Способ лечения ран мягких тканей с использованием измельченных слайсов пантов марала Российский патент 2024 года по МПК A61K35/32 A61P17/02 

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, может быть использовано для сокрушения сроков регенерации, купированию воспалительных процессов.

Лечение ран мягких тканей остается актуальным вопросом современной хирургии [Лечение гнойной инфекции мягких тканей: от истории к настоящему (литературный обзор) / Э.С. Аль-Канани, В.К. Гостищев, А.Л. Ярош [и др.] // Актуальные проблемы медицины. - 2020. - Т. 43, №1. - С. 155-164]. По данным ВОЗ ежегодно в хирургический стационар обращается более 1 млрд человек с ранами мягких тканей, из которых гнойные раны составляют почти 60% случаев [Оценка эффективности применения современных перевязочных материалов в комплексном лечении гнойных ран / С.Е. Каторкин, С.А. Быстров, О.Е. Лисин [и др.] // Стационарозамещающие технологии: Амбулаторная хирургия. - 2019. - №1-2. - С. 146-152]. Расходы на лечение всех типов ран по разным оценкам достигают 96,8 млрд долларов в год. При наличии инфицирования ран мягких тканей значительно увеличиваются длительность пребывания больного в стационаре, стоимость лечения, количество потенциальных хирургических манипуляций, значительно возрастает частота инвалидизации, а также сроки временной нетрудоспособности [Возможности разработки нового биологически активного шовного материала в хирургии (обзор литературы) / А.М. Морозов, Е.М. Мохов, И.В. Любский [и др.] // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. -2019. -Т. 12, №3. - С. 193-198.].

Среди пациентов с ранами мягких тканей, в том числе инфицированных, более 70% составляют лица трудоспособного возраста. На амбулаторном этапе лечения данных больных сроки составляют до 13-17 суток, на стационарном -18-23 суток.

Таким образом, на современном этапе развития медицины, поиск новых методов стимуляции репаративных процессов мягких тканей остается актуальной задачей хирургии, решение которой должно позволить сократить сроки временной нетрудоспособности, снизить стоимость лечения, а также частоту развития инфекционных осложнений. Одним из таких методов являются применение пантов марала, обладающих иммуномодулирующими, адаптогенными свойствами, способных снижать воспалительные реакции и ускорять образование костной мозоли при лечении переломов [Б.И.Козлов. Методическое пособие для врачей и фармацевтов/ Б.И. Козлов, И.С. Попова. 2-е изд., испр. и перераб. 2014 г. - С. 5-14.].

Известен способ лечения ран [патент RU 2775878 С1], основанный на обработке раневой поверхности раствором хлоргексидина 0,02% и подсушиванием с дальнейшим аппликацией тонкого слоя порошка модифицированной монтмориллонт содержащей глины, содержащей 0,14 масс. % серебра, из расчета 0,1 г на 1 см². Далее производится фиксация прозрачной самофиксирующейся пленочной повязкой Hydrofilm®. Недостатками данного метода являются техническая сложность приготовления необходимого порошка, высокая цена, многокомпонентность предлагаемого лечения.

Известен способ лечения ран [патент RU 2684415 С1], основанный на использовании в I фазе раневого процесса повязки "Аквасель Ag повязка Гидрофайбер" и "Аквасель Ag Фоум повязка Гидрофайбер", во II или III фазе покрывают гидроколлоидными повязками "Грануфлекс", при этом при очищении раны, выполнении ее грануляционной тканью и появлении краевой эпителизации последнюю ушивают. К недостатком данной методики можно отнести ее сложность что связано с невозможностью точного определения стадий раневого процесса, поскольку данный параметр определяется субъективно хирургом, возможность аллергических реакций, необходимость провести посев микрофлоры с раневой поверхности для ушивания раны, а также сложность и многокомпонентность данных повязок.

Известно лекарственное средство для заживления ран на основе пантов марала [патент RU 2491945 С1]. Авторы разработали состав, включающий концентрат из сырья пантовых оленей, концентраты из смеси трав, стеариновую кислоту, моностеарат глицерина, воск пчелиный, воск косметический, ланолин, масло растительное и другие компоненты. Состав имеет сложную многоэтапную технологию приготовления, что делает его производство затруднительным и длительным процессом. Многокомпонентность лекарственного препарата влечет за собой возможность развития аллергических реакций, а также неизвестные исходы взаимодействия с другими препаратами, применяемыми в лечении ран мягких тканей.

Технический результат - сокращение сроков регенерации ран мягких тканей, купирование воспалительных процессов, активация тучных клеток на начальных этапах заживления раневого процесса, увеличение скорости синтеза ретикулярных и коллагеновых волокнах в зоне раневого дефекта по сравнению с группами контроля, а также восстановлению дермы кожи с образованием нежного малозаметного рубца.

Способ лечения ран мягких тканей с использованием измельченных слайсов пантов марала осуществляют следующим образом. Панты марала измельчают до размера частиц 200-300 мкм. Проводят обработку раневой поверхности стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, например, Мирамистина. На зону дефекта мягких тканей наносят порошок измельченных пантов марала с размером частиц 200-300 мкм плотность покрытия 400 мг/см². Обработку раны проводят ежедневно в течение 14 суток.

Оптимальный размер частиц и объема необходимого порошка для покрытия раневой поверхности из сырья, закупленного у производителя [найдено в интернет (https://apteka-altai.ru/shop/voronezh/panty-marala/panty-marala-slajsy-50-gr/), дата обращения 12.04.2024] определены эмпирически в процессе предварительных исследований.

При изучении оптимального размера частиц выявлено, что в случае использования измельченных пантов марала размером меньше 200 мкм формируется пленка на поверхности раны, которая препятствует доступу воздуха и способствует развитию гнойной инфекции. Также установлено, что хранение порошка, размер частиц которого менее 200 мкм, в закрытом флаконе приводт к реакциям разложения с формированием газовой взвеси и микровзрыва в момент вскрытия упаковки. Нанесение частиц диаметром более 300 мкм является нецелесообразным поскольку сцепление частиц с поверхностью раны и друг с другом крайне низкое, при любом движении животного частицы такого размера легко скатываются с поверхности раны.

Эмпирическим путем установлен оптимальный объема необходимого лекарственного средства для полного покрытия раневой поверхности - 400 мг/см². Например, у экспериментального животного с раной 45 мм² расход лекарственно средства составит 0,18 г. (пример расчета: 0.4 г/см² * 0.45 см² это 45 мм²=0,18 г).

Проведено экспериментальное исследование эффективности предлагаемого способа на 60 половозрелых самцах крысах линии Wistar в полном соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной практики (GLP), требованиями ФЗ РФ от 14.05.1993 г. №4979-1 "О ветеринарии" (с изменениями от 02.07.2021 г. ), директивы 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза "О защите животных, используемых в научных целях", ГОСТа №33216-2014 "Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами", ГОСТа №33215-2014 "Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур", ГОСТа №33044-2014 "Принципы надлежащей лабораторной практики".

Моделирование раневого дефекта проводили в области холки животного. В качестве ингаляционного наркоза использовали Изофлуран. На предварительно выбритом и обработанном антисептиком участке скальпелем по пластиковому шаблону диаметром 1,3 см. иссекали кожу и подкожную клетчатку. Поверхностную фасцию удаляли с помощью хирургических ножниц. Сформированный раневой дефект обрабатывали 0,9% физиологическим раствором NaCl и начинали лечение в соответствии с выбранной схемой.

После моделирования раны животные были разделены на 3 группы, по 20 в каждой. В 1-й контрольной группе лечение не проводили, заживление раны спонтанное. Во 2-й контрольной группе крысам ежедневно проводили обработку раневой поверхности стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, например, Мирамистина. В основной группе ежедневно проводили обработку раневой поверхности стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, например, Мирамистина с последующем нанесением измельченных пантов марала с размером частиц 200-300 мкм с плотностью покрытия 0,4 г/см².

Вывод животных из эксперимента проводили путем передозировки ингаляционного наркоза с последующим забором материала для морфологического изучения на 3-е, 5-е, 7-е и 14-е сутки после моделирования дефекта мягких тканей.

Во время проведения исследования использовали следующие методы оценки эффективности в группах исследования - объективные, лабораторные, а также гистологические и гистохимические методы с дальнейшим этапом морфометрии. Проводилась количественная оценка клеточного представительства фибробластического дифферона, функционального состояния тучных клеток, относительное количество фибриллярных компонентов стромы соединительной ткани дермы кожи с диаметром волокон более 1 мкм. При изучении динамики купирования местных признаков воспаления были изучены следующие симптомы - отек и гиперемия кожи, а также снижение количества отделяемого ран до скудного.

Определение отечности мягких тканей проводили при помощи сантиметровой ленты путем измерения диаметра шейного отдела. Температура кожных покровов устанавливали при помощи бесконтактного термометра. Динамику тканевого отделяемого получали путем аппликаций стерильных стандартизированных ватно-марлевых тампонов массой 1 г на две минуты и сравнения массы пропитанного тампона с исходной. Разница массы между пропитанным и исходным менее 0,4 г считали незначительной.

Согласно полученным данным, в основной группе отмечали сокращение сроков заживления в среднем в 1,3 раза по сравнению с опытной группой, в которой лечение раневой поверхности не проводили (табл. 1).

Для определения площади раневой поверхности использовали мобильное приложение ImitoWound, ПО находится в свободном доступе и является самым точным мобильными приложением для оценки динамики сокращения площади раневого дефекта [Сравнительный анализ эффективности мобильных приложений для проведения планиметрических исследований ран мягких тканей Боков Д.А., Михайлов Н.О. Санкт-Петербургские научные чтения-2022. Сборник тезисов IX Международного Молодежного Медицинского Конгресса. Санкт-Петербург, 2022. С. 369.] Получены следующие результаты (табл. 1.).

К 7-м суткам в группе при обработке раневой поверхности путем нанесения измельченных пантов марала площадь дефекта сократилась в среднем на 92,8% в группе без лечения на 83,9%, в группе, где применяли перевязки с использованием местного антисептика на 87,1%) от исходной. На 14 сутки исследования в группах без лечения и с перевязками с использование местного антисептика площадь составила в среднем 6,4%) и 2,6% от исходной, соответственно, при применении предлагаемого способа - 0,4%).

При морфологическом анализе микропрепаратов, окрашенных гематоксилином и эозином в группе, где не проводилось лечение раневой поверхности на 3-й сутки выявляются ярко выраженные признаки острого воспаления - полнокровные кровеносные сосуды, диапедез эритроцитов, отек, зоны некроза ткани, плотный воспалительный инфильтрат (112±9,6) (табл. 2; фиг. 1 а, элемент 1), включающий нейтрофильные и эозинофильные гранулоциты.

* - достоверность различий по сравнению с 1-й сутками, р<0,05

@ - достоверность различий по сравнению с группой без лечения, р<0,05

# - достоверность различий по сравнению с перевязками с применением местного антисептика, р<0,05

Представители фибробластического дифферона и волокнистые структуры с диаметром более 1 мкм в области раневого дефекта представлены в небольшом количестве относительно других групп (табл. 2). Наибольшее количество тучных клеток представлено в образцах дермы на 3-й сутки. Тучные клетки расположены скоплениями, значительную часть которых составляют клетки с признаками дегрануляции (табл. 2).

В группе с применением перевязок с использованием местного антисептика воспалительный инфильтрат (фиг. 1 6, элемент 1) имеет меньшую плотность (95±7,2) по сравнению с группой без лечения (табл. 2), выраженный отек стромы, сосуды расширены, полнокровны.

При окрашивании гематоксилином и эозином при использовании предложенного метода на аналогичные сутки визуализируются полнокровные кровеносные сосуды, умеренная отечность стромы, фибринозный экссудат с инфильтрацией полиморфноядерными лейкоцитами (фиг. 1 в). Воспалительный инфильтрат представлен в меньшем объеме, по сравнению с группами контроля. Количество тучных клеток ниже по сравнению с другими группами, большинство клеток с признаками дегрануляции (табл. 2). Тучные клетки солокализованы с ретикулярными и коллагеновыми волокнами, по данным ряда публикаций принимая участие в фибриллогенезе коллагена.

* - достоверность различий с группой без лечения (р<0,05)

На 5-е сутки при лечении ран перевязками с местными антисептиком отмечается формирование грануляционной ткани в сетчатом слое дермы кожи и волокнистого компонента соединительной ткани, единичными в поле зрения представителями фибробластического дифферона (фиг. 2 6, элемент 2), визуально волокна короткие и тонкие, без четкой гистоархитектоники. При использовании предложенного метода на 5-е сутки волокнистые компоненты соединительнотканной стромы дермы организуют сеть фибрилл с четко упорядоченной ячеистой структурой, представители фибробластического дифферона (фиг. 2 в, элемент 2) преобладают в дерме кожи в области раны.

На 7-е сутки исследования в группах без лечения и при использовании перевязок с местным антисептиком на аналогичные сутки еще только запускается фаза пролиферации и ремоделирования пораженного участка, обусловленная повышением количества клеточных агентов (тучные клетки и представители фибробластического дифферона), остаются признаки острого воспаления в виде очаговой инфильтрации гранулоцитами (фиг. 3 а, б). В группе без лечения раневой поверхности соединительнотканный компонент представлен тонкими ретикулярными волокнами (3), при применении стандартных перевязок с использованием местного антисептика - зрелыми коллагеновыми волокнами (4).

При использовании предложенного метода тучные клетки (5) значительно чаще солокализованы с волокнистыми структурами (4) различной степени зрелости, от молодых, ретикулярных волокон до более зрелых, оказывая важное регуляторное воздействие на процесс фибриллогенеза (фиг. 3 в). Динамика репаративных процессов при использованиии предложенного способа протекает значительно эффективнее по ряду критериев - сформированность волокнистых структур, снижение количества тучных клеток и представителей фибробластического дифферона (табл. 2).

На 14-е сутки гистологические структуры кожи после лечения с использованием предложенного метода соответствуют здоровой коже (фиг. 4 в). Область раны реэпителизирована, отсутствуют признаки острого воспаления, процент толстых коллагеновых волокон дермы занимает значительную площадь (71,4±0,4), количество тучных клеток и представителей фибробластического дифферона снижается, большинство волосяных фолликулов находятся в фазе активного роста. Эпителиальные гребни (9), врастающие в дерму и соединительнотканные сосочки (8), врастающие в эпидермис (6) сформированы только в опытной группе и соответствуют здоровой коже. Отмечается формирование большого количества волосяных фолликулов (7).

В группах без лечения (фиг. 4 а) и при использовании перевязок с местным антисептиком (фиг. 4 б) эпидермис (6) не полностью сформирован, представляет тонкий участок с базальным и шиповатыми слоями. Под эпидермисом в сосочковом слое сохраняются признаки воспаления, граница между эпидермисом и дермой выражена нечетко, единичные соединительно-тканные сосочки и эпителиальные гребни. Волокнистый компонент дермы представлен как толстыми, так и тонкими, незрелыми ретикулярными волокнами. В группе без лечения отмечается формирование волосяных фолликулов (7).

Пример выполнения способа. Самцу крысы линии Wistar возрастом 11,7 месяцев и массой тела 329 г на предварительно выбритом и обработанном участки холки нанесли рану размером 133,7 мм² с иссечением кожи, подкожной клетчатки и поверхностной фасции. Раневой дефект обработали 0,9% физиологическим раствором NaCl и начали лечение с использованием предлагаемого способа. Ежедневно раневую обрабатывали стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, Мирамистина с последующим нанесением измельченных пантов марала с размером частиц 200-300 мкм с плотностью покрытия 0,4 г/см². Полученные данные, а также необходимое для нанесения количество лекарственного вещества отражены в табл. 3.

На третьи сутки площадь раны составила 42,7 мм², что требует нанесение 0,17 г лекарственного вещества, отечность мягких тканей 11,4 см. температура в проекции раны 36,2 С, масса тканевого отделяемого составила 0,4 г.

На пятые сутки площадь раны уменьшилась на 50,35% и составила 21,5 мм², на раневую поверхность нанесли 0,086 г лекарственного вещества, температура в проекции раны 36,1 С, масса тканевого отделяемого 0,1 г, отечность мягких тканей 11,4 см.

На седьмые сутки при измерении аналогичных показателей получили следующие данные: площадь - 11,2 мм², что требует нанесение 0,045 г лекарственного вещества прочие показатели без изменения.

На четырнадцатые сутки площадь раневого дефекта составила 0,4 мм², что требует нанесение 0,02 г лекарственного вещества, отечность мягких тканей 11,5 см, температура в проекции раны составила 36,2 С, тканевое отделяемое отсутствовало.

После проведения измерений животное вывели из эксперимента путем передозировки ингаляционным наркозом с последующим забором материала для морфологического анализа. При проведении исследования полученного материала на 14-е сутки отмечается реэпителизация участка раны, гистоархитектоника ткани имеет четко выраженные слои, что характеризует полноценное восстановление дермы. Это подтверждается и процентом волокон соединительной ткани в препарате, составляющий в данном случае 87,7%, клетки воспалительного инфильтрата отсутствуют, волосяные фолликулы сформированы и равномерно распределены.

Таким образом, нами предложен новый способ лечения ран мягких тканей, включающий обработку раневой поверхности стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, например, Мирамистина с последующим нанесением измельченных пантов марала с размером частиц 200-300 мкм с плотностью покрытия 0,4 г/см². Обработку раны осуществляют ежедневно в течение 14 суток.

Это позволило получить новый, не известный из уровня техники результат: купирование воспалительных процессов с ускорением в 1,3 раза, активацию тучных клеток на начальных этапах заживления раневого процесса, увеличение скорости синтеза ретикулярных и коллагеновых волокнах в зоне раневого дефекта.

Описание к фигурам.

Фигура 1. Дерма кожи крыс на 3-й сутки. Методика окрашивания: гематоксилин и эозин, увеличение × 400, масштабный отрезок - 20 μm.

а) без лечения, б) перевязки с применением местного антисептика, в) предлагаемый способ.

1 - воспалительный инфильтрат.

Фигура 2. Дерма кожи крыс на 5-е сутки. Методика окрашивания: гематоксилин и эозин, увеличение × 400, масштабный отрезок - 20 μm.

а) без лечения, б) перевязки с применением местного антисептика, в) предлагаемый способ

2 - клетки фибробластического дифферона.

Фигура 3. Дерма кожи крыс на 7-е сутки. Методика окрашивания: комбинация протокола импрегнации раствором аммиачного серебра и окрашивания толуидиновым синим, увеличение 1000.

а) без лечения, б) перевязки с применением местного антисептика, в) предлагаемый способ

3 - тонкие, ретикулярные волокна,

4 - зрелые коллагеновые волокна,

5 - тучные клетки.

Фигура 4. Дерма кожи крыс на 14-е сутки. Методика окрашивания: гематоксилин и эозин; объектив × 20, увеличение 200, масштабный отрезок 50 μm.

а) без лечения, б) перевязки с применением местного антисептика, в) предлагаемый способ

6 - эпидермис;

7 - волосяные фолликулы;

8 - соединительнотканные сосочки;

9 - эпителиальные гребни.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу лечения поверхностных ран мягких тканей с использованием измельченных слайсов пантов марала. Способ лечения поверхностных ран мягких тканей с использованием измельченных слайсов пантов марала, включающий обработку раневой поверхности стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, отличающийся тем, что сразу после обработки раны антисептиком на неё наносят измельчённые слайсы пантов марала, размер частиц 200-300 мкм, плотность покрытия 0,4 г/см²; обработку раны осуществляют один раз в сутки в течение 14 дней. Изобретение позволяет сократить сроки регенерации ран мягких тканей, купировать воспалительные процессы, активировать тучные клетки на начальных этапах заживления раневого процесса, увеличить скорость синтеза ретикулярных и коллагеновых волокон в зоне раневого дефекта, восстановить дерму кожи с образованием нежного малозаметного рубца. 4 ил., 3 табл.

Способ лечения поверхностных ран мягких тканей с использованием измельченных слайсов пантов марала, включающий обработку раневой поверхности стерильным ватно-марлевым тампоном, смоченным раствором местного антисептика, отличающийся тем, что сразу после обработки раны антисептиком на неё наносят измельчённые слайсы пантов марала, размер частиц 200-300 мкм, плотность покрытия 0,4 г/см²; обработку раны осуществляют один раз в сутки в течение 14 дней.