ПРИМЕНЕНИЕ 7-МЕТИЛ-5-[4-(ТРИФТОРМЕТИЛ)ФЕНИЛ]-1,2,4,5-ТЕТРАГИДРО-3H-ПИРРОЛО[1,2-a][1,4]ДИАЗЕПИН-3-ОНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/551 A61P31/10 

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-а][1,4]диазепинонам, а именно к 7-метил-5-[4-(трифторметил)фенил]-1,2,4,5-тетрагидро-3Н-пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-3-ону 1 формулы:

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4Н-бензо[ƒ]пирроло[1,2-a][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 75, 3453-3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211-218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-a][1,4]диазепинонов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 7-метил-5-[4-(трифторметил)фенил]-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-3-она, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой 5-метилфурфуриламина Вос-3-амино-3-[4-(трифторметил)фенил]пропионовой кислотой при кипячении с обратным холодильником в течение 12 часов в абсолютном дихлорэтане в присутствии 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и N-метилморфолина. Затем образовавшийся неочищенный амид обрабатывают смесью ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты Na₂CO₃, нагреванием реакционной смеси при 120°С и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. К перемешиваемому раствору 999 мг (3 ммоль) Вос-3-амино-3-[4-(трифторметил)фенил]пропионовой кислоты в 5 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 367 мкл (3.3 ммоль) 5-метилфурфуриламина, 632 мг (3.3 ммоль) 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и 362 мкл (3.3 ммоль) N-метилморфолина. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 12 часов. Затем растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. К раствору неочищенного амида в 22.5 мл ледяной АсОН добавляют 2.5 мл конц. HCl. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем к реакционной смеси порционно присыпают 4.4 г Na₂CO₃ и кипятят с обратным холодильником в течение 30 минут. Далее растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (9:1), очищенный продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/этилацетат.Выход 45%. Т_пл=159-160°С. Найдено, %: С, 62.34; Н, 4.82; N, 9.00. C₁₆H₁₅F₃N₂O. Вычислено, %: С, 62.33; Н, 4.90; N, 9.09. ИК спектр, (KBr), ν_max, см^-1: 3209, 3159, 1680, 1329, 1070, 1130. Спектр ЯМР ¹Н, (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д.: 7.95 (уш. с, 1Н), 7.65-7.63 (м, 2Н), 7.02-7.00 (м, 2Н), 5.90 (д, J=3.2 Гц, 1H), 5.74 (д, J=3.2 Гц, 1H), 5.71 (дд, J=6.8 Гц, J=3.6 Гц, 1Н), 4.44 (дд, J=16.4 Гц, J=3.2 Гц, 1H), 4.16 (дд, J=16.4 Гц, J=6.8 Гц, 1H), 3.51 (дд, J=14.4 Гц, J=3.6 Гц, 1H), 2.83 (дд, J=14.4 Гц, J=6.8 Гц, 1H), 1.77 (с, 3Н). Спектр ЯМР ¹³С (100 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д.: 171.3, 147.0, 129.4, 128.9, 127.6 (кв, J=31.4 Гц), 126.3 (2С), 125.2 (кв, J=3.8 Гц, 2С), 124.1 (kb, J=272.0 Гц), 106.1, 105.7, 54.9, 40.7, 38.5, 12.1; m/z (%) (ЭУ, 70 эВ) 308 (70) [М⁺], 264 (22), 199 (59), 171 (18), 121 (30), 109 (42), 94 (100), 43 (37), 81 (57). Полученное соединение 1 представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в этаноле, ацетоне, хлороформе, этилацетате.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество ДМСО не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет>500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к IV классу мало токсичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 превышает по антимикотической активности препарат сравнения (Кетоконазол) в 1.5 раза по отношению к С.albicans. Таким образом, 7-метил-5-[4-(трифторметил)фенил]-1,2,4,5-тетрагидро-3Н-пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-3-он 1 проявляет более высокую активность по сравнению с эталоном сравнения в отношении дрожжевых грибов, что делает возможным его использование для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к применению 7-метил-5-[4-(трифторметил)фенил]-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она формулы 1 в качестве противогрибкового средства. Технический результат – выраженный антимикотический эффект в отношении дрожжевых грибов и низкая токсичность, проявляемые соединением формулы 1. 1 табл., 3 пр.

Применение 7-метил-5-[4-(трифторметил)фенил]-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она 1:

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.