Способ получения 2a,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2a,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-она, проявляющего цитотоксичность в отношении клеток HEK 293 Российский патент 2024 года по МПК C07D487/04 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к способу получения 2а,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2а,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1 -она формулы 1:

Данное соединение может быть применено в медицине, фармакологии, ветеринарии в качестве лекарственного средства и для синтеза новых гетероциклический соединений.

Известны структурные аналоги заявляемого соединения [H.Z. Wang, X. Zhou, J.X. Xu, S. Jin, Y.M. Li, A.C. Chan / On the mechanism and stereochemistry of the formation of β-lactam derivatives of 2,4-disubstituted-2,3-dihydro-benzo[1,4]diazepines // Journal of Heterocyclic Chemistry. 2009. Vol. 38. №5. P. 1031-1034. DOI: 10.1002/jhet.5570380503].

Синтез структурных аналогов осуществляется по следующей схеме:

Недостатком данного способа является невозможность синтеза 2а,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2а,3,4,5-тетрагидро-1Н-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-она, который включает в себя спироциклический фрагмент.

Задачей изобретения является разработка способа получения 2а,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2а,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-она.

Поставленная задача достигается путем взаимодействия 2,4-дифенил-1-(4-трифторметил)бензоил-2,3-дигидро-1H-1,5-бензодиазепина 2 с метил 1-бромциклопропанкарбоксилатом и цинком в среде растворителя с последующим выделением целевых продуктов, по схеме:

Процесс ведут при температуре 144-145°С, а в качестве растворителя используют о-ксилол.

Из патентной и технической литературы не были выявлены способы получения, имеющие сходные признаки с заявленным способом, а именно, не использовались исходные продукты, растворитель, в котором проходит реакция, на основании чего можно сделать вывод о соответствии заявленного технического решения критерию «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 2а,4-Дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2а,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-он (1)

Смесь 3,29 г (0,007 моль) 2,4-дифенил-1-(4-трифторметил)бензоил-2,3-дигидро-1H-1,5-бензодиазепина 2, 1,17 г (0,018 моль) металлического цинка, 40 мл безводного о-ксилола, 4 мл ГМФТА, каталитического количество сулемы и 3,22 г (0,018 моль) метилового эфира 1-бромциклопропанкарбоновой кислоты кипятили в течение 6 часов. После охлаждения к реакционной смеси добавляли 5% уксусную кислоту до растворения осадка. Затем водный слой отделяли и трижды экстрагировали этилацетатом. Органические вытяжки объединяли и сушили прокаленным сульфатом натрия. Растворители отгоняли, к остатку добавляли 15 мл этанола и оставляли кристаллизоваться. Продукт перекристаллизовывали из этилацетата. Выход 69%, Т.пл.=226-227°С.

Соединение (1) C₃₅H₂₅F₃N₂O₂.

Найдено, %: С 73.60; Н 4.68; N 5.20.

Вычислено, %: С 73.54; Н 4.59; N 5.14.

ИК спектр, ν, см^-1: 1791, 1771 (СО).

¹H NMR (400 МГц, CDCl₃) δ 0.40-0.46 (м, 1H), 1.16-1.26 (м, 2Н), 1.38-1.43 (м, 1H), 2.93 (дд, J=15.2, 11.4 Гц, 1H), 3.07 (дд, J=15.2, 7.9 Гц, 1H), 5.99 дд, J=7.9, 1.2 Гц, 1H), 6.27 (дд, J=11.4, 7.9 Гц, 1Н), 6.55 (тд, J=7.8, 1.3 Гц, 1H), 7.14 (т, J=9.6 Гц, 2Н), 7.23 (м, 2Н), 7.29 (д, J=9.4 Гц, 8Н), 7.37 (т, J=7.6 Гц, 2Н),7.51 (м, 2Н), 8.48 (дд,.7=8.3, 1.1 Гц, 1H).

¹³C NMR (101 МГц, CDCl₃) δ 10.7, 11.0, 37.7, 46.2, 56.2, 68.2, 119.4, 123.2, 124.4, 124.7, 125.1, 126.1, 128.2, 128.4, 128.6, 129.2, 129.3, 131.3, 131.6, 133.3, 136.0, 138.8, 140.1, 168.5, 173.6.

Соединение 1 представляет собой белое кристаллическое вещество, легкорастворимое в ДМСО, хлороформе, ацетоне, трудно растворимое в спирте и алканах, нерастворимое в воде. Устойчиво при хранении в обычных условиях.

Пример 2. Исследование цитотоксичности соединения (1) в отношении клеток HEK 293

Цитотоксичность синтезированных соединений определяли с помощью МТТ-теста [Т. Mosmarm / Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // Journal of Immunological Methods. 1983. Vol.65. №1-2. P. 55-63. DOI: 10.1016/0022-1759(83)90303-4]. Суспензии клеток в концентрации 1×10⁴ клеток/200 мкл высевали в 96-луночный планшет и культивировали при 37°С во влажной атмосфере с 5% СО₂ в инкубаторе. Через 24 часа инкубации к культурам клеток добавляли исследуемые соединения, растворенные в ДМСО, в диапазоне концентраций от 3,125 до 100 мкмоль⋅л^-1. После добавления соединений клетки культивировали в указанных выше условиях в течение 72 часов. В качестве контроля использовали лунки с добавлением ДМСО, конечная концентрация которого не превышала 1% и не была токсична для клеток. Выживаемость клеток оценивали через 72 часа инкубации с исследуемыми соединениями путем добавления 20 мкл раствора МТТ (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенил тетразолия бромид, 5 мг/мл) в каждую лунку. После инкубации клеток с раствором МТТ в течение 4 часов, среду из планшетов удаляли и в каждую лунку добавляли 100 мкл ДМСО для растворения образовавшихся кристаллов формазана. С помощью планшетного спектрофотометра определяли оптическую плотность при 544 нм. Данные сравнивали с отрицательным контролем (1% раствор ДМСО), в качестве положительного контроля использовали доксорубицин. Значение 50% ингибирующей концентрации (IC₅₀) определяли на основе дозозависимых кривых с помощью программного обеспечения Prism 6.0.

Проведенные исследования показали (см. табл.), что соединение 1 обладает умеренной цитотоксичностью. Данные о фармакологической активности заявляемого соединения в доступной литературе отсутствуют.

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 проявляет умеренную цитотоксичность. Следовательно, заявляемое соединение 1 может найти применение в медицинской практике в качестве цитотоксического лекарственного средства.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к способу получения 2a,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2a,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-она формулы 1. Способ заключается во взаимодействии 2,4-дифенил-1-(4-трифторметил)бензоил-2,3-дигидро-1H-1,5-бензодиазепина формулы 2 с метиловым эфиром 1-бромциклопропанкарбоновой кислоты и цинком в среде o-ксилола при кипячении в течение 6 часов с последующей обработкой реакционной массы и выделением целевых продуктов. Способ позволяет получить 2a,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2a,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-он, обладающий цитотоксической активностью. 1 табл., 2 пр.

Способ получения 2a,4-дифенил-5-(4-(трифторметил)бензоил)-2a,3,4,5-тетрагидро-1H-спиро[азето[1,2-d]бензо[b][1,4]диазепин-2,1'-циклопропан]-1-она 1, при котором 2,4-дифенил-1-(4-трифторметил)бензоил-2,3-дигидро-1H-1,5-бензодиазепин 2 подвергают взаимодействию с метиловым эфиром 1-бромциклопропанкарбоновой кислоты и цинком в среде o-ксилола при кипячении в течение 6 часов с последующей обработкой реакционной массы и выделением целевых продуктов, по следующей схеме: