КОНЪЮГАТЫ ИНТЕРЛЕЙКИНА 10 И ВАРИАНТЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК C07K14/54 C12P21/02 A61K38/20 A61K47/60 A61P35/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[1] Настоящая заявка заявляет приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/930322, поданной 4 ноября 2019 г., и предварительной заявке на патент США № 62/953095, поданной 23 декабря 2019 г, раскрытия каждой из которых настоящим включены посредством ссылки во всей своей полноте.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[2] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте. Копия указанного файла с кодировкой ASCII, созданная 2 ноября 2020 г., имеет название 01183-0077-00PCT_sequence_listing.txt, и ее размер составляет 135 Кбайт.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[3] Отдельные популяции Т-клеток модулируют иммунную систему для поддержания иммунного гомеостаза и толерантности. Например, регуляторные Т (Treg)-клетки предотвращают несоответствующие ответы иммунной системы посредством предотвращения патологической аутореактивности, в то время как цитотоксические Т-клетки нацеливаются на инфицированные клетки и/или раковые клетки и уничтожают их. В некоторых случаях модулирование различных популяций Т-клеток представляет собой вариант лечения заболевания или показания.

[4] Цитокины предусматривают семейство белков передачи сигналов в клетке, таких как хемокины, интерфероны, интерлейкины, лимфокины, факторы некроза опухоли и другие факторы роста, участвующие в гомеостазе врожденных и адаптивных иммунных клеток. Цитокины продуцируются иммунными клетками, такими как макрофаги, В-лимфоциты, Т-лимфоциты и тучные клетки, эндотелиальными клетками, фибробластами и различными стромальными клетками. В некоторых случаях цитокины модулируют баланс между гуморальным и клеточным иммунными ответами.

[5] Интерлейкины представляют собой сигнальные белки, которые модулируют развитие и дифференцировку Т- и В-лимфоцитов, клеток моноцитарной линии дифференцировки, нейтрофилов, базофилов, эозинофилов, мегакариоцитов и гемопоэтических клеток. Интерлейкины продуцируются хелперными CD4+ T- и B-лимфоцитами, моноцитами, макрофагами, эндотелиальными клетками и другими резидентными клетками в тканях.

[6] В некоторых случаях передачу сигнала с помощью интерлейкина 10 (IL-10) используют для модулирования T-клеточных ответов. Соответственно, в одном аспекте в данном документе представлены конъюгаты IL-10 и варианты их применения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[7] В определенных вариантах осуществления в данном документе раскрыты конъюгаты интерлейкина 10 (IL-10) и варианты их применения в лечении одного или нескольких показаний. В некоторых вариантах осуществления в данном документе раскрыты конъюгаты IL-10 для лечения рака. В дополнительных случаях в данном документе раскрыты фармацевтические композиции и наборы, которые содержат конъюгат IL-10, описанный в данном документе.

[8] Охватываются следующие варианты осуществления.

[9] Вариант осуществления A1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3;

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[10] Вариант осуществления A2. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A1, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой .

[11] Вариант осуществления A3. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A1, где Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой .

[12] Вариант осуществления A4. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A1, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой .

[13] Вариант осуществления A5. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1, где Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой .

[14] Вариант осуществления A6. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-5, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 20 кДа и 30 кДа.

[15] Вариант осуществления A7. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A6, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 10 кДа и 20 кДа.

[16] Вариант осуществления A8. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-7, где положение структуры формулы (I) выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130.

[17] Вариант осуществления A9. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A8, где положение структуры формулы (I) выбрано из N82 и N129.

[18] Вариант осуществления A10. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A1, где структура формулы (I) имеет структуру формулы (X) или формулы (XI) или представляет собой смесь формулы (X) и формулы (XI),

где

q равняется 1, 2 или 3;

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

[19] Вариант осуществления A11. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A10, где положение структуры формулы (X) или формулы (XI) в SEQ ID NO: 1 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130.

[20] Вариант осуществления A12. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A11, где положение структуры формулы (X) или формулы (XI) в SEQ ID NO: 1 выбрано из N82 и N129.

[21] Вариант осуществления A13. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A10-12, где n представляет собой такое целое число, что -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃ имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 10 кДа или 20 кДа.

[22] Вариант осуществления A14. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A1, где структура формулы (I) имеет структуру формулы (XII) или формулы (XIII) или представляет собой смесь формулы (XII) и формулы (XIII),

где

q равняется 1, 2 или 3;

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

[23] Вариант осуществления A15. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A14, где положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) в SEQ ID NO: 1 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130.

[24] Вариант осуществления A16. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления A14, где положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) в SEQ ID NO: 1 выбрано из N82 и N129.

[25] Вариант осуществления A17. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A14-16, где n представляет собой такое целое число, что -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃ имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 10 кДа или 20 кДа.

[26] Вариант осуществления A18. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-17, где q равняется 1.

[27] Вариант осуществления A19. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-17, где q равняется 2.

[28] Вариант осуществления A20. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-17, где q равняется 3.

[29] Вариант осуществления A21. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-20, где конъюгат IL-10 представляет собой фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[30] Вариант осуществления A22. Способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту эффективного количества конъюгата IL-10 согласно любому из вариантов осуществления A1-21.

[31] Вариант осуществления A23. Способ согласно варианту осуществления A22, где рак выбран из почечноклеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), классической лимфомы Ходжкина (cHL), первичной медиастинальной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (PMBCL), уротелиальной карциномы, рака с микросателлитной нестабильностью, рака с микросателлитной стабильностью, колоректального рака с микросателлитной стабильностью, рака желудка, рака шейки матки, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), меланомы, мелкоклеточного рака легкого (SCLC), рака пищевода, глиобластомы, мезотелиомы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака яичника, опухолей с мутационной нагрузкой от умеренной до низкой, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC), плоскоклеточного рака кожи (SCSC), опухолей с экспрессией PD-L1 от низкой до отсутствующей, опухолей, системно диссеминирующих в печень и ЦНС, за пределы их первичного участка анатомического происхождения, и диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы.

[32] Вариант осуществления A24. Способ согласно варианту осуществления A22 или A23, где конъюгат IL-10 вводят субъекту один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в 4 недели, один раз в 5 недель, один раз в 6 недель, один раз в 7 недель или один раз в 8 недель.

[33] Вариант осуществления A25. Способ согласно любому из вариантов осуществления A22-24, где конъюгат IL-10 вводят субъекту путем внутривенного введения.

[34] Вариант осуществления A26. Способ получения конъюгата IL-10, включающий

осуществление реакции полипептида IL-10, содержащего неприродную аминокислоту формулы , где полипептид IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в полипептиде IL-10 заменен неприродной аминокислотой, положение X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; положение X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку, и положение X указывает на положение аминокислоты, которую заменяет неприродная аминокислота, с mPEG-DBCO формулы

или , где q равняется 1, 2 или 3, и n является таким, что mPEG-DBCO содержит PEG, имеющий молекулярную массу, составляющую приблизительно 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа или 60 кДа,

с получением таким образом конъюгата IL-10.

[35] Вариант осуществления A27. Способ согласно варианту осуществления A26, где q равняется 1.

[36] Вариант осуществления A28. Способ согласно варианту осуществления A26, где q равняется 2.

[37] Вариант осуществления A29. Способ согласно варианту осуществления A26, где q равняется 3.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[38] Различные аспекты настоящего изобретения конкретно изложены в прилагаемой формуле изобретения. Лучшее понимание особенностей и преимуществ настоящего изобретения будет получено при обращении к нижеследующему подробному описанию, где излагаются иллюстративные варианты осуществления, в которых используются принципы настоящего изобретения, и прилагаемым графическим материалам.

[39] На фиг. 1 проиллюстрированы иллюстративный SDS-PAGE и анализ с помощью вестерн-блоттинга соединения A в восстанавливающих условиях и проиллюстрировано гомогенное пегелирование мономеров IL-10, как описано в примере 2.

[40] На фиг. 2 проиллюстрировано иллюстративное определение молекулярной массы соединения A, которое описано в примере 2, с помощью SEC-MALS.

[41] На фиг. 3 проиллюстрирован иллюстративный анализ стабильности димера соединения A, который описан в примере 2, при низких концентрациях с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).

[42] На фиг. 4 проиллюстрирована следовая концентрация соединения A (пг/мл) в зависимости от пролиферации (OD₄₅₀) в анализе пролиферации с использованием MC/9 из примера 3.

[43] На фиг. 5 проиллюстрирована следовая концентрация соединения D (пг/мл) в зависимости от пролиферации (OD₄₅₀) в анализе пролиферации с использованием MC/9 из примера 3.

[44] На фиг. 6 проиллюстрирована следовая концентрация соединения E (пг/мл) в зависимости от пролиферации (OD₄₅₀) в анализе пролиферации с использованием MC/9 из примера 3.

[45] На фиг. 7A проиллюстрирована следовая концентрация соединения F (пг/мл) в зависимости от пролиферации (OD₄₅₀) в анализе пролиферации с использованием MC/9 из примера 3.

[46] На фиг. 7B проиллюстрирована следования концентрация соединения G и соединения H (пг/мл) в зависимости от пролиферации (OD₄₅₀) в анализе пролиферации с использованием MC/9 из примера 3.

[47] На фиг. 8 проиллюстрировано измерение биологической активности IL-10 дикого типа в анализе PathHunter из примера 3.

[48] На фиг. 9 проиллюстрировано измерение биологической активности соединения A в анализе PathHunter из примера 3.

[49] На фиг. 10A-C проиллюстрировано профилирование pSTAT3 в спленоцитах мышей Balb/c в отношении IL-10 дикого типа (закрашенные кружочки), соединения A (незакрашенные треугольники) и соединения D (незакрашенные квадраты) из примера 4 в CD8+ T-клетках, NK-клетках и B-клетках, соответственно.

[50] На фиг. 11A-C проиллюстрировано профилирование pSTAT3 в спленоцитах мышей B57BL/6 в отношении IL-10 дикого типа (закрашенные кружочки), соединения A (незакрашенные треугольники) и соединения D (незакрашенные квадраты) из примера 4 в CD8+ T-клетках, NK-клетках и B-клетках, соответственно.

[51] На фиг. 12A-C проиллюстрирована концентрация His-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D в зависимости от MFI pSTAT3 из примера 5 в CD8+ T-клетках, NK-клетках и B-клетках, соответственно.

[52] На фиг. 13A-B проиллюстрировано высвобождение IFNγ при активации антиген-специфического TCR с применением His-IL-10 дикого типа или соединения A из примера 6. N.D.=не обнаружено.

[53] На фиг. 14A-B проиллюстрирована положительная регуляция PD-1 после обработки с помощью [His]-IL-10 или соединения A из примера 6 и продемонстрировано, что такая положительная регуляция является независимой от активации TCR.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[54] Цитокины предусматривают семейство белков передачи сигналов в клетке, таких как хемокины, интерфероны, интерлейкины, лимфокины, факторы некроза опухоли и другие факторы роста, участвующие в гомеостазе врожденных и адаптивных иммунных клеток. Цитокины продуцируются иммунными клетками, такими как макрофаги, В-лимфоциты, Т-лимфоциты и тучные клетки, эндотелиальными клетками, фибробластами и различными стромальными клетками. В некоторых случаях цитокины модулируют баланс между гуморальным и клеточным иммунными ответами.

[55] Интерлейкины представляют собой сигнальные белки, которые модулируют развитие и дифференцировку Т- и В-лимфоцитов, клеток моноцитарной линии дифференцировки, нейтрофилов, базофилов, эозинофилов, мегакариоцитов и гемопоэтических клеток. Интерлейкины продуцируются хелперными CD4 Т- и В-лимфоцитами, моноцитами, макрофагами, эндотелиальными клетками и другими резидентными клетками в тканях. В некоторых случаях присутствуют приблизительно 15 интерлейкинов, интерлейкины 1-13, интерлейкин 15 и интерлейкин 17.

[56] IL-10 обеспечивает иммунный ответ в отношении опухоли путем активации инфильтрирующих опухоль CD8+ Т-клеток, клеточной пролиферации CD8+ Т-клеток, индукции IFN-γ, что приводит к увеличению количества молекул MHC класса I на опухолевых клетках и MHC класса II на макрофагах и индукции цитотоксических белков, опосредующих лизис клеток-мишеней. Повышенная стимуляция Т-клеточного рецептора на CD8+ Т-клетках обеспечивает противоапоптотические сигналы и сигналы пролиферации. Неожиданная роль IL-10 в микроокружении опухоли (TME) заключается в подавлении провоспалительных клеток Th17 и цитокинов, ответственных за воспаление, связанное с опухолью, что приводит к супрессии противоопухолевых ответов эффекторных клеток. Доклинические исследования показали, что дефицит IL-10 увеличивает частоту развития опухолей и снижает иммунный надзор. Кроме того, обработка трансгенных мышей Her2 пегилированным IL-10 приводила к отторжению опухоли, однако при этом требовалось наличие экспрессии IFN-γ и экспрессирующих гранзим CD8+ Т-клеток, что сопровождалось значительным увеличением количества CD8a/b+ T-клеток в опухоли.

[57] В организме IL-10 характеризуется относительно коротким периодом полужизни в сыворотке крови. По сути, время полужизни у мышей, измеренное с помощью биоанализа in vitro или по эффективности в модельной системе септического шока (см. Smith et al., Cellular Immunology 173:207-214 (1996), раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки) составляет от приблизительно 2 до 6 часов.

[58] В определенных вариантах осуществления в данном документе раскрыт модифицированный полипептид IL-10, который характеризуется увеличенным периодом полужизни в плазме крови. В некоторых вариантах осуществления в данном документе также описан модифицированный полипептид IL-10, который, при димеризации, усиливает воздействие инфильтрирующих опухоль иммунных клеток на совокупность опухолевых клеток. В других вариантах осуществления в данном документе дополнительно описан модифицированный полипептид IL-10, который образует биологически активный димер IL-10. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан модифицированный полипептид IL-10, который образует биологически активный модифицированный димер IL-10.

[59] Дополнительно в данном документе описаны конъюгаты IL-10, где конъюгаты IL-10 представляют собой IL-10 или модифицированные полипептиды IL-10, сопряженные с по меньшей мере одним фрагментом для конъюгации. Также в данном документе описаны фармацевтические композиции, содержащие один или несколько модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, и способы лечения заболевания или показания.

Определения

[60] Если не указано иное, то все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области, к которой принадлежит заявленный объект изобретения. Следует учитывать, что подробные описания являются исключительно иллюстративными и пояснительными и не ограничивают какой-либо заявляемый объект изобретения. В данной заявке применение единственного числа предусматривает множественное число, если специально не указано иное. Следует отметить, что используемая в данном описании форма единственного числа включает ссылки на множественное число, если контекстом явно не предписывается иное. В данной заявке применение "или" означает "и/или", если не указано иное. Кроме того, применение термина "включая", а также других форм, таких как "включать", "включает" и "включенный", не является ограничивающим.

[61] Хотя различные признаки настоящего изобретения могут быть описаны в контексте одного варианта осуществления, признаки также могут быть предусмотрены отдельно или в любой подходящей комбинации. Наоборот, несмотря на то, что настоящее изобретение может быть описано в данном документе в контексте отдельных вариантов осуществления для ясности, настоящее изобретение также может быть реализовано в одном варианте осуществления.

[62] Ссылка в настоящем описании на "некоторые варианты осуществления", "вариант осуществления", "один вариант осуществления" или "другие варианты осуществления" означает, что конкретные признак, структура или характеристика, описанные в связи с вариантами осуществления, включены в по меньшей мере некоторые варианты осуществления, но не обязательно во все варианты осуществления, настоящего изобретения.

[63] Применяемые в данном документе, диапазоны и количества могут быть выражены как "приблизительно" конкретное значение или диапазон. "Приблизительно" также включает точное количество. Следовательно "приблизительно 5 мкл" означает "приблизительно 5 мкл", а также "5 мкл." Как правило, выражение "приблизительно" включает количество, которое, как ожидается, будет находиться в пределах экспериментальной погрешности, например в пределах 15%, 10% или 5%.

[64] Применяемые в данном документе заголовки разделов служат только для организационных целей и не должны пониматься как ограничивающие описываемый объект настоящего изобретения.

[65] Применяемый в данном документе термин "субъект(-ы)" или "пациент(-ы)" означает любое млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее является человеком. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее является отличным от человека. В некоторых вариантах осуществления у субъекта отсутствует заболевание. В некоторых вариантах осуществления у субъекта не диагностировано заболевание. В некоторых вариантах осуществления у субъекта диагностировано заболевание. В некоторых вариантах осуществления у субъекта диагностировано по меньшей мере одно заболевание. В некоторых случаях субъект является пациентом. Ни один из терминов не требует ситуаций, характеризующихся наблюдением (например, постоянным или периодическим) медицинского работника (например, врача, дипломированной медсестры, практикующей медсестры, фельдшера, санитара или работника хосписа), или не ограничивается ими.

[66] Применяемые в данном документе термины "значительный" и "в значительной степени" применительно к связыванию рецептора означают изменение, достаточное для воздействия на связывание полипептида IL-10 с целевым рецептором. В некоторых случаях термин относится к изменению на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более. В некоторых случаях термин означает изменение в по меньшей мере 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или более.

[67] В некоторых случаях термин "по сути" в отношении димеризации означает изменение, достаточное для предотвращения образования димера IL-10.

[68] Применяемый в данном документе термин "иммунная(-ые) клетка(-и), инфильтрующая(-ие) опухоль", относится к иммунным клеткам, которые инфильтрировали участок, содержащий клетки опухоли (например, микроокружение опухоли). В некоторых случаях инфильтрирующие опухоль иммунные клетки ассоциированы с разрушением опухолевых клеток, снижением пролиферации опухолевых клеток, снижением опухолевой нагрузки или их комбинациями. В некоторых случаях инфильтрирующие опухоль иммунные клетки предусматривают инфильтрирующие опухоль лимфоциты (TIL). В некоторых случаях инфильтрирующие опухоль иммунные клетки предусматривают T-клетки, B-клетки, натуральные киллерные клетки, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки, тучные клетки, эозинофилы или базофилы. В некоторых случаях инфильтрирующие опухоль иммунные клетки предусматривают CD4+ или CD8+ T-клетки.

[69] Применяемый в данном документе термин "неприродная аминокислота" относится к аминокислоте, отличной от одной из 20 встречающихся в природе аминокислот. Иллюстративные неприродные аминокислоты описаны в Young et al., "Beyond the canonical 20 amino acids: expanding the genetic lexicon", J. of Biological Chemistry 285(15): 11039-11044 (2010), раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки.

[70] Как используется в данном документе, "нуклеотид" относится к соединению, содержащему нуклеозидный фрагмент и фосфатный фрагмент. Иллюстративные природные нуклеотиды включают без ограничения аденозинтрифосфат (ATP), уридинтрифосфат (UTP), цитидинтрифосфат (CTP), гуанозинтрифосфат (GTP), аденозиндифосфат (ADP), уридиндифосфат (UDP), цитидиндифосфат (CDP), гуанозиндифосфат (GDP), аденозинмонофосфат (AMP), уридинмонофосфат (UMP), цитидинмонофосфат (CMP) и гуанозинмонофосфат (GMP), дезоксиаденозинтрифосфат (dATP), дезокситимидинтрифосфат (dTTP), дезоксицитидинтрифосфат (dCTP), дезоксигуанозинтрифосфат (dGTP), дезоксиаденозиндифосфат (dADP), тимидиндифосфат (dTDP), дезоксицитидиндифосфат (dCDP), дезоксигуанозиндифосфат (dGDP), дезоксиаденозинмонофосфат (dAMP), дезокситимидинмонофосфат (dTMP), дезоксицитидинмонофосфат (dCMP) и дезоксигуанозинмонофосфат (dGMP). Иллюстративные природные дезоксирибонуклеотиды, которые содержат дезоксирибозу в качестве сахарного фрагмента, включают dATP, dTTP, dCTP, dGTP, dADP, dTDP, dCDP, dGDP, dAMP, dTMP, dCMP и dGMP. Иллюстративные природные рибонуклеотиды, которые содержат рибозу в качестве сахарного фрагмента, включают ATP, UTP, CTP, GTP, ADP, UDP, CDP, GDP, AMP, UMP, CMP и GMP.

[71] Как используется в данном документе, "основание" или "нуклеиновое основание" относится к по меньшей мере части нуклеозида или нуклеотида (нуклеозид и нуклеотид охватывают рибо- или дезоксирибонуклеотидные варианты), являющейся нуклеиновым основанием, которая в некоторых случаях может содержать дополнительные модификации сахарной части нуклеозида или нуклеотида. В некоторых случаях термин "основание" также используется для обозначения всего нуклеозида или нуклеотида (например, "основание" может быть встроено с помощью ДНК-полимеразы в ДНК или с помощью РНК-полимеразы в РНК). Однако термин "основание" не следует интерпретировать как обязательно представляющий весь нуклеозид или нуклеотид, если этого не требует контекст. В представленных в данном документе химических структурах основания или нуклеинового основания показано только основание нуклеозида или нуклеотида, а сахарный фрагмент и необязательно какие-либо фосфатные остатки опущены для ясности. Как используется в представленных в данном документе химических структурах основания или нуклеинового основания, волнистая линия представляет соединение с нуклеозидом или нуклеотидом, при этом сахарная часть нуклеозида или нуклеотида может быть дополнительно модифицирована. В некоторых вариантах осуществления волнистая линия представляет присоединение основания или нуклеинового основания к сахарной части нуклеозида или нуклеотида, такой как пентоза. В некоторых вариантах осуществления пентоза представляет собой рибозу или дезоксирибозу.

[72] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновое основание обычно представляет собой часть нуклеозида, являющуюся гетероциклическим основанием. Нуклеиновые основания могут встречаться в природе, могут быть модифицированы, могут не иметь сходства с природными основаниями и/или могут быть синтезированы, например путем органического синтеза. В определенных вариантах осуществления нуклеиновое основание содержит любой атом или группу атомов в нуклеозиде или нуклеотиде, где атом или группа атомов способны взаимодействовать с основанием другой нуклеиновой кислоты с использованием или без использования водородных связей. В определенных вариантах осуществления неприродное нуклеиновое основание не является производным природного нуклеинового основания. Следует отметить, что неприродные нуклеиновые основания не обязательно обладают основными свойствами, однако для простоты они называются нуклеиновыми основаниями. В некоторых вариантах осуществления при упоминании нуклеинового основания "(d)" указывает на то, что нуклеиновое основание может быть присоединено к дезоксирибозе или рибозе, тогда как "d" без скобок указывает на то, что нуклеиновое основание присоединено к дезоксирибозе.

[73] Как используется в данном документе, "нуклеозид" представляет собой соединение, содержащее фрагмент, являющийся нуклеиновым основанием, и сахарный фрагмент. Нуклеозиды включают без ограничения нуклеозиды, встречающиеся в природе (обнаруживаемые в ДНК и РНК), нуклеозиды, лишенные основания, модифицированные нуклеозиды и нуклеозиды, имеющие миметические основания и/или сахарные группы. Нуклеозиды предусматривают нуклеозиды, содержащие любое разнообразие заместителей. Нуклеозид может представлять собой гликозидное соединение, образованное посредством гликозидной связи между основанием нуклеиновой кислоты и восстанавливающей группой сахара.

[74] Используемый в данном документе термин "аналог" химической структуры относится к химической структуре, которая сохраняет существенное сходство с исходной структурой, хотя она не может быть легко получена синтетическим путем из исходной структуры. В некоторых вариантах осуществления аналог нуклеотида представляет собой неприродный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления аналог нуклеозида представляет собой неприродный нуклеозид. Родственная химическая структура, которая легко получается синтетическим путем из исходной химической структуры, называется "производной".

[75] Хотя различные признаки настоящего изобретения могут быть описаны в контексте одного варианта осуществления, признаки также могут быть предусмотрены отдельно или в любой подходящей комбинации. Наоборот, несмотря на то, что настоящее изобретение может быть описано в данном документе в контексте отдельных вариантов осуществления для ясности, настоящее изобретение также может быть реализовано в одном варианте осуществления.

Модифицированные полипептиды IL-10

[76] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описаны полипептиды IL-10, модифицированные по аминокислотному положению. В некоторых случаях модификация относится к природной аминокислоте. В некоторых случаях модификация относится к неприродной аминокислоте. В некоторых случаях в данном документе описан выделенный и модифицированный полипептид IL-10, который содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 представляет собой выделенный и очищенный IL-10 млекопитающего, например белок IL-10 грызуна или человеческий белок IL-10. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 представляет собой человеческий белок IL-10. В некоторых вариантах осуществления основой для модификации в модифицированный полипептид IL-10 является исходная последовательность IL-10. В некоторых случаях исходная последовательность IL-10 представляет собой последовательность IL-10 дикого типа. В некоторых случаях исходная последовательность IL-10 представляет собой SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полипептиды IL-10, описанные в данном документе, содержат необязательный метионин на N-конце, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1 и 3-73. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полипептиды IL-10 содержат метионин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10, за которым следует серин. В некоторых случаях модифицированные полипептиды IL-10 содержат серин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полипептиды IL-10 содержат метионин, замещающий и заменяющий серин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полипептиды IL-10 содержат метионин на N-конце, за которым следует серин, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированные полипептиды IL-10 содержат серин на N-конце SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полипептиды IL-10 содержат метионин, замещающий и заменяющий серин на N-конце, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях исходная последовательность IL-10 представляет собой SEQ ID NO: 2.

[77] В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 97% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 1. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 2. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 2.

[78] В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 представляет собой усеченный вариант. В некоторых случаях усечение представляет собой N-концевую делецию. В других случаях усечение представляет собой С-концевую делецию. В дополнительных случаях усечение включает как N-концевую, так и C-концевую делеции. Например, усечение может представлять собой делецию по меньшей мере или приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или большего количества остатков либо с N-конца, либо с С-конца, либо с обоих концов. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 или более остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 2 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 3 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 4 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 5 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 6 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 7 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 8 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 9 остатков. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 предусматривает N-концевую делецию по меньшей мере или приблизительно 10 остатков.

[79] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-10 представляет собой функционально активный фрагмент. В некоторых случаях функционально активный фрагмент содержит участок IL-10 5-160, 10-160, 15-160, 20-160, 1-155, 5-155, 10-155, 15-155, 20-155, 1-150, 5-150, 10-150, 15-150 или 20-150, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 5-160, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 10-160, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 15-160, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 20-160, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 1-155, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 5-155, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 10-155, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 15-155, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 20-155, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 1-150, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 5-150, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 10-150, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 15-150, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях функционально активный фрагмент предусматривает область IL-10 20-150, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1.

[80] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан полипептид IL-10, который содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в спирали C, D или E. В некоторых случаях спираль C содержит остатки L60-N82, положения которых относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях спираль D содержит остатки I87-C108, положения которых относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях спираль E содержит остатки S118-L131, положения которых относятся к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в экспонированном на поверхности местоположении в спирали C, D или E.

[81] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан модифицированный полипептид IL-10, который содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту в положении, выбранном из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 67, 70, 74, 75, 79, 82, 88, 89, 99, 125, 126, 129 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79 или N82, где положения остатков соответствуют положениям 67, 70, 74, 75, 79 и 82, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 88, 89, 99, 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 67, 70, 74, 75, 79, 82, 88, 89, 99, 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E67. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q70. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E74. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E75. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q79. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N82. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K88. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой A89. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K99. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K125. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N126. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N129. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K130. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q132.

[82] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны полипептиды IL-10, модифицированные по аминокислотному положению. В некоторых случаях модификация относится к природной аминокислоте. В некоторых случаях модификация относится к неприродной аминокислоте. В некоторых случаях в данном документе описан выделенный и модифицированный полипептид IL-10, который содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 представляет собой выделенный и очищенный IL-10 млекопитающего, например белок IL-10 грызуна или человеческий белок IL-10. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 представляет собой человеческий белок IL-10.

[83] В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 3. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 3. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 4. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 4. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 5. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 5. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 6. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 6. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 7. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 7. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 8. В дополнительных случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 8. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 9. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 9. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 9. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 10. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 10. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 13. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 13. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 13. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 14. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 14. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 14. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 15. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 15. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 16. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 16. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 17. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 17. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 17. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 18. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 18. В некоторых случаях модифицированный полипептид IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 18.

[84] В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена проксимально по отношению к N-концу. Как используется в данном документе, "проксимально" относится к остатку, расположенному на расстоянии от по меньшей мере 1 остатка от N-концевого остатка до приблизительно 50 остатков от N-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 10, 20, 30, 40 или 50 остатков от N-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 10 остатков от N-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 20 остатков от N-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 30 остатков от N-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 40 остатков от N-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 50 остатков от N-концевого остатка.

[85] В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой N-концевой остаток.

[86] В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена проксимально по отношению к C-концу. Как используется в данном документе, "проксимально" относится к остатку, расположенному на расстоянии от по меньшей мере 1 остатка от С-концевого остатка до приблизительно 50 остатков от С-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 10, 20, 30, 40 или 50 остатков от C-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 10 остатков от C-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 20 остатков от C-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 30 остатков от C-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 40 остатков от C-концевого остатка. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в пределах первых 50 остатков от C-концевого остатка.

[87] В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой C-концевой остаток.

[88] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-10 представляет собой функционально активный мономер или функционально активный димер, который способен связываться с IL-10R и активирует сигнальный путь. В некоторых случаях функционально активный модифицированный мономер или димер IL-10 характеризуется увеличенным периодом полужизни в плазме крови. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови сравнивают с периодом полужизни в плазме крови белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10 составляет по меньшей мере 90 минут, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 18 часов, 24 часа, 36 часов, 48 часов, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 14 дней, 21 день, 28 дней, 30 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10 составляет приблизительно 90 минут, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 18 часов, 24 часа, 36 часов, 48 часов, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 14 дней, 21 день, 28 дней или 30 дней по сравнению с периодом полужизни в плазме крови белка IL-10 дикого типа.

[89] В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, при котором обеспечивается возможность пролиферации и/или увеличения количества инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL), T-клеток, B-клеток, натуральных киллерных клеток, макрофагов, нейтрофилов, дендритных клеток, тучных клеток, эозинофилов, базофилов или CD4+ или CD8+ T-клеток.

[90] В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10 вводят субъекту. В некоторых вариантах осуществления вводимый субъекту модифицированный мономер или димер IL-10 характеризуется сниженной токсичностью по сравнению с токсичностью вводимого субъекту IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10 характеризуется сниженной токсичностью, которая снижена в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз или более по сравнению с димером IL-10 дикого типа. В некоторых случаях сниженная токсичность снижена на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или больше по сравнению с белком IL-10 дикого типа.

[91] В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10 вводят субъекту. В некоторых вариантах осуществления вводимый субъекту модифицированный мономер или димер IL-10 не обуславливает возникновение нежелательных явлений 3-й или 4-й степени. В некоторых вариантах осуществления вводимый субъекту модифицированный мономер или димер IL-10 характеризуется сниженной частотой возникновения или тяжестью нежелательных явлений 3-й или 4-й степени по сравнению с частотой возникновения или тяжестью нежелательных явлений 3-й или 4-й степени, обусловленных введением субъекту белка IL-10 дикого типа. Иллюстративные нежелательные явления 3-й или 4-й степени включают анемию, лейкопению, тромбоцитопению, повышенный уровень ALT, анорексию, артралгию, боль в пояснице, озноб, диарею, дислипидемию, утомляемость, лихорадку, гриппоподобные симптомы, гипоальбуминемию, повышенный уровень липазы, реакцию в месте инъекции, миальгию, тошноту, ночную потливость, прурит, высыпание, эритематозную сыпь, пятнисто-папулезную сыпь, трансаминит, рвоту и слабость.

[92] В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10 снижает частоту возникновения нежелательных явлений 3-й или 4-й степени у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению с введением субъекту белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях модифицированный мономер или димер IL-10 снижает тяжесть нежелательных явлений 3-й или 4-й степени у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению с введением субъекту белка IL-10 дикого типа.

[93] В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10, который описан в данном документе, характеризуется пониженной аффинностью к IL-10R по сравнению с аффинностью белка IL-10 дикого типа к IL-10R. В некоторых вариантах осуществления аффинность модифицированного мономера или димера IL-10 к IL-10R по сравнению с аффинностью белка IL-10 дикого типа к IL-10R снижается на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 30%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 70%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 95%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 100%.

[94] В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности модифицированного мономера или димера IL-10 по сравнению с белком IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 3-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 7-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 9-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 200-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 400-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является более чем 1000-кратным.

[95] В некоторых случаях модифицированный мономер или димер IL-10 не взаимодействует с IL-10R. В некоторых случаях модифицированный мономер или димер IL-10 имеет приблизительно такое же значение аффинности к IL-10R, как и значение аффинности IL-10 дикого типа к IL-10R.

[96] В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10, который описан в данном документе, характеризуется повышенной аффинностью к IL-10R по сравнению с аффинностью белка IL-10 дикого типа к IL-10R. В некоторых вариантах осуществления аффинность модифицированного мономера или димера IL-10 к IL-10R по сравнению с аффинностью белка IL-10 дикого типа к IL-10R увеличивается на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 30%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 70%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 95%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 100%.

[97] В некоторых вариантах осуществления повышение аффинности модифицированного мономера или димера IL-10 по сравнению с белком IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 3-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 7-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 9-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 200-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 400-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является более чем 1000-кратным.

[98] В некоторых случаях сигнальную действенность IL-10R, опосредованную IL-10, измеряют по снижению половины максимальной эффективной концентрации (EC50). В некоторых вариантах осуществления EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижена по сравнению с EC50 белка IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 10%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 20%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 30%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 40%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 50%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 60%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 70%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 80%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 90%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 95%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 99%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 100%.

[99] В некоторых вариантах осуществления снижение EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 по сравнению с белком IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в более 1000 раз.

[100] В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 является приблизительно такой же, как и EC50 белка IL-10 дикого типа.

[101] В некоторых случаях модифицированный мономер или димер IL-10, который описан в данном документе, характеризуется повышенной EC50 по сравнению с EC50 белка IL-10 дикого типа при активации передачи сигнала с помощью IL-10R. В некоторых вариантах осуществления повышение EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 10%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 20%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 30%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 40%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 50%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 60%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 70%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 80%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 90%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 95%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 99%. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 100%.

[102] В некоторых вариантах осуществления повышение EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 по сравнению с EC50 белка IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях EC50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в более 1000 раз.

[103] В некоторых случаях сигнальную действенность IL-10R, опосредованную IL-10, измеряют по средней эффективной дозе (ED50). В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер или димер IL-10, который описан в данном документе, характеризуется сниженной ED50 по сравнению с ED50 белка IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 10%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 20%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 30%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 40%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 50%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 60%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 70%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 80%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 90%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 95%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 99%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается на приблизительно 100%.

[104] В некоторых вариантах осуществления снижение ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 по сравнению с ED50 белка IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 снижается в более 1000 раз.

[105] В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 является приблизительно такой же, как и ED50 белка IL-10 дикого типа.

[106] В некоторых случаях модифицированный мономер или димер IL-10, который описан в данном документе, характеризуется повышенной ED50 по сравнению с ED50 белка IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления повышение ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 10%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 20%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 30%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 40%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 50%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 60%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 70%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 80%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 90%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 95%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 99%. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается на приблизительно 100%.

[107] В некоторых вариантах осуществления повышение ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 по сравнению с ED50 белка IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или больше. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях ED50 модифицированного мономера или димера IL-10 повышается в более 1000 раз.

Конъюгаты IL-10

[108] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описаны конъюгаты IL-10. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полипептиды IL-10, которые описаны в данном документе, представляют собой конъюгаты IL-10. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит полипептид IL-10, содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, и по меньшей мере один конъюгируемый фрагмент, связанный с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой. В некоторых случаях по меньшей мере один конъюгируемый фрагмент непосредственно связан с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой. В других случаях по меньшей мере один конъюгируемый фрагмент опосредованно связан с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой с помощью линкера, описанного в данном документе.

[109] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает по меньшей мере одну мутацию, предусматривающую по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, и по меньшей мере один конъюгируемый фрагмент, связанный с по меньшей мере одной неприродной аминокислотой в по меньшей мере одном любом из положений в SEQ ID NO: 1-66 (таблица 1). В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10, описанные в данном документе, содержат необязательный метионин на N-конце, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1 и 3-73. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10, за которым следует серин. В некоторых случаях конъюгаты IL-10, которые описаны в данном документе, содержат серин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10. В некоторых вариантах осуществления модифицированные конъюгаты IL-10 содержат метионин, замещающий и заменяющий серин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин на N-конце, за которым следует серин, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях конъюгаты IL-10 содержат серин на N-конце SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин, замещающий и заменяющий серин на N-конце, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1.

(M) обозначает, что остаток метионина может быть необязательно добавлен к N-концу модифицированных полипептидов IL-10 и конъюгатов IL-10, показанных под SEQ ID NO: 1 и 3-73. В качестве альтернативы остаток метионина может замещать и заменять серин на N-конце.

X обозначает сайт, содержащий неприродную аминокислоту.

[AzK] обозначает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин. Соединение имеет регистрационный номер по реферативному журналу "Chemical Abstracts" 1167421-25-1.

[AzK_PEG] обозначает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно конъюгированный с PEG посредством DBCO-опосредованной клик-химии с образованием соединения, предусматривающего структуру формулы (II), или формулы (III), или формулы (X), или формулы (XI). В некоторых примерах соединение характеризуется структурой формулы (II), формулы (III), формулы (X) или формулы (XI), где присутствует заместитель q, и q равняется 1. В некоторых примерах соединение характеризуется структурой формулы (II), формулы (III), формулы (X) или формулы (XI), где присутствует заместитель q, и q равняется 2. В некоторых примерах соединение характеризуется структурой формулы (II), формулы (III), формулы (X) или формулы (XI), где присутствует заместитель q, и q равняется 3. Например, если указано, то PEG20kDa обозначает, в случае соединения, предусматривающего структуру формулы (II) или формулы (III), линейную цепь полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой, составляющей 20 килодальтонов, закрытую метокси-группой. В другом примере, если указано, то PEG20kDa обозначает, в случае соединения, предусматривающего структуру формулы (X) или формулы (XI), соединение, где n представляет собой значение, обеспечивающее группу PEG с массой, составляющей 20 килодальтонов. Соотношение региоизомеров, образующихся в результате клик-реакции, составляет приблизительно 1:1 или более чем 1:1. Термин "DBCO" означает химический фрагмент, содержащий дибензоциклооктиновую группу, как, например, содержащий соединение mPEG-DBCO.

[AzK_L1_PEG] обозначает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин, стабильно конъюгированный с PEG посредством DBCO-опосредованной клик-химии с образованием соединения, предусматривающего структуру формулы (IV), или формулы (V), или формулы (XII), или формулы (XIII). В некоторых примерах соединение характеризуется структурой формулы (IV), формулы (V), формулы (XII) или формулы (XIII), где присутствует заместитель q, и q равняется 1. В некоторых примерах соединение характеризуется структурой формулы (IV), формулы (V), формулы (XII) или формулы (XIII), где присутствует заместитель q, и q равняется 2. В некоторых примерах соединение характеризуется структурой формулы (IV), формулы (V), формулы (XII) или формулы (XIII), где присутствует заместитель q, и q равняется 3. Например, если указано, то PEG20kDa обозначает, в случае соединения, предусматривающего структуру формулы (IV) или формулы (V), линейную цепь полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой, составляющей 20 килодальтонов, закрытую метокси-группой. В другом примере, если указано, то PEG20kDa обозначает, в случае соединения, предусматривающего структуру формулы (XII) или формулы (XIII), соединение, где n представляет собой значение, обеспечивающее группу PEG с массой, составляющей 20 килодальтонов. Соотношение региоизомеров, образующихся в результате клик-реакции, составляет приблизительно 1:1 или более чем 1:1. Термин "DBCO" означает химический фрагмент, содержащий дибензоциклооктиновую группу, как, например, содержащий соединение mPEG-DBCO.

[His] обозначает аминокислотную последовательность, содержащую гистидиновую метку и сайт распознавания TEV, имеющую последовательность HHHHHHGSSENLYFQ (остатки 1-15 в SEQ ID NO: 67-73). Эта последовательность может быть отщеплена от экспрессированного конъюгата IL-10 способами, описанными в данном документе и известными специалисту в данной области, с получением конъюгата IL-10 без аминокислотной последовательности HHHHHHGSSENLYFQ (остатки 1-15 в SEQ ID NO: 67-73). Например, гистидиновая метка и сайт распознавания TEV, содержащиеся в конъюгате IL-10 под SEQ ID NO: 68, могут быть отщеплены с получением конъюгата IL-10, имеющего SEQ ID NO: 27. В более общем смысле, "[His]-SEQ ID NO: X" указывает на то, что последовательность, содержащая гистидиновую метку и сайт распознавания TEV, показанная выше, присутствует на N-конце указанной последовательности, сразу после исходного метионина, если он присутствует.

[110] Как описано в данном документе, по меньшей мере одна неприродная аминокислота необязательно расположена в спирали C, D или E, например, в положении открытого остатка на поверхности. В некоторых случаях остатки предусматривают E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 67, 70, 74, 75, 79, 82, 88, 89, 99, 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях остатки предусматривают E67, Q70, E74, E75, Q79, или N82, где положения остатков соответствуют положениям 67, 70, 74, 75, 79 и 82, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях остаток предусматривает K88, K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 88, 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях остаток предусматривает K125, N126, N129, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях остаток предусматривает Q70, E74, N82, K88, N126, K130 или Q132, где положения остатков соответствуют положениям 70, 74, 82, 88, 126, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях остаток предусматривает A89 и K99, где положения остатков соответствуют положениям 89 и 99, представленным в SEQ ID NO: 1.

[111] В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E67 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q70 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E74 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E75 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q79 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N82 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K88 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой A89 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K99 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K125 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N126 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N129 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K130 в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q132 в SEQ ID NO: 1.

[112] В некоторых случаях по меньшей мере один остаток неприродной аминокислоты выбран из E85, Q88, E92, E93, Q97, N100, K106, A107, K117, K143, N144, N147, K148 или Q150, где положения остатков соответствуют положениям 85, 88, 92, 93, 97, 100, 106, 107, 117, 143, 144, 147, 148 и 150, представленным в предшественнике IL-10 под SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E85 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q88 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E92 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой E93 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q97 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N100 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K106 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой A107 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K117 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K143 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N144 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой N147 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой K148 в SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты представляет собой Q150 в SEQ ID NO: 2.

[113] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[114] В других вариантах осуществления в данном документе описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

q равняется 1, 2 или 3;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[115] Здесь и по всему данному документу термин "конъюгат IL-10" охватывает фармацевтически приемлемые соли, сольваты и гидраты указанной структуры.

[116] Здесь и по всему данному документу структура формулы (I) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. В некоторых вариантах осуществления структура формулы (I) или любые ее вариант осуществления или видоизменение представлены в виде ее фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления структура формулы (I) или любые ее вариант осуществления или видоизменение представлены в виде ее сольвата. В некоторых вариантах осуществления структура формулы (I) или любые ее вариант осуществления или видоизменение представлены в виде ее гидрата. В некоторых вариантах осуществления структура формулы (I) или любые ее вариант осуществления или видоизменение представлены в виде свободного основания.

[117] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой

[118] . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой . В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой . Здесь и по всему данному документу варианты осуществления для Z и Y также охватывают их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[119] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), q равняется 3.

[120] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[121] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E67, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q70, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E74, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E75, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q79, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N82, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K88, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой A89, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K99, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K125, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N126, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N129, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K130, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1 и в SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (I), положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q132, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1.

[122] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[123] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[124] Здесь и по всему данному документу структура формулы (II) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (III) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты.

[125] В некоторых вариантах осуществления [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II). В некоторых вариантах осуществления [AzK_PEG] имеет структуру формулы (III). В некоторых вариантах осуществления [AzK_PEG] представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III).

[126] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[127] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[128] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[129] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[130] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[131] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[132] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[133] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[134] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[135] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[136] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[137] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[138] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[139] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[140] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[141] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[142] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[143] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[144] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[145] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[146] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[147] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[148] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[149] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[150] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, W представляет собой линейную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, W представляет собой разветвленную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, W представляет собой метокси-PEG-группу. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, метокси-PEG-группа является линейной или разветвленной. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, метокси-PEG-группа является линейной. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, предусматривающего формулу (II), формулу (III) или смесь формулы (II) и формулы (III) и имеющего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, метокси-PEG группа является разветвленной.

[151] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[152] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[153] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34.

[154] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34.

[155] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG20kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34.

[156] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[157] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[158] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), формулы (III) или представляющего собой смесь формулы (II) и формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42.

[159] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (II), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42.

[160] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего [AzK_PEG30kDa] и имеющего структуру формулы (III), конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42.

[161] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[162] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[163] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III). В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[164] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), W представляет собой линейную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), W представляет собой разветвленную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), W представляет собой метокси-PEG-группу. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), метокси-PEG-группа является линейной или разветвленной. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), метокси-PEG-группа является линейной. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 19-26 и имеющего [AzK_PEG] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), метокси-PEG-группа является разветвленной.

[165] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[166] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[167] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III). В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 27-34 и имеющего [AzK_PEG20kDa] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 27-34 и имеющего [AzK_PEG20kDa] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 27-34 и имеющего [AzK_PEG20kDa] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее приблизительно 1:1.

[168] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[169] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[170] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III). В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 35-42 и имеющего [AzK_PEG30kDa] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 35-42 и имеющего [AzK_PEG30kDa] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 35-42 и имеющего [AzK_PEG30kDa] в виде смеси структур формулы (II) и формулы (III), соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее приблизительно 1:1.

[171] В некоторых вариантах осуществления формулы (II), формулы (III) или смеси формулы (II) и формулы (III), описанных в данном документе, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления формулы (II), формулы (III) или смеси формулы (II) и формулы (III), описанных в данном документе, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления формулы (II), формулы (III) или смеси формулы (II) и формулы (III), описанных в данном документе, q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (II), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (II), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (II), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (III), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (III), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (III), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (II) и формулы (III), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (II) и формулы (III), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (II) и формулы (III), и q равняется 3.

[172] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 59-66, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[173] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 59-66, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[174] Здесь и по всему данному документу структура формулы (IV) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (V) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты.

[175] В некоторых вариантах осуществления в способах применяют конъюгат IL-10, в котором [AzK_L1_PEG] представлен формулой (IV). В некоторых вариантах осуществления в способах применяют конъюгат IL-10, в котором [AzK_L1_PEG] представлен формулой (V). В некоторых вариантах осуществления в способах применяют конъюгат IL-10, в котором [AzK_L1_PEG] представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V).

[176] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 Да, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[177] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или ее фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[178] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[179] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[180] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[181] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[182] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 500 дальтонов, 1 кДа, 2 кДа, 3 кДа, 4 кДа, 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 100 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66 и [AzK_L1_PEG], имеющий структуру формулы (IV), формулы (V) или представляющий собой смесь формулы (IV) и формулы (V), W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа.

[183] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[184] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[185] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V).

[186] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V).

[187] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру, представляющую собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 43-50 и [AzK_L1_PEG20kDa], имеющий структуру, представляющую собой смесь формулы (IV) и формулы (V), соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_ PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 43-50 и [AzK_L1_PEG20kDa], имеющий структуру, представляющую собой смесь формулы (IV) и формулы (V), соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_ PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 43-50 и [AzK_L1_PEG20kDa], имеющий структуру смеси формулы (IV) и формулы (V), соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_ PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[188] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[189] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность с любым из SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[190] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 55, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 56, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 57, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 58, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V).

[191] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру, представляющую собой смесь формулы (IV) и формулы (V). В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 51-58 и [AzK_L1_PEG30kDa], имеющий структуру, представляющую собой смесь формулы (IV) и формулы (V), соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_ PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 51-58 и [AzK_L1_PEG30kDa], имеющий структуру, представляющую собой смесь формулы (IV) и формулы (V), соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_ PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего одну или несколько аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 51-58 и [AzK_L1_PEG30kDa], имеющий структуру смеси формулы (IV) и формулы (V), соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_ PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[192] В некоторых вариантах осуществления формулы (IV), формулы (V) или смеси формулы (IV) и формулы (V), описанных в данном документе, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления формулы (IV), формулы (V) или смеси формулы (IV) и формулы (V), описанных в данном документе, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления формулы (IV), формулы (V) или смеси формулы (IV) и формулы (V), описанных в данном документе, q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (IV), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (IV), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (IV), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (V), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (V), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (V), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (IV) и формулы (V), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (IV) и формулы (V), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (IV) и формулы (V), и q равняется 3.

[193] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII),

где

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[194] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII),

где

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[195] Здесь и по всему данному документу структура формулы (VI) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (VII) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты.

[196] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132.

[197] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E67. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q70. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E74. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E75. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q79. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N82. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K88. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой A89. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K99. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K125. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N126. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N129.

[198] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q132.

[199] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере одно из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132 в конъюгате IL-10 заменено структурой, представляющей собой смесь формулы (VI) и формулы (VII), соотношение количества структуры формулы (VI) и количества структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере одно из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132 в конъюгате IL-10 заменено структурой, представляющей собой смесь формулы (VI) и формулы (VII), соотношение количества структуры формулы (VI) и количества структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере одно из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132 в конъюгате IL-10 заменено структурой, представляющей собой смесь формулы (VI) и формулы (VII), соотношение количества структуры формулы (VI) и количества структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[200] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10, заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII), положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132, n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 1000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 25000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 20000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 15000 дальтонов или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 10000 дальтонов.

[201] В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 1000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 5000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 10000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 15000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 20000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 25000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 30000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 40000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 50000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 100000 дальтонов.

[202] В некоторых вариантах осуществления формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII), описанных в данном документе, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII), описанных в данном документе, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII), описанных в данном документе, q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VI), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VI), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VI), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VII), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VII), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VII), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (VI) и формулы (VII), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (VI) и формулы (VII), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (VI) и формулы (VII), и q равняется 3.

[203] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII) или формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX),

где

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов; и

X имеет структуру

,

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

[204] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII) или формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX),

где

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

,

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[205] Здесь и по всему данному документу структура формулы (VIII) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (IX) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты.

[206] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130.

[207] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E67. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q70. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E74. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой E75. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q79. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N82. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K88. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой A89. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K99. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K125. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N126. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N129. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой Q132.

[208] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере одно из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132 в конъюгате IL-10 заменено структурой, представляющей собой смесь формулы (VIII) и формулы (IX), соотношение количества структуры формулы (VIII) и количества структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере одно из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132 в конъюгате IL-10 заменено структурой, представляющей собой смесь формулы (VIII) и формулы (IX), соотношение количества структуры формулы (VIII) и количества структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере одно из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132 в конъюгате IL-10 заменено структурой, представляющей собой смесь формулы (VIII) и формулы (IX), соотношение количества структуры формулы (VIII) и количества структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[209] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10, заменен структурой формулы (VIII), формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX), положение структуры формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 и Q132, n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 1000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 25000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 20000 дальтонов, от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 15000 дальтонов или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 10000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 1000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 5000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 10000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 15000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 20000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 25000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 30000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 40000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 50000 дальтонов. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет приблизительно 100000 дальтонов.

[210] В некоторых вариантах осуществления формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX), описанных в данном документе, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX), описанных в данном документе, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления формулы (VIII), формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX), описанных в данном документе, q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VIII), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VIII), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (VIII), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (IX), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (IX), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (IX), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (VIII) и формулы (IX), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (VIII) и формулы (IX), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (VIII) и формулы (IX), и q равняется 3.

[211] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

[212] В данном документе в некоторых вариантах осуществления описан конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000;

q равняется 1, 2 или 3; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[213] Здесь и по всему данному документу структура формулы (X) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (XI) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 представляет собой фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[214] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает по сути (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (X) и формуле (XI) предусматривает только (S).

[215] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N82. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K88. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение A89. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K99. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K125. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N126. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N129. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (X) и количества структуры формулы (XI), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (X) и количества структуры формулы (XI), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (X) и количества структуры формулы (XI), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[216] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546.

[217] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[218] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[219] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой N82, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[220] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой K88, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[221] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой A89, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[222] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой K99, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[223] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой K125, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) и формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[224] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой N126, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) и формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[225] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой N129, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[226] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, представляет собой K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (X) или формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[227] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет в диапазоне от приблизительно 1000 дальтонов до приблизительно 200000 дальтонов, или от приблизительно 2000 дальтонов до приблизительно 150000 дальтонов, или от приблизительно 3000 дальтонов до приблизительно 125000 дальтонов, или от приблизительно 4000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 90000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 80000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 65000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[228] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов, приблизительно 50000 дальтонов, приблизительно 60000 дальтонов, приблизительно 70000 дальтонов, приблизительно 80000 дальтонов, приблизительно 90000 дальтонов, приблизительно 100000 дальтонов, приблизительно 125000 дальтонов, приблизительно 150000 дальтонов, приблизительно 175000 дальтонов или приблизительно 200000 дальтонов. В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (X) или формулы (XI) или смесью формулы (X) и формулы (XI), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов или приблизительно 50000 дальтонов.

[229] В некоторых вариантах осуществления формулы (X), формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI), описанных в данном документе, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления формулы (X), формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI), описанных в данном документе, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления формулы (X), формулы (XI) или смеси формулы (X) и формулы (XI), описанных в данном документе, q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (X), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (X), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (X), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XI), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XI), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XI), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (X) и формулы (XI), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (X) и формулы (XI), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (X) и формулы (XI), и q равняется 3.

[230] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

[231] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII),

где

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000;

q равняется 1, 2 или 3; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления, q равняется 3.

[232] Здесь и по всему данному документу структура формулы (XII) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (XIII) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 представляет собой фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[233] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XII) и формуле (XIII) предусматривает только (S).

[234] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N82. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K88. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение A89. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K99. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K125. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N126. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N129. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K130.

[235] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XII) и количества структуры формулы (XIII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XII) и количества структуры формулы (XIII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XII) и количества структуры формулы (XIII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[236] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546.

[237] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[238] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XII) или формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n равняется приблизительно 113, 227, 340, 454, 568 или 681.

[239] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтонов до приблизительно 200000 дальтонов, или от приблизительно 2000 дальтонов до приблизительно 150000 дальтонов, или от приблизительно 3000 дальтонов до приблизительно 125000 дальтонов, или от приблизительно 4000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 90000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 80000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 65000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[240] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов, приблизительно 50000 дальтонов, приблизительно 60000 дальтонов, приблизительно 70000 дальтонов, приблизительно 80000 дальтонов, приблизительно 90000 дальтонов, приблизительно 100000 дальтонов, приблизительно 125000 дальтонов, приблизительно 150000 дальтонов, приблизительно 175000 дальтонов или приблизительно 200000 дальтонов. В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XII) или формулы (XIII) или смесью формулы (XII) и формулы (XIII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов или приблизительно 50000 дальтонов.

[241] В некоторых вариантах осуществления формулы (XII), формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII), описанных в данном документе, q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления формулы (XII), формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII), описанных в данном документе, q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления формулы (XII), формулы (XIII) или смеси формулы (XII) и формулы (XIII), описанных в данном документе, q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XII), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XII), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XII), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XIII), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XIII), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает формулу (XIII), и q равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (XII) и формулы (XIII), и q равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (XII) и формулы (XIII), и q равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 предусматривает смесь формулы (XII) и формулы (XIII), и q равняется 3.

[242] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV),

где

m представляет собой целое число от 0 до 20;

p представляет собой целое число от 0 до 20;

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

[243] Здесь и по всему данному документу структура формулы (XIV) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (XV) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 представляет собой фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[244] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XIV) и формуле (XV) предусматривает только (S).

[245] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10. описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) составляет от 0 до 20, или от 1 до 18, или от 1 до 16, или от 1 до 14, или от 1 до 12, или от 1 до 10, или от 1 до 9, или от 1 до 8, или от 1 до 7, или от 1 до 6, или от 1 до 5, или от 1 до 4, или от 1 до 3, или от 1 до 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 11. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 12. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 13. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 14. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 15. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 16. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 17. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 18. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 20.

[246] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10. описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) составляет от 1 до 20, или от 1 до 18, или от 1 до 16, или от 1 до 14, или от 1 до 12, или от 1 до 10, или от 1 до 9, или от 1 до 8, или от 1 до 7, или от 1 до 6, или от 1 до 5, или от 1 до 4, или от 1 до 3, или от 1 до 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 11. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 12. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 13. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 14. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 15. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 16. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 17. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 18. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, p в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) равняется 20.

[247] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575.

[248] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m представляет собой целое число от 1 до 6, p представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m представляет собой целое число от 2 до 6, p представляет собой целое число от 2 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m представляет собой целое число от 2 до 4, p представляет собой целое число от 2 до 4, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 1, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 3, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 4, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 5, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 6, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 7, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 8, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 9, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 10, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 11, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 11, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137.

[249] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N82. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K88. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение A89. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K99. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K125. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N126. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N129. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K130.

[250] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XIV) и количества структуры формулы (XV), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XIV) и количества структуры формулы (XV), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XIV) и количества структуры формулы (XV), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[251] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546.

[252] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[253] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[254] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[255] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтонов до приблизительно 200000 дальтонов, или от приблизительно 2000 дальтонов до приблизительно 150000 дальтонов, или от приблизительно 3000 дальтонов до приблизительно 125000 дальтонов, или от приблизительно 4000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 90000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 80000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 65000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[256] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов, приблизительно 50000 дальтонов, приблизительно 60000 дальтонов, приблизительно 70000 дальтонов, приблизительно 80000 дальтонов, приблизительно 90000 дальтонов, приблизительно 100000 дальтонов, приблизительно 125000 дальтонов, приблизительно 150000 дальтонов, приблизительно 175000 дальтонов или приблизительно 200000 дальтонов. В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов или приблизительно 50000 дальтонов.

[257] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, m представляет собой целое число от 1 до 6, p представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[258] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где m представляет собой целое число от 1 до 6, p представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[259] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XIV) или формулы (XV) или смесью формулы (XIV) и формулы (XV), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где m представляет собой целое число от 1 до 6, p представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XIV) или формулы (XV) или смеси формулы (XIV) и формулы (XV) m равняется 2, p равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[260] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII),

где

m представляет собой целое число от 0 до 20;

n представляет собой целое число в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5000; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

[261] Здесь и по всему данному документу структура формулы (XVI) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. Здесь и по всему данному документу структура формулы (XVII) охватывает ее фармацевтически приемлемые соли, сольваты или гидраты. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 представляет собой фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[262] В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает рацемическую смесь, предусматривает смесь, обогащенную (R), предусматривает смесь, обогащенную (S), предусматривает по сути только (R), предусматривает по сути только (S), предусматривает только (R) или предусматривает только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает рацемическую смесь. В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает смесь, обогащенную (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает смесь, обогащенную (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает по сути только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает по сути только (S). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает только (R). В некоторых вариантах осуществления стереохимия хирального центра в формуле (XVI) и формуле (XVII) предусматривает только (S).

[263] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10. описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) составляет от 1 до 20, или от 1 до 18, или от 1 до 16, или от 1 до 14, или от 1 до 12, или от 1 до 10, или от 1 до 9, или от 1 до 8, или от 1 до 7, или от 1 до 6, или от 1 до 5, или от 1 до 4, или от 1 до 3, или от 1 до 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 2. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 3. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 4. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 5. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 6. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 7. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 8. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 9. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 10. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 11. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 12. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 13. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 14. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 15. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 16. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 17. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 18. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 19. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, m в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) равняется 20.

[264] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 4600, или от приблизительно 10 до приблизительно 4000, или от приблизительно 20 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 3000, или от приблизительно 100 до приблизительно 2900, или от приблизительно 150 до приблизительно 2900, или от приблизительно 125 до приблизительно 2900, или от приблизительно 100 до приблизительно 2500, или от приблизительно 100 до приблизительно 2000, или от приблизительно 100 до приблизительно 1900, или от приблизительно 100 до приблизительно 1850, или от приблизительно 100 до приблизительно 1750, или от приблизительно 100 до приблизительно 1650, или от приблизительно 100 до приблизительно 1500, или от приблизительно 100 до приблизительно 1400, или от приблизительно 100 до приблизительно 1300, или от приблизительно 100 до приблизительно 1250, или от приблизительно 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575.

[265] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m представляет собой целое число от 2 до 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m представляет собой целое число от 2 до 4, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 1, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 3, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 4, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 5, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 6, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 7, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 8, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 9, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 10, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 11, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 12, и n представляет собой целое число, выбранное из 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136 и 1137.

[266] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546.

[267] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N82. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K88. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение A89. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K99. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K125. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N126. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение N129. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, положение структуры формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 под SEQ ID NO: 1 представляет собой положение K130.

[268] В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XVI) и количества структуры формулы (XVII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XVI) и количества структуры формулы (XVII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, соотношение количества структуры формулы (XVI) и количества структуры формулы (XVII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[269] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от 100 до приблизительно 1150, или от приблизительно 100 до приблизительно 1100, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000, или от приблизительно 100 до приблизительно 900, или от приблизительно 100 до приблизительно 750, или от приблизительно 100 до приблизительно 700, или от приблизительно 100 до приблизительно 600, или от приблизительно 100 до приблизительно 575, или от приблизительно 100 до приблизительно 500, или от приблизительно 100 до приблизительно 450, или от приблизительно 100 до приблизительно 350, или от приблизительно 100 до приблизительно 275, или от приблизительно 100 до приблизительно 230, или от приблизительно 150 до приблизительно 475, или от приблизительно 150 до приблизительно 340, или от приблизительно 113 до приблизительно 340, или от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 340 до приблизительно 795, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909, или от приблизительно 227 до приблизительно 1500, или от приблизительно 225 до приблизительно 2280, или от приблизительно 460 до приблизительно 2160, или от приблизительно 460 до приблизительно 2050, или от приблизительно 341 до приблизительно 1820, или от приблизительно 341 до приблизительно 1710, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 225 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1250, или от приблизительно 341 до приблизительно 1136, или от приблизительно 341 до приблизительно 1023, или от приблизительно 341 до приблизительно 910, или от приблизительно 341 до приблизительно 796, или от приблизительно 341 до приблизительно 682, или от приблизительно 341 до приблизительно 568, или от приблизительно 114 до приблизительно 1000, или от приблизительно 114 до приблизительно 950, или от приблизительно 114 до приблизительно 910, или от приблизительно 114 до приблизительно 800, или от приблизительно 114 до приблизительно 690, или от приблизительно 114 до приблизительно 575. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545 и 4546.

[270] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137 и 1249.

[271] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[272] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, n в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 500 до приблизительно 1000. В некоторых вариантах осуществления n составляет от приблизительно 550 до приблизительно 800. В некоторых вариантах осуществления n составляет приблизительно 681.

[273] В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, находится в диапазоне от приблизительно 1000 дальтонов до приблизительно 200000 дальтонов, или от приблизительно 2000 дальтонов до приблизительно 150000 дальтонов, или от приблизительно 3000 дальтонов до приблизительно 125000 дальтонов, или от приблизительно 4000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 90000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 80000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 70000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 65000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов, или от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 7000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 8500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 9500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 15000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 50000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 45000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 35000 дальтонов, или от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов. В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов, приблизительно 50000 дальтонов, приблизительно 60000 дальтонов, приблизительно 70000 дальтонов, приблизительно 80000 дальтонов, приблизительно 90000 дальтонов, приблизительно 100000 дальтонов, приблизительно 125000 дальтонов, приблизительно 150000 дальтонов, приблизительно 175000 дальтонов или приблизительно 200000 дальтонов. В данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса фрагмента, представляющего собой PEG, составляет приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов или приблизительно 50000 дальтонов.

[274] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, содержащие аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (XVI) или формулы (XVII) или смесью формулы (XVI) и формулы (XVII), где аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 1, который заменен, выбран из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, и где m представляет собой целое число от 1 до 6, и n представляет собой целое число от приблизительно 450 до приблизительно 800, или от приблизительно 454 до приблизительно 796, или от приблизительно 454 до приблизительно 682, или от приблизительно 568 до приблизительно 909. В некоторых вариантах осуществления конъюгата IL-10, описанного в данном документе, в соединениях формулы (XVI) или формулы (XVII) или смеси формулы (XVI) и формулы (XVII) m равняется 2, и n представляет собой целое число, выбранное из 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909 и 910.

[275] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описаны конъюгаты IL-10, модифицированные в положении аминокислоты. В некоторых случаях модификация относится к природной аминокислоте. В некоторых случаях модификация относится к неприродной аминокислоте. В некоторых случаях модификация представляет собой замену на неприродную аминокислоту, которая также является конъюгированной. В некоторых случаях модификация представляет собой замену на неприродную аминокислоту и конъюгацию с аминокислотными остатками, которые не являются неприродной аминокислотой. В некоторых вариантах осуществления модификация конъюгата IL-10 предусматривает модификацию и конъюгирование исходного IL-10, содержащего последовательности под SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях исходный IL-10 представляет собой IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат необязательный метионин на N-конце, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1 и 3-73. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10, за которым следует серин. В некоторых случаях конъюгаты IL-10 содержат серин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин, замещающий и заменяющий серин на N-конце последовательности IL-10 дикого типа или исходной последовательности IL-10. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин на N-конце, за которым следует серин, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях конъюгаты IL-10 содержат серин на N-конце SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10 содержат метионин, замещающий и заменяющий серин на N-конце, показанный в виде (M) в SEQ ID NO: 1.

[276] В некоторых случаях в данном документе описан выделенный конъюгат IL-10, который содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых случаях конъюгат IL-10 представляет собой выделенный и очищенный IL-10 млекопитающего, например белок IL-10 грызуна или человеческий белок IL-10. В некоторых случаях конъюгат IL-10 представляет собой человеческий белок IL-10. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 19. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 19. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 19. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 20. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 20. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 21. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 21. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 22. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 22. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 22. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 24. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 24. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 25. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 25. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 25. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 26. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 26. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 26. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 27. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 27. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 27. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 28. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 28. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 28. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 29. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 29. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 29. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 30. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 30. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 30. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 31. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 31. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 31. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 32. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 32. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 32. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 33. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 33. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 33. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 34. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 34. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 34. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 35. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 36. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 36. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 36. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 37. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 38. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 38. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 38. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 39. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 39. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 39. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 40. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 40. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 40. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 42. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 42. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 42. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 43. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 43. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 43. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 44. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 44. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 44. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 45. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 45. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 45. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 46. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 46. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 46. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 47. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 47. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 47. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 49. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 49. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 49. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 50. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 50. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 50. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 51. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 51. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 51. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 52. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 52. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 52. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 53. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 53. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 53. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 54. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 54. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 54. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 55. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 55. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 55. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 56. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 56. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 56. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 57. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 57. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 57. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 58. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 58. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 58. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 59. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 59. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 59. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 60. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 60. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 60. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 61. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 61. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 61. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 62. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 62. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 62. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 63. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 63. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 63. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 64. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 64. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 64. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 65. В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 65. В некоторых случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 65. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 66. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность под SEQ ID NO: 66. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности под SEQ ID NO: 66. В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности c любой из SEQ ID NO: 67-73. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит последовательность с любой из SEQ ID NO: 67-73. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 состоит из последовательности с любой из SEQ ID NO: 67-73.

[277] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена проксимально по отношению к N-концу (например, проксимально по отношению к N-концевому остатку). Например, по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена необязательно в пределах первых 10, 20, 30, 40 или 50 остатков со стороны N-конца. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена на N-конце (т. e. по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой N-концевой остаток полипептида IL-10).

[278] В других вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена проксимально по отношению к C-концу (например, проксимально по отношению к С-концевому остатку). Например, по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена необязательно в пределах первых 10, 20, 30, 40 или 50 остатков со стороны С-конца. В некоторых случаях по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена на С-конце (т. e. по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой С-концевой остаток полипептида IL-10).

[279] В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит один конъюгируемый фрагмент, связанный с неприродной аминокислотой.

[280] В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит мономер IL-10, который способен активировать сигнальный путь с участием IL-10R. В других случаях конъюгат IL-10 содержит димер IL-10, который является функционально активным.

[281] В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит два или более конъюгируемых фрагмента, где каждый из двух или более конъюгируемых фрагментов связан с другой неприродной аминокислотой. В некоторых случаях два или более конъюгируемых фрагмента конъюгированы с одним и тем же полипептидом IL-10 (например, представленным либо в виде функционально активного мономера IL-10, либо в виде функционально активного димера IL-10). В других случаях каждый из двух или более конъюгируемых фрагментов конъюгирован с другим полипептидом IL-10 в пределах димера IL-10. В дополнительных случаях конъюгат IL-10 содержит три, четыре, пять, шесть или более конъюгируемых фрагментов, где каждый из конъюгируемых фрагментов связан с другой неприродной аминокислотой. В таких случаях два полипептида IL-10 в пределах димера характеризуются неравномерным распределением конъюгируемых фрагментов, например один полипептид IL-10 имеет один конъюгируемый фрагмент, тогда как другой полипептид IL-10 имеет два или более конъюгируемых фрагмента.

[282] В некоторых случаях конъюгат IL-10 содержит два или более конъюгируемых фрагмента. В некоторых случаях каждый из двух или более конъюгируемых фрагментов связан с неприродной аминокислотой в одном и том же положении остатка в пределах соответствующего мономера IL-10. В других случаях каждый из двух или более конъюгируемых фрагментов связан с неприродной аминокислотой, расположенной в другом положении остатка в пределах димера IL-10.

[283] В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента по сути не влияет на димеризацию полипептида IL-10.

[284] В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента, кроме того, существенно не влияет на связывание димера IL-10 с IL-10R.

[285] В некоторых вариантах осуществления местоположение конъюгируемого фрагмента ухудшает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или меньше. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 90%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 80%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 70%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 60%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 50%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 40%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 30%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 20%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 10%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 5%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 2%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента нарушает передачу сигнала с участием IL-10R на менее чем 1%. В некоторых случаях местоположение конъюгируемого фрагмента существенно не нарушает передачу сигнала с участием L-10R.

[286] В дополнительных случаях местоположение конъюгируемого фрагмента не нарушает передачу сигнала с участием IL-10R.

[287] В некоторых случаях конъюгат IL-10 характеризуется увеличенным периодом полужизни в плазме крови. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови сравнивают с периодом полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 90 минут, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 18 часов, 24 часа, 36 часов, 48 часов, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 14 дней, 21 день, 28 дней, 30 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 90 минут или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 2 часа или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 3 часа или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 4 часа или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 5 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 6 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 10 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 12 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 18 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 24 часа или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 36 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 48 часов или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 3 дня или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 4 дня или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 5 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 6 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 7 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 10 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 12 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 14 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 21 день или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 28 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях увеличенный период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 составляет по меньшей мере 30 дней или является более продолжительным, чем период полужизни в плазме крови конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа.

[288] В некоторых вариантах осуществления также в данном документе описан комплекс IL-10/IL-10R, содержащий модифицированный димер IL-10, содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту, и IL-10R, где модифицированный димер IL-10 характеризуется увеличенным периодом полужизни в плазме крови по сравнению с периодом полужизни в плазме крови белка IL-10 дикого типа. В некоторых случаях модифицированный димер IL-10 дополнительно содержит конъюгируемый фрагмент, ковалентно присоединенный по меньшей мере к одной неприродной аминокислоте.

[289] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 характеризуется периодом полужизни в плазме крови, при котором обеспечивается возможность пролиферации и/или увеличения количества инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL), T-клеток, B-клеток, натуральных киллерных клеток, макрофагов, нейтрофилов, дендритных клеток, тучных клеток, эозинофилов, базофилов или CD4+ или CD8+ T-клеток.

[290] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 вводят субъекту. В некоторых вариантах осуществления вводимый субъекту конъюгат IL-10 характеризуется сниженной токсичностью по сравнению с токсичностью белка IL-10 дикого типа, вводимого второму субъекту. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 характеризуется сниженной токсичностью, которая снижена в по меньшей мере 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз или более по сравнению с димером IL-10 дикого типа. В некоторых случаях сниженная токсичность снижена на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или больше по сравнению с белком IL-10 дикого типа.

[291] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 вводят субъекту. В некоторых вариантах осуществления вводимый субъекту конъюгат IL-10 не обуславливает возникновение нежелательных явлений 3-й или 4-й степени. В некоторых вариантах осуществления вводимый субъекту конъюгат IL-10 характеризуется сниженной частотой возникновения или тяжестью нежелательных явлений 3-й или 4-й степени по сравнению с частотой возникновения или тяжестью нежелательных явлений 3-й или 4-й степени, обусловленных белком IL-10 дикого типа, вводимого второму субъекту. Иллюстративные нежелательные явления 3-й или 4-й степени включают анемию, лейкопению, тромбоцитопению, повышенный уровень ALT, анорексию, артралгию, боль в пояснице, озноб, диарею, дислипидемию, утомляемость, лихорадку, гриппоподобные симптомы, гипоальбуминемию, повышенный уровень липазы, реакцию в месте инъекции, миальгию, тошноту, ночную потливость, прурит, высыпание, эритематозную сыпь, пятнисто-папулезную сыпь, трансаминит, рвоту и слабость.

[292] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 снижает частоту возникновения нежелательных явлений 3-й или 4-й степени у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят белок IL-10 дикого типа. В некоторых случаях конъюгат IL-10 снижает тяжесть нежелательных явлений 3-й или 4-й степени у субъекта на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или приблизительно 100% по сравнению со вторым субъектом, которому вводят белок IL-10 дикого типа.

[293] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10, который описан в данном документе, характеризуется сниженной аффинностью к IL-10R по сравнению с аффинностью конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа к IL-10R. В некоторых вариантах осуществления аффинность конъюгата IL-10 к IL-10R по сравнению с аффинностью конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа к IL-10R снижается на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 30%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 70%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 95%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях снижение аффинности составляет приблизительно 100%.

[294] В некоторых вариантах осуществления снижение аффинности конъюгата IL-10 по сравнению с конъюгатом IL-10 дикого типа или белком IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 3-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 7-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 9-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 200-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 400-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях снижение аффинности является более чем 1000-кратным.

[295] В некоторых случаях конъюгат IL-10 не взаимодействует с IL-10R. В некоторых случаях конъюгат IL-10 имеет приблизительно такое же значение аффинности к IL-10R, как и значение аффинности IL-10 дикого типа к IL-10R.

[296] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10, который описан в данном документе, характеризуется повышенной аффинностью к IL-10R по сравнению с аффинностью конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа к IL-10R. В некоторых вариантах осуществления аффинность конъюгата IL-10 к IL-10R по сравнению с аффинностью конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа к IL-10R увеличивается на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 10%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 20%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 30%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 40%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 50%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 60%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 70%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 80%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 90%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 95%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 99%. В некоторых случаях повышение аффинности составляет приблизительно 100%. В некоторых вариантах осуществления повышение аффинности конъюгата IL-10 по сравнению с конъюгатом IL-10 дикого типа или белком IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 1-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 2-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 3-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 4-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 5-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 6-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 7-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 8-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 9-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 10-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 30-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 50-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 100-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 200-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 300-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 400-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 500-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является приблизительно 1000-кратным. В некоторых случаях повышение аффинности является более чем 1000-кратным.

[297] В некоторых случаях сигнальную действенность IL-10R, опосредованную IL-10, измеряют по EC50. В некоторых вариантах осуществления EC50 конъюгата IL-10 снижается по сравнению с EC50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение EC50 конъюгата IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 10%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 20%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 30%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 40%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 50%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 60%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 70%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 80%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 90%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 95%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 99%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 100%.

[298] В некоторых вариантах осуществления снижение EC50 конъюгата IL-10 по сравнению с конъюгатом IL-10 дикого типа или белком IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 снижается в более чем 1000 раз.

[299] В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 является приблизительно такой же, как и EC50 белка IL-10 дикого типа.

[300] В некоторых случаях конъюгат IL-10, который описан в данном документе, характеризуется повышенной EC50 по сравнению с EC50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа при активации сигнального пути с помощью IL-10R. В некоторых вариантах осуществления повышение EC50 конъюгата IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 10%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 20%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 30%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 40%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 50%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 60%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 70%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 80%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 90%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 95%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 99%. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 100%.

[301] В некоторых вариантах осуществления повышение EC50 конъюгата IL-10 по сравнению с EC50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях EC50 конъюгата IL-10 повышается в более чем 1000 раз.

[302] В некоторых случаях сигнальную действенность IL-10R, опосредованную IL-10, измеряют по ED50. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10, который описан в данном документе, характеризуется сниженной ED50 по сравнению с ED50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления снижение ED50 конъюгата IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 10%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 20%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 30%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 40%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 50%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 60%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 70%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 80%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 90%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 95%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 99%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается на приблизительно 100%.

[303] В некоторых вариантах осуществления снижение ED50 конъюгата IL-10 по сравнению с ED50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 снижается в более чем 1000 раз.

[304] В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 является приблизительно такой же, как и ED50 белка IL-10 дикого типа.

[305] В некоторых случаях конъюгат IL-10, который описан в данном документе, характеризуется повышенной ED50 по сравнению с ED50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления повышение ED50 конъюгата IL-10 составляет приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% или более 99%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 10%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 20%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 30%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 40%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 50%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 60%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 70%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 80%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 90%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 95%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 99%. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается на приблизительно 100%.

[306] В некоторых вариантах осуществления повышение ED50 конъюгата IL-10 по сравнению с ED50 конъюгата IL-10 дикого типа или белка IL-10 дикого типа является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 1 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 2 раза. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 3 раза. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 4 раза. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 5 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 6 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 7 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 8 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 9 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 10 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 30 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 50 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 100 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 200 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 300 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 400 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 500 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в приблизительно 1000 раз. В некоторых случаях ED50 конъюгата IL-10 повышается в более чем 1000 раз.

Природные и неприродные аминокислоты

[307] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан аминокислотный остаток в пределах модифицированного полипептида IL-10 или конъюгата IL-10, который подвергнут мутации в лизин, цистеин, гистидин, аргинин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, серин, треонин или тирозин до связывания (или осуществления реакции) с конъюгируемым фрагментом. Например, боковая цепь лизина, цистеина, гистидина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, серина, треонина или тирозина может связываться с конъюгируемым фрагментом, описанным в данном документе. В некоторых случаях аминокислотный остаток подвергнут мутации в цистеин, лизин или гистидин. В некоторых случаях аминокислотный остаток подвергнут мутации в цистеин. В некоторых случаях аминокислотный остаток подвергнут мутации в лизин. В некоторых случаях аминокислотный остаток подвергнут мутации в гистидин. В некоторых случаях аминокислотный остаток подвергнут мутации в тирозин. В некоторых случаях аминокислотный остаток подвергнут мутации в триптофан. В некоторых случаях аминокислотный остаток расположен проксимальнее N- или C-конца, на N- или C-конце или в положении внутреннего остатка. В некоторых случаях аминокислотный остаток представляет собой N- или С-концевой остаток, и мутация обеспечивает замену на цистеин или лизин. В некоторых случаях аминокислотный остаток расположен проксимально по отношению к N- или С-концевому остатку (например, в пределах 50, 40, 30, 20 или 10 остатков от N- или С-концевого остатка), и мутация обеспечивает замену на цистеин или лизин.

[308] В некоторых случаях аминокислотный остаток добавляют к N- или С-концевому остатку, т. e. полипептид IL-10 содержит дополнительный аминокислотный остаток либо на N-, либо на C-конце, и дополнительный аминокислотный остаток представляет собой цистеин или лизин. В некоторых случаях дополнительный аминокислотный остаток представляет собой цистеин. В некоторых случаях дополнительная аминокислота конъюгирована с конъюгируемым фрагментом.

[309] В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток, описанный в данном документе (например, в пределах полипептида IL-10), подвергнут мутации с заменой на неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота не конъюгирована с конъюгируемым фрагментом. В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-10, описанный в данном документе, содержит неприродную аминокислоту, где IL-10 конъюгирован с белком, при этом точка присоединения не является неприродной аминокислотой.

[310] В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток, описанный в данном документе (например, в пределах полипептида IL-10), подвергнут мутации с заменой на неприродную аминокислоту до связывания с конъюгируемым фрагментом. В некоторых случаях мутация в неприродную аминокислоту предотвращает или минимизирует ответ иммунной системы на аутоантиген. Используемый в данном документе термин "неприродная аминокислота" относится к аминокислоте, отличной от 20 аминокислот, которые встречаются в природе в белке. Неограничивающие примеры неприродных аминокислот включают п-ацетил-L-фенилаланин, п-йод-L-фенилаланин, п-метоксифенилаланин, O-метил-L-тирозин, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргилфенилаланин, L-3-(2-нафтил)аланин, 3-метилфенилаланин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-допу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-борфенилаланин, O-пропаргилтирозин, L-фосфосерин, фосфоносерин, фосфонотирозин, п-бромфенилаланин, селеноцистеин, п-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, N6-[(2-азидоэтокси)карбонил]-L-лизин (AzK), N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин; неприродный аналог аминокислоты тирозина; неприродный аналог аминокислоты глутамина; неприродный аналог аминокислоты фенилаланина; неприродный аналог аминокислоты серина; неприродный аналог аминокислоты треонина; аминокислоту, замещенную алкилом, арилом, ацилом, азидо-, циано-, галогеном, гидразином, гидразидом, гидроксилом, алкенилом, алкинилом, эфиром, тиолом, сульфонилом, селено-, сложным эфиром, тиокислотой, боратом, боронатом, фосфо-, фосфоно-, фосфином, гетероциклом, еноном, имином, альдегидом, гидроксиламином, кето- или амино- или их комбинацию; аминокислоту с фотоактивируемым кросс-линкером; спин-меченую аминокислоту; флуоресцентную аминокислоту; связывающуюся с металлом аминокислоту; металлсодержащую аминокислоту; радиоактивную аминокислоту; фотоэкранированную и/или фотоизомеризуемую аминокислоту; аминокислоту, содержащую биотин или аналог биотина; кетосодержащую аминокислоту; аминокислоту, содержащую полиэтиленгликоль или полиэфир; аминокислоту, замещенную тяжелым атомом; химически расщепляемую или фоторасщепляемую аминокислоту; аминокислоту с удлиненной боковой цепью; аминокислоту, содержащую токсичную группу; замещенную сахаром аминокислоту; аминокислоту, содержащую углерод-связанный сахар; редокс-активную аминокислоту; а-гидроксисодержащую кислоту; аминотиокислоту; α,α-дизамещенную аминокислоту; β-аминокислоту; циклическую аминокислоту, отличную от пролина или гистидина, и ароматическую аминокислоту, отличную от фенилаланина, тирозина или триптофана.

[311] Другие примеры неприродных аминокислот включают N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), N6-(пропаргилэтокси)-L-лизин (PraK), N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин и N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин.

[312] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит селективную реакционноспособную группу или реакционноспособную группу для сайт-селективного мечения целевого полипептида. В некоторых случаях химия представляет собой биортогональную реакцию (например, биосовместимые и селективные реакции). В некоторых случаях химия представляет собой Cu(I)-катализируемую или "не требующую участия меди" алкин-азидную реакцию образования триазолов, лигирование по Штаудингеру, реакцию Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями (IEDDA), "фото-клик"-химию или опосредованный металлом процесс, такой как метатезис олефинов и кросс-сочетание Сузуки-Мияуры или Соногаширы.

[313] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота содержит фотореактивную группу, которая сшивается при облучении, например, УФ.

[314] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включает фотоэкранированную аминокислоту.

[315] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой пара-замещенное, мета-замещенное или орто-замещенное производное аминокислоты.

[316] В некоторых случаях неприродная аминокислота предусматривает п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), п-йод-L-фенилаланин, O-метил-L-тирозин, п-метоксифенилаланин, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргилфенилаланин, L-3-(2-нафтил)аланин, 3-метилфенилаланин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-допу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, L-фосфосерин, фосфоносерин, фосфонотирозин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин или изопропил-L-фенилаланин.

[317] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 3-аминотирозин, 3-нитротирозин, 3,4-дигидроксифенилаланин или 3-йодтирозин.

[318] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой фенилселеноцистеин.

[319] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой бензофенон-, кетон-, йодид-, метокси-, ацетил-, бензоил- или азид-содержащее производное фенилаланина.

[320] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой бензофенон-, кетон-, йодид-, метокси-, ацетил-, бензоил- или азид-содержащее производное лизина.

[321] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит ароматическую боковую цепь.

[322] В некоторых случаях неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь.

[323] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит азидогруппу.

[324] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота содержит N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), N6-(пропаргилэтокси)-L-лизин (PraK), N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(пропаргилэтокси)-L-лизин (PraK). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин.

[325] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит группу акцепторов Михаэля. В некоторых случаях группы акцепторов Михаэля включают ненасыщенный фрагмент, способный к образованию ковалентной связи в реакции 1,2-присоединения. В некоторых случаях группы акцепторов Михаэля включают электронодефицитные алкены или алкины. В некоторых случаях группы акцепторов Михаэля включают без ограничения альфа-, бета-ненасыщенные кетоны, альдегиды, сульфоксиды, сульфоны, нитрилы, имины или ароматические соединения.

[326] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой дегидроаланин.

[327] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит альдегидную или кетонную группу.

[328] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, содержащее альдегидную или кетонную группу.

[329] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, содержащее один или несколько атомов O, N, Se или S в бета-, гамма- или дельта-положении. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, содержащее атомы O, N, Se или S в гамма-положении.

[330] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, где атом N в эпсилон-положении заменен на атом кислорода.

[331] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, которое представляет собой не встречающийся в природе посттрансляционно модифицированный лизин.

[332] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой аминокислоту, содержащую боковую цепь, в которой шестой атом от альфа-положения содержит карбонильную группу. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой аминокислоту, содержащую боковую цепь, в которой шестой атом от альфа-положения содержит карбонильную группу, а пятый атом от альфа-положения представляет собой азот. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой аминокислоту, содержащую боковую цепь, в которой седьмой атом от альфа-положения представляет собой атом кислорода.

[333] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное серина, содержащее селен. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой селеносерин (2-амино-3-гидроселенопропановую кислоту). В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-оксопропил)амино)этил)селанил)пропановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит селен, где окисление селена приводит к образованию неприродной аминокислоты, содержащей алкен.

[334] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит циклооктинильную группу.

[335] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит трансциклооктенильную группу.

[336] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит норборненильную группу.

[337] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит циклопропенильную группу.

[338] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит диазириновую группу.

[339] В некоторых случаях неприродная аминокислота содержит тетразиновую группу.

[340] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, в котором азот боковой цепи карбамилирован. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой производное лизина, в котором азот боковой цепи ацилирован. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-Boc-N6-метиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-ацетиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой пирролизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-трифторацетиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(бензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(п-йодбензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(п-нитробензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-пролиллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(циклопентилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(циклопентанкарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(тетрагидрофуран-2-карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(3-этинилтетрагидрофуран-2-карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((проп-2-ин-1-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(2-азидоциклопентилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(2-нитробензилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-{[(2-циклооктинилокси)карбонил]амино}гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(2-аминобут-3-иноил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-6-((2-аминобут-3-иноил)окси)гексановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(аллилоксикарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(бутенил-4-оксикарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(пентенил-5-оксикарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бут-3-ин-1-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((пент-4-ин-1-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(тиазолидин-4-карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-8-оксононановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-8-оксооктановую кислоту. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(2-оксоацетил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин.

[341] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-пропиониллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-бутириллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(бут-2-еноил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((спиро[2.3]гекс-1-ен-5-илметокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-(((4-(1-(трифторметил)циклопроп-2-ен-1-ил)бензил)окси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илметокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой цистеиниллизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((1-(6-нитробензо[d][1,3]диоксол-5-ил)этокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((2-(3-метил-3H-диазирин-3-ил)этокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((3-(3-метил-3H-диазирин-3-ил)пропокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((мета-нитробензилокси)N6-метилкарбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((бицикло[6.1.0]нон-4-ин-9-илметокси)карбонил)лизин. В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой N6-((циклогепт-3-ен-1-илокси)карбонил)-L-лизин.

[342] В некоторых случаях неприродная аминокислота представляет собой 2-амино-3-(((((бензилокси)карбонил)амино)метил)селанил)пропановую кислоту.

[343] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включена в полипептид IL-10 с помощью перепрофилированного стоп-кодона "амбер", "опал" или "охра".

[344] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включена в полипептид IL-10 с помощью кодона из 4 оснований.

[345] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включена в полипептид IL-10 с помощью перепрофилированного редко используемого смыслового кодона.

[346] В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота включена в полипептид IL-10 с помощью синтетического кодона, содержащего неприродную нуклеиновую кислоту.

Ортогональная пара синтетаза и tRNA

[347] В некоторых случаях неприродная аминокислота включена в полипептид IL-10 с помощью встречающейся в природе синтетазы. В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин с помощью организма, который является ауксотрофным по одной или нескольким аминокислотам. В некоторых вариантах осуществления синтетазы, соответствующие ауксотрофной аминокислоте, способны загружать соответствующую tRNA неприродной аминокислотой. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота представляет собой селеноцистеин или его производное. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота представляет собой селенометионин или его производное. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота представляет собой ароматическую аминокислоту, где ароматическая аминокислота включает арилгалогенид, такой как йодид. В вариантах осуществления неприродная аминокислота структурно подобна ауксотрофной аминокислоте.

Конъюгируемые фрагменты

[348] В определенных вариантах осуществления в данном документе раскрыты конъюгируемые фрагменты, которые связаны с полипептидом IL-10, описанным в данном документе. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент представляет собой молекулу, которая нарушает взаимодействие IL-10 с его рецептором. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент представляет собой любую молекулу, которая при связывании с IL-10 позволяет конъюгату IL-10 модулировать иммунный ответ. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент связан с IL-10 посредством ковалентной связи. В некоторых случаях IL-10, описанный в данном документе, присоединен к конъюгируемому фрагменту с помощью триазольной группы. В некоторых случаях IL-10, описанный в данном документе, присоединен к конъюгируемому фрагменту с помощью дигидропиридазиновой или пиридазиновой группы. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает водорастворимый полимер. В других случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает белок или его связывающий фрагмент. В дополнительных случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает пептид. В дополнительных случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает нуклеиновую кислоту. В дополнительных случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает малую молекулу. В дополнительных случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает биоконъюгат (например, агонист TLR, такой как агонист TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 или TLR9; или синтетический лиганд, такой как Pam3Cys, CFA, MALP2 , Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, поли I:C, поли A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA или флагеллин). В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент увеличивает время полужизни в сыворотке крови и/или улучшает стабильность. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент снижает взаимодействие цитокина с одним или несколькими доменами или субъединицами рецептора цитокина. В дополнительных случаях конъюгируемый фрагмент блокирует взаимодействие IL-10 с одним или несколькими доменами или субъединицами IL-10 с его когнатным(-и) рецептором(-ами). В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10, описанные в данном документе, содержат несколько конъюгируемых фрагментов. В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент присоединен к неприродной или природной аминокислоте в полипептиде IL-10. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 содержит конъюгируемый фрагмент, присоединенный к природной аминокислоте. В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 присоединен к неприродной аминокислоте в пептиде цитокина. В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент присоединен к N- или C-концевой аминокислоте полипептида IL-10. В данном документе раскрыты различные комбинации сайтов, например, первый конъюгируемый фрагмент присоединен к неприродной или природной аминокислоте в полипептиде IL-10, а второй конъюгируемый фрагмент присоединен к N- или C-концевой аминокислоте полипептида IL-10. В некоторых вариантах осуществления один конъюгируемый фрагмент присоединен к нескольким остаткам полипептида IL-10 (например, в петле). В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент присоединен как к N-концевой, так и к C-концевой аминокислотам полипептида IL-10.

Водорастворимые полимеры

[349] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгируемый фрагмент представляет собой водорастворимый полимер. В некоторых случаях водорастворимый полимер является непептидным, нетоксическим и биологически совместимым. Как используется в данном документе, вещество считается биосовместимым, если положительные эффекты, связанные с применением этого вещества отдельно или с другим веществом (например, активным средством, таким как фрагмент IL-10) в сочетании с живыми тканями (например, при введении пациенту), превосходят любые вредные эффекты согласно оценке клинициста, например врача, токсиколога или специалиста по клиническим разработкам. Кроме того, в некоторых случаях водорастворимый полимер является неиммуногенным. В некоторых случаях вещество считается неиммуногенным, если предполагаемое применение вещества in vivo не вызывает нежелательный иммунный ответ (например, антителообразование) или, если иммунный ответ возникает, то такой ответ не считается клинически значимым или важным по оценке клинициста, например врача, токсиколога или специалиста по клинической разработке.

[350] В некоторых случаях водорастворимый полимер характеризуется наличием от приблизительно 2 до приблизительно 300 концов. Иллюстративные водорастворимые полимеры включают без ограничения поли(алкиленгликоли), такие как полиэтиленгликоль ("PEG"), поли(пропиленгликоль) ("PPG"), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля и т. п., поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт) (PVA), полиакриламид (PAAm), поли(N-(2-гидроксипропил)метакриламид) (PHPMA), полиметилакриламид (PDAAm), полифосфазен, полиоксазолины ("POZ") (которые описаны в WO 2008/106186), поли(N-акрилоилморфолин) и комбинации любых из вышеперечисленных.

[351] В некоторых случаях водорастворимый полимер не ограничен конкретной структурой. В некоторых случаях водорастворимый полимер является линейным (например, кэппированным на конце, например, алкокси-PEG или бифункциональный PEG), разветвленным или многолучевым (например, раздвоенный PEG или PEG, присоединенный к ядру полиола), характеризуется дендритным (или звездчатым) строением, каждый с одной или несколькими разрушаемыми связями или без них. Более того, внутренняя структура водорастворимого полимера может быть организована в виде любого количества различных повторяющихся паттернов и может быть выбрана из группы, состоящей из гомополимера, чередующегося сополимера, статистического сополимера, блок-сополимера, чередующегося триполимера, статистического триполимера и блок-триполимера.

[352] В некоторых вариантах осуществления W в любом из конъюгатов IL-10, описанных в данном документе, таком как любые конъюгаты IL-10, предусматривающее формулу (II), формулу (III), формулу (IV) или формулу (V), представляет собой линейную или разветвленную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления W представляет собой линейную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления W представляет собой разветвленную группу PEG. В некоторых вариантах осуществления W представляет собой метокси-PEG-группу. В некоторых вариантах осуществления метокси-PEG-группа является линейной или разветвленной. В некоторых вариантах осуществления метокси-PEG-группа является линейной. В некоторых вариантах осуществления метокси-PEG-группа является разветвленной.

[353] В некоторых вариантах осуществления средневесовая молекулярная масса водорастворимого полимера в конъюгате IL-10 составляет от приблизительно 100 дальтонов до приблизительно 150000 дальтонов. Иллюстративные диапазоны включают, например, значения средневесовой молекулярной массы в диапазоне от более 5000 дальтонов до приблизительно 100000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 6000 дальтонов до приблизительно 90000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 85000 дальтонов, в диапазоне от более 10000 дальтонов до приблизительно 85000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 20000 дальтонов до приблизительно 85000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 53000 дальтонов до приблизительно 85000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 25000 дальтонов до приблизительно 120000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 29000 дальтонов до приблизительно 120000 дальтонов, в диапазоне от приблизительно 35000 дальтонов до приблизительно 120000 дальтон и в диапазоне от приблизительно 40000 дальтонов до приблизительно 120000 дальтонов.

[354] Иллюстративные значения средневесовой молекулярной массы водорастворимого полимера включают значения, составляющие приблизительно 100 дальтонов, приблизительно 200 дальтонов, приблизительно 300 дальтонов, приблизительно 400 дальтонов, приблизительно 500 дальтонов, приблизительно 600 дальтонов, приблизительно 700 дальтонов, приблизительно 750 дальтонов, приблизительно 800 дальтонов, приблизительно 900 дальтонов, приблизительно 1000 дальтонов, приблизительно 1500 дальтонов, приблизительно 2000 дальтонов, приблизительно 2200 дальтонов, приблизительно 2500 дальтонов, приблизительно 3000 дальтонов, приблизительно 4000 дальтонов, приблизительно 4400 дальтонов, приблизительно 4500 дальтонов, приблизительно 5000 дальтонов, приблизительно 5500 дальтонов, приблизительно 6000 дальтонов, приблизительно 7000 дальтонов, приблизительно 7500 дальтонов, приблизительно 8000 дальтонов, приблизительно 9000 дальтонов, приблизительно 10000 дальтонов, приблизительно 11000 дальтонов, приблизительно 12000 дальтонов, приблизительно 13000 дальтонов, приблизительно 14000 дальтонов, приблизительно 15000 дальтонов, приблизительно 20000 дальтонов, приблизительно 22500 дальтонов, приблизительно 25000 дальтонов, приблизительно 30000 дальтонов, приблизительно 35000 дальтонов, приблизительно 40000 дальтонов, приблизительно 45000 дальтонов, приблизительно 50000 дальтонов, приблизительно 55000 дальтонов, приблизительно 60000 дальтонов, приблизительно 65000 дальтонов, приблизительно 70000 дальтонов и приблизительно 75000 дальтонов. Также можно применять разветвленные варианты водорастворимого полимера (например, разветвленный водорастворимый полимер с молекулярным весом 40000 дальтонов, состоящий из двух полимеров с молекулярным весом 20000 дальтонов), имеющие общий молекулярный вес любого из вышеперечисленных. В одном или нескольких вариантах осуществления конъюгат не будет содержать каких-либо фрагментов, представляющих собой PEG, присоединенных, непосредственно или опосредованно, к PEG, имеющему средневесовую молекулярную массу менее чем приблизительно 6000 дальтонов.

[355] Как правило, PEG будут содержать ряд мономеров (OCH₂CH₂) [или мономеров (CH₂CH₂O), в зависимости от того, как определяется PEG]. Применяемое в данном документе количество повторяющихся звеньев обозначается индексом "n" в "(OCH₂CH₂)_n". Таким образом, значение (n) обычно попадает в один или несколько из следующих диапазонов: от 2 до приблизительно 3400, от приблизительно 100 до приблизительно 2300, от приблизительно 100 до приблизительно 2270, от приблизительно 136 до приблизительно 2050, от приблизительно 225 до приблизительно 1930, от приблизительно 450 до приблизительно 1930, от приблизительно 1200 до приблизительно 1930, от приблизительно 568 до приблизительно 2727, от приблизительно 660 до приблизительно 2730, от приблизительно 795 до приблизительно 2730, от приблизительно 795 до приблизительно 2730, от приблизительно 909 до приблизительно 2730 и от приблизительно 1200 до приблизительно 1900. Для любого данного полимера, для которого известна молекулярная масса, можно определить количество повторяющихся звеньев (т. е. "n"), разделив общую средневесовую молекулярную массу полимера на молекулярную массу повторяющегося мономера.

[356] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер представляет собой полимер, кэппированный на конце, то есть полимер, имеющий по меньшей мере один конец, кэппированный относительно инертной группой, такой как низшая C_1-6алкоксигруппа или гидроксильная группа. Когда полимер представляет собой PEG, например, можно применять метокси-PEG (обычно называемый mPEG), который является линейной формой PEG, где один конец полимера представляет собой метокси(-OCH₃)-группу, тогда как другой конец представляет собой гидроксил или другую функциональную группу, которая необязательно может быть химически модифицирована.

[357] В некоторых вариантах осуществления иллюстративные водорастворимые полимеры предусматривают без ограничения линейный или разветвленный дискретный PEG (dPEG) от Quanta Biodesign, Ltd; линейные, разветвленные или раздвоенные PEG от Nektar Therapeutics; линейные, разветвленные или Y-образные производные PEG от JenKem Technology.

[358] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-10, описанный в данном документе, конъюгирован с водорастворимым полимером, выбранным из поли(алкиленгликоли), с таким как полиэтиленгликоль ("PEG"), поли(пропиленгликоль) ("PPG"), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля и т. п., поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт) (PVA), полиакриламид (PAAm), полиметилакриламид (PDAAm), поли(N-(2-гидроксипропил)метакриламид) (PHPMA), полифосфазен, полиоксазолины ("POZ"), поли(N-акрилоилморфолин) и их комбинация. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PEG (например, пегилирован). В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PPG. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с POZ. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PVP.

[359] В некоторых случаях водорастворимый полимер предусматривает полиглицерин (PG). В некоторых случаях полиглицерин представляет собой гиперразветвленный PG (HPG) (например, как описано в Imran, et al. "Influence of architecture of high molecular weight linear and branched polyglycerols on their biocompatibility and biodistribution," Biomaterials 33:9135-9147 (2012), раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки). В других случаях полиглицерин представляет собой линейный PG (LPG). В дополнительных случаях полиглицерин представляет собой полуфункциональный PG, линейно-блочно-гиперразветвленный PG (например, как описано в Wurm et. Al., "Squaric acid mediated synthesis and biological activity of a library of linear and hyperbranched poly(glycerol)-protein conjugates," Biomacromolecules 13:1161-1171 (2012), раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки) или PG с функциональными боковыми цепями (например, как описано в Li, et. al., "Synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials for bioconjugation," Bioconjugate Chem. 20:780-789 (2009), раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки).

[360] В некоторых случаях полипептид IL-10, описанный в данном документе, конъюгирован с PG, например HPG, LPG, среднефункциональным PG, линейным гиперразветвленным блоксополимером PG или PG с функциональными группами в боковой цепи.

[361] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер представляет собой разрушаемую синтетическую альтернативу PEG. Иллюстративные альтернативы для разрушаемого синтетического PEG включают без ограничения поли[олиго(этиленгилколь)метилметакрилат] (POEGMA), производные PEG с модификацией основной цепи, созданные путем полимеризации телехелевых или функционализированных по двум концам макромономеров на основе PEG, производные PEG, содержащие сомономеры, содержащие разрушаемую связь, такие как поли[(этиленоксид)-ко-(метиленэтиленоксид)][P(EO-ко-MEO)], циклические кетенацетали, такие как 5,6-бензо-2-метилен-1,3-диоксепан (BMDO), 2-метилен-1,3-диоксепан (MDO) и 2-метилен-4-фенил-1,3-диоксолан (MPDL), сополимеризированный с OEGMA, или поли-(ε-капролактон)-привитый-поли(этиленоксид) (PCL-g-PEO).

[362] В некоторых случаях полипептид IL-10, описанный в данном документе, конъюгирован с альтернативой для разлагаемого синтетического PEG, такой как, например, POEGM; производные PEG с модификацией основной цепи, созданные путем полимеризации телехелевых или функционализированных по двум концам макромономеров на основе PEG; P(EO-ко-MEO), циклические кетенацетали, такие как BMDO, MDO и MPDL, сополимеризированный с OEGMA; или PCL-g-PEO.

[363] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер предусматривает поли(цвиттер-ионы). Иллюстративные поли(цвиттер-ионы) предусматривают без ограничения поли(сульфобетаинметакрилат) (PSBMA), поли(карбоксибетаинметакрилат) (PCBMA) и поли(2-метакрилоилоксиэтилфосфорилхолин) (PMPC). В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с поли(цвиттер-ионом), таким как PSBMA, PCBMA или PMPC.

[364] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер предусматривает поликарбонат. Иллюстративные поликарбонаты предусматривают без ограничения пентафторфенил-5-метил-2-оксо-1,3-диоксан-5-карбоксилат (MTC-OC₆F₅). В некоторых случаях полипептид IL-10, описанный в данном документе, конъюгирован с поликарбонатом, таким как MTC-OC₆F₅.

[365] В некоторых вариантах осуществления растворимый в воде полимер предусматривает полимерный гибрид, такой как, например, полимерный гибрид поликарбонат/PEG, конъюгат пептид/белок-полимер или содержащий гидроксил и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер (например, содержащий гидроксил и/или цвиттер-ионный дериватизированный PEG-полимер). В некоторых случаях полипептид IL-10, описанный в данном документе, конъюгирован с полимерным гибридом, таким как полимерный гибрид поликарбонат/PEG, конъюгат пептид/белок-полимер или содержащий гидроксил и/или цвиттер-ионный дериватизированный полимер (например, содержащий гидроксил и/или цвиттер-ионный дериватизированный PEG-полимер).

[366] В некоторых случаях водорастворимый полимер предусматривает полисахарид. Иллюстративные полисахариды предусматривают без ограничения декстран, полисиаловую кислоту (PSA), гиалуроновую кислоту (HA), амилозу, гепарин, гепарансульфат (HS), декстрин или гидроксиэтилкрахмал (HES). В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с полисахаридом. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с декстраном. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PSA. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с HA. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с амилозой. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с гепарином. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с HS. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с декстрином. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с HES.

[367] В некоторых случаях водорастворимый полимер предусматривает гликан. Иллюстративные классы гликанов предусматривают N-связанные гликаны, O-связанные гликаны, гликолипиды, O-GlcNAc и гликозаминогликаны. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с гликаном. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с N-связанными гликанами. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с O-связанными гликанами. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с гликолипидами. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с O-GlcNAc. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с гликозаминогликанами.

[368] В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер предусматривает полимер полиоксазолина. Полимер полиоксазолина представляет собой линейный синтетический полимер и, как и PEG, характеризуется низкой полидисперсностью. В некоторых случаях полимер полиоксазолин представляет собой полидисперсный полимер полиоксазолин, имеющий среднюю молекулярную массу. В некоторых случаях средняя молекулярная масса полимера полиоксазолина полимера составляет, например, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 10000, 12000, 20000, 35000, 40000, 50000, 60000, 100000, 200000, 300000, 400000 или 500000 Да. В некоторых случаях полимер полиоксазолина предусматривает поли(2-метил-2-оксазолин) (PMOZ), поли(2-этил-2-оксазолин) (PEOZ) или поли(2-пропил-2-оксазолин) (PPOZ). В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с полимером полиоксазолином. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PMOZ. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PEOZ. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с PPOZ.

[369] В некоторых случаях водорастворимый полимер предусматривает полимер на основе полиакриловой кислоты. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с полимером на основе полиакриловой кислоты.

[370] В некоторых случаях водорастворимый полимер предусматривает полиамин. Полиамин представляет собой органический полимер, содержащий две или более первичные аминогруппы. В некоторых вариантах осуществления полиамин предусматривает разветвленный полиамин, линейный полиамин или циклический полиамин. В некоторых случаях полиамин представляет собой низкомолекулярный линейный полиамин. Иллюстративные полиамины включают путресцин, кадаверин, спермидин, спермин, этилендиамин, 1,3-диаминопропан, гексаметилендиамин, тетраэтилметилендиамин и пиперазин. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с полиамином. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с путресцином, кадаверином, спермидином, спермином, этилендиамином, 1,3-диаминопропаном, гексаметилендиамином, тетраэтилметилендиамином или пиперазином.

[371] В некоторых случаях водорастворимый полимер описан в патентах США №№ 7744861, 8273833 и 7803777. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с линкером, описанным в патентах США №№ 7744861, 8273833 или 7803777.

Липиды

[372] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгируемый фрагмент представляет собой липид. В некоторых случаях липид представляет собой жирную кислоту. В некоторых случаях жирная кислота представляет собой насыщенную жирную кислоту. В других случаях жирная кислота представляет собой ненасыщенную жирную кислоту. Иллюстративные жирные кислоты включают без ограничения жирные кислоты, содержащие от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых случаях липид связывается с одним или несколькими белками сыворотки крови, тем самым повышая стабильность в сыворотке крови и/или время полужизни в сыворотке крови.

[373] В некоторых вариантах осуществления липид конъюгирован с полипептидом IL-10, описанным в данном документе. В некоторых случаях липид представляет собой жирную кислоту, например насыщенную жирную кислоту или ненасыщенную жирную кислоту. В некоторых случаях жирная кислота содержит от приблизительно 6 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 20 атомов углерода, от приблизительно 6 до приблизительно 18 атомов углерода, от приблизительно 20 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 26 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 24 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 22 атомов углерода, от приблизительно 12 до приблизительно 20 атомов углерода или от приблизительно 12 до приблизительно 18 атомов углерода. В некоторых случаях жирная кислота содержит приблизительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 26 атомов углерода в длину. В некоторых случаях жирная кислота предусматривает капроновую кислоту (гексановую кислоту), энантовую кислоту (гептановую кислоту), каприловую кислоту (октановую кислоту), пеларгоновую кислоту (нонановую кислоту), каприновую кислоту (декановую кислоту), ундециловую кислоту (ундекановую кислоту), лауриновую кислоту (додекановую кислоту), тридециловую кислоту (тридекановую кислоту), миристиновую кислоту (тетрадекановую кислоту), пентадециловую кислоту (пентадекановую кислоту), пальмитиновую кислоту (гексадекановую кислоту), маргариновую кислоту (гептадекановую кислоту), стеариновую кислоту (октадекановую кислоту), нонадециловую кислоту (нонадекановую кислоту), арахидиновую кислоту (эйкозановую кислоту), генейкозиловую кислоту (генейкозановую кислоту), бегеновую кислоту (докозановую кислоту), трикозиловую кислоту (трикозановую кислоту), лигноцериновую кислоту (тетракозановую кислоту), пентакозиловую кислоту (пентакозановую кислоту) или церотовую кислоту (гексакозановую кислоту).

[374] В некоторых вариантах осуществления липидный конъюгат IL-10 повышает стабильность в сыворотке крови и/или время полужизни в сыворотке крови.

Белки

[375] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгируемый фрагмент представляет собой белок или его связывающий фрагмент. Иллюстративные белки включают альбумин, трансферрин или транстиретин. В некоторых случаях белок или его связывающий фрагмент предусматривают антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых случаях конъюгат IL-10 предусматривает белок или его связывающий фрагмент. В некоторых случаях конъюгат IL-10, содержащий белок или его связывающий фрагмент, характеризуется увеличенным временем полужизни в сыворотке крови и/или повышенной стабильностью. В некоторых случаях конъюгат IL-10, содержащий белок или его связывающий фрагмент, характеризуется сниженной степенью взаимодействия IL-10 с одной или несколькими субъединицами IL-10R. В дополнительных случаях белок или его связывающий фрагмент блокирует взаимодействие IL-10 с одной или несколькими субъединицами IL-10R.

[376] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой альбумин. Альбумин представляет собой семейство водорастворимых глобулярных белков. Обычно он обнаруживается в плазме крови, составляя приблизительно 55-60% от всех белков плазмы крови. Человеческий сывороточный альбумин (HSA) представляет собой полипептид из 585 аминокислот, в котором третичная структура разделена на три домена: домен I (аминокислотные остатки 1-195), домен II (аминокислотные остатки 196-383) и домен III (аминокислотные остатки 384-585). Каждый домен дополнительно содержит сайт связывания, который способен обратимо или необратимо взаимодействовать с эндогенными лигандами, такими как длинно- и среднецепочечные жирные кислоты, билирубин или гемин, или экзогенными соединениями, такими как гетероциклические или ароматические соединения.

[377] В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с альбумином. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с человеческим сывороточным альбумином (HSA). В дополнительных случаях полипептид IL-10 конъюгирован с функциональным фрагментом альбумина.

[378] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой трансферрин. Трансферрин представляет собой полипептид из 679 аминокислот, который имеет размер приблизительно 80 кДа и содержит два сайта связывания Fe³⁺, один из которых находится в N-концевом домене, а другой находится в C-концевом домене. В некоторых случаях человеческий трансферрин характеризуется временем полужизни, составляющим приблизительно 7-12 дней.

[379] В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с трансферрином. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с человеческим трансферрином. В дополнительных случаях полипептид IL-10 конъюгирован с функциональным фрагментом трансферрина.

[380] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой транстиретин (TTR). Транстиретин представляет собой транспортный белок, находящийся в сыворотке крови и спинномозговой жидкости, который транспортирует тиреоидный гормон тироксин (T₄) и ретинол-связывающий белок, связанный с ретинолом.

[381] В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с транстиретином (посредством одного из его концов или посредством внутреннего шарнирного участка). В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с функциональным фрагментом транстиретина.

[382] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой антитело или его связывающие фрагменты. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент, мышиное антитело или его связывающий фрагмент, химерное антитело или его связывающий фрагмент, моноклональное антитело или его связывающий фрагмент, моновалентный Fab', бивалентный Fab₂, F(ab)'₃-фрагменты, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантитело, миниантитело, наноантитело, триантитело, тетраантитело, гумаантитело, дисульфид-стабилизированный белок Fv (dsFv), однодоменное антитело (sdAb), Ig NAR, верблюжье антитело или его связывающий фрагмент, биспецифическое антитело или его связывающий фрагмент или их химически модифицированное производное.

[383] В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает scFv, бис-scFv, (scFv)₂, dsFv или sdAb. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает scFv. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает бис-scFv. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает (scFv)₂. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает dsFv. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает sdAb.

[384] В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает Fc-часть антитела, например IgG, IgA, IgM, IgE или IgD. В некоторых случаях фрагмент предусматривает Fc-часть IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄).

[385] В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с гуманизированным антителом или его связывающим фрагментом, мышиным антителом или его связывающим фрагментом, химерным антителом или его связывающим фрагментом, моноклональным антителом или его связывающим фрагментом, моновалентным Fab', бивалентным Fab₂, F(ab)'₃-фрагментами, одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантителом, миниантителом, наноантителом, триантителом, тетраантителом, гумаантителом, дисульфид-стабилизированным белком Fv (dsFv), однодоменным антителом (sdAb), Ig NAR, верблюжьим антителом или его связывающим фрагментом, биспецифическим антителом или его связывающим фрагментом или их химически модифицированным производным. В дополнительных случаях полипептид IL-10 конъюгирован с Fc-частью антитела. В дополнительных случаях полипептид IL-10 конъюгирован с Fc-частью IgG (например, IgG₁, IgG₃ или IgG₄).

[386] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-10 конъюгирован с водорастворимым полимером (например, PEG) и антителом или его связывающим фрагментом. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент, мышиное антитело или его связывающий фрагмент, химерное антитело или его связывающий фрагмент, моноклональное антитело или его связывающий фрагмент, моновалентный Fab', бивалентный Fab₂, F(ab)'₃-фрагменты, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), бис-scFv, (scFv)₂, диантитело, миниантитело, наноантитело, триантитело, тетраантитело, гумаантитело, дисульфид-стабилизированный белок Fv (dsFv), однодоменное антитело (sdAb), Ig NAR, верблюжье антитело или его связывающий фрагмент, биспецифическое антитело или его связывающий фрагмент или их химически модифицированное производное. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают scFv, бис-scFv, (scFv)₂, dsFv или sdAb. В некоторых случаях антитело или его связывающие фрагменты предусматривают scFv. В некоторых случаях антитело или его связывающий фрагмент направляет конъюгат IL-10 к представляющей интерес целевой клетке, а водорастворимый полимер повышает его стабильность и/или время полужизни в сыворотке крови.

[387] В некоторых случаях один или несколько конъюгатов полипептида IL-10 и водорастворимого полимера (например, PEG) дополнительно связаны с антителом или его связывающими фрагментами. В некоторых случаях соотношение конъюгата IL-10 и антитела составляет приблизительно 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1 или 12:1. В некоторых случаях соотношение конъюгата IL-10 и антитела составляет приблизительно 1:1. В других случаях соотношение конъюгата IL-10 и антитела составляет приблизительно 2:1, 3:1 или 4:1. В дополнительных случаях соотношение конъюгата IL-10 и антитела составляет приблизительно 6:1 или выше.

[388] В некоторых вариантах осуществления один или несколько конъюгатов полипептида IL-10 и водорастворимого полимера (например, PEG) непосредственно связаны с антителом или его связывающими фрагментами. В других случаях конъюгат IL-10 опосредованно связан с антителом или его связывающими фрагментами посредством линкера. Иллюстративные линкеры включают гомобифункциональные линкеры, гетеробифункциональные линкеры, линкеры на основе малеимида, бесследные линкеры, саморасщепляющиеся линкеры, спейсеры и т.п.

[389] В некоторых вариантах осуществления антитело или его связывающие фрагменты прямо или опосредованно связаны с частью полипептида IL-10 в конъюгате полипептида IL-10 и водорастворимого полимера (например, PEG). В таких случаях сайт конъюгации антитела с полипептидом IL-10 представляет собой сайт, который не будет препятствовать связыванию полипептида IL-10 с IL-10R. В дополнительных случаях сайт конъюгации антитела с полипептидом IL-10 представляет собой сайт, который частично блокирует связывание полипептида IL-10 с IL-10R. В других вариантах осуществления антитело или его связывающие фрагменты прямо или опосредованно связаны с частью водорастворимого полимера в конъюгате полипептида IL-10 и водорастворимого полимера (например, PEG).

Пептиды

[390] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе конъюгируемый фрагмент представляет собой пептид. В некоторых случаях пептид представляет собой неструктурированный пептид. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с пептидом. В некоторых случаях конъюгат IL-10, содержащий пептид, характеризуется увеличенным временем полужизни в сыворотке крови и/или повышенной стабильностью. В некоторых случаях конъюгат IL-10, содержащий пептид, характеризуется сниженным взаимодействием IL-10 с одной или несколькими субъединицами IL-10R. В дополнительных случаях пептид блокирует взаимодействие IL-10 с одной или несколькими субъединицами IL-10R.

[391] В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент представляет собой пептид XTEN™ (Amunix Operating Inc.), а модификация называется икстэнилированием. Икстэнилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей пептид XTEN™ (Amunix Operating Inc.), длинный неструктурированный гидрофильный пептид, содержащий в разном процентном соотношении шесть аминокислот: Ala, Glu, Gly, Ser и Thr. В некоторых случаях пептид XTEN™ выбирают на основе таких свойств как экспрессия, генетическая стабильность, растворимость, устойчивость к агрегации, увеличенное время полужизни, повышенная эффективность и/или повышенная активность in vitro в комбинации с представляющим интерес полипептидом. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с пептидом XTEN.

[392] В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент представляет собой богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP), а модификация называется гагилированием. Гагилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей богатый глицином аминокислотный гомополимер (HAP). В некоторых случаях полимер HAP содержит повторяющийся мотив (Gly₄Ser)_n (SEQ ID NO: 67) и иногда его длина составляет приблизительно 50, 100, 150, 200, 250, 300 или больше. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с HAP.

[393] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой полипептид PAS, и модификация называется пазилированием. Пазилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид PAS. Полипептид PAS представляет собой гидрофильный незаряженный полипептид, состоящий из остатков Pro, Ala и Ser. В некоторых случаях длина полипептида PAS составляет по меньшей мере приблизительно 100, 200, 300, 400, 500 или 600 аминокислот. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с полипептидом PAS.

[394] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой эластин-подобный полипептид (ELP), и модификация называется эппилированием. Эппилирование представляет собой генетическое слияние нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, с нуклеиновой кислотой, кодирующей эластин-подобный полипептид (ELP). ELP содержит повторяющийся мотив VPGxG (SEQ ID NO: 77), в котором x представляет собой любую аминокислоту за исключением пролина. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с ELP.

[395] В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент представляет собой пептид CTP. Пептид CTP содержит пептид из 30 или 31 аминокислотного остатка (FQSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ (SEQ ID NO: 78) или FQDSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ (SEQ ID NO: 79)), в котором S* обозначает сайты O-гликозилирования (OPKO). В некоторых случаях пептид CTP является генетически слитым с полипептидом IL-10. В некоторых случаях полипептид IL-10 конъюгирован с пептидом CTP.

[396] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-10 модифицирован путем глутамилирования. Глутамилирование (или полиглутамилирование) представляет собой обратимую посттрансляционную модификацию глутамата, при которой γ-карбоксильная группа глутамата образует подобную пептидной связь с аминогруппой свободного глутамата, в котором α-карбоксильная группа переходит в полиглутаматную цепь.

[397] В некоторых вариантах осуществления полипептид IL-10 модифицирован с помощью полимера желатин-подобного белка (GLK). В некоторых случаях полимер GLK содержит несколько повторов Gly-Xaa-Yaa, где Xaa и Yaa преимущественно содержат пролин и 4-гидроксипролин соответственно. В некоторых случаях полимер на основе GLK дополнительно содержит аминокислотные остатки Pro, Gly, Glu, Gln, Asn, Ser и Lys. В некоторых случаях длина полимера GLK составляет приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 остатков или больше.

Дополнительные конъюгируемые фрагменты

[398] В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает внеклеточный биомаркер. В некоторых случаях внеклеточный биомаркер представляет собой опухолевый антиген. В некоторых случаях иллюстративный внеклеточный биомаркер предусматривает CD19, PSMA, B7-H3, B7-H6, CD70, CEA, CSPG4, EGFRvIII, EphA3, EpCAM, EGFR, ErbB2 (HER2), FAP, FRα, GD2, GD3, Lewis-Y, мезотелин, Muc1, Muc16, ROR1, TAG72, VEGFR2, CD11, Gr-1, CD204, CD16, CD49b, CD3, CD4, CD8 и B220. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент связан или конъюгирован с IL-10. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент является генетически слитым, например, с N-концом или C-концом IL-10.

[399] В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает молекулу с посттрансляционной модификацией. В некоторых случаях примеры посттрансляционной модификации включают миристоилирование, пальмитоилирование, изопренилирование (или пренилирование) (например, фарнезилирование или геранилгеранилирование), глипирование, ацилирование (например, O-ацилирование, N-ацилирование, S-ацилирование), алкилирование (например, дополнительными алкильными группами, такими как метильные или этильные группы), амидирование, гликозилирование, гидроксилирование, йодирование, добавление нуклеотидов, окисление, фосфорилирование, сукцинилирование, сульфатирование, гликозилирование, карбамилирование, глутамилирование или дезамидирование. В некоторых случаях IL-10 модифицирован путем посттрансляционной модификации, такой как миристоилирование, пальмитоилирование, изопренилирование (или пренилирование) (например, фарнезилирование или геранилгеранилирование), глипирование, ацилирование (например, O-ацилирование, N-ацилирование, S-ацилирование), алкилирование (например, добавление алкильных групп, таких как метильные или этильные группы), амидирование, гликозилирование, гидроксилирование, йодирование, добавление нуклеотидов, окисление, фосфорилирование, сукцинилирование, сульфатирование, гликирование, карбамилирование, глутамилирование или дезамидирование.

Конъюгация

Линкеры

[400] В некоторых вариантах осуществления применимые функциональные реакционноспособные группы для конъюгирования или связывания конъюгируемого фрагмента с полипептидом IL-10, описанным в данном документе, предусматривают, например, нулевые линкеры или линкеры более высокого порядка. В некоторых случаях неприродная аминокислота, встроенная в описанный в данном документе интерлейкин, содержит функциональную реакционноспособную группу. В некоторых случаях линкер содержит функциональную реакционноспособную группу, которая реагирует с неприродной аминокислотой, встроенной в описанный в данном документе интерлейкин. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент содержит функциональную реакционноспособную группу, которая реагирует с неприродной аминокислотой, встроенной в описанный в данном документе интерлейкин. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент содержит функциональную реакционноспособную группу, которая реагирует с линкером (необязательно предварительно присоединенным к пептиду цитокина), описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит реакционноспособную группу, которая реагирует с природной аминокислотой в полипептиде IL-10, описанном в данном документе. В некоторых случаях линкеры более высокого порядка предусматривают бифункциональные линкеры, такие как гомобифункциональные линкеры или гетеробифункциональные линкеры. Иллюстративные гомобифункциональные линкеры включают без ограничения реагент Ломанта, представляющий собой дитиобис(сукцинимидилпропионат) DSP, 3'3'-дитиобис(сульфосукцинимидилпропионат (DTSSP), дисукцинимидилсуберат (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберат (BS), дисукцинимидилтартрат (DST), дисульфосукцинимидилтартрат (сульфо-DST), этиленгликобис(сукцинимидилсукцинат) (EGS), дисукцинимидилглутарат (DSG), N,N'-дисукцинимидилкарбонат (DSC), диметиладипимидат (DMA), диметилпимелимидат (DMP), диметилсуберимидат (DMS), диметил-3,3'-дитиобиспропионимидат (DTBP), 1,4-ди-3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо)бутан (DPDPB), бисмалеимидогексан (BMH), арилгалогенид-содержащее соединение (DFDNB), такое как, например, 1,5-дифтор-2,4-динитробензол или 1,3-дифтор-4,6-динитробензол, 4,4'-дифтор-3,3'-динитрофенилсульфон (DFDNPS), бис-[β-(4-азидосалициламидо)этил]дисульфид (BASED), формальдегид, глутаральдегид, 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир, дигидразид адипиновой кислоты, карбогидразид, о-толуидин, 3,3'-диметилбензидин, бензидин, α,α'-п-диаминодифенил, дийод-п-ксилолсульфоновую кислоту, N,N'-этилен-бис(йодацетамид) или N,N'-гексаметилен-бис(йодацетамид).

[401] В некоторых вариантах осуществления бифункциональный линкер предусматривает гетеробифункциональный линкер. Иллюстративный гетеробифункциональный линкер включает без ограничения аминореактивные и сульфгидрильные кросс-линкеры, такие как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (sPDP), длинноцепочечный N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (LC-sPDP), водорастворимый длинноцепочечный N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (сульфо-LC-sPDP), сукцинимидилоксикарбонил-α-метил-α-(2-пиридилдитио)толуол (sMPT), сульфосукцинимидил-6-[α-метил-α-(2-пиридилдитио)толуамидо]гексаноат (сульфо-LC-sMPT), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (sMCC), сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-sMCC), сложный эфир м-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимида (MBs) сложный эфир м-малеимидобензоил-N-гидроксисульфосукцинимида (сульфо-MBs), N-сукцинимидил(4-йодактеил)аминобензоат (sIAB), сульфосукцинимидил(4-йодактеил)аминобензоат (сульфо-sIAB), сукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (sMPB), сульфосукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (сульфо-sMPB), сложный эфир N-(γ-малеимидобутирилокси)сукцинимида (GMBs), сложный эфир N-(γ-малеимидобутирилокси)сульфосукцинимида (сульфо-GMBs), сукцинимидил-6-((йодацетил)амино)гексаноат (sIAX), сукцинимидил-6-[6-(((йодацетил)амино)гексаноил)амино]гексаноат (sIAXX), сукцинимидил-4-(((йодацетил)амино)метил)циклогексан-1-карбоксилат (sIAC), сукцинимидил-6-(((((4-йодацетил)амино)метил)циклогексан-1-карбонил)амино)гексаноат (sIACX), п-нитрофенилйодацетат (NPIA), карбонил-реактивные и сульфгидрил-реактивные кросс-линкеры, такие как гидразид 4-(4-N-малеимидофенил)масляной кислоты (MPBH), 4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилгидразид-8 (M₂C₂H), 3-(2-пиридилдитио)пропионилгидразид (PDPH), аминореактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как N-гидроксисукцинимидил-4-азидосалициловая кислота (NHs-AsA), N-гидроксисульфосукцинимидил-4-азидосалициловая кислота (сульфо-NHs-AsA), сульфосукцинимидил-(4-азидосалициламидо)гексаноат (сульфо-NHs-LC-AsA), сульфосукцинимидил-2-(п-азидосалициламидо)этил-1,3'-дитиопропионат (sAsD), N-гидроксисукцинимидил-4-азидобензоат (HsAB), N-гидроксисульфосукцинимидил-4-азидобензоат (сульфо-HsAB), N-сукцинимидил-6-(4'-азидо-2'-нитрофениламино)гексаноат (sANPAH), сульфосукцинимидил-6-(4'-азидо-2'-нитрофениламино)гексаноат (сульфо-sANPAH), N-5-азидо-2-нитробензоилоксисукцинимид (ANB-NOs), сульфосукцинимидил-2-(м-азидо-о-нитробензамидо)-этил-1,3'-дитиопропионат (sAND), N-сукцинимидил-4-(4-азидофенил)-1,3'-дитиопропионат (sADP), N-сульфосукцинимидил-(4-азидофенил)-1,3'-дитиопропионат (сульфо-sADP), сульфосукцинимидил-4-(п-азидофенил)бутират (сульфо-sAPB), сульфосукцинимидил-2-(7-азидо-4-метилкумарин-3-ацетамид)этил-1,3'-дитиопропионат (sAED), сульфосукцинимидил-7-азидо-4-метилкумарин-3-ацетат (сульфо-sAMCA), п-нитрофенилдиазопируват (ρNPDP), п-нитрофенил-2-диазо-3,3,3-трифторпропионат (PNP-DTP), сульфгидрил-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как 1-(п-азидосалициламидо)-4-(йодацетамидо)бутан (AsIB), N-[4-(п-азидосалициламидо)бутил]-3'-(2'-пиридилдитио)пропионамид (APDP), бензофенон-4-йодацетамид, бензофенон-4-малеимид, карбонил-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как п-азидобензоилгидразид (ABH), карбоксилат-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как 4-(п-азидосалициламидо)бутиламин (AsBA) и аргинин-реактивные и фотореактивные кросс-линкеры, такие как п-азидофенилглиоксаль (APG).

[402] В некоторых случаях реакционноспособная функциональная группа предусматривает нуклеофильную группу, которая реагирует с электрофильной группой, присутствующей на связывающем фрагменте (например, на конъюгируемом фрагменте или на IL-10). Иллюстративные электрофильные группы включают карбонильные группы, такие как альдегидная, кетонная, карбонильная группа карбоновой кислоты, сложного эфира, амида, енона, ацилгалогенида или ангидрида кислоты. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная функциональная группа представляет собой альдегидную группу. Иллюстративные нуклеофильные группы включают гидразидную, оксимную, амино, гидразинную, тиосемикарбазонную, гидразинкарбоксилатную и арилгидразидную. В некоторых вариантах осуществления неприродная аминокислота, встроенная в описанный в данном документе интерлейкин, содержит электрофильную группу.

[403] В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой расщепляемый линкер. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой дипептидный линкер. В некоторых вариантах осуществления дипептидный линкер представляет собой валин-цитруллин (Val-Cit), фенилаланин-лизин (Phe-Lys), валин-аланин (Val-Ala) и валин-лизин (Val-Lys). В некоторых вариантах осуществления дипептидный линкер представляет собой валин-цитруллин.

[404] В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой пептидный линкер, содержащий, например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или больше аминокислот. В некоторых случаях пептидный линкер содержит не более 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или меньше аминокислот. В дополнительных случаях пептидный линкер содержит приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот.

[405] В некоторых вариантах осуществления линкер содержит саморасщепляющийся линкерный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления саморасщепляющийся линкерный фрагмент включает п-аминобензиловый спирт (PAB), п-аминобензилоксикарбонил (PABC) или их производные или аналоги. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит дипептидный линкерный фрагмент и саморасщепляющийся линкерный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления саморасщепляющийся линкерный фрагмент является таким, как описанный в патенте США № 9089614 и заявке WIPO № WO2015038426,раскрытие каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[406] В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой глюкуронид. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой расщепляемый кислотой линкер. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый кислотой линкер представляет собой гидразин. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер представляет собой восстанавливаемый линкер.

[407] В некоторых вариантах осуществления линкер содержит малеимидную группу. В некоторых случаях малеимидную группу также называют малеимидным спейсером. В некоторых случаях малеимидная группа дополнительно содержит капроновую кислоту, образующую малеимидокапроил (mc). В некоторых случаях линкер содержит малеимидокапроил (mc). В некоторых случаях линкер представляет собой малеимидокапроил (mc). В других случаях малеимидная группа включает малеимидометильную группу, такую как сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (sMCC) или сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-sMCC), описанные выше.

[408] В некоторых вариантах осуществления малеимидная группа представляет собой самостабилизирующийся малеимид. В некоторых случаях самостабилизирующийся малеимид задействует диаминопропионовую кислоту (DPR) для включения основной аминогруппы, смежной с малеимидом, для обеспечения внутримолекулярного катализа гидролиза тиосукцинимидного кольца с исключением тем самым участия малеимида в реакции элиминирования посредством обратной реакции Михаэля. В некоторых случаях самостабилизирующийся малеимид представляет собой малеимидную группу, описанную в Lyon, et al., "Self-hydrolyzing maleimides improve the stability and pharmacological properties of antibody-drug conjugates," Nat. Biotechnol. 32(10):1059-1062 (2014), раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки. В некоторых случаях линкер предусматривает самостабилизирующийся малеимид. В некоторых случаях линкер представляет собой самостабилизирующийся малеимид.

Химия конъюгации

[409] Различные реакции конъюгации применяют для конъюгации линкеров, конъюгирующих фрагментов и неприродных аминокислот, встроенных в пептиды цитокина, описанные в данном документе. Такие реакции конъюгации часто совместимы с водными условиями, такие как "биоортогональные" реакции. В некоторых вариантах осуществления реакции конъюгации опосредуются химическими реагентами, такими как катализаторы, свет или реакционноспособные химические группы, обнаруженные на линкерах, конъюгируемых фрагментах или в неприродных аминокислотах. В некоторых вариантах осуществления реакции конъюгации опосредуются ферментами. В некоторых вариантах осуществления применяемая в данном документе реакция конъюгации описана в Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123, раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления применяемая в данном документе реакция конъюгации описана в Chen, X.; Wu. Y-W. Org. Biomol. Chem. 2016, 14, 5417, раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки.

[410] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию 1,3-диполярного циклоприсоединения. В некоторых вариантах осуществления реакция 1,3-диполярного циклоприсоединения включает реакцию азида и фосфина ("клик"-реакцию). В некоторых вариантах осуществления реакция конъюгации катализируется медью. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации приводит к получению пептида цитокина, содержащего линкер или конъюгирующий фрагмент, присоединенный посредством триазола. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию азида с напряженным олефином. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации включает реакцию азида с напряженным алкином. В некоторых вариантах осуществления описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает реакцию азида с циклоалкином, например DBCO.

[411] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает реакцию, указанную на схеме 1.

где X представляет собой положение в конъюгате IL-10, содержащем неприродную аминокислоту, такую как в любой из SEQ ID NO: 3-10. В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент предусматривает водорастворимый полимер. В некоторых вариантах осуществления реакционноспособная группа предусматривает алкин или азид.

[412] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает реакцию, указанную на схеме 2.

где X представляет собой положение в конъюгате IL-10, содержащем неприродную аминокислоту, такую как в любой из последовательности под SEQ ID NO: 3-10.

[413] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает реакцию, указанную на схеме 3.

где X представляет собой положение в конъюгате IL-10, содержащем неприродную аминокислоту, такую как в любой из последовательности под SEQ ID NO: 3-10.

[414] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации предусматривает реакцию, указанную на схеме 4.

где X представляет собой положение в конъюгате IL-10, содержащем неприродную аминокислоту, такую как в любой из SEQ ID NO: 3-10.

[415] В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, описанная в данном документе реакция конъюгации включает в себя реакцию циклоприсоединения между фрагментом, представляющим собой азид, таким как фрагмент, содержащийся в белке, содержащем аминокислотный остаток, полученный из N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизина (AzK), и напряженным циклоалкином, таким как полученный из DBCO, который представляет собой химический фрагмент, содержащий дибензоциклооктиновую группу. Группы PEG, содержащие фрагмент, представляющий собой DBCO, являются коммерчески доступными или могут быть получены способами, известными средним специалистам в данной области. Иллюстративные реакции показаны на схемах 5a-b и 6a-b.

[416] Посредством реакций конъюгации, таких как "клик"-реакция, описанных в данном документе, можно получать один региоизомер или смесь региоизомеров. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 2:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1,5:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1,2:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет приблизительно 1,1:1. В некоторых случаях соотношение региоизомеров составляет более 1:1.

[417] В одном аспекте в данном документе предусмотрен способ получения конъюгата IL-10, который описан в данном документе, включающий

осуществление реакции полипептида IL-10, содержащего неприродную аминокислоту формулы ,

где полипептид IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в полипептиде IL-10 заменен неприродной аминокислотой, положение X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку, положение X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку, и положение X указывает положение аминокислоты, в котором происходит замещение неприродной аминокислотой, с mPEG-DBCO формулы

где n является таким, что mPEG-DBCO содержит PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа или 60 кДа, с получением тем самым конъюгата IL-10.

[418] В дополнительном аспекте в данном документе предусмотрен способ получения конъюгата IL-10, который описан в данном документе, включающий

осуществление реакции полипептида IL-10, содержащего неприродную аминокислоту формулы , где полипептид IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в полипептиде IL-10 заменен неприродной аминокислотой, положение X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку, положение X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку, и положение X указывает положение аминокислоты, в котором происходит замещение неприродной аминокислотой, с mPEG-DBCO формулы

где n является таким, что mPEG-DBCO содержит PEG, имеющий молекулярную массу приблизительно 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа или 60 кДа, с получением тем самым конъюгата IL-10.

Получение полипептида IL-10

[419] В некоторых случаях конъюгаты IL-10, описанные в данном документе, содержащие либо мутацию с заменой на природную аминокислоту, либо мутацию с заменой на неприродную аминокислоту, получают рекомбинантным путем или синтезируют химическим путем. В некоторых случаях конъюгаты IL-10, описанные в данном документе, получают рекомбинантным путем, например, либо в системе клеток-хозяев, либо в бесклеточной системе.

[420] В некоторых случаях конъюгаты IL-10 получают рекомбинантным путем с применением системы клеток-хозяев. В некоторых случаях клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку (например, клетку млекопитающего, клетки насекомых, дрожжевые клетки или растительную клетку), прокариотическую клетку (например, грамположительную бактерию или грамотрицательную бактерию). В некоторых случаях эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего. В некоторых случаях клетка-хозяин млекопитающего является стабильной линией клеток или линией клеток, которая содержит встроенный представляющий интерес генетический материал в свой собственный геном и обладает способностью экспрессировать продукт генетического материала после многих поколений клеточного деления. В других случаях клетка-хозяин млекопитающего представляет собой транзиентную линию клеток или линию клеток, которая не содержит встроенный представляющий интерес генетический материал в свой собственный геном и не обладает способностью экспрессировать продукт генетического материала после многих поколений клеточного деления.

[421] Иллюстративные клетки-хозяева млекопитающих включают линию клеток 293T, линию клеток 293A, линию клеток 293FT, клетки 293F, клетки 293 H, клетки A549, клетки MDCK, клетки CHO DG44, клетки CHO-S, клетки CHO-K1, клетки Expi293F™, линию клеток Flp-In™ T-REx™ 293, линию клеток Flp-In™-293, линию клеток Flp-In™-3T3, линию клеток Flp-In™-BHK, линию клеток Flp-In™-CHO, линию клеток Flp-In™-CV-1, линию клеток Flp-In™-Jurkat, клетки FreeStyle™ 293-F, клетки FreeStyle™ CHO-S, линию клеток GripTite™ 293 MSR, линию клеток GS-CHO, клетки HepaRG™, линию клеток T-REx™ Jurkat, клетки Per.C6, линию клеток T-REx™-293, линию клеток T-REx™-CHO и линию клеток T-REx™-HeLa.

[422] В некоторых вариантах осуществления эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина, являющуюся клеткой насекомого. Иллюстративные клетки-хозяева, представляющие собой клетки насекомого, предусматривают клетки S2 Drosophila, клетки Sf9, клетки Sf21, клетки High Five™ и клетки expresSF+®.

[423] В некоторых вариантах осуществления эукариотическая клетка-хозяин представляет собой дрожжевую клетку-хозяина. Иллюстративные дрожжевые клетки-хозяева включают штаммы дрожжей Pichia pastoris (K. phaffii), такие как GS115, KM71H, SMD1168, SMD1168H и X-33, и штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, такой как INVSc1.

[424] В некоторых вариантах осуществления эукариотическая клетка-хозяин представляет собой растительную клетку-хозяина. В некоторых случаях растительные клетки предусматривают клетку водоросли. Иллюстративные линии растительных клеток включают штаммы из Chlamydomonas reinhardtii 137c или Synechococcus elongatus PPC 7942.

[425] В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой прокариотическую клетку-хозяина. Иллюстративные прокариотические клетки-хозяева включают BL21, Mach1™, DH10B™, TOP10, DH5α, DH10Bac™, OmniMax™, MegaX™, DH12S™, INV110, TOP10F', INVαF, TOP10/P3, ccdB Survival, PIR1, PIR2, Stbl2™, Stbl3™ или Stbl4™.

[426] В некоторых случаях подходящие молекулы полинуклеиновой кислоты или векторы для получения полипептида IL-10, описанного в данном документе, включают любые подходящие векторы, полученные из либо эукариотического, либо прокариотического источника. Иллюстративные молекулы полинуклеиновой кислоты или векторы включают векторы, полученные из источника, относящегося к бактериям (например, E. coli), насекомым, дрожжам (например, Pichia pastoris, K. phaffii), водорослям или млекопитающим. Бактериальные векторы предусматривают, например, pACYC177, pASK75, ряд векторов pBAD, ряд векторов pBADM, ряд векторов pET, ряд векторов pETM, ряд векторов pGEX, pHAT, pHAT2, pMal-c2, pMal-p2, ряд векторов pQE, pRSET A, pRSET B, pRSET C, ряд pTrcHis2, pZA31-Luc, pZE21-MCS-1, pFLAG ATS, pFLAG CTS, pFLAG MAC, pFLAG Shift-12c, pTAC-MAT-1, pFLAG CTC или pTAC-MAT-2.

[427] Векторы насекомых предусматривают, например, pFastBac1, pFastBac DUAL, pFastBac ET, pFastBac HTa, pFastBac HTb, pFastBac HTc, pFastBac M30a, pFastBact M30b, pFastBac, M30c, pVL1392, pVL1393, pVL1393 M10, pVL1393 M11, pVL1393 M12, такие векторы FLAG, как pPolh-FLAG1 или pPolh-MAT 2, или такие векторы MAT, как pPolh-MAT1 или pPolh-MAT2.

[428] Дрожжевые векторы предусматривают, например, вектор Gateway^® pDEST™ 14, вектор Gateway^® pDEST™ 15, вектор Gateway^® pDEST™ 17, вектор Gateway^® pDEST™ 24, вектор Gateway^® pYES-DEST52, вектор доставки Gateway^® pBAD-DEST49, вектор pAO815 Pichia, вектор pFLD1 Pichia pastoris (K. phaffii), вектор pGAPZ A, B и C Pichia pastoris (K. phaffii), вектор pPIC3.5K Pichia, вектор pPIC6 A, B и C Pichia, вектор pPIC9K Pichia, pTEF1/Zeo, дрожжевой вектор pYES2, дрожжевой вектор pYES2/CT, дрожжевой вектор pYES2/NT A, B и C или дрожжевой вектор pYES3/CT.

[429] Векторы водорослей предусматривают, например, вектор pChlamy-4 или вектор MCS.

[430] Векторы млекопитающих предусматривают, например, векторы транзиентной экспрессии или векторы стабильной экспрессии. Иллюстративные векторы транзиентной экспрессии млекопитающих включают p3xFLAG-CMV 8, pFLAG-Myc-CMV 19, pFLAG-Myc-CMV 23, pFLAG-CMV 2, pFLAG-CMV 6a, b,c, pFLAG-CMV 5,1, pFLAG-CMV 5a, b,c, p3xFLAG-CMV 7,1, pFLAG-CMV 20, p3xFLAG-Myc-CMV 24, pCMV-FLAG-MAT1, pCMV-FLAG-MAT2, pBICEP-CMV 3 или pBICEP-CMV 4. Иллюстративные векторы стабильной экспрессии млекопитающих включают pFLAG-CMV 3, p3xFLAG-CMV 9, p3xFLAG-CMV 13, pFLAG-Myc-CMV 21, p3xFLAG-Myc-CMV 25, pFLAG-CMV 4, p3xFLAG-CMV 10, p3xFLAG-CMV 14, pFLAG-Myc-CMV 22, p3xFLAG-Myc-CMV 26, pBICEP-CMV 1 или pBICEP-CMV 2.

[431] В некоторых случаях для получения полипептида цитокина (например, IL-10), описанного в данном документе, используют бесклеточную систему. В некоторых случаях бесклеточная система содержит смесь цитоплазматических и/или ядерных компонентов из клетки и подходит для синтеза нуклеиновых кислот in vitro. В некоторых случаях в бесклеточной системе применяют компоненты прокариотических клеток. В других случаях в бесклеточной системе применяют компоненты эукариотических клеток. Синтез нуклеиновых кислот достигается в бесклеточной системе, например, на основе клетки дрозофилы, яйца Xenopus, архей или клеток HeLa. Иллюстративные бесклеточные системы включают систему на основе экстракта S30 E. coli, систему S30 E. coli T7 или PURExpress®, XpressCF и XpressCF+.

[432] Бесклеточные системы трансляции содержат разные компоненты, как, например, плазмиды, mRNA, ДНК, tRNA, синтетазы, факторы высвобождения, рибосомы, белки-шапероны, факторы инициации и элонгации трансляции, природные и/или неприродные аминокислоты и/или другие компоненты, применяемые для экспрессии белка. Такие компоненты необязательно модифицируют для повышения выхода, увеличения скорости синтеза, повышения соответствия белкового продукта или встраивания неприродных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления цитокины, описанные в данном документе, синтезированы с применением бесклеточных систем трансляции, описанных в US 8778631; US 2017/0283469; US 2018/0051065; US 2014/0315245 или US 8778631, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления бесклеточные системы трансляции включают модифицированные факторы высвобождения или даже удаление одного или нескольких факторов высвобождения из системы. В некоторых вариантах осуществления бесклеточные системы трансляции содержат пониженную концентрацию протеазы. В некоторых вариантах осуществления бесклеточные системы трансляции содержат модифицированные tRNA с переназначенными кодонами, применяемыми для кодирования неприродных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления синтетазы, описанные в данном документе, предназначенные для встраивания неприродных аминокислот, применяют в бесклеточных системах трансляции. В некоторых вариантах осуществления tRNA предварительно загружают неприродными аминокислотами с применением ферментативных или химических способов перед добавлением в бесклеточную систему трансляции. В некоторых вариантах осуществления компоненты для бесклеточной системы трансляции получают из модифицированных организмов, таких как модифицированные бактерии, дрожжи или другой организм.

[433] В некоторых вариантах осуществления полипептид цитокина (например, IL-10) получают в виде циркулярно пермутированной формы либо с помощью системы экспрессии хозяина, либо с помощью бесклеточной системы.

Получение полипептида IL-10, содержащего неприродную аминокислоту

[434] В настоящем изобретении можно использовать ортогональный или расширенный генетический код, в котором один или несколько конкретных кодонов, присутствующих в последовательности нуклеиновой кислоты полипептида цитокина (например, IL-10), предназначены для кодирования неприродной аминокислоты, чтобы ее можно было генетически встроить в цитокин (например, IL-10) с использованием ортогональной пары tRNA-синтетаза/tRNA. Ортогональная пара tRNA-синтетаза/tRNA способна загружать tRNA неприродной аминокислотой и способна встраивать эту неприродную аминокислоту в полипептидную цепь в ответ на кодон.

[435] В некоторых вариантах осуществления получают полинуклеотид, содержащий последовательность под SEQ ID NO: 76, при этом кодон замещен кодоном, который кодирует неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления получают полинуклеотид, содержащий последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 76, где полинуклеотид содержит кодон, который кодирует неприродную аминокислоту, где необязательно остатки T заменены остатками U. Полинуклеотид может кодировать любую из последовательностей IL-10, содержащую неприродную аминокислоту, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления последовательность характеризуется по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с SEQ ID NO: 76. Полинуклеотид может представлять собой ДНК, такую как плазмида, вектор экспрессии или интегрированная конструкция экспресии. Полинуклеотид может представлять собой РНК, такую как mRNA.

[436] В некоторых случаях кодон представляет собой амбер-кодон, охра-кодон, опал-кодон или квадруплетный кодон. В некоторых случаях кодон соответствует ортогональной tRNA, которую будут применять для переноса неприродной аминокислоты. В некоторых случаях кодон представляет собой амбер-кодон. В других случаях кодон представляет собой ортогональный кодон.

[437] В некоторых случаях кодон представляет собой квадруплетный кодон, который может декодироваться ортогональной рибосомой ribo-Q1. В некоторых случаях квадруплетный кодон является таким, который показан в Neumann, et al, "Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome," Nature, 464(7287): 441-444 (2010), раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки.

[438] В некоторых случаях кодон, применяемый в настоящем изобретении, представляет собой перекодированный кодон, например синонимичный кодон или редкий кодон, который заменен альтернативным кодоном. В некоторых случаях перекодированный кодон является таким, который описан в Napolitano, et al., "Emergent rules for codon choice elucidated by editing rare arginine codons in Escherichia coli," PNAS, 113(38): E5588-5597 (2016), раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки. В некоторых случаях перекодированный кодон является таким, как описано в Ostrov et al., "Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome," Science 353(6301): 819-822 (2016), раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки.

[439] В некоторых случаях используют неприродные нуклеиновые кислоты, что приводит к встраиванию одной или нескольких неприродных аминокислот в цитокин (например, IL-10). Иллюстративные неприродные нуклеиновые кислоты включают без ограничения урацил-5-ил, гипоксантин-9-ил (I), 2-аминоаденин-9-ил, 5-метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил- и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-пропил- и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинилурацил и цитозин, 6-азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген-, в частности 5-бром-, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин, а также 3-деазагуанин и 3-деазааденин. Определенные неприродные нуклеиновые кислоты, такие как 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2-замещенные пурины, N-6-замещенные пурины, O-6-замещенные пурины, 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил, 5-пропинилцитозин, 5-метилцитозин, те, которые повышают стабильность образования дуплекса, универсальные нуклеиновые кислоты, гидрофобные нуклеиновые кислоты, разнородные нуклеиновые кислоты, нуклеиновые кислоты с увеличенным размером, фторированные нуклеиновые кислоты, 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2-, N-6- и О-6-замещенные пурины, в том числе 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин, 5-метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил-, другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил- и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил, 5-галогенцитозин, 5-пропинил-(-C≡C-CH₃-)урацил, 5-пропинилцитозин-, другие алкинильные производные пиримидиновых нуклеиновых кислот, 6-азоурацил, 6-азоцитозин, 6-азотимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген-, 8-амино-, 8-тиол-, 8-тиоалкил-, 8-гидроксил- и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген- в частности 5-бром-, 5-трифторметил-, другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин, 7-метиладенин, 2-F-аденин, 2-аминоаденин, 8-азагуанин, 8-азааденин, 7-деазагуанин, 7-деaзaаденин, 3-деазагуанин, 3-деазааденин, трициклические пиримидины, феноксазинцитидин ([5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3H)-он), фенотиазинцитидин (1H-пиримидо[5,4-b][1,4]бензотиазин-2(3H)-он), G-зажимы, феноксазинцитидин (например, 9-(2-аминоэтокси)-H-пиримидо[5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3H)-он), карбазолцитидин(2H-пиримидо[4,5-b]индол-2-он), пиридоиндолцитидин(H-пиридо[3',2':4,5]пирроло[2,3-d]пиримидин-2-он), те, в которых пуриновое или пиримидиновое основание заменено другими гетероциклами, 7-деазааденин, 7-деазагуанозин, 2-аминопиридин, 2-пиридон, aзaцитозин, 5-бромцитозин, бромурацил, 5-хлорцитозин, хлорированный цитозин, циклоцитозин, цитозин-арабинозид, 5-фторцитозин, фторпиримидин, фторурацил, 5,6-дигидроцитозин, 5-йодцитозин, гидроксимочевина, йодурацил, 5-нитроцитозин, 5-бромурацил, 5-хлорурацил, 5-фторурацил и 5-йодурацил, 2-амино-аденин, 6-тиогуанин, 2-тиотимин, 4-тиотимин, 5-пропинилурацил, 4-тиоурацил, N4-этилцитозин, 7-деазагуанин, 7-деаза-8-aзaгуанин, 5-гидроксицитозин, 2'-дезоксиуридин, 2-амино-2'-дезоксиаденозин, и те, которые описаны в патентах США №№ 3687808; 4845205; 4910300; 4948882; 5093232; 5130302; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121; 5596091; 5614617; 5645985; 5681941; 5750692; 5763588; 5830653 и 6005096; WO 99/62923; Kandimalla et al., (2001) Bioorg. Med. Chem. 9:807-813; The Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858- 859; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; и Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke and Lebleu Eds., CRC Press, 1993, 273-288, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки. Дополнительные модификации оснований можно найти, например, в патенте США № 3687808; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; и Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289-302, Crooke and Lebleu ed., CRC Press, 1993, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[440] Неприродные нуклеиновые кислоты, содержащие различные гетероциклические основания и различные сахарные фрагменты (и аналоги сахаров), доступны в уровне техники, и нуклеиновые кислоты в некоторых случаях включают одно или несколько гетероциклических оснований, отличных от основных пяти компонентов-оснований встречающихся в природе нуклеиновых кислот. Например, гетероциклическое основание включает в некоторых случаях урацил-5-ильные, цитозин-5-ильные, аденин-7-ильные, аденин-8-ильные, гуанин-7-ильные, гуанин-8-ильные, 4-аминопирроло[2.3-d]пиримидин-5-ильные, 2-амино-4-оксопироло[2,3-d]пиримидин-5-ильные, 2-амино-4-оксопирроло[2.3-d]пиримидин-3-ильные группы, где пурины присоединены к сахарному фрагменту нуклеиновой кислоты через положение 9, пиримидины через положение 1, пирролопиримидины через положение 7 и пиразолопиримидины через положение 1.

[441] В некоторых вариантах осуществления аналоги нуклеотидов также модифицированы в фосфатном фрагменте. Модифицированные фосфатные фрагменты включают без ограничения фрагменты с модификацией в связи между двумя нуклеотидами и включают, например, фосфоротиоат, хиральный фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфотриэфир, аминоалкилфосфотриэфир, метил- и другие алкилфосфонаты, в том числе 3'-алкиленфосфонат и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, в том числе 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты. Следует понимать, что эти фосфатные или модифицированные фосфатные связи между двумя нуклеотидами образованы посредством 3'-5'-связи или 2'-5'-связи, и связь характеризуется инвертированной полярностью, такой как с 3'-5' на 5'-3' или с 2'-5' на 5'-2'. Также включены различные соли, смешанные соли и формы свободных кислот. В многочисленных патентах Соединенных Штатов Америки описаны получение и применение нуклеотидов, включающих модифицированные фосфаты, и они включают без ограничения, 3687808; 4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361 и 5625050, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[442] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеиновые кислоты включают 2',3'-дидезокси-2',3'-дидегидронуклеозиды (PCT/US2002/006460), 5'-замещенные производные ДНК и РНК (PCT/US2011/033961; Saha et al., J. Org Chem., 1995, 60, 788-789; Wang et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1999, 9, 885-890; и Mikhailov et al., Nucleosides & Nucleotides, 1991, 10(1-3), 339-343; Leonid et al., 1995, 14(3-5), 901-905; и Eppacher et al., Helvetica Chimica Acta, 2004, 87, 3004-3020; PCT/JP2000/004720; PCT/JP2003/002342; PCT/JP2004/013216; PCT/JP2005/020435; PCT/JP2006/315479; PCT/JP2006/324484; PCT/JP2009/056718; PCT/JP2010/067560) или 5'-замещенные мономеры, полученные в виде монофосфата с модифицированными основаниями (Wang et al., Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids, 2004, 23 (1 & 2), 317-337), раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[443] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеиновые кислоты включают модификации в 5'-положении и 2'-положении сахарного кольца (PCT/US94/02993), например 5'-CH₂-замещенные 2'-O-защищенные нуклеозиды (Wu et al., Helvetica Chimica Acta, 2000, 83, 1127-1143 и Wu et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 921-924). В некоторых случаях неприродные нуклеиновые кислоты включают нуклеозидные димеры с амидной связью, полученные для встраивания в олигонуклеотиды, где 3'-связанный нуклеозид в димере (от 5' к 3') содержит 2'-OCH₃ и 5'-(S)-CH₃ (Mesmaeker et al., Synlett, 1997, 1287-1290). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 2'-замещенные 5'-CH₂ (или O) модифицированные нуклеозиды (PCT/US92/01020). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-метиленфосфонатные мономеры ДНК и РНК, а также димеры (Bohringer et al., Tet. Lett., 1993, 34, 2723-2726; Collingwood et al., Synlett, 1995, 7, 703-705; и Hutter et al., Helvetica Chimica Acta, 2002, 85, 2777-2806). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-фосфонатные мономеры, имеющие 2'-замещение (US2006/0074035), и другие модифицированные 5'-фосфонатные мономеры (WO1997/35869). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-модифицированные метиленфосфонатные мономеры (EP614907 и EP629633). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать аналоги 5'- или 6'-фосфонатных рибонуклеозидов, содержащие гидроксильную группу в 5'- и/или 6'-положении (Chen et al., Phosphorus, Sulfur and Silicon, 2002, 777, 1783-1786; Jung et al., Bioorg. Med. Chem., 2000, 8, 2501-2509; Gallier et al., Eur. J. Org. Chem., 2007, 925-933; и Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19(8), 1029-1033). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать 5'-фосфонатные дезоксирибонуклеозидные мономеры и димеры, имеющие 5'-фосфатную группу (Nawrot et al., Oligonucleotides, 2006, 16(1), 68-82). Неприродные нуклеиновые кислоты могут включать нуклеозиды, имеющие 6'-фосфонатную группу, в которой 5'- или/и 6'-положение является незамещенным или замещенным тио-трет-бутильной группой (SC(CH₃)₃) (и ее аналогами); метиленаминогруппой (CH₂NH₂) (и ее аналогами) или цианогруппой (CN) (и ее аналогами) (Fairhurst et al., Synlett, 2001, 4, 467-472; Kappler et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 1030-1038; Kappler et al., J. Med. Chem., 1982, 25, 1179-1184; Vrudhula et al., J. Med. Chem., 1987, 30, 888-894; Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19, 1371-1377; Geze et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105(26), 7638-7640; и Hampton et al., J. Am. Chem. Soc, 1973, 95(13), 4404-4414). Раскрытие каждого из таких литературных источников включено в данный документ посредством ссылки.

[444] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеиновые кислоты также включают модификации сахарного фрагмента. В некоторых случаях нуклеиновые кислоты содержат один или несколько нуклеозидов, где сахарная группа была модифицирована. Такие нуклеозиды с модифицированным сахаром способны придавать повышенную стабильность в отношении нуклеаз, повышенную аффинность связывания или некоторые другие полезные биологические свойства. В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты содержат химически модифицированный фрагмент рибофуранозного кольца. Примеры химически модифицированных рибофуранозных колец включают без ограничения добавление замещающих групп (включая 5'- и/или 2'-замещающие группы, соединение мостиком двух атомов кольца с образованием бициклических нуклеиновых кислот (BNA), замену атома кислорода рибозильного кольца на S, N(R) или C(R₁)(R₂) (R=H, C₁-C₁₂алкил или защитную группу); и их комбинации. Примеры химически модифицированных сахаров можно найти в WO2008/101157, US2005/0130923 и WO2007/134181, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[445] В некоторых случаях модифицированная нуклеиновая кислота содержит модифицированные сахара или аналоги сахаров. Таким образом, в дополнение к рибозе и дезоксирибозе сахарный фрагмент может представлять собой пентозу, дезоксипентозу, гексозу, дезоксигексозу, глюкозу, арабинозу, ксилозу, ликсозу или циклопентильную группу, представляющую собой "аналог" сахара. Сахар может быть в пиранозильной или фуранозильной форме. Сахарный фрагмент может представлять собой фуранозид рибозы, дезоксирибозы, арабинозы или 2'-O-алкилрибозы, и сахар может быть присоединен к соответствующим гетероциклическим основаниям либо в [альфа], либо в [бета]-аномерной конфигурации. Модификации сахара включают без ограничения аналоги 2'-алкокси-РНК, аналоги 2'-амино-РНК, 2'-фтор-ДНК и 2'-алкокси- или химеры амино-РНК/ДНК. Например, модификация сахара может включать 2'-O-метилуридин или 2'-O-метилцитидин. Модификации сахара включают 2'-O-алкилзамещенные дезоксирибонуклеозиды и 2'-O-этиленгликоль-подобные рибонуклеозиды. Известно получение этих сахаров или аналогов сахаров и соответствующих "нуклеозидов", где такие сахара или аналоги присоединены к гетероциклическому основанию (основанию нуклеиновой кислоты). Модификации сахара также могут быть получены и объединены с другими модификациями.

[446] Модификации сахарного фрагмента включают природные модификации рибозы и дезоксирибозы, а также неприродные модификации. Модификации сахара включают без ограничения следующие модификации в 2'-положении: OH; F; O-, S- или N-алкил; O-, S- или N-алкенил; O-, S- или N-алкинил; или O-алкил-O-алкил, где алкил, алкенил и алкинил могут представлять собой замещенный или незамещенный C₁-C₁₀алкил или C₂-C₁₀алкенил и алкинил. 2'-Модификации сахара также включают без ограничения -O[(CH₂)_nO]_m CH₃, -O(CH₂)_nOCH₃, -O(CH₂)_nNH₂, -O(CH₂)_nCH₃, -O(CH₂)_nONH₂ и -O(CH₂)_nON[(CH₂)n CH₃)]₂, где n и m составляют от 1 до приблизительно 10.

[447] Другие модификации в 2'-положении включают без ограничения низший C₁-C₁₀алкил, замещенный низший алкил, алкарил, аралкил, O-алкарил, O-аралкил, SH, SCH₃, OCN, Cl, Br, CN, CF₃, OCF₃, SOCH₃, SO₂ CH₃, ONO₂, NO₂, N₃, NH₂, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, расщепляющую РНК группу, репортерную группу, интеркалятор, группу для улучшения фармакокинетических свойств олигонуклеотида или группу для улучшения фармакодинамических свойств олигонуклеотида, а также другие заместители с аналогичными свойствами. Аналогичные модификации также могут быть осуществлены в других положениях в сахаре, в частности в 3'-положении сахара в 3'-концевом нуклеотиде или в 2'-5'-связанных олигонуклеотидах и в 5'-положении 5'-концевого нуклеотида. Модифицированные сахара также включают сахара, которые предусматривают модификации в мостиковом атоме кислорода кольца, такие как CH₂ и S. Нуклеотиды с аналогами сахаров также могут содержать миметики сахаров, такие как циклобутильные фрагменты вместо пентофуранозильного сахара. Существуют многочисленные патенты Соединенных Штатов Америки, в которых описано получение таких структур модифицированных сахаров и в которых подробно изложен и конкретизирован диапазон модификаций оснований, такие как патенты США №№ 4981957; 5118800; 5319080; 5359044; 5393878; 5446137; 5466786; 5514785; 5519134; 5567811; 5576427; 5591722; 5597909; 5610300; 5627053; 5639873; 5646265; 5658873; 5670633; 4845205; 5130302; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121, 5596091; 5614617; 5681941 и 5700920, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[448] Примеры нуклеиновых кислот, имеющих модифицированные сахарные фрагменты, включают без ограничения нуклеиновые кислоты, содержащие замещающие группы, представляющие собой 5'-винильную, 5'-метильную (R или S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH₃ и 2'-O(CH₂)₂OCH₃. Заместитель в 2'-положении также может быть выбран из аллила, амино, азидо, тио, O-аллила, O-(C₁-C₁₀алкил), OCF₃, O(CH₂)₂SCH₃, O(CH₂)₂-O-N(R_m)(R_n) и O-CH₂-C(=O)-N(R_m)(R_n), где каждый R_m и R_n независимо представляет собой H или замещенный или незамещенный C₁-C₁₀алкил.

[449] В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, описанные в данном документе, включают одну или несколько бициклических нуклеиновых кислот. В определенных таких вариантах осуществления бициклическая нуклеиновая кислота содержит мостик между 4'- и 2'-атомами рибозильного кольца. В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, предусмотренные в данном документе, включают одну или несколько бициклических нуклеиновых кислот, где мостик содержит 4'-2'-бициклическую нуклеиновую кислоту. Примеры таких 4'-2'-бициклических нуклеиновых кислот включают без ограничения одну из формул: 4'-(CH₂)-O-2' (LNA); 4'-(CH₂)-S-2'; 4'-(CH₂)₂-O-2' (ENA); 4'-CH(CH₃)-O-2' и 4'-CH(CH₂OCH₃)-O-2' и их аналоги (см. патент США № 7399845); 4'-C(CH₃)(CH₃)-O-2' и ее аналоги (см. WO2009/006478, WO2008/150729, US2004/0171570, патент США № 7427672, Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 209, 74, 118-134 и WO2008/154401). Также см., например: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1-7; Oram et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США №№ 4849513; 5015733; 5118800; 5118802; 7053207; 6268490; 6770748; 6794499; 7034133; 6525191; 6670461 и 7399845; международные публикации №№ WO2004/106356, WO1994/14226, WO2005/021570, WO2007/090071 и WO2007/134181; публикации патентов США №№. US2004/0171570, US2007/0287831 и US2008/0039618; предварительные заявки на патенты США №№ 60/989574, 61/026995, 61/026998, 61/056564, 61/086231, 61/097787 и 61/099844; и международные заявки №№ PCT/US2008/064591, PCT US2008/066154, PCT US2008/068922 и PCT/DK98/00393; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[450] В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты включают связанные нуклеиновые кислоты. Нуклеиновые кислоты могут быть связаны вместе с применением любой связи между нуклеиновыми кислотами. Два основных класса групп, связывающих между собой нуклеиновые кислоты, определяются наличием или отсутствием атома фосфора. Типичные фосфорсодержащие связи между нуклеиновыми кислотами включают без ограничения фосфодиэфирные, фосфотриэфирные, метилфосфонатные, фосфорамидатные и фосфоротиоатные (P=S). Типичные не включающие фосфор группы, связывающие между собой нуклеиновые кислоты, включают без ограничения метиленметилимино (-CH₂-N(CH₃)-O-CH₂-), тиодиэфирную (-O-C(O)-S-), тионокарбаматную (-O-C(O)(NH)-S-); силоксановую (-O-Si(H)₂-O-) и N,N*-диметилгидразиновую (-CH₂-N(CH₃)-N(CH₃)). В определенных вариантах осуществления связи между нуклеиновыми кислотами, имеющие хиральный атом, можно получать в виде рацемической смеси, в виде отдельных энантиомеров, например алкилфосфонатов и фосфоротиоатов. Неприродные нуклеиновые кислоты могут содержать одну модификацию. Неприродные нуклеиновые кислоты могут содержать несколько модификаций в одном из фрагментов или между различными фрагментами.

[451] Модификации фосфата остова в нуклеиновой кислоте включают без ограничения метилфосфонат, фосфоротиоат, фосфорамидат (мостиковый или немостиковый), фосфотриэфир, фосфородитиоат, фосфодитиоат и боранофосфат и могут применяться в любой комбинации. Другие нефосфатные связи также можно применять.

[452] В некоторых вариантах осуществления модификации остова (например, метилфосфонатные, фосфоротиоатные, фосфорамидатные и фосфородитиоатные межнуклеотидные связи) могут придавать иммуномодулирующую активность модифицированной нуклеиновой кислоте и/или повышать ее стабильность in vivo.

[453] В некоторых случаях производное фосфора (или модифицированная фосфатная группа) присоединена к сахару или фрагменту аналога сахара и может представлять собой монофосфат, дифосфат, трифосфат, алкилфосфонат, фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфорамидат или т. п. Иллюстративные полинуклеотиды, содержащие модифицированные фосфатные связи или нефосфатные связи, можно найти в Peyrottes et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24: 1841-1848; Chaturvedi et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24:2318-2323; и Schultz et al., (1996) Nucleic Acids Res. 24:2966-2973; Matteucci, 1997, "Oligonucleotide Analogs: an Overview" в Oligonucleotides as Therapeutic Agents, (Chadwick and Cardew, ed.) John Wiley and Sons, New York, NY; Zon, 1993, "Oligonucleoside Phosphorothioates" в Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties, Humana Press, pp. 165-190; Miller et al., 1971, JACS 93:6657-6665; Jager et al., 1988, Biochem. 27:7247-7246; Nelson et al., 1997, JOC 62:7278-7287; патенте США № 5453496 и Micklefield, 2001, Curr. Med. Chem. 8: 1157-1179; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[454] В некоторых случаях модификация остова включает замену фосфодиэфирной связи альтернативным фрагментом, таким как анионная, нейтральная или катионная группа. Примеры таких модификаций включают анионную межнуклеозидную связь; модификацию фосфорамидата от N3' к P5'; боранофосфатную ДНК; проолигонуклеотиды; нейтральные межнуклеозидные связи, такие как метилфосфонаты; ДНК с амидной связью; метиленовые(метилимино) связи; формацетальные и тиоформацетальные связи; остовы, содержащие сульфонильные группы; морфолиновые олигонуклеотиды; пептидные нуклеиновые кислоты (PNA) и положительно заряженные дезоксирибонуклеиновые гуанидиновые (DNG) олигонуклеотиды (Micklefield, 2001, Current Medicinal Chemistry 8: 1157-1179, раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки). Модифицированная нуклеиновая кислота может содержать химерный или смешанный остов, предусматривающий одну или несколько модификаций, например, комбинацию фосфатных связей, такую как комбинация фосфодиэфирных и фосфоротиоатных связей.

[455] Заместители для фосфата включают, например, короткоцепочечные алкильные или циклоалкильные межнуклеозидные связи, смешанные гетероатомные и алкильные или циклоалкильные межнуклеозидные связи, или одну или несколько короткоцепочечных гетероатомных или гетероциклических межнуклеозидных связей. К ним относятся те, которые имеют морфолиновые связи (образованные частично из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматные остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфонамидные остовы; амидные остовы и другие, имеющие смешанные части компонентов N, O, S и CH₂. В многочисленных патентах Соединенных Штатов Америки раскрыты получение и применение таких типов фосфатных замещений, и они включают без ограничения патенты США №№ 5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 5264562; 5264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5610289; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439. Также следует понимать, что при замене нуклеотида можно заменять как сахарные, так и фосфатные фрагменты нуклеотида, например, посредством связи амидного типа (аминоэтилглицин) (PNA). В патентах Соединенных Штатов Америки №№ 5539082; 5714331 и 5719262 описаны получение и применение молекулы PNA, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки. См. также Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500. Также возможно связать другие типы молекул (конъюгатов) с нуклеотидами или аналогами нуклеотидов, чтобы усилить, например, поглощение клеткой. Конъюгаты могут быть химически связаны с нуклеотидом или аналогами нуклеотидов. Такие конъюгаты включают без ограничения липидные фрагменты, такие как холестериновый фрагмент (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), холиновую кислоту (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), простой тиоэфир, например гексил-S-тритилтиол (Manoharan et al., Ann. KY. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), тиохолестерин (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), алифатическую цепь, например додекандиоловые или ундециловые остатки (Saison-Behmoaras et al., EM5OJ, 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), фосфолипид, например ди-гексадецил-рац-глицерин или 1-ди-O-гексадецил-рац-глицеро-S-H-фосфонат триэтиламмония (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), цепь полиамина или полиэтиленгликоля (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973) или адамантануксусную кислоту (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), пальмитиловый фрагмент (Mishra et al., Biochem. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237) или октадециламиновый или гексиламинокарбонилоксихолестериновый фрагмент (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937). В многочисленных патентах Соединенных Штатов Америки описано получение таких конъюгатов, и они включают без ограничения патенты США №№ 4828979; 4948882; 5218105; 5525465; 5541313; 5545730; 5552538; 5578717, 5580731; 5580731; 5591584; 5109124; 5118802; 5138045; 5414077; 5486603; 5512439; 5578718; 5608046; 4587044; 4605735; 4667025; 4762779; 4789737; 4824941; 4835263; 4876335; 4904582; 4958013; 5082830; 5112963; 5214136; 5082830; 5112963; 5214136; 5245022; 5254469; 5258506; 5262536; 5272250; 5292873; 5317098; 5371241, 5391723; 5416203, 5451463; 5510475; 5512667; 5514785; 5565552; 5567810; 5574142; 5585481; 5587371; 5595726; 5597696; 5599923; 5599928 и 5688941. Раскрытие каждого из таких литературных источников включено в данный документ посредством ссылки.

[456] В некоторых случаях неприродные нуклеиновые кислоты дополнительно образуют неприродные пары оснований. Иллюстративные неприродные нуклеотиды, способные к образованию неприродной пары оснований ДНК или РНК (UBP) в условиях in vivo, включают без ограничения TAT1, dTAT1, 5FM, d5FM, TPT3, dTPT3, 5SICS, d5SICS, NaM, dNaM, CNMO, dCNMO и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды предусматривают

Иллюстративные неприродные пары оснований предусматривают (d)TPT3-(d)NaM; (d)5SICS-(d)NaM; (d)CNMO-(d)TAT1; (d)NaM-(d)TAT1; (d)CNMO-(d)TPT3 и (d)5FM-(d)TAT1.

[457] Другие примеры неприродных нуклеотидов, способных образовывать неприродные UBP, которые можно применять для получения конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе, можно найти в Dien et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:16115-16123; Feldman et al., J Am Chem Soc, 2017, 139:11427-11433; Ledbetter et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:758-765; Dhami et al., Nucleic Acids Res. 2014, 42:10235-10244; Malyshev et al., Nature, 2014, 509:385-388; Betz et al., J Am Chem Soc., 2013, 135:18637-18643; Lavergne et al., J Am Chem Soc. 2013, 135:5408-5419; и Malyshev et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:12005-12010; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды предусматривают

.

[458] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, которые могут быть использованы для получения конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе, могут быть получены из соединения формулы,

, где R₂ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, метокси, метантиола, метанселено, галогена, циано и азидо; и

волнистой линией указана связь с рибозилом или 2'-дезоксирибозилом, где 5'-гидроксигруппа рибозильного или 2'-дезоксирибозильного фрагмента находится в свободной форме или необязательно связана с монофосфатной, дифосфатной или трифосфатной группой, или включена в РНК или ДНК или в аналог РНК или аналог ДНК.

[459] В некоторых вариантах осуществления каждый X представляет собой атом углерода. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один X представляет собой атом углерода. В некоторых вариантах осуществления один X представляет собой атом углерода. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере два X представляют собой атомы углерода. В некоторых вариантах осуществления два X представляют собой атомы углерода. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один X представляет собой атом азота. В некоторых вариантах осуществления один X представляет собой атом азота. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере два X представляют собой атомы азота. В некоторых вариантах осуществления два X представляют собой атомы азота.

[460] В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой атом серы. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой атом кислорода. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой атом селена. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой вторичный амин.

[461] В некоторых вариантах осуществления E представляет собой атом серы. В некоторых вариантах осуществления E представляет собой атом кислорода. В некоторых вариантах осуществления Е представляет собой атом селена.

[462] В некоторых вариантах осуществления R₂ присутствует, если X представляет собой атом углерода. В некоторых вариантах осуществления R² отсутствует, если X представляет собой атом азота. В некоторых вариантах осуществления каждый R₂ в тех случаях, когда он присутствует, представляет собой атом водорода. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой алкил, такой как метил, этил или пропил. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой алкенил, такой как -CH₂=CH₂. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой алкинил, такой как этинил. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой метантиол. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой метанселено. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой галоген, такой как хлор, бром или фтор. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой циано. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой азид.

[463] В некоторых вариантах осуществления E представляет собой серу, Y представляет собой серу, и каждый X независимо представляет собой атом углерода или азота. В некоторых вариантах осуществления E представляет собой атом серы, Y представляет собой атом серы, и каждый X представляет собой атом углерода.

[464] В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, которые можно применять для получения конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе, могут быть получены из

В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, которые можно применять для получения конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе, включают , , , , , , , , , , и или их соли.

[465] В некоторых вариантах осуществления неприродная пара оснований генерирует неприродную аминокислоту, описанную в Dumas et al., "Designing logical codon reassignment - Expanding the chemistry in biology," Chemical Science, 6: 50-69 (2015), раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки.

[466] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) посредством синтетического кодона, содержащего неприродную нуклеиновую кислоту. В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин посредством ортогональной модифицированной пары синтетаза/tRNA. Такие ортогональные пары содержат неприродную синтетазу, которая способна загружать неприродную tRNA неприродной аминокислотой, при этом минимизируя загрузку а) других эндогенных аминокислот на неприродную tRNA и b) неприродных аминокислот на другие эндогенные tRNA. Такие ортогональные пары содержат tRNA, которые способны нести неприродную синтетазу, избегая при этом загрузки a) другими эндогенными аминокислотами посредством эндогенных синтетаз. В некоторых вариантах осуществления такие пары идентифицированы у различных организмов, таких как бактерии, дрожжи, археи или люди. В некоторых вариантах осуществления ортогональная пара синтетаза/tRNA содержит компоненты из одного организма. В некоторых вариантах осуществления ортогональная пара синтетаза/tRNA содержит компоненты из двух различных организмов. В некоторых вариантах осуществления ортогональная пара синтетаза/tRNA содержит компоненты, которые до модификации способствуют трансляции двух различных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную аланинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную аргининсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную аспарагинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную синтетазу аспарагиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную цистеинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную глутаминсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную синтетазу глутаминовой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированный аланин-глицин. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную гистидинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную лейцинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную изолейцинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную лизинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную метионинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную фенилаланинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную пролинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную серинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную треонинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную триптофансинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную тирозинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную валинсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная синтетаза представляет собой модифицированную фосфосеринсинтетазу. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA аланина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA аргинина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA аспарагина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA аспарагиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA цистеина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA глутамина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA глутаминовой кислоты. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированный аланин-глицин. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA гистидина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA лейцина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA изолейцина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA лизина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA метионина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA фенилаланина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA пролина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA серина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA треонина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA триптофана. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA тирозина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA валина. В некоторых вариантах осуществления ортогональная tRNA представляет собой модифицированную tRNA фосфосерина.

[467] В некоторых вариантах осуществления неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) посредством пары аминоацил(aaRS или RS)-tRNA-синтетаза-tRNA. Иллюстративные пары aaRS-tRNA включают без ограничения пары aaRS/tRNA Methanococcus jannaschii (Mj-Tyr), пары TyrRS E. coli (Ec-Tyr)/tRNA_CUA B. stearothermophilus, пары LeuRS (Ec-Leu) E. coli/tRNA_CUA B. stearothermophilus и пары пирролизил-tRNA. В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, в полипептид IL) посредством пары RS/tRNA Mj-Tyr. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать посредством пары Mj-TyrRS/tRNA, включают без ограничения пара-замещенные производные фенилаланина, такие как пара-аминофенилаланин и пара-метоксифенилаланин; мета-замещенные производные тирозина, такие как 3-аминотирозин, 3-нитротирозин, 3,4-дигидроксифенилаланин и 3-йодтирозин; фенилселеноцистеин; пара-борфенилаланин и oрто-нитробензилтирозин.

[468] В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) посредством пары Ec-Tyr/tRNA_CUA или Ec-Leu/tRNA_CUA. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать посредством пары Ec-Tyr/tRNA_CUA или пары Ec-Leu/tRNA_CUA, включают без ограничения производные фенилаланина, содержащие бензoфеноновые, кетоновые, йодидные или азидные заместители; O-пропаргилтирозин; α-аминокаприловую кислоту, O-метилтирозин, O-нитробензилцистеин и 3-(нафталин-2-иламино)-2-аминопропановую кислоту.

[469] В некоторых случаях неприродную аминокислоту встраивают в цитокин (например, полипептид IL) с помощью пары пирролизил-tRNA. В некоторых случаях PylRS получают из архебактерии, например, из метаногенной архебактерии. В некоторых случаях PylRS получают из Methanosarcina barkeri, Methanosarcina mazei или Methanosarcina acetivorans. Иллюстративные UAA, которые можно встраивать с помощью пары пирролизил-tRNA, включают без ограничения амид- и карбамат-замещенные лизины, такие как 2-амино-6-((R)-тетрагидрофуран-2-карбоксамидо)гексановая кислота, N-ε-_D-пролил-_L-лизин и N-ε-циклопентилоксикарбонил-_L-лизин; N-ε-акрилоил-_L-лизин; N-ε-[(1-(6-нитробензо[d][1,3]диоксол-5-ил)этокси)карбонил]-_L-лизин и N-ε-(1-метилциклопро-2-ен-карбоксамидо)лизин. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10, раскрытые в данном документе, можно получать посредством применения tRNA M. mazei, которая селективно загружена неприродной аминокислотой, такой как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), с помощьюпирролизил-tRNA-синтетазы M. barkeri (Mb PylRS). Специалистам в данной области известны и другие способы, как, например, способы, раскрытые в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647, раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки.

[470] В некоторых случаях неприродная аминокислота встроена в цитокин, описанный в данном документе (например, полипептид IL), с помощью синтетазы, раскрытой в US 9988619 и US 9938516, раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[471] Клетку-хозяина, в которую вводят раскрытые в данном документе конструкции или векторы, культивируют или поддерживают в подходящей среде таким образом, что продуцируются tRNA, tRNA-синтетаза и представляющий интерес белок. Среда также содержит неприродную(-ые) аминокислоту(-ы), так что в представляющий интерес белок встраивается(-ются) неприродная(-ые) аминокислота(-ы). В некоторых вариантах осуществления нуклеозидтрифосфатный переносчик (NTT) из бактерии, растения или водоросли также присутствует в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10, раскрытые в данном документе, получают посредством применения клетки-хозяина, которая экспрессирует NTT. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидный нуклеозидтрифосфатный переносчик, применяемый в клетке-хозяине, может быть выбран из TpNTT1, TpNTT2, TpNTT3, TpNTT4, TpNTT5, TpNTT6, TpNTT7, TpNTT8 (T. pseudonana), PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, PtNTT6 (P. tricornutum), GsNTT (Galdieria sulphuraria), AtNTT1, AtNTT2 (Arabidopsis thaliana), CtNTT1, CtNTT2 (Chlamydia trachomatis), PamNTT1, PamNTT2 (Protochlamydia amoebophila), CcNTT (Caedibacter caryophilus), RpNTT1 (Rickettsia prowazekii). В некоторых вариантах осуществления NTT выбран из PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5 и PtNTT6. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT1. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT2. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT3. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT4. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT5. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT6. Другие NTT, которые могут быть использованы, раскрыты в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; Malyshev et al. Nature 2014 (509(7500)), 385-388; и Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317-1322; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[472] Ортогональная пара tRNA-синтетаза/tRNA загружает tRNA неприродной аминокислотой и встраивает неприродную аминокислоту в полипептидную цепь в ответ на кодон. Иллюстративные пары aaRS-tRNA включают без ограничения пары aaRS/tRNA Methanococcus jannaschii (Mj-Tyr), пары TyrRS E. coli (Ec-Tyr)/tRNA_CUA B. stearothermophilus, пары LeuRS (Ec-Leu) E. coli/tRNA_CUA B. stearothermophilus и пары пирролизил-tRNA. Другие пары aaRS-tRNA, которые можно применять в соответствии с настоящим изобретением, включают пары, полученные из M. mazei, описанные в Feldman et al., J Am Chem Soc., 2018 140:1447-1454; и Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317-1322; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[473] В некоторых вариантах осуществления представлены способы получения конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе, в клеточной системе, которая экспрессирует NTT и tRNA-синтетазу. В некоторых вариантах осуществления, описанных в данном документе, NTT выбран из PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5 и PtNTT6, а tRNA-синтетаза выбрана из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus и M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT1, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT2, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT3, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT3, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT4, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT5, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei. В некоторых вариантах осуществления NTT представляет собой PtNTT6, а tRNA-синтетаза получена из Methanococcus jannaschii, E. coli TyrRS (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus или M. mazei.

[474] В некоторых вариантах осуществления NTT, применяемый в данном документе, представляет собой NTT, который усечен по N-концу, по C-концу или как по N-, так и по C-концу. В некоторых вариантах осуществления усеченный NTT является на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85% или по меньшей мере 90% идентичным неусеченному NTT. В некоторых случаях NTT, применяемый в данном документе, представляет собой PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5 или PtNTT6. В некоторых случаях PtNTT, применяемый в данном документе, усечен по N-концу, по C-концу или как по N-, так и по C-концу. В некоторых вариантах осуществления усеченный PtNTT является на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85% или по меньшей мере 90% идентичным неусеченным PtNTT. В некоторых случаях NTT, применяемый в данном документе, представляет собой усеченный PtNTT2, где усеченный PtNTT2 характеризуется аминокислотной последовательностью, которая является на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85% или по меньшей мере 90% идентичной аминокислотной последовательности неусеченного PtNTT2. Пример неусеченного PtNTT2 (номер доступа в NCBI EEC49227.1, GI:217409295) имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 74:

1 mrpyptiali svflsaatri satsshqasa lpvkkgthvp

41 dspklsklyi maktksvsss fdpprggstv apttplatgg

81 alrkvrqavf piygnqevtk flligsikff iilaltltrd

121 tkdtlivtqc gaeaiaflki ygvlpaataf ialyskmsna

161 mgkkmlfyst cipfftffgl fdvfiypnae rlhpsleavq

201 ailpggaasg gmavlakiat hwtsalfyvm aeiyssvsvg

241 llfwqfandv vnvdqakrfy plfaqmsgla pvlagqyvvr

281 faskavnfea smhrltaavt fagimicify qlsssyvert

321 esakpaadne qsikpkkkkp kmsmvesgkf lassqylrli

361 amlvlgygls infteimwks lvkkqypdpl dyqrfmgnfs

401 savglstciv iffgvhvirl lgwkvgalat pgimailalp

441 ffacillgld sparleiavi fgtiqsllsk tskyalfdpt

481 tqmayipldd eskvkgkaai dvlgsrigks ggsliqqglv

521 fvfgniinaa pvvgvvyysv lvawmsaagr lsglfqaqte

561 mdkadkmeak tnkek

[475] В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10, раскрытые в данном документе, можно получать в клетке, такой как E. coli, содержащей (a) транспортeр нуклеотидтрифосфата PtNTT2 (включающий усеченный вариант, в котором первые 65 аминокислотных остатков полноразмерного белка удалены), (b) плазмиду, содержащую двухнитевой олигонуклеотид, который кодирует вариант IL-10, имеющий требуемую аминокислотную последовательность, и который содержит неприродную пару оснований, содержащую первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид для обеспечения наличия кодона в требуемом положении, в которое будет встроена неприродная аминокислота, такая как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), N6-(пропаргилэтокси)-L-лизин (PraK), N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, (c) плазмиду, кодирующую tRNA, полученную из M. mazei, и которая содержит неприродный нуклеотид для обеспечения распознаваемого антикодона (для кодона варианта IL-10) вместо ее нативной последовательности, и (d) плазмиду, кодирующую полученную из M. barkeri пирролизил-tRNA-синтетазу (Mb PylRS), которая может представлять собой ту же плазмиду, которая кодирует tRNA, или другую плазмиду. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетка дополнена дезоксириботрифосфатами, содержащими одно или несколько неприродных оснований. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетка дополнена риботрифосфатами, содержащими одно или несколько неприродных оснований. В некоторых вариантах осуществления клетка дополнена одной или несколькими неприродными аминокислотами, такими как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), N6-(пропаргилэтокси)-L-лизин (PraK), N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления двухнитевой олигонуклеотид, который кодирует аминокислотную последовательность требуемого варианта IL-10, содержит кодон AXC, например, в положении 67, 70, 74, 75, 79, 82, 88, 89, 99, 125, 126, 129, 130 или 132 последовательности, которая кодирует белок, имеющий SEQ ID NO: 1, где X представляет собой неприродный нуклеотид, как, например, раскрытый в данном документе, например NaM. В некоторых вариантах осуществления клетка дополнительно содержит плазмиду, которая может представлять собой плазмиду экспрессии белка или другую плазмиду, которая кодирует ген ортогональной tRNA из M. mazei, которая содержит соответствующий AXC антикодон GYT вместо своей нативной последовательности, где Y представляет собой неприродный нуклеотид, раскрытый в данном документе, такой как TPT3, который является комплементарным и может быть таким же, как неприродный нуклеотид в кодоне, или может отличаться от него. В некоторых вариантах осуществления неприродный нуклеотид в кодоне отличается от неприродного нуклеотида и комплементарен неприродному нуклеотиду в антикодоне. В некоторых вариантах осуществления неприродный нуклеотид в кодоне является таким же, как неприродный нуклеотид в антикодоне. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй неприродные нуклеотиды, содержащие неприродную пару оснований в двухнитевом олигонуклеотиде, можно получать из , , , , и . В некоторых вариантах осуществления первый и второй неприродные нуклеотиды, содержащие неприродную пару оснований в двухнитевом олигонуклеотиде, можно получать из и . В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают , и или их соли. В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают и или их соли. В некоторых вариантах осуществления mRNA, полученная из двухнитевого олигонуклеотида, содержащего первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид, может содержать кодон, содержащий неприродный нуклеотид, полученный из , и . В некоторых вариантах осуществления tRNA M. mazei может содержать антикодон, содержащий неприродный нуклеотид, который распознает кодон, содержащий неприродный нуклеотид mRNA. Антикодон в tRNA M. mazei может содержать неприродный нуклеотид, полученный из , , , , и . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . Клетку-хозяина культивируют в среде, содержащей соответствующие питательные вещества и дополненной (a) трифосфатами дезоксирибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, которые необходимы для репликации плазмиды(плазмид), кодирующей(-их) ген цитокина, несущий кодон, (b) трифосфатами рибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, необходимых для транскрипции (i) mRNA, соответствующей кодирующей последовательности цитокина и содержащей кодон, содержащий одно или несколько неприродных оснований, и (ii) tRNA, содержащей антикодон, содержащий одно или несколько неприродных оснований, и (c) неприродной(-ыми) аминокислотой(-ами), подлежащей(-ими) встраиванию в полипептидную последовательность представляющего интерес цитокина. Затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, обеспечивающих экспрессию представляющего интерес белка.

[476] Полученный белок, содержащий одну или несколько неприродных аминокислот, например AzK, N6-(пропаргилэтокси)-L-лизин (PraK), N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, который экспрессируется, может быть очищен способами, известными специалистам в данной области, и затем может быть обеспечено его реагирование с алкином, таким как DBCO, содержащим цепь PEG, имеющую требуемую среднюю молекулярную массу, раскрытую в данном документе, в условиях, известных специалистам в данной области, с получением конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе. Специалистам в данной области известны и другие способы, как, например, способы, раскрытые в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; WO 2015157555; WO 2015021432; WO 2016115168; WO 2017106767; WO 2017223528; WO 2019014262; WO 2019014267; WO 2019028419 и WO2019/028425; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[477] В качестве альтернативы полипептид цитокина (например, IL-10), содержащий неприродную(-ые) аминокислоту(-ы), получают посредством введения в клетку-хозяина описанных в данном документе конструкций на основе нуклеиновых кислот, содержащих tRNA и аминоацил-tRNA-синтетазу и содержащих представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты с одним или несколькими ортогональными (стоп-)кодонами в рамке считывания. Клетку-хозяина культивируют в среде, содержащей соответствующие питательные вещества и дополненной (a) трифосфатами дезоксирибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, необходимых для репликации плазмиды(плазмид), кодирующей(-их) ген цитокина, несущий новый кодон и антикодон, (b) трифосфатами рибонуклеозидов, необходимыми для транскрипции mRNA, соответствующей (i) последовательности цитокина, содержащей кодон, и (ii) ортогональной tRNA, содержащей антикодон, и (c) неприродной(-ыми) аминокислотой(-ами). Затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, обеспечивающих экспрессию представляющего интерес белка. Неприродная(-ые) аминокислота(-ы) встраивается(-ются) в полипептидную цепь в ответ на неприродный кодон. Например, одна или несколько неприродных аминокислот встраиваются в полипептид цитокина (например, IL-10). В качестве альтернативы две или более неприродных аминокислот могут быть встроены в полипептид цитокина (например, IL-10) в двух или более сайтах белка.

[478] После того, как цитокин (например, IL-10) со встроенной(-ыми) неприродной(-ыми) аминокислотой(-ами) был получен в клетке-хозяине, его можно извлечь из нее посредством различных методик, известных из уровня техники, включая ферментативный, химический и/или осмотический лизис и физическое разрушение. Полипептид цитокина (например, IL-10) может быть очищен посредством стандартных методик, известных из уровня техники, таких как препаративная ионообменная хроматография, хроматография гидрофобного взаимодействия, аффинная хроматография или посредством любой другой подходящей методики, известной специалистам в данной области.

[479] В некоторых вариантах осуществления конъюгаты IL-10, раскрытые в данном документе, можно получать в клетке, такой как E. coli, содержащей (a) транспортeр нуклеотидтрифосфата PtNTT2 (включающий усеченный вариант, в котором первые 65 аминокислотных остатков полноразмерного белка удалены), (b) плазмиду, содержащую двухнитевой олигонуклеотид, который кодирует вариант IL-10, имеющий требуемую аминокислотную последовательностью, и который содержит неприродную пару оснований, содержащую первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид, для обеспечения наличия кодона в требуемом положении, в которое будет встроена неприродная аминокислота, такая как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), (c) плазмиду, кодирующую tRNA, полученную из M. mazei, и которая содержит неприродный нуклеотид для обеспечения наличия распознаваемого антикодона (для кодона варианта IL-10) вместо своей нативной последовательности, и (d) плазмиду, кодирующую пирролизил-tRNA-синтетазу, полученную из M. barkeri (Mb PylRS), которая может представлять собой ту же плазмиду, которая кодирует tRNA, или другую плазмиду. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетка дополнена дезоксириботрифосфатами, содержащими одно или несколько неприродных оснований. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетка дополнена риботрифосфатами, содержащими одно или несколько неприродных оснований. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления клетки дополнены одной или несколькими неприродными аминокислотами, такими как N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK). В некоторых вариантах осуществления двухнитевой олигонуклеотид, который кодирует аминокислотную последовательность требуемого варианта IL-10, содержит кодон AXC, например, в положении N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 или K130 последовательности, которая кодирует белок, имеющий SEQ ID NO: 1, где X представляет собой неприродный нуклеотид.

[480] В некоторых вариантах осуществления клетка дополнительно содержит плазмиду, которая может представлять собой плазмиду экспрессии белка или другую плазмиду, которая кодирует ген ортогональной tRNA из M. mazei, которая содержит AXC-соответствующий антикодон GYT вместо своей нативной последовательности, где Y представляет собой неприродный нуклеотид, который является комплементарным и может быть таким же или отличаться от неприродного нуклеотида в кодоне. В некоторых вариантах осуществления неприродный нуклеотид в кодоне отличается от неприродного нуклеотида и комплементарен неприродному нуклеотиду в антикодоне. В некоторых вариантах осуществления неприродный нуклеотид в кодоне является таким же, как неприродный нуклеотид в антикодоне. В некоторых вариантах осуществления неприродные нуклеотиды, содержащие неприродную пару оснований в двухнитевом олигонуклеотиде, можно получать из

, , , , и . В некоторых вариантах осуществления первый и второй неприродные нуклеотиды, содержащие неприродную пару оснований в двухнитевом олигонуклеотиде, можно получать из и . В некоторых вариантах осуществления первый и второй неприродные нуклеотиды, содержащие неприродную пару оснований в двухнитевом олигонуклеотиде, можно получать из и . В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают , , , , и или их соли. В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают и или их соли. В некоторых вариантах осуществления трифосфаты первого и второго неприродных нуклеотидов включают и или их соли. В некоторых вариантах осуществления mRNA, полученная из двухнитевого олигонуклеотида, содержащего первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид, может содержать кодон, содержащий неприродный нуклеотид, полученный из , , , , и . В некоторых вариантах осуществления tRNA M. mazei может содержать антикодон, содержащий неприродный нуклеотид, который распознает кодон, содержащий неприродный нуклеотид mRNA. Антикодон в tRNA M. mazei может содержать неприродный нуклеотид, полученный из , , , , и . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . В некоторых вариантах осуществления mRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из , и tRNA содержит неприродный нуклеотид, полученный из . Клетку-хозяина культивируют в среде, содержащей соответствующие питательные вещества и дополненной (a) трифосфатами дезоксирибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, которые необходимы для репликации плазмиды(плазмид), кодирующей(-их) ген цитокина, несущий кодон, (b) трифосфатами рибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, необходимых для транскрипции (i) mRNA, соответствующей кодирующей последовательности цитокина и содержащей кодон, содержащий одно или несколько неприродных оснований, и (ii) tRNA, содержащей антикодон, содержащий одно или несколько неприродных оснований, и (c) неприродной(-ыми) аминокислотой(-ами), подлежащей(-ими) встраиванию в полипептидную последовательность представляющего интерес цитокина. Затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, обеспечивающих экспрессию представляющего интерес белка.

[481] В некоторых случаях кодон, содержащий неприродное основание, и антикодон, содержащий неприродное основание, может быть выбран из следующих пар, где каждый X и Y содержит основание, независимо выбранное из группы, состоящей из , , , , , , , , , , , , и где R₂ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, метокси, метантиола, метанселено, галогена, циано и азидо; и в каждом случае волнистой линией указана связь с рибозилом, если X и Y предусматривают mRNA или tRNA, или с 2'-дезоксирибозилом, если X и Y предусматривают ДНК (таблица 2).

Таблица 2. Перечень неограничивающих примеров кодонов и антикодонов, содержащих X и Y. Кодон (mRNA) Антикодон (tRNA) UUX YAA или XAA UGX YCA или XCA CGX YCG или XCG AGX YCU или XCU GAX YUC или XUC CAX YUG или XUG GXU AYC CXU AYG GXG CYC AXG CYU GXC GYC AXC GYU GXA UYC CXC GYG UXC GYA AUX YAU или XAU CUX XAG или YAG GUX XAC или YAC UAX XUA или YUA GGX XCC или YCC

[482] Полученный в результате белок, содержащий одну или несколько неприродных аминокислот, например Azk, который экспрессируется, может быть очищен способами, известными специалистам в данной области, и затем может быть обеспечена его реагирование с алкином, таким как DBCO, содержащим цепь PEG с требуемой средней молекулярной массой, как раскрывается в данном документе, в условиях, известных специалистам в данной области, с получением конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе. Специалистам в данной области известны и другие способы, как, например, способы, раскрытые в Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; WO 2015157555; WO 2015021432; WO 2016115168; WO 2017106767; WO 2017223528; WO 2019014262; WO 2019014267; WO 2019028419 и WO2019/028425; раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[483] В качестве альтернативы полипептид цитокина (например, IL-10), содержащий неприродную(-ые) аминокислоту(-ы), получают посредством введения в клетку-хозяина описанных в данном документе конструкций на основе нуклеиновых кислот, содержащих tRNA и аминоацил-tRNA-синтетазу и содержащих представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты с одним или несколькими ортогональными (стоп-)кодонами в рамке считывания. Клетку-хозяина культивируют в среде, содержащей соответствующие питательные вещества и дополненной (a) трифосфатами дезоксирибонуклеозидов, содержащими одно или несколько неприродных оснований, необходимых для репликации плазмиды(плазмид), кодирующей(-их) ген цитокина, несущий новый кодон и антикодон, (b) трифосфатами рибонуклеозидов, необходимыми для транскрипции mRNA, соответствующей (i) последовательности цитокина, содержащей кодон, и (ii) ортогональной tRNA, содержащей антикодон, и (c) неприродной(-ыми) аминокислотой(-ами). Затем клетки-хозяева поддерживают в условиях, обеспечивающих экспрессию представляющего интерес белка. Неприродная(-ые) аминокислота(-ы) встраивается(-ются) в полипептидную цепь в ответ на неприродный кодон. Например, одна или несколько неприродных аминокислот встраиваются в полипептид цитокина (например, IL-10). В качестве альтернативы две или более неприродных аминокислот могут быть встроены в полипептид цитокина (например, IL-10) в двух или более сайтах белка.

[484] После того, как цитокин (например, IL-10) со встроенной(-ыми) неприродной(-ыми) аминокислотой(-ами) был получен в клетке-хозяине, его можно извлечь из нее посредством различных методик, известных из уровня техники, включая ферментативный, химический и/или осмотический лизис и физическое разрушение. Полипептид цитокина (например, IL-10) может быть очищен посредством стандартных методик, известных из уровня техники, таких как препаративная ионообменная хроматография, хроматография гидрофобного взаимодействия, аффинная хроматография или посредством любой другой подходящей методики, известной специалистам в данной области.

[485] Подходящие клетки-хозяева могут включать бактериальные клетки (например, E. coli, BL21(DE3)), но в наиболее подходящем случае клетки-хозяева являются эукариотическими клетками, например клетками насекомых (например, представителя рода Drosophila, такого как Drosophila melanogaster), клетками дрожжей, нематод (например, C. elegans), клетками мышей (например, Mus musculus) или млекопитающих (такими как клетки яичника китайского хомяка (CHO) или клетки COS, клетки человека 293T, клетки HeLa, клетки NIH/3T3 и клетки эритролейкоза мыши (MEL)) или клетками человека или другими эукариотическими клетками. Другие подходящие клетки-хозяева известны специалистам в данной области. Соответственно, клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, такую как клетка человека, или клетку насекомого. В некоторых вариантах осуществления подходящие клетки-хозяева включают E. coli.

[486] Другими подходящими клетками-хозяевами, которые в целом можно использовать в вариантах осуществления настоящего изобретения, являются клетки, упомянутые в разделе "Примеры". Векторную ДНК можно вводить в клетки-хозяева с помощью обычных методик трансформации или трансфекции. Применяемые в данном документе термины "трансформация" и "трансфекция" предназначены для обозначения множества хорошо известных методик введения молекулы чужеродной нуклеиновой кислоты (например, ДНК) в клетку-хозяина, включая совместное осаждение фосфатом кальция или хлоридом кальция, опосредованную DEAE-декстраном трансфекцию, липофекцию или электропорацию. Подходящие способы трансформации или трансфекции клеток-хозяев хорошо известны из уровня техники.

[487] При создании линий клеток обычно предпочтительно получать стабильные линии клеток. Например, известно, что в случае стабильной трансфекции клеток млекопитающих в зависимости от применяемых вектора экспрессии и методики трансфекции только небольшая часть клеток может интегрировать чужеродную ДНК в свой геном. Для идентификации и отбора этих интегрантов в клетки-хозяева вместе с представляющим интерес геном обычно вводят ген, который кодирует селектируемый маркер (например, для устойчивости к антибиотикам). Предпочтительные селектируемые маркеры включают маркеры, которые придают устойчивость к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие селектируемый маркер, можно вводить в клетку-хозяина в том же векторе или можно вводить в отдельном векторе. Клетки, стабильно трансфицированные введенной молекулой нуклеиновой кислоты, можно идентифицировать посредством отбора с лекарственным средством (например, клетки, которые содержат встроенный ген селектируемого маркера, выживут, тогда как другие клетки погибают).

[488] В одном варианте осуществления описанные в данном документе конструкции интегрируют в геном клетки-хозяина. Преимущество стабильной интеграции состоит в том, что достигается однородность между отдельными клетками или клонами. Еще одно преимущество состоит в возможности осуществления отбора лучших продуцентов. Соответственно, необходимо создать стабильные линии клеток. В другом варианте осуществления описанными в данном документе конструкциями трансфицируют клетку-хозяина. Преимущество трансфекции клетки-хозяина конструкциями состоит в том, что выход белка может быть максимизирован. В одном аспекте описана клетка, содержащая конструкцию на основе нуклеиновой кислоты или вектор, описанные в данном документе.

Способы применения

[489] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения рака у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества любого из модифицированного полипептида IL-10 или конъюгатов IL-10, которые описаны в данном документе. В некоторых случаях рак представляет собой солидную опухоль или гемобластоз. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой метастатический рак. В некоторых случаях рак представляет собой рецидивный или рефрактерный рак в результате предшествующего лечения. В некоторых вариантах осуществления подлежащий лечению рак, который описан в данном документе, выбран из почечно-клеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного мозга, рака молочной железы, колоректального рака, рака пищевода, рака глаза, рака головы и шеи, рака почки, рака легкого, меланомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, плоскоклеточной карциномы, рака поджелудочной железы и рака предстательной железы. В некоторых вариантах осуществления подлежащий лечению рак, как описано в данном документе, выбран из почечно-клеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), классической лимфомы Ходжкина (cHL), первичной медиастинальной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (PMBCL), уротелиальной карциномы, рака с микросателлитной нестабильностью, рака с микросателлитной стабильностью, колоректального рака с микросателлитной стабильностью, рака желудка, рака шейки матки, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), меланомы, мелкоклеточного рака легкого (SCLC), рака пищевода, глиобластомы, мезотелиомы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака яичника, опухолей с мутационной нагрузкой от умеренной до низкой, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC), плоскоклеточного рака кожи (SCSC), опухолей с экспрессией PD-L1 от низкой до отсутствующей, опухолей, системно диссеминирующих в печень и ЦНС, за пределы их первичного участка анатомического происхождения, и диффузной B-крупноклеточной лимфомы.

[490] В некоторых вариантах осуществления подлежащий лечению рак, как описано в данном документе, представляет собой гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование предусматривает лейкоз, лимфому или миелому. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование представляет собой T-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование представляет собой В-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование представляет собой метастатическое гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рецидивное гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рефрактерное гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых случаях рак, подлежащий лечению посредством любого из модифицированного полипептида IL-10 или конъюгата IL-10, представляет собой рак, выбранный из хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (SLL), фолликулярной лимфомы (FL), диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы (DLBCL), лимфомы из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемии Вальденстрема, множественной миеломы, экстранодальной В-клеточной лимфомы из клеток краевой зоны, нодальной В-клеточной лимфомы из клеток краевой зоны, лимфомы Беркитта, В-клеточной неберкиттовской лимфомы высокой степени злокачественности, первичной медиастинальной B-клеточной лимфомы (PMBL), иммунобластной крупноклеточной лимфомы, В-лимфобластной лимфомы из клеток-предшественников, пролимфоцитарного В-клеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы, лимфомы из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточной миеломы, плазмоцитомы, медиастинальной (тимической) крупноклеточной В-клеточной лимфомы, внутрисосудистой крупноклеточной В-клеточной лимфомы, первичной эффузионной лимфомы или лимфоматоидного гранулематоза.

Пролиферативные заболевания или состояния

[491] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения пролиферативного заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества любого из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления пролиферативное заболевание или состояние представляет собой рак. В некоторых случаях рак представляет собой солидную опухоль. Иллюстративные солидные опухоли включают без ограничения рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланому, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой метастатический рак. В некоторых случаях солидная опухоль представляет собой рецидивный или рефрактерный рак в результате предшествующего лечения.

[492] В некоторых случаях любой из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, описанных в данном документе, вводят нуждающемуся в этом субъекту для лечения солидной опухоли. В таких случаях у субъекта имеется рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки (или почечно-клеточная карцинома), рак легкого, меланома, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака мочевого пузыря. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака молочной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения колоректального рака. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака пищевода. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака головы и шеи. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака почки (или почечно-клеточной карциномы или RCC). В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака легкого. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения меланомы. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака яичника. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака поджелудочной железы. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения рака предстательной железы. В некоторых случаях рак представляет собой метастатический рак. В других случаях рак представляет собой рецидивный рак. В дополнительных случаях рак представляет собой рефрактерный рак.

[493] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой не подвергавшийся лечению рак. В таких случаях не подвергавшийся лечению рак предусматривает рак, не подвергавшийся лечению посредством терапии. В некоторых случаях не подвергавшийся лечению рак представляет собой солидную опухоль, такую как рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки (или RCC), рак легкого, меланому, рак яичника, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения не подвергавшейся лечению солидной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, который предусматривает введение субъекту конъюгата IL-10, описанного в данном документе.

[494] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых случаях описанный в данном документе конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту для лечения гематологического злокачественного новообразования. В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование предусматривает лейкоз, лимфому или миелому. В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой T-клеточное злокачественное новообразование. В других случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой B-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой метастатическое гематологическое злокачественное новообразование. В других случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рецидивное гематологическое злокачественное новообразование. В дополнительных случаях гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рефрактерное гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется T-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется В-клеточное злокачественное новообразование. В некоторых случаях у субъекта имеется хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (SLL), фолликулярная лимфома (FL), диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома (DLBCL), лимфома из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемия Вальденстрема, множественная миелома, экстранодальная В-клеточная лимфома из клеток краевой зоны, нодальная В-клеточная лимфома из клеток краевой зоны, лимфома Беркитта, В-клеточная неберкиттовская лимфома высокой степени злокачественности, первичная медиастинальная B-клеточная лимфома (PMBL), иммунобластная крупноклеточная лимфома, В-лимфобластная лимфома из клеток-предшественников, пролимфоцитарный В-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарная лимфома, лимфома из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточная миелома, плазмоцитома, медиастинальная (тимическая) крупноклеточная В-клеточная лимфома, внутрисосудистая крупноклеточная В-клеточная лимфома, первичная эффузионная лимфома или лимфоматоидный гранулематоз. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения CLL. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения SLL. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения FL. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения DLBCL. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения MCL. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения макроглобулинемии Вальденстрема. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения множественной миеломы. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят субъекту для лечения лимфомы Беркитта.

Дополнительные терапевтические средства

[495] В некоторых вариантах осуществления субъекту дополнительно вводят дополнительное терапевтическое средство. В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно с конъюгатом IL-10 и/или составляют совместно. В других случаях дополнительное терапевтическое средство и конъюгат IL-10 вводят последовательно, например конъюгат IL-10 вводят до введения дополнительного терапевтического средства или конъюгат IL-10 вводят после введения дополнительного терапевтического средства. В некоторых случаях одно или несколько дополнительных средств представляют собой один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа, выбранных из группы, состоящей из ингибиторов PD-1, ингибиторов PD-L1, ингибиторов PD-L2, ингибиторов CTLA-4, агонистов OX40 и агонистов 4-1BB. В некоторых случаях один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа выбраны из ингибиторов PD-1. Иллюстративные ингибиторы PD-1 включают пембролизумаб, ниволумаб, цемиплимаб, ламбролизумаб, AMP-224, синтилимаб, торипалимаб, камрелизумаб, тислелизумаб, достарлимаб (GSK), PDR001 (Novartis), MGA012 (Macrogenics/Incyte), GLS-010 (Arcus/Wuxi), AGEN2024 (Agenus), цетрелимаб (Janssen), ABBV-181 (Abbvie), AMG-404 (Amgen), BI-754091 (Boehringer Ingelheim), CC-90006 (Celgene), JTX-4014 (Jounce), PF-06801591 (Pfizer) и генолимзумаб (Apollomics/Genor BioPharma). В некоторых случаях один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа выбраны из ингибиторов PD-L1. Иллюстративные ингибиторы PD-L1 включают атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб, ASC22 (Alphamab/Ascletis), CX-072 (Cytomx), CS1001 (Cstone), косибелимаб (Checkpoint Therapeutics), INCB86550 (Incyte) и TG-1501 (TG Therapeutics). В некоторых случаях один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа выбраны из ингибиторов CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления ингибиторы CTLA-4 выбраны из тремелимумаба, ипилимумаба и AGEN-1884 (Agenus). В некоторых случаях одно или несколько дополнительных средств предусматривают фолиниевую кислоту, 5-фторурацил и оксалиплатин для лечения рака поджелудочной железы и аденокарциномы протоков поджелудочной железы (PDAC).

[496] В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство предусматривает химиотерапевтическое средство, иммунотерапевтическое средство, средство для таргетной терапии, лучевую терапию или их комбинацию. Иллюстративные дополнительные терапевтические средства включают без ограничения алкилирующие средства, такие как альтретамин, бусульфан, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, циклофосфамид, дакарбазин, ломустин, мелфалан, оксалаплатин, темозоломид или тиотепа; антиметаболиты, такие как 5-фторурацил (5-FU), 6-меркаптопурин (6-MP), капецитабин, цитарабин, флоксуридин, флударабин, гемцитабин, гидроксимочевина, метотрексат или пеметрексед; антрациклины, такие как даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин или идарубицин; ингибиторы топоизомеразы I, такие как топотекан или иринотекан (СРТ-11); ингибиторы топоизомеразы II, такие как этопозид (VP-16), тенипозид или митоксантрон; ингибиторы митоза, такие как доцетаксел, эстрамустин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин или винорелбин; или кортикостероиды, такие как преднизон, метилпреднизолон или дексаметазон.

[497] В некоторых случаях дополнительное терапевтическое средство предусматривает средство терапии первой линии. Применяемый в данном документе термин "терапия первой линии" включает первичное лечение субъекта с раком. В некоторых случаях рак представляет собой первичный или местнораспространенный рак. В других случаях рак представляет собой метастатический или рецидивирующий рак. В некоторых случаях терапия первой линии предусматривает химиотерапию. В других случаях лечение первой линии предусматривает иммунотерапию, таргетную терапию или лучевую терапию. Квалифицированный специалист в данной области сможет легко понять, что различные виды лечения первой линии могут быть применимы к различным типам рака.

[498] В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят с дополнительным терапевтическим средством, выбранным из алкилирующего средства, такого как альтретамин, бусульфан, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, циклофосфамид, дакарбазин, ломустин, мелфалан, оксалаплатин, темозоломид или тиотепа; антиметаболита, такого как 5-фторурацил (5-FU), 6-меркаптопурин (6-MP), капецитабин, цитарабин, флоксуридин, флударабин, гемцитабин, гидроксимочевина, метотрексат или пеметрексед; антрациклина, такого как даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин или идарубицин; ингибитора топоизомеразы I, такого как топотекан или иринотекан (СРТ-11); ингибитора топоизомеразы II, такого как этопозид (VP-16), тенипозид или митоксантрон; ингибитора митоза, такого как доцетаксел, эстрамустин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин или винорелбин; или кортикостероида, такого как преднизон, метилпреднизолон или дексаметазон.

[499] В некоторых случаях конъюгат IL-10, описанный в данном документе, вводят с ингибитором фермента поли-АДФ-рибозополимеразы (PARP). Иллюстративные ингибиторы PARP включают без ограничения олапариб (AZD-2281, Lynparza®, от Astra Zeneca), рукапариб (PF-01367338, Rubraca®, от Clovis Oncology), нирапариб (MK-4827, Zejula®, от Tesaro), талазопариб (BMN-673, от BioMarin Pharmaceutical Inc.), велипариб (ABT-888, от AbbVie), CK-102 (ранее CEP 9722, от Teva Pharmaceutical Industries Ltd.), E7016 (от Eisai), инипариб (BSI 201, от Sanofi) и памипариб (BGB-290, от BeiGene). В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят в комбинации с ингибитором PARP, таким как олапариб, рукапариб, нирапариб, талазопариб, велипариб, CK-102, E7016, инипариб или памипариб.

[500] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10, описанный в данном документе, вводят с ингибитором тирозинкиназы (TKI). Иллюстративные TKI включают без ограничения афатиниб, алектиниб, акситиниб, босутиниб, кабозантиниб, церитиниб, кобиметиниб, кризотиниб, дабрафениб, дазатиниб, эрлотиниб, гефитиниб, ибрутиниб, иматиниб, лапатиниб, ленватиниб, нилотиниб, нинтеданиб, осимертиниб, пазопаниб, понатиниб, регорафениб, руксолитиниб, сорафениб, сунитиниб, тофацитиниб и вандетаниб.

[501] В некоторых случаях конъюгат IL-10, описанный в данном документе, вводят с ингибитором контрольных точек иммунного ответа. Иллюстративные ингибиторы контрольных точек иммунного ответа включают ингибиторы PD-L1, такие как дурвалумаб (Imfinzi) от AstraZeneca, атезолизумаб (MPDL3280A) от Genentech, авелумаб от EMD Serono/Pfizer, CX-072 от CytomX Therapeutics, FAZ053 от Novartis Pharmaceuticals, KN035 от 3D Medicine/Alphamab, LY3300054 от Eli Lilly или M7824 (антитело к PD-L1/ловушка TGF-бета) от EMD Serono; ингибиторы PD-L2, такие как AMP-224 от GlaxoSmithKline (амплиммун) и rHIgM12B7; ингибиторы PD-1, такие как ниволумаб (Opdivo) от Bristol-Myers Squibb, пембролизумаб (Keytruda) от Merck, AGEN 2034 от Agenus, BGB-A317 от BeiGene, Bl-754091 от Boehringer-Ingelheim Pharmaceuticals, CBT-501 (генолимзумаб) от CBT Pharmaceuticals, INCSHR1210 от Incyte, JNJ-63723283 от Janssen Research & Development, MEDI0680 от MedImmune, MGA 012 от MacroGenics, PDR001 от Novartis Pharmaceuticals, PF-06801591 от Pfizer, REGN2810 (SAR439684) от Regeneron Pharmaceuticals/Sanofi или TSR-042 от TESARO; ингибиторы CTLA-4, такие как ипилимумаб (также известный как Yervoy®, MDX-010, BMS-734016 и MDX-101) от Bristol Meyers Squibb, тремелимумаб (CP-675206, тицилимумаб) от Pfizer, или AGEN 1884 от Agenus; ингибиторы LAG3, такие как BMS-986016 от Bristol-Myers Squibb, IMP701 от Novartis Pharmaceuticals, LAG525 от Novartis Pharmaceuticals или REGN3767 от Regeneron Pharmaceuticals; ингибиторы B7-H3, такие как эноблитузумаб (MGA271) от MacroGenics; ингибиторы KIR, такие как лирилумаб (IPH2101; BMS-986015) от Innate Pharma; ингибиторы CD137, такие как урелумаб (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), PF-05082566 (антитело к 4-1BB, PF-2566, Pfizer) или XmAb-5592 (Xencor); ингибиторы PS, такие как бавитуксимаб; и ингибиторы, такие как антитело или его фрагменты (например, моноклональное антитело, человеческое, гуманизированное или химерное антитело), молекулы RNAi или малые молекулы к TIM3, CD52, CD30, CD20, CD33, CD27, OX40, GITR, ICOS, BTLA (CD272), CD160, 2B4, LAIR1, TIGHT, LIGHT, DR3, CD226, CD2 или SLAM.

[502] В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-1 представляют собой пембролизумаб, ниволумаб или цемиплимаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-1 представляет собой цемиплимаб.

[503] В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-L1 представляет собой атезолизумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-L1 представляет собой авелумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-L1 представляет собой дурвалумаб.

[504] В некоторых вариантах осуществления ингибиторы CTLA-4 выбраны из тремелимумаба, ипилимумаба и AGEN-1884 (Agenus). В некоторых вариантах осуществления ингибитор CTLA-4 представляет собой тремелимумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор CTLA-4 представляет собой ипилимумаб. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят в комбинации с пембролизумабом, ниволумабом, тремелимумабом или ипилимумабом.

[505] В некоторых случаях конъюгат IL-10, описанный в данном документе, вводят с антителом, таким как алемтузумаб, трастузумаб, ибритумомаб тиуксетан, брентуксимаб ведотин, адо-трастузумаб эмтанзин или блинатумомаб.

[506] В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят с дополнительным терапевтическим средством, выбранным из дополнительного цитокина. В некоторых случаях дополнительный цитокин усиливает и/или оказывает синергетическое действие в отношении размножения и/или пролиферации эффекторных Т-клеток. В некоторых случаях дополнительный цитокин предусматривает IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 или TNFα. В некоторых случаях дополнительный цитокин представляет собой IL-7. В некоторых случаях дополнительный цитокин представляет собой IL-15. В некоторых случаях дополнительный цитокин представляет собой IL-21. В некоторых случаях дополнительный цитокин представляет собой TNFα.

[507] В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят с дополнительным терапевтическим средством, выбранным из агониста рецептора. В некоторых случаях агонист рецептора предусматривает лиганд Toll-подобного рецептора (TLR). В некоторых случаях лиганд TLR предусматривает TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 или TLR9. В некоторых случаях лиганд TLR предусматривает синтетический лиганд, такой как, например, Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, поли I:C, поли A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA или флагеллин. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят с одним или несколькими агонистами TLR, выбранными из TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 и TLR9. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят с одним или несколькими агонистами TLR, выбранными из Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, поли I:C, поли A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA и флагеллина.

[508] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 применяют в сочетании с терапией адоптивного переноса Т-клеток (ACT). В одном варианте осуществления ACT включает идентификацию аутологичных Т-лимфоцитов у субъекта, например, с противоопухолевой активностью, размножение аутологичных Т-лимфоцитов in vitro и последующую реинфузию размноженных Т-лимфоцитов субъекту. В другом варианте осуществления ACT включает применение аллогенных Т-лимфоцитов, например, с противоопухолевой активностью, размножение Т-лимфоцитов in vitro и последующую инфузию размноженных аллогенных Т-лимфоцитов нуждающемуся в этом субъекту. В некоторых случаях конъюгат IL-10, описанный в данном документе, применяют в сочетании с аутологичными Т-лимфоцитами в качестве компонента терапии ACT. В других случаях конъюгат IL-10, описанный в данном документе, применяют в сочетании с аллогенными Т-лимфоцитами в качестве компонента терапии ACT. В некоторых случаях конъюгат IL-10 вводят одновременно со средством терапии ACT нуждающемуся в этом субъекту. В других случаях конъюгат IL-10 вводят последовательно со средством терапии ACT нуждающемуся в этом субъекту.

[509] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 применяют для ex vivo активации и/или размножения аутологичных и/или аллогенных Т-клеток при переносе. В таких случаях конъюгат IL-10 применяют для активации и/или размножения образца, содержащего аутологичные и/или аллогенные T-клетки, и конъюгат IL-10 необязательно удаляют из образца перед введением образца нуждающемуся в этом субъекту.

[510] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 вводят с вакциной. В некоторых случаях конъюгат IL-10 используют в комбинации с онколитическим вирусом. В таких случаях конъюгат IL-10 действует в качестве стимулирующего средства для модуляции иммунного ответа. В некоторых случаях конъюгат IL-10 применяют с онколитическим вирусом в качестве компонента адъювантной терапии. Иллюстративные онколитические вирусы включают T-Vec (Amgen), G47Δ (Todo et al.), JX-594 (Sillajen), CG0070 (Cold Genesys) и реолизин (Oncolytics Biotech). В некоторых случаях конъюгат IL-10 применяют в комбинации с онколитическим вирусом, таким как T-Vec, G47Δ, JX-594, CG0070 или реолизин.

[511] В некоторых вариантах осуществления конъюгат IL-10 вводят в комбинации с лучевой терапией.

Способы лечения других заболеваний

[512] В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения фиброзного нарушения у субъекта посредством введения любого из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, описанных в данном документе. В некоторых случаях фиброзное нарушения может предусматривать фиброз печени, идиопатический легочный фиброз и перипортальный фиброз. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH) у субъекта посредством введения любого из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления в данном документе описан способ лечения неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD) у субъекта посредством введения любого из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, описанных в данном документе.

Фармацевтические композиции и составы

[513] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция и составы, описанные в данном документе, вводят субъекту несколькими путями введения, включая без ограничения парентеральный, пероральный или трансдермальный пути введения. В некоторых случаях парентеральное введение предусматривает внутривенное, подкожное, внутримышечное, интрацеребральное, интраназальное, внутриартериальное, внутрисуставное, внутрикожное, интравитреальное, внутрикостную инфузию, интраперитонеальное или интратекальное введение. В некоторых случаях фармацевтическую композицию составляют для местного введения. В других случаях фармацевтическую композицию составляют для системного введения.

[514] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы включают без ограничения водные жидкие дисперсии, самоэмульгирующиеся дисперсии, липосомальные дисперсии, аэрозоли, составы с немедленным высвобождением, составы с контролируемым высвобождением, составы с замедленным высвобождением, составы с пролонгированным высвобождением, составы с пульсирующим высвобождением и смешанные составы с немедленным и контролируемым высвобождением.

[515] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы включают носитель или материалы-носители, выбранные на основе совместимости с композицией, раскрытой в данном документе, и характеристик профиля высвобождения необходимой лекарственной формы. См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995), Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975, Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980, и Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 1999); раскрытие каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

[516] В некоторых случаях фармацевтическую композицию составляют в виде иммунолипосомы, которая содержит совокупность конъюгатов IL-10, прямо или опосредованно связанных с липидным бислоем липосом. Иллюстративные липиды включают без ограничения жирные кислоты; фосфолипиды; стерины, такие как холестерины; сфинголипиды, такие как сфингомиелин; гликосфинголипиды, такие как ганглиозиды, глобозиды и цереброзиды; амины поверхностно-активных веществ, такие как стеарил-, олеил- и линолеиламины. В некоторых случаях липид предусматривает катионный липид. В некоторых случаях липид предусматривает фосфолипид. Иллюстративные фосфолипиды включают без ограничения фосфатидную кислоту ("PA"), фосфатидилхолин ("PC"), фосфатидилглицерин ("PG"), фосфатидилэтаноламин ("PE"), фосфатидилинозитол ("PI") и фосфатидилсерин ("PS"), сфингомиелин (включая сфингомиелин головного мозга), лецитин, лизолецитин, лизофосфатидилэтаноламин, цереброзиды, диарахидоилфосфатидилхолин ("DAPC"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилхолин ("DDPC"), диелаидоилфосфатидилхолин ("DEPC"), дилауроилфосфатидилхолин ("DLPC"), дилинолеоилфосфатидилхолин, димиристоилфосфатидилхолин ("DMPC"), диолеоилфосфатидилхолин ("DOPC"), дипальмитоилфосфатидилхолин ("DPPC"), дистеароилфосфатидилхолин ("DSPC"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилхолин ("POPC"), диарахидоилфосфатидилглицерин ("DAPG"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилглицерин ("DDPG"), диелаидоилфосфатидилглицерин ("DEPG"), дилауроилфосфатидилглицерин ("DLPG"), дилинолеоилфосфатидилглицерин, димиристоилфосфатидилглицерин ("DMPG"), диолеоилфосфатидилглицерин ("DOPG"), дипальмитоилфосфатидилглицерин ("DPPG"), дистеароилфосфатидилглицерин ("DSPG"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилглицерин ("POPG"), диарахидоилфосфатидилэтаноламин ("DAPE"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилэтаноламин ("DDPE"), диелаидоилфосфатидилэтаноламин ("DEPE"), дилауроилфосфатидилэтаноламин ("DLPE"), дилинолеоилфосфатидилэтаноламин, димиристоилфосфатидилэтаноламин ("DMPE"), диолеоилфосфатидилэтаноламин ("DOPE"), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин ("DPPE"), дистеароилфосфатидилэтаноламин ("DSPE"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилэтаноламин ("POPE"), диарахидоилфосфатидилинозитол ("DAPI"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилинозитол ("DDPI"), диелаидоилфосфатидилинозитол ("DEPI"), дилауроилфосфатидилинозитол ("DLPI"), дилинолеоилфосфатидилинозитол, димиристоилфосфатидилинозитол ("DMPI"), диолеоилфосфатидилинозитол ("DOPI"), дипальмитоилфосфатидилинозитол ("DPPI"), дистеароилфосфатидилинозитол ("DSPI"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилинозитол ("POPI"), диарахидоилфосфатидилсерин ("DAPS"), дидеканоил-L-альфа-фосфатидилсерин ("DDPS"), диелаидоилфосфатидилсерин ("DEPS"), дилауроилфосфатидилсерин ("DLPS"), дилинолеоилфосфатидилсерин, димиристоилфосфатидилсерин ("DMPS"), диолеоилфосфатидилсерин ("DOPS"), дипальмитоилфосфатидилсерин ("DPPS"), дистеароилфосфатидилсерин ("DSPS"), 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилсерин ("POPS"), диарахидоилсфингомиелин, дидеканоилсфингомиелин, диелаидоилсфингомиелин, дилауроилсфингомиелин, дилинолеоилсфингомиелин, димиристоилсфингомиелин, сфингомиелин, диолеоилсфингомиелин, дипальмитоилсфингомиелин, дистеароилсфингомиелин и 1-пальмитоил-2-олеоилсфингомиелин.

[517] В некоторых случаях фармацевтические составы дополнительно предусматривают средства для доведения pH или буферные средства, которые предусматривают кислоты, такие как уксусная, борная, лимонная, молочная, фосфорная и соляная кислоты, основания, такие как гидроксид натрия, фосфат натрия, борат натрия, цитрат натрия, ацетат натрия, лактат натрия и трис-гидроксиметиламинометан, и буферы, такие как цитратный/с декстрозой, бикарбонат натрия и хлорид аммония. Такие кислоты, основания и буферы включают в количестве, необходимом для поддержания pH композиции в приемлемом диапазоне.

[518] В некоторых случаях фармацевтический состав предусматривает одну или несколько солей в количестве, необходимом для приведения осмоляльности композиции в приемлемый диапазон. Такие соли предусматривают соли, содержащие катионы натрия, калия или аммония и анионы хлорида, цитрата, аскорбата, бората, фосфата, бикарбоната, сульфата, тиосульфата или бисульфита, подходящие соли включают хлорид натрия, хлорид калия, тиосульфат натрия, бисульфит натрия и сульфат аммония.

[519] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы включают без ограничения сахара, такие как трегалоза, сахароза, маннит, сорбит, мальтоза, глюкоза, или соли, такие как фосфат калия, цитрат натрия, сульфат аммония, и/или другие средства, такие как гепарин, для повышения растворимости и стабильности полипептидов in vivo.

[520] В некоторых случаях фармацевтические составы дополнительно включают разбавитель, который применяют для стабилизации соединений, поскольку они способны обеспечить более стабильную среду. Соли, растворенные в буферных растворах (которые также способны обеспечивать контроль или поддержание pH), используют в качестве разбавителей в уровне техники, включая без ограничения забуференный фосфатом раствор хлорида натрия.

[521] Стабилизаторы предусматривают такие как любые антиоксидантные средства, буфера, кислоты, консерванты и т. п. Иллюстративные стабилизаторы предусматривают гидрохлорид L-аргинина, трометамин, альбумин (человеческий), лимонную кислоту, бензиловый спирт, фенол, дигидрат динатрия бифосфата, пропиленгликоль, метакрезол или м-крезол, ацетат цинка, полисорбат-20 или Tween® 20 или трометамол.

[522] Поверхностно-активные вещества включают такие соединения, как лаурилсульфат натрия, докузат натрия, Tween 60 или 80, триацетин, витамин E TPGS, сорбитанмоноолеат, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат, полисорбаты, полаксомеры, соли желчных кислот, глицерилмоностеарат, сополимеры этиленоксида и пропиленоксида, например Pluronic^® (BASF) и т. п. Дополнительные поверхностно-активные вещества включают полиоксиэтиленовые глицериды жирных кислот и растительных масел, например полиоксиэтиленовое (60) гидрогенизированное касторовое масло, а также алкиловые эфиры и алкилфениловые эфиры полиоксиэтилена, например октоксинол 10, октоксинол 40. Иногда поверхностно-активные вещества включают для повышения физической стабильности или для других целей.

Терапевтические режимы

[523] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе фармацевтические композиции вводят для терапевтических применений. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят ежедневно, каждый день, через день, пять дней в неделю, один раз в неделю, каждые две недели, две недели в месяц, три недели в месяц, один раз в месяц, два раза в месяц, три раза в месяц или чаще. Фармацевтическую композицию вводят в течение по меньшей мере 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 18 месяцев, 2 лет, 3 лет или более.

[524] В случае, когда состояние пациента действительно улучшается, по усмотрению врача введение композиции осуществляют непрерывно, альтернативно, дозу подлежащей введению композиции временно снижают или временно приостанавливают на определенный период времени (т. е. "перерыв в применении лекарственного средства"). В некоторых случаях продолжительность перерыва в применении лекарственного средства варьируется от 2 дней до 1 года, включая в качестве примера 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 15 дней, 20 дней, 28 дней, 35 дней, 50 дней, 70 дней, 100 дней, 120 дней, 150 дней, 180 дней, 200 дней, 250 дней, 280 дней, 300 дней, 320 дней, 350 дней или 365 дней. Снижение дозы во время перерыва в применении лекарственного средства составляет 10-100%, включая только в качестве примера 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

[525] В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в 4 недели, один раз в 5 недель, один раз в 6 недель, один раз в 7 недель, один раз в 8 недель, один раз в 9 недель, один раз в 10 недель, один раз в 11 недель, один раз в 12 недель, один раз в 13 недель, один раз в 14 недель, один раз в 15 недель, один раз в 16 недель, один раз в 17 недель, один раз в 18 недель, один раз в 19 недель, один раз в 20 недель, один раз в 21 неделю, один раз в 22 недели, один раз в 23 недели, один раз в 24 недели, один раз в 25 недель, один раз в 26 недель, один раз в 27 недель или один раз в 28 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в две недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в три недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 4 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 5 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 6 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 7 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 8 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 9 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 10 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 11 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 12 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 13 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 14 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 15 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 16 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 17 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 18 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 19 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 20 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 21 неделю. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 22 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 23 недели. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество конъюгата IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в 24 недели.

[526] В некоторых вариантах осуществления количество данного средства, которое соответствует такому количеству, варьируется в зависимости от таких факторов, как конкретное соединение, тяжесть заболевания, индивидуальные характеристики (например, вес) субъекта или хозяина, нуждающегося в лечении, но тем не менее обычно определяется способом, известным из уровня техники, в соответствии с конкретными обстоятельствами, относящимися к конкретному случаю, включая, например, конкретное подлежащее введению средство, путь введения и субъекта или хозяина, подлежащего лечению. В некоторых случаях требуемая доза обычно представлена в виде однократной дозы или разделенных доз, вводимых одновременно (или в течение короткого периода времени) или с соответствующими интервалами, например в виде двух, трех, четырех или более субдоз, в день.

[527] В некоторых вариантах осуществления способы включают введение дозы конъюгата IL-10 нуждающемуся в этом субъекту в дозе в диапазоне от 1 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 2 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 4 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 6 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 8 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 10 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 12 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 14 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 16 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 18 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 20 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 22 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 24 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 26 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 28 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 32 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 34 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 36 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 40 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 45 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 50 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 55 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 60 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 65 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 70 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 75 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 80 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 85 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 90 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 95 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 100 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 110 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 120 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 130 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 140 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 150 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 160 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 170 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 180 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, или от приблизительно 190 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта до приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта. Вышеупомянутые диапазоны являются лишь предположительными, поскольку количество переменных в отношении индивидуальной схемы лечения велико, и существенные отклонения от этих рекомендуемых значений не являются редкостью. Такие дозы изменяют в зависимости от ряда переменных, не ограничиваясь активностью применяемого соединения, заболеванием или патологическим состоянием, подлежащим лечению, способом введения, потребностями отдельного субъекта, тяжестью заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и мнением практикующего специалиста.

[528] В некоторых вариантах осуществления способы включают введение дозы конъюгата IL-10 нуждающемуся в этом субъекту в дозе, составляющей приблизительно 1 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта или приблизительно 2 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 4 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 6 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 8 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 10 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 12 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 14 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 16 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 18 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 20 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 22 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 24 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 26 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 28 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 30 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 32 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 34 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 36 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 38 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 40 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 42 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 44 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 46 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 48 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 50 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 55 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 60 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 65 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 70 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 75 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 80 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 85 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 90 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 95 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 100 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 110 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 120 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 130 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 140 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 150 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 160 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 170 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 180 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта, приблизительно 190 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта или приблизительно 200 мкг конъюгата IL-10 на кг веса тела субъекта. Вышеупомянутые диапазоны являются лишь предположительными, поскольку количество переменных в отношении индивидуальной схемы лечения велико, и существенные отклонения от этих рекомендуемых значений не являются редкостью. Такие дозы изменяют в зависимости от ряда переменных, не ограничиваясь активностью применяемого соединения, заболеванием или патологическим состоянием, подлежащим лечению, способом введения, потребностями отдельного субъекта, тяжестью заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и мнением практикующего специалиста. В некоторых вариантах осуществления токсичность и терапевтическую эффективность таких схем терапии определяют с помощью стандартных фармацевтических процедур с использованием культур клеток или экспериментальных животных, включая без ограничения определение LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз для токсических и терапевтических эффектов представляет собой терапевтический индекс и выражается в виде соотношения между LD50 и ED50. Предпочтительными являются соединения, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, полученные в анализах с применением культур клеток и в исследованиях на животных, применяются при составлении диапазона доз для применения у человека. Доза таких соединений предпочтительно находится в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED50 с минимальной токсичностью. Доза варьируется в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

[529] После улучшения состояния пациента при необходимости вводят поддерживающую дозу. Впоследствии дозу или частоту введения, или и то и другое, можно уменьшать в зависимости от симптомов до уровня, на котором поддерживается улучшение состояния при заболевании, нарушении или состоянии.

[530] В некоторых вариантах осуществления количество данного средства, которое соответствует такому количеству, варьируется в зависимости от таких факторов, как конкретное соединение, тяжесть заболевания, индивидуальные характеристики (например, вес) субъекта или хозяина, нуждающегося в лечении, но тем не менее обычно определяется способом, известным из уровня техники, в соответствии с конкретными обстоятельствами, относящимися к конкретному случаю, включая, например, конкретное подлежащее введению средство, путь введения и субъекта или хозяина, подлежащего лечению. В некоторых случаях требуемая доза обычно представлена в виде однократной дозы или разделенных доз, вводимых одновременно (или в течение короткого периода времени) или с соответствующими интервалами, например в виде двух, трех, четырех или более субдоз, в день.

[531] В некоторых вариантах осуществления доза может по меньшей мере частично определяться частотой возникновения или тяжестью нежелательных явлений 3-й или 4-й степени у субъекта. Неограничивающие примеры нежелательных явлений включают гипотермию; шок; брадикардию; желудочковую экстрасистолию; ишемию миокарда; обморок; кровоизлияние; предсердную аритмию; флебит; предсердно-желудочковую AV-блокаду второй степени; эндокардит; выпот в перикард; периферическую гангрену; тромбоз; нарушение коронарной артерии; стоматит; тошноту и рвоту; отклонение от нормы биохимических показателей функции печени; желудочно-кишечное кровоизлияния; гематемезис; геморрагический понос; желудочно-кишечное нарушение; прободение кишечника; панкреатит; анемию; лейкопению; лейкоцитоз; гипокальцемию; повышение уровня щелочной фосфатазы; повышение уровня азота мочевины в крови (BUN); гиперурикемию; повышение уровня небелкового азота (NPN); респираторный ацидоз; сонливость; возбуждение; нейропатию; параноидную реакцию; судороги; большой эпилептический припадок; делирий; астму, отек легких; гипервентиляцию; гипоксию; кровохарканье; гиповентиляцию; пневмоторакс; мидриаз; нарушение функции зрачков; нарушение функции почек; почечную недостаточность; острый канальцевый некроз; язву двенадцатиперстной кишки; некроз кишечника; миокардит; наджелудочковую тахикардию; перманентную или транзиторную слепоту на фоне неврита зрительного нерва; транзиторные ишемические атаки; менингит; отек головного мозга; перикардит; аллергический интерстициальный нефрит; трахеопищеводную фистулу; злокачественную гипертермию; остановку сердца; инфаркт миокарда; легочную эмболию; инсульт; печеночную или почечную недостаточность; тяжелую депрессию, приводящую к суициду; отек легких; остановку дыхания; дыхательную недостаточность; лейкопению, тромбоцитопению, повышение уровня аланинаминотрансферазы (ALT), анорексию, артралгию, боль в спине, озноб, диарею, дислипидемию, утомляемость, лихорадку, гриппоподобные симптомы, гипоальбуминемию, повышенный уровень липазы, реакцию в месте инъекции, миальгию, тошноту, ночную потливость, прурит, сыпь, эритематозную сыпь, пятнисто-папулезную сыпь, трансаминит, рвоту и слабость.

[532] Вышеупомянутые диапазоны являются лишь предположительными, поскольку количество переменных в отношении индивидуальной схемы лечения велико, и существенные отклонения от этих рекомендуемых значений не являются редкостью. Такие дозы изменяют в зависимости от ряда переменных, не ограничиваясь активностью применяемого соединения, заболеванием или патологическим состоянием, подлежащим лечению, способом введения, потребностями отдельного субъекта, тяжестью заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и мнением практикующего специалиста.

[533] В некоторых вариантах осуществления токсичность и терапевтическую эффективность таких схем терапии определяют с помощью стандартных фармацевтических процедур с использованием культур клеток или экспериментальных животных, включая без ограничения определение LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз для токсических и терапевтических эффектов представляет собой терапевтический индекс и выражается в виде соотношения между LD50 и ED50. Предпочтительными являются соединения, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, полученные в анализах с применением культур клеток и в исследованиях на животных, применяются при составлении диапазона доз для применения у человека. Доза таких соединений предпочтительно находится в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED50 с минимальной токсичностью. Доза варьируется в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

Наборы/изделие

[534] В данном документе в определенных вариантах осуществления раскрыты наборы и изделия для применения с одним или несколькими способами и композициями, описанными в данном документе. Такие наборы включают носитель, упаковку или контейнер, который разделен на части для размещения одного или нескольких контейнеров, таких как флаконы, пробирки и т. п., причем каждый контейнер содержит один из отдельных элементов, которые должны применяться в способе, описанном в данном документе. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы и тестовые пробирки. В одном варианте осуществления контейнеры получают из различных материалов, таких как стекло или пластик.

[535] Предусмотренные в данном документе изделия содержат упаковочные материалы. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают без ограничения блистерные упаковки, бутылки, пробирки, пакеты, контейнеры, бутылки и любой упаковочный материал, подходящий для выбранного состава и предполагаемого способа введения и лечения.

[536] Например, контейнер(-ы) включает(-ют) один или несколько полипептидов или конъюгатов IL-10, раскрытых в данном документе, и необязательно одно или несколько фармацевтических вспомогательных веществ, описанных в данном документе, для облегчения доставки полипептидов или конъюгатов IL-10. Такие наборы дополнительно необязательно включают идентифицирующее описание или этикетку, или инструкции, относящиеся к их применению в способах, описанных в данном документе.

[537] Набор обычно включает этикетки с перечнем содержимого и/или инструкциями по применению, а также листки-вкладыши с инструкциями по применению. Также обычно включают набор инструкций.

[538] В одном варианте осуществления этикетка находится на контейнере или связана с ним. В одном варианте осуществления этикетка находится на контейнере, когда буквы, числа или другие символы, образующие этикетку, прикреплены, отформованы или вытравлены на самом контейнере, при этом этикетка связана с контейнером, когда она находится внутри приспособления или держателя, который также удерживает контейнер, например, в виде листка-вкладыша. В одном варианте осуществления этикетка применяется для обозначения того, что содержимое должно применяться для конкретного терапевтического применения. Этикетка также указывает направления для применения содержимого, такие как в описанных в данном документе способах.

[539] В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции представлены в упаковке или дозирующем устройстве, которые содержат одну или несколько стандартных лекарственных форм, содержащих соединение, предусмотренное в данном документе. Упаковка, например, содержит металлическую или пластиковую фольгу, такую как блистерная упаковка. В одном варианте осуществления упаковка или дозирующее устройство сопровождается инструкциями по введению. В одном варианте осуществления упаковка или дозатор также сопровождается уведомлением, связанным с контейнером, по форме, предписанной государственным агентством, регулирующим изготовление, применение или продажу фармацевтических препаратов, причем уведомление отражает одобрение агентством формы лекарственного средства для введения человеку или в ветеринарии. Такое уведомление, например, представляет собой этикетку, одобренную Управлением по контролю за продуктами и лекарственными средствами США для лекарственных средств, или листок-вкладыш одобренного продукта. В одном варианте осуществления композиции, содержащие соединение, предусмотренное в данном документе, составленные в совместимом фармацевтическом носителе, также получают, помещают в соответствующий контейнер и маркируют для лечения указанного состояния.

[540] В некоторых вариантах осуществления наборы содержат изделия, которые применимы для разработки средств для адоптивной клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления наборы содержат один или несколько из полипептидов цитокина (например, IL-10) или конъюгатов цитокина (например, IL-10), раскрытых в данном документе, и необязательно одно или несколько фармацевтических вспомогательных веществ, описанных в данном документе, для облегчения доставки полипептидов цитокина (например, IL-10) или конъюгатов цитокина (например, IL-10). Такие наборы могут необязательно включать один или несколько вспомогательных компонентов, содержащих индукторы инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL), T-клеток, B-клеток, натуральных киллерных клеток, макрофагов, нейтрофилов, дендритных клеток, тучных клеток, эозинофилов, базофилов или T-клеток CD4+ или CD8+. Такие наборы дополнительно необязательно включают идентифицирующее описание или этикетку, или инструкции, относящиеся к их применению в способах, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления наборы содержат одну или несколько последовательностей полинуклеиновых кислот, кодирующих конъюгаты IL-10, раскрытые в данном документе, индукторы инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL), T-клеток, B-клеток, натуральных киллерных клеток, макрофагов, нейтрофилов, дендритных клеток, тучных клеток, эозинофилов, базофилов или T-клеток CD4+ или CD8+ и/или их фармацевтическую композицию.

[541] В некоторых вариантах осуществления наборы и изделия, описанные в данном документе, содержат модифицированный полипептид IL-10, содержащий по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина, содержит ароматическую боковую цепь, содержит азидогруппу, содержит алкиновую группу или содержит альдегидную или кетоновую группу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота не содержит ароматическую боковую цепь. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота содержит N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), N6-((пропаргилокси)-карбонил)-L-лизин (PraK), BCN-L-лизин, норборненлизин, TCO-лизин, метилтетразинлизин, aллилоксикарбониллизин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, 2-амино-8-оксононановую кислоту, пара-ацетил-L-фенилаланин, пара-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), пара-йод-L-фенилаланин, мета-ацетилфенилаланин, 2-амино-8-оксононановую кислоту, пара-пропаргилоксифенилаланин, пара-пропаргилфенилаланин, 3-метилфенилаланин, L-допу, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, пара-азидо-L-фенилаланин, пара-ацил-L-фенилаланин, пара-бензоил-L-фенилаланин, пара-бромфенилаланин, пара-амино-L-фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, O-аллилтирозин, O-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, три-O-ацетил-GlcNAcp-серин, L-фосфосерин, фосфоносерин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-оксопропил)амино)этил)селанил)пропановую кислоту, 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту, селеноцистеин, N6-(((2-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин, N6-(((3-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин или N6-(((4-азидобензил)окси)карбонил)-L-лизин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота содержит N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK) или N6-((пропаргилокси)-карбонил)-L-лизин (PraK). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота предусматривает N6-((пропаргилокси)-карбонил)-L-лизин (PraK).

[542] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неприродная аминокислота содержит алкин, которому обеспечивают возможность вступления в реакцию с конъюгирующим фрагментом, который содержит водорастворимый полимер, содержащий полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер предусматривает молекулу PEG

[543] В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-10 предусматривает конъюгируемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления конъюгируемый фрагмент предусматривает водорастворимый полимер, липид, белок и/или пептид. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер предусматривает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислота), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер предусматривает молекулу PEG

[544] В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-0. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает молекулу PEG, которая связана с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови PEG, размер которого меньше конъюгируемого фрагмента. В некоторых случаях конъюгируемый фрагмент предусматривает молекулу PEG, которая связана с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови PEG, размер которого превышает размер конъюгируемого фрагмента.

[545] В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигналов к сигнальному пути с участием IL-10R. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание с IL-10R или поддерживаемое связывание с IL-10R, где сниженное связывание с IL-10R сравнивают со связыванием белка IL-10 дикого типа и IL-10R.

[546] В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой линейный PEG. В некоторых вариантах осуществления молекула PEG представляет собой разветвленный PEG. В некоторых вариантах осуществления масса PEG составляет от приблизительно 2000 до 50000 дальтонов (Да). В некоторых вариантах осуществления PEG имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000 Да, 10000 Да, 15000 Да, 20000 Да, 25000 Да, 30000 Да, 35000 Да, 40000 Да, 45000 Да или 50000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 5000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 10000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 15000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 20000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 25000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 30000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 35000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 40000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 45000 Да. В некоторых случаях масса PEG составляет 50000 Да.

[547] Например, контейнер(-ы) включают один или несколько модифицированных полипептидов IL-10, содержащих подвергнутый мутации аминокислотный остаток E67, Q70, E74, E75, Q79, N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129, K130 или Q132 в положениях остатков, соответствующих 67, 70, 74, 75, 79, 82, 88, 89, 99, 125, 126, 129, 130 и 132, представленным в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид IL-10 содержит конъюгируемый фрагмент, содержащий PEG, имеющий молекулярную массу, составляющую приблизительно 2000-50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 5000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 10000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 15000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 20000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 25000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 30000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 35000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 45000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса составляет 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG определяет, по меньшей мере частично, in vivo период полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10. В некоторых случаях PEG связан с более длительным in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG меньшего размера. В некоторых случаях PEG связан с более коротким in vivo периодом полужизни в плазме крови модифицированного полипептида IL-10 по сравнению с in vivo периодом полужизни в плазме крови при PEG большего размера. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на эффективность рецепторной передачи сигналов от модифицированного полипептида IL-10 к сигнальному пути с участием IL-10R. В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса PEG не влияет или оказывает минимальное воздействие на требуемое сниженное связывание модифицированного полипептида IL-10 с IL-10R или поддерживаемое связывание с IL-10R, где сниженное связывание с IL-10R сравнивают со связыванием белка IL-10 дикого типа и IL-10R.

Иллюстративные варианты осуществления

[548] Настоящее изобретение дополнительно описано с помощью следующих вариантов осуществления. Признаки каждого варианта осуществления комбинируются с любым таковым других вариантов осуществления, где это уместно и осуществимо на практике.

[549] Вариант осуществления 1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[550] Вариант осуществления 1.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (I),

где

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ;

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой ; или

Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой ;

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[551] Вариант осуществления 2. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1 или 1.1, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[552] Вариант осуществления 3. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1 или 1.1, где Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[553] Вариант осуществления 4. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1, где Z представляет собой CH₂, и Y представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[554] Вариант осуществления 5. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1 или 1.1, где Y представляет собой CH₂, и Z представляет собой , или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[555] Вариант осуществления 6. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1 или 1.1, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[556] Вариант осуществления 7. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 6, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[557] Вариант осуществления 8. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 6, где группа PEG имеет среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[558] Вариант осуществления 9. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 1 или 1.1, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[559] Вариант осуществления 10. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 9, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, K99, N126, N129 и K130, где положение структуры формулы (I) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 относится к положениям в SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[560] Вариант осуществления 11. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[561] Вариант осуществления 11.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[562] Вариант осуществления 12. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 11 или 11.1, где [AzK_PEG] представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[563] Вариант осуществления 13. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 11 или 11.1, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[564] Вариант осуществления 14. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[565] Вариант осуществления 15. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 14, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[566] Вариант осуществления 16. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 15, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[567] Вариант осуществления 17. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 16, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[568] Вариант осуществления 18. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 16, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[569] Вариант осуществления 19. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[570] Вариант осуществления 20. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 19, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[571] Вариант осуществления 21. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 20, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[572] Вариант осуществления 22. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 21, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[573] Вариант осуществления 23. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 21, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[574] Вариант осуществления 24. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[575] Вариант осуществления 25. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 24, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[576] Вариант осуществления 26. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 25, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[577] Вариант осуществления 27. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 26, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[578] Вариант осуществления 28. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 26, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[579] Вариант осуществления 29. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[580] Вариант осуществления 30. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 29, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[581] Вариант осуществления 31. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 30, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[582] Вариант осуществления 32. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 31, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[583] Вариант осуществления 33. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 31, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[584] Вариант осуществления 34. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[585] Вариант осуществления 35. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 34, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[586] Вариант осуществления 36. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 35, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[587] Вариант осуществления 37. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 36, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[588] Вариант осуществления 38. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 36, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[589] Вариант осуществления 39. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[590] Вариант осуществления 40. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 39, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[591] Вариант осуществления 41. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 40, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[592] Вариант осуществления 42. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 41, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[593] Вариант осуществления 43. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 41, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[594] Вариант осуществления 44. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[595] Вариант осуществления 45. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 44, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[596] Вариант осуществления 46. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 45, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[597] Вариант осуществления 47. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 46, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[598] Вариант осуществления 48. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 46, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[599] Вариант осуществления 49. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 13, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[600] Вариант осуществления 50. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 49, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[601] Вариант осуществления 51. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 50, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[602] Вариант осуществления 52. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 51, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[603] Вариант осуществления 53. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 51, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[604] Вариант осуществления 54. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 11 или 11.1, где [AzK_PEG] имеет структуру формулы (III),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[605] Вариант осуществления 55. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[606] Вариант осуществления 56. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 55, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[607] Вариант осуществления 57. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 56, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[608] Вариант осуществления 58. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 57, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[609] Вариант осуществления 59. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 57, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[610] Вариант осуществления 60. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 20, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[611] Вариант осуществления 61. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 60, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[612] Вариант осуществления 62. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 61, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[613] Вариант осуществления 63. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 62, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[614] Вариант осуществления 64. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 62, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[615] Вариант осуществления 65. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[616] Вариант осуществления 66. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 65, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[617] Вариант осуществления 67. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 66, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[618] Вариант осуществления 68. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 67, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[619] Вариант осуществления 69. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 67, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[620] Вариант осуществления 70. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[621] Вариант осуществления 71. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 70, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[622] Вариант осуществления 72. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 71, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[623] Вариант осуществления 73. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 72, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[624] Вариант осуществления 74. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 72, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[625] Вариант осуществления 75. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 23, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[626] Вариант осуществления 76. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 75, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[627] Вариант осуществления 77. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 76, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[628] Вариант осуществления 78. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 77, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[629] Вариант осуществления 79. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 77, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[630] Вариант осуществления 80. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 24, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[631] Вариант осуществления 81. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 80, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[632] Вариант осуществления 82. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 81, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[633] Вариант осуществления 83. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 82, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[634] Вариант осуществления 84. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 82, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[635] Вариант осуществления 85. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 25, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[636] Вариант осуществления 86. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 85, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[637] Вариант осуществления 87. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 86, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[638] Вариант осуществления 88. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 87, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[639] Вариант осуществления 89. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 87, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[640] Вариант осуществления 90. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 54, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[641] Вариант осуществления 91. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 90, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[642] Вариант осуществления 92. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 91, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[643] Вариант осуществления 93. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 92, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[644] Вариант осуществления 94. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 92, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[645] Вариант осуществления 95. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-94, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[646] Вариант осуществления 96. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-94, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[647] Вариант осуществления 97. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-94, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[648] Вариант осуществления 98. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-94, где W представляет собой метокси-PEG-группу, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[649] Вариант осуществления 99. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 98, где метокси-PEG-группа является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[650] Вариант осуществления 100. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 98, где метокси-PEG-группа является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[651] Вариант осуществления 101. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 98, где метокси-PEG-группа является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[652] Вариант осуществления 102. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[653] Вариант осуществления 102.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[654] Вариант осуществления 103. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[655] Вариант осуществления 104. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[656] Вариант осуществления 105. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[657] Вариант осуществления 106. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[658] Вариант осуществления 107. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[659] Вариант осуществления 108. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[660] Вариант осуществления 109. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[661] Вариант осуществления 110. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[662] Вариант осуществления 111. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где [AzK_PEG20kDa] имеет структуру формулы (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[663] Вариант осуществления 112. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[664] Вариант осуществления 113. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[665] Вариант осуществления 114. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[666] Вариант осуществления 115. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[667] Вариант осуществления 116. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[668] Вариант осуществления 117. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[669] Вариант осуществления 118. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[670] Вариант осуществления 119. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 111, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[671] Вариант осуществления 120. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 102 или 102.1, где [AzK_PEG20kDa] имеет структуру формулы (III),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[672] Вариант осуществления 121. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[673] Вариант осуществления 122. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[674] Вариант осуществления 123. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[675] Вариант осуществления 124. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[676] Вариант осуществления 125. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[677] Вариант осуществления 126. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[678] Вариант осуществления 127. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[679] Вариант осуществления 128. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 120, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[680] Вариант осуществления 129. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[681] Вариант осуществления 129.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] имеет структуру формулы (II), формулы (III) или представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[682] Вариант осуществления 130. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 35, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[683] Вариант осуществления 131. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 36, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[684] Вариант осуществления 132. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[685] Вариант осуществления 133. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[686] Вариант осуществления 134. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[687] Вариант осуществления 135. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[688] Вариант осуществления 136. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[689] Вариант осуществления 137. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[690] Вариант осуществления 138. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где [AzK_PEG30kDa] имеет структуру формулы (II),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[691] Вариант осуществления 139. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 35, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[692] Вариант осуществления 140. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 36, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[693] Вариант осуществления 141. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[694] Вариант осуществления 142. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[695] Вариант осуществления 143. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[696] Вариант осуществления 144. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[697] Вариант осуществления 145. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[698] Вариант осуществления 146. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 138, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[699] Вариант осуществления 147. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 129 или 129.1, где [AzK_PEG30kDa] имеет структуру формулы (III),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[700] Вариант осуществления 148. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 35, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[701] Вариант осуществления 149. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 36, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[702] Вариант осуществления 150. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[703] Вариант осуществления 151. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[704] Вариант осуществления 152. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[705] Вариант осуществления 153. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 40, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[706] Вариант осуществления 154. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[707] Вариант осуществления 155. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 147, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[708] Вариант осуществления 156. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[709] Вариант осуществления 156.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 19-26, где [AzK_PEG] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[710] Вариант осуществления 157. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 156 или 156.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[711] Вариант осуществления 158. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 156 или 156.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1.

[712] Вариант осуществления 159. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 156 или 156.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[713] Вариант осуществления 160. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 156-159, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[714] Вариант осуществления 161. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 156-159, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[715] Вариант осуществления 162. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 156-159, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[716] Вариант осуществления 163. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 156-159, где W представляет собой метокси-PEG-группу, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[717] Вариант осуществления 164. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 163, где метокси-PEG-группа является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[718] Вариант осуществления 165. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 164, где метокси-PEG-группа является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[719] Вариант осуществления 166. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 164, где метокси-PEG-группа является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[720] Вариант осуществления 167. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[721] Вариант осуществления 167.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 27-34, где [AzK_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[722] Вариант осуществления 168. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 167 или 167.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[723] Вариант осуществления 169. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 167 или 167.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1.

[724] Вариант осуществления 170. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 167 или 167.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[725] Вариант осуществления 171. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[726] Вариант осуществления 171.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 35-42, где [AzK_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (II) и формулы (III),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[727] Вариант осуществления 172. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 171 или 171.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[728] Вариант осуществления 173. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 171 или 171.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1.

[729] Вариант осуществления 174. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 171 или 171.1, где соотношение количества структуры формулы (II) и количества структуры формулы (III), составляющих общее количество [AzK_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[730] Вариант осуществления 175. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 59-66, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[731] Вариант осуществления 175.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 59-66, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа и 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[732] Вариант осуществления 176. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 175 или 175.1, где [AzK_L1_PEG] представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V), или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[733] Вариант осуществления 177. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 175 или 175.1, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (IV),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[734] Вариант осуществления 178. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[735] Вариант осуществления 179. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 178, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[736] Вариант осуществления 180. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 179, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[737] Вариант осуществления 181. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 180, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[738] Вариант осуществления 182. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 180, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[739] Вариант осуществления 183. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[740] Вариант осуществления 184. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 183, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[741] Вариант осуществления 185. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 184, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[742] Вариант осуществления 186. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 185, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[743] Вариант осуществления 187. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 185, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[744] Вариант осуществления 188. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[745] Вариант осуществления 189. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 188, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[746] Вариант осуществления 190. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 189, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[747] Вариант осуществления 191. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 190, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[748] Вариант осуществления 192. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 190, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[749] Вариант осуществления 193. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[750] Вариант осуществления 194. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 193, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[751] Вариант осуществления 195. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 194, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[752] Вариант осуществления 196. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 195, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[753] Вариант осуществления 197. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 195, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[754] Вариант осуществления 198. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[755] Вариант осуществления 199. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 198, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[756] Вариант осуществления 200. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 199, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[757] Вариант осуществления 201. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 200, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[758] Вариант осуществления 202. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 200, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[759] Вариант осуществления 203. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[760] Вариант осуществления 204. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 203, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[761] Вариант осуществления 205. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 204, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[762] Вариант осуществления 206. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 205, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[763] Вариант осуществления 207. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 205, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[764] Вариант осуществления 208. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[765] Вариант осуществления 209. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 208, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[766] Вариант осуществления 210. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 209, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[767] Вариант осуществления 211. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 210, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[768] Вариант осуществления 212. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 210, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[769] Вариант осуществления 213. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 177, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[770] Вариант осуществления 214. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 213, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[771] Вариант осуществления 215. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 214, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[772] Вариант осуществления 216. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 215, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[773] Вариант осуществления 217. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 215, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[774] Вариант осуществления 218. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 175 или 175.1, где [AzK_L1_PEG] имеет структуру формулы (V),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[775] Вариант осуществления 219. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[776] Вариант осуществления 220. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 219, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[777] Вариант осуществления 221. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 220, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[778] Вариант осуществления 222. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 221, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[779] Вариант осуществления 223. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 221, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[780] Вариант осуществления 224. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[781] Вариант осуществления 225. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 224, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[782] Вариант осуществления 226. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 225, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[783] Вариант осуществления 227. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 226, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[784] Вариант осуществления 228. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 226, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[785] Вариант осуществления 229. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[786] Вариант осуществления 230. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 229, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[787] Вариант осуществления 231. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 230, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[788] Вариант осуществления 232. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 231, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[789] Вариант осуществления 233. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 231, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[790] Вариант осуществления 234. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[791] Вариант осуществления 235. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 234, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[792] Вариант осуществления 236. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 235, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[793] Вариант осуществления 237. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 236, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[794] Вариант осуществления 238. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 236, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[795] Вариант осуществления 239. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 63, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[796] Вариант осуществления 240. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 239, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[797] Вариант осуществления 241. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 240, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[798] Вариант осуществления 242. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 241, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[799] Вариант осуществления 243. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 241, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[800] Вариант осуществления 244. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 64, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[801] Вариант осуществления 245. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 244, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[802] Вариант осуществления 246. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 245, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[803] Вариант осуществления 247. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 246, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[804] Вариант осуществления 248. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 246, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[805] Вариант осуществления 249. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 65, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[806] Вариант осуществления 250. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 249, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[807] Вариант осуществления 251. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 250, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[808] Вариант осуществления 252. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 251, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[809] Вариант осуществления 253. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 251, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[810] Вариант осуществления 254. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 218, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 66, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[811] Вариант осуществления 255. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 254, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[812] Вариант осуществления 256. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 255, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу, выбранную из 20 кДа и 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[813] Вариант осуществления 257. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 256, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[814] Вариант осуществления 258. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 256, где W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[815] Вариант осуществления 259. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 175-258, где W представляет собой линейную или разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[816] Вариант осуществления 260. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 178-258, где W представляет собой линейную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[817] Вариант осуществления 261. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 175-258, где W представляет собой разветвленную группу PEG, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[818] Вариант осуществления 262. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 175-258, где W представляет собой метокси-PEG-группу, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[819] Вариант осуществления 263. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 262, где метокси-PEG-группа является линейной или разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[820] Вариант осуществления 264. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 263, где метокси-PEG-группа является линейной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[821] Вариант осуществления 265. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 263, где метокси-PEG-группа является разветвленной, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[822] Вариант осуществления 266. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[823] Вариант осуществления 266.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[824] Вариант осуществления 267. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[825] Вариант осуществления 268. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[826] Вариант осуществления 269. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[827] Вариант осуществления 270. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[828] Вариант осуществления 271. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[829] Вариант осуществления 272. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[830] Вариант осуществления 273. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[831] Вариант осуществления 274. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[832] Вариант осуществления 275. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (IV),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[833] Вариант осуществления 276. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[834] Вариант осуществления 277. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[835] Вариант осуществления 278. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[836] Вариант осуществления 279. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[837] Вариант осуществления 280. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[838] Вариант осуществления 281. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[839] Вариант осуществления 282. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[840] Вариант осуществления 283. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 275, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[841] Вариант осуществления 284. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 266 или 266.1, где [AzK_L1_PEG20kDa] имеет структуру формулы (V),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[842] Вариант осуществления 285. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 43, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[843] Вариант осуществления 286. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[844] Вариант осуществления 287. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[845] Вариант осуществления 288. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 46, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[846] Вариант осуществления 289. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[847] Вариант осуществления 290. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[848] Вариант осуществления 291. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 49, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[849] Вариант осуществления 292. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 284, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[850] Вариант осуществления 293. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[851] Вариант осуществления 293.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV), формулы (V) или представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[852] Вариант осуществления 294. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[853] Вариант осуществления 295. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[854] Вариант осуществления 296. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[855] Вариант осуществления 297. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[856] Вариант осуществления 298. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 55, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[857] Вариант осуществления 299. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 56, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[858] Вариант осуществления 300. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 57, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[859] Вариант осуществления 301. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 58, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[860] Вариант осуществления 302. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (IV),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[861] Вариант осуществления 303. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[862] Вариант осуществления 304. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[863] Вариант осуществления 305. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[864] Вариант осуществления 306. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[865] Вариант осуществления 307. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 55, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[866] Вариант осуществления 308. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 56, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[867] Вариант осуществления 309. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 57, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[868] Вариант осуществления 310. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 302, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 58, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[869] Вариант осуществления 311. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 293 или 293.1, где [AzK_L1_PEG30kDa] имеет структуру формулы (V),

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[870] Вариант осуществления 312. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[871] Вариант осуществления 313. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[872] Вариант осуществления 314. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[873] Вариант осуществления 315. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 54, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[874] Вариант осуществления 316. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 55, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[875] Вариант осуществления 317. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 56, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[876] Вариант осуществления 318. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 57, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[877] Вариант осуществления 319. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 311, где конъюгат IL-10 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 58, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[878] Вариант осуществления 320. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[879] Вариант осуществления 320.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 43-50, где [AzK_L1_PEG20kDa] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 20 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[880] Вариант осуществления 321. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 320 или 320.1, где соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[881] Вариант осуществления 322. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 320 или 320.1, где соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1.

[882] Вариант осуществления 323. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 320 или 320.1, где соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_PEG20kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее 1:1.

[883] Вариант осуществления 324. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[884] Вариант осуществления 324.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 51-58, где [AzK_L1_PEG30kDa] представляет собой смесь структур формулы (IV) и формулы (V),

где

W представляет собой группу PEG, имеющую среднюю молекулярную массу 30 кДа;

q равняется 1, 2 или 3; и

X имеет структуру

; или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[885] Вариант осуществления 325. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 324 или 324.1, где соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[886] Вариант осуществления 326. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 324 или 324.1, где соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет более 1:1.

[887] Вариант осуществления 327. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 324 или 324.1, где соотношение количества структуры формулы (IV) и количества структуры формулы (V), составляющих общее количество [AzK_L1_PEG30kDa] в конъюгате IL-10, составляет менее чем 1:1.

[888] Вариант осуществления 328. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII),

где

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов; и

X имеет структуру ,

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[889] Вариант осуществления 328.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VI), формулы (VII) или смесью формулы (VI) и формулы (VII),

где

q равняется 1, 2 или 3;

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов; и

X имеет структуру ,

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[890] Вариант осуществления 329. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 328 или 328.1, где положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[891] Вариант осуществления 330. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 329, где положение структуры формулы (VI), формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, K99, N126, N129 и K130, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[892] Вариант осуществления 331. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 328-330, где соотношение количества структуры формулы (VI) и количества структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[893] Вариант осуществления 332. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 328-330, где соотношение количества структуры формулы (VI) и количества структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1.

[894] Вариант осуществления 333. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 328-330, где соотношение количества структуры формулы (VI) и количества структуры формулы (VII), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[895] Вариант осуществления 334. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 328-333, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов.

[896] Вариант осуществления 335. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 334, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[897] Вариант осуществления 336. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 334, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 25000 дальтонов.

[898] Вариант осуществления 337. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 334, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 7500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[899] Вариант осуществления 338. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 334, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 20000 дальтонов.

[900] Вариант осуществления 339. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 328 или 328.1, где положение структуры формулы (VI) или формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, N129 и K130, и где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 7500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[901] Вариант осуществления 340. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 339, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 20000 дальтонов.

[902] Вариант осуществления 341. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 340, где положение структуры формулы (VI) или формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N82.

[903] Вариант осуществления 342. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 340, где положение структуры формулы (VI) или формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K88.

[904] Вариант осуществления 343. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 340, где положение структуры формулы (VI) или формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой A89.

[905] Вариант осуществления 344. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 340, где положение структуры формулы (VI) или формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N129.

[906] Вариант осуществления 345. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 340, где положение структуры формулы (VI) или формулы (VII) или смеси формулы (VI) и формулы (VII) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K130.

[907] Вариант осуществления 346. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII) или формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX),

где

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов; и

X имеет структуру ,

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[908] Вариант осуществления 346.1. Конъюгат IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в конъюгате IL-10 заменен структурой формулы (VIII) или формулы (IX) или смесью формулы (VIII) и формулы (IX),

где

q равняется 1, 2 или 3;

n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 60000 дальтонов; и

X имеет структуру ,

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[909] Вариант осуществления 347. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 346 или 346.1, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, K99, K125, N126, N129 и K130, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[910] Вариант осуществления 348. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 346 или 346.1, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX), или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, K99, N126, N129 и K130, или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[911] Вариант осуществления 349. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 346-348, где соотношение количества структуры формулы (VIII) и количества структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет приблизительно 1:1.

[912] Вариант осуществления 350. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 346-348, где соотношение количества структуры формулы (VIII) и количества структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет более 1:1.

[913] Вариант осуществления 351. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 346-348, где соотношение количества структуры формулы (VIII) и количества структуры формулы (IX), содержащихся в общем количестве конъюгата IL-10, составляет менее 1:1.

[914] Вариант осуществления 352. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 346-351, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 40000 дальтонов.

[915] Вариант осуществления 353. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 352, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[916] Вариант осуществления 354. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 352, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 5000 дальтонов до приблизительно 25000 дальтонов.

[917] Вариант осуществления 355. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 352, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 7500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[918] Вариант осуществления 356. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 352, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 20000 дальтонов.

[919] Вариант осуществления 357. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 346 или 346.1, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 выбрано из N82, K88, A89, N129 и K130, и где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 7500 дальтонов до приблизительно 30000 дальтонов.

[920] Вариант осуществления 358. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 357, где n представляет собой такое целое число, что молекулярная масса группы PEG составляет от приблизительно 10000 дальтонов до приблизительно 20000 дальтонов.

[921] Вариант осуществления 359. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 358, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N82.

[922] Вариант осуществления 360. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 358, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K88.

[923] Вариант осуществления 361. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 358, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой A89.

[924] Вариант осуществления 362. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 358, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой N129.

[925] Вариант осуществления 363. Конъюгат IL-10 согласно варианту осуществления 358, где положение структуры формулы (VIII) или формулы (IX) или смеси формулы (VIII) и формулы (IX) в аминокислотной последовательности конъюгата IL-10 представляет собой K130.

[926] Вариант осуществления 364. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363.

[927] Вариант осуществления 365. Способ согласно варианту осуществления 364, где рак представляет собой солидную опухоль или гемобластоз.

[928] Вариант осуществления 366. Способ согласно варианту осуществления 365, где рак представляет собой солидную опухоль.

[929] Вариант осуществления 367. Способ согласно варианту осуществления 366, где солидная опухоль представляет собой метастатический рак.

[930] Вариант осуществления 368. Способ согласно варианту осуществления 366, где солидная опухоль представляет собой рецидивный или рефрактерный рак в результате предшествующего лечения.

[931] Вариант осуществления 369. Способ согласно любому из вариантов осуществления 364-368, где рак у субъекта выбран из почечно-клеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного мозга, рака молочной железы, колоректального рака, рака пищевода, рака глаза, рака головы и шеи, рака почки, рака легкого, меланомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, плоскоклеточной карциномы, рака поджелудочной железы и рака предстательной железы.

[932] Вариант осуществления 370. Способ согласно варианту осуществления 364, где рак у субъекта выбран из почечно-клеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), классической лимфомы Ходжкина (cHL), первичной медиастинальной B-крупноклеточной лимфомы (PMBCL), уротелиальной карциномы, рака с микросателлитной нестабильностью, рака с микросателлитной стабильностью, колоректального рака с микросателлитной стабильностью, рака желудка, рака шейки матки, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), меланомы, мелкоклеточного рака легкого (SCLC), рака пищевода, глиобластомы, мезотелиомы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака яичника, опухолей с мутационной нагрузкой от умеренной до низкой, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC), плоскоклеточного рака кожи (SCSC), опухолей с экспрессией PD-L1 от низкой до отсутствующей, опухолей, системно диссеминирующих в печень и ЦНС, за пределы их первичного участка анатомического происхождения, и диффузной B-крупноклеточной лимфомы.

[933] Вариант осуществления 371. Способ согласно варианту осуществления 364, где рак у субъекта представляет собой гематологическое злокачественное новообразование.

[934] Вариант осуществления 372. Способ согласно варианту осуществления 371, где гематологическое злокачественное новообразование предусматривает лейкоз, лимфому или миелому.

[935] Вариант осуществления 373. Способ согласно варианту осуществления 371, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой T-клеточное злокачественное новообразование.

[936] Вариант осуществления 374. Способ согласно варианту осуществления 371, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой В-клеточное злокачественное новообразование.

[937] Вариант осуществления 375. Способ согласно варианту осуществления 371, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой метастатическое злокачественное новообразование.

[938] Вариант осуществления 376. Способ согласно варианту осуществления 371, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рецидивирующее гематологическое злокачественное новообразование.

[939] Вариант осуществления 377. Способ согласно варианту осуществления 371, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой рефрактерное злокачественное новообразование.

[940] Вариант осуществления 378. Способ согласно варианту осуществления 371, где рак представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), фолликулярную лимфому (FL), диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), макроглобулинемию Вальденстрема, множественную миелому, экстранодальную В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, нодальную В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, лимфому Беркитта, В-клеточную неберкиттовскую лимфому высокой степени злокачественности, первичную медиастинальную B-клеточную лимфому (PMBL), иммунобластную крупноклеточную лимфому, В-лимфобластную лимфому из клеток-предшественников, пролимфоцитарный В-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарную лимфому, лимфому из клеток краевой зоны селезенки, плазмоклеточную миелому, плазмоцитому, медиастинальную (тимическую) крупноклеточную В-клеточную лимфому, внутрисосудистую крупноклеточную В-клеточную лимфому, первичную эффузионную лимфому или лимфоматоидный гранулематоз.

[941] Вариант осуществления 379. Способ согласно любому из вариантов осуществления 364-378, где способ дополнительно включает введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества одного или нескольких дополнительных средств.

[942] Вариант осуществления 380. Способ согласно варианту осуществления 379, где одно или несколько дополнительных средств представляют собой один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа, выбранных из группы, состоящей из ингибиторов PD-1, ингибиторов PD-L1, ингибиторов PD-L2, ингибиторов CTLA-4, агонистов OX40 и агонистов 4-1BB.

[943] Вариант осуществления 381. Способ согласно варианту осуществления 380, где один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа выбраны из ингибиторов PD-1.

[944] Вариант осуществления 382. Способ согласно варианту осуществления 381, где один или несколько ингибиторов PD-1 выбраны из пембролизумаба, ниволумаба, цемиплимаба, ламбролизумаба, AMP-224, синтилимаба, торипалимаба, камрелизумаба, тислелизумаба, достарлимаба (GSK), PDR001 (Novartis), MGA012 (Macrogenics/Incyte), GLS-010 (Arcus/Wuxi), AGEN2024 (Agenus), цетрелимаба (Janssen), ABBV-181 (Abbvie), AMG-404 (Amgen), BI-754091 (Boehringer Ingelheim), CC-90006 (Celgene), JTX-4014 (Jounce), PF-06801591 (Pfizer) и генолимзумаба (Apollomics/Genor BioPharma).

[945] Вариант осуществления 383. Способ согласно варианту осуществления 380, где один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа выбраны из ингибиторов PD-L1.

[946] Вариант осуществления 384. Способ согласно варианту осуществления 383, где ингибиторы PD-L1 выбраны из атезолизумаба, авелумаба, дурвалумаба, ASC22 (Alphamab/Ascletis), CX-072 (Cytomx), CS1001 (Cstone), косибелимаба (Checkpoint Therapeutics), INCB86550 (Incyte) и TG-1501 (TG Therapeutics).

[947] Вариант осуществления 385. Способ согласно варианту осуществления 380, где один или несколько ингибиторов контрольных точек иммунного ответа выбраны из ингибиторов CTLA-4.

[948] Вариант осуществления 386. Способ согласно варианту осуществления 385, где ингибиторы CTLA-4 выбраны из тремелимумаба, ипилимумаба и AGEN-1884 (Agenus).

[949] Вариант осуществления 387. Способ согласно варианту осуществления 379, где одно или несколько дополнительных средств содержат фолиниевую кислоту, 5-фторурацил и оксалиплатин.

[950] Вариант осуществления 388. Способ согласно варианту осуществления 387, где рак представляет собой рак поджелудочной железы.

[951] Вариант осуществления 389. Способ согласно варианту осуществления 388, где рак поджелудочной железы представляет собой аденокарциному протоков поджелудочной железы (PDAC).

[952] Вариант осуществления 390. Способ лечения фиброзного нарушения у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363.

[953] Вариант осуществления 391. Способ согласно варианту осуществления 390, где фиброзное нарушение у субъекта выбрано из фиброза печени, идиопатического легочного фиброза и перипортального фиброза.

[954] Вариант осуществления 392. Способ согласно варианту осуществления 391, где фиброзное нарушение у субъекта представляет собой фиброз печени.

[955] Вариант осуществления 393. Способ согласно варианту осуществления 391, где фиброзное нарушение у субъекта представляет собой идиопатический легочный фиброз.

[956] Вариант осуществления 394. Способ согласно варианту осуществления 391, где фиброзное нарушение у субъекта представляет собой перипортальный фиброза.

[957] Вариант осуществления 395. Способ лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH) у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363.

[958] Вариант осуществления 396. Способ лечения неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD) у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества конъюгата IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363.

[959] Вариант осуществления 397. Способ согласно любому из вариантов осуществления 364-396, где введение эффективного количества IL-10 нуждающемуся в этом субъекту не вызывает у субъекта нежелательное явление 3-й или 4-й степени.

[960] Вариант осуществления 398. Способ согласно варианту осуществления 397, где нежелательное явление 3-й или 4-й степени выбрано из анемии, лейкопении, тромбоцитопении, повышенного уровня ALT, анорексии, артралгии, боли в спине, озноба, диареи, дислипидемии, утомляемости, лихорадки, гриппоподобных симптомов, гипоальбуминемии, повышенного уровня липазы, реакции в месте инъекции, миальгии, тошноты, ночной потливости, прурита, сыпи, эритематозной сыпи, пятнисто-папулезной сыпи, трансаминита, рвоты и слабости.

[961] Вариант осуществления 399. Способ согласно варианту осуществления 398, где нежелательное явление 3-й или 4-й степени выбрано из анемии, лейкопении, тромбоцитопении, эритематозной сыпи и пятнисто-папулезной сыпи.

[962] Вариант осуществления 400. Способ согласно варианту осуществления 399, где нежелательное явление 3-й или 4-й степени выбрано из анемии, тромбоцитопении, эритематозной сыпи и пятнисто-папулезной сыпи.

[963] Вариант осуществления 401. Способ согласно варианту осуществления 400, где нежелательное явление 3-й или 4-й степени выбрано из анемии и тромбоцитопении.

[964] Вариант осуществления 402. Способ согласно варианту осуществления 401, где нежелательное явление 3-й или 4-й степени представляет собой анемию.

[965] Вариант осуществления 403. Способ согласно варианту осуществления 401, где нежелательное явление 3-й или 4-й степени представляет собой тромбоцитопению.

[966] Вариант осуществления 404. Способ согласно любому из вариантов осуществления 364-403, где введение эффективного количества конъюгата IL-10 группе субъектов не вызывает одного или нескольких нежелательных явлений 4-й степени у более чем 1% субъектов после введения конъюгата IL-10 субъектам.

[967] Вариант осуществления 405. Способ согласно любому из вариантов осуществления 364-404, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в 4 недели, один раз в 5 недель, один раз в 6 недель, один раз в 7 недель или один раз в 8 недель.

[968] Вариант осуществления 406. Способ согласно варианту осуществления 405, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели или один раз в 4 недели.

[969] Вариант осуществления 407. Способ согласно варианту осуществления 406, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в сутки, два раза в сутки, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели или один раз в 4 недели.

[970] Вариант осуществления 408. Способ согласно варианту осуществления 407, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в сутки.

[971] Вариант осуществления 409. Способ согласно варианту осуществления 407, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю.

[972] Вариант осуществления 410. Способ согласно варианту осуществления 407, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в две недели.

[973] Вариант осуществления 411. Способ согласно варианту осуществления 407, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в три недели.

[974] Вариант осуществления 412. Способ согласно варианту осуществления 407, где конъюгат IL-10 вводят нуждающемуся в этом субъекту один раз в четыре недели.

[975] Вариант осуществления 413. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363 или способ согласно любому из вариантов осуществления 364-412, где конъюгат IL-2 представляет собой фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат.

[976] Вариант осуществления 414. Конъюгат IL-10 для применения в способе согласно любому из вариантов осуществления 364-412.

[977] Вариант осуществления 415. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363 или способ согласно любому из вариантов осуществления 364-412, где q равняется 1 в конъюгате IL-10.

[978] Вариант осуществления 416. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363 или способ согласно любому из вариантов осуществления 364-412, где q равняется 2 в конъюгате IL-10.

[979] Вариант осуществления 417. Конъюгат IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363 или способ согласно любому из вариантов осуществления 364-412, где q равняется 3 в конъюгате IL-10.

[980] Вариант осуществления 418. Применение конъюгата IL-10 согласно любому из вариантов осуществления 1-363 или 415-417 для изготовления лекарственного препарата для лечения рака, фиброзного нарушения, NASH или NAFLD в соответствии со способом согласно любому из вариантов осуществления 364-412.

ПРИМЕРЫ

[981] Данные примеры представлены исключительно в иллюстративных целях и не ограничивают объем представленной в данном документе формулы изобретения.

ПРИМЕР 1

[982] Биохимические взаимодействия пегилированного IL-10 с рецептором IL-10 человека

[983] Кинетические и равновесные константы диссоциации для взаимодействия пегилированного соединения IL-10 с рецептором IL-10 человека измеряли с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR) посредством Biosensor Tools LLC. Для этих исследований внеклеточный домен IL-10R, слитый с Fc IgG1 человека, фиксировали на поверхности покрытого белком А биосенсорного чипа CM4. Поверхность зондировали в двух повторностях с помощью серии двухкратных разбавлений, начиная с 2 мкМ либо нативного IL-10 (также называемого в данном документе "природным IL-10" или "IL-10 дикого типа"), либо мутеинов IL-10 с применением Biacore 2000 или подобного прибора для SPR. Тестовые образцы вводили в течение 60 с или больше для обеспечения измерения ассоциации до достижения плато, после чего применяли только буфер (отмывка) в течение 30 с или больше для измерения диссоциации. Единицы ответа (отн. ед., ось Y) наносили на график в зависимости от времени (с, ось X).

[984] Ex-vivo определение профиля иммунного ответа для мутеина IL-10 в образцах PBMC, полученных из системы удаления первичных лейкоцитов человека (LRS)

[985] Для определения того, как разная рецепторная специфичность мутеинов IL-10 влияет на активацию субпопуляций первичных иммунных клеток, осуществляли определение профиля зависимости "концентрация-ответ" для активации лимфоцитов в образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) человека, полученных из LRS, с помощью многоцветной проточной цитометрии. Эти исследования выполняли посредством PrimityBio LLC (Фримонт, штат Калифорния, США). Свежие образцы, полученные из LRS, обрабатывали либо нативным IL-10, либо мутеином IL-10 в серии 5-кратных разбавлений, начиная с максимальной концентрации 30 мкг/мл. После 45 минут инкубации образцы фиксировали и окрашивали антителами для выявления фосфорилированной формы фактора транскрипции STAT3 (pSTAT3), являющейся маркером вышележащего привлечения и активации сигнальных комплексов рецептора IL-10, и панели поверхностных маркеров (таблица 3) для отслеживания образования pSTAT3 в субпопуляциях специфических Т-клеток и натуральных киллерных (NK) клеток.

Таблица 3. Панель окрашивания для исследования с помощью проточной цитометрии образцов PBMC, полученных с помощью LRS Тип клеток Маркерный профиль Эффекторные T-клетки (Teff) CD3+, CD4+, CD8+, CD127+ NK-клетки CD3-, CD16+ Регуляторные T-клетки (Treg) CD3+, CD4+, CD8-, IL-2Rα+, CD127-

ПРИМЕР 2

[986] Пегилированные соединения IL-10 получали в виде гомогенных дипегелированных димеров

[987] Образцы конъюгатов IL-10, соответствующих SEQ ID NO: 43, 46, 47, 49, 50 и 59, меченных N-концевым [His], которые определены выше (соответствующих соединению A, соединению B, соединению C, соединению D, соединению E и соединению F, соответственно; для соединения F, в данном случае и в других случаях PEG составлял 10 кДа) получали с помощью способов, описанных в данном документе. Образцы конъюгатов IL-10, соответствующих SEQ ID NO: 43 и 49, в которых N-концевой [His] удаляли (соответствующих соединению G и H, соответственно) получали с помощью способов, описанных в данном документе. Соединения A-H содержат [AzK_L1_PEG] и как таковые характеризуются структурой формулы (IV), или формулы (V), или формулы (XII), или формулы (XIII), где присутствует заместитель q, и q равняется 3.

Краткое изложение структурных особенностей соединений A-H представлено в таблице 3-A.

Таблица 3-A. Краткое изложение структурных особенностей соединений A-H. Соединение Релевантная SEQ ID NO: Аминокислотный остаток, замещенный неприродной аминокислотой Молекулярная масса PEG (кДа) Метка [His], присутствующая на N-конце или непосредственно после исходного метионина A 43 N82 20 Да B 46 K99 20 Да C 47 K125 20 Да D 49 N129 20 Да E 50 K130 20 Да F 59 N82 10 Да G 43 N82 20 Нет H 49 N129 20 Нет

[His] указывает на последовательность, содержащую His-метку и сайт распознавания TEV, которые определены выше.

[988] Вкратце, конъюгаты IL-10 экспрессировали в виде телец включения в E. coli с применением способов, раскрытых в данном документе, при этом получали плазмиды экспрессии, кодирующие белок с требуемой аминокислотной последовательностью, которые содержали (a) неприродную пару оснований, содержащую первый неприродный нуклеотид и второй неприродный нуклеотид, для обеспечения наличия кодона в требуемом положении, в которое включали неприродную аминокислоту N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK), и соответствующего антикодона в tRNA, (b) плазмиду, кодирующую tRNA, полученную из Pyl M. mazei , которая содержит неприродный нуклеотид для обеспечения наличия соответствующего антикодона вместо своей нативной последовательности, (c) плазмиду, кодирующую пирролизил-tRNA-синтетазу, полученную из M. barkeri (MbPylRS), и (d) N6-((2-азидоэтокси)-карбонил)-L-лизин (AzK). Двухнитевой олигонуклеотид, который кодирует аминокислотную последовательность требуемого варианта IL-10, содержащего кодон AXC, например, в положении 82, 88, 89, 99, 125, 126, 129 или 130 последовательности, которая кодирует белок под SEQ ID NO: 1, где X представляет собой неприродный нуклеотид, раскрытый в данном документе. В некоторых вариантах осуществления клетка дополнительно содержит плазмиду, которая может представлять собой плазмиду экспрессии белка или другую плазмиду, которая кодирует ген ортогональной tRNA из M. mazei, которая содержит антикодон GYT, соответствующий AXC, вместо своей нативной последовательности, где Y представляет собой неприродный нуклеотид, раскрытый в данном документе, и может быть таким же, как неприродный нуклеотид в кодоне, или отличаться от него. X и Y выбраны из неприродных нуклеотидов dTPT3TP, dNaMTP и dCNMOTP, раскрытых в данном документе. Экспрессируемый белок очищали и подвергали рефолдингу с использованием стандартных процедур перед сайт-специфическим пегилированием AzK-содержащего продукта IL-10 с помощью DBCO-опосредованной клик-химии без использования меди для стабильного ковалентного присоединения фрагментов mPEG к AzK, который указан на схеме 6b, где q равняется 3.

[989] В некоторых вариантах осуществления природный His-TEV-IL-10 имеет нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 75:

ATGCATCATCACCATCATCATGGTAGCAGCGAAAATCTGTATTTTCAGAGCCCTGGTCAGGGCACCCAGAGCGAAAATTCATGTACCCATTTTCCGGGTAATCTGCCGAATATGCTGCGCGATCTGCGTGATGCATTTAGCCGTGTTAAAACCTTTTTCCAGATGAAAGATCAGCTGGATAATCTGCTGCTGAAAGAAAGCCTGCTGGAAGATTTCAAAGGTTATCTGGGTTGTCAGGCACTGAGCGAAATGATTCAGTTTTATCTGGAAGAAGTTATGCCGCAGGCAGAAAATCAGGATCCGGATATTAAAGCACATGTTAATAGCCTGGGCGAAAATCTGAAAACCCTGCGTCTGCGCCTGCGTCGTTGTCATCGTTTTCTGCCGTGTGAAAACAAAAGCAAAGCAGTTGAACAGGTGAAAAACGCCTTTAACAAACTGCAAGAGAAAGGCATCTATAAAGCCATGAGCGAATTCGACATCTTCATCAACTATATCGAAGCCTACATGACCATGAAAATCCGCAATTAA

[990] В некоторых вариантах осуществления природный IL-10 имеет нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 76:

ATGAGCCCTGGTCAGGGAACCCAATCCGAAAATTCATGTACCCATTTTCCGGGTAATCTGCCGAATATGCTGCGCGATCTGCGTGATGCATTTAGCCGTGTTAAAACCTTTTTCCAGATGAAAGATCAGCTGGATAATCTGCTGCTGAAAGAAAGCCTGCTGGAAGATTTCAAAGGTTATCTGGGTTGTCAGGCACTGAGCGAAATGATTCAGTTTTATCTGGAAGAAGTTATGCCGCAGGCAGAAAATCAGGATCCGGATATTAAAGCACATGTTAATAGCCTGGGCGAAAATCTGAAAACCCTGCGTCTGCGCCTGCGTCGTTGTCATCGTTTTCTGCCGTGTGAAAACAAAAGCAAAGCAGTTGAACAGGTGAAAAACGCCTTTAACAAACTGCAAGAGAAAGGCATCTATAAAGCCATGAGCGAATTCGACATCTTCATCAACTATATCGAAGCCTACATGACCATGAAAATCCGCAATTAA

[991] Конъюгаты после биоконъюгации с соответствующим содержащим PEG реагентом DBCO инкубировали с буфером для образцов Лэммли в восстанавливающих условиях в течение 5 минут при 95°C. После охлаждения образцов до комнатной температуры образцы загружали на гели SDS-PAGE для электрофоретического разделения белков. Гель инкубировали с водорастворимым красителем Кумасси или переносили на нитроцеллюлозную мембрану для обнаружения соответствующих соединений с помощью вестерн-блоттинга с применением антитела к IL-10. На фиг. 1 проиллюстрированы иллюстративный SDS-PAGE и анализ с помощью вестерн-блоттинга соединения A в восстанавливающих условиях, проиллюстрировано гомогенное пегелирование мономеров IL-10. Определение молярной массы конъюгатов проводили с помощью эксклюзионной хроматографии с многоугольным светорассеянием (SEC-MALS), и результаты согласовывались с тем, что соединения A-F представляют собой дипегилированные димеры (соотношение белок:PEG 1:1). Дополнительный анализ разбавлений соединений не показал диссоциации субъединиц в диапазоне тестируемых концентраций. На фиг. 2 проиллюстрировано иллюстративное определение молекулярной массы соединения A с помощью SEC-MALS. На фиг. 3 проиллюстрирован иллюстративный анализ стабильности димера соединения A при низких концентрациях с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).

[992] Удаление метки [His] при получении соединения А, соединения В, соединения С, соединения D, соединения Е и соединения F может быть выполнено с использованием протеазы вируса травления табака (TEV) в соответствии со способами, известными специалистам в уровне техники. Как правило, протеаза TEV распознает линейный эпитоп общей формы E-Xaa-Xaa-Y-Xaa-Q-(G/S), при этом расщепление происходит между Q и G или Q и S. Расщепление белковой метки по TEV может осуществляться внутриклеточно во время экспрессии или во время очистки описанных в данном документе конъюгатов IL-10. Например, удаление метки [His] из непегилированного предшественника соединения А осуществляли с применением протеазы TEV при комнатной температуре в течение ночи. Обнаружение проводили с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих условиях с последующим анализом с помощью вестерн-блоттинга с применением антител к IL-10. Дополнительные способы удаления метки [His] с использованием протеазы TEV представлены в Raran-Kurussi et al. (2017) Removal of Affinity Tags with TEV Protease. В: Burgess-Brown N. (eds) Heterologous Gene Expression in E. coli. Methods in Molecular Biology, vol 1586. Humana Press, New York, NY; Phan et al. (2002). Structural basis for the substrate specificity of tobacco etch virus protease. J. Biol. Chem. 277: 50564-50572; и Kapust et al. (2000). Controlled intracellular processing of fusion proteins by TEV protease. Protein Expr. Purif. 19: 312-318.

ПРИМЕР 3

[993] Биологическая активность конъюгатов IL-10

[994] Биологическую активность соединения A, соединения B, соединения C, соединения D, соединения E, соединения F, соединения G и соединения H, имеющих структурные особенности, указанные в таблице 3-A, определяли с использованием двух ортогональных анализов: анализа пролиферации клеток MC/9 и анализа цитокиновых рецепторов PathHunter® (DiscoverX). Клетки MC/9 зависят от цитокинов для роста. Культуры клеток МС/9 получали в присутствии IL-2, который удаляли перед стимуляцией IL-10. С помощью анализа пролиферации клеток MC/9 измеряли пролиферацию клеток MC/9, обработанных возрастающими концентрациями IL-10 и пегилированных соединений, после 4 ч голодания по IL-2 при 37°C. После 72-часовой обработки hIL-10 добавляли реагент для пролиферации клеток WST-1 (Sigma, 11644807001) и клетки инкубировали в течение дополнительных 3 ч при 37°C перед измерением поглощения образца при OD450 по сравнению с фоновым контролем. На фиг. 4-7b проиллюстрированы следы концентрации конъюгатов IL-10 (пг/мл) в зависимости от пролиферации (OD₄₅₀) для соединений A, D, E, F, G и H, соответственно, в анализе пролиферации MC/9. Из данных видно, что N-концевая метка [His] хорошо переносилась без существенной разницы в эффективности между природным IL-10 и природным [His]-IL-10. В таблице 4 показана активность (EC₅₀) для различных соединений IL-10 в анализе пролиферации MC/9.

Таблица 4. Действенность иллюстративных конъюгатов IL-10. Соединение EC₅₀ (нг/мл) Соединение A 9,69 Соединение B 129 Соединение C 440 Соединение D 38,2 Соединение E 89,8 Соединение F 2,29 Соединение G 10,5 Соединение H 29,8

[995] Биологическую активность соединения A, соединения B, соединения C, соединения D, соединения E и соединения F также измеряли с использованием анализа рецепторов цитокинов PathHunter® (DiscoverX/Eurofins), с помощью которого измеряли взаимодействие 2 цепей рецептора IL-10 при участие цитокинов. В этом анализе одна цепь рецептора была мечена небольшим пептидным эпитопом ProLink (PK), а другая цепь была мечена ферментным акцептором (EA). Связывание IL-10 или конъюгатов IL-10 с рецептором индуцирует димеризацию, таким образом, комплементация фрагментов PK и EA приводит к образованию активной единицы β-галактозидазы, которую обнаруживают с помощью хемилюминесценции. На фиг. 8 проиллюстрировано измерение биологической активности IL-10 дикого типа в анализе PathHunter®. На фиг. 9 проиллюстрировано измерение биологической активности соединения А в анализе PathHunter®. В таблице 5 показана биологическая активность соединения А в анализе димеризации IL-10 R1/R2 PathHunter® по сравнению с IL-10 дикого типа.

Таблица 5. Биологическая активность иллюстративных конъюгатов IL-10. Соединение EC₅₀ (мкМ) IL-10 дикого типа 0,0139 Соединение A 0,2123

ПРИМЕР 4

[996] Профилирование конъюгатов IL-10 в селезенке мышей

[997] В этом исследовании оценивали фосфорилирование STAT3 CD8, NK- и В-клеток в ответ на стимуляцию природным [His]-IL-10, соединением A и соединением D. Обработку проводили на спленоцитах C57BL/6 и Balb/c. Кривая дозы состояла из 12 точек доз, что в 3 раза ниже максимальной дозы с максимальной дозой 1 мкг/мл для природного HisIL-10 и 10 мкг/мл для соединения А и соединения D. Спленоциты селезенки мыши получали путем срезов селезенки на мелкие кусочки с последующим прессованием и промыванием с помощью PBS через сито. Клеточную суспензию центрифугировали и супернатант удаляли путем аспирации. 1x рабочий раствор буфера для лизиса RBC (BioLegend 420301) использовали для ресуспендирования клеток. Через 4 мин при комнатной температуре реакцию останавливали путем добавления 4-8-кратного разбавления с помощью PBS и пропускали через сито с отверстиями 70 мкм. Клетки снова центрифугировали и промывали полной средой RPMI для спленоцитов (RPMI, Gibco 22-400-089 с 10% фетальной бычьей сывороткой и 1% пенициллином/стрептомицином (P/S)). Наконец, клетки ресуспендировали в полной среде RPMI, разбавленной до 5,5×10⁶ клеток/мл, и добавляли по 90 мкл клеток в каждую лунку 96-луночного планшета с U-образным дном. Клетки инкубировали в течение 20 минут или дольше при 37°C перед стимуляцией. Клетки стимулировали в течение 45 мин при 37°С с последующей фиксацией с помощью 200 мкл подогретого буфера для фиксации (BD 554655) и инкубировали в течение 10 мин на водяной бане при 37°С. Клетки центрифугировали и дважды промывали с помощью Stain Buffer (BD 554657). Клетки инкубировали с различными антителами, описанными в таблице 6. В таблице 7 показана действенность [His]-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D в спленоцитах мыши Balb/c, определяемая по фосфорилированию STAT3. В таблице 8 показана действенность [His]-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D в спленоцитах мыши B57BL/6, определяемая по фосфорилированию STAT3. На фиг. 10A-C проиллюстрировано профилирование pSTAT3 в спленоцитах мышей Balb/c в отношении IL-10 дикого типа (закрашенные кружочки), соединения A (незакрашенные треугольники) и соединения D (незакрашенные квадраты) в CD8+ T-клетках, NK-клетках и B-клетках, соответственно. На фиг. 11A-C проиллюстрировано профилирование pSTAT3 в спленоцитах мышей B57BL/6 в отношении IL-10 дикого типа (закрашенные кружочки), соединения A (незакрашенные треугольники) и соединения D (незакрашенные квадраты) в CD8+ T-клетках, NK-клетках и B-клетках, соответственно.

Таблица 6. Антитела, используемые для определения профиля конъюгатов IL-10 в селезенке мышей. Мишень Клон Флуор. 1X Разбавление FcX Block 93 Отсутствуют 1:50 CD49b DX5 eF506 1:50 NKp46 (Balb/c) или NK1.1 (B6) 29A1.4 PK136 BV605 SB600 1:50 CD62L MEL-14 BV421 1:200 CD25 PC61 FITC 1:100 CD3 17A2 APC/Cy7 1:400

Таблица 7. Активность His-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D в спленоцитах мышей Balb/c определяли по фосфорилированию STAT3. Соединение CD8 T клетки EC₅₀ (нг/мл) NK клетки EC₅₀ (нг/мл) B клетки EC₅₀ (нг/мл) His-IL-10 дикого типа 4,07 1,08 1,30 Соединение A 37,5 12,3 12,5 Соединение D 165 47,8 46,1

Таблица 8. Активность His-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D в спленоцитах мыши B57BL/6 определяли по фосфорилированию STAT3. Соединение CD8 T клетки EC₅₀ (нг/мл) NK клетки EC₅₀ (нг/мл) B клетки EC₅₀ (нг/мл) His-IL-10 дикого типа 3,65 1,06 0,83 Соединение A 38,2 17,3 9,18 Соединение D 244 60,9 36,9

ПРИМЕР 5

[998] Профилирование конъюгатов IL-10 в системе лейкоредукции человека (LRS)

[999] В этом исследовании оценивали фосфорилирование STAT3 субпопуляций В-клеток, NK- и CD8+ Т-клеток в ответ на стимуляцию IL-10 в отношении His-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D. Обработку проводили на 1 доноре LRS. Максимальная концентрация составляла 0,5 мкг/мл для His-IL-10 дикого типа и 30 мкг/мл для соединения A и соединения D. Кровь LRS разбавляли в PBS и добавляли по 90 мкл клеток в каждую лунку стерильного 96-луночного планшета с U-подобным дном. Клетки инкубировали с разведениями соединений в течение 45 мин при 37°С с последующей фиксацией буфером Lyse/fix. Через 10 минут при 37°C клетки промывали буфером для окрашивания с последующей инкубацией с соответствующими растворами антител, как указано в таблице 9. Клетки инкубировали в течение 20 мин в защищенном от света месте с последующими двумя отмывками окрашивающим буфером. Затем клетки подвергали пермеабилизации с использованием охлажденного льдом Perm Buffer III (BD Biosciences) в течение 30 мин в защищенном от света месте. Клетки инкубировали с соответствующей смесью внутриклеточных антител, как указано в таблице 10, в течение 1 ч в темноте. Наконец, клетки промывали буфером для окрашивания и готовили для проточного цитометрического анализа. На фиг. 12A-C проиллюстрирована концентрация His-IL-10 дикого типа, соединения A и соединения D по сравнению с MFI pSTAT3 в CD8+ Т-клетках, NK-клетках и В-клетках, соответственно.

Таблица 9. Смесь антител для окрашивания мембранных маркеров. Мишень Клон Флуор. 1X Разбавление CD127 eBioRDR5 eFluor506 1:50 CD19 SJ25C1 BV785 1:100 CD3 UCHT1 APC/Cy7 1:500

Таблица 10. Смесь антител для окрашивания внутриклеточных маркеров. Мишень Клон Флуор. 1X Разбавление CD4 RPA-T4 PE/Cy7 1:200 CD8 RPA-T8 PerCP/Cy5.5 1:100 CD25 M-A251 PE 1:500 CD45RA HI100 A488 1:500 CD14 M5E2 BV605 1:50 CD56 HCD56 BV421 1:100 pSTAT3 4/P-Stat3 AF647 1:5

ПРИМЕР 6

[1000] Измерение ответа, вызванного памятью в клетках CMV IL-10⁺

[1001] В этом исследовании измеряли, как конъюгат IL-10, соединение А, изменял функциональный ответ, вызванный памятью CD8+ T-клеток на пептид CMV по сравнению с His-IL-10 дикого типа. Донорские CD8+ Т-клетки культивировали с нагруженными пептидами клетками, отличными от CD8, и несколькими концентрациями His-IL-10 дикого типа или соединения А в течение 5 дней. После инкубации клетки окрашивали в отношении IFN-гамма и PD1. Из криоконсервированных CMV⁺ PBMC очищали CD8 T-клетки путем положительной селекции с использованием набора для выделения CD8⁺ T-клеток в соответствии с рекомендациями производителя (Miltenyi Biotech, Оберн, штат Калифорния, США). Клетки CD8 доводили до 4×10⁶ клеток/мл. Концентрацию клеток, отличных от CD8, регулировали на основе измеренного % моноцитов CD14+ с помощью FACS.

100 мкл/лунка клеток, отличных от CD8, переносили в другую пробирку для массовой загрузки CMV. Пептид CMV добавляли в 2-кратной конечной концентрации, инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре при частом перемешивании и затем фракции объединяли после нормализации частоты CD8 Т-клеток до частоты CD14⁺ моноцитов. После центрифугирования клетки ресуспендировали в полных средах, переносили в лунки на 96-луночном планшете и инкубировали с различными соединениями в полных средах. Кривая дозы состояла из 3 точек доз, в 10 раз ниже максимальной дозы. После 5 дней инкубации при 37°C клетки пермеабилизировали и окрашивали соответствующей смесью антител в течение 30 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте. Дополнительную аликвоту дополнительных клеток CD8-клеток и отличных от CD8-клеток использовали для подтверждения чистоты каждой фракции. На фиг. 13A-B проиллюстрировано высвобождение IFNγ при активации антиген-специфического TCR с помощью His-IL-10 дикого типа или соединения A. На фиг. 14A-B проиллюстрирована активация PD-1 после обработки His-IL-10 или соединением А и продемонстрировано, что такая активация не зависит от активации TCR.

ПРИМЕР 7

[1002] Клиническое испытание фазы 1 IL-10 у участников с раком

[1003] Клиническое испытание проводят для изучения эффективности и безопасности введения любого из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, описанных в данном документе, у участников с раком. В некоторых случаях исследование является многоцентровым, рандомизированным, двойным слепым и с контролем, представляющим собой среду-носитель. Целью исследования является введение 1 мкг/кг, 2 мкг/кг, 2,5 мкг/кг, 5 мкг/кг, 10 мкг/кг, 15 мкг/кг, 20 мкг/кг, 25 мкг/кг, 30 мкг/кг, 50 мкг/кг, 100 мкг/кг, 200 мкг/кг или более модифицированного полипептида IL-10 или конъюгата IL-10 участникам с раком, включая меланому, рак предстательной железы, рак яичника, почечно-клеточную крциному, колоректальную карциному, карциному поджелудочной железы, немелкоклеточную карциному легкого, солидные опухоли и рак молочной железы.

Цели и оценки исходов

[1004] Цель и оценки исходов введения модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10 участникам с раком определяли на основе первичного результата (т. е. безопасности) и вторичного результата (т. е. эффективности). Первичный исход определяли по измерением частоты возникновения и тяжести нежелательных явлений, таких как нежелательные явления 3-й и 4-й степени. Дополнительный первичный исход определяли по фармакокинетическим параметрам (PK), в том числе минимальной и максимальной концентрации лекарственного средства в сыворотке крови (C_мин и C_макс), площади под кривой зависимости концентрации в сыворотке крови от времени (AUC) и периода полувыведения. Вторичный исход основан на изменении опухолевой нагрузки, которую определяют с помощью объемной компьютерной томографии (CT) или магнитно-резонансной томографии (MRI).

Критерии включения

[1005] Участник соответствует требованиям с гистологически или цитологически подтвержденной прогрессирующей злокачественной солидной опухолью, ограниченной меланомой, кастрационно-резистентным раком предстательной железы (CRPC), раком яичника (OVCA), почечно-клеточным раком, колоректальным раком (CRC), раком поджелудочной железы или немелкоклеточной карциномой легкого (NSCLC), которая является рефрактерной, непереносимой, для которой не существует стандарта терапии или когда участник отказывается от существующих способов лечения. Возраст участника должен быть по меньшей мере 18 лет или старше, и он должен иметь адекватную функцию органов.

Критерии исключения

[1006] Участник не соответствует требованиям, если наблюдается беременность или кормление грудью, диагностировано неврологическое расстройство, наличие инфаркта миокарда в течение последних 6 месяцев, нестабильная стенокардия, требующая лекарственных препаратов для контроля сердечной аритмии, наличие операции в течение последних 28 дней, наличие любого типа инфекции, геморрагический диатез в анамнезе в течение последних 6 месяцев или положительный результат теста на ВИЧ, гепатит С или гепатит В.

План исследования

[1007] Участников случайным образом распределяют по 1 из 3 групп лечения в соотношении 1:1:1. Во время фазы А исследования первая когорта участников получает ежедневные подкожные (SC) инъекции 1 мкг/кг одного из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, которые описаны в данном документе, в течение 12 месяцев. Вторая когорта участников получает ежедневные SC инъекции 10 мкг/кг одного из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, которые описаны в данном документе, в течение 12 месяцев. Третья когорта участников получает ежедневные SC инъекции 50 мкг/кг одного из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10, которые описаны в данном документе, в течение 12 месяцев. Повышение доз направлено на определение частоты возникновения и тяжести побочных явлений у участников. Во время фазы B исследования три когорты получают ежедневную SC инъекцию одного из модифицированных полипептидов IL-10 или конъюгатов IL-10 и по меньшей мере одного дополнительного ингибитора контрольной точки иммунного ответа, выбранного из ингибитора PD-1, ингибитора PD-L1, ингибитора PD-L2, ингибитора CTLA-4, агониста OX40 и агониста 4-1BB.

[1008] Хотя в данном документе были показаны и описаны предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, для специалистов в данной области будет очевидно, что такие варианты осуществления предусмотрены исключительно в качестве примера. Многочисленные вариации, изменения и замены теперь будут очевидны специалистам в данной области без отступления от настоящего изобретения. Следует понимать, что различные альтернативы вариантов осуществления настоящего изобретения, описанного в данном документе, могут быть использованы при осуществлении настоящего изобретения на практике. Подразумевается, что следующая формула изобретения определяет объем настоящего изобретения и таким образом охватывает способы и структуры в пределах объема данной формулы изобретения, а также их эквиваленты. Раскрытия всех патентов и научной литературы, приведенных в данном документе, явным образом включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В той мере, в какой какой-либо включенный материал не соответствует прямому содержанию настоящего раскрытия, явное содержание имеет преимущественную силу.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SYNTHORX, INC.

CAFFARO, Carolina E., et al.

<120> КОНЪЮГАТЫ ИНТЕРЛЕЙКИНА 10 И ВАРИАНТЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

<130> 01183-0077-00PCT

<150> US 62/930,322

<151> 2019-11-04

<150> US 62/953,095

<151> 2019-12-23

<160> 79

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> другой_признак

<223> IL-10 (Homo sapiens) (зрелая форма)

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<400> 1

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 2

<211> 178

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> другой_признак

<223> IL-10 (Homo sapiens) (предшественник)

<400> 2

Met His Ser Ser Ala Leu Leu Cys Cys Leu Val Leu Leu Thr Gly Val

1 5 10 15

Arg Ala Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His

20 25 30

Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe

35 40 45

Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu

50 55 60

Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys

65 70 75 80

Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro

85 90 95

Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu

100 105 110

Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg

115 120 125

Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn

130 135 140

Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu

145 150 155 160

Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile

165 170 175

Arg Asn

<210> 3

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 3

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 4

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 4

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 5

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 5

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 6

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 6

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 7

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 7

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 8

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 8

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 9

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 9

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 10

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130X

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой неприродную аминокислоту

<400> 10

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 11

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 11

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 12

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 12

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 13

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 13

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 14

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 14

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 15

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 15

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 16

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 16

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 17

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 17

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 18

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [AzK]

<400> 18

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 19

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 19

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 20

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 20

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 21

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 21

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 22

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 22

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 23

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 23

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 24

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 24

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 25

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 25

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 26

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [Azk_PEG]

<400> 26

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 27

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 27

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 28

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 28

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 29

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 29

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 30

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 30

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 31

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 31

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 32

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 32

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 33

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 33

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 34

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 34

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 35

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 35

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 36

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 36

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 37

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 37

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 38

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 38

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 39

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 39

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 40

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 40

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 41

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 41

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 42

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG30kDa]

<400> 42

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 43

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 43

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 44

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK__L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 44

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 45

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 45

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 46

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 46

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 47

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 47

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 48

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 48

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 49

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 49

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 50

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK_L1_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG20kDa]

<400> 50

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 51

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 51

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 52

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK__L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 52

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 53

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 53

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 54

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 54

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 55

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 55

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 56

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 56

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 57

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 57

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 58

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK_L1_PEG30kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG30kDa]

<400> 58

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 59

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N82[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (83)..(83)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 59

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 60

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K88[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (89)..(89)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 60

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Xaa Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 61

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_A89[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (90)..(90)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 61

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Xaa His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 62

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K99[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (100)..(100)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 62

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 63

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K125[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (126)..(126)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 63

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 64

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N126[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (127)..(127)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 64

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Xaa Ala

115 120 125

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 65

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_N129[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (130)..(130)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 65

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 66

<211> 161

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: IL-10_K130[AzK_L1_PEG]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (131)..(131)

<223> Xaa представляет собой [AzK_L1_PEG]

<400> 66

Met Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

1 5 10 15

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

20 25 30

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

35 40 45

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

50 55 60

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

85 90 95

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

100 105 110

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

115 120 125

Phe Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

130 135 140

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

145 150 155 160

Asn

<210> 67

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<400> 67

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

130 135 140

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 68

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10_N82[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (98)..(98)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 68

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

130 135 140

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 69

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10_K99[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (115)..(115)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 69

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Xaa Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

130 135 140

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 70

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10_K125[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (141)..(141)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 70

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Xaa Asn Ala Phe

130 135 140

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 71

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10_N129[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (145)..(145)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 71

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

130 135 140

Xaa Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 72

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10_K130[AzK_PEG20kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> Met может присутствовать или может отсутствовать; в качестве

альтернативы, остаток Met может заменять и замещать Ser на N-конце

<220>

<221> другой_признак

<222> (146)..(146)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG20kDa]

<400> 72

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

130 135 140

Asn Xaa Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 73

<211> 176

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: His-IL-10_N82[AzK_PEG10kDa]

<220>

<221> другой_признак

<222> (98)..(98)

<223> Xaa представляет собой [AzK_PEG10kDa]

<400> 73

Met His His His His His His Gly Ser Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln

1 5 10 15

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

20 25 30

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

35 40 45

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

65 70 75 80

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

85 90 95

Glu Xaa Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

100 105 110

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

115 120 125

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

130 135 140

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

145 150 155 160

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

165 170 175

<210> 74

<211> 575

<212> БЕЛОК

<213> Phaeodactylum tricornutum

<220>

<221> другой_признак

<223> неусеченный PtNTT2; CCAP 1055/1 Phaeodactylum tricornutum

<400> 74

Met Arg Pro Tyr Pro Thr Ile Ala Leu Ile Ser Val Phe Leu Ser Ala

1 5 10 15

Ala Thr Arg Ile Ser Ala Thr Ser Ser His Gln Ala Ser Ala Leu Pro

20 25 30

Val Lys Lys Gly Thr His Val Pro Asp Ser Pro Lys Leu Ser Lys Leu

35 40 45

Tyr Ile Met Ala Lys Thr Lys Ser Val Ser Ser Ser Phe Asp Pro Pro

50 55 60

Arg Gly Gly Ser Thr Val Ala Pro Thr Thr Pro Leu Ala Thr Gly Gly

65 70 75 80

Ala Leu Arg Lys Val Arg Gln Ala Val Phe Pro Ile Tyr Gly Asn Gln

85 90 95

Glu Val Thr Lys Phe Leu Leu Ile Gly Ser Ile Lys Phe Phe Ile Ile

100 105 110

Leu Ala Leu Thr Leu Thr Arg Asp Thr Lys Asp Thr Leu Ile Val Thr

115 120 125

Gln Cys Gly Ala Glu Ala Ile Ala Phe Leu Lys Ile Tyr Gly Val Leu

130 135 140

Pro Ala Ala Thr Ala Phe Ile Ala Leu Tyr Ser Lys Met Ser Asn Ala

145 150 155 160

Met Gly Lys Lys Met Leu Phe Tyr Ser Thr Cys Ile Pro Phe Phe Thr

165 170 175

Phe Phe Gly Leu Phe Asp Val Phe Ile Tyr Pro Asn Ala Glu Arg Leu

180 185 190

His Pro Ser Leu Glu Ala Val Gln Ala Ile Leu Pro Gly Gly Ala Ala

195 200 205

Ser Gly Gly Met Ala Val Leu Ala Lys Ile Ala Thr His Trp Thr Ser

210 215 220

Ala Leu Phe Tyr Val Met Ala Glu Ile Tyr Ser Ser Val Ser Val Gly

225 230 235 240

Leu Leu Phe Trp Gln Phe Ala Asn Asp Val Val Asn Val Asp Gln Ala

245 250 255

Lys Arg Phe Tyr Pro Leu Phe Ala Gln Met Ser Gly Leu Ala Pro Val

260 265 270

Leu Ala Gly Gln Tyr Val Val Arg Phe Ala Ser Lys Ala Val Asn Phe

275 280 285

Glu Ala Ser Met His Arg Leu Thr Ala Ala Val Thr Phe Ala Gly Ile

290 295 300

Met Ile Cys Ile Phe Tyr Gln Leu Ser Ser Ser Tyr Val Glu Arg Thr

305 310 315 320

Glu Ser Ala Lys Pro Ala Ala Asp Asn Glu Gln Ser Ile Lys Pro Lys

325 330 335

Lys Lys Lys Pro Lys Met Ser Met Val Glu Ser Gly Lys Phe Leu Ala

340 345 350

Ser Ser Gln Tyr Leu Arg Leu Ile Ala Met Leu Val Leu Gly Tyr Gly

355 360 365

Leu Ser Ile Asn Phe Thr Glu Ile Met Trp Lys Ser Leu Val Lys Lys

370 375 380

Gln Tyr Pro Asp Pro Leu Asp Tyr Gln Arg Phe Met Gly Asn Phe Ser

385 390 395 400

Ser Ala Val Gly Leu Ser Thr Cys Ile Val Ile Phe Phe Gly Val His

405 410 415

Val Ile Arg Leu Leu Gly Trp Lys Val Gly Ala Leu Ala Thr Pro Gly

420 425 430

Ile Met Ala Ile Leu Ala Leu Pro Phe Phe Ala Cys Ile Leu Leu Gly

435 440 445

Leu Asp Ser Pro Ala Arg Leu Glu Ile Ala Val Ile Phe Gly Thr Ile

450 455 460

Gln Ser Leu Leu Ser Lys Thr Ser Lys Tyr Ala Leu Phe Asp Pro Thr

465 470 475 480

Thr Gln Met Ala Tyr Ile Pro Leu Asp Asp Glu Ser Lys Val Lys Gly

485 490 495

Lys Ala Ala Ile Asp Val Leu Gly Ser Arg Ile Gly Lys Ser Gly Gly

500 505 510

Ser Leu Ile Gln Gln Gly Leu Val Phe Val Phe Gly Asn Ile Ile Asn

515 520 525

Ala Ala Pro Val Val Gly Val Val Tyr Tyr Ser Val Leu Val Ala Trp

530 535 540

Met Ser Ala Ala Gly Arg Leu Ser Gly Leu Phe Gln Ala Gln Thr Glu

545 550 555 560

Met Asp Lys Ala Asp Lys Met Glu Ala Lys Thr Asn Lys Glu Lys

565 570 575

<210> 75

<211> 531

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: Природный His-TEV-IL-10

<400> 75

atgcatcatc accatcatca tggtagcagc gaaaatctgt attttcagag ccctggtcag 60

ggcacccaga gcgaaaattc atgtacccat tttccgggta atctgccgaa tatgctgcgc 120

gatctgcgtg atgcatttag ccgtgttaaa acctttttcc agatgaaaga tcagctggat 180

aatctgctgc tgaaagaaag cctgctggaa gatttcaaag gttatctggg ttgtcaggca 240

ctgagcgaaa tgattcagtt ttatctggaa gaagttatgc cgcaggcaga aaatcaggat 300

ccggatatta aagcacatgt taatagcctg ggcgaaaatc tgaaaaccct gcgtctgcgc 360

ctgcgtcgtt gtcatcgttt tctgccgtgt gaaaacaaaa gcaaagcagt tgaacaggtg 420

aaaaacgcct ttaacaaact gcaagagaaa ggcatctata aagccatgag cgaattcgac 480

atcttcatca actatatcga agcctacatg accatgaaaa tccgcaatta a 531

<210> 76

<211> 486

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая: Природный IL-10

<400> 76

atgagccctg gtcagggaac ccaatccgaa aattcatgta cccattttcc gggtaatctg 60

ccgaatatgc tgcgcgatct gcgtgatgca tttagccgtg ttaaaacctt tttccagatg 120

aaagatcagc tggataatct gctgctgaaa gaaagcctgc tggaagattt caaaggttat 180

ctgggttgtc aggcactgag cgaaatgatt cagttttatc tggaagaagt tatgccgcag 240

gcagaaaatc aggatccgga tattaaagca catgttaata gcctgggcga aaatctgaaa 300

accctgcgtc tgcgcctgcg tcgttgtcat cgttttctgc cgtgtgaaaa caaaagcaaa 360

gcagttgaac aggtgaaaaa cgcctttaac aaactgcaag agaaaggcat ctataaagcc 420

atgagcgaat tcgacatctt catcaactat atcgaagcct acatgaccat gaaaatccgc 480

aattaa 486

<210> 77

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Повторяющийся мотив для конъюгируемого фрагмента эластиноподобного

полипептида

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> X представляет собой любую аминокислоту за исключением пролина

<400> 77

Val Pro Gly Xaa Gly

1 5

<210> 78

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Иллюстративный пептид цитоплазматической трансдукции

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> сайт O-гликозилирования

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> сайт O-гликозилирования

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> сайт O-гликозилирования

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (23)..(23)

<223> сайт O-гликозилирования

<400> 78

Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro

1 5 10 15

Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln

20 25 30

<210> 79

<211> 31

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Иллюстративный пептид цитоплазматической трансдукции

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> сайт O-гликозилирования

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(3)

<223> сайт O-гликозилирования

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> сайт O-гликозилирования

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)..(24)

<223> сайт O-гликозилирования

<400> 79

Phe Gln Asp Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser

1 5 10 15

Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln

20 25 30

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть применимо в медицине. Предложены новые конъюгаты пептида интерлейкина 10 (IL-10), в которых фрагмент ПЭГ присоединен к IL-10 через дибензоциклооктиновый линкер с применением клик-химии. Указанный конъюгат характеризуется увеличенным периодом полужизни в плазме крови и при димеризации способен усиливать воздействие инфильтрирующих опухоль иммунных клеток на совокупность опухолевых клеток. Изобретение может быть использовано для модулирования T-клеточных ответов у человека, в частности при лечении больных, страдающих от рака. 6 н. и 30 з.п. ф-лы, 7 пр., 10 табл., 14 ил.

1. Конъюгат IL-10 для лечения рака, содержащий полипептид IL-10, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в полипептиде IL-10 заменен структурой формулы (I)

(I),

где по меньшей мере один аминокислотный остаток, замененный структурой формулы (I), расположен в полипептиде IL-10 в положении, выбранном из N82, K99, K125, N129 и K130;

Z представляет собой CH₂ и Y представляет собой

;

Y представляет собой CH₂ и Z представляет собой

;

Z представляет собой CH₂ и Y представляет собой

; или

Y представляет собой CH₂ и Z представляет собой

;

W представляет собой группу PEG, имеющую молекулярную массу, выбранную из приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа и приблизительно 60 кДа;

q равняется 1, 2 или 3;

X имеет структуру

;

X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; и

X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку.

2. Конъюгат IL-10 по п. 1, где Z представляет собой CH₂ и Y представляет собой .

3. Конъюгат IL-10 по п. 1, где Y представляет собой CH₂ и Z представляет собой .

4. Конъюгат IL-10 по п. 1, где Z представляет собой CH₂ и Y представляет собой .

5. Конъюгат IL-10 по п. 1, где Y представляет собой CH₂ и Z представляет собой .

6. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 1-5, где группа PEG имеет молекулярную массу, выбранную из приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 20 кДа и приблизительно 30 кДа.

7. Конъюгат IL-10 по п. 6, где группа PEG имеет молекулярную массу, выбранную из приблизительно 10 кДа и приблизительно 20 кДа.

8. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 1-7, где положение выбрано из N82, K99, N129 и K130.

9. Конъюгат IL-10 по п. 8, где положение выбрано из N82 и N129.

10. Конъюгат IL-10 по п. 1, где структура формулы (I) имеет структуру формулы (X) или формулы (XI):

(X);

(XI);

где q равняется 1, 2 или 3;

n представляет собой целое число, такое, что группа PEG, имеющая структуру -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃, имеет молекулярную массу приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа и приблизительно 60 кДа; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

11. Конъюгат IL-10 по п. 10, где положение выбрано из N82, K99, N129 и K130.

12. Конъюгат IL-10 по п. 11, где положение выбрано из N82 и N129.

13. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 10-12, где n представляет собой такое целое число, что группа PEG, имеющая структуру -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃, имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 10 кДа или приблизительно 20 кДа.

14. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая эффективное количество смеси конъюгатов IL-10 по любому из пп. 10-13, где смесь содержит конъюгаты IL-10, в которых структура формулы (I) имеет структуру формулы (X), и конъюгаты IL-10, в которых структура формулы (I) имеет структуру формулы (XI).

15. Конъюгат IL-10 по п. 1, где структура формулы (I) имеет структуру формулы (XII) или формулы (XIII):

(XII);

(XIII);

где q равняется 1, 2 или 3;

n представляет собой целое число, такое, что группа PEG, имеющая структуру -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃, имеет молекулярную массу приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа и приблизительно 60 кДа; и

волнистыми линиями обозначены ковалентные связи с аминокислотными остатками в пределах SEQ ID NO: 1, которые не заменены.

16. Конъюгат IL-10 по п. 15, где положение выбрано из N82, K99, N129 и K130.

17. Конъюгат IL-10 по п. 15 или 16, где положение выбрано из N82 и N129.

18. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 15-17, где n представляет собой такое целое число, что группа PEG, имеющая структуру -(OCH₂CH₂)_n-OCH₃, имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно 10 кДа или приблизительно 20 кДа.

19. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая эффективное количество смеси конъюгатов IL-10 по любому из пп. 15-18, где смесь содержит конъюгаты IL-10, в которых структура формулы (I) имеет структуру формулы (XII), и конъюгаты IL-10, в которых структура формулы (I) имеет структуру формулы (XIII).

20. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 1-13 и 15-18, где q равняется 1.

21. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 1-13 и 15-18, где q равняется 2.

22. Конъюгат IL-10 по любому из пп. 1-13 и 15-18, где q равняется 3.

23. Фармацевтическая композиция по п. 14 или 19, где q равняется 1.

24. Фармацевтическая композиция по п. 14 или 19, где q равняется 2.

25. Фармацевтическая композиция по п. 14 или 19, где q равняется 3.

26. Способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту эффективного количества конъюгата IL-10 по любому из пп. 1-13, 15-18 и 20-22.

27. Способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 14, 19 и 23-25.

28. Способ по п. 26 или 27, где рак выбран из почечноклеточной карциномы (RCC), немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), классической лимфомы Ходжкина (cHL), первичной медиастинальной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (PMBCL), уротелиальной карциномы, рака с микросателлитной нестабильностью, рака с микросателлитной стабильностью, колоректального рака с микросателлитной стабильностью, рака желудка, рака шейки матки, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), карциномы из клеток Меркеля (MCC), меланомы, мелкоклеточного рака легкого (SCLC), рака пищевода, глиобластомы, мезотелиомы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака яичника, опухолей с мутационной нагрузкой от умеренной до низкой, плоскоклеточной карциномы кожи (CSCC), плоскоклеточного рака кожи (SCSC), опухолей с экспрессией PD-L1 от низкой до отсутствующей, опухолей, системно диссеминирующих в печень и ЦНС, за пределы их первичного участка анатомического происхождения, и диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы.

29. Способ по любому из пп. 26-28, где конъюгат IL-10 вводят субъекту один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в 4 недели, один раз в 5 недель, один раз в 6 недель, один раз в 7 недель или один раз в 8 недель.

30. Способ по любому из пп. 26-29, где конъюгат IL-10 вводят субъекту путем внутривенного введения.

31. Способ по любому из пп. 26-29, где конъюгат IL-10 вводят субъекту путем подкожного введения.

32. Способ получения конъюгата IL-10, включающий

осуществление реакции полипептида IL-10, содержащего неприродную аминокислоту формулы

в положении X полипептида IL-10, где полипептид IL-10 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1, при этом по меньшей мере один аминокислотный остаток в полипептиде IL-10 заменен неприродной аминокислотой, положение X-1 указывает точку присоединения к предыдущему аминокислотному остатку; положение X+1 указывает точку присоединения к следующему аминокислотному остатку и положение X указывает на положение аминокислоты, которую заменяет неприродная аминокислота,

с mPEG-DBCO формулы

или ,

где q равняется 1, 2 или 3 и n является таким, что mPEG-DBCO содержит PEG, имеющий молекулярную массу, составляющую приблизительно 5 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 15 кДа, приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа, приблизительно 50 кДа или приблизительно 60 кДа,

с получением таким образом конъюгата IL-10,

где положение X выбирают из N82, K99, K125, N129 и K130.

33. Способ по п. 32, где q равняется 1.

34. Способ по п. 32, где q равняется 2.

35. Способ по п. 32, где q равняется 3.

36. Способ по п. 32, где конъюгат IL-10 представляет собой конъюгат IL-10 по любому из пп. 1-13, 15-18 и 20-22.