ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ СЛАБОКИСЛОТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K9/127 A61K31/5585 A61K31/5578 A61K47/24 A61P11/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] В данной заявке испрашивается преимущество заявки США №62/847,337, поданной 14 мая 2019 г., полное раскрытие которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] В настоящем документе раскрыты фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одну липосому, инкапсулирующую слабо кислотное лекарственное средство с периодом полувыведения менее 2 часов, составленные таким образом, чтобы обеспечить соотношение максимальной и минимальной концентрации лекарственного средства в плазме крови (соотношение Р/Т (peak to trough)) от 1 до 100 (т.е. более плоский плазменный профиль) и/или увеличить эффективность инкапсулированного слабокислотного лекарственного средства по сравнению с активностью свободного слабокислотного лекарственного средства.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] Легочная гипертензия (ЛГ), определяемая как среднее давление в легочной артерии (pulmonary arterial pressure (PAP)) более 25 мм рт.ст. в покое или более 30 мм рт.ст. при физической нагрузке, часто характеризуется прогрессирующим и устойчивым повышением легочного сосудистого сопротивления. В конечном итоге это может привести к правожелудочковой недостаточности и может быть опасным для жизни состоянием, если его не лечить. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) разделила ЛГ на пять групп на основе патофизиологии, клинических проявлений и терапевтических возможностей [J Am Coll Cardiol. 2009; 54 (1 Suppl): S43-54].

[0004] ЛГ (группа 1 по классификации ВОЗ) представляет собой состояние, характеризующееся повышением артериального давления в легочной артерии, легочной вене или легочных капиллярах, приводящее к одышке, головокружению, обморокам и другим симптомам, которые усугубляются при физической нагрузке. ЛГ представляет собой тяжелое заболевание с заметно сниженной толерантностью к физической нагрузке и сердечной недостаточностью. Это орфанное заболевание с частотой 500-1000 новых случаев в США. Медиана выживаемости пациентов с нелеченной ЛГ находится в диапазоне от 2 до 3 лет с момента постановки диагноза; причиной смерти обычно является недостаточность правого желудочка.

[0005] Введение терапевтического средства для лечения ЛГ путем ингаляции имеет много преимуществ, включая прямую доставку терапевтического средства к целевому органу, что повышает легочную специфичность и уменьшает системные побочные эффекты. Такое введение также может улучшать соотношение вентиляции и перфузии за счет расширения сосудов и улучшенного газообмена и обеспечивать более высокую концентрацию лекарственного средства в органе-мишени при более низкой общей дозе. Ряд терапевтических средств для лечения ЛГ, таких как простагландин и его производные, были одобрены FDA. Недостатками ингаляционных простагландинов являются большие колебания уровня лекарственного средства в плазме между дозами и короткие периоды полувыведения простагландина. Данные недостатки требуют частых ингаляций лекарств (один раз в 4 часа, от 4 до 6 раз в день) и усиливают системные побочные эффекты (например, головная боль, тошнота, приливы и головокружение) и местные раздражающие воздействия (например, кашель, раздражение в горле, боль в глотке, носовое кровотечение, кровохарканье и хрипы), что, в конечном итоге, приводит к непереносимости вдыхаемых простагландинов (NS Hill et al, Inhaled Therapies for Pulmonary Hypertension. Respir Care 2015 Jun; 60 (6): 794-802).

[0006] Следовательно, существует потребность в ингаляционной терапии ЛГ, которая обеспечивает пролонгированный терапевтический эффект и/или повышенную эффективность, но снижает частоту введения. Настоящее изобретение удовлетворяет данные и другие потребности.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0007] Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей липосомы, суспендированные во внешней среде, причем указанные липосомы содержат (а) внешний липидный бислой, содержащий по меньшей мере один везикулообразующий фосфолипид; и (b) внутреннюю водную среду, содержащую слабокислотное лекарственное средство с периодом полувыведения менее 2 часов и соль для обеспечения градиента рН между внутренней водной средой и внешней средой, и после введения фармацевтической композиции по меньшей мере каждые шесть часов обеспечивается соотношение максимальной и минимальной концентрации лекарственного средства в плазме крови (соотношение Р/Т) от около 1 до около 100.

[0008] Настоящее изобретение также раскрывает способы лечения легочной гипертензии, включающие стадии введения фармацевтической композиции, описанной в данном документе, по меньшей мере каждые 6 часов.

[0009] Изобретение станет более очевидным при чтении с сопровождающими фигурами и подробным описанием, которое следует ниже.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0010] Приведенные в качестве примера варианты осуществления настоящего изобретения подробно описаны ниже со ссылкой на следующие фигуры.

[0011] Фиг. 1А-1D представляют собой линейные графики, иллюстрирующие моделируемые и измеренные уровни трепростинила в плазме крови для липосомальной композиции трепростинила у крыс при различных частотах дозирования (Фиг. 1А - 8 часов BID, Фиг. 1В - 10 часов BID, Фиг. 1С - 12 часов BID и 1D - 8 часов TID). Фиг. 1Е представляет собой линейный график, иллюстрирующий смоделированные и измеренные уровни трепростинила в плазме раствора свободного трепростинила у крыс, которым его вводили каждые 4 часа, QID.

[0012] Фиг. 2А-2D представляют собой линейные графики, иллюстрирующие смоделированные и измеренные уровни илопроста в плазме крови для липосомальной композиции илопроста у крыс при различных частотах дозирования (Фиг. 2А - 6 часов BID, Фиг. 2В - 8 часов BID, Фиг. 2С - 6 часов TID и Фиг. 2D - 8 часов TID). Фиг. 2Е представляет собой линейный график, иллюстрирующий смоделированные и измеренные уровни раствора свободного илопроста в плазме крови у крыс, которым его вводили каждые 2 часа 6 раз в день.

[0013] Фиг. 3А-3D представляют собой линейные графики, иллюстрирующие смоделированные и измеренные уровни трепростинила в плазме крови для липосомальной композиции трепростинила (Тивазо (Tyvaso)) у человека при различных частотах дозирования (Фиг. 3А - 8 часов BID, Фиг. 3В - 10 часов BID, Фиг. 3С - 12 часов BID и Фиг. 3D - 8 часов TID). Фиг. 3Е представляет собой линейный график, иллюстрирующий смоделированные и измеренные уровни трепростинила в плазме крови для раствора свободного Тивазо у человека, вводимого каждые 4 часа, QID.

[0014] Фиг. 4А представляет собой линейный график, показывающий снижение РАР у крыс с ЛГ, которым вводили физиологический раствор, раствор свободного трепростинила (раствор TRE) или липосомальную композицию трепростинила по настоящему изобретению (липосомальный TRE). Фиг. 4В представляет собой линейный график, показывающий концентрацию трепростинила в плазме крови у крыс с ЛГ, которым вводили раствор свободного трепростинила или липосомальную композицию трепростинила.

[0015] Фиг. 5А представляет собой линейный график, показывающий снижение РАР у крыс с ЛГ, которым вводили физиологический раствор, раствор свободного илопроста (раствор ILO) или липосомальную композицию илопроста по настоящему изобретению (липосомальный ILO). Фиг. 5В представляет собой линейный график, показывающий концентрацию илопроста в плазме крови у крыс с ЛГ, которым вводили свободный раствор илопроста или липосомальную композицию илопроста. (*Средняя концентрация в плазме крови от 5 исследованных крыс, у 2 из которых уровень лекарственного средства был ниже нижнего предела количественного определения (LLOQ) через 0,25 часа и расценен как 0.)

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0016] В данном контексте артикли «а» и «an» обозначают один или более чем один (то есть, по меньшей мере один) грамматический объект, к которому относится артикль. В качестве примера, «элемент» («an element») означает один или несколько элементов.

[0017] Все числа модифицированы термином «около». Используемый в данном описании термин «около» относится к диапазону ±10% от указанного значения.

[0018] Термин «содержать» или «содержащий» обычно используется в смысле «включать/включающий», что означает допущение наличия одного или нескольких свойств, ингредиентов или компонентов.

[0019] Термин «субъект» может относиться к позвоночному животному, страдающему легочной гипертензией, или к позвоночному животному, которое, как считается, нуждается в лечении легочной гипертензии. Субъекты включают теплокровных животных, таких как млекопитающие, таких как приматы, и, более предпочтительно, человека. Приматы также являются субъектами. Термин «субъект» включает домашних животных, таких как кошки, собаки и т.д., домашний скот (например, крупный рогатый скот, лошади, свиньи, овцы, козы и т.д.) и лабораторных животных (например, мышь, кролик, крыса, песчанка, морская свинка и т.д.). Таким образом, в данном описании рассматриваются ветеринарные применения и медицинские препараты.

[0020] Термин «лечение» относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам. Те, кто нуждается в лечении, включают тех, кто уже имеет ЛГ, тех, кто склонен к ЛГ из-за таких состояний, как хроническая легочная эмболия, фиброз легких, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) или тех, у которых ЛГ необходимо предотвратить. Применение или введение фармацевтической композиции, описанной в данном документе, предназначено для излечения, исцеления, облегчения, смягчения, изменения, исправления, улучшения, усиления или воздействия на ЛГ, симптомы или состояния ЛГ, инвалидность, вызванную ЛГ, или прогрессирование ЛГ.

[0021] Используемые в данном описании термины «инкапсуляция», «нагруженный» и «захваченный» могут использоваться взаимозаменяемо и относятся к включению или связыванию биологически активного средства (например, илопроста) во внутренней водной среде липосомы.

[0022] Используемый в данном описании термин «практически не содержит» означает, что фармацевтическая композиция содержит менее 5%, 4%, 3%, 2% или 1% определенного вещества. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция не содержит конкретного вещества.

[0023] Термин «эффективность лекарственного средства» определяется как AUC (area under the curve (площадь под кривой)) снижения РАР AUC концентрации лекарственного средства в плазме крови.

[0024] Слабокислотное лекарственное средство, используемое в данном описании, если не указано иное или иное не очевидно из контекста, также включает его фармацевтически приемлемую соль и его протонированную форму. В одном варианте осуществления слабокислотное лекарственное средство имеет период полувыведения от 1 минуты до 2 часов, от 1 минуты до 1,5 часов, от 1 минуты до 1 часа, от 10 минут до 2 часов или от 30 минут до 2 часов. В другом варианте осуществления слабо кислотное лекарственное средство имеет pKa от 1 до 7, от 1 до 6, от 2 до 6, от 2 до 6,9, от 2,5 до 7 или от 2,5 до 6. В еще одном варианте осуществления слабокислотное лекарственное средство представляет собой простагландин. В табл. 1 показаны неограничивающие примеры слабокислотного лекарственного средства с периодом полувыведения менее 2 часов.

[0026] В одном варианте осуществления слабо кислотное лекарственное средство с периодом полувыведения менее 2 часов не является пролекарством. В другом варианте осуществления слабо кислотное лекарственное средство по существу не содержит носителя, такого как полимер, гидрогель или хорошо гидратированная полимерная матрица. Без привязки к какой-либо конкретной теории считается, что комбинация носителя и слабой кислоты с периодом полувыведения менее 2 часов (например, полимер и трепростинил) не подходит для ингаляции, поскольку лекарство может не высвобождаться из полимера и накапливается в легких, что приводит к нежелательным побочным эффектам. Такая комбинация также не подходит для парентерального введения, поскольку вызывает свертывание крови.

[0027] Настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию с контролируемым высвобождением с более плоским плазматическим профилем, содержащую липосомы, суспендированные во внешней среде, причем указанные липосомы содержат: (а) внешний липидный бислой, содержащий по меньшей мере один везикулообразующий фосфолипид; и (b) внутреннюю водную среду, содержащую слабокислотное лекарственное средство с периодом полувыведения менее 2 часов и соль слабой кислоты для обеспечения градиента рН между внутренней водной средой и внешней средой, причем после введения фармацевтической композиции по меньшей мере каждые шесть часов обеспечивается соотношение максимальной и минимальной концентрации лекарственного средства в плазме крови (соотношение Р/Т) от около 1 до около 100.

[0028] Используемый в данном описании термин «соотношение Р/Т» предназначен для обозначения соотношения между пиковым уровнем в плазме крови (например, наивысшей устойчивой концентрацией в плазме крови) слабокислотного лекарственного средства между по меньшей мере двумя дозами и минимальным уровнем в плазме крови (например, самая низкая стабильная концентрация в плазме крови) слабокислого лекарственного средства между по меньшей мере двумя дозами. Меньшее соотношение Р/Т, например, менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, и более плоский плазматический профиль обеспечивают терапевтические эффекты в течение не менее 6 часов и уменьшают частоту дозирования слабо кислотного лекарственного средства.

[0029] Соотношение Р/Т фармацевтической композиции составляет менее 100, около 10-100, 10-95, 10-90, 10-85, 10-80, 10-75, 10-70, 10-65, 10-60., 10-55, 10-50, 5-100, 5-95, 5-90, 5-85, 5-80, 5-75, 5-70, 5-65, 5-60, 5-55, 5-50, 2-100, 2-95, 2-90, 2-85, 2-80, 2-75, 2-70, 2-65, 2-60, 2-55, 2-50, 1-100, 1-95, 1-90, 1-85, 1-80, 1-75, 1-70, 1-65, 1-60, 1-55, 1-50, 1-45, 1-40, 1-39, 1-38, 1-37, 1-36, 1-35, 1-34, 1-33, 1-32, 1-31, 1-30, 1-29, 1-28, 1-27, 1-26, 1-25, 1-24, 1-23, 1-22, 1-21, 1-20 или любой диапазон между ними (например, от 5 до 40) с частотой дозирования по меньшей мере каждые 6 часов, тогда как соотношение Р/Т соответствующего свободного лекарственного средства (например, трепростинила и илопроста) превышает 100 при частоте дозирования менее чем каждые 6 часов.

[0030] В приведенном в качестве примера варианте осуществления соотношение Р/Т илопроста, инкапсулированного в фармацевтическую композицию, составляет от около 5 до около 40 с режимом дозирования каждые 6, 8, 10 или 12 часов. В другом приведенном в качестве примера варианте осуществления соотношение Р/Т трепростинила, инкапсулированного в фармацевтической композиции, составляет от около 1 до около 20 при режиме дозирования каждые 6, 8, 10 или 12 часов.

[0031] Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению с заявленным соотношением Р/Т имеет следующие характеристики:

[0032] Увеличивает сокращение РАР и усиливает действие слабокислотного лекарственного средства. Эффективность фармацевтической композиции в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 раз выше, чем у свободного слабокислотного лекарственного средства. Не привязываясь к какой-либо конкретной теории, считается, что начальный повышенный уровень в плазме крови и/или высокое соотношение Р/Т слабокислотного лекарственного средства (например, простациклина и/или его аналогов) опосредуют как сужение сосудов, так и расширение сосудов через активацию различных подтипов простаноидных рецепторов. Соответственно, слабо кислотное лекарственное средство с высоким отношением Р/Т приводит к более высокой пиковой концентрации лекарственного средства в плазме крови и, следовательно, к меньшему снижению РАР из-за активации вазоконстрикторных рецепторов (например, DP₁, IP, ЕР₂ и ЕР₄), которые сужают легочную сосудистую сеть. С другой стороны, слабо кислотное лекарственное средство с более низким соотношением Р/Т (например, менее 100) позволяет избежать первоначального скачка концентрации лекарственного средства в плазме крови (то есть, обеспечивает более плоский плазматический профиль) и, следовательно, позволяет добиться большего снижения РАР и повышения эффективности лекарственного средства только путем активации сосудорасширяющих рецепторов (например, ЕР₃, EP₁ и FP), которые расширяют легочную сосудистую сеть.

[0033] Терапевтический эффект слабокислотного лекарственного средства сохраняется в течение по меньшей мере 6 часов после однократного введения фармацевтической композиции и, следовательно, снижает частоту введения (т.е. от 1 до 3 раз в день) и уменьшает побочные эффекты.

[0034] В приведенном в качестве примера варианте осуществления терапевтический эффект трепростинила сохраняется в течение от 6 до 12 часов. В другом приведенном в качестве примера варианте осуществления терапевтический эффект илопроста сохраняется в течение по меньшей мере 6 часов.

[0035] Более высокая концентрация лекарственного средства (например, более 1,0 мг/мл простациклина или его аналогов) в фармацевтической композиции позволяет доставить большее количество лекарственного средства за заданное время (например, 0,45 мг трепростинила может быть доставлено в минуту) по сравнению с концентрацией свободного лекарственного средства (0,18 мг трепростинила в минуту), не вызывая первоначального скачка концентрации лекарственного средства в плазме крови.

[0036] Настоящее изобретение также относится к способам лечения ЛГ путем введения терапевтически эффективного количества описанной в данном описании фармацевтической композиции.

[0037] Используемый в данном описании термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству слабокислотного лекарственного средства, обеспечивающему терапевтический эффект у субъекта с ЛГ, и может изменяться в зависимости от различных факторов, таких как способ и частота введения, масса тела и возраст. Специалисты в данной области могут определить дозировку в каждом случае на основе раскрытия в данном описании, установленных способов и своего собственного опыта. Термин «терапевтический эффект» относится по меньшей мере к 20% снижению РАР от исходного уровня.

[0038] Описанная в данном документе фармацевтическая композиция может вводиться перорально, путем ингаляции, инъекции (например, внутриартериально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутри стекловидного тела, интратекально, внутрисуставно, внутримышечно, в других полостях тела человека). В некоторых вариантах осуществления ингаляцию вводят с помощью ингалятора с отмеренной дозой, ингалятора сухого порошка, распылителя, ингалятора мягкого тумана или диспергирования с помощью аэрозоля (включая интраназальное и легочное введение).

[0039] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию можно вводить от одного до трех раз в день. В другом варианте осуществления частота дозирования фармацевтической композиции может составлять приблизительно каждые 6 часов, 6,5 часов, 7 часов, 7,5 часов, 8 часов, 8,5 часов, 9 часов, 9,5 часов, 10 часов, 10,5 часов, 11 часов, 11,5 часов, 12 часов или представлять собой их сочетание.

[0040] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят с другим терапевтическим средством для лечения ЛГ. Неограничивающие примеры терапевтического средства для лечения ЛГ включают ингибитор ФДЭ-5, блокатор кальциевых каналов, антагонист рецептора эндотелина, стимуляторы гуанилатциклазы, антикоагулянт или их комбинацию.

Липосомальные компоненты

[0041] Используемый в данном описании термин «липосома» относится к микроскопическим везикулам или частицам, состоящим из одного или нескольких липидных бислоев, окружающих внутреннюю водную среду. Для образования липосом необходимо присутствие по меньшей мере одного «везикулообразующего липида», который представляет собой амфипатический липид, способный либо образовывать, либо встраиваться в липидный бислой. Любой подходящий везикулообразующий липид может быть использован для образования липидного бислоя, составляющего липосомы. Везикулообразующий липид включает, помимо прочего, фосфолипиды, такие как фосфатидилхолин (PC), фосфатидилглицерин (PG), фосфатидилинозитол (PI), фосфатидная кислота (РА), фосфатидилэтаноламин (РЕ) или фосфатидилсерин (PS), и заряженные липиды (PS), такие как положительно заряженный липид или отрицательно заряженный липид.

[0042] Липидный бислой липосомы дополнительно содержит стерол (например, от 0 до 14,99 мол. %), указанный стерол выбран из группы, состоящей из холестерина, гексасукцината холестерина, эргостерина, ланостерина и любой их комбинации, но не ограничивается этим. В приведенном в качестве примера варианте осуществления стерол представляет собой холестерин.

[0043] В некоторых вариантах осуществления везикулообразующий липид представляет собой смесь первого фосфолипида и второго фосфолипида. В некоторых вариантах осуществления первый фосфолипид представляет собой фосфатидилхолин (PC), который выбран из группы, состоящей из гидрогенизированного яичного фосфатидилхолина (НЕРС), гидрированного соевого фосфатидилхолина (HSPC), дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC), дистеарилохолинфосфатидилфосфатидилхолина (DSPC), димиристоилфосфатидилхолина (DMPC), яичного фосфатидилхолина (SPC), соевоего фосфатидилхолина (SPC), олеоил-пальмитоил-фосфатидилхолина, диолеоил-фосфатидилхолина (DOPC), дипетрозелиноилфосфатидилхолина, пальмитоилелаидоилфосфатидилхолина, пальмитоил-олеоил-фосфатидилхолина, дилауроил фосфатидилхолина (DLPC), диундеканоилфосфатидилхолина, дидеканоилфосфатидилхолина, динонаноилфосфатидилхолина и любой их комбинации. В других вариантах осуществления второй фосфолипид представляет собой модифицированный полиэтиленгликолем фосфолипид, содержащий полиэтиленгликоль с молекулярной массой от около 500 до около 10000 дальтон, такой как 1,2-дистеаролили-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси(полиэтиленгликоль)-2000] (DSPE-PEG2000), отрицательно заряженный фосфолипид, такой как дистеарилоилфосфатидилглицерин (DSPG), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG) или димиристоилфосфатидилглицерин (DOPG). В приведенном в качестве примера варианте осуществления соотношение молярных процентов первый фосфолипид: холестерин: второй фосфолипид составляет 75-99: 0-14,9: 0,1-25.

[0044] В других вариантах осуществления везикулообразующие липиды представляют собой смесь первого фосфолипида и электрически заряженного липида. В приведенном в качестве примера варианте осуществления везикулообразующие липиды представляют собой смесь первого фосфолипида, второго фосфолипида и электрически заряженного липида. Заряженный липид включает стеариламин, 1,2-диолеоил-3-триметиламмоний-пропан (DOTAP), 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)-карбамоил]холестерин (DC-холестерин), N⁴-холестерил-Спермин (GL67), диметилдиоктадециламмоний (DDAB), 1,2-ди-О-октадеценил-3-триметиламмоний пропан (DOTMA), этилфосфохолин (этил PC) или их комбинацию. В другом приведенном в качестве примера варианте осуществления соотношение молярных процентов первый фосфолипид: холестерин: заряженный фосфолипид составляет 75-99: 0-14,9: 0,1-25.

[0045] В одном из вариантов осуществления соотношение молярных процентов HSPC, холестерина и DSPG в липидном бислое составляет 75-99: 0-14,9: 0,1-25. В другом варианте осуществления соотношение молярных процентов HSPC, холестерина и DSPE-PEG2000 в липидном бислое составляет 75-99: 0-14,9: 0,1-25.

[0046] В одном варианте осуществления внешний липидный бислой липосом дополнительно содержит поверхностно-активное вещество, которое может быть неионным поверхностно-активным веществом, катионным поверхностно-активным веществом или цвиттерионным поверхностно-активным веществом. Неионное поверхностно-активное вещество не имеет формально заряженных групп в своей голове. Катионное поверхностно-активное вещество несет в себе чистый положительный заряд. Цвиттерионное поверхностно-активное вещество электрически нейтрально, но несет формальные положительные и отрицательные заряды на разных атомах.

[0047] Неограничивающие примеры неионных поверхностно-активных веществ включают неионные водорастворимые моно-, ди- и триглицериды; неионные водорастворимые сложные эфиры моно- и дижирных кислот и полиэтиленгликоля; неионные водорастворимые сложные эфиры сорбитана и жирных кислот (например, сорбитанмоноолеаты, такие как TWEEN 20 (полиоксиэтилен 20 сорбитанмоноолеат), SPAN 80); неионные водорастворимые триблок-сополимеры (например, триблок-сополимеры поли(этиленоксид)/полипропиленоксид)/поли(этиленоксид), такие как POLOXAMER 406 (PLURONIC F-127) или их производные.

[0048] Неограничивающие примеры катионного поверхностно-активного вещества включают бромид диметилдиалкиламмония или бромид додецилтриметиламмония.

[0049] Неограничивающие примеры цвиттерионного поверхностно-активного вещества включают 3-(N,N-диметилпалмитиламмонио)пропансульфонат.

[0050] Липосомы в суспензии подвергаются уменьшению размера. Размер липосомы обычно определяется ее диаметром. Уменьшение размера липосом может быть достигнуто с помощью ряда способов, таких как экструзия, обработка ультразвуком, способы гомогенизации или способы измельчения, которые хорошо известны и могут быть выполнены специалистами в данной области. Экструзия включает пропускание липосом под давлением один или несколько раз через фильтры с определенными размерами пор. Фильтры обычно изготавливаются из поликарбоната, но также могут быть изготовлены из любого прочного материала, который не взаимодействует с липосомами и достаточно прочен, чтобы обеспечить экструзию при достаточном давлении. Размер липосом можно уменьшить с помощью обработки ультразвуком, которая использует звуковую энергию для разрушения или сдвига липосом, которые спонтанно преобразуются в более мелкие липосомы. Например, обработка ультразвуком может быть проведена путем погружения стеклянной трубки, содержащей суспензию липосом, в звуковой эпицентр, созданный в ультразвуковом устройстве типа ванны, или может быть использован ультразвуковой датчик зондового типа, в котором звуковая энергия генерируется вибрацией титанового зонда в прямом контакте с суспензией липосом. В настоящем изобретении липосомы обычно имеют диаметр от около 50 нм до 500 нм, например около 500 нм или менее, около 400 нм или менее, около 300 нм или менее, около 200 нм или менее, или около 100 нм или менее.

[0051] После получения липосом нужного размера концентрация соли слабой кислоты во внешней среде регулируется для обеспечения градиента рН между внутренней водной средой и внешней средой, что может быть выполнено несколькими способами, например, путем замены внешней среды подходящим буфером без солей слабых кислот, таким как буфер лимонной кислоты (H₃C₆H₅O) и буфер фосфорной кислоты (H₃PO₄), такими способами, как диафильтрация, диализ, ультрафильтрация или фильтрация с тангенциальным потоком.

[0052] Соль слабой кислоты обеспечивает более низкий внешний и более высокий внутренний градиент рН между внешней средой и внутренней водной средой липосом.

В одном варианте осуществления рН внешней среды по меньшей мере на 0,1 единицы, 0,5 единицы или 1 единицы выше, чем pKa слабо кислотного лекарственного средства. В еще одном варианте осуществления рН внутренней водной среды составляет около 7, 8, 9 или 10, и рН внешней среды составляет менее 7, менее 6, менее 5, менее 4, менее 3, около 3-7, около 3,5-6,5 или около 4-6.

[0053] Неограничивающие примеры соли слабой кислоты включают соль карбоновой кислоты и бикарбонатную соль.

[0054] Используемый в данном описании термин «бикарбонатная соль» относится к фармацевтически приемлемой соли соединения, включающей бикарбонатный анион и катионный компонент. В одном варианте катионный компонент солевого соединения представляет собой металл. Неограничивающие примеры металла включают металл группы IA или IIA, такой как калий (K), натрий (Na), кальций (Са), магний (Mg), цезий (Cs) и литий (Li) или металл, отличный от металла группы IA или IIA, такой как двухвалентное железо (Fe) и никель (Ni). Примеры бикарбонатной соли включают, но не ограничиваются ими, бикарбонат калия, бикарбонат натрия, бикарбонат кальция, бикарбонат магния, бикарбонат цезия, бикарбонат лития, бикарбонат никеля, бикарбонат двухвалентного железа или любую их комбинацию.

[0055] Используемый в данном описании термин «соль карбоновой кислоты» включает, но не ограничивается ими, формиат, ацетат, пропионат, бутират, изобутират, валерат, изовалерат или их комбинацию. В одном приведенном в качестве примера варианте осуществления ацетат представляет собой ацетат натрия, ацетат кальция или их комбинацию.

[0056] Концентрация бикарбонатной соли или соли карбоновой кислоты составляет 50 мМ или выше, 100 мМ или выше, 150 мМ или выше, 200 мМ или выше, 250 мМ или выше, 300 мМ или выше, 350 мМ или выше, 400 мМ или выше, 450 мМ или выше, 500 мМ или выше, 600 мМ или выше, 700 М или выше, 800 мМ или выше 900 мМ, менее 1000 мМ, от 50 мМ до менее 1000 мМ, от 50 мМ до 800 мМ, от 200 мМ до менее 1000 мМ, от 200 мМ до 800 мМ или от 200 мМ до 600 мМ, от 250 до менее 1000 мМ, от 250 мМ до 800 мМ или от 250 мМ до 600 мМ, от 300 мМ до 600 мМ.

[0057] Приготовленные липосомы можно хранить в течение значительных периодов времени перед загрузкой слабокислотного лекарственного средства и введением субъекту. Например, липосомы можно хранить в условиях охлаждения в течение значительных периодов времени перед загрузкой слабо кислотного лекарственного средства. В качестве альтернативы, липосомы можно обезвоживать, хранить, а затем регидратировать и загружать слабо кислотным лекарственным средством перед введением. Липосомы также могут быть обезвожены после загрузки слабо кислотным лекарственным средством. Дегидратация может выполняться рядом способов, доступных и известных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления липосомы дегидратируют с использованием стандартного устройства для сублимационной сушки, то есть дегидратации в условиях низкого давления. Также липосомы можно заморозить, например, с помощью жидкого азота. Сахариды можно добавлять в липосомальную среду, например, в буфер, содержащий липосомы, до дегидратации, чтобы гарантировать стабильность и целостность липосом во время дегидратации. Примеры сахаридов включают, но не ограничиваются ими, мальтозу, лактозу, сахарозу, трегалозу, декстрозу, сорбит, маннит, ксилит или их комбинацию.

[0058] Настоящее раскрытие будет дополнительно описано в следующих примерах. Однако следует понимать, что следующие примеры предназначены исключительно для целей иллюстрации и не должны толковаться как ограничение настоящего раскрытия на практике.

ПРИМЕРЫ

[0059] Липосомальная композиция трепростинила

[0060] Липосомальную коллоидную суспензию получали с использованием техники этанольной инъекции следующим образом.

[0061] Все липидные ингредиенты, включая первый фосфолипид (т.е. HSPC), холестерин и второй фосфолипид (т.е. DSPG) в молярном соотношении 3: 2: 0,075, растворяли в 2,86 мл раствора этанола при приблизительно 60°С. Полученный липидный раствор затем впрыскивали в 17,14 мл раствора бикарбоната натрия (400 мМ; рН 8,5) и перемешивали при интенсивном перемешивании при 60°С для гидратации липосом с последующей экструзией от 6 до 10 раз через поликарбонатные мембраны с определенным размером пор (200 и/или 100 нм, соответственно). Была получена суспензия липосом, имеющая средний размер частиц от 100 нм до 140 нм и индекс полидисперсности (PdI)<0,2. Суспензию липосом диализовали с помощью системы фильтрации с тангенциальным потоком против 50 мМ натрий-цитратного буфера (рН 5,5) для образования транс мембранного градиента рН между внутренним водным ядром липосомы и внешней средой (т.е. градиент рН) и затем хранили при 4°С перед загрузкой лекарственного средства.

[0062] Трепростинил (коммерчески доступный от Cayman Chemical, США) растворяли в 50 мМ водном растворе цитрата натрия, затем добавляли в суспензию липосом из предыдущего абзаца при соотношении лекарственного средства к фосфолипидам 1,5 мг/мл к 10 мМ и инкубировали при 40°С в течение 30 мин. К полученному продукту добавляли натрий-цитратный буфер (рН 5,5) для получения липосомальной композиции трепростинила с рН 5,5 во внешней среде и концентрацией фосфолипидов 8,59 мг/мл.

[0063] Липосомальная композиция илопроста

[0064] Липосомальную коллоидную суспензию получали с использованием техники этанольной инъекции следующим образом.

[0065] Все липидные ингредиенты, включая первый фосфолипид (т.е. HSPC) и второй фосфолипид (т.е. DSPE-PEG2000) в молярном соотношении 98: 2, растворяли в 2,86 мл раствора этанола при приблизительно 60°С. Полученный липидный раствор затем впрыскивали в 17,14 мл раствора бикарбоната натрия (200 мМ; рН 8,5), который содержит циклодекстрин (т.е. гидроксипропил-β-циклодекстрин (90 мМ)), и перемешивали при интенсивном перемешивании при 60°С для гидратации липосом с последующей экструзией через поликарбонатные мембраны с определенным размером пор (200 и/или 100 нм, соответственно) от 6 до 10 раз. Была получена суспензия липосом, имеющая средний размер частиц от 100 нм до 140 нм и индекс полидисперсности (PdI)<0,02. Суспензию липосом диализовали с помощью системы фильтрации с тангенциальным потоком против 10 мМ натрий-цитратного буфера (рН 5,5) для образования трансмембранного градиента рН между внутренним водным ядром липосомы и внешней средой (т.е. градиент рН) и затем хранили при 4°С перед загрузкой лекарственного средства.

[0066] Илопрост (коммерчески доступный от Cayman Chemical, США) растворяли в 50 мМ водном растворе цитрата натрия, затем добавляли в суспензию липосом из предыдущего абзаца при соотношении лекарственного средства к фосфолипидам 0,25 мг/мл к 10 мМ и инкубировали при 40°С в течение 30 мин. К полученному продукту добавляли натрий-цитратный буфер (рН 5,5) для получения липосомальной композиции илопроста с рН 5,5 во внешней среде и концентрацией фосфолипидов 8,59 мг/мл.

[0067] Приготовление раствора свободного трепростинила

Раствор свободного трепростинила получали растворением 0,6 мг трепростинила в 10 мл раствора, содержащего 6,52 мг/мл хлорида натрия, 6,31 мг/мл цитрата натрия и 0,2 мг/мл гидроксида натрия. рН раствора доводили до 6,0 7,2 с помощью 1 н. соляной кислоты.

[0068] Приготовление раствора свободного илопроста

[0069] Свободный раствор илопроста получали растворением 0,02 мг илопроста в 10 мл раствора, содержащего 1,62 мг/мл этанола, 0,242 мг/мл трометамина и 9,0 мг/мл хлорида натрия.

[0070] Аналитический способ определения концентрации трепростинила

[0071] Анализ концентрации трепростинила в липосомальной композиции трепростинила или в растворе свободного трепростинила проводили с использованием ВЭЖХ-системы Waters с детектором PDA. Аликвоту 20 мкл раствора образца непосредственно вводили в систему ВЭЖХ со смесью ацетонитрила и фосфатного буфера (рН 2,5) при объемном соотношении 50:50 в качестве подвижной фазы при скорости потока 1,0 мл/мин. Разделение проводили на колонке С18, 4,6 мм × 7,5 см, 3,5 мкм, при 45°С, и пик детектировался при 220 нм.

[0072] Аналитический способ определения концентрации илопроста

[0073] Анализ концентрации илопроста в липосомальной композиции илопроста или в растворе свободного илопроста проводили с использованием системы Waters HPLC с детектором PDA. Аликвоту 30 мкл раствора образца вводили непосредственно в систему ВЭЖХ со смесью ацетонитрила, метанола, фосфатного буфера (рН 2,5) при объемном соотношении 36:17:47 в качестве подвижной фазы при скорости потока 1,0 мл/мин. Разделение проводили в 3,9 мм × 15,0 см, 5,0 мкм, при 25°С, и пик детектировался при 205 нм.

[0074] Измеренный фармакокинетический (Pharmacokinetic (PK)) профиль у крыс

[0075] Тестируемое изделие (липосомальные композиции, содержащие трепростинил или илопрост, раствор свободного трепростинила или раствор илопроста) вводили исследуемому животному с помощью аэрозольного устройства с микроспреем (MicroSprayer, PennCentury, Philadelphia, PA), прикрепленного к шприцу высокого давления (PennCentury). Каждую крысу Sprague Dawley (>250 г) анестезировали изофлураном с надежным расположением под углом от 45° до 50° относительно верхних зубов. Наконечник аэрозоля с микроспреем вставляли в разветвление трахеи и вводили 0,5 мл/кг исследуемого вещества.

[0076] В каждый заданный момент времени образец крови крысы собирали в пробирку, содержащую гепарин, и держали на влажном льду. Затем образец крови центрифугировали при приблизительно 2500 × g в течение 15 минут и при 4±2°С в течение 1 часа после сбора, чтобы отделить плазму от клеток крови. Около 0,1 мл образца плазмы добавляли в новую пробирку для хранения и хранили при -70±2°С.

[0077] Концентрацию трепростинила в плазме измеряли, смешивая 50 мкл образца плазмы со 150 мкл ацетонитрила и перемешивая смесь в течение 1 минуты, чтобы нарушить связывание белков плазмы с трепростинилом, с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 минут. Супернатант (150 мкл) смешивали с равным объемом H₂O и подвергали анализу жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС, англ. LC-MS/MS) (табл. 2).

[0078] Концентрацию илопроста в плазме определяли путем смешивания 30 мкл образца плазмы с 3 мл метил-трет-бутилового эфира и перемешивания на вортексе в течение 1 минуты. Затем добавляли 1 мл раствора муравьиной кислоты (2%) и полученную смесь встряхивали в течение 2 минут для разрушения связывания белков плазмы с илопростом с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 минут. Супернатант (150 мкл) переносили в чистую пробирку, упаривали досуха в потоке N₂ в течение 15 мин при 35°С, смешивали с 200 мкл H₂O и подвергали анализу ЖХ-МС/МС (табл. 2).

[0080] Измеренный фармакокинетический (PK) профиль у здорового человека

[0081] Липосомную композицию трепростинила вводили здоровым людям (испускаемая доза 51 мкг; n=6) с помощью микрораспылителей (Philips Health Care, Chichester, UK). Концентрации трепростинила в плазме оценивали в заранее определенные моменты времени после ингаляции. Трепростинил выделяли путем экстракции жидкость/жидкость, супернатант выпаривали в потоке азота и оставшийся остаток восстанавливали. Конечный экстракт анализировали с помощью UPLC и MS/MS детекции (табл. 3).

[0083] Оценка фармакокинетики (PK) и фармакодинамики (PD) в модели острой ЛГ у находящихся в сознании крыс

[0084] Индукция острой ЛГ у крыс

[0085] Для данного исследования использовали самцов крыс Sprague Dawley массой приблизительно от 300 до 350 г. Один конец напорного катетера вводили в легочную артерию (pulmonary artery (РА)) крысы для измерения давления. Другой конец катетера был открыт в задней части шеи и соединен с датчиком давления. На следующий день крыс переводили в гипоксическую камеру (уровень кислорода составлял 10%/FiO₂=0,1). Чтобы вызвать стойкую ЛГ, крыс оставляли на ночь в гипоксической камере. После установления ЛГ использовали микрораспылитель для доставки исследуемого продукта чуть выше разветвления трахеи. РАР измеряли непрерывно в течение 30 секунд (для вычисления среднего РАР), и образец крови собирали в каждый заранее определенный момент времени.

[0086] Смоделированный плазменный профиль

[0087] Смоделированный плазменный профиль был рассчитан с использованием линейного внутреннего способа на основе измеренного уровня лекарственного средства в плазме крови у крыс или человека через определенный период (то есть через 8, 10 и 12 часов после ингаляции).

[0088] Пример 1: Влияние липосомальной композиции трепростинила на уровень трепростинила в плазме у здоровых крыс

[0089] На фиг. 1A-1D показаны измеренные и смоделированные PK профили липосомальных композиций трепростинила у крыс при различных частотах дозирования. Уровень трепростинила в плазме составлял от 2,0 до 3,0 нг/мл в течение до 8 часов и снизился до 0,3 нг/мл через 12 часов после интратрахеального введения 48 мкг/кг липосомальной композиции трепростинила (см. измеренные данные на фиг. 1A-1D). Следовательно, липосомальная композиция трепростинила по настоящему изобретению может доставляться два раза в день (BID, каждые 8, 10 или 12 часов) или три раза в день (TID, каждые 8 часов) (см. смоделированный профиль на фиг. 1А-1D) при поддержании терапевтического уровня трепростинила в плазме.

[0090] На фиг. 1Е показаны измеренные и смоделированные PK профили для раствора свободного трепростнила (12 мкг/кг), вводимого каждые 4 часа, QID. Концентрация в плазме достигла гораздо более высокого пика (8,0 нг/мл) в течение одного часа после ингаляции трепростинила (Т_макс=0,083 часа) и упала ниже нижнего предела количественного определения (LLOQ при 25 пг/мл) в течение 4 часов после ингаляции трепростинила (фиг. 1Е, измеренные данные). Данный pK профиль соответствует графику дозирования, указанному в информации о назначении ингаляционного Тивазо (трепростинил), который вводится 4 раза в день (QID) каждые 4 часа (фиг. 1Е, смоделированный профиль).

[0091] Режим BID или TID дозирования липосомальной композиции трепростинила приводит к более плоскому плазматическому профилю и более низкому соотношению Р/Т (менее 10) по сравнению с режимом дозирования QID раствора свободного трепростинила (соотношение Р/Т=121) (см. табл. 4).

[0093] Пример 2: Влияние липосомальной композиции илопроста на уровень илопроста в плазме крови здоровых крыс

[0094] После интратрахеального введения липосомальной композиции илопроста (60 мкг/кг) концентрация илопроста в плазме крови достигла пика С_макс(8,10 нг/мл) в течение 5 минут после введения дозы и постепенно снизилась до 0,32 нг/мл через 8 часов после введения дозы и до 0,17 нг/мл через 12 часов после введения дозы (фиг. 2A-2D, измеренные данные). Следовательно, липосомальная композиция илопроста может доставляться два раза в день (BID, каждые 6-8 часов) или трижды в день (TID, каждые 6-8 часов) (см. смоделированный профиль на фиг. 2A-2D) при сохранении терапевтического уровня илопроста в плазме.

[0095] РК профиль раствора свободного илопроста (доза 60 мкг/кг) у крысы показывает, что была достигнута более высокая концентрация пика в плазме крови (32 нг/мл) в момент времени 0,083 ч (Т_макс), аналогично липосомальной композиции илопроста, но С_макс была приблизительно в 4 раза больше, чем для липосомальной композиции илопроста. Концентрация илопроста в плазме крови упала ниже LLOQ (100 пг/мл) в течение 1 часа после введения дозы (фиг. 2Е, измеренные данные). Данный РК профиль соответствует графику дозирования, указанному в информации о назначении ингаляционного Вентависа (Ventavis (илопрост)), которое представляет собой 6-9 раз в день (QID) каждые 2 часа (фиг. 2Е, смоделированный профиль).

[0096] График BID или TID дозирования липосомальной композиции илопроста приводит к более плоскому плазматическому профилю по сравнению с профилем раствора свободного илопроста, вводимого каждые 2 часа (см. табл. 5).

[0098] Пример 3: Влияние липосомальной композиции трепростинила на уровень трепростинила в плазме крови здорового человека

[0099] Профиль РК (фармакокинетики) ингаляционной липосомальной композиции трепростинила (испускаемая доза 102 мкг) у человека показывает, что концентрация трепростинила в плазме крови поддерживалась в диапазоне от 0,12 до 0,26 нг/мл через 8 часов после введения дозы и постепенно снижалась до 0,02 нг/мл через 12 часов после введения дозы (фиг. 3A-3D, измеренные данные). Следовательно, липосомальную композицию по настоящему изобретению можно вводить два раза в день (BID, каждые 8, 10 и 12 часов) или три раза в день (TID, каждые 8 часов) (фиг. 3A-3D, моделируемый профиль) при сохранении терапевтического уровня трепростинила в плазме.

[00100] График дозирования липосомальной композиции трепростинила два раза в день или три раза в день у человека приводит к более плоскому плазматическому профилю и более низкому соотношению Р/Т (менее 15) по сравнению с графиком дозирования раствора свободного трепростинила QID у человека (соотношение Р/Т=845) (см. табл. 6).

[00101] Справочные данные о свободном растворе Тивазо (Tyvaso (трепростинил)) (54 мкг/кг) на фиг. 3Е были взяты из опубликованного исследования фазы I повышения однократной дозы у здоровых добровольцев [Drug Design, Development and Therapy 2012: 6 19-28], где показано, что более высокая пиковая концентрация в плазме крови (0,845 нг/мл) была достигнута через 0,167 часа (Т_макс) и снизилась до 100 пг/мл через 4 часа после введения. Смоделированный профиль раствора свободного Тивазо (трепростинила) на фиг. 3Е был оценен на основе справочных данных о свободном Тивазо и соответствует графику дозирования, указанному в информации о назначении ингаляционного Тивазо, который назначается 4 раза в день (QID) каждые 4 часа.

[00103] Пример 4: Влияние липосомальной композиции трепростинила у крыс с ЛГ. [00104] PK и PD профили липосомальной композиции трепростинила оценивают у находящихся в сознании крыс с острой ЛГ. Для подтверждения достоверности индуцированной гипоксией ЛГ у крыс была включена контрольная группа физиологического раствора. РАР крыс в контрольной группе физиологического раствора оставалось повышенным до 12 часов.

[00105] Крысы с ЛГ получали раствор свободного трепростинила в дозе 6 мкг/кг или липосомальную композицию трепростинила в дозе 6 мкг/кг в соответствии со способами, описанными ранее.

[00106] Крысы с ЛГ, получавшие свободный раствор трепростинила, показали умеренное снижение РАР. Максимальный эффект (снижение РАР до 79% от исходного гипоксического значения) наблюдался через 0,5 часа после введения дозы, и уровень трепростинила в плазме составлял около 1 нг/мл.

[00107] Для крыс с ЛГ, получавших липосомальную композицию трепростинила, РАР было устойчиво ниже, чем у крыс, получавших физиологический раствор или раствор свободного трепростинила. Более низкое РАР (снижение РАР до 69% от исходного гипоксического значения) сохранялся до 12 часов после введения дозы (Фиг. 4А). Результаты позволяют предполагать, что липосомальная композиция трипростинила более эффективно индуцирует расширение сосудов легочной артерии у крыс с ЛГ по сравнению с раствором свободного трепростинила.

[00108] У крыс с ЛГ, получавших липосомальную композицию трепростинила, данные PK/PD профиля показывают, что концентрация трепростинила в плазме крови при около 0,1 нг/мл снижает РАР до 63% от исходного гипоксического значения. Однако такая же концентрация трепростинила в плазме крови (0,1 нг/мл) у крыс, получавших раствор свободного трепростинила, снизила РАР только до 83% от исходного гипоксического значения, см. фиг. 4А и 4В. При такой же концентрации трепростинила в плазме раствор свободного трепростинила не так эффективен в снижении РАР, как липосомальная композиция трепростинила. На основании определения эффективности снижения РАР, изложенного выше, липосомальная композиция трепростинила показывает в 3-9 раз более высокую эффективность снижения РАР по сравнению с таковой у раствора свободного трепростинила (табл. 7).

[00110] Пример 5: Влияние липосомальной композиции илопроста у крыс с ЛГ

[00111] Крысы с ЛГ, получавшие свободный раствор илопроста (2,5 мкг/кг), показали умеренное снижение РАР. Максимальный эффект (снижение РАР до 76% от исходного гипоксического значения) наблюдался через 0,75 часа после введения дозы, и уровень илопроста в плазме крови был ниже 0,1 нг/мл (LLOQ), см. фиг. 5А.

[00112] Крысы с ЛГ, получавшие липосомальную композицию илопроста (2,5 мкг/кг), имели постоянно более низкое РАР, чем крысы, получавшие физиологический раствор или раствор свободного трепростинила. Более низкое РАР (снижение РАР до 70% от исходного гипоксического значения) сохранялся до 4 часов после введения дозы (фиг. 5А). Результаты показывают, что липосомальная композиция илопроста эффективно индуцирует расширение сосудов легочной артерии у крыс с ЛГ.

[00113] Данные PK/PD профиля показывают, что у крыс с ЛГ, получавших липосомальную композицию илопроста, плазменные концентрации при около 0,1 нг/мл снижали РАР до 68,4% от исходного гипоксического значения, тогда как аналогичная плазменная концентрация илопроста (ниже LLOQ) у крыс, получавших раствор свободного илопроста, по-видимому, не так эффективна (снижает РАР до 77,2% от исходного гипоксического значения), как липосомальный аналог, см. фиг. 5А и 5В. На основании определения эффективности снижения РАР, изложенного выше, липосомальная композиция илопроста показывает от 3 до 5 раз более высокую эффективность снижения РАР по сравнению с таковой у раствора свободного илопроста (см. табл. 8).

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей липосомы, причем указанные липосомы содержат внешний липидный бислой; и внутреннюю водную среду, включающую слабо кислотное лекарственное средство с периодом полувыведения менее 2 часов, которое представляет собой трепростинил или илопрост. Также предусматривается применение фармацевтической композиции, раскрытой в настоящем описании, для лечения легочной гипертензии с уменьшенной частотой дозирования. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 19 ил., 8 табл., 5 пр.

1. Фармацевтическая композиция для лечения легочной гипертензии, содержащая:

липосомы, суспендированные во внешней среде, причем указанные липосомы содержат:

(а) внешний липидный бислой, причем внешний липидный бислой содержит (а) первый фосфолипид, который представляет собой фосфатидилхолин (PC), (b) второй фосфолипид или электрически заряженный липид, где второй фосфолипид представляет собой ПЭГ-модифицированный фосфолипид или отрицательно заряженный фосполипид; и (с) необязательно стерол; и

(b) внутреннюю водную среду, содержащую слабокислотное лекарственное средство, которое представляет собой трепростинил или илопрост и бикарбонатную соль в концентрации от около 50 мМ до около 600 мМ,

при этом липосомы имеют индекс полидисперсности (PdI) <0,2.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой стерол выбран из группы, состоящей из холестерина, гексасукцината холестерина, эргостерина, ланостерина и их комбинации.

3. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой указанное слабокислотное лекарственное средство представляет собой илопрост.

4. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой указанное слабокислотное лекарственное средство представляет собой трепростинил.

5. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой фосфатидилхолин (PC) представляет собой HEPC, HSPC, DSPC, DPPC, DMPC, SPC, SPC, DOPC, DLPC или любую их комбинацию.

6. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой ПЭГ-модифицированный фосфолипид представляет собой PEG-DSPE.

7. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой электрически заряженный липид представляет собой стеариламин, 1,2-диолеоил-3-триметиламмонийпропан (DOTAP), 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)-карбамоил]холестерин (DC-холестерин), N⁴-холестерил-спермин (GL67), диметилдиоктадециламмоний (DDAB), 1,2-ди-O-октадеценил-3-триметиламмоний пропан (DOTMA), этилфосфохолин (этил-РС) или их комбинацию.

8. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой отрицательно заряженный фосфолипид представляет собой DSPG, DPPG, DMPG, DOPG или любую их комбинацию.

9. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой первый фосфолипид представляет собой HSPC или DSPC, второй фосфолипид представляет собой PEG-DSPE, DSPG или DOPG и электрически заряженный липид представляет собой стеариламин или DDAB.

10. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 9, в которой молярное соотношение первого фосфолипида ко второму фосфолипиду или электрически заряженному липиду представляет собой 98:2.

11. Фармацевтическая композиция по п. 10, в которой слабокислотное лекарственное средство представляет собой илопрост или трепростинил.

12. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой первый фосфолипид представляет собой HSPC или DSPC, стерол представляет собой холестерин, второй фосфолипид представляет собой PEG-DSPE, DSPG или DOPG и электрически заряженный липид представляет собой стеариламин или DDAB.

13. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 12, в которой соотношение молярных процентов первый фосфолипид: стерол: второй фосфолипид или электрически заряженный липид составляет 75-99: 0-14,9: 0,1.

14. Фармацевтическая композиция по п. 13, в которой слабокислотное лекарственное средство представляет собой трепростинил или илопрост.

15. Применение фармацевтической композиции по пп. 1-14 для лечения легочной гипертензии, включающее стадии введения фармацевтической композиции по пп. 1-14 по меньшей мере каждые 6 часов.

16. Применение по п. 15, в котором фармацевтическую композицию вводят один, два или три раза в день.

17. Применение по п. 15, в котором фармацевтическую композицию вводят путем ингаляции.

18. Применение по п. 17, в котором терапевтический эффект слабокислотного лекарственного средства сохраняется в течение по меньшей мере 6 часов после введения фармацевтической композиции.

19. Применение по п. 17, в котором соотношение максимальной и минимальной концентрации лекарственного средства в плазме крови (соотношение P/T) от около 1 до около 100 сохраняется от около 1 часа до около 12 часов после введения фармацевтической композиции.

20. Применение по п. 15, дополнительно включающее введение по меньшей мере одного другого терапевтического средства, эффективного при лечении легочной гипертензии, где указанное терапевтическое средство представляет собой простогландин, ингибитор ФДЭ-5, блокатор кальциевых каналов, антагонист рецептора эндотелина, стимуляторы гуанилатциклазы, антикоагулянт или их комбинацию.