторых случаях продолжительность перерыва в применении лекарственного средства варьируется от 2 дней до 1 года, включая в качестве примера 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 15 дней, 20 дней, 28 дней, 35 дней, 50 дней, 70 дней, 100 дней, 120 дней, 150 дней, 180 дней, 200 дней, 250 дней, 280 дней, 300 дней, 320 дней, 350 дней или 365 дней. Снижение дозы во время перерыва в применении лекарственного средства составляет 10-100%, включая только в качестве примера 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

[00514] В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз каждые 4 недели, один раз каждые 5 недель, один раз каждые 6 недель, один раз каждые 7 недель, один раз каждые 8 недель, один раз каждые 9 недель, один раз каждые 10 недель, один раз каждые 11 недель, один раз каждые 12 недель, один раз каждые 13 недель, один раз каждые 14 недель, один раз каждые 15 недель, один раз каждые 16 недель, один раз каждые 17 недель, один раз каждые 18 недель, один раз каждые 19 недель, один раз каждые 20 недель, один раз каждые 21 неделю, один раз каждые 22 недели, один раз каждые 23 недели, один раз каждые 24 недели, один раз каждые 25 недель, один раз каждые 26 недель, один раз каждые 27 недель или один раз каждые 28 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые две недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 4 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 5 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 6 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 7 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 8 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 9 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 10 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 11 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 12 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 13 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 14 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 15 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 16 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 17 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 18 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 19 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 20 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 21 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 22 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 23 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз каждые 24 недели.

[00515] В некоторых вариантах осуществления количество данного средства, которое соответствует такому количеству, варьируется в зависимости от таких факторов, как конкретное соединение, тяжесть заболевания, индивидуальные характеристики (например, вес) субъекта или хозяина, нуждающегося в лечении, но тем не менее обычно определяется способом, известным из уровня техники, в соответствии с конкретными обстоятельствами, относящимися к конкретному случаю, включая, например, конкретное подлежащее введению средство, путь введения и субъекта или хозяина, подлежащего лечению. В некоторых случаях требуемая доза обычно представлена в виде однократной дозы или разделенных доз, вводимых одновременно (или в течение короткого периода времени) или с соответствующими интервалами, например, в виде двух, трех, четырех или более субдоз в день.

[00516] В некоторых вариантах осуществления способы включают введение дозы конъюгата IL-2 нуждающемуся в этом субъекту в диапазоне от 1 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 2 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 4 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 6 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 8 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 10 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 12 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта¸ или от приблизительно 14 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 16 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 18 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 20 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 22 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 24 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 26 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 28 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 32 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 34 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 36 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта¸ или от приблизительно 40 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 45 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта¸ или от приблизительно 50 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 55 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта¸ или от приблизительно 60 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 65 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 70 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 75 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 80 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта¸ или от приблизительно 85 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 90 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 95 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 100 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 110 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 120 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 130 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 140 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 150 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 160 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 170 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 180 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 190 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта. Вышеупомянутые диапазоны являются лишь предположительными, поскольку количество переменных в отношении индивидуальной схемы лечения велико, и существенные отклонения от этих рекомендуемых значений не являются редкостью. Такие дозы изменяются в зависимости от ряда переменных, не ограничиваясь активностью применяемого соединения, заболеванием или патологическим состоянием, подлежащим лечению, способом введения, потребностями отдельного субъекта, тяжестью заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и мнением практикующего специалиста. В некоторых вариантах осуществления токсичность и терапевтическую эффективность таких схем терапии определяют с помощью стандартных фармацевтических процедур с использованием культур клеток или экспериментальных животных, включая без ограничения определение LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз для токсических и терапевтических эффектов представляет собой терапевтический индекс и выражается в виде соотношения между LD50 и ED50. Предпочтительными являются соединения, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, полученные в анализах с применением культур клеток и в исследованиях на животных, применяются при составлении диапазона дозировки для применения у человека. Дозировка таких соединений предпочтительно находится в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED50 с минимальной токсичностью. Дозировка варьируется в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

[00517] В некоторых вариантах осуществления способы включают введение дозы конъюгата IL-2 нуждающемуся в этом субъекту в дозе, составляющей приблизительно 1 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта или приблизительно 2 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 4 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 6 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 8 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 10 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 12 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 14 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 16 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 18 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 20 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 22 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 24 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 26 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 28 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 30 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 32 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 34 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 36 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 38 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 40 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 42 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 44 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 46 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 48 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 50 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 55 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 60 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 65 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 70 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 75 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 80 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 85 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 90 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 95 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 100 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 110 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 120 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 130 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 140 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 150 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 160 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 170 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 180 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта, приблизительно 190 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта или приблизительно 200 мкг конъюгата IL-2 на кг веса тела субъекта. Вышеупомянутые диапазоны являются лишь предположительными, поскольку количество переменных в отношении индивидуальной схемы лечения велико, и существенные отклонения от этих рекомендуемых значений не являются редкостью. Такие дозы изменяются в зависимости от ряда переменных, не ограничиваясь активностью применяемого соединения, заболеванием или патологическим состоянием, подлежащим лечению, способом введения, потребностями отдельного субъекта, тяжестью заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и мнением практикующего специалиста. В некоторых вариантах осуществления токсичность и терапевтическую эффективность таких схем терапии определяют с помощью стандартных фармацевтических процедур с использованием культур клеток или экспериментальных животных, включая без ограничения определение LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз для токсических и терапевтических эффектов представляет собой терапевтический индекс и выражается в виде соотношения между LD50 и ED50. Предпочтительными являются соединения, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, полученные в анализах с применением культур клеток и в исследованиях на животных, применяются при составлении диапазона дозировки для применения у человека. Дозировка таких соединений предпочтительно находится в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED50 с минимальной токсичностью. Дозировка варьируется в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

[00518] После улучшения состояния пациента при необходимости вводят поддерживающую дозу. Впоследствии дозировку или частоту введения, или и то и другое, можно уменьшать в зависимости от симптомов до уровня, на котором поддерживается улучшение состояния при заболевании, нарушении или состоянии.

[00519] В некоторых вариантах осуществления количество данного средства, которое соответствует такому количеству, варьируется в зависимости от таких факторов, как конкретное соединение, тяжесть заболевания, индивидуальные характеристики (например, вес) субъекта или хозяина, нуждающегося в лечении, но тем не менее обычно определяется способом, известным из уровня техники, в соответствии с конкретными обстоятельствами, относящимися к конкретному случаю, включая, например, конкретное подлежащее введению средство, путь введения и субъекта или хозяина, подлежащего лечению. В некоторых случаях требуемая доза обычно представлена в виде однократной дозы или разделенных доз, вводимых одновременно (или в течение короткого периода времени) или с соответствующими интервалами, например, в виде двух, трех, четырех или более субдоз в день.

[00520] Вышеупомянутые диапазоны являются лишь предположительными, поскольку количество переменных в отношении индивидуальной схемы лечения велико, и существенные отклонения от этих рекомендуемых значений не являются редкостью. Такие дозы изменяются в зависимости от ряда переменных, не ограничиваясь активностью применяемого соединения, заболеванием или патологическим состоянием, подлежащим лечению, способом введения, потребностями отдельного субъекта, тяжестью заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и мнением практикующего специалиста.

[00521] В некоторых вариантах осуществления токсичность и терапевтическую эффективность таких схем терапии определяют с помощью стандартных фармацевтических процедур с использованием культур клеток или экспериментальных животных, включая без ограничения определение LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз для токсических и терапевтических эффектов представляет собой терапевтический индекс и выражается в виде соотношения между LD50 и ED50. Предпочтительными являются соединения, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, полученные в анализах с применением культур клеток и в исследованиях на животных, применяются при составлении диапазона дозировки для применения у человека. Дозировка таких соединений предпочтительно находится в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED50 с минимальной токсичностью. Дозировка варьируется в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

Наборы/изделие

[00522] В данном документе в определенных вариантах осуществления раскрыты наборы и изделия для применения с одним или несколькими способами и композициями, описанными в данном документе. Такие наборы включают носитель, упаковку или контейнер, который разделен на части для размещения одного или нескольких контейнеров, таких как флаконы, пробирки и т. п., причем каждый контейнер содержит один из отдельных элементов, которые должны применяться в способе, описанном в данном документе. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы и тестовые пробирки. В одном варианте осуществления контейнеры получают из различных материалов, таких как стекло или пластик.

[00523] В некоторых вариантах осуществления наборы содержат изделия, которые применимы для разработки средств для адоптивной клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления наборы содержат один или несколько из полипептидов цитокина (например, IL-2) или конъюгатов цитокина (например, IL-2), раскрываемых в данном документе, и необязательно одно или несколько фармацевтических вспомогательных веществ, описанных в данном документе, для облегчения доставки полипептидов цитокина (например, IL-2) или конъюгатов цитокина (например, IL-2). Такие наборы необязательно могут включать один или несколько вспомогательных компонентов, включающих индукторы передачи сигнала или модуляции Т-клеточного рецептора (например, антитела к контрольным точкам иммунного ответа, антитела к CD3/CD28, основные комплексы гистосовместимости (MHC) и т. п.), или альтернативные цитокины, или агонисты цитокиновых рецепторов. Такие наборы дополнительно необязательно включают идентифицирующее описание или этикетку, или инструкции, относящиеся к их применению в способах, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления наборы содержат одну или несколько последовательностей полинуклеиновых кислот, кодирующих конъюгаты IL-2, раскрываемые в данном документе, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) и/или их фармацевтическую композицию.

[00524] Наборы и изделия для лечения пролиферативных и инфекционных заболеваний

[00525] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются наборы, содержащие выделенный и модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в положении в полипептиде, что снижает степень связывания между модифицированным полипептидом IL-2 и α-рецептором интерлейкина 2 (IL-2Rα), но сохраняет значительную степень связывания с сигнальным комплексом βγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления снижение связывания с IL-2Rα предусматривает уменьшение аффинности связывания на приблизительно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или 100% по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение связывания с IL-2Rα предусматривает уменьшение в 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз или больше по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа.

[00526] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются наборы, содержащие выделенный и модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, где выделенный и модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2βγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ, и где различие между эффективностью передачи сигнала первого рецептора и эффективностью передачи сигнала второго рецептора является менее чем 10-кратным. В некоторых вариантах осуществления различие в эффективности рецепторной передачи сигнала является менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным.

[00527] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются наборы, содержащие полинуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в положении в полипептиде, что снижает степень связывания между модифицированным полипептидом IL-2 и α-рецептором интерлейкина 2 (IL-2Rα), но сохраняет значительную степень связывания с сигнальным комплексом βγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00528] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются наборы, содержащие полинуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, где выделенный и модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2βγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ, и где различие между эффективностью в передаче сигнала первого рецептора и эффективностью в передаче сигнала второго рецептора является менее чем 10-кратной. В некоторых вариантах осуществления различие в эффективности рецепторной передачи сигнала является менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным.

[00529] Наборы и изделия для лечения аутоиммунных заболеваний

[00530] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются наборы, содержащие выделенный и модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащие по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в положении в полипептиде, что снижает эффективность в рецепторной передачи сигнала к βγ-рецептору интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ, но сохраняет значительную активацию αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), при этом сниженную эффективность рецепторной передачи сигнала сравнивают с эффективностью рецепторной передачи сигнала между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rβγ, и при этом рекрутинг сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rγ полипептидом IL-2 дикого типа.

[00531] В данном документе в некоторых вариантах осуществления раскрываются наборы, содержащие выделенный и модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в положении в полипептиде, что повышает рекрутинг субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2, что приводит к активации αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), при этом повышение рекрутинга сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rα полипептидом IL-2 дикого типа.

[00532] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 с понижением эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ способен обеспечивать размножение CD4+ регуляторных Т-клеток (Treg). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент ухудшает или блокирует эффективность рецепторной передачи сигнала IL-2 с IL-2Rβγ или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ. В некоторых вариантах осуществления пролиферация CD4+ Treg-клеток комплексом модифицированный IL-2/IL-2Rαβγ эквивалентна или превышает таковую у полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный комплекс IL-2/IL-2Rαβγ индуцирует пролиферацию CD4+ Treg-клеток в популяцию, что достаточно для модуляции течения заболевания в животной модели. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ, при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или меньше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых вариантах осуществления эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления эффективность в передаче сигнала второго рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 дополнительно обеспечивает повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2, что приводит к активации αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где повышение рекрутинга сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rα полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 дополнительно обеспечивает снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ, при этом сниженный рекрутинг сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rβ и/или субъединицы IL-2Rγ полипептидом IL-2 дикого типа.

[00533] В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты в упомянутых выше модифицированных полипептидах IL-2 выбрано из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105 и Y107, где положения остатков соответствуют положениям 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68 и L72, где положения остатка соответствуют положениям 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68 и 72, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K35, K64, V69, N71, M104, C105 и Y107, где положения остатка соответствуют положениям 35, 64, 69, 71, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, Y45, E61, E68 и L72, где положения остатка соответствуют положениям 37, 38, 41, 45, 61, 68 и 72, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из F42, K43, F44, E62 и P65, где положения остатка соответствуют положениям 42, 43, 44, 62 и 65, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, и T113, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95 и Q126, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9 и H16, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из Q22, N26, N88 и Q126, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из E15, D20, D84 и E95, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из L12, L19 и M23, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из Q22 и N26, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1.

[00534] Наборы и изделия в целом

[00535] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина, содержит ароматическую боковую цепь, содержит азидогруппу, содержит алкиновую группу или содержит альдегидную или кетоновую группу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK; химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3C), N6-(пропаргилокси)-карбонил)-L-лизин (PraK; химическая структура которого показана в виде соединения 112 на фигуре 3C), BCN-L-лизин, норборненлизин, TCO-лизин, метилтетразинлизин, аллилоксикарбониллизин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, 2-амино-8-оксооктановую кислоту, п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), п-йод-L-фенилаланин, м-ацетилфенилаланин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргил-фенилаланин, 3-метил-фенилаланин, L-дофу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, O-аллилтирозин, O-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-фосфосерин, фосфоносерин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-окопропил)амино)этил)селанин)пропановую кислоту, 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту или селеноцистеин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK; химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3C) или N6-(пропаргилокси)-карбонил)-L-лизин (PraK; химическая структура которого показана в виде соединения 112 на фигуре 3C). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK; химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3C). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-(пропаргилокси)-карбонил)-L-лизин (PraK; химическая структура которого показана в виде соединения 112 на фигуре 3C).

[00536] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота содержит алкин, которому обеспечивают возможность вступления в реакцию с конъюгирующим фрагментом, который включает водорастворимый полимер, включающий полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает молекулу PEG

[00537] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит конъюгирующий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер, липид, белок и/или пептид. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает молекулу PEG.

[00538] В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит молекулу PEG, которая связана с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови PEG, размер которого меньше конъюгирующего фрагмента. В некоторых случаях конъюгирующий фрагмент содержит молекулу PEG, которая связана с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови PEG, размер которого превышает размер конъюгирующего фрагмента.

[00539] В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00540] В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой линейный PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой разветвленный PEG. В некоторых вариантах осуществления масса PEG составляет от приблизительно 2000 до 50000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 Да, 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 5000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 10000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 15000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 20000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 25000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 30000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 35000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 40000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 45000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 50000 Да.

[00541] Предусмотренные в данном документе изделия содержат упаковочные материалы. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают без ограничения блистерные упаковки, бутылки, пробирки, пакеты, контейнеры, бутылки и любой упаковочный материал, подходящий для выбранного состава и предполагаемого способа введения и лечения.

[00542] Например, контейнер(ы) включает (включают) один или несколько модифицированных полипептидов IL-2, содержащих K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105 или Y107, при этом положения остатков соответствуют 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий T37 с положениями остатков, соответствующими положениям 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00543] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке R38, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00544] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке T41, соответствующем положению 41 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00545] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке F42, соответствующем положению 42 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00546] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке K43, соответствующем положению 43 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00547] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке F44, соответствующем положению 44 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00548] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке Y45, соответствующем положению 45 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00549] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E60, соответствующем положению 60 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00550] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E61, соответствующем положению 61 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00551] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E62, соответствующем положению 62 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00552] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке K64, соответствующем положению 64 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00553] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке P65, соответствующем положению 65 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00554] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке E68, соответствующем положению 68 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00555] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке V69, соответствующем положениям 69 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00556] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке N71, соответствующем положению 71 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00557] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке L72, соответствующем положению 72 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00558] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке M104, соответствующем положению 104 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00559] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке C105, соответствующем положению 105 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00560] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2, содержащий мутацию в остатке Y107, соответствующем положению 107 в SEQ ID NO: 1, содержит конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование комплекса модифицированный полипептид IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

[00561] Набор обычно включает этикетки с перечнем содержимого и/или инструкциями по применению, а также листки-вкладыши с инструкциями по применению. Также обычно включается набор инструкций.

[00562] В одном варианте осуществления этикетка находится в на контейнере или связана с ним. В одном варианте осуществления этикетка находится на контейнере, когда буквы, числа или другие символы, образующие этикетку, прикреплены, отформованы или вытравлены на самом контейнере, при этом этикетка связана с контейнером, когда она находится внутри приспособления или держателя, который также удерживает контейнер, например, в виде листка-вкладыша. В одном варианте осуществления этикетка применяется для обозначения того, что содержимое должно применяться для конкретного терапевтического применения. Этикетка также указывает направления для применения содержимого, такие как в описанных в данном документе способах.

[00563] В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции представлены в упаковке или дозирующем устройстве, которые содержат одну или несколько стандартных лекарственных форм, содержащих соединение, предусмотренное в данном документе. Упаковка, например, содержит металлическую или пластиковую фольгу, такую как блистерная упаковка. В одном варианте осуществления упаковка или дозирующее устройство сопровождается инструкциями по введению. В одном варианте осуществления упаковка или дозатор также сопровождается уведомлением, связанным с контейнером, по форме, предписанной государственным агентством, регулирующим изготовление, применение или продажу фармацевтических препаратов, причем уведомление отражает одобрение агентством формы лекарственного средства для введения человеку или в ветеринарии. Такое уведомление, например, представляет собой этикетку, одобренную Управлением по контролю за продуктами и лекарственными средствами США для лекарственных средств, или листок-вкладыш одобренного продукта. В одном варианте осуществления композиции, содержащие соединение, предусмотренное в данном документе, составленные в совместимом фармацевтическом носителе, также получают, помещают в соответствующий контейнер и маркируют для лечения указанного состояния.

Варианты осуществления

[00564] В определенных вариантах осуществления в данном документе раскрываются конъюгаты цитокина и их применение в лечении одного или нескольких показаний. Также в данном документе в некоторых вариантах осуществления описаны конъюгаты интерлейкина 2 (IL-2) и их применение в лечении одного или нескольких показаний. В некоторых случаях одно или несколько показаний включают рак, патогенную инфекцию или аутоиммунное заболевание. В некоторых случаях в данном документе описаны способы модуляции взаимодействия между IL-2 и рецептором IL-2 для стимуляции или размножения определенных популяций T-клеток, натуральных киллерных (NK) клеток и/или натуральных киллерных T-клеток (NKT). В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-2 содержат конъюгирующие фрагменты (например, PEG), которые способствуют увеличению или уменьшению in vivo периода полужизни в плазме крови, не влияя на фармакокинетику, включая требуемые взаимодействия цитокин-рецептор и размножение иммунных клеток. Кроме того, в дополнительных случаях в данном документе описаны фармацевтические композиции и наборы, которые содержат один или несколько конъюгатов интерлейкина (например, конъюгатов IL-2), описанных в данном документе, которые могут быть применимы в качестве реагентов для разработки средств для адоптивной клеточной терапии, предназначенных для лечения одного или нескольких показаний, описанных в данном документе.

[00565] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены выделенные и модифицированные полипептиды интерлейкина 2 (IL-2), содержащие по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в положении в полипептиде, что снижает степень связывания между модифицированным полипептидом IL-2 и α-рецептором интерлейкина 2 (IL-2Rα), но сохраняет значительную степень связывания с сигнальным комплексом βγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления различие в эффективности рецепторной передачи сигнала является менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, Y107, где положения остатка соответствуют положениям 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68 и L72, где положения остатка соответствуют положениям 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68 и 72, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K35, K64, V69, N71, M104, C105 и Y107, где положения остатка соответствуют положениям 35, 64, 69, 71, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, Y45, E61, E68 и L72, где положения остатка соответствуют положениям 37, 38, 41, 45, 61, 68 и 72, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из F42, K43, F44, E62 и P65, где положения остатка соответствуют положениям 42, 43, 44, 62 и 65, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина, содержит ароматическую боковую цепь, содержит азидогруппу, содержит алкиновую группу или содержит альдегидную или кетоновую группу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK; химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3C), N6-(пропаргилокси)-карбонил-L-лизин (PraK), BCN-L-лизин, норборненлизин, TCO-лизин, метилтетразинлизин, аллилоксикарбониллизин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, 2-амино-8-оксооктановую кислоту, п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pMF), п-йод-L-фенилаланин, м-ацетилфенилаланин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргил-фенилаланин, 3-метил-фенилаланин, L-дофу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, O-аллилтирозин, O-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, три-O-ацетил-GlcNcp-серин, L-фосфосерин, фосфоносерин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-окопропил)амино)этил)селанин)пропановую кислоту, 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту или селеноцистеин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одну неприродную аминокислоту встраивают в модифицированный полипептид IL-2 с помощью ортогональной пары тРНК-синтетаза/тРНК. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК из пары ортогональная синтетаза/тРНК содержит по меньшей мере одно неприродное нуклеиновое основание. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 ковалентно присоединен к конъюгирующему фрагменту посредством по меньшей мере одной неприродной аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер, липид, белок и/или пептид. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает молекулу PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой линейный PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой разветвленный PEG. В некоторых вариантах осуществления масса PEG составляет от приблизительно 2000 до 50000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 Да, 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови полипептида IL-2. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полисахарид. В некоторых вариантах осуществления полисахарид включает декстран, полисиаловую кислоту (PSA), гиалуроновую кислоту (HA), амилозу, гепарин, гепарансульфат (HS), декстрин или гидроксиэтилкрахмал (HES). В некоторых вариантах осуществления липид включает жирную кислоту. В некоторых вариантах осуществления жирная кислота содержит от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления жирная кислота представляет собой насыщенную жирную кислоту. В некоторых вариантах осуществления белок включает альбумин, трансферрин или транстиретин. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает агонист TLR. В некоторых вариантах осуществления белок включает антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых вариантах осуществления антитело или его связывающие фрагменты предусматривает Fc-часть антитела. В некоторых вариантах осуществления пептид включает пептид XTEN, богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP), полипептид PAS, эластин-подобный полипептид (ELP), пептид CTP или полимер желатин-подобного белка (GLK). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент опосредованно связан с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой модифицированного IL-2 посредством линкера. В некоторых вариантах осуществления линкер включает гомобифункциональный линкер, гетеробифункциональный линкер, линкер нулевой длины, расщепляемый или нерасщепляемый дипептидный линкер, малеимидную группу, спейсер или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности составляет приблизительно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или 100% от снижения аффинности связывания с IL-2Rα по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности связывания с IL-2Rα является приблизительно 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным или больше по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 представляет собой функционально активный фрагмент полноразмерного полипептида IL-2, рекомбинантный полипептид IL-2 или рекомбинантный человеческий полипептид IL-2. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию, C-концевую делецию или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления N-концевая делеция предусматривает делецию первых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 остатков с N-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления C-концевая делеция предусматривает делецию последних 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или более остатков с С-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130 или 1-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 с сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rα способен обеспечивать размножение популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, CD8+ T-клеток, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент или неприродная аминокислота нарушает или блокирует связывание IL-2 с IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления активация популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) посредством комплекса IL-2Rβγ модифицированным полипептидом IL-2 обеспечивает сохранение значительной эффективности активации указанной популяции клеток по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 комплексу IL-2Rβγ выше, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа комплексу IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 комплексу IL-2Rβγ ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа комплексу IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ, и при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз выше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора, при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 выше, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ, а эффективность в передаче сигнала второго рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ. В некоторых вариантах осуществления эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 в по меньшей мере 1 раз ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа.

[00566] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены выделенные и модифицированные полипептиды интерлейкина 2 (IL-2), содержащие по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, где выделенный и модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2βγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к комплексу передачи сигнала IL-2αβγ, и где различие между эффективностью передачи сигнала первого рецептора и эффективностью передачи сигнала второго рецептора является менее чем 10-кратным. В некоторых вариантах осуществления различие в эффективности рецепторной передачи сигнала является менее чем 5-кратным, менее чем 4-кратным, менее чем 3-кратным, менее чем 2-кратным или менее чем 1-кратным. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, Y107, где положения остатка соответствуют положениям 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68 и L72, где положения остатка соответствуют положениям 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68 и 72, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K35, K64, V69, N71, M104, C105 и Y107, где положения остатка соответствуют положениям 35, 64, 69, 71, 104, 105 и 107, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из T37, R38, T41, Y45, E61, E68 и L72, где положения остатка соответствуют положениям 37, 38, 41, 45, 61, 68 и 72, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из F42, K43, F44, E62 и P65, где положения остатка соответствуют положениям 42, 43, 44, 62 и 65, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина, содержит ароматическую боковую цепь, содержит азидогруппу, содержит алкиновую группу или содержит альдегидную или кетоновую группу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK; химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3C), N6-(пропаргилокси)-карбонил-L-лизин (PraK), BCN-L-лизин, норборненлизин, TCO-лизин, метилтетразинлизин, аллилоксикарбониллизин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, 2-амино-8-оксооктановую кислоту, п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), п-йод-L-фенилаланин, м-ацетилфенилаланин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргил-фенилаланин, 3-метил-фенилаланин, L-дофу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, O-аллилтирозин, O-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-фосфосерин, фосфоносерин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-окопропил)амино)этил)селанин)пропановую кислоту, 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту или селеноцистеин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одну неприродную аминокислоту встраивают в модифицированный полипептид IL-2 с помощью ортогональной пары тРНК-синтетаза/тРНК. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК из пары ортогональная синтетаза/тРНК содержит по меньшей мере одно неприродное нуклеиновое основание. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 ковалентно присоединен к конъюгирующему фрагменту посредством по меньшей мере одной неприродной аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер, липид, белок и/или пептид. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает молекулу PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой линейный PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой разветвленный PEG. В некоторых вариантах осуществления масса PEG составляет от приблизительно 2000 до 50000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 Да, 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови полипептида IL-2. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полисахарид. В некоторых вариантах осуществления полисахарид включает декстран, полисиаловую кислоту (PSA), гиалуроновую кислоту (HA), амилозу, гепарин, гепарансульфат (HS), декстрин или гидроксиэтилкрахмал (HES). В некоторых вариантах осуществления липид включает жирную кислоту. В некоторых вариантах осуществления жирная кислота содержит от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления жирная кислота представляет собой насыщенную жирную кислоту. В некоторых вариантах осуществления белок включает альбумин, трансферрин или транстиретин. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает агонист TLR. В некоторых вариантах осуществления белок включает антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых вариантах осуществления антитело или его связывающие фрагменты предусматривает Fc-часть антитела. В некоторых вариантах осуществления пептид включает пептид XTEN, богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP), полипептид PAS, эластин-подобный полипептид (ELP), пептид CTP или полимер желатин-подобного белка (GLK). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент опосредованно связан с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой модифицированного IL-2 посредством линкера. В некоторых вариантах осуществления линкер включает гомобифункциональный линкер, гетеробифункциональный линкер, линкер нулевой длины, расщепляемый или нерасщепляемый дипептидный линкер, малеимидную группу, спейсер или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности составляет приблизительно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или 100% от снижения аффинности связывания с IL-2Rα по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности связывания с IL-2Rα является приблизительно 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным или больше по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 представляет собой функционально активный фрагмент полноразмерного полипептида IL-2, рекомбинантный полипептид IL-2 или рекомбинантный человеческий полипептид IL-2. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию, C-концевую делецию или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления N-концевая делеция предусматривает делецию первых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 остатков с N-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления C-концевая делеция предусматривает делецию последних 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или более остатков с С-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130 или 1-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 с сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rα способен обеспечивать размножение популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, CD8+ T-клеток, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент или неприродная аминокислота нарушает или блокирует связывание IL-2 с IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления активация популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT) посредством комплекса IL-2Rβγ модифицированным полипептидом IL-2 обеспечивает сохранение значительной эффективности активации указанной популяции клеток по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 комплексу IL-2Rβγ выше, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа комплексу IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 комплексу IL-2Rβγ ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа комплексу IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ, и при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз выше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора, при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 выше, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ, а эффективность в передаче сигнала второго рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ. В некоторых вариантах осуществления эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 в по меньшей мере 1 раз ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа.

[00567] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены конъюгаты интерлейкина 2 (IL-2), содержащие неприродную аминокислоту, ковалентно присоединенную к конъюгирующему фрагменту, при этом неприродная аминокислота расположена в участке 35-107, и при этом участок 35-107 соответствует остаткам K35-Y107 в последовательности под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота расположена в участке 42, и при этом участок 42 соответствует остатку F42. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер с молекулярной массой от 2000 до 50000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер с молекулярной массой 5000 Да, 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E61, соответствующем положению остатка 61 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да.

[00568] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены белки, связывающие βγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rβγ), где аффинность связывания в отношении α-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rα) у указанного связывающего белка меньше, чем у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления указанный связывающий белок представляет собой модифицированный полипептид IL-2 или его функционально активный фрагмент, где модифицированный полипептид IL-2 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неприродная аминокислота расположена в участке 35-107, и при этом участок 35-107 соответствует остаткам K35-Y107 в последовательности под SEQ ID NO: 1.

[00569] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены комплексы IL-2/IL-2Rβγ, содержащие модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной аффинностью связывания в отношении IL-2Rα, и где сниженную аффинность связывания сравнивают с аффинностью связывания между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте.

[00570] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены активаторы CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, CD8+ T-клетки, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), которые селективно обеспечивают размножение CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральный киллерных T-клеток (NKT) в клеточной популяции, где указанный активатор содержит модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор обеспечивает размножение CD4+ регуляторных (Treg) Т-клеток менее чем на 20%, 15%, 10%, 5%, 1% или 0,1% при контакте указанного активатора с указанной клеточной популяцией. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор не обеспечивает размножение Treg-клеток в указанной клеточной популяции. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vivo клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vitro клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой ex vivo клеточную популяцию.

[00571] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлена фармацевтическая композиция, содержащая выделенный и модифицированный полипептид IL-2, описанный в данном документе, конъюгат IL-2, описанный в данном документе, белок, связывающий IL-2Rβγ, описанный в данном документе, или активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), описанный в данном документе, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию составляют для системной доставки. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию составляют для парентерального введения. В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 5000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 10000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 15000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 20000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 25000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 5000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 10000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 15000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 20000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 25000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 5000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 10000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 15000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 20000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 25000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30000 дальтон (Да).

[00572] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен способ лечения заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества выделенного и модифицированного полипептида IL-2, описанного в данном документе, конъюгата IL-2, описанного в данном документе, описанного в данном документе белка, связывающего IL-2Rβγ, активатора CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), описанного в данном документе, или фармацевтической композиции, описанной в данном документе. В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние представляет собой рак. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рак в виде солидной опухоли. В некоторых вариантах осуществления рак в виде солидной опухоли представляет собой рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланому, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), фолликулярную лимфому (FL), диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому (DLBCL), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемию Вальденстрема, множественную миелому, экстранодальную В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, нодальную В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, лимфому Беркитта, В-клеточную неберкиттовскую лимфому высокой степени злокачественности, первичную медиастинальную B-клеточную лимфому (PMBL), иммунобластную крупноклеточную лимфому, В-лимфобластную лимфому из клеток-предшественников, пролимфоцитарный В-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарную лимфому, лимфому из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточную миелому, плазмоцитому, медиастинальную (тимическую) крупноклеточную В-клеточную лимфому, внутрисосудистую крупноклеточную В-клеточную лимфому, первичную эффузионную лимфому или лимфоматоидный гранулематоз. В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает патогенную инфекцию. В некоторых вариантах осуществления патогенная инфекция вызвана ретровирусом, вирусом, вирусом, содержащим дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), или вирусом, содержащим рибонуклеиновую кислоту (РНК), или их комбинацией. В некоторых вариантах осуществления РНК-вирус включает вирус, содержащий отрицательно-смысловую однонитевую (он) РНК, вирус, содержащий положительно-смысловую онРНК, или вирус, содержащий двухнитевую (дн) РНК. В некоторых вариантах осуществления ДНК-вирус включает вирус, содержащий однонитевую (он) ДНК, или вирус, содержащий двухнитевую (дн) ДНК. В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает аутоиммунного заболевание. В некоторых вариантах осуществления заболевание или патологическое состояние включает очаговую алопецию, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, миастению гравис, рассеянный склероз, пемфигус/пемфигоид, пернициозную анемию, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермию, синдром Шегрена, системную красную волчанку, тироидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтическую композицию и дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтическую композицию и дополнительное терапевтическое средство вводят последовательно. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтическую композицию вводят перед дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтическую композицию вводят после введения дополнительного терапевтического средства.

[00573] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены способы размножения популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных и клеток памяти, натуральных киллерных (NK) клеток или натуральных киллерных T-клеток (NKT), включающие приведение в контакт клеточной популяции с выделенным и модифицированным полипептидом IL-2, описанным в данном документе, любым конъюгатом IL-2 из описанных в данном документе, конъюгатом IL-2, описанным в данном документе, описанным в данном документе белком, связывающим IL-2Rβγ, активатором CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, CD8+ T-клетки, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), описанным в данном документе, или фармацевтической композицией, описанной в данном документе, в течение времени, достаточного для индуцирования образования комплекса с IL-2Rβγ, за счет чего обеспечивается стимуляция размножения популяции Teff-, CD8+ T-клеток и/или NK-клеток. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтическая композиция обеспечивают размножение CD4+ регуляторных (Treg) Т-клеток менее чем на 20%, 15%, 10%, 5% или 1% в популяции CD3+ клеток по сравнению с размножением CD4+ Treg-клеток в популяции CD3+ клеток при контакте с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2, конъюгат IL-2, белок, связывающий IL-2Rβγ, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтическая композиция не обеспечивают размножение CD4+ Treg-клеток в клеточной популяции. В некоторых вариантах осуществления соотношение Teff-клеток и Treg-клеток в клеточной популяции после инкубации с выделенным и модифицированным полипептидом IL-2, конъюгатом IL-2, белком, связывающим IL-2Rβγ, активатором CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT) или фармацевтической композицией составляет приблизительно или по меньшей мере 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1 или 100:1. В некоторых вариантах осуществления способ представляет собой in vivo способ. В некоторых вариантах осуществления способ представляет собой in vitro способ. В некоторых вариантах осуществления способ представляет собой ex vivo способ. В некоторых вариантах осуществления субъект является человеком.

[00574] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены наборы, содержащие одно или несколько из выделенного и модифицированного полипептида IL-2, описанного в данном документе, конъюгата IL-2, описанного в данном документе, белка, связывающего IL-2Rβγ, описанного в данном документе 0, активатора CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), описанного в данном документе, и/или фармацевтической композиции, описанной в данном документе. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ.

[00575] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен набор, содержащий одну или несколько последовательностей полинуклеиновых кислот, кодирующих полипептид IL-2, описанный в данном документе, конъюгат IL-2, описанный в данном документе, белок, связывающий IL-2Rβγ, описанный в данном документе, активатор CD4+ хелперной клетки, CD8+ эффекторной наивной и клетки памяти, натуральной киллерной (NK) клетки или натуральной киллерной T-клетки (NKT), описанный в данном документе, и/или фармацевтическую композицию, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу приблизительно 5000 дальтон (Да, например, 5 кДа или 5 кДа), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E62, соответствующем положению остатка 62 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rα или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγ, при этом сниженное связывание с IL-2Rα сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ.

[00576] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены система клеточной культуры, содержащая иммунную клетку, и выделенный и модифицированный полипептид IL-2, описанный в данном документе, и/или конъюгат IL-2, описанный в данном документе. В некоторых вариантах осуществления иммунная клетка включает CD4+ хелперную клетку, CD8+ эффекторную наивную и T-клетку памяти, CD8+ клетку, натуральную киллерную (NK) клетку или натуральную киллерную T-клетку (NKT). В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 или конъюгат IL-2 является эффективным для усиления размножения иммунной клетки.

[00577] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены реагенты для изготовления средства для адоптивной клеточной терапии, содержащего выделенный и модифицированный полипептид IL-2, описанный в данном документе, и/или конъюгат IL-2, описанный в данном документе. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 и/или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 и/или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке E61, соответствующем положению остатка 61 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 и/или конъюгат IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения растворимости выделенного и модифицированного полипептида IL-2 и/или конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для повышения стабильности выделенного и модифицированного полипептида IL-2 и/или конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения эффективности изготовления средства для адоптивной клеточной терапии, содержащего выделенный и модифицированный полипептид IL-2 и/или конъюгат IL-2.

[00578] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен выделенный и модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в определенном положении, что снижает эффективность рецепторной передачи сигнала к βγ-рецептору интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ, но сохраняет значительную активацию αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), при этом сниженную эффективность рецепторной передачи сигнала сравнивают с эффективностью рецепторной передачи сигнала между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rβγ, и при этом рекрутинг сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rγ полипептидом IL-2 дикого типа.

[00579] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен выделенный и модифицированный полипептид интерлейкина 2 (IL-2), содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в определенном положении, что повышает рекрутинг субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2, приводя к активации αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), при этом повышение рекрутинга сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rα полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132 и T133, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107,. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, и T133, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, и T113, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95 и Q126, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K8, K9 и H16, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из Q22, N26, N88 и Q126, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из E15, D20, D84 и E95, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из L12, L19 и M23, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из Q22 и N26, где нумерация аминокислотных остатков соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина, представляет собой аналог цистеина или аналог гистидина, содержит ароматическую боковую цепь, содержит азидогруппу, содержит алкиновую группу или содержит альдегидную или кетоновую группу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота включает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK; химическая структура которого показана в виде соединения 90 на фигуре 3C), N6-(пропаргилокси)-карбонил-L-лизин (PraK), BCN-L-лизин, норборненлизин, TCO-лизин, метилтетразинлизин, аллилоксикарбониллизин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, 2-амино-8-оксооктановую кислоту, п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (AMF), п-йод-L-фенилаланин, м-ацетилфенилаланин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргил-фенилаланин, 3-метил-фенилаланин, L-дофу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, O-аллилтирозин, O-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-фосфосерин, фосфоносерин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-окопропил)амино)этил)селанин)пропановую кислоту, 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту или селеноцистеин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одну неприродную аминокислоту встраивают в модифицированный полипептид IL-2 с помощью ортогональной тРНК. В некоторых вариантах осуществления ортогональная тРНК, раскрываемая в данном документе, содержит по меньшей мере одно неприродное нуклеиновое основание. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 ковалентно присоединен к конъюгирующему фрагменту посредством по меньшей мере одной неприродной аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент включает водорастворимый полимер, липид, белок или пептид. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер содержит молекулу PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой линейный PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой разветвленный PEG. В некоторых вариантах осуществления масса PEG составляет от приблизительно 2000 до 50000 дальтон (Да). В некоторых вариантах осуществления PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 Да, 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит F42 в положении остатка 42 последовательности под SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит P65 в положении остатка 65 последовательности под SEQ: 1. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит E62 в положении остатка 62 последовательности под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления в данном документе молекулярная масса определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови полипептида IL-2. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых вариантах осуществления PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-2 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на эффективность рецепторной передачи сигнала модифицированного полипептида IL-2 к комплексам передачи сигнала IL-2βγ или IL-2αβγ. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-2 с IL-2Rβγ или требуемое поддерживаемое связывание с комплексом передачи сигнала IL-2Rβγα, при этом сниженное связывание с IL-2Rβγ сравнивают со связыванием полипептида IL-2 дикого типа и IL-2Rβγα. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет на образование модифицированного полипептидного комплекса IL-2/IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер включает полисахарид. В некоторых вариантах осуществления полисахарид включает декстран, полисиаловую кислоту (PSA), гиалуроновую кислоту (HA), амилозу, гепарин, гепарансульфат (HS), декстрин или гидроксиэтилкрахмал (HES). В некоторых вариантах осуществления липид включает жирную кислоту. В некоторых вариантах осуществления жирная кислота содержит от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления жирная кислота представляет собой насыщенную жирную кислоту. В некоторых вариантах осуществления белок включает альбумин, трансферрин или транстиретин. В некоторых вариантах осуществления белок включает антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых вариантах осуществления в данном документе антитело или его связывающие фрагменты предусматривают Fc-часть антитела. В некоторых вариантах осуществления пептид включает пептид XTEN, богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP), полипептид PAS, эластин-подобный полипептид (ELP), пептид CTP или полимер желатин-подобного белка (GLK). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент опосредованно связан с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой модифицированного IL-2 посредством линкера. В некоторых вариантах осуществления линкер включает гомобифункциональный линкер, гетеробифункциональный линкер, линкер нулевой длины, расщепляемый или нерасщепляемый дипептидный линкер, малеимидную группу, спейсер или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 характеризуется снижением эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ, и при этом снижение эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 представляет собой функционально активный фрагмент полноразмерного полипептида IL-2, рекомбинантный полипептид IL-2 или рекомбинантный человеческий полипептид IL-2. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 содержит N-концевую делецию, C-концевую делецию или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления N-концевая делеция предусматривает делецию первых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 остатков с N-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления C-концевая делеция предусматривает делецию последних 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или более остатков с С-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления функционально активный фрагмент содержит участок IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130 или 1-125, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c последовательностью под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 с понижением эффективности рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ способен обеспечивать размножение CD4+ регуляторных Т-клеток (Treg). В некоторых вариантах осуществления конъюгирующий фрагмент ухудшает или блокирует эффективность рецепторной передачи сигнала IL-2 с IL-2Rβγ или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ. В некоторых вариантах осуществления пролиферация CD4+ Treg-клеток комплексом модифицированный IL-2/IL-2Rαβγ эквивалентна или превышает таковую у полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный комплекс IL-2/IL-2Rαβγ индуцирует пролиферацию CD4+ Treg-клеток в популяцию, что достаточно для модуляции течения заболевания в животной модели. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 проявляет эффективность в передаче сигнала первого рецептора к IL-2Rβγ и эффективность в передаче сигнала второго рецептора к IL-2Rαβγ, при этом эффективность в передаче сигнала первого рецептора выше в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или меньше, чем эффективность в передаче сигнала второго рецептора. В некоторых вариантах осуществления эффективность в передаче сигнала первого рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления эффективность в передаче сигнала второго рецептора модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем эффективность рецепторной передачи сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 дополнительно обеспечивает повышение рекрутинга субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2, что приводит к активации αβγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где повышение рекрутинга сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rα полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 дополнительно обеспечивает снижение рекрутинга субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ, при этом сниженный рекрутинг сравнивают с рекрутингом субъединицы IL-2Rβ и/или субъединицы IL-2Rγ полипептидом IL-2 дикого типа.

[00580] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен белок, связывающий αβγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где эффективность рецепторной передачи сигнала для βγ-рецептора интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) указанного связывающего белка меньше таковой у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту.

[00581] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен белок, связывающий αβγ-рецептор интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), где рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ указанным связывающим белком меньше такового у человеческого IL-2 (hIL-2) дикого типа, и где указанный связывающий белок содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления указанный связывающий белок представляет собой модифицированный полипептид IL-2 или его функционально активный фрагмент, где модифицированный полипептид IL-2 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту.

[00582] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены комплексы IL-2/IL-2Rαβγ, содержащие модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rαβγ, где модифицированный полипептид IL-2 характеризуется сниженной эффективностью рецепторной передачи сигнала к IL-2Rβγ, и где сниженную эффективность рецепторной передачи сигнала сравнивают с аффинностью связывания между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rβγ. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток на менее чем 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, или 0,1% в популяции CD3+ клеток при контакте указанного активатора с указанной популяцией CD3+ клеток по сравнению с размножением CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток в популяции CD3+ клеток при контакте с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор не обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vivo клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vitro клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой ex vivo клеточную популяцию.

[00583] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены комплексы IL-2/IL-2Rαβγ, содержащие модифицированный полипептид IL-2, содержащий неприродную аминокислоту, и IL-2Rαβγ, где рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ указанным модифицированным полипептидом IL-2 меньшее такового у полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-2 дополнительно содержит конъюгирующий фрагмент, ковалентно присоединенный к неприродной аминокислоте. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток на менее чем 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, или 0,1% в популяции CD3+ клеток при контакте указанного активатора с указанной популяцией CD3+ клеток по сравнению с размножением CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток в популяции CD3+ клеток при контакте с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор не обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vivo клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vitro клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой ex vivo клеточную популяцию.

[00584] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен активатор CD4+ Treg-клеток, который селективно обеспечивает размножение CD4+ Treg-клеток в клеточной популяции, где указанный активатор содержит модифицированный полипептид IL-2, содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток на менее чем 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, или 0,1% в популяции CD3+ клеток при контакте указанного активатора с указанной популяцией CD3+ клеток по сравнению с размножением CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток в популяции CD3+ клеток при контакте с полипептидом IL-2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления указанный активатор не обеспечивает размножение CD8+ эффекторной T-клетки и/или натуральных киллерных клеток. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vivo клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой in vitro клеточную популяцию. В некоторых вариантах осуществления указанная клеточная популяция представляет собой ex vivo клеточную популяцию.

[00585] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлена фармацевтическая композиция, содержащая выделенный и модифицированный полипептид IL-2, описанный в данном документе, белок, связывающий IL-2Rαβγ, описанный в данном документе, или CD4⁺ Treg, описанную в данном документе, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию составляют для системной доставки. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию составляют для парентерального введения. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное заболевание или нарушение включает очаговую алопецию, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, миастению гравис, рассеянный склероз, пемфигус/пемфигоид, пернициозную анемию, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермию, синдром Шегрена, системную красную волчанку, тироидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 и дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 и дополнительное терапевтическое средство вводят последовательно. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 вводят перед дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 вводят после введения дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления субъект является человеком.

[00586] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены способы лечения аутоиммунного заболевания или нарушения у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение субъекту терапевтически эффективного количества выделенного и модифицированного полипептида IL-2, описанного в данном документе, белка, связывающего IL-2Rαβγ, описанного в данном документе, CD4⁺ Treg-клетки, описанной в данном документе, или фармацевтической композиции, описанной в данном документе. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное заболевание или нарушение включает очаговую алопецию, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, миастению гравис, рассеянный склероз, пемфигус/пемфигоид, пернициозную анемию, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермию, синдром Шегрена, системную красную волчанку, тироидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 и дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 и дополнительное терапевтическое средство вводят последовательно. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 вводят перед дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-2 вводят после введения дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления субъект является человеком.

[00587] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлен способ размножения популяции CD4+ регуляторных T-клеток (Treg), включающий приведение в контакт клетки с выделенным и модифицированным полипептидом IL-2, описанным в данном документе, описанным в данном документе белком, связывающим IL-2Rαβγ, CD4⁺ Treg-клеткой, описанной в данном документе, или фармацевтической композицией, описанной в данном документе, в течение времени, достаточного для индуцирования образования комплекса с IL-2Rαβγ, за счет чего обеспечивается стимуляция размножения популяции Treg-клеток. В некоторых вариантах осуществления способ представляет собой in vivo способ. В некоторых вариантах осуществления способ представляет собой in vitro способ. В некоторых вариантах осуществления способ представляет собой ex vivo способ.

[00588] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены наборы, содержащие выделенный и модифицированный полипептид IL-2, описанный в данном документе, белок, связывающий IL-2Rαβγ, описанный в данном документе, CD4⁺ Treg-клетку, описанную в данном документе, или фармацевтическую композицию, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке E61, соответствующем положению остатка 61 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения растворимости выделенного и модифицированного полипептида IL-2 и/или конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для повышения стабильности выделенного и модифицированного полипептида IL-2 и/или конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения эффективности изготовления средства для адоптивной клеточной терапии, содержащего выделенный и модифицированный полипептид IL-2 и/или конъюгат IL-2.

[00589] В аспектах, раскрываемых в данном документе, представлены реагенты для изготовления средства для адоптивной клеточной терапии, содержащего выделенный и модифицированный полипептид IL-2, описанный в данном документе, белок, связывающий IL-2Rαβγ, описанный в данном документе, CD4⁺ Treg-клетку, описанную в данном документе, или фармацевтическую композицию, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке P65, соответствующем положению остатка 65 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке E61, соответствующем положению остатка 61 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления выделенный и модифицированный полипептид IL-2 содержит мутацию в остатке F42, соответствующем положению остатка 42 в SEQ ID NO: 1, и конъюгирующий фрагмент, содержащий PEG, при этом PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 дальтон (Да), 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения растворимости выделенного и модифицированного полипептида IL-2 и/или конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для повышения стабильности выделенного и модифицированного полипептида IL-2 и/или конъюгата IL-2. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG является эффективной для улучшения эффективности изготовления средства для адоптивной клеточной терапии, содержащего выделенный и модифицированный полипептид IL-2 и/или конъюгат IL-2.

Определенная терминология

[00590] Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники, к которой принадлежит заявленный объект изобретения. Следует понимать, что подробное описание является лишь иллюстративным и пояснительным и не ограничивает какой-либо заявленный объект изобретения. В данной заявке применение единственного числа включает множественное число, если специально не указано иное. Следует отметить, что применяемые в данном описании формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если контекстом явно не предписывается иное. В данной заявке применение "или" означает "и/или", если не указано иное. Кроме того, применение термина "включая", а также других форм, таких как "включать", "включает" и "включенный", не является ограничивающим.

[00591] Хотя различные признаки настоящего изобретения могут быть описаны в контексте одного варианта осуществления, признаки также могут быть предусмотрены отдельно или в любой подходящей комбинации. Наоборот, несмотря на то, что настоящее изобретение может быть описано в данном документе в контексте отдельных вариантов осуществления для ясности, настоящее изобретение также может быть реализовано в одном варианте осуществления.

[00592] Ссылка в настоящем описании на "некоторые варианты осуществления", "вариант осуществления", "один вариант осуществления" или "другие варианты осуществления" означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с вариантами осуществления, включены по меньшей мере в некоторые варианты осуществления, но не обязательно во все варианты осуществления настоящего изобретения.

[00593] Применяемые в данном документе, диапазоны и количества могут быть выражены как "приблизительно" конкретное значение или диапазон. "Приблизительно" также включает точное количество. Следовательно "приблизительно 5 мкл" означает "приблизительно 5 мкл", а также "5 мкл." Как правило, выражение "приблизительно" включает количество, которое, как ожидается, будет находиться в пределах экспериментальной погрешности, например в пределах 15%, 10% или 5%.

[00594] Применяемые в данном документе заголовки разделов служат только в организационных целях и не должны пониматься как ограничивающие описываемый объект изобретения.

[00595] Применяемые в данном документе термины "индивидуум(индивидуумы)", "субъект(субъекты)" и "пациент(пациенты)" означают любое млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее является человеком. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее является отличным от человека. Ни один из терминов не требует ситуаций, характеризующихся наблюдением (например, постоянным или периодическим) медицинского работника (например, врача, дипломированной медсестры, практикующей медсестры, фельдшера, санитара или работника хосписа), или не ограничивается ими.

[00596] Используемое в данном документе выражение "значительный" или "в значительной степени" применительно к аффинности связывания означает изменение аффинности связывания цитокина (например, полипептида IL-2), достаточное для воздействия на связывание цитокина (например, полипептида IL-2) с целевым рецептором. В некоторых случаях термин относится к изменению на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более. В некоторых случаях термин означает изменение в по меньшей мере 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или более.

[00597] В некоторых случаях выражение "значительный" или "в значительной степени" применительно к активацию одной или нескольких популяций клеток посредством сигнального комплекса цитокина означает изменение, достаточное для активации популяции клеток. В некоторых случаях изменение для активации популяции клеток измеряется как эффективность рецепторной передачи сигнала. В таких случаях может быть предусмотрено значение EC50. В других случаях может быть предусмотрено значение ED50. В дополнительных случаях может быть предусмотрена концентрация или дозировка цитокина.

[00598] Используемый в данном документе термин "эффективность" относится к количеству цитокина (например, полипептида IL-2), необходимому для достижения целевого эффекта. В некоторых случаях термин "эффективность" относится к количеству цитокина (например, полипептида IL-2), необходимому для активации целевого рецептора цитокина (например, рецептора IL-2). В других случаях термин "эффективность" относится к количеству цитокина (например, полипептида IL-2), необходимому для активации целевой популяции клеток. В некоторых случаях эффективность измеряется как ED50 (эффективная доза 50) или доза, необходимая для достижения 50% от максимального эффекта. В других случаях эффективность измеряется как ЕС50 (эффективная концентрация 50) или доза, необходимая для достижения целевого эффекта у 50% популяции.

Пронумерованные варианты осуществления

[00599] В настоящем изобретении представлены следующие неограничивающие пронумерованные варианты осуществления.

Вариант осуществления 1. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3, в которой по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (I),

формула (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 2. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-2 заменен структурой формулы (I),

формула (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

X имеет структуру

; и

где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 3. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 4. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 5. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 6. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 7. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 8. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 9. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 8, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 10. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 8, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 11. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 1 или 2, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69 и L72, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 12. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 11, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 выбрано из F42, E62 и P65, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-2 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 13. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 15-19, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II), или формулы (III), или смеси формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 14. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 13, где [AzK_PEG] представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 15. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 13, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II),

формула (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 16. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 15, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 17. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 16, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 18. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 17, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 19. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 17, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 20. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 17, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 21. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 15, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 16, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 22. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 21, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 23. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 22, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 24. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 23, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 25. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 23, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 26. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 15, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 17, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 27. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 26, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 28. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 27, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 29. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 27, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 30. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 27, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 31. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 15, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 32. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 31, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 33. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 32, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 34. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 33, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 35. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 33, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 36. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 15, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 37. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 36, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 38. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 37, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 39. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 38, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 40. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 38, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 41. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 13, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (III),

формула (III),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 42. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 41, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 43. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 42, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 44. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 43, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 45. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 44, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 46. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 44, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 47. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 41, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 16, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 48. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 47, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 49. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 48, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 50. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 49, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 51. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 49, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 52. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 41, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 17, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 53. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 52, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 54. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 53, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 55. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 54, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 56. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 54, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 57. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 41, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 58. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 57, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 59. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 58, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 60. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 59, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 61. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 59, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 62. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 41, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 63. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 62, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 64. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 63, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 65. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 64, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 66. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 64, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 67. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 1-66, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 68. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 1-66, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 69. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 1-66, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 70. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 1-66, где W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 71. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 70, где группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 72. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 71, где группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 73. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 71, где группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 74. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 20-24, где [AzK_PEG5kD] имеет структуру формулы (II), или формулы (III), или смеси формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 75. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 76. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 77. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 78. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 79. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 80. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где [AzK_PEG5kD] имеет структуру формулы (II),

формула (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 81. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 80, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 82. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 80, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 83. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 80, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 84. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 80, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 85. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 80, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 86. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 74, где [AzK_PEG5kD] имеет структуру формулы (III),

формула (III),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 87. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 86, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 88. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 86, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 89. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 86, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 90. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 86, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 91. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 86, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 92. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 25-29, где [AzK_PEG30kD] имеет структуру формулы (II) или формулы (III) или представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 93. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 94. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 95. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 96. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 97. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 98. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где [AzK_PEG30kD] имеет структуру формулы (II),

формула (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 99. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 98, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 100. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 98, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 101. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 98, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 102. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 98, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 103. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 98, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 104. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 92, где [AzK_PEG30kD] имеет структуру формулы (III),

формула (III),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 105. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 104, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 106. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 104, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 107. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 104, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 108. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 104, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 109. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 104, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 110. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 15-19, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 111. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 110, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1.

Вариант осуществления 112. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 110, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG] в конъюгате IL-2, составляет более 1:1.

Вариант осуществления 113. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 110, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG] в конъюгате IL-2, составляет менее 1:1.

Вариант осуществления 114. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 110-113, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 115. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 110-113, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 116. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 110-113, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 117. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 110-113, где W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 118. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 117, где группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 119. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 118, где группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 120. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 118, где группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 121. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 20-24, где [AzK_PEG5kD] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 122. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 121, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1.

Вариант осуществления 123. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 121, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет более 1:1.

Вариант осуществления 124. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 121, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет менее 1:1.

Вариант осуществления 125. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 25-29, где [AzK_PEG30kD] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

формула (II),

формула (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 126. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 125, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1.

Вариант осуществления 127. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 125, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет более 1:1.

Вариант осуществления 128. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 125, где отношение количества структуры формулы (II) к количеству структуры формулы (III), содержащихся в общем количестве [AzK_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет менее 1:1.

Вариант осуществления 129. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 40-44, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV), или формулы (V), или смеси формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 130. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 129, где [AzK_L1_PEG] представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 131. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 129, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV),

формула (IV),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 132. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 131, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 133. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 132, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 134. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 133, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 135. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 133, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 136. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 133, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 137. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 131, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 138. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 137, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 139. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 138, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 140. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 139, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 141. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 139, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 142. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 129, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 143. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 142, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 144. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 143, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 145. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 144, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 146. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 144, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 147. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 129, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 148. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 147, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 149. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 148, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 150. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 149, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 151. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 149, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 152. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 129, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 153. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 152, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 154. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 153, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 155. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 154, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 156. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 155, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 157. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 129, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (V),

формула (V),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 158. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 157, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 159. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 158, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 160. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 159, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 161. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 160, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 162. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 160, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 163. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 157, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 164. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 163, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 165. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 164, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 166. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 165, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 167. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 165, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 168. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 157, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 169. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 168, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 170. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 169, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 171. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 170, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 172. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 170, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 173. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 157, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 174. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 173, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 175. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 174, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 176. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 175, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 177. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 175, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 178. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 157, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 179. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 178, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 180. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 179, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 181. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 180, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 182. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 180, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 183. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 129-182, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 184. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 129-182, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 185. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 129-182, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 186. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 129-182, где W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 187. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 186, где группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 188. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 187, где группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 189. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 187, где группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 190. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 45-49, где [AzK_L1_PEG5kD] имеет структуру формулы (IV), или формулы (V), или смеси формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 191. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 192. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 193. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 194. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 195. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 196. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где [AzK_L1_PEG5kD] имеет структуру формулы (IV),

формула (IV),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 197. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 196, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 198. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 196, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 199. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 196, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 200. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 196, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 201. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 196, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 202. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 190, где [AzK_L1_PEG5kD] имеет структуру формулы (V),

формула (V),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 203. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 202, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 204. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 202, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 205. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 202, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 206. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 202, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 207. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 202, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 208. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 50-54, где [AzK_L1_PEG30kD] имеет структуру формулы (IV) или формулы (V) или представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 209. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 208, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 210. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 208, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 211. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 208, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 212. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 208, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 213. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 208, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 214. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 208, где [AzK_L1_PEG30kD] имеет структуру формулы (IV),

формула (IV),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 215. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 214, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 216. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 214, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 217. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 214, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 218. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 214, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 219. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 214, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 220. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 214, где [AzK_L1_PEG30kD] имеет структуру формулы (V),

формула (V),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 221. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 220, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 222. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 220, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 223. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 220, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 224. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 220, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 225. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 220, где конъюгат IL-2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 226. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 40-44, где [Azk_L1_PEG] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 227. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 226, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1.

Вариант осуществления 228. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 226, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG] в конъюгате IL-2, составляет более 1:1.

Вариант осуществления 229. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 226, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG] в конъюгате IL-2, составляет менее 1:1.

Вариант осуществления 230. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 226-229, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 231. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 226-229, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 232. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 226-229, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 233. Конъюгат IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 226-229, где W представляет собой группу метокси-PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 234. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 233, где группа метокси-PEG является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 235. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 234, где группа метокси-PEG является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 236. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 234, где группа метокси-PEG является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 237. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 45-49, где [AzK_L1_PEG5kD] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 238. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 237, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_ PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1.

Вариант осуществления 239. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 237, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет более 1:1.

Вариант осуществления 240. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 237, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG5kD] в конъюгате IL-2, составляет менее 1:1.

Вариант осуществления 241. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 50-54, где [AzK_L1 PEG30kD] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

формула (IV),

формула (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления 242. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 241, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет приблизительно 1:1.

Вариант осуществления 243. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 241, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет более 1:1.

Вариант осуществления 244. Конъюгат IL-2 согласно варианту осуществления 241, где отношение количества структуры формулы (IV) к количеству структуры формулы (V), содержащихся в общем количестве [AzK_L1_PEG30kD] в конъюгате IL-2, составляет менее 1:1.

Вариант осуществления 245. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-2 согласно любому из вариантов осуществления 1-244.

Вариант осуществления 246. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 245, где рак у субъекта выбран из почечноклеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), классической лимфомы Ходжкина (cHL), первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы (PMBCL), уротелиальной карциномы, рака с микросателлитной нестабильностью, рака с микросателлитной стабильностью, рака желудка, рака шейки матки, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), меланомы, мелкоклеточного рака легкого (SCLC), эзофагеального, глиобластомы, мезотелиомы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака яичника, опухолей со средней или низкой мутационной нагрузкой, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC), плоскоклеточного рака кожи (SCSC), опухолей с низким уровнем экспрессии PD-L1 или без таковой, опухолей, распространяющихся системно в печень и CNS за пределы их первичного анатомического участка происхождения, и диффузной В-крупноклеточной лимфомы.

Вариант осуществления 247. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 246, где рак у субъекта выбран из почечноклеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), уротелиальной карциномы и меланомы.

Вариант осуществления 248. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-247, где конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в 4 недели, один раз в 5 недель, один раз в 6 недель, один раз в 7 недель или один раз в 8 недель.

Вариант осуществления 249. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 248, где конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю или один раз в две недели.

Вариант осуществления 250. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 249, где конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю.

Вариант осуществления 251. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 249, где конъюгат IL-2 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в две недели.

Вариант осуществления 252. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов у субъекта.

Вариант осуществления 253. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 2, степени 3 или степени 4 у субъекта.

Вариант осуществления 254. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 2 у субъекта.

Вариант осуществления 255. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 253, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 3 у субъекта.

Вариант осуществления 256. Способ лечения рака у субъекта согласно варианту осуществления 253, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости сосудов степени 4 у субъекта.

Вариант осуществления 257. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к потере сосудистого тонуса у субъекта.

Вариант осуществления 258. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к экстравазации белков плазмы крови и жидкости во внесосудистое пространство у субъекта.

Вариант осуществления 259. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к развитию гипотонии и снижения перфузии органа у субъекта.

Вариант осуществления 260. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к нарушения функции нейтрофилов у субъекта.

Вариант осуществления 261. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к снижению хемотаксиса у субъекта.

Вариант осуществления 262. Способ лечения рака у субъекта в соответствии с любым из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не ассоциировано с повышенным риском диссеминированной инфекции у субъекта.

Вариант осуществления 263. Способ согласно варианту осуществления 262, где диссеминированная инфекция представляет собой сепсис или бактериальный эндокардит.

Вариант осуществления 264. Способ согласно варианту осуществления 263, где диссеминированная инфекция представляет собой сепсис.

Вариант осуществления 265. Способ согласно варианту осуществления 262, где диссеминированная инфекция представляет собой бактериальный эндокардит.

Вариант осуществления 266. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где субъекта лечат от любых предшествующих бактериальных инфекций перед введением конъюгата IL-2.

Вариант осуществления 267. Способ согласно варианту осуществления 266, где субъекта лечат антибактериальным средством, выбранным из оксациллина, нафциллина, ципрофлоксацина и ванкомицина, перед введением конъюгата IL-2.

Вариант осуществления 268. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не усугубляет проявлений уже существующего или возникшего впервые аутоиммунного заболевания или воспалительного нарушения у субъекта.

Вариант осуществления 269. Способ в соответствии с вариантом осуществления 268, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не усугубляет проявлений уже существующего или возникшего впервые аутоиммунного заболевания у субъекта.

Вариант осуществления 270. Способ согласно варианту осуществления 268, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не усугубляет проявлений уже существующего или возникшего впервые воспалительного нарушения у субъекта.

Вариант осуществления 271. Способ согласно варианту осуществления 268, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта выбрано из болезни Крона, склеродермии, тироидита, воспалительного артрита, сахарного диабета, окулобульбарной миастении гравис, серповидного гломерулонефрита IgA, холецистита, церебрального васкулита, синдрома Стивенса-Джонсона и буллезного пемфигоида.

Вариант осуществления 272. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой болезнь Крона.

Вариант осуществления 273. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой склеродермию.

Вариант осуществления 274. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой тироидит.

Вариант осуществления 275. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой воспалительный артрит.

Вариант осуществления 276. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой сахарный диабет.

Вариант осуществления 277. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой окулобульбарную миастению гравис.

Вариант осуществления 278. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой серповидный гломерулонефрит IgA.

Вариант осуществления 279. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой холецистит.

Вариант осуществления 280. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой церебральный васкулит.

Вариант осуществления 281. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой синдром Стивенса-Джонсона.

Вариант осуществления 282. Способ согласно варианту осуществления 271, где аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение у субъекта представляет собой буллезный пемфигоид.

Вариант осуществления 283. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению изменений психического статуса, речевых затруднений, корковой слепоты, атаксии конечностей или походки, галлюцинаций, возбуждения, заторможенности или комы у субъекта.

Вариант осуществления 284. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению судорог у субъекта.

Вариант осуществления 285. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, имеющим подтвержденное судорожное нарушение.

Вариант осуществления 286. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров у субъекта.

Вариант осуществления 287. Способ согласно варианту осуществления 286, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров 2 степени, 3 степени или 4 степени у субъекта.

Вариант осуществления 288. Способ согласно варианту осуществления 287, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров 2 степени у субъекта.

Вариант осуществления 289. Способ согласно варианту осуществления 287, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров 3 степени у субъекта.

Вариант осуществления 290. Способ согласно варианту осуществления 287, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению синдрома повышенной проницаемости капилляров 4 степени у субъекта.

Вариант осуществления 291. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к снижению среднего артериального давления крови у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 292. Способ согласно варианту осуществления 291, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к развитию гипотонии у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 293. Способ согласно варианту осуществления 292, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит у субъекта к снижению систолического давления крови ниже 90 мм рт. ст. или к снижению на 20 мм рт. ст. от исходного систолического давления после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 294. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению отека у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 295. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к нарушению функции почек или печени у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 296. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению эозинофилии у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 297. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 500 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 298. Способ согласно варианту осуществления 297, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 500 на мкл - 1500 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 299. Способ согласно варианту осуществления 297, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 1500 на мкл - 5000 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 300. Способ согласно варианту осуществления 297, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к повышению количества эозинофилов в периферической крови у субъекта до значения, превышающего 5000 на мкл, после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 301. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые уже проходят курс лечения психотропными лекарственными средствами.

Вариант осуществления 302. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые уже проходят курс лечения нефротоксическими, миелотоксическими, кардиотоксическими или гепатотоксическими лекарственными средствами.

Вариант осуществления 303. Способ согласно варианту осуществления 302, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые уже проходят курс лечения аминогликозидами, с использованием цитотоксической химиотерапии, доксорубицином, метотрексатом или аспарагиназой.

Вариант осуществления 304. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не противопоказано субъектам, которые получают курсы лечения комбинированными препаратами, содержащими противоопухолевые средства.

Вариант осуществления 305. Способ согласно варианту осуществления 304, где противоопухолевое средство выбрано из дакарбазина, цисплатина, тамоксифена и интерферона-альфа.

Вариант осуществления 306. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений степени 4 у субъекта после введения конъюгата IL-2 субъекту.

Вариант осуществления 307. Способ согласно варианту осуществления 306, где одно или несколько нежелательных явлений 4 степени выбраны из гипотермии, шока, брадикардии, желудочковой экстрасистолии, ишемии миокарда, обморока, кровоизлияния, предсердной аритмии, флебита, AV-блокады второй степени, эндокардита, выпота в перикард, периферической гангрены, тромбоза, нарушения коронарной артерии, стоматита, тошноты и рвоты, отклонения от нормы биохимических показателей функции печени, желудочно-кишечного кровоизлияния, гематемезиса, геморрагического поноса, желудочно-кишечного нарушения, прободения кишечника, панкреатита, анемии, лейкопении, лейкоцитоза, гипокальцемии, повышения уровня щелочной фосфатазы, повышения концентрации азота мочевины в крови (BUN), гиперурикемии, повышения небелкового азота (NPN), респираторного ацидоза, сонливости, возбуждения, нейропатии, параноидной реакции, судороги, большого эпилептического припадка, делирия, астмы, отека легких, гипервентиляции, гипоксии, кровохаркания, гиповентиляции, пневмоторакса, мидриаза, нарушения функции зрачков, нарушения функции почек, почечной недостаточности и острого канальцевого некроза.

Вариант осуществления 308. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 группе субъектов не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений степени 4 у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-2 субъектам.

Вариант осуществления 309. Способ согласно варианту осуществления 307, где одно или несколько нежелательных явлений 4 степени выбраны из гипотермии, шока, брадикардии, желудочковой экстрасистолии, ишемии миокарда, обморока, кровоизлияния, предсердной аритмии, флебита, AV-блокады второй степени, эндокардита, выпота в перикард, периферической гангрены, тромбоза, нарушения коронарной артерии, стоматита, тошноты и рвоты, отклонения от нормы биохимических показателей функции печени, желудочно-кишечного кровоизлияния, гематемезиса, геморрагического поноса, желудочно-кишечного нарушения, прободения кишечника, панкреатита, анемии, лейкопении, лейкоцитоза, гипокальцемии, повышения уровня щелочной фосфатазы, повышения концентрации азота мочевины в крови (BUN), гиперурикемии, повышения небелкового азота (NPN), респираторного ацидоза, сонливости, возбуждения, нейропатии, параноидной реакции, судороги, большого эпилептического припадка, делирия, астмы, отека легких, гипервентиляции, гипоксии, кровохаркания, гиповентиляции, пневмоторакса, мидриаза, нарушения функции зрачков, нарушения функции почек, почечной недостаточности и острого канальцевого некроза.

Вариант осуществления 310. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 группе субъектов не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-2 субъектам, где одно или несколько нежелательных явлений выбраны из язвы двенадцатиперстной кишки, некроза кишечника, миокардита, суправентрикулярной тахикардии, постоянной или проходящей слепоты, вторичной по отношению к невриту зрительного нерва, транзиторной ишемической атаки, менингита, церебрального отека, перикардита, аллергического интерстициального нефрита и трахеопищеводной фистулы.

Вариант осуществления 311. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 группе субъектов не приводит к возникновению одного или нескольких нежелательных явлений у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-2 субъектам, где одно или несколько нежелательных явлений выбраны из злокачественной гипертермии, остановки сердца, инфаркта миокарда, легочной эмболии, инсульт, прободения кишечника, печеночной или почечной недостаточности, тяжелой депрессии, приводящей к суициду, легочного отека, остановки дыхания, дыхательной недостаточности.

Вариант осуществления 312. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не приводит к продуцированию нейтрализующих антител к конъюгату IL-2.

Вариант осуществления 313. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-256, где введение конъюгата IL-2 субъекту обеспечивает повышение количества периферических CD8+ T- и NK-клеток у субъекта без повышения количества периферических CD4+ регуляторных T-клеток у субъекта.

Вариант осуществления 314. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-256, где введение конъюгата IL-2 субъекту обеспечивает повышение количества периферических CD8+ T- и NK-клеток у субъекта без повышения количества периферических эозинофилов у субъекта.

Вариант осуществления 315. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-256, где введение конъюгата IL-2 субъекту обеспечивает повышение количества внутриопухолевых CD8+ T- и NK-клеток у субъекта без повышения количества внутриопухолевых CD4+ регуляторных T-клеток у субъекта.

Вариант осуществления 316. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество IL-конъюгата согласно любому из вариантов осуществления 1-244 и одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

Вариант осуществления 317. Способ лечения рака у субъекта согласно любому из вариантов осуществления 245-251, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не требует наличия отделения интенсивной терапии или квалифицированных специалистов в области сердечно-легочной медицины или интенсивной терапии.

Вариант осуществления 318. Способ согласно варианту осуществления 317, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не требует наличия отделения интенсивной терапии.

Вариант осуществления 319. Способ согласно варианту осуществления 317, где введение эффективного количества конъюгата IL-2 субъекту не требует наличия квалифицированных специалистов в области сердечно-легочной медицины или интенсивной терапии.

ПРИМЕРЫ

[00600] Данные примеры представлены исключительно в иллюстративных целях и не ограничивают объем представленной в данном документе формулы изобретения.

[00601] В каждом из соединений, раскрытых в примерах 2-12, используется SEQ ID NO: 4 и фрагмент [AzK_PEG], где положение замененной аминокислоты в конъюгате IL-2 относится к положениям в последовательности под SEQ ID NO: 4.

[00602] Например, соединение, обозначенное как "P65_5kD" в таблицах 2A и 2B, получали с использованием способов, аналогичных тем, которые описаны в примере 2, где сперва получали белок, имеющий последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой пролин в положении 65 был заменен AzK. Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 20, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа.

[00603] В другом примере соединение, обозначенное как "P65_30kD" в таблицах 2A и 2B, получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой пролин в положении 65 был заменен AzK. Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 25, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[00604] Аналогично соединение, обозначенное как "P65_30kD", получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой пролин в положении 65 был заменен на N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK) (SEQ ID NO: 10). Соединение также может быть определено как соединение, содержащее аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой пролин в положении 65 (P65) заменен структурой формулы (VI) или структурой формулы (VII) или смесью структур формул (VI) и (VII), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение также может быть определено как соединение, содержащее аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой пролин в положении 65 (P65) заменен структурой формулы (X) или структурой формулы (XI) или смесью структур формул (X) и (XI), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение P65_30kD использовали в примерах 5, 6, 7 и 8.

[00605] В другом примере соединение, обозначенное как "E62_5kD" в таблицах 2A и 2B, получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой глутаминовая кислота в положении 62 была заменена AzK. Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 21, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа.

[00606] Аналогично соединение, обозначенное как "E62_5kD", получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой глутаминовая кислота в положении 62 (E62) была заменена на N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин AzK (SEQ ID NO: 11). Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 21, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 5 кДа. Соединение E62_5kD использовали в примере 9.

[00607] В другом примере соединение, обозначенное как "E62_30kD" в таблицах 2A и 2B, получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой глутаминовая кислота в положении 62 была заменена AzK. Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 26, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[00608] Аналогично соединение, обозначенное как "E62_30kD", получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой глутаминовая кислота в положении 62 (E62) была заменена на N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK) (SEQ ID NO: 11). Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 26, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. Соединение также может быть определено как соединение, содержащее аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой глутаминовая кислота в положении 62 (E62) заменена структурой формулы (VI) или структурой формулы (VII) или смесью структур формул (VI) и (VII), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение также может быть определено как соединение, содержащее аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой глутаминовая кислота в положении 62 (E62) заменена структурой формулы (X) или структурой формулы (XI) или смесью структур формул (X) и (XI), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение E62_30kD использовали в примерах 3, 5 и 9.

[00609] В другом примере соединение, обозначенное как "K35_30kD" и используемое в примере 12, получали сперва посредством получения белка, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой лизин в положении 35 был заменен на N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK) (SEQ ID NO: 14). Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 29, содержащую структуру формулы (II), структуру формулы (III) или смесь структур формул (II) и (III), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. Соединение также может быть определено как соединение, содержащее аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой лизин в положении 35 (K35) заменен структурой формулы (VI) или структурой формулы (VII) или смесью структур формул (VI) и (VII), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение также может быть определено как соединение, содержащее аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4, в которой лизин в положении 35 (K35) заменен структурой формулы (X) или структурой формулы (XI) или смесью структур формул (X) и (XI), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа.

[00610] Соединение, раскрываемое в примерах 13 и 14, обозначенное как "IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1", получали с использованием способов, аналогичных тем, которые описаны в примере 2, где сперва получали белок, имеющий последовательность под SEQ ID NO 3, в которой пролин в положении 64 был заменен AzK. Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, с получением продукта, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 50, содержащую структуру формулы (IV), структуру формулы (V) или смесь структур формул (IV) и (V), где W представляет собой метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[00611] Аналогично соединение, обозначенное как "IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1", получали с использованием способов, аналогичных тем, которые описаны в примере 2, где сперва получали белок, имеющий последовательность под SEQ ID NO: 3, в которой пролин в положении 64 был заменен на N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин AzK (SEQ ID NO: 35). Затем проводили реакцию AzK-содержащего белка в условиях клик-химии с DBCO, содержащим метокси, линейную группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. Соединение IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 также определяли как соединение, имеющее последовательность под SEQ ID NO: 3, в которой остаток пролина в положении 64 (P64) заменен структурой формулы (VIII) или структурой формулы (IX) или смесью структур формул (VIII) и (IX), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 также определяли как соединение, имеющее последовательность под SEQ ID NO: 3, в которой остаток пролина в положении 64 (P64) заменен структурой формулы (XII) или структурой формулы (XIII) или смесью структур формул (XII) и (XIII), и где n представляет собой такое целое число, что группа PEG имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа. Соединение IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1 использовали в примерах 13, 14 и 15.

ПРИМЕР 1

[00612] Анализы димеризации киназных и цитокиновых рецепторов

[00613] Обработка клеток

[00614] Обеспечивали размножение клеточных линий PathHunter из замороженных исходных культур в соответствии со стандартными процедурами. Клетки высевали в общем объеме 20 мкл в 384-луночные микропланшеты с белыми стенками и инкубировали в течение соответствующего периода времени перед анализом.

[00615] Формат агониста

[00616] Для определения агониста клетки инкубировали с образцом для индуцирования ответа. Осуществляли промежуточное разбавление исходных культур для получения 5Х образца в буфере для анализа. Приблизительно 5 мкл 5X образца добавляли к клеткам и инкубировали при 37°C в течение 6-16 часов в зависимости от анализа. Концентрация среды-носителя составляла 1%.

[00617] Детекция сигнала

[00618] Сигнал в анализе получали путем однократного добавления 12,5 или 15 мкл (50% об./об.) детектирующего коктейля реагентов PathHunter для анализов агонистов и антагонистов соответственно, с последующей инкубацией в течение одного часа при комнатной температуре. В случае некоторых анализов активность детектировали с использованием высокочувствительного детектирующего реагента (PathHunter Flash Kit) с целью улучшения эффективности анализа. В ходе данных анализов в лунки добавляли равный объем детектирующего реагента (25 или 30 мкл) с последующей инкубацией в течение одного часа при комнатной температуре. Считывание микропланшетов проводили после генерации сигнала с использованием прибора PerkinElmer EnvisionTM для детекции хемилюминесцентного сигнала.

[00619] Анализ данных

[00620] Активность соединения анализировали с использованием пакета для анализа данных CBIS (ChemInnovation, CA). Для анализов в режиме агониста процент активности рассчитывали по следующей формуле:

% активности=100% x (средняя RLU анализируемого образца - средняя RLU контрольной среды-носителя) / (средняя MAX RLU контрольного лиганда - средняя RLU контрольной среды-носителя).

[00621] Для анализов в режиме антагониста процент подавления рассчитывали по следующей формуле:

% подавления=100% x (1 - (средняя RLU анализируемого образца - средняя RLU контрольной среды-носителя) / (средняя RLU EC80 контроля - средняя RLU контрольной среды-носителя)).

ПРИМЕР 2

[00622] Скрининг на основе клеток для идентификации пегилированных соединений IL-2 без вовлечения IL-2Rα

[00623] Структурные данные сигнального комплекса IL-2/гетеротримерный рецептор (PDB: 2ERJ) использовали для управления конструированием сайтов nAA-пегилирования, чтобы специфически устранить взаимодействие IL-2 и субъединицы α-рецептора IL-2 (IL-2Rα). Проводили функциональный анализ иллюстративных конъюгатов IL-2: K35, F42, K43, E62 и P65. Конъюгаты IL-2 экспрессировали в виде телец включения в E. coli, очищали и подвергали повторному фолдингу с использованием стандартных процедур перед сайт-специфическим пегилированием продукта IL-2 с применением DBCO-опосредованной клик-химии без участия меди для стабильного ковалентного присоединения фрагментов mPEG к AzK (схема 1).

[00624] Схема 1. Иллюстративный синтез вариантов AzK_PEG интерлейкина (где n обозначает число повторяющихся звеньев PEG). Региоизомеры

[00625] Схема 2. Иллюстративный синтез вариантов AzK_PEG интерлейкина (где n обозначает число повторяющихся звеньев PEG). Может быть получена смесь региоизомеров.

[00626] Конъюгаты IL-2 подвергали скринингу на предмет функциональной активности в Discoverx (Фримонт, Калифорния) с использованием анализа рецепторов цитокина IL-2 PathHunter. В данном анализе использовали рекомбинантную линию человеческих клеток U2OS, которая экспрессирует субъединицы β (IL-2Rβ) и γ (IL-2Rγ) рецептора IL-2, каждая из которых слита с половиной репортерного сплит-фермента β -галактозидазы. Дополнительно конструировали вторую клеточную линию для экспрессии субъединицы IL-2Rα. Параллельный анализ с этими двумя клеточными линиями позволяет оценить активацию варианта рецептора IL-2 αβγ, а также базального комплекса βγ. Активность агониста IL-2 в комплексе βγ-рецептора IL-2 стимулирует димеризацию рецептора и восстановление репортерной β-галактозидазы, что дает хемилюминесцентный сигнал. Анализ проводили в режиме агониста для определения EC₅₀ каждого анализируемого изделия, а сравнение профилей кривой зависимости доза-ответ между положительными и отрицательными по IL2Rα типами клеток позволяет определить участие IL2Rα в наблюдаемой активности.

[00627] В таблице 1 показаны данные по ЕС50 для агонизма рецептора IL-2 при клеточном скрининге пегилированных конъюгатов IL-2 10 кДа (за исключением отмеченных случаев)

Сайт βγ
EC50 (нМ) αβγ
EC50 (нМ) Соотношение βγ/αβγ Нативный 1,68 0,074 23 Оптимальный 1,68 1,68 1 K35 6,75 0,15 45 F42 6,09 0,515 12 K43 9,84 0,131 75 E62 3 1,5 2 P65* 23,8 4,44 5 R38 4,16 0,165 25 T41 6,37 0,0489 130 E68 7,70 0,0893 86 Y45* 9,06 0,110 83 V69* 9,99 0,083 121 *обозначает пегилированный конъюгат IL-2 30 кДа.

[00628] Биохимические взаимодействия пегилированного IL-2 с субъединицами рецептора IL-2 человека

[00629] Кинетику взаимодействий пегилированного соединения IL-2 с субъединицами рецептора человеческого IL-2 измеряли с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в Biosensor Tools LLC (Солт-Лейк-Сити, Юта). Для этих исследований слитые с Fc человеческого IgG1 внеклеточные домены IL-2 Rα (Sino Biological, номер по каталогу 10165-H02H) и β (Sino Biological, номер по каталогу 10696-H02H) иммобилизовали на поверхности сенсорного чипа CM4, покрытого белком А, от Biacore. Эти поверхности анализировали в двух повторностях с серией двукратного разбавления, начиная с 2 мкM нативного IL-2 (IL-2 дикого типа; Thermo № PHC0021), P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD или E62_5kD с использованием прибора Biacore 2000 SPR. Анализируемые образцы вводили в течение 60 секунд для обеспечения измерения ассоциации, а затем только буфер (отмывка) в течение 30 секунд для измерения диссоциации. Единицы ответа (отн. ед., ось Y) наносили на график в зависимости от времени (с, ось X).

[00630] Чтобы оценить влияние α-субъединицы рецептора IL-2 на связывание IL-2 с β, α иммобилизовали в приблизительно двукратном избытке по сравнению с β. На эти поверхности наносили нативный IL-2 (IL-2 дикого типа), P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD или E62_5kD в серии трехкратных разбавлений, начиная с 2,5 мкМ. Данные связывания соответствовали модели взаимодействия 1:1, которая включала сдвиг массива, а извлеченные кинетические параметры приведены в таблице 2A и таблице 2B. В таблице 2A и таблице 2B, а также на фигурах 4A - 4B показано, что небольшие PEG устраняют вовлечение IL2R-альфа, но оказывают менее неспецифическое воздействие на вовлечение IL2R-бета.

Таблица 2A. Кинетические параметры для взаимодействий варианта IL-2 с отдельными поверхностями субъединицы рецептора IL-2 - с поверхностью α-рецептора IL-2

k_a (M^-1с^-1) k_d(с^-1) K_D(мкM) Нативный IL-2 4,5 ± 0,3 x10⁷ 0,410 ± 0,01 0,009 ± 0,002 P65_30kD 114 ± 36 x10⁷ 0,018 ± 0,008 158 ± 21 P65_5kD 797 ± 226 x10⁷ 0,033 ± 0,004 42 ± 7 E62_30kD 333 ± 88 x10⁷ 0,050 ± 0,01 162 ±7 E62_5kD 1010 ± 41 x10⁷ 0,035 ± 0,002 34,4 ± 0,3

Таблица 2B. Кинетические параметры для взаимодействий варианта IL-2 с отдельными поверхностями субъединицы рецептора IL-2 - с поверхностью β-рецептора IL-2

k_a (M^-1с^-1) k_d(с^-1) K_D(мкM) Нативный IL-2 1,3 ± 0,2×10⁶ 0,185 ± 0,009 0,145 ± 0,005 P65_30kD 1,8 ± 0,2×10⁵ 0,370 ± 0,01 2,09 ± 0,09 P65_5kD 9,0 ± 0,4×10⁵ 0,270 ± 0,01 0,305 ± 0,002 E62_30kD 1,8 ± 0,4×10⁵ 0,208 ± 0,006 1,14 ± 0,01 E62_5kD 6,6 ± 0,8×10⁵ 0,281 ± 0,004 0,428 ± 0,00

[00631] На поверхностях сенсора, содержащих иммобилизованный IL-2Rα, нативный IL-2 продемонстрировал быструю ассоциацию и медленную кинетику диссоциации, демонстрируя высокоаффинное связывание (фиг. 4A). И напротив, ни P65_30kD, ни E62_30kD не взаимодействует с поверхностью IL-2Rα даже при максимальной анализируемой концентрации 2 мкM (фиг. 4A). Аналогично F42_30kD не взаимодействует с поверхностью IL-2 IL-2Rα (фиг. 4C). Поверхности, содержащие иммобилизованный IL-2 Rβ, показывали сопоставимые ответы ассоциации и диссоциации как с нативным IL-2 (IL-2 дикого типа), так и с IL-2 P65_30kD (фиг. 4B), а также с F42_30kD (фиг. 4C). Незначительное различие в K_D, наблюдаемое между соединениями в случае β -субъединицы, связано со снижением скорости ассоциации IL-2 P65_30kD по сравнению с нативным IL-2, что ожидаемо, исходя из изменения гидродинамического радиуса данного пегилированного соединения (более низкий коэффициент диффузии), а также неспецифических экранирующих эффектов крупного фрагмента PEG на отдаленных связывающих поверхностях. Данные результаты предполагают, что P65_30kD, E62_30kD и F42_30kD являются дефектными во взаимодействиях с IL-2Rα, сохраняя при этом в значительной степени связывание с IL-2Rβ.

[00632] Ex-vivo профилирование иммунного ответа соединений IL-2 в образцах РВМС, полученных с помощью системы редукции первичных лейкоцитов человека (LRS)

[00633] Для определения того, как разная рецепторная специфичность IL-2 P65_30kD, K64_30kD, K43_30kD, K35_30kD и F42_30kD влияет на активацию субпопуляций первичных клеток иммунной системы, осуществляли определение профиля зависимости "концентрация-ответ" для активации лимфоцитов в образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) человека, полученных с помощью LRS, с применением многоцветной проточной цитометрии. Данные исследования проводили в PrimityBio LLC (Фримонт, Калифорния). Свежие образцы, полученные с помощью LRS, обрабатывали нативным IL-2, L-2 P65_30kD, K64_30kD, K43_30kD, K35_30kD и F42_30kD в серии 5-кратных разбавлений, начиная с максимальной концентрации 30 мкг/мл. После 45 мин инкубации образцы фиксировали и окрашивали антителами для выявления фосфорилированной формы фактора транскрипции STAT5 (pSTAT5), маркера вышестоящего вовлечения и активации сигнальных комплексов рецептора IL-2, а также панели поверхностных маркеров для последующего образования pSTAT5 в специфических субпопуляциях T-клеток и натуральных киллерных клеток (NK). Панель окрашивания для исследования посредством проточной цитометрии образцов PBMC, полученных из LRS, включает маркеры эффекторных Т-клеток (Teff: CD3+, CD4+, CD8+, CD127+), NK-клеток (CD3-, CD16+) и регуляторных Т-клеток (Treg: CD3+, CD4+, CD8-, IL-2Rα+, CD127-1).

[00634] Данные проточной цитометрии анализировали на предмет активации различных подгрупп Т- и NK-клеток в режиме "концентрация-ответ", считывая накопление pSTAT5 после обработки нативным IL-2 (фиг. 5A и 5G), E62_30kD (фиг. 5H), P65_30kD (фиг. 5B и 5I), K64_30kD (фиг. 5C), K43_30kD (фиг. 5D), K35_kDa (фиг. 5E) и F42_30kDa (фиг. 5F). В результате Treg-специфической экспрессии IL-2 Rα нативный IL-2 продемонстрировал повышенную эффективность стимуляции pSTAT5 в Treg по сравнению с CD8 Teff- и NK-клетками. По сравнению с нативным соединением пегилированные варианты, показанные на фиг. 5B - 5F, демонстрируют умеренно сниженную эффективность в отношении популяций CD8 T-клеток и NK-клеток, но демонстрируют дифференциальное снижение эффективности у экспрессирующих IL-2 Rα Treg-клеток по сравнению с нативным IL-2.

[00635] В таблице 3 представлена EC50 зависимости доза-ответ для передачи сигнала pSTAT5 (EC₅₀) при пролиферации образцов LRS человека или CTLL-2 при обработке указанным вариантом IL-2.

Таблица 3. EC₅₀ зависимости доза-ответ для передачи сигнала pSTAT5 (EC₅₀) при пролиферации образцов LRS человека или CTLL-2 при обработке указанным вариантом IL-2

Обработка NK-клетки Treg-клетки CD8+ Т-клетки Соотношение CD8/Treg CTLL-2 Нативный IL-2 5150,5 62,5 25703,5 411,3 846 E62_30kD 12834 37213 66644 1,8 398,012 E62_5kD 5327,5 18146 41552,5 2,3 275,590 E62K 10305 11086 64037 5,8 58,213 P65_30kD 15741 40740,5 113638 2,8 677,198 P65_5kD 1920 6324,5 13769,5 2,2 194,924 K35_30kD 14021 358 63023 176,0 Н.О. F42_30kD 16397 36856 107944 2,9 123,936 K43_30kD 9004 4797 50504 10,5 Н.О.

[00636] Значения EC₅₀ (пг/мл) вычисляли по кривым зависимости ответ-доза, полученным из графиков MFI.

ПРИМЕР 3

[00637] PEG и замена остатков способствует фармакологическим свойствам вариантов, отличным от альфа

[00638] Для определения того, как PEG и замена остатков влияют на фармакологические свойства IL-2 E62, отличное от альфа, осуществляли определение профиля зависимости "концентрация-ответ" для активации лимфоцитов в образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) человека, полученных с помощью LRS, с применением многоцветной проточной цитометрии. Данные исследования проводили в PrimityBio LLC (Фримонт, Калифорния). Свежие образцы, полученные с помощью LRS, обрабатывали либо нативным IL-2, E62K, либо E62_30kD в серии 5-кратных разбавлений, начиная с максимальной концентрации 30 мкг/мл. После 45 мин инкубации образцы фиксировали и окрашивали антителами для выявления фосфорилированной формы фактора транскрипции STAT5 (pSTAT5), маркера вышестоящего вовлечения и активации сигнальных комплексов рецептора IL-2, а также панели поверхностных маркеров для последующего образования pSTAT5 в специфических субпопуляциях T-клеток и натуральных киллерных клеток (NK). Панель окрашивания для исследования посредством проточной цитометрии образцов PBMC, полученных из LRS, включает маркеры CD4, CD4+ центральных клеток памяти, CD4+ эффекторных клеток памяти, CD4+ Т-клеток памяти, CD4+ наивных T-клеток, CD4+ T-клеток, CD8, CD8+ центральных клеток памяти, CD8+ эффекторных клеток памяти, CD8+ T-клеток памяти, CD8+ наивных T-клеток, CD8+ T-клеток, NK-клеток и регуляторных T-клеток.

[00639] Данные проточной цитометрии анализировали в отношении активации различных подгрупп Т- и NK-клеток в IL-2 (фиг. 6A), E62K (фиг. 6B) или E62_30kD (фиг. 6C). Данные результаты показывают, что замена аминокислотного остатка в положении 62, а также AzK-пегилирование в модифицированном положении могут способствовать снижению вовлечения IL-2 Rα и, как следствие, дифференциальной эффективности в отношении первичных лимфоцитов, которые экспрессируют эти рецепторы.

Таблица 4. EC₅₀ зависимости доза-ответ для передачи сигнала pSTAT5 (EC₅₀) при пролиферации образцов LRS человека, обработанных указанным вариантом IL-2

Обработка Treg-клетки CD8+ Т-клетки Соотношение CD8/Treg Нативный IL-2 17 6092 358 E62_30kD 33580 64134 1,9 E62K 11086 64037 5,8

ПРИМЕР 4

[00640] Зависимости фармакологических свойств, отличных от альфа, вариантов от размера PEG

[00641] Конъюгаты IL-2 подвергали скринингу на предмет функциональной активности в Discoverx (Фримонт, Калифорния) с использованием анализа рецепторов цитокина IL-2 PathHunter. В данном анализе использовали рекомбинантную линию человеческих клеток U2OS, которая экспрессирует субъединицы β (IL-2Rβ) и γ (IL-2Rγ) рецептора IL-2, каждая из которых слита с половиной репортерного сплит-фермента β -галактозидазы. Дополнительно конструировали вторую клеточную линию для экспрессии субъединицы IL-2Rα. Параллельный анализ с этими двумя клеточными линиями позволяет оценить активацию варианта рецептора IL-2 αβγ, а также базального комплекса βγ. Активность агониста IL-2 в комплексе βγ-рецептора IL-2 стимулирует димеризацию рецептора и восстановление репортерной β-галактозидазы, что дает хемилюминесцентный сигнал. Анализ проводили в режиме агониста для определения EC₅₀ каждого анализируемого изделия, а сравнение профилей кривой зависимости доза-ответ между положительными и отрицательными по IL2Rα типами клеток позволяет определить участие IL2Rα в наблюдаемой активности.

[00642] На фиг. 7 показано, что наблюдаемая эффективность соединений, пегилированных посредством PEG массой 5 кДа и 30 кДа, была схожей в клетках, экспрессирующих IL-2 Rα, а также в клетках, экспрессирующих только IL-2 Rβγ. Данные результаты предполагают, что снижение вовлечения IL-2 Rα этими соединениями является на чувствительным к молекулярной массе PEG в конъюгате.

[00643] ПРИМЕР 5

[00644] PK/PD-исследования у ранее не получавших лечения (E3826-U1704) и несущих опухоль B16-F10 (E3826-U1803) мышей C57BL/6

[00645] Схемы исследования представлены в таблицах 5 и 6, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG. Образцы крови при умерщвлении отбирали посредством пункции сердца в указанные временные точки. Исследование E3826-U1704 включало 13 временных точек (0,13, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 и 120 часов) с умерщвлением 3 мышей в каждую временную точку, а исследование E3826-U1803 включало 9 временных точек (2, 8, 12, 24, 48, 72, 120, 168 и 240 часов) с умерщвлением 4-7 мышей в каждую временную точку. Плазму крови и клетки крови (в обоих исследованиях) и опухоли в исследовании E3826-U1803 отбирали для PK- и PD-анализов.

[00646] Биологический анализ образцов плазмы крови выполняли с использованием специализированного ELISA-анализа IL-2 человека (Abcam, Кембридж, Великобритания). Концентрации альдеслейкина, E62_30kD и P65_30kD и внутреннего стандарта в образцах, полученных из плазмы крови, определяли посредством ELISA-анализа. Анализ данных PK выполняли в NW Solutions (Сиэтл, Вашингтон). Данные PK импортировали в Phoenix WinNonlin v6.4 (Certara/Pharsight, Принстон, Нью-Джерси) для анализа. Средние значения концентрации в плазме крови в группе в зависимости от времени анализировали с помощью некомпартментных методов с использованием модели в/в болюсного введения.

Таблица 5. PK/PD-исследование № E3826-U1704 - контрольная группа и получающая экспериментальное лечение группа мышей C57/BL6, ранее не получавших лечение

Обработка Доза*(мг/кг) Путь введения, схема Временные точки N Контроль 0 в/в, однократная доза 13 3 Альдеслейкин 0,3 в/в, однократная доза 13 3 P65_30kD 0,3 в/в, однократная доза 13 3 E62_30kD 0,3 в/в, однократная доза 13 3 * Доза относится к количеству полипептида IL-2 P65_30kD, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG.

Таблица 6. PK/PD-исследование № E3826-U1803 - контрольная группа и группа мышей с меланомой B16F-10, получающая экспериментальное лечение (при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG)

Обработка Доза (мг/кг) Путь введения, схема Временная точка N Отсутствует (перед дозой) 0 мг/кг Отсутствует 1 6 Контрольная среда-носитель 0 мг/кг в/в, однократная доза 9 3 P65_30kD 1 мг/кг в/в, однократная доза 9 4 P65_30kD 3 мг/кг в/в, однократная доза 9 4

[00647] Профили концентрации в плазме крови P65_30kD, E62_30kD, E62_5kD и альдеслейкина при 0,3 мг/кг нанесены на график на фиг. 8.

[00648] В исследовании E3826-U1704 как P65_30kD, так и E62_30kD демонстрируют лучший PK-профиль по сравнению с альдеслейкином, что представлено в таблице 5. После однократной в/в болюсной дозы альдеслейкина Tmax наблюдали через 0,03 часа после введения дозы (первая временная точка измерения после введения дозы), а средние концентрации в плазме крови измеряли до 4 часов после введения дозы. После однократного в/в болюсного введения дозы P65_30kD и E62_30kD Tmax наблюдали через 0,03 часа после введения дозы, а средние концентрации в плазме крови измеряли до 120 часов после введения дозы (последняя временная точка измерения). В отдельном исследовании после в/в введения дозы E62_5kD T_max наблюдали через 0,133 часа после введения дозы, а средние концентрации в плазме крови измеряли до 12 часов после введения дозы.

[00649] Воздействие, исходя из C_max и AUC_0-t, было следующим: P65_30kD >E62_30kD >> E62_5kD > альдеслейкин. E62_5kD с PEG меньшего размера характеризовался PK-профилем, близким к rIL-2. Воздействие P65_30kD в 5,5 и 200 раз превышало воздействие альдеслейкина, исходя из Cmax и AUC0-t соответственно. Кроме того, P65_30kD демонстрировал 23-кратное увеличение t1/2 (13,3 часа против 0,57 часа) и приблизительно 198-кратное снижение CL (6,58 против 1300 мл/ч/кг) по сравнению с альдеслейкином. И для P65_30kD, и для E62_30kD объем распределения (82,4 и 92,3 мл/кг соответственно) был в приблизительно 4,2-4,7 раза меньше по сравнению с альдеслейкином и аналогичен объему крови у мыши (85 мл/кг [Boersen 2013]). Это свидетельствует о том, что P65_30kD и E62_30kD распределяются главным образом в системном кровотоке.

Таблица 7. PK-параметры P65_30kD у самок мышей C57BL/6

Параметр Единицы измерения P65_30kD E62_30kD E62_5kD Альдеслейкин T_max ч 0,030 0,030 0,133 0,030 C_max нг/мл 4,870 4,230 936 884 AUC_0-t ч*нг/мл 45,600 37,100 798 229 R² 0,992 0,986 0,851 0,900 AUC_INF ч*нг/мл 45,600 37,100 807 230 t_1/2 ч 13,300 14,500 2,56 0,573 CL мл/ч/кг 6,580 8,07 372 1300 V_ss мл/кг 82,4 92,3 404 390

Примечание: R² представляет собой параметр критерия согласия для конечной фазы каждого профиля зависимости "концентрация-время".

Все параметры приведены с точностью до 3 значащих цифр.

ПРИМЕР 6

[00650] Фармакодинамические исследования в компартменте периферической крови

[00651] Фосфорилирование STAT5 и индуцирование пролиферации клеток (ранний молекулярный маркер Ki-67 и количества клеток) использовали в качестве фармакодинамических показателей для оценки фармакологического профиля P65_30kD относительно его фармакокинетики. Маркер pSTAT5 PD показал оптимальную корреляцию с PK как для P65_30kD, так и для альдеслейкина в CD8+ эффекторных Т-клетках (таблица 7). Устойчивое повышение pSTAT5 наблюдали как в NK-, так и в CD8+ Т-клетках до 72 часов и до 24 часов в Treg. Индуцирование pSTAT5 возвращалась к исходному уровню только через 2 часа у мышей, получавших дозу альдеслейкина (фиг. 8). Фосфорилирование STAT5, транслировалось в пролиферативные ответы (72-120 часов) CD8+ эффекторных Т-клеток и NK-клеток, но не Treg (фиг. 9A - 9C). Фенотипический анализ CD8+ эффекторных Т-клеток выявлял значительную степень размножения CD44+ клеток памяти в данной популяции (фиг. 10A - 10B).

[00652] Фармакодинамические исследования в опухолевом компартменте у мышей C57BL/6 с опухолью B16-F10 (E3826-U1803)

[00653] В таблице 8 показана концентрация лекарственного средства в плазме крови и в опухоли после однократной дозы P65_30kD 3 мг/кг у мышей с опухолью B16-F10, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG. Период полужизни в опухоли вдвое превышал период полужизни в плазме крови (24,4 против 12,6), что указывает на то, что P65_30kD проникает в опухоль и остается в опухоли. Конец кривых пересекается, показывая, что из плазмы крови ведение осуществляется быстрее, чем из опухоли (данные не показаны). Соотношение AUC опухоль:плазма крови составляло 9,7% и 8,4% для доз 1 и 3 мг/кг соответственно.

Таблица 8. PK-параметры P65_30kD в плазме крови и в опухоли у самок мышей C57BL/6 с опухоль B16-F10

Параметр P65_30kD (3 мг/кг) Плазма крови Опухоль T_max (ч) *2,00 8 C_max (нг/мл) 40000 1550 t1/2 (ч) 12,60 24,4 AUC_0-t (ч*нг/мл) 656,000 55200 R² 0,974 0,988 AUC_INF (ч*нг/мл) 656,000 55200

[00654] На фиг. 11A - фиг. 11B показано размножение NK- и CD+ Т-клеток, обусловленное P65_30kD, в опухолях B16F10. На фиг. 11A показана процентная доля NK-клеток, CD8+ клеток и Treg в популяции опухолевых CD3+ T-клеток после обработки однократной в/в болюсной дозой P65_30kD 3 г/кг. Образцы опухоли анализировали с помощью проточной цитометрии на предмет популяций иммунных клеток через 5 дней после обработки. Каждая точка данных представляет собой среднее значение для 3 повторностей в каждый момент времени ± SEM. Представленные данные клеточной популяции получены для образцов опухоли в день 5, а соотношение CD8/Treg рассчитывали для образцов в день 7. На фиг. 11B показано соотношение CD8+ эффекторных клеток и CD4+ регуляторных Т-клеток через 7 дней после обработки однократной в/в болюсной дозой P65_30kD 3 мг/кг. Каждая точка данных представляет собой среднее значение для 3 повторностей в каждый момент времени ± SEM.

[00655] Исследование MTD на мышах Balb/c E3826-U1802

[00656] Исследование диапазона доз P65_30kD выполняли на ранее не получавших лечение самках мышей Balb/c в Crown Biosciences, Inc. (Сан-Диего, Калифорния). Схема исследования показана в таблице 9, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG. Образцы крови отбирали из подчелюстной вены в 7 временных точках (0,25, 1, 4, 12, 24, 34, 48 и 72 часа). И плазму крови, и клетки крови отбирали для PK- и PD-анализов.

[00657] Все образцы плазмы анализировали на предмет человеческого IL-2, а также мышиные цитокины IL-2, TNF-α, IFNγ, IL-5 и IL-6, используя коммерчески доступные наборы для ELISA.

Таблица 9. PK/PD и исследование MTD № E3826-U1802 - контрольная группа и получающая экспериментальное лечение группа мышей Balb/C, ранее не получавших лечение

Обработка Доза (мг/кг) Путь введения, схема Временная точка N Ранее не получавшие лечение 0 мг/кг 0 3 Контрольная среда-носитель 0 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 Альдеслейкин 0,01 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 Альдеслейкин 0,03 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 Альдеслейкин 0,1 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 Альдеслейкин 1,0 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 Альдеслейкин 3,0 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 Альдеслейкин 5,0 мг/кг в/в, BID x 3 3 3 P65_30kD 0,01 мг/кг в/в, однократная доза 3 3 P65_30kD 0,03 мг/кг в/в, однократная доза 3 3 P65_30kD 0,1 мг/кг в/в, однократная доза 3 3 P65_30kD 1,0 мг/кг в/в, однократная доза 3 3 P65_30kD 3,0 мг/кг в/в, однократная доза 3 3 P65_30kD 5,0 мг/кг в/в, однократная доза 3 3 #P65_30kD 0,3 мг/кг в/в, однократная доза 8 3

* Во всех временных точках, за исключением 72-ч временной точки, кровь отбирали из подчелюстной вены. Во временной точке 72 часа забор крови осуществляли с умерщвлением.

# Для оценки PK/PD использовали только дозу 0,3 мг/кг P65_30kD.

[00658] Токсикологические исследования в исследовании MTD с использованием мышей Balb/c

[00659] Основная токсичность, связанная с высокими дозами альдеслейкина, проявляется как синдром повышенной проницаемости сосудов и связанный с ним синдром выброса цитокина (CRS). Чтобы оценить потенциал данного эффекта у мышей, осуществляли однократное в/в введение P65_30kD в дозах, варьируемых от 0,01 до 5,0 мг/кг (таблица 10), при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG. Проводили гематологический анализ, гистопатологический анализ, анализ веса органов и цитокина. Не выявили отклонений от нормы при гематологическом анализе, гистопатологическом анализе или анализе веса тела по сравнению с обработанными контрольной средой-носителем мышами как с P65_30kD, так и с альдеслейкином. Что касается анализа цитокина, наблюдали, что альдеслейкин повышал уровни IL-5 в плазме крови крови, начиная с дозы 1 мг/кг до 5 мг/кг (фигура 12A). С P65_30kD наблюдали умеренное повышение IL-5 (но меньшее по сравнению с альдеслейкином) только при дозе 5 мг/кг (фиг. 12B). Временное повышение системных уровней IFNγ наблюдалось как для альдеслейкина, так и для P65_30kD.

ПРИМЕР 7

[00660] PK/PD у макаков-крабоедов - исследование № 20157276

[00661] Фармакокинетический и фармакодинамический профили P65_30kD оценивали у ранее получавших лечение макаков-крабоедов после введения однократной внутривенной дозы 0,3 мг/кг, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG. Исследование проводили в Charles River Laboratories, Inc. (Рино, Невада), а анализ РК-данных выполняли в NW Solutions (Сиэтл, Вашингтон). Образцы крови отбирали до введения дозы и в 21 временной точке (через 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48, 72, 120, 144, 168, 192 и 240 часов после введения дозы). И плазму крови, и клетки крови отбирали для PK- и PD-анализов. Выбранные временные точки использовали для анализа PK, PD, клеточной популяции и гематологического анализа.

[00662] Все образцы плазмы крови анализировали на предмет человеческого IL-2 (PK-показатели) с использованием коммерчески доступных наборов для ELISA.

[00663] В таблице 10 показаны РК-параметры P65_30kD у макака-крабоеда.

Таблица 10

0,3 мг/кг Животное 2699 Животное 2705 Среднее значение ROA Параметр Единицы измерения Оценка в/в T_max ч 0,500 0,500 0,500 C_max нг/мл 11000 11400 11200 AUC_0-t ч*нг/мл 121000 120000 121000 t_1/2 ч 13,4 13,9 13,6 CL мл/час/кг 2,47 2,49 2,48 V_ss мл/кг 29,0 32,1 30,5

[00664] После однократного в/в болюсного введения T_max наблюдали через 0,5 часа после введения дозы (первая временная точка измерения после введения дозы), а средние концентрации в плазме крови измеряли до 168 часов после введения дозы (последнее измерение). T_1/2 и AUC для P65_30kD составляли 13,6 часа и 121000 ч*нг/мл соответственно.

[00665] Гематологические параметры - макаки-крабоеды - исследование № 20157276

[00666] Для гематологических параметров временные точки оценки соответствуют дням до введения дозы в день -1 и через 1, 3, 6, 8, 10, 12, 14, 17, 19, 21 день после введения дозы.

[00667] На фиг. 13 показаны абсолютные значения и дифференцированные значения количества белых кровяных клеток. Данные представляют собой среднее ±SD (N=2 животных/получающая дозу группа).

[00668] Анализ субпопуляций белых кровяных клеток (WBC) показал, что значительное увеличение количества WBC было связано с размножением клеточной популяции лимфоцитов, что согласуется с механизмом P65_30kD. Повышения эозинофилов не наблюдали.

ПРИМЕР 8

[00669] Маркеры размножения Treg в первичных лимфоцитах, обработанных различными соединениями PEG IL-2

[00670] Выделяли первичные лимфоциты из свежей системы редукции лейкоцитов человека (LRS), предварительно обрабатывали фиколлом и оставляли при 4°C на протяжении ночи. На следующий день использовали FACS для сортировки популяций лимфоцитов, в том числе CD8-положительных T-клеток, NK-клеток и Treg. Выделенные популяции стимулировали с использованием связанного с планшетом антитела к CD8/CD28 в течение двух дней. Согласно кривым доз нативного IL-2 и K9_30kD инкубировали при 37°C. На третий день среду обновляли и снова добавляли соединения согласно кривым доз. В день 6 клетки собирали и анализировали с использованием проточной цитометрии для определения профиля уровней CD25 и Ki-67 в качестве показателя пролиферации. На фиг. 16 показано, что соединения PEG IL-2 могут специфически увеличивать популяции иммунных клеток ex vivo в первичных лимфоцитах по сравнению с нормальным контрольным IL-2. На фиг. 16A показаны маркеры размножения иммунных клеток Ki67 после обработки IL-2 (контролем). На фиг. 16B показаны маркеры размножения иммунных клеток Ki67 после обработки P65_30kD.

ПРИМЕР 9

[00671] Размер PEG может быть подобран для корректировки фармакокинетики скорости клиренса in vivo

[00672] Исследовали взаимосвязь PK/PD пегилированного варианта IL-2 E62, модифицированного с помощью mPEG 5 размером кДа и 30 кДа, по сравнению с контрольным соединением альдеслейкином (Proleukin). Использовали 4 группы мышей C57/Bl6 возрастом 6-8 недель, весом от 16 до 22 г, при этом в каждой группе было 12 мышей. Мыши получали дозы путем однократной в/в инъекции в день 0, время 0. В указанные временные точки отбирали приблизительно 100 мкл цельной крови в пробирки с EDTA для обработки: 50 мкл фиксировали в буфере для проточной цитометрии, а из оставшегося образца экстрагировали плазму крови для ELISA-анализа. Для окончательного сбора крови фиксировали приблизительно 300 мкл цельной крови, оставшийся образец центрифугировали для получения плазмы крови и использовали для ELISA.

Перед в/в введением 10 мл/кг анализируемые изделия составляли при концентрации 37,5 мкг/мл в PBS, и отбирали образцы по 100 мкл в t=8 минут, 15 минут, 30 минут и 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 и 120 часов после введения дозы. В таблице 11 показан режим обработки, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG. В таблице 12 иллюстрируются разные скорости клиренса in vivo.

[00673] В таблице 11 иллюстрируются обработки мышей in vivo вариантом IL2

Группа Обработка Доза (мг/кг) 1 Среда-носитель 0,0 2 Альдеслейкин 0,3 3 E62 (30 кДа PEG) 0,3 4 E62 (5 кДа PEG) 0,3

[00674] В таблице 12 иллюстрируются скорости клиренса для вариантов IL по сравнению с контролем в виде альдеслейкина

Обработка Альдеслейкин E62 (30 кДа PEG) E62 (5 кДа PEG) Cmax, нг/мл 745 8,450 936 AUC_0-t(нг*ч/мл) 432 81,900 807 t_1/2(ч) 0,576 10,4 2,56 Vss (мл/кг) 232 48,9 404 CL (мл/г/кг) 694 3,66 373

ПРИМЕР 10

[00675] В таблице 11 иллюстрируются последовательности и соединения IL-2, описанные в данном документе.

Название Последовательность SEQ ID NO: IL-2
(homo sapiens)
(зрелая форма) APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT 1 IL-2
(homo sapiens)
(предшественник)
№ доступа в NCBI: AAB46883.1 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT 2

[00676] ПРИМЕР 11

[00677] Ex-vivo определение профиля иммунного ответа иллюстративных соединений IL-2 в образцах РВМС, полученных с помощью системы редукции первичных лейкоцитов человека (LRS)

[00678] Для определения того, как разная рецепторная специфичность иллюстративных соединений IL-2 влияет на активацию субпопуляций первичных клеток иммунной системы, осуществляли определение профиля зависимости "концентрация-ответ" для активации лимфоцитов в образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) человека, полученных с помощью LRS, с применением многоцветной проточной цитометрии. Конъюгаты из таблицы 13 синтезировали с помощью модификации SEQ NO. 1. Данные исследования проводили в PrimityBio LLC (Фримонт, Калифорния). Первичные лимфоциты, полученные из образцов LRS человека, обрабатывали серией разбавлений иллюстративных соединений IL-2 и определяли количественно на основании передачи сигнала pSTAT5 в каждом типе лимфоцитарных клеток с использованием панели, показанной в таблице 12.

[00679] Таблица 12. Обозначение, указывающее популяции клеток

Маркер Популяция клеток CD3 Т-клетки CD4 Th-клетки CD8 Эффекторные Т-клетки CD45RA Наивные Т-клетки CD56 NK-клетки CD14/19 Моноцит/B-клетки CD25 Treg или «обученная» T-клетки CD127 Клетка, не являющаяся Treg CD62L Т-клетка памяти против эффекторной Т-клетки памяти pSTAT5 (Y694) Маркер активации

[00680] Данные проточной цитометрии анализировали в отношении активации различных субпопуляций Т- и NK-клеток в режиме "концентрация-ответ", считывая накопление pSTAT5 после обработки с помощью иллюстративного варианта IL-2 K9_30kD.

[00681] На фиг. 15A - фиг. 15B показаны кривые зависимости доза-ответ для передачи сигнала pSTAT5 в первичной клетке человека, полученной с помощью LRS (фиг. 15A), и ответ в виде пролиферации в популяциях мышиных CTLL-2 (фиг. 15B).

[00682] В таблице 13 показана EC50 зависимости доза-ответ для передачи сигнала pSTAT5 (EC50) при пролиферации образцов LRS человека или CTLL-2 при обработке указанным вариантом IL-2.

Таблица 13. EC₅₀ зависимости доза-ответ для передачи сигнала pSTAT5 (EC₅₀) при пролиферации образцов LRS человека или CTLL-2 при обработке указанным вариантом IL-2

Соединение NK-клетки CD8+ T-клетки Treg-клетки Соотношение CD8+/Treg Кратность повышения EC50 Treg по сравнению с нативным IL-2 Пролиферация CTLL-2 Нативный IL-2 4586 31024 75 414 1 455,8 K9_30kD 169578 1100679 2217 496 30 504 H16_30kD 2545257 12070108 34976 345 466 80755 L19_30kD 6756768 22436430 93205 241 1243 3510 D20_30kD 2643930 9505217 1129455 8 15059 689939 M23_30kD 143620 539824 1030 524 14 1102 N26_30kD 258531 1188859 2459 483 33 2594 N88_30kD 3298113 11111537 323201 34 4309 66606 E100_30kD 35088 195823 483 405 6 1676 N119_30kD 34010 143380 535 268 11 1215 T123_30kD 33396 152928 269 569 6 255 Q126_30kD 3676807 19722480 29454 670 393 3584 S127_30kD 20210 92190 150 615 3 123 T131_30kD 24207 132922 258 515 3 641 N88R/D109_30kD 2780819 12503386 175805 71 3663 59577 V91K 20537 102255 142 720 3 99,5 N88R 2312847 15025734 11082 1356 148 363

[00683] Значения EC₅₀ (пг/мл) вычисляли по кривым зависимости доза-ответ, полученным из графиков MFI.

[00684] *Изменение эффективности Treg по сравнению с нативным IL-2 (IL-2 дикого типа) анализировали в каждом отдельном эксперименте.

ПРИМЕР 12

[00685] PK-исследование на мышах C57BL/6

[00686] Подробности эксперимента представлены в таблице 14, при этом дозу вычисляли исходя из массы белкового компонента, не включая массу фрагмента PEG.

[00687] Таблица 14.

Группа Количество животных Исследуемое/контрольное изделие (доза) Путь, схема введения Конечная точка (точки) 1 9 Нативный IL-2 (дикого типа) (3,0 мг/кг) Концентрация: 0,6 мг/мл в/в, однократная доза в день 0 в T=0 при 5 мл/кг Отбор крови через 0,08, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 и 24 часа после введения дозы 2 9 K35_30kD (3,0 мг/кг) Концентрация: 0,6 мг/мл в/в, однократная доза в день 0 в T=0 при 5 мл/кг 3 9 K35_30kD (0,3 мг/кг) Концентрация: 0,6 мг/мл в/в, однократная доза в день 0 в T=0 при 5 мл/кг Дополнительные 6 Отсутствуют Отсутствуют Сбор холостых образцов (не ограничен по времени) Всего 33

[00688] Оценивали фармакокинетические свойства иллюстративного соединения пегилированного IL-2 K35_30kD при двух уровнях дозы. Лиофилизированное исследуемое изделие восстанавливали в PBS, и девяти самцам мышей C57BL/6 вводили в дозах 0,3 и 3 мг/кг посредством внутривенной инъекции в хвостовую вену для каждой группы доз (см. подробности отбора ниже). Образцы крови отбирали через 0,08, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 и 24 часа после введения дозы. Набор hIL-2 ELISA от Abcam (ab100566), который перекрестно не реагирует с нативным мышиным IL-2, использовали для выявления и количественного определения исследуемых изделий. Чтобы скорректировать ELISA-специфические различия в чувствительности выявления набора нативных и пегилированных соединений, строили стандартные кривые нативного IL-2 и исследуемого изделия K35_30kD с использованием буфера для разбавления исследуемого изделия, при этом данные анализировали относительно соответствующих стандартных кривых. Представленные на графике данные представляют собой среднее и SEM для трех отдельных образцов (биологических повторностей), описанных выше, а PK-параметры для исследуемых изделий K35_30kD были получены и приведены в таблице 15.

[00689] Таблица 15.

Аналит Параметр Единица измерения Доза 0,3 мг/кг 3 мг/кг Оценка IL-2 K35-mPEG30kD T_max ч 0,250 0,250 C_max нг/мл 6080 57700 AUC_o-t ч*/нг/мл 38500 425000 R² 0,994 0,947 AUC_½extrap % 35,3 37,4 AUC_0-∞ ч*нг/мл 59600 679000 t_1/2 ч 18,2 19,5 C_max/D кг*нг/мл/мг 20300 19200 AUC_o-t/D ч*нг/мл 128000 142000

ПРИМЕР 13

[00690] Характеристика связывания с IL-2R альфа и IL-2R бета человека

[00691] Исследование выполняли для характеристики связывания иллюстративного конъюгата IL-2, IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1, с IL-2R альфа и IL-2R бета человека.

[00692] Образцы исследуемого изделия, связывающиеся с IL-2R альфа. Образцы исследуемого изделия в растворе анализировали на предмет связывания с поверхностями рецептора IL-2R альфа. Данные ответа обрабатывали путем вычитания сигналов от референтной поверхности без рецептора, а также среднего значения введений буфера с использованием Scrubber-2 (Biologic Software Pty Ltd). Ответы на серию концентраций rhIL-2 в целом соответствовали модели взаимодействия 1:1, включая стадию массопереноса (фиг. 17A - 17B). Обобщенные константы связывания представлены в таблице 16.

[00693] Таблица 16

K_D (нM) IL-2 R альфа IL-2 R бета rhIL-2 11 ± 1 0,7 ± 1 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 Н.Д. 3,1 ± 0,3

[00694] Захват Fc-меченного IL-2R бета на сенсорном чипе CM4, покрытом белком. Сенсорный чип CM4 вставляли в оптический биосенсор Biacore 4000 и инструмент трижды заполняли рабочим буфером HBS-P (HBS-P представляет собой 1X HBS-N с добавлением 0,005% Tween-20). Белок А связывали с использованием стандартных условий сочетания NHS/EDC. IL-2R бета-Fc растворяли в воде до концентрации 0,1 мг/мл, а затем разбавляли 1/1000 рабочим буфером HBS-P. IL-2R бета-Fc вводили в течение разных периодов времени для создания 2 рецепторных поверхностей с разной плотностью (~750 отн. ед. и 1500 отн. ед., данные не показаны).

[00695] Характеристик образцов, связывающихся с IL-2R бета. Образцы исследуемого изделия в растворе анализировали на предмет связывания с поверхностями рецептора IL-2R бета. Данные ответа обрабатывали путем вычитания сигналов от референтной поверхности без рецептора, а также среднего значения введений буфера с использованием Scrubber-2 (Biologic Software Pty Ltd). Ответы на образцы rhIL-2 (2-кратные разбавления максимальной концентрации 4 мкМ) и IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 (2-кратные разбавления максимальной концентрации 8 мкМ), проанализированные в двух повторностях, в целом соответствовали модели взаимодействия 1:1, включая стадию массопереноса, как показано на фиг. 17C - 17D. Обобщенные константы связывания представлены в таблице 16.

[00696] Результаты. His-меченный IL-2R альфа захватывали при различных плотностях на сенсорном чипе NTA, заряженным никелем, в биосенсорной системе Biacore SPR. Fc-меченный IL-2R бета захватывали при различных плотностях на сенсорном чипе CM4, покрытым белком А. Данные ответа соответствовали модели взаимодействия 1:1 для определения констант связывания для каждого взаимодействия. Рекомбинантный IL-2 человека (rhIL-2) связывался с IL-2R альфа с аффинностью ~11 нМ, в то время как не смогли детектировать связывание образцов IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 с IL-2R альфа. RhIL-2 связывался с IL-2R бета с аффинностью ~700 нМ, а IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 связывался с IL-2R бета с аффинностью ~3 мкМ при данных условиях анализа.

ПРИМЕР 14

[00697] Выполняли исследование для определения эффективности и дифференциальной специфичности клеточного типа IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 по сравнению с рекомбинантным человеческим интерлейкином-2 (hIL-2) для эффективности передачи сигнала с участием фосфорилированной формы транскрипционного фактора STAT5 (pSTAT5) в типах первичных иммунных клеток человека.

[00698] Способы обработки образца PBMC человека. Исходные растворы IL-2 (контроль, 1 мг/мл) и IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 ("партия 1": 1,27 мг/мл; "партия 2": 2,29 мг/мл) хранили в виде исходных растворов, замороженных при -20°C.

[00699] Партию 1 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 и партию 2 соединений разбавляли с помощью PBS, а IL-2 разбавляли с помощью PBS+0,1% BSA для получения 10X исходных растворов. Концентрация 10X исходного раствора IL-2 составляла 5 мкг/мл, а концентрация исходных растворов GLP-1 и GLP-2 составляла от 6 до 300 мкг/мл в зависимости от эксперимента. 10X исходные растворы разбавляли последовательными 5-кратными разбавлениями для создания 10-точечного титрования дозы. Максимальная доза IL-2 составляла 5 мкг/мл, а исходных растворов партии 1 и партии 2 от 6 до 300 мкг/мл в зависимости от эксперимента. 10 мкл каждого исходного раствора добавляли к 90 мкл образцов клеток для достижения конечной максимальной дозы для IL-2 500 нг/мл и 0,6-30 мкг/мл для каждой партии 1 и партии 2.

[00700] Стимуляция образца. Для стимуляции 10 мкл указанной выше титрованной дозы добавляли к 90 мкл образца крови, предварительно уравновешенного до 37°C. Образцы инкубировали при 37°C в течение 45 минут. В конце инкубационного периода красные кровяные клетки лизировали и клетки фиксировали одновременно следующим образом:

[00701] 100 мкл клеток переносили в 900 мкл буфера BD Lyse/Fix (Beckton Dickinson, № по каталогу 558049) и сразу же откручивали на вортексе. BD Lyse/Fix получали путем разбавления исходного раствора 1:5 водой для культивирования клеток непосредственно перед добавлением. Образцы инкубировали 10 минут при комнатной температуре, затем центрифугировали при 450 x g в течение 5 минут для осаждения клеток. Осажденные клетки промывали с помощью PBS+0,5% BSA и хранили при -37°C до анализа.

[00702] Протокол окрашивания

Стадия 1. Клетки размораживали при комнатной температуре. Стадия 2. Добавляли Fc Block (TruStain FcX™). Стадия 3. Инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут. Стадия 4. Добавляли следующие антитела из таблицы 17.

[00703] Таблица 17

[00704] Антитела для человеческой панели

Флуорофор CD4 BUV737 CD56 BV711 CD16 BV711 CD8 BUV805 CD27 BV786 CD45RA BUV395 CD127 FITC CD25 Биотин

[00705] Стадия 5. Инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре. Стадия 6. Клетки промывали два раза с помощью PBS+0,5% BSA. Стадия 7. Клетки пермеабилизировали путем добавления 10 объемов метанола на один объем клеток. Стадия 8. Клетки инкубировали в течение 10 минут при 4°C. Стадия 9. Промывали с помощью PBS. Стадия 10. Клетки промывали с помощью PBS без 0,5% BSA. Стадия 11. Добавляли Fc Block (TruStain FcX™). Стадия 12. Добавляли следующую панель окрашивания после пермеабилизации из таблицы 18.

[00706] Таблица 18

[00707] Реагенты для окрашивания

Флуорофор CD3 PE-Cy7 STAT5 Ax647 Стрептавидин BV421 FOXp3 PE

[00708] Проточная цитометрия и анализ данных. Образцы анализировали на приборе Becton Dickinson Fortessa и LSR II с пятью лазерами (372 нМ, 405 нМ, 488 нМ, 561 нМ и 640 нМ). Приборы были оснащены 20 детекторами, включающими параметры рассеяния. Инструменты регулярно калибровали с использованием Becton Dickinson Cytometer Setup & Tracking Beads. 96-луночные планшеты, содержащие окрашенные образцы, анализировали при менее чем 8000 клеток/секунда с использованием 96-луночного высокопроизводительного пробоотборника.

[00709] Данные экспортировали как файлы.fcs на сетевой драйвер и компенсировали с учетом избытка флуорофоров, а файлы.fcs аннотировали. Затем файлы.fcs отбирали в соответствии со стратегиями, описанными на фиг. 18. Клетки сначала гейтировали по синглетам с использованием FSC-A с помощью FSC-H, чтобы исключить любые агрегаты или дублеты (фиг. 18, гейт синглетов, 1^-я панель). В данном гейте клетки гейтировали по среднему-высокому прямому рассеянию (FSC-A) и боковому рассеянию (SSC-A), чтобы исключить красные кровяные клетки, дебрис и гранулоциты (фиг. 18, гейт лимфоцитов, 2^-я панель). Затем Т-клетки гейтировали как CD3+, CD56/16-негативную популяцию, 3^-я панель. NK-клетки идентифицировали как CD3-негативную, CD56/16-высокую популяцию, 3^-я панель. Затем Т-клетки разделяли на CD4+ Т-клетки и CD8+ Т-клетки (фиг. 18, 4^-я панель). Затем Treg гейтировали из CD4+ Т-клеток как CD25^{высокую} x C127^низкую популяцию, фиг. 18, 5^-я панель.

[00710] Статистические данные и построение графиков для получения значений EC₅₀. Среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) для каждого из клеточной популяции, донора и обработки соединением рассчитывали по сигналу в канале, выявляющем фосфорилирование. Статистические данные анализировали с помощью Spotfire. С помощью Spotfire данные наносили на логарифмическую шкалу для доз соединения и линейную шкалу для считываний MFI. Эти данные подбирали с использованием 4-параметрического уравнения логистической регрессии. ЕС₅₀ рассчитывали как точку перегиба кривой.

[00711] Результаты. Образцы человеческого IL-2 и IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 разбавляли и анализировали в трех повторностях против каждого из трех отдельных доноров, как описано выше. Рассчитанные значения полумаксимальной эффективной концентрации (ЕС₅₀) приведены в таблице 19. Результаты демонстрируют, что IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 является высокоактивным агонистом передачи сигнала рецептора IL-2 в лимфоцитах человека. В соответствии с предыдущими исследованиями связывания in vitro, которые показывали, что IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 специфически взаимодействует с субъединицей IL-2Rβ, а не с IL2Rα, он продемонстрировал специфическое снижение эффективности передачи сигнала в Treg-клетках, эффективность которых зависит от взаимодействия IL-2Rα, по сравнению с Teff- и NK-клетками, которые конститутивно не экспрессируют высокие уровни IL-2Rα.

[00712] Таблица 19

[00713] Характеристики эффективности для партий hIL-2 и IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 против субпопуляций первичных CD8+ T-клеток, NK-клеток и Treg-клеток от доноров-людей.

EC₅₀ клеток человека (нг/мл) Материал CD8+ T CD8+ T памяти NK Treg Соотношение CD8/Treg Человеческий IL-2 12,4 ± 1,29 11,3 ± 1,63 2,88 ± 1,63 0,027 ± 0,005 460 Партия 1* 224 ± 25,3 240 ± 27,3 54,7 ± 6,55 114 ± 20,3 2,0 Партия 2* 265 ± 12,4 284 ± 18,3 55,7 ± 8,62 132 ± 24,0 2,0

Данные представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM), вычисленные при анализе в трех повторностях образцов от трех независимых доноров. *IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1.

[00714] Пример 15. Стабильность IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 в сыворотке крови человека

[00715] Исследование проводили для оценивания стабильности соединения IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 в сыворотке крови человека в зависимости от времени.

[00716] Для исследования использовали следующие материалы:

Реагент Источник № по каталогу Соединение IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 Synthorx Партия 19-1756 СЫВОРОТКА КРОВИ ЧЕЛОВЕКА A/B, объединенная Fischer Sci NC9370648 Козье антитело к человеческому IL2 Abcam Ab10752 PEG поликлональное антитело ThermoFisher PA5-32247 Мышиное антитело к IgG кролика-HRP Southern Biotech 4090-05 Казеин Blocker™ в PBS, 1% ThermoFisher 37528 Раствор субстрата 1-Step™ Ultra TMB-ELISA ThermoFisher 34028 Стоп-раствор для субстратов TMB ThermoFisher N600 PBS (10X), pH 7,4 ThermoFisher 70011044

[00717] Соединение IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 вносили в объединенную сыворотку крови человека A/B в трех (3) концентрациях (2590 нг/мл, 847 нг/мл и 212 нг/мл) в пробирках для ПЦР. Каждую концентрацию временной точки готовили в трех повторностях. Соединение IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 готовили в концентрациях исходных растворов 25900 нг/мл, 8470 нг/мл и 2120 нг/мл и 20 мкл каждого исходного раствора добавляли к 180 мкл объединенной сыворотки крови человека, хорошо перемешивали и инкубировали при 37°C до 168 часов. Образцы отбирали во временные точки, соответствующие 0, 6, 24, 48, 72, 96, 120 и 168 часам после инкубации, разделяли на две аликвоты и замораживали при -80°C для анализа партии. Первый набор образцов анализировали в один день, а второй набор образцов анализировали в другой день.

[00718] В день проведения анализа образцы размораживали при комнатной температуре с использованием специализированного формата ELISA с использованием козьего антитела к человеческому IL-2 и PEG поликлонального антитела. Планшет для ELISA покрывали на протяжении ночи при 4°C 1 мкг/мл антитела к человеческому IL2 α и промывали 1 x PBS для 3×300 мкл с помощью устройства для промывки планшетов. Планшет для анализа блокировали в течение одного (1) часа 1% казеином в PBS. Анализируемые образцы предварительно разбавляли сывороткой крови человека, чтобы они попали в диапазон выявления ELISA. Калибровочный стандарт и образцы QC также готовили с матрицей сыворотки крови человека в точной концентрации. Все образцы разбавляли в 25 раз буфером для анализа (1% казеин) до MRD (минимально необходимого разбавления). Образцы вносили в планшет, запечатывали на два (2) часа при комнатной температуре на шейкере для планшетов и промывали с помощью 1 х PBS для 3×300 мкл с помощью устройства для промывки планшетов. Вторичное детекторное антитело, α-PEG (кролика), при 1 мкг/мл добавляли по 100 мкл на лунку, запечатывали на один (1) час при комнатной температуре на шейкере для планшетов и промывали 1х PBS для 3×300 мкл с помощью устройства для промывки планшетов. Конечное детекторное антитело, α-кролика-HRP, готовили в разбавлении 1:5000 и добавляли по 100 мкл на лунку, запечатывали на 45 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов и промывали 1 x PBS для 3×300 мкл с помощью устройства для промывки планшетов. Субстрат добавляли по 100 мкл на лунку и помещали вдали от света на 30 минут без запечатывания или встряхивания. И наконец, в каждую лунку добавляли 50 мкл стоп-раствора и планшет сразу же считывали с помощью устройства для считывания планшетов Spectramax iD5 для получения значений при OD450 для всех образцов. Необработанные показатели интерполировали на соответствующие концентрации с использованием методов 4-параметрической логистической подгонки кривой для определения концентраций образцов. Данные, представленные на фигуре 19, являются результатом двух повторных циклов ELISA. Эти результаты демонстрируют, что соединение IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 является стабильным в матрице сыворотки крови человека до последней анализируемой временной точки, которая составляла 168 часов.

[00719] Хотя в данном документе были показаны и описаны предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие варианты осуществления предусмотрены только в качестве примера. Многочисленные вариации, изменения и замены теперь будут очевидны специалистам в данной области техники без отклонения от настоящего изобретения. Следует понимать, что различные альтернативы вариантам осуществления настоящего изобретения, описанные в данном документе, можно применять при осуществлении настоящего изобретения на практике. Подразумевается, что нижеследующая формула изобретения определяет объем настоящего изобретения и что способы и структуры в пределах объема данной формулы изобретения и их эквиваленты охвачены ею.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SYNTHORX, INC.

<120> КОНЪЮГАТЫ IL-2 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

<130> 46085-729.601

<140>

<141>

<150> 62/940,173

<151> 2019-11-25

<150> 62/899,035

<151> 2019-09-11

<150> 62/870,581

<151> 2019-07-03

<150> 62/847,844

<151> 2019-05-14

<150> 62/802,191

<151> 2019-02-06

<160> 87

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 1

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 2

<211> 153

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu

1 5 10 15

Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu

20 25 30

Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe

50 55 60

Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu

65 70 75 80

Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys

85 90 95

Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile

100 105 110

Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala

115 120 125

Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe

130 135 140

Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

145 150

<210> 3

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 3

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 4

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 4

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 5

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 5

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Xaa Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 6

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 6

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Xaa Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 7

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 7

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Xaa Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 8

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 8

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Xaa Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 9

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 9

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Xaa Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 10

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 10

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 11

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 11

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 12

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 12

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 13

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 13

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 14

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 14

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 15

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 15

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 16

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 16

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 17

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 17

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 18

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 18

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 19

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 19

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 20

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 20

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 21

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 21

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 22

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 22

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 23

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 23

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 24

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 24

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 25

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 25

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 26

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 26

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 27

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 27

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 28

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 28

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 29

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 29

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 30

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 30

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Xaa

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 31

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 31

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Xaa Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 32

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 32

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Xaa Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 33

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 33

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Xaa Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 34

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> Любая неприродная аминокислота

<400> 34

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Xaa Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 35

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 35

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 36

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 36

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 37

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 37

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 38

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 38

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 39

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<400> 39

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 40

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 40

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 41

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 41

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 42

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 42

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 43

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 43

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 44

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 44

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 45

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 45

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 46

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 46

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 47

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 47

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 48

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 48

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 49

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 49

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 50

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 50

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 51

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 51

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 52

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 52

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 53

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 53

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 54

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 54

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 55

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 55

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 56

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания замен

и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 56

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 57

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания замен

и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 57

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 58

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 58

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 59

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 59

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 60

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 60

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 61

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 61

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 62

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 62

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 63

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 63

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 64

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 64

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 65

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 65

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 66

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (62)..(62)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 66

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 67

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 67

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 68

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (43)..(43)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 68

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 69

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (35)..(35)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно

конъюгированный с PEG

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 69

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 70

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 70

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 71

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 71

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 72

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 72

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 73

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 73

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 74

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 74

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 75

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 75

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 76

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 76

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 77

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 77

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 78

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 78

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 79

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 79

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 80

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 80

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 81

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (61)..(61)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 81

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 82

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (41)..(41)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 82

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 83

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (42)..(42)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 83

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 84

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин

<220>

<223> См. поданное описание изобретения для подробного описания

замен и предпочтительных вариантов осуществления

<400> 84

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

1 5 10 15

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

20 25 30

Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys

35 40 45

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

65 70 75 80

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

85 90 95

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

100 105 110

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile

115 120 125

Ser Thr Leu Thr

130

<210> 85

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 85

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 86

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (4)..(4)

<223> Любая аминокислота за исключением Pro

<400> 86

Val Pro Gly Xaa Gly

1 5

<210> 87

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 87

Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro

1 5 10 15

Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln

20 25 30

<---

Иллюстрации к изобретению RU 2 829 327 C2

Реферат патента 2024 года КОНЪЮГАТЫ IL-2 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Изобретение относится к конъюгату IL-2, содержащему аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 80% идентичности SEQ ID NO: 3, где по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении аминокислоты, выбранном из K34, F41, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44 и V68, относящемся к положениям аминокислот в SEQ ID NO: 3, заменен структурой формулы (I), где значения X, Y, Z определены в формуле изобретения, и способу его получения. Также предложены фармацевтические композиции, содержащие один или несколько конъюгатов IL-2. Конъюгаты IL-2 предназначены для лечения рака у пациента. 9 н. и 12 з.п. ф-лы, 36 ил, 19 табл., 15 пр.

Формула изобретения RU 2 829 327 C2

1. Конъюгат IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 80% идентичности SEQ ID NO: 3, где по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении аминокислоты, выбранном из K34, F41, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44 и V68, относящемся к положениям аминокислот в SEQ ID NO: 3, заменен структурой формулы (I)

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую молекулярную массу, выбранную из приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа и приблизительно 60 кДа;

X представляет собой L-аминокислоту, имеющую структуру

X-1 указывает точку присоединения аминокислотного остатка, предшествующего замещенной аминокислоте; и

X+1 указывает точку присоединения аминокислотного остатка, следующего за замещенной аминокислотой.

2. Конъюгат IL-2 по п. 1, где указанный конъюгат содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, где по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении аминокислоты, выбранном из K34, F41, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44 и V68, относящемся к положениям аминокислот в SEQ ID NO: 3, заменен структурой формулы (I).

3. Конъюгат IL-2 по п. 1 или 2, где указанный по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении P64 заменен структурой формулы (I).

4. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-3, где указанная структура формулы (I) имеет структуру формулы (IV) или формулы (V):

5. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-4, где W представляет собой группу ПЭГ, имеющую молекулярную массу приблизительно 30 кДа.

6. Конъюгат IL-2 по п. 2, где указанный по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении P64 заменен структурой формулы (I), которая имеет структуру формулы (XII) или формулы (XIII):

где:

n представляет собой целое число, такое что группа PEG, имеющая структуру -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃, имеет молекулярную массу приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа или приблизительно 60 кДа;

волнистые линии указывают ковалентные связи с аминокислотными остатками в SEQ ID NO: 3, которые не заменены.

7. Конъюгат IL-2 по п. 6, где n представляет собой целое число, такое что группа PEG, имеющая структуру -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃, имеет молекулярную массу приблизительно 30 кДа.

8. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая эффективное количество конъюгата IL-2 по любому из пп. 1-7 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

9. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая эффективное количество смеси конъюгатов IL-2 по п. 6 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, где указанная смесь содержит (i) конъюгаты IL-2, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении P64 заменен структурой формулы (XII), и (ii) конъюгаты IL-2, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении P64 заменен структурой формулы (XIII).

10. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая эффективное количество смеси конъюгатов IL-2 по п. 4 или 5 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, где указанная смесь содержит (i) конъюгаты IL-2, в которых структура Формулы (I) имеет структуру формулы (IV), и (ii) конъюгаты IL-2, в которых структура формулы (I) имеет структуру формулы (V).

11. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая эффективное количество смеси конъюгатов IL-2 по п. 7 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, где указанная смесь содержит (i) конъюгаты IL-2, в которых указанный по меньшей мере один аминокислотный остаток в положении Р64 заменена структурой Формулы (XII), и конъюгаты IL-2, в которых аминокислота Р64 заменен структурой формулы (XIII).

12. Способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту эффективного количества конъюгата IL-2 по любому из пп. 1-7 или фармацевтической композиции по любому из пп. 8-11.

13. Способ по п. 12, где рак выбран из группы, состоящей из почечноклеточной карциномы (RCC), меланомы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), уротелиальной карциномы (UC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), рака яичника, рака желудка, рака молочной железы, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного мозга, колоректального рака, рака пищевода, рака глаза, рака головы и шеи, рака почки, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC) и классической лимфомы Ходжкина (cHL).

14. Применение конъюгата IL-2 по любому из пп. 1-7 или фармацевтической композиции по любому из пп. 8-11 для лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом.

15. Применение по п. 14, где рак выбран из группы, состоящей из почечноклеточной карциномы (RCC), меланомы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), уротелиальной карциномы (UC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), рака яичника, рака желудка, рака молочной железы, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного мозга, колоректального рака, рака пищевода, рака глаза, рака головы и шеи, рака почки, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC) и классической лимфомы Ходжкина (cHL).

16. Способ получения конъюгата IL-2, включающий:

осуществление реакции полипептида IL-2, содержащего неприродную аминокислоту формулы

где полипептид IL-2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, положение X-1 указывает точку присоединения к предшествующему аминокислотному остатку, положение X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку, а положение X указывает положение аминокислоты, которую заменяет неприродная аминокислота, где положение X представляет собой K34, F41, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44 или V68 относительно положений аминокислот в SEQ ID NO: 3,

с mPEG-DBCO формулы

или

где n представляет собой целое число, так что mPEG-DBCO содержит mPEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа или приблизительно 60 кДа,

с образованием конъюгата IL-2.

17. Способ получения конъюгата IL-2, включающий:

осуществление реакции полипептида IL-2, содержащего неприродную аминокислоту формулы

где полипептид IL-2 содержит указанную аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, где положение X представляет собой P64 относительно положений аминокислот в SEQ ID NO: 3, положение X-1 указывает точку присоединения к предшествующему аминокислотному остатку, положение X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку,

с mPEG-DBCO формулы

где n представляет собой целое число, так что mPEG-DBCO содержит mPEG с молекулярной массой приблизительно 30 кДа,

с образованием конъюгата IL-2, где указанный конъюгат IL-2 имеет формулу (XII) или формулу (XIII):

где

волнистые линии указывают ковалентные связи с аминокислотными остатками в SEQ ID NO: 3, которые не заменены.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2024 года RU2829327C2

US 20140328791 A1, 06.11.2014
US 20060269515 A1, 30.11.2006
US 20170260137 A1, 14.09.2017.

RU 2 829 327 C2

Авторы

Птацин, Джерод

Каффаро, Каролина Е.

Милла, Маркос

Даты

2024-10-30—Публикация

2020-02-05—Подача

название	год	авторы	номер документа
ВАРИАНТ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ИЛИ ЕГО ПРОИЗВОДНОЕ	2019	Чэнь, Лэй Ху, Циюе Гэ, Ху Линь, Юань Ван, Хунвэй Оу, Янчао Кун, Сянлинь Ляо, Чэн Чжан, Ляньшань	RU2799437C2
КОМПОЗИЦИИ ESCHERICHIA COLI И СПОСОБЫ НА ИХ ОСНОВЕ	2021	Доналд, Роберт Г.К. Пан, Розалинд	RU2821929C1
КОНЪЮГАТЫ ЦИТОКИНОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ	2018	Птацин, Джерод Каффаро, Каролина Е. Милла, Маркос	RU2787201C2
ВАРИАНТЫ СВИНОГО G-CSF И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ	2018	Каннинг, Питер Коннор Нудсен, Николас Рашид, Мд Харунур	RU2823074C2
РЕКОМБИНАНТНЫЕ МОЛЕКУЛЫ pMHC КЛАССА II	2017	Сантамария, Педро	RU2777115C2
УЛУЧШЕННЫЙ СЛИТЫЙ БЕЛОК ФАКТОРА IX И ЕГО КОНЪЮГАТ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ	2020	Су Хуншэн Чэнь Сянь Мо Вэйчуань Чжу Луянь Янь Хайся Жэнь Цзыцзя Ван Яли	RU2794350C1
НОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ СО СПЕЦИФИЧЕСКИМ СВЯЗЫВАНИЕМ И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2015	Хиннер Марлон Виденман Александер Аллерсдорфер Андреа	RU2723034C2
АНТИТЕЛА, НАЦЕЛИВАЮЩИЕСЯ НА КОСТНУЮ ТКАНЬ	2018	Цю, Хуавэй Парк, Сунгхае Стефано, Джеймс	RU2801206C2
БЕЛКИ, СПЕЦИФИЧНЫЕ В ОТНОШЕНИИ CD137	2016	Хиннер Марлон Роте Кристине Ольвилль Шейн Аллерсдорфер Андреа Бел Айба Рачида Сихам	RU2736312C2
КОМПОЗИЦИИ IL-12, НАЦЕЛЕННЫЕ НА EDB	2019	Вилла, Алессандра Маташи, Маттиа Онгаро, Тициано	RU2758143C1

КОНЪЮГАТЫ IL-2 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K47/60 C07K14/55 A61P35/00

Описание патента на изобретение RU2829327C2

Похожие патенты RU2829327C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 829 327 C2

Реферат патента 2024 года КОНЪЮГАТЫ IL-2 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Формула изобретения RU 2 829 327 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2024 года RU2829327C2

RU 2 829 327 C2