Вакцина против ротавирусной инфекции человека на основе вирусоподобных частиц ротавируса Российский патент 2024 года по МПК A61K39/15 

Область техники

Изобретение относится к области биотехнологии, иммунологии и вирусологии и касается вакцины против ротавирусной инфекции человека на основе вирусоподобных частиц ротавируса.

Уровень техники

Актуальность разработки антивирусных препаратов или вакцин для профилактики ротавирусной инфекции не вызывает сомнений. Российская Федерация относится к регионам с высоким уровнем заболеваемости острыми кишечными инфекциями (ОКИ). Среди очагов групповой заболеваемости, вызванных возбудителями с фекально-оральным механизмом передачи, ротавирусная инфекция занимает 2-е место.

В качестве нового направления борьбы против ротавирусной инфекции в последнее время были предложены вакцины на основе рекомбинантных технологий - на основе вирусоподобных частиц или virus like particles (VLP). Вирусоподобные частицы или virus like particle (ВПЧ или VLP) представляют собой структуры размером порядка 100-150 нм, которые являются результатом самосборки вирусных белков без нуклеиновой кислоты генома внутри.

VLP могут продуцироваться в различных экспрессионных системах. Наиболее перспективными считаются VLP на основе белков, полученных в бакуловирусной системе экспрессии. Эта системы дают высокие уровни экспрессии рекомбинантных белков и позволяют организовать последующее крупномасштабное производство вакцины. VLP, продуцируемые в клетках насекомых, считаются более безопасными, чем другие системы экспрессии, поскольку бакуловирусы обнаруживаются в овощах и не способны реплицироваться в клетках млекопитающих. Кроме того, клетки насекомых можно адаптировать для роста в бессывороточной, не содержащей животных продуктах, среде, могут быть идентифицированы с помощью анализа кариотипа и изофермента, свободны от загрязняющих микроорганизмов, случайных агентов, ретровирусов и, как было показано, не являются онкогенными. Считается, что данная технология безопасна и используется для широкомасштабного производства VLP [Rong R, Progress in vaccine development based on baculovirus expression vector system PMID:31001944, DOI:10.13345/j.cjb.180301].

В настоящее время, разработано несколько вакцин против ротавирусной инфекции человека, которые находятся на разных стадиях клинических испытаний:

• Парентеральная вакцина Ro-VLP на основе растительных вирусоподобных частиц. [Natsuki Kurokawa et. al. Safety and immunogenicity of a plant-derived rotavirus-like particle vaccine in adults, toddlers and infants// VaccineVolume 39, Issue 39, 2021, PP 5513-5523];

• Трехвалентная парентеральная субъединичная ротавирусная вакцина VP2-P8 [Michelle J Groome et. al. Safety and immunogenicity of a parenteral trivalent P2-VP8 subunit rotavirus vaccine: a multisite, randomised, double-blind, placebo-controlled trial// Lancet Infect Dis 2020; 20: 851-63].

Эти вакцины охватывают единичные генотипы ротавируса, что недостаточно для эффективной профилактики, как минимум 6-ти генотипов ротавируса, циркулирующих в РФ.

Кроме того, что касается субъединичной вакцины, то недостатком рекомбинантных субъединичных вакцин, является то, что презентация антигена может отличаться от природного вируса и будут вырабатываться антитела, не способные эффективно нейтрализовать патоген.

Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является документ (EP 1261629 B1, опуб. 02.11.2006), в котором раскрывается техническое решение, относящиеся к рекомбинантному бакуловирусу, содержащему, экспрессирующие белки VP2, VP6, VP7 и/или VP4 ротавируса, а также содержащему капсидный ген MS2. Также в материалах патента раскрыто получение вирусоподобных частиц на основе бакуловируса. Недостатком данного технического решения является то, что данная конструкция содержит поверхностные антигены ротавируса (VP7 и/или VP4), и Р6 и Р2 одного генотипа, следовательно, не вызывает образование антител против поверхностных белков ротавируса, специфичных для России генотипов ротавируса, позволяющий сформировать специфический иммунный ответ.

Таким образом, существует потребность в создании VLP, сформированных нуклеокапсидом ротавируса (белки VP2, VP6) и поверхностными белками ротавируса 6 генотипов VP4 и VP7 (G1, G2, G4, G9, P4, P8), наиболее представленных на территории России позволяющими формировать 6 типов VLP, которые смогут эффективно формировать широкий спектр антител, и, следовательно, вызывать специфический иммунитет к вирусным генотипам, циркулирующим в Российской Федерации.

Раскрытие сущности изобретения

Технической задачей изобретения является разработка оптимального состава вакцины против ротавирусной инфекции человека, обладающей возможностью эффективно формировать специфический иммунитет к наиболее представленным на территории России 6-ти генотипам ротавируса А.

Технический результат заявленного изобретения заключается в расширении арсенала вакцин для индукции специфического иммунитета против инфекции, вызываемой ротавирусом А человека, а также заключается в создании средства, обладающего специфической иммуногенностью и эффективностью для профилактики ротавирусной инфекции, вызываемой определенными генотипами ротавируса А, а также обладает высокой степенью безопасности.

Указанный технический результат достигается за счет того, что разработана вакцина против ротавирусной инфекции человека на основе вирусоподобных частиц ротавируса, содержащая:

- рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP), сформированные белками нуклеокапсида VP2, VP6 и поверхностными белками VP4 и VP7 6 генотипов G1, G2, G4, G9, P4, P8 ротавируса типа А, синтезированные в бакуловирусной системе экспрессии - 30- 120 мкг;

- калия дигидрофосфат - 0,30 мг;

- динатрия гидрофосфат - 0,31 мг;

- натрия хлорид - 2,01 мг;

- калия хлорид - 0,04 мг;

- кальция хлорид - 0,03 мг;

- трис(гидроксиметил)аминометан гидрохлорид - 0,04 мг;

- водно-масляный адъювант на основе сквалена - 0,25 мл;

- тиомерсал - 3,0 мкг;

- вода для инъекций - до 0,5 мл.

В частном случае выполнения вакцины рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP) содержатся в количестве 30, 60 или 120 мкг.

Краткое описание чертежей

На фигуре 1 показан уровень специфических IgG после трехкратной иммунизации мышей препаратами VLP с различными адъювантами.

На фигуре 2 показано изменение титра IgG определяемого методом ИФА на 21 день после 2-ой (визит 9) и на 28 день после 3-ей (визит 13) вакцинации.

На фигуре 3 показано изменение титра IgА определяемого методом ИФА на 21 день после 2-ой (визит 9) и на 28 день после 3-ей (визит 13) вакцинации.

На фигуре 4 показано изменение титра вируснейтрализующих антител, определяемого в реакции нейтрализации вируса G3P[8] на 21 день после второй (визит 9) и на 28 день после третьей (визит 13) вакцинации.

На фигуре 5 показано изменение титра вируснейтрализующих антител, определяемого в реакции нейтрализации вируса G9P[4] на 21 день после второй (визит 9) и на 28 день после третьей (визит 13) вакцинации.

На фигуре 6 показано изменение титра вируснейтрализующих антител, определяемого в реакции нейтрализации вируса G1P[8] на 21 день после второй (визит 9) и на 28 день после третьей (визит 13) вакцинации.

Осуществление изобретения

Осуществление изобретения подтверждается следующими примерами.

Пример 1. Получение трехслойных вирусоподобных частиц, с использованием рекомбинантных бакуловирусов.

Активным компонентом разработанной вакцины является рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP), сформированные белками нуклеокапсида (VP2, VP6) и поверхностными белками VP4 и VP7 6 генотипов (G1, G2, G4, G9, P4, P8) ротавируса типа А, синтезированные в бакуловирусной системе экспрессии.

При этом белки капсидных генов ротавируса VP2 и VP6 имеют нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, а поверхностные белки VP4 и VP7 различных генотипов ротавируса G1, G2, G4, G9, P4, P8 имеют нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8.

Для создания конструкции VP2/VP6, последовательность этих генов была оптимизирована для экспрессии в клетках насекомых, получена синтетическим путем, затем клонирована в соответствующие участки вектора pFastBacDual, как это указано в примерах в публикации RU 2795055 C1.

Нуклеотидные последовательности, кодирующие выбранные генотипы белков VP4 и VP7, были оптимизированы для наработки в клетках насекомых и получены синтетическим путем, затем клонированы в трансферный вектор pFastBacHTa. Особенностью данного вектора является наличие гена полигистидинового фрагмента на N-конце белка, для очистки продукта методом металлоаффинной хроматографии и детекции с применением специфических антигистидиновых МКА. Каждая последовательность была клонирована в отдельный трансферный вектор.

С помощью трансферных векторов гены белков ротавируса А были перенесены в бакуловирусный геном. После трансфекции клеток Sf-9 бакмидами, содержащими гены белков VP6 и eGFP-Delta92-VP2, следующий пассаж вируса проводили на клетках T. ni и наблюдали за появлением флуоресценции, сравнивая клетки, зараженные бакуловирусом дикого типа с клетками, зараженными eGFP-Delta92-VP2/VP6.

Кинетику накопления базовых VLP eGFP-Delta92-VP2/VP6 оценивали по флуоресценции на инвертированном микроскопе Olympus и методом непрямого ИФА с моноклональными антителами к полигистидину. В результате было показано, что максимальное накопление антигенов наблюдалось на вторые сутки после заражения. Однако в случае коинфицирования рекомбинантным бакуловирусом со вставкой VP2/VP6 с одним или двумя другими рекомбинантными бакуловирусами (VP4, VP7), происходит значительное снижение числа инфицированных клеток. Это может быть связано с интерференцией между вирусами. Снижение дозы бакуловирусов со вставкой VP4 и VP7 позволило решить эту проблему и добиться необходимого уровня экспрессии генов VP2/VP6 при коинфекции сопоставимого с таковым при моноинфекции.

Таким образом, были подобраны оптимальные рекомбинантные бакуловирусы для каждой конструкции, а также длительность инкубации культуры клеток насекомых, инфицированных различными рекомбинантными бакуловирусами.

Полученные данные были использованы для проведения коинфекции, то есть одновременного заражения перевиваемой линии клеток насекомых T.ni различными сочетаниями рекомбинантных бакуловирусов.

Анализ структурных белков и чистоту VLP оценивали методом электрофореза в 12% полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ПААГ-ДСН) по методу Laemmli (1970) Электрофорез проводили в пластинах полиакриламидного геля размером 70 х 100 х 0,75 на приборе Mini-PROTEAN II (Bio-Rad, США) в восстанавливающих условиях при по-стоянном напряжении 200 V. Разделяющий гель содержал 12% акриламида, 0,5% N,N-метилен-бис-акриламида, 0,375 М трис-HCl pH 8,8 и 0,1% ДСН. Фокусирующий гель содержал 4% акриламида, 10% N,N-метилен- бисакриламида в 0,125 М трис-HCl буфере pH 6,8. Для полимеризации в оба геля вносили по 0,025% персульфата аммония и 0,075% TEMED. Электродный буфер содержал 0,025 М трис-HCl, 0,192 М глицина, pH 8,3 и 0,1% ДСН. Все испытуемые пробы содержали лизирующий буфер с восстановителем (0,125 М трис-HCl, pH 6,8, 5% ДСН, 0,5% β -меркаптоэтанола, 10,8% глицерина, 0,01% бромфенолового синего) и были прогреты в течение 5 минут при 100°C. Заливку геля и подготовку аппарата для электрофореза к работе проводили согласно рекомендациям изготовителя. Белки в гелях окрашивали в течение 1 часа 0,1% раствором Кумасси ярко-голубого (CBB R-350) в водном растворе, содержащем 10% уксусной кислоты и 30% метанола. Избыток красителя отмывали 10% раствором уксусной кислотой такое же время с несколькими его сменами. В качестве белков-маркеров молекулярной массы использовали β-галактозидазу- 116 кД; фосфорилазу В - 94 кД, БСА- 66 кД, овальбумин- 45 кД, карбонат ангидразу-30 кД, ингибитор трипсина- 20,1 кД.

Таким образом, было определено, что в результаты синтеза трехслойных частиц синтезируются три белка ротавируса.

Для оценки вирусного продукта VP6 проводили иммуноферментный анализ. Рекомбинантный белок VP6 был окрашен специфическими моноклональными антителами. Поскольку белки VP2 и VP6 были клонированы в одной кассете, то экспрессия VP6 одновременно подтверждала экспрессию VP2.

Таким образом, был получен антигенный материал, содержащий очищенные трехслойные VLP ротавирусов.

Очистка VLP ротавируса

Культуральную жидкость, содержащую вирусоподобные частицы, подвергали низкоскоростному центрифугированию, освобождаясь от клеток и клеточного дебриса при 1000 об/мин в течение 5 минут и при 6000 об/мин в течение 20 минут (+4°С, ротор Sorval® SS34). После этого надосадочную жидкость использовали для выделения и очистки ротавирусных-VLP методом ультрацентрифугирования.

Полученную надосадочную жидкость наслаивали на 6 мл 25% или 35% (w/v) сахарозы, приготовленной на буфере TNС (10 mM Tris-HCl, 140 mM NaCl, 10 mM CaCl2 рН 7,4). Центрифугировали в течение 2 часов при 28 000 об/мин (центрифуга Оptima XE-100, ротор SW 32Ti, Beckman Coulter, +4°С). Полученные осадки ресуспендировали в буфере TNС, и хранили при температуре +4°С.

Пример 2. Оптимизация состава вакцины. Подбор адъюванта.

Был проведен сравнительный анализ эффективности различных адъювантов в составе ротавирусной вакцины на модели лабораторных мышей линии BALB/c. Было сформировано 4 группы по 5 животных в группе. В качестве изучаемых адъювантов были использованы адьювант «Полиоксидоний» (азоксимера бромид) (группа 1) и водно-масляный адъювант на основе сквалена (группа 2). Контрольной группе вводили VLP без адъюванта (группа 3), группе плацебо - 0,9% раствор натрия хлорида (группа 4). Животных иммунизировали трехкратно внутримышечно 0,1 мл/доза с интервалом в 14 дней.

Уровень специфических иммуноглобулинов класса G (IgG) определяли методом непрямого ИФА. В ходе исследования был отмечен прирост специфических IgG более чем в 6 раз после 3-й иммунизации в сыворотках мышей, иммунизированных вакциной с адъювантом на основе сквалена, по сравнению с группой, иммунизированной вакциной с адъювантом «Полиоксидоний». Максимальный титр, наблюдаемый после 3-й иммунизации в группе животных, иммунизированных вакциной с адъювантом на основе сквалена, составил GM > 800000, для группы животных, иммунизированных вакциной с адъювантом «Полиоксидоний», GM = 128000, что статистически значимо отличалось от титра антител в группе животных, иммунизированных VLP без адъюванта (GM = 512000) (фигура 1).

Таким образом, был выбран адъювант на основе сквалена.

Была получена вакцина следующего состава:

- рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP), сформированные белками нуклеокапсида VP2, VP6 и поверхностными белками VP4 и VP7 6 генотипов G1, G2, G4, G9, P4, P8 ротавируса типа А, синтезированные в бакуловирусной системе экспрессии - 30- 120 мкг;

- калия дигидрофосфат - 0,30 мг;

- динатрия гидрофосфат - 0,31 мг;

- натрия хлорид - 2,01 мг;

- калия хлорид - 0,04 мг;

- кальция хлорид - 0,03 мг;

- трис(гидроксиметил)аминометан гидрохлорид - 0,04 мг;

- водно-масляный адъювант на основе сквалена - 0,25 мл;

- тиомерсал - 3,0 мкг;

- вода для инъекций - до 0,5 мл.

Активный компонент (вирусоподобные частицы) в буфере TNC (10 mM Tris-HCl, 140 mM NaCl, 10 mM CaCl2 рН 7,4) ресуспендируют в фосфатно-солевом буферном растворе (0,01М КН2РО4, 0,01М Na2НРО4; 0,137М NaCl; 0,0027М KCl, рН 7,4) до необходимой концентрации, и затем с адъювантом перемешивают в течение 30 минут при скорости вращения 250-300 оборотов в минуту.

Вакцина разливается в стерильные флаконы. Хранение производят в защищенном от света месте, при температуре 2-8°С.

Пример 3. Оценка иммуногенности вакцины на основе вирусоподобных частиц. Исследование формирования иммуноглобулинов IgG и IgA.

Для исследования иммуногенности вакцины в исследование включили и рандомизировали 180 здоровых добровольцев 18-45 лет, соответствующих критериям включения в исследование и не имеющих критериев для последующего анализа безопасности и иммуногенности. Добровольцы были распределены на группы в соотношении 1:1:1: Вакцинация проведена внутримышечно.

• 1 группа - 60 здоровых добровольцев 18-45 лет, которым введена вакцина Гам-VLP-рота трехкратно с интервалом 21 сутки с содержанием антигена 60 мкг в дозе 0,5 мл.

• 2 группа - 60 здоровых добровольцев 18-45 лет, которым введена вакцина Гам-VLP-рота трехкратно с интервалом 21 сутки с содержанием антигена 120 мкг в дозе 0,5 мл.

• 3 группа - 60 здоровых добровольцев 18-45 лет, которым введено Плацебо трехкратно с интервалом 21 сутки в объеме 0,5 мл.

Специфические иммуноглобулины классов IgG и IgA в сыворотках крови добровольцев определяли с помощью тест-систем на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), разработанных в ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи». Ранее была разработана аналогичные тест-системы для выявления специфических IgG и IgA в крови мышей, морских свинок, карликовых свиней (Филатов И.Е., Цибезов В.В., Баландина М.В., Норкина С.Н., Латышев О.Е.,Елисеева О.В., Черепушкин С.А., Верховский О.А., Гребенникова Т.В. Использование вирусоподобных частиц на основе рекомбинантных вирусных белков VP2/VP6 ротавируса А для оценки гуморального иммунного ответа методом ИФА. Вопросы вирусологии. 2023; 68(2). https://doi.org/10.36233/0507-4088-169).

Протокол ИФА для определения специфических IgG и IgA в сыворотке крови человека

Рекомбинантные белки VP2/6 РВА сорбировали в лунках микропланшета в 0,1 М карбонатном буфере, рН 9,5 в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл в лунку в течение ночи при 4 оС. После 4-кратной отмывки планшета в лунки вносили по 100 мкл сывороток крови человека (разведения 1/100 - 1/200 - 1/400 - 1/800 - 1/1600 - 1/3200 - 1/6400 - 1/12800). Инкубировали планшет 1 час при 37 оС. После отмывки планшета в лунки вносили по 100 мкл конъюгированных с пероксидазой хрена специфических антител к IgG человека (каталожный номер: A0170, производитель Sigma, США) и к IgA человека (каталожный номер: XM4-HRP, производитель ХЕМА, Россия). Инкубировали планшет 1 час при 37 оС. После промывания планшета вносили по 100 мкл субстратного раствора с тетраметилбензидином (ХЕМА, Россия). Инкубировали 15 мин при комнатной температуре в темноте и добавляли 100 мкл 1М H2SO4 для остановки реакции. Оптическую плотность при 450 нм (А450) измеряли на спектрофотометре с вертикальным лучом Multiscan ЕХ (Thermo, США). Титром антител считали последнее разведение сыворотки, при котором А450 в 2,5 раза превышает значение А450 в лунке без сыворотки.

Данная методика была валидирована с использованием сывороток крови пациентов, переболевших ротавирусной инфекцией, полученных из Инфекционной клинической больницы №1. Показано, что разработанная методика удовлетворяет критериям приемлемости по тестам: специфичность, повторяемость и промежуточная прецизионность и позволяет применять данные тест-системы для анализа биологических образцов в широком диапазоне количества специфических IgG и IgA.

Был проведен анализ титров специфических антител IgG (фигура 2), IgА (фигура 3) на 21 день после второй вакцинации и на 28 день после третьей вакцинации. Анализ данных титров специфических антител IgG показал, что на 28 день после третьей вакцинации СГТ для IgG в группе добровольцев, иммунизированных вакциной содержащей 60 мкг антигена составлял 10159,37, в группе добровольцев, иммунизированных вакциной содержащей 120 мкг антигена- 10204,61, тогда как в группе плацебо он был 2652,29. Аналогичные показатели для IgA на 28 день после третьей вакцинации СГТ составляли в группе добровольцев, иммунизированных вакциной содержащей 60 мкг антигена 2329,05, в группе добровольцев, иммунизированных вакциной содержащей 120 мкг антигена- 2015,87 и в группе плацебо 993,49. Прирост от исходного уровня ко дню 28 по IgG составил в среднем 6,28 в группе добровольцев, иммунизированных вакциной, содержащей 60 мкг антигена, 12,04 - в группе добровольцев, иммунизированных вакциной содержащей 120 мкг антигена, и 0,96 - в группе плацебо. Для IgA средний прирост был 2,18, 1,82 и 0,93, соответственно.

Титр специфических антител IgG и IgА после второй и третьей вакцинации был статистически достоверно выше в группах, вакцинированных вакциной с содержанием антигена 60 мкг в дозе и 120 мкг в дозе вакцины.

Таким образом, в результате оценки иммуногенности было показано, что трехкратное внутримышечное введение вакцины Гам-VLP-рота как в дозе 60 мкг, так и в дозе 120 мкг, эффективно индуцирует выработку специфических к ротавирусу антител IgG и IgA.

Пример 4. Оценка иммуногенности вакцины на основе вирусоподобных частиц. Образование вируснейтрализующих антител к различным антигенам ротавируса А.

В реакции нейтрализации использовались штаммы ротавируса А человека, депонированные в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России: G9P[4] (Инвентарный номер штамма в коллекции организации 2999), G3[P8] (Инвентарный номер штамма в коллекции организации 3001), а также вирус G1P[8], (Инвентарный номер штамма в коллекции организации 2998).

Был проведен анализ титров вируснейтрализующих антител на 21 день после второй вакцинации и на 28 день после третьей вакцинации. Уровень нейтрализующих антител, определяемых на 28-й день после третьего введения вакцины по сравнению с уровнем антител в группе плацебо, вырос от исходного в 4 раза для субъектов, получивших вакцину с содержанием антигена как 60 мкг, так и 120 мкг, в то время как в группе плацебо прирост уровня нейтрализующих антител отсутствовал (фигуры 4, 5, 6).

Пример 5. Оценка безопасности вакцины на основе вирусоподобных частиц.

Сбор данных о нежелательных явлениях (НЯ) осуществлялся на протяжении 70-ти дней после первого введения ИП/ Плацебо.

Безопасность вакцины оценивалась с помощью:

- помещения субъектов в условия стационарного наблюдения на 24 часа;

- проведения регулярных физикальных обследований;

- регулярных оценок жизненно важных показателей;

- проведение электрокардиографии;

- проведения регулярных лабораторных исследований: клинический анализ крови, биохимический анализ крови, коагулограмма, определение уровня IgE;

- сбора данных о возникновении нежелательных явлений, в т.ч., путем анализа дневников субъектов исследования.

За все время исследования было зарегистрировано 708 НЯ, которые наблюдались у 125 добровольцев (69,4%). Межгрупповое сравнение частоты развития НЯ было проведено с помощью χ2-критерия и при необходимости точного тест Фишера, если ожидаемая частота в какой-либо из ячеек была менее 5. Наиболее частыми НЯ были общие нарушения и реакции в месте введения.

Большая часть этих НЯ относятся к группам:

- общие нарушения и реакции в месте введения (боль/зуд/уплотнение/отек/эритема в месте инъекции, усталость, озноб, пирексия);

- нарушения со стороны нервной системы (головная боль);

- лабораторные и инструментальные данные (различные отклонения от норм показателей, определенных при проведении клинического/биохимического анализа крови, общего анализа мочи, коагулограммы, определения уровня IgE);

- нарушения со стороны мышечной, скелетной и соединительной ткани (миалгия);

- желудочно-кишечные нарушения (диарея, тошнота, рвота, абдоминальный дискофорт, гастроэнтерит).

Нежелательные явления, относящиеся к группам: Общие нарушения и реакции в месте введения; Нарушения со стороны нервной системы; Нарушения со стороны мышечной, скелетной и соединительной ткани; а также часть НЯ из группы Желудочно-кишечные нарушения (такие НЯ, как диарея, тошнота, рвота) представляют собой как местные, так и системные реакции на введение вакцины и являются обычными при применении иммунобиологических препаратов.

Нежелательные явления, относящиеся к группе «Лабораторные и инструментальные данные», судя по всему, не связаны с применением вакцины, так как между тремя группами исследования (группа, иммунизированная вакциной содержащей 60 мкг антигена, группа, иммунизированная вакциной содержащей 120 мгк антигена, группа плацебо) отсутствуют статистически значимые различия в отношении частоты развития этих НЯ. Нежелательные явления «Абдоминальный дискомфорт», «Гастроэнтерит», а также НЯ групп «Инфекции и инвазии», «Нарушения со стороны сердца» и «Нарушения со стороны репродуктивной системы и молочных желез» носили единичный характер.

Подавляющее число НЯ (542 из 708) были 1-й (Легкой) степени тяжести, 166 НЯ были 2-й (Умеренной) степени тяжести.

Необходимо отметить, что НЯ 3-й (Тяжелой) и 4-й (Жизнеугрожающей) степеней тяжести в исследовании не было.

Практически все НЯ (99,0%) закончилась выздоровлением, 7 НЯ (1,0%), представляющие собой незначительные отклонения лабораторных показателей от нормы (повышение уровня IgE, повышение уровня C-реактивного белка, повышение уровня холестерина, повышение уровня белка в моче), ), не разрешились (Таблица 1); при этом следует отметить, что указанные повышения лабораторных показателей не сопровождались наличием каких-либо симптомов и не потребовали какой-либо терапии. Для купирования одного НЯ (ОРВИ) потребовалось проведение медикаментозного лечения (Таблица 2).

Таблица 1. Исходы нежелательных явлений, зарегистрированных в анализируемый период, после введения исследуемого препарата, по группам (FAS)

Исход Вакцина 60 мкг/дозу Вакцина 120 мкг/дозу Плацебо Суммарно p-value N % N % N % N % Выздоровление/ разрешение 259/262 98,9 343/345 99,4 99/101 98,0 701/708 99,0 0,314 Продолжается/Не разрешилось 3/262 1,2 2/345 0,6 2/101 2,0 7/708 1,0

Таблица 2. Меры, предпринятые в связи с нежелательными явлениями, зарегистрированными в анализируемый период, по группам лечения (FAS)

Действия Вакцина 60 мкг/дозу Вакцина 120 мкг/дозу Плацебо Суммарно p-value N % N % N % N % Не применялись 261/262 99,6 345/345 100,0 101/101 100,0 707/708 99,9 0,513 Медикаментозное лечение 1/262 0,4 0/345 0,0 0/101 0,0 1/708 0,1 0,513

Проведенный анализ данных свидетельствует о благоприятном профиле безопасности вакцины против ротавирусной инфекции на основе вирусоподобных частиц, как в препарате, содержащей 60 мкг антигена, так и содержащей 120 мкг антигена в дозе вакцины.

Таким образом, представленные примеры показывают достижение заявленного технического результата и промышленную применимость заявленного изобретения.

Изобретение относится к области биотехнологии, иммунологии и вирусологии и касается вакцины против ротавирусной инфекции человека на основе вирусоподобных частиц ротавируса. Вакцина содержит рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP), сформированные белками нуклеокапсида VP2, VP6 и поверхностными белками VP4 и VP7 6 генотипов G1, G2, G4, G9, P4, P8 ротавируса типа А, синтезированные в бакуловирусной системе экспрессии – 30-120 мкг; калия дигидрофосфат - 0,30 мг; динатрия гидрофосфат - 0,31 мг; натрия хлорид - 2,01 мг; калия хлорид - 0,04 мг; кальция хлорид - 0,03 мг; трис(гидроксиметил)аминометан - 0,04 мг; тиомерсал - не более 4,5 мкг; водно-масляный адъювант на основе сквалена - 0, 25 мл, вода для инъекций - до 0,5 мл. Изобретение обеспечивает создание вакцины, которая индуцирует специфический иммунитет против инфекции, вызываемой ротавирусом А человека. 3 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл., 5 пр.

1. Вакцина против ротавирусной инфекции человека на основе вирусоподобных частиц ротавируса, содержащая:

- рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP), сформированные белками нуклеокапсида VP2, VP6 и поверхностными белками VP4 и VP7 6 генотипов G1, G2, G4, G9, P4, P8 ротавируса типа А, синтезированные в бакуловирусной системе экспрессии - 30-120 мкг;

- калия дигидрофосфат - 0,30 мг;

- динатрия гидрофосфат - 0,31 мг;

- натрия хлорид - 2,01 мг;

- калия хлорид - 0,04 мг;

- кальция хлорид - 0,03 мг;

- трис(гидроксиметил)аминометан - 0,04 мг;

- тиомерсал - не более 4,5 мкг;

- водно-масляный адъювант на основе сквалена - 0, 25 мл,

- вода для инъекций - до 0,5 мл.

2. Вакцина по п.1, где рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP) содержатся в количестве 30 мкг.

3. Вакцина по п.1, где рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP) содержатся в количестве 60 мкг.

4. Вакцина по п.1, где рекомбинантные вирусоподобные частицы (VLP) содержатся в количестве 120 мкг.