Способ прогнозирования риска развития многососудистого поражения коронарных артерий у лиц с сахарным диабетом 2 типа Российский патент 2025 года по МПК G01N33/58 C12Q1/6806 C12Q1/6827 C12Q1/686 C12Q1/6876 C12Q1/6883 G16H50/30 

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, кардиологии.

Аналоги

Известны работы о роли полиморфизма ряда генов в развитии и течении сердечно-сосудистых заболеваний при сахарном диабете, однако они отличаются значительной противоречивостью (Ferrarezi DAF, Bellili-Munoz N, Dubois-Laforgue D, et al. Allelic variations of the vitamin D receptor (VDR) gene are associated with increased risk of coronary artery disease in type 2 diabetics: The DIABHYCAR prospective study. Diabetes and Metabolism. 2013;39(3):263-70. https://doi.org/10.1016/i.diabet.2012.11.004. Ma L, Wang S, Chen H, Cui L, Liu X, Yang H, Li G, Liu S, Qi T, Tian H. Diminished 25-OH vitamin D₃ levels and vitamin D receptor variants are associated with susceptibility to type 2 diabetes with coronary artery diseases. J Clin Lab Anal. 2020 Apr;34(4):e23137. doi: 10.1002/jcla.23137. Epub 2019 Dec 3. PMID: 31793694; PMCID: PMC7171300)

Критика аналогов

Известные способы не выявляют признаки генетического полиморфизма тех или иных генов, отвечающих за развитие многососудистого поражения коронарных артерий у пациентов с сахарным диабетом 2 типа.

Прототип

В качестве прототипа нами взят «Способ прогнозирования риска неблагоприятного исхода у больных острым коронарным синдромом и сопутствующим сахарным диабетом 2 типа» патент №2573499 от 27.10.2014. Известный способ заключается в прогнозировании неблагоприятного исхода в течение двенадцати месяцев у больных после эпизода острого коронарного синдрома с сопутствующим сахарным диабетом 2 типа. Сущность способа-прототипа: исследуют факторы иммунного ответа: СРБ (С-реактивный белок), интерлейкины-1β, -4, -6,-10 (ИЛ-β, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10), фактор некроза опухоли α (ФНОα), маркер дестабилизации атеросклеротической бляшки - растворимую форму CD40 лиганда (sCD40L) и маркеры эндотелиальной дисфункции - Натрийуретический пропептид С-типа (CNP) и Ангиотензин-II (АТ-II) в сыворотке крови. Затем по предложенной математической модели рассчитывают коэффициент прогнозирования риска развития неблагоприятного исхода. При полученном значении коэффициента К>0,15 оценивают риск развития неблагоприятного исхода как высокий, а при полученном значении коэффициента К<0,15 оценивают риск развития неблагоприятного исхода как низкий.

Критика прототипа

Недостатком способа-прототипа можно считать то, что он отражает процессы воспаления и иммунитета, которые могут иметь косвенное значение, но не дает патогенетическое обоснование развития поражения коронарных артерий у пациентов сахарным диабетом 2 типа, что уменьшает достоверность метода.

Цель изобретения

Целью изобретения является повышение эффективности прогнозирования развития многососудистых поражений коронарных артерий у пациентов с сахарным диабетом 2 типа. Обеспечение адекватного включения в прогностические алгоритмы новых предикторов, в том числе и генетических, позволит повысить чувствительность и специфичность прогностических алгоритмов.

Сущность изобретения

Предлагаемый способ заключается в следующем: проводят взятие цельной периферической крови в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette объемом 4,0 мл с добавленной в качестве антикоагулянта солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Выделение геномной ДНК было проведено из 100 мкл периферической крови с использование набора Проба-Рапид-Генетика (ДНК-технология, Россия). Для амплификации готовят реакционную смесь, согласно протоколу производителя (из расчета на 1 образец): 20 мкл смеси для амплификации, включающей в себя праймеры, сигнальные зонды, содержащие флуоресцентные метки Fam и Hex, 12 мкл ПЦР-буфера, 1 мкл Taq-AT-полимеразы, 5 мкл ДНК, с последующим наслоением 20 мкл минерального масла. Исследование полиморфизма генов проводят методом ПЦР в режиме реального времени (real-timepcr) с использованием наборов тест систем компании ДНК технологии на приборе ДТлайт (ДНК-Технология, Россия).

Оценивались полиморфизмы гена рецептора витамина D (VDR): FokI, BsmI, TagI и при наличии сочетания: генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI была выявлена ассоциативная связь и прогнозирует многососудистое поражение коронарных артерий.

Для оценки атеросклеротического поражения коронарных артерий всем пациентам проводилась ангиография. Процедуру проводили по методике М. Judkins и соавторов (1968) трансрадиальным доступом. Использовались диагностические катетеры 5F (Boston, Terumo). Контрастное вещество (омнипак) вводили болюсно от руки в количестве 5-10 мл на каждую инъекцию. Съемка коронарных артерий шла с частотой 25 кадров/секунду. Использовалась ангиографическая установка General Electric. При визуальном контроле оценивали коронарные артерии и их ветви, тип кровоснабжения, число пораженных сосудов.

При наличии сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируется многососудистое поражение коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.

Примеры конкретного выполнения способа

Пример 1

Больной А. обследован на наличие генетического полиморфизма гена VDR: FOKI, BSMI, TagI. Взятие цельной периферической крови проводилось в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette объёмом 4,0 мл с добавленной в качестве антикоагулянта солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Выделение геномной ДНК было проведено из 100 мкл периферической крови с использование набора Проба-Рапид-Генетика (ДНК-технология, Россия). Для амплификации готовили реакционную смесь, согласно протоколу производителя (из расчета на 1 образец): 20 мкл смеси для амплификации (включающей в себя праймеры, сигнальные зонды, содержащие флуоресцентные метки Fam и Hex), 12 мкл ПЦР-буфера, 1 мкл Taq-AT-полимеразы, 5 мкл ДНК, с последующим наслоением 20 мкл минерального масла, для избежания выпаривания реакционной смеси в приборе. Исследование полиморфизмов гена VDR проводили методом

ПЦР - в режиме реального времени (real-timepcr) с использованием наборов тест систем компании ДНК технологии на приборе DT-Lite (НПО ДНК-Технология, Россия).

Получены результаты: сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируют многососудистое поражение коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.

Пациенту проведена ангиография коронарных артерий, по результатам которого выявлено многососудистое поражение.

Результаты осуществления данного способа у больного А. подтвердили, что сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируют многососудистое поражение коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.

Пример 2

Больной Б. с сахарным диабетом 2 типа обследован на наличие генетического полиморфизма гена VDR: FokI, BsmI, TagI. Взятие цельной периферической крови проводилось в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette объёмом 4,0 мл с добавленной в качестве антикоагулянта солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Выделение геномной ДНК было проведено из 100 мкл периферической крови с использование набора Проба-Рапид-Генетика (ДНК-технология, Россия). Для амплификации готовили реакционную смесь, согласно протоколу производителя (из расчета на 1 образец): 20 мкл смеси для амплификации (включающей в себя праймеры, сигнальные зонды, содержащие флуоресцентные метки Fam и Hex), 12 мкл ПЦР-буфера, 1 мкл Taq-AT-полимеразы, 5 мкл ДНК, с последующим наслоением 20 мкл минерального масла, для избежания выпаривания реакционной смеси в приборе. Исследование полиморфизмов гена VDR проводили методом ПЦР - в режиме реального времени (real-timepcr) с использованием наборов тест систем компании ДНК технологии на приборе DT-Lite (НПО ДНК-Технология, Россия).

Получены результаты: сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируют многососудистое поражение коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.

Пациенту проведена ангиография коронарных артерий, по результатам которого выявлено многососудистое поражение.

Результаты осуществления данного способа у больного Б. подтвердили, что сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируют многососудистое поражение коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.

Признаки изобретения, отличительные от прототипа

Способ-прототип исследует факторы иммунного ответа: СРБ (С-реактивный белок), которые отражают процессы воспаления и иммунитета. Признаки прототипа - исследуют факторы иммунного ответа: СРБ (С-реактивный белок), интерлейкины-1β, -4, -6,-10 (ИЛ-1β, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10), фактор некроза опухоли α (ФНОα), маркер дестабилизации атеросклеротической бляшки - растворимую форму CD40 лиганда (sCD40L) и маркеры эндотелиальной дисфункции - Натрийуретический пропептид С-типа (CNP) и Ангиотензин-П (АТ-П) в сыворотке крови.

Предлагаемый в качестве изобретения способ определяет, что при наличии сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируется многососудистое поражение коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.

Признаки изобретения - выделение геномной ДНК проводят из 100 мкл периферической крови с использование набора Проба-Рапид-Генетика (ДНК-технология, Россия). Взятие цельной периферической крови проводилось в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette объёмом 4,0 мл с добавленной в качестве антикоагулянта солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Для амплификации готовили реакционную смесь, согласно протоколу производителя (из расчета на 1 образец): 20 мкл смеси для амплификации (включающей в себя праймеры, сигнальные зонды, содержащие флуоресцентные метки Fam и Hex), 12 мкл ПЦР-буфера, 1 мкл Taq-AT- полимеразы, 5 мкл ДНК. При определении генетического полиморфизма при наличии сочетания: генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FOKI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BSMI была выявлена ассоциативная связь и прогнозирует многососудистое поражение коронарных артерий.

Положительный эффект от применения предлагаемого способа

Предлагаемый в качестве изобретения способ позволяет прогнозировать многососудистое поражение коронарных артерий при выявлении ассоциативной связи: генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI. Использование предлагаемого способа позволяет с повысить достоверность прогнозирования развитие многососудистых поражений коронарных артерий у пациентов с сахарным диабетом 2 типа. На основании проведенного исследования выявлены следующие закономерности: наличие ассоциативной связи генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, и генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF и Ff полиморфного маркера FokI и генотипом ВВ и Вb полиморфного маркера BsmI с многососудистым поражением коронарных артерий у пациентов с сахарным диабетом 2 типа.

Источники нформации

«Способ прогнозирования риска неблагоприятного исхода у больных острым коронарным сидромом и сопутствующим сахарным диабетом 2 типа», патент РФ № 2573499 от 27.10.2014. - прототип.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития многососудистого поражения коронарных артерий у лиц с сахарным диабетом 2 типа. В цельной крови исследуют полиморфизмы гена рецептора витамина D (VDR): FokI, BsmI, TagI. При наличии сочетания генотипа ТТ полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, или сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF или Ff полиморфного маркера Fokl и генотипом ВВ или Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируют риск развития многососудистого поражения коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа. Способ обеспечивает повышение эффективности прогнозирования развития многососудистых поражений коронарных артерий у пациентов с сахарным диабетом 2 типа за счет определения полиморфизмов FokI, BsmI, TagI гена VDR в крови. 2 пр.

Способ прогнозирования риска развития многососудистого поражения коронарных артерий у лиц с сахарным диабетом 2 типа, характеризующийся тем, что в цельной крови исследуют полиморфизмы гена рецептора витамина D (VDR): FokI, BsmI, TagI, и при наличии сочетания генотипа ТТ полиморфного маркера TagI с генотипом ff полиморфного маркера FokI, или сочетания генотипа ТТ или Tt полиморфного маркера TagI с генотипом FF или Ff полиморфного маркера Fokl и генотипом ВВ или Вb полиморфного маркера BsmI, прогнозируют риск развития многососудистого поражения коронарный артерий при сахарном диабете 2 типа.