ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001] Настоящая заявка относится к полипептидным соединениям и их применению в фармацевтической области. Более конкретно, настоящая заявка относится к полипептидному соединению, обладающему активностью тройного агониста в отношении рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1 R), рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP R) и рецептора глюкагона (GCG R), и к их применению при лечении метаболического синдрома.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Диабет II типа и ожирение все чаще становятся глобальными болезнями, влияющими на здоровье человека. Ожирение является основной причиной многих хронических болезней, таких как диабет, гипертония, болезнь сердца, дислипидемия, жировая болезнь печени, атеросклероз, артрит, инсульт, нейродегенеративные заболевания, а диабет также может привести к сердечно-сосудистым и цереброваскулярным болезням и другим осложнениям. В настоящее время большинство гипогликемических лекарственных средств, представленных на рынке, оказывают влияние только на контроль уровня сахара в крови, но не могут улучшить массу тела пациента с ожирением. Некоторые лекарственные средства даже имеют побочный эффект в виде увеличения массы тела. Таким образом, по-прежнему существует настоятельная необходимость в разработке лекарственных средств, которые могут как снижать уровень сахара в крови, так и улучшать массу тела, а также обладают множеством полезных эффектов, удовлетворяющих потребностям большинства людей с ожирением и сахарным диабетом II типа.
[0003] Инкретин представляет собой тип полипептидного гормона, выделяемого из кишечника после стимуляции нормального физиологического приема пищи. Ранние исследования показали, что он может стимулировать β-клетки островков поджелудочной железы секретировать инсулин при повышении уровней глюкозы после еды, регулировать гомеостаз глюкозы и защищать β-клетки островков поджелудочной железы, снижать массу тела за счет подавления аппетита и задержки опорожнения желудка. В настоящее время установлено, что GLP-1 и GIP представляют собой два типа гормона, стимулирующего поджелудочную железу.
[0004] GLP-1 представляет собой полипептид с 31 аминокислотой, который экспрессируется геном глюкагона в L-клетках слизистой оболочки кишечника и в основном воздействует на рецептор GLP-1 (GLP-1 R), стимулируя секрецию инсулина, ингибируя секрецию глюкагона, защищая β-клетки островков поджелудочной железы, выполняя физиологическую функцию регулирования гомеостаза глюкозы в крови, одновременно замедляя всасывание пищи и опорожнение желудка через сигнальные пути центральной нервной системы, усиливая чувство сытости и, таким образом, снижая массу тела. Эксендин-4 представляет собой аналог GLP-1, выделяемый из слюнных желез африканских ядозубов, который проявляет более сильную активацию рецептора GLP-1 и эффекты, аналогичные GLP-1. По сравнению с природным GLP-1, Эксендин-4 обладает более высокой устойчивостью к DPP-4 и более длительным периодом полувыведения из плазмы в организме.
[0005] GIP представляет собой одноцепочечный полипептид из 42 аминокислот, который продуцируется К-клетками слизистой оболочки тонкого кишечника и в основном воздействует на рецепторы GIP (GIP R) в островковых клетках поджелудочной железы и адипоцитах. Секреция глюкозозависимого инсулинотропного GIP повышает качество β-клеток островков поджелудочной железы, стимулирует секрецию инсулина, ингибирует секрецию желудочной кислоты и замедляет перистальтику желудка. Кроме того, она также стимулирует поглощение и утилизацию жирных кислот клетками жировой ткани. GIP также обладает физиологическим эффектом, стимулируя дифференцировку остеобластов, ингибируя апоптоз остеобластов, ингибируя резорбцию костной ткани, увеличивая минеральную плотность костной ткани и защищая кость.
[0006] GCG представляет собой полипептид, содержащий 29 аминокислот, экспрессируемый и секретируемый протогеном глюкагона в α-клетках островков поджелудочной железы, который в основном воздействует на рецептор глюкагона (GCG R), распределенный в печени и почках, стимулируя расщепление гликогена в печени, повышая уровень сахара в крови, активируя липазу, стимулируя разложение жира, одновременно ингибируя синтез жира в печени и усиливая окисление жирных кислот. Результаты исследований показывают, что GCG оказывает определенное влияние на сокращение потребления пищи, увеличение энергопотребления жировой ткани и уменьшение жирового компонента тела. Соответствующий эффект GCG, повышающего уровень сахара в крови, может обеспечить обратную связь с регуляцией выработки инсулина и уменьшить возникновение гипогликемических явлений.
[0007] Нацеленные на действие инкретина, агонисты рецептора GLP-1, такие как Эксенатид, Лисенатид, Лираглутид, Дулаглутид и Семаглутид, были успешно разработаны для лечения сахарного диабета II типа. Кроме того, лираглутид был успешно разработан для потери массы тела, а семаглутид также проходит клинические исследования в связи с показаниями при ожирении. Преимущество аналогов GLP-1 заключается в том, что они могут снижать уровень глюкозы в крови, а также оказывать благоприятное воздействие на сердечно-сосудистую систему и контролировать массу тела. Однако в настоящее время потеря массы тела при применении одного агониста рецептора GLP-1 все еще составляет менее 10%, и наблюдаются очевидные побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта, связанные с дозой (главным образом тошнота, рвота, диарея). По-прежнему существует острая потребность в более эффективных терапевтических лекарственных средствах для потери массы тела для групп населения, страдающих метаболическими заболеваниями со сложными состояниями, такими как сахарный диабет II типа с ожирением, неалкогольная жировая болезнь печени/неалкогольный стеатогепатит (NAFLD/NASH), сахарный диабет и ожирение с сердечно-сосудистым риском.
[0008] Что касается физиологических эффектов GLP-1, GIP и GCG, в настоящее время многие исследования подтвердили, что одновременная активация обоих или трех их рецепторов может обеспечить лучшие терапевтические эффекты при диабете и ожирении, чем активация только GLP-1R. Сообщается, что гипергликемия, ожирение и инсулинорезистентность препятствуют эффектам GIP R и его сигнальным путям. Однако по мере снижения уровня сахара в крови и улучшения инсулинорезистентности, роль GIP в стимулировании секреции инсулина и улучшении функции островков поджелудочной железы может быть повышена. В дополнение к стимулированию расщепления гликогена и повышения уровня сахара в крови, GCG может также стимулировать расщепление жира, ингибировать синтез жира в печени и оказывать влияние на снижение содержания липидов в крови и массы тела. Однако для подавления эффекта повышения уровня сахара в крови, требуется синергетическое ингибирование GLP-1. Таким образом, благодаря "авангардному" эффекту GLP-1, снижение уровня сахара в крови и улучшение инсулинорезистентности могут еще больше усилить функцию стимулирования секреции инсулина и синергетический эффект инсулиновых сенсибилизаторов GIP, улучшить функцию островков поджелудочной железы, еще больше усилить эффект разложения липидов GCG, улучшить липидный метаболизм и усилить эффект потери массы тела.
[0009] С раскрытием клинических данных о двойных агонистах GLP-1/GIP и GLP-1/GCG, постепенно становится ясным влияние распределения активности двойных агонистов GLP-1/GIP или GLP-1/GCG среди различных рецепторов на клиническую терапевтическую эффективность лекарственных средств.
[0010] Например, результаты клинического исследования Фазы II Тирзепатида компании Lilly II (LY3298176) показали, что доза Тирзепатида в 1 мг практически не приводила к потере массы тела, а его гипогликемический эффект был значительно ниже, чем у дулаглутида в дозе 1,5 мг. Только при увеличении дозы Тирзепатида до 5 мг, он может продуцировать гипогликемический эффект и приводить к потере массы тела лучше, чем 1,5 мг Дулаглутида. Вероятно, это связано с тенденцией Тирзепатида к усилению активности агониста рецептора GIP, в то время как активность рецептора GLP-1 со значением EC50 составляет всего примерно 15% от активности GLP-1 дикого типа со значением EC50. Для достижения максимальной эффективности, дозировка Тирзепатида была значительно увеличена (до максимальной дозы 15 мг), что может увеличить риск для безопасности лекарственного средства.
[0011] С другой стороны, из-за сильного гипергликемического эффекта GCG, требуется достаточная активность GLP-1 в двойных агонистах рецепторов GLP-1/GCG, чтобы сбалансировать и подавить гипергликемический эффект GCG, обеспечивая тем самым гипогликемический эффект. Относительная активность рецепторов GLP-1 и GCG со значением EC50 в двойном агонисте рецепторов GLP-1/GCG компании AstraZeneca MEDI0382 (Котадутид) составила 29% и 12,8%, соответственно. Результаты 26-недельного клинического исследования показали дозозависимое снижение массы тела, содержания липидов в крови и уровней АЛТ (аланинаминотрансфераза) и АСТ (аспартатаминотрансфераза) в результате приема 100-300 мкг Котадутида, по сравнению с лираглутидом, и эффект в группе приема дозы 300 мкг был значительно лучше, чем эффект в группе приема дозы 1,8 мг лираглутида. Однако существенного преимущества в снижении уровня HbA1c (гликированный гемоглобин), по сравнению с лираглутидом, в каждой дозовой группе выявлено не было. Кроме того, по мере увеличения дозировки Котадутида, эффект снижения уровня гликированного гемоглобина в группе приема дозы 300 мкг был фактически хуже, чем в группе приема дозы 200 мкг. Вероятно, это связано с низкой активностью рецептора GLP-1 молекулы Котадутида при увеличении дозы, которая недостаточна для подавления эффекта GCG.
[0012] Идеальная молекула тройного агониста рецептора GLP-1/GIP/GCG длительного действия, действующая один раз в неделю, два раза в неделю или три раза в неделю, должна обладать максимально возможной активностью GLP-1R/GIPR и относительно контролируемой активностью GCGR для обеспечения максимальной потери массы тела и гипогликемических эффектов. В документах CN 104902919 A и CN 111040022 A раскрыта серия молекул тройного агониста GLP-1/GIP/GCG R, основанных на структурной модификации экзопептида-4 ядозуба (эксендин-4); и в документе CN 109071624 A раскрыта серия молекул циклического пептида, объединенных с конъюгатами длительного действия с образованием молекул. Кроме того, в документах WO 2015067716 A1, WO 2019125929 A1 и WO 2019125938 A1 также раскрыты некоторые полипептиды, которые связывают жирные кислоты с боковыми цепями аминокислот в положении 17. Все эти полипептиды демонстрируют тройной эффект активации GLP-1/GIP/GCG R и обладают потенциалом длительного действия один раз в неделю. Молекулы, раскрытые в вышеуказанных патентных заявках, не могут проявлять достаточно высокую активность в отношении GLP-1 R/GIP R/GCG R одновременно.
[0013] Все еще есть возможности для дальнейшей разработки трех молекул агонистов.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0014] С учетом вышеуказанных технических условий, настоящее изобретение предлагает новую полипептидную молекулу с тройной активационной активностью GLP-1/GIP/GCG R, которая может быть применена при лечении диабета II типа, ожирения, дислипидемии, неалкогольной жировой болезни печени/неалкогольного стеатогепатита и других связанных с ними метаболических заболеваний.
[0015] В настоящей заявке предложено полипептидное соединение тройного агониста GLP-1/GIP/GCG R, имеющее общую формулу (I), или его соли, или сольваты:
[0016] Y-Aib-X3-GT-X6-TSDYSI-X13-LDK-X17-AQ-Aib-AFIE-X25-LLE-X29-X30-PSS-X34-X35-PP-X38- S-R1 (I) ,
[0017] при этом,
[0018] X3 представляет собой Q или H;
[0019] X6 представляет собой F, αMeF или αMeF (2F);
[0020] X13 представляет собой αMeL, F, αMeF или L;
[0021] X17 представляет собой ψ;
[0022] X25 представляет собой Y или F;
[0023] X29 представляет собой T, S, G или Aib;
[0024] X30 представляет собой G, H, R или Aib;
[0025] X34 представляет собой G или Aib;
[0026] X35 представляет собой A, Q, Aib или H;
[0027] X38 представляет собой Ac3c или P;
[0028] R1 представляет собой NH2 или OH, или их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры;
[0029] где ψ представляет собой Lys (лизин) с боковыми цепями, модифицированными следующей общей формулой (II):
[0030] Y-Z (II), при этом,
[0031] Y представляет собой (AEEAc или Glu)a-(AEEAc или Glu)b-(AEEAc или Glu)c, где a, b и c независимо друг от друга равны 0 или 1, и в то же время a, b и c не равны нулю (в качестве примерной иллюстрации, AEEAc-AEEAc-γGlu), а карбоксильный конец Y соединен с ε-амино Lys на боковой цепи; и
[0032] Z представляет собой -CO-(CH2)m-R2, m представляет собой целое число от 6 до 24, а R2 выбран из-COOH.
[0033] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, соединение общей формулы (I) включает, по меньшей мере, две специфические аминокислоты в следующих сайтах:
[0034] X13 представляет собой F или α MeF;
[0035] X25 представляет собой F;
[0036] X29 представляет собой T или S;
[0037] X30 представляет собой H, R или Aib;
[0038] X35 представляет собой Q, Aib или H;
[0039] X38 представляет собой Ac3c.
[0040] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, общая формула (II) представляет собой AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH.
[0041] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления, соединение выбрано из:
В настоящем изобретении, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, соединение дополнительно выбрано из:
[0042] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, в отношении способности к активации стабильно трансфицированных клеток рецептора GLP-1, по сравнению с природным GLP-1, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 30%, предпочтительно, по меньшей мере, 60%, более предпочтительно, по меньшей мере, 80%, и еще более предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно способности к активации рецептора GLP-1.
[0043] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, в отношении способности к активации стабильно трансфицированных клеток рецептора GLP-1, по сравнению с природным GLP-1, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 100% и более предпочтительно, по меньшей мере, 150% относительно способности к активации рецептора GLP-1.
[0044] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, в отношении способности активации стабильно трансфицированных клеток рецептора GCG, по сравнению с природным GCG, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 10%, более предпочтительно, по меньшей мере, 30% относительно способности к активации рецептора GCG.
[0045] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, в отношении активации на репрезентативной клетке RIN-m5F ткани островка поджелудочной железы, по сравнению с природным GLP-1 (7-37), соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 60%, предпочтительно, по меньшей мере, 80% и более предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно активации на клетке RIN-m5F.
[0046] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, в отношении активации на репрезентативной клетке 3T3-L1 жировой ткани, по сравнению с природным GIP, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 60%, и, предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно активации на клетке 3T3-L1.
[0047] В настоящей заявке, в качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, в отношении активации на первичных клетках печени человека, представляющих ткань печени, по сравнению с природным GCG, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 60% и предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно активации на клетках печени.
[0048] Настоящая заявка также предлагает фармацевтическую композицию, включающую любое из соединений, или их солей, или сольватов в соответствии с любым из вышеуказанных аспектов в эффективном количестве, и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, разбавители, носители или вспомогательные вещества.
[0049] В одном аспекте, фармацевтическая композиция представляет собой инъекцию, лиофилизированный порошок, таблетку, пилюлю, пастилку, мягкую капсулу, твердую капсулу, гранулу, порошок, раствор, суспензию или сироп; и, в качестве альтернативы, лекарственная композиция находится в форме микрокапсулы, микросфер, наночастицы или липосомы.
[0050] В одном аспекте, фармацевтическую композицию используют для перорального введения, ингаляционного введения или парентерального введения, и парентеральное введение выбирают из внутрибрюшинного, внутримышечного, артериального, внутривенного, подкожного или внутрикожного пути введения инъекции.
[0051] В одном аспекте, фармацевтическую композицию вводят с частотой, по меньшей мере, один раз в день, один раз в неделю, один раз в две недели или один раз в месяц.
[0052] В одном аспекте, фармацевтическую композицию также можно применять в сочетании, по меньшей мере, с одним из следующих активных веществ для лечения, включая противодиабетические активаторы (такие как инсулин и его аналоги, бигуаниды, сульфонилмочевины, тиазолидиндионы, ингибиторы α-глюкозидазы, ингибиторы DPP-4 (дипептидилпептидазы IV), ингибиторы натрийзависимого переносчика глюкозы 2 типа (SGLT2), двойные ингибиторы SGLT1/SGLT2, агонисты рецептора GLP-1, амилин и его аналоги, агонисты рецептора GIP, агонисты или антагонисты рецептора GCG, агонисты рецептора GLP-1/GIP, агонисты рецептора GLP-1/GCG, агонисты рецептора GIP/GCG, FGF-21 и его аналоги, холецистокинин B (CCKB) и его аналоги, PYY (3-36) и его аналоги, лептин и его аналоги, Кальцитонин и его аналоги, липидрегулирующие активные лекарственные средства, агонисты или регуляторы PPAR-α, β, δ, активаторы противотромбоцитарной агрегации, ингибиторы PCSK9, ингибиторы липазы, противофиброзные или противоцирротические активаторы, противовоспалительные активаторы. В качестве одного из вариантов осуществления настоящего изобретения, противодиабетический активатор включает инсулин и его аналоги, бигуаниды, сульфонилмочевины, тиазолидиндионы, ингибиторы α-глюкозидазы, ингибиторы DPP-4, ингибиторы SGLT2, двойные ингибиторы SGLT1/SGLT2, агонисты рецептора GLP-1 или амилин и его аналоги.
[0053] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для стимулирования секреции инсулина и снижения уровня сахара в крови.
[0054] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для ингибирования принимаемой пищи, задержки опорожнения желудка, увеличения энергопотребления и снижения массы тела.
[0055] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для снижения апоптоза β-клеток островков поджелудочной железы, увеличения числа β-клеток островков поджелудочной железы и улучшения функции островковых клеток поджелудочной железы.
[0056] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для улучшения содержания липидов в крови, уменьшения жировых отложений в печени, ингибирования развития воспаления печени и предотвращения и лечения неалкогольной жировой болезни печени.
[0057] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для стимулирования роста нейронов головного мозга, удаления из организма нейротоксинов, ингибирования развития воспаления и осуществления нейропротективных действий.
[0058] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для предотвращения и/или лечения метаболических нарушений и связанных с ними осложнений, предпочтительно для лечения диабета, ожирения или неалкогольной жировой болезни печени.
[0059] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для лечения дислипидемии и связанных с нею заболеваний, а также нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.
[0060] Применение любого из соединений или их солей, или сольватов, или любой фармацевтической композиции по настоящей заявке при приготовлении лекарственных средств для лечения заболеваний костей, связанных с эндокринными нарушениями, метаболическими нарушениями, заболеваниями почек или тому подобным, причем заболевания костей включают остеопороз и остеоартрит.
[0061] Любое соединение по настоящей заявке может быть синтезировано твердофазным синтезом.
[0062] В одном аспекте, в настоящей заявке предлагаются соединения или их соли, или комплексы растворителей в следующей последовательности:
Соединение 1 (SEQ ID №:1)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 2 (SEQ ID №:2)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETHPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 3 (SEQ ID №:3)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLESHPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 4 (SEQ ID №:4)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLEGGPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 5 (SEQ ID №:5)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH) AQ-Aib-AFIEFLLEGGPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 6 (SEQ ID №:6)
Y-Aib-HGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLE-Aib-HPSSGQPPPS-NH2
Соединение 7 (SEQ ID №:7)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSG-Aib-PPPS-NH2
Соединение 8 (SEQ ID №:8)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGQPPPS-NH2
Соединение 9 (SEQ ID №:9)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 10 (SEQ ID №:10)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 11 (SEQ ID №:11)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 12 (SEQ ID №:12)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSSGAPPPS-NH2
Соединение 13 (SEQ ID №:13)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGAPPPS-NH2
Соединение 14 (SEQ ID №:14)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSSGAPPPS-NH2
Соединение 15 (SEQ ID №:15)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSSGAPPPS-NH2
Соединение 16 (SEQ ID №:16)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLE-Aib-HPSSGAPPPS-NH2
Соединение 17 (SEQ ID №:17)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGAPPPS-NH2
Соединение 18 (SEQ ID №:18)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLE-Aib-HPSSGAPPPS-NH2
Соединение 19 (SEQ ID №:19)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSSGAPPPS-NH2
Соединение 20 (SEQ ID №:20)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLE-Aib-HPSSGAPPPS-NH2
Соединение 21 (SEQ ID №:21)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLEGGPSSGQPPPS-NH2
Соединение 22 (SEQ ID №:22)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLEGGPSSGQPPPS-NH2
Соединение 23 (SEQ ID №:23)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGQPPPS-NH2
Соединение 24 (SEQ ID №:24)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSS-Aib-HPPPS-NH2
Соединение 25 (SEQ ID №:25)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLEGRPSS-Aib-HPPPS-NH2
Соединение 26 (SEQ ID №:26)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSSGAPPPS-NH2
Соединение 27 (SEQ ID №:27)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeF-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLESHPSSGAPPPS-NH2
Соединение 28 (SEQ ID №:28)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLES-Aib-PSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 29 (SEQ ID №:29)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLES-Aib-PSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 30 (SEQ ID №:30)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLET-Aib-PSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 31 (SEQ ID №:31)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLE-Aib-HPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 32 (SEQ ID №:32)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSIFLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLE-Aib-HPSSGAPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 33 (SEQ ID №:33)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSS-Aib-HPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 34 (SEQ ID №:34)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGQPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 35 (SEQ ID №:35)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLETGPSSGQPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 36 (SEQ ID №:36)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLEGGPSS-Aib-HPPPS-NH2
Соединение 37 (SEQ ID №:37)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLEGRPSS-Aib-HPPPS-NH2
Соединение 38 (SEQ ID №:38)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETGPSS-Aib-HPPPS-NH2
Соединение 39 (SEQ ID №:39)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLETRPSS-Aib-HPPPS-NH2
Соединение 40 (SEQ ID №:40)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSS-Aib-HPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 41 (SEQ ID №:41)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSILLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSS-Aib-HPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 42 (SEQ ID №:42)
Y-Aib-QGT-αMeF-TSDYSILLDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEFLLESHPSS-Aib-HPP-Ac3c-S-NH2
Соединение 43 (SEQ ID №:43)
Y-Aib-QGT-αMeF(2F)-TSDYSI-αMeL-LDKK(AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH)AQ-Aib-AFIEYLLESHPSS-Aib-HPP-Ac3c-S-NH2,
[0063] Было установлено, что GLP-1 R, GIP R и GCG R распределяются и экспрессируются во многих тканях, органах и клетках человеческого организма, связанных с метаболизмом. Например, GLP-1 R, GIP R и GCG R одновременно экспрессируются в клетках островковой ткани поджелудочной железы, причем GLP-1 R является наиболее преобладающим рецептором. Например, было установлено, что GLP-1 R и GIP R экспрессируются в адипоцитах с наиболее высоким содержанием GIP R. Также были сообщения об экспрессии GLP-1 R и GCG R в клетках печени с наибольшим содержанием GCG R. В то же время, авторы изобретения были удивлены, обнаружив, что, хотя некоторые соединения могут иметь лучшее значение EC50, чем полипептиды дикого типа в стабильно трансфицированных клетках одного рецептора, требуются еще более высокие дозы для полной стимуляции клеток ткани, по сравнению с полипептидами дикого типа в вышеупомянутых клетках ткани. Вероятно, это связано с тенденцией распределения мультиагонистических соединений по множеству рецепторов. Следовательно, для достижения максимального терапевтического эффекта требуется, чтобы три молекулы агониста были способны полностью активировать множество рецепторов в клетках ткани и, по меньшей мере, были способны эффективно активировать рецепторы, находящиеся в высоком содержании, в клетках ткани. Следовательно, значение EC50 трех молекул агонистов в клетках различных тканей должно быть, по меньшей мере, лучше, чем у соответствующего полипептида дикого типа GLP-1/GIP/GCG.
[0064] Соединение по настоящей заявке обладает высокой относительной активностью EC50 по отношению к трем компонентам GLP-1/GIP/GCG R и может полностью стимулировать соответствующие клетки ткани целевого органа.
[0065] Предпочтительно, соединение по настоящей заявке может стимулировать секрецию инсулина и снижать уровень сахара в крови. Предпочтительно, оно также может ингибировать питание, задерживать опорожнение желудка, увеличивать энергопотребление и, в конечном счете, наблюдаются эффекта потери массы тела.
[0066] Предпочтительно, соединение по настоящей заявке может снижать апоптоз β-клеток островков поджелудочной железы, увеличивать количество β-клеток островков поджелудочной железы и улучшать функцию островковых клеток поджелудочной железы.
[0067] Предпочтительно, соединение по настоящей заявке может также улучшать содержание липидов в крови, уменьшать жировые отложения в печени, ингибировать развитие воспаления печени, предотвращать и лечить неалкогольную жировую болезнь печени.
[0068] Предпочтительно, ожидается, что соединение по настоящей заявке будет стимулировать рост нейронов головного мозга, удалять из организма нейротоксины, ингибировать развитие воспаления и играть нейропротекторную роль.
[0069] Предпочтительно, соединения или композиции по настоящей заявке могут быть применены для предотвращения и/или лечения метаболических нарушений и связанных с ними осложнений. Их предпочтительно применять для лечения диабета, ожирения и неалкогольной жировой болезни печени.
[0070] Предпочтительно, соединения или композиции по настоящей заявке могут быть применены для лечения дислипидемии и связанных с нею заболеваний, а также нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.
[0071] Предпочтительно, соединения или композиции по настоящей заявке могут быть применены для лечения заболеваний костей, связанных с эндокринными нарушениями, метаболическими нарушениями, заболеваниями почек и другими причинами, такими как остеопороз и остеоартрит.
[0072] Соединение по настоящей заявке оказывает значительное стимулирующие воздействия на рецепторы GLP-1, GIP и GCG.
[0073] Полипептидные соединения по настоящей заявке могут быть синтезированы и модифицированы специалистами в данной области техники с помощью известных технических методов. Например, каркас полипептидной последовательности полипептидного соединения по настоящей заявке может быть приготовлен способами, такими как синтез.
[0074] Пептидный каркас соединения по настоящей заявке модифицирован химическим путем группами боковой цепи жирной кислоты, по меньшей мере, в одном сайте. Предпочтительно, соединение может иметь стабильную α-спиральную структуру пептидов и увеличивать силу связывания альбумина, достигая улучшенной стабильности пептидных соединений и увеличенного времени действия пептида.
[0075] Соединение по настоящей заявке обладает агонистической активностью в отношении рецепторов GLP-1, рецепторов GIP и рецепторов GCG. Упомянутая "агонистическая активность" относится к способности соединения стимулировать специфические клетки рецептора продуцировать cAMP, которые могут быть сконструированы специалистами в данной области техники для сверхэкспрессирования рецепторов GLP-1, рецепторов GIP или рецепторов GCG в клетках хозяина, клетках ткани поджелудочной железы, адипоцитах, клетках печени и так далее. Активность активации рецептора может быть измерена значением EC50 cAMP, продуцируемого соединением, стимулирующим клетки рецептора. Значение EC50 относится к значению концентрации лекарственного средства, необходимому для достижения половины максимальной активности (50% активности) соединения в конкретной системе измерения.
[0076] В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения, агонистическая активность соединения может быть оценена путем оценки относительной активности конкретных природных соединений. Относительная активность представляет собой процентное отношение значения EC50 конкретного природного соединения к значению EC50 испытуемого соединения.
[0077] По сравнению с существующими соединениями, полипептидная молекула тройного агониста GLP-1/GIP/GCG R, представленная в настоящей заявке, обладает лучшей относительной активностью GLP-1 R, GIP R, GCG R и клеток ткани со значением EC50.
Определение
[0078] "Относительная активность EC50" относится к отношению значений EC50 соответствующих положительных пептидов дикого типа человека GLP-1 (7-37), GIP человека и GCG человека к значениям EC50 соединений по настоящей заявке.
[0079] Аминокислоты в последовательности соединения по настоящей заявке происходят из природных аминокислот или родственных вариантов аминокислот и/или производных. Сокращения и коды упомянутых природных аминокислот основаны на общих правилах, знакомых специалистам в данной области техники. Aib, α-MeF, α-MeF (2F), α-Химическая структурная формула MeL и Ac3c выглядит следующим образом:
[0080] Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют те же значения, что и технические и научные термины, которые обычно понятны специалистам в данной области техники. В случае возникновения противоречий, настоящий документ, включая определение, имеет преимущественную силу. Предпочтительные способы и материалы описаны ниже, но способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе, могут быть применены для реализации или проведения испытания на основе настоящей заявки. Материалы, способы и примеры, раскрытые в настоящем документе, носят исключительно иллюстративный характер и не рассматриваются, как ограничивающие.
[0081] Конкретные значения сокращений, используемых в настоящем изобретении, являются следующими:
[0082] Aib: α-аминоизомасляная кислота
[0083] α-MeF: α-метилфенилаланин
[0084] α-MeF (2F): α-метил-2-фторфенилаланин
[0085] α-MeL: α-метиллейцин
[0086] Ac3c: 1-аминоциклопропанкарбоновая кислота
[0087] AEEAc: [2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил
[0088] cAMP: циклический аденозинмонофосфат
[0089] Fmoc: флуоренметоксикарбонил
[0090] Boc: трет-бутоксикарбонил
[0091] ДМФ: диметилформамид
[0092] HBTU: бензотриазол-N, N, N', N'-тетраметилурония гексафторфосфат
[0093] Trt: трифенилметил
[0094] ivdde: 1- (4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексил)-3-метилбутил
[0095] tBu: трет-бутил
[0096] OtBu: трет-бутиловый кислород
[0097] TFA: трифторуксусная кислота
[0098] Тис: триизопропилсилан
[0099] HPLC/MS: Высокоэффективная жидкостная хроматография/масс-спектрометрия
[00100] HPLC-UV: Высокоэффективная жидкостная хроматография в УФ-спектре
[00101] IPTG: изопропил-β-D-тиогалактозид
[00102] Tris: тригидроксиметиламинометан
[00103] DCM: дихлорметан
[00104] THF: тетрагидрофуран
[00105] DIPEA: N, N-диизопропилэтиламин
[00106] NMP: N-метилпирролидон
[00107] HEK-293: человеческие эмбриональные клетки почек
[00108] CHO: клетки яичника китайского хомячка
[00109] GLP-1: глюкагоноподобный пептид-1
[00110] GIP: глюкозозависимый инсулинотропный полипептид
[00111] GCG: глюкагон
[00112] GLP-1: рецептор глюкагоноподобного пептида-1
[00113] GIP: рецептор глюкозозависимого инсулинотропного полипептида
[00114] GCG R: рецептор глюкагона
[00115] NAFLD: неалкогольная жировая болезнь печени
[00116] NASH: неалкогольный стеатогепатит
[00117] DMEM: среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко
[00118] FBS: фетальная бычья сыворотка
[00119] FCS: телячья сыворотка
[00120] P/S: пенициллин/стрептомицин
[00121] PBS: фосфатно-буферный раствор
[00122] HBSS: буферный солевой раствор Хэнка
[00123] EC50: половинная максимальная эффективная концентрация
[00124] IBMX: 3-изобутил-1-метилксантин.
Подробное описание изобретения
[00125] Следующие варианты осуществления настоящего изобретения и экспериментальные примеры приведены для дополнительной иллюстрации настоящей заявки, но никоим образом не ограничивают эффективный объем настоящей заявки.
Пример 1: синтез пептидных соединений
[001326] Промежуточные продукты и соединения по настоящей заявке могут быть синтезированы и приготовлены различными способами, известными в данной области техники. Следующие конкретные варианты осуществления настоящего изобретения иллюстрируют использование методов химического синтеза для приготовления соединений по настоящей заявке. Каждый описанный конкретный этап синтеза может быть объединен с использованием различных материалов и способов для синтеза различных соответствующих соединений или солей по настоящей заявке. Используемые реагенты и сырье легкодоступны для обычного технического персонала в этой области. В частности, следующие варианты осуществления настоящего изобретения предназначены только для иллюстрации настоящей заявки и никоим образом не должны ограничивать объем настоящей заявки.
[00127] Материал:
[00128] Все материалы и реагенты, используемые в настоящей заявке, приобретены на рынке как в качестве сырьевых товаров, а защитными аминокислотами, используемыми во всем процессе синтеза, являются следующие: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Ac3c-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(ivdde)-OH, Fmoc-α-MeLeu-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-α-MePhe-OH, Fmoc-α-MePhe(2F)-OH, Fmoc-Aib-OH, Boc-Tyr(tBu)-OH.
[00129] Способ синтеза и приготовления соединения по настоящей заявке проиллюстрированы ниже на примере Соединения 10 (где приготовление других соединений требует только изменения порядка синтеза аминокислотного сырья).
[00130] (1) Предварительная обработка амидной смолы Ринка MBHA: 1 г высушенной амидной смолы Ринка MBHA (степень замещения S = 0,28 ммоль/г) взвешивали и добавляли в реакционную колонку, добавляли 10 мл ДМФА (диметилформамид) и продували газообразным азотом в течение 30 минут. Растворитель удаляли, добавляли еще 10 мл ДМФА для промывки 3 раза по 1 минуте каждая, и растворитель удаляли.
[00131] (2) Удаление защитной группы Fmoc: к обработанной амидной смоле Ринка добавляли 20% раствор пиперидина/ДМФА (10 мл) и оставляли реагировать в течение 20 минут в атмосфере азота, в течение которых степень реакции контролировали с помощью нингидринового колориметрического метода, и когда цвет смолы становился синим, это указывало на успешное удаление Fmoc. После реакции проводили фильтрацию для удаления растворителя, в реакционную систему добавляли ДМФА для промывки смолы в течение 1 минуты, которую повторяли 6 раз.
[00132] (3) Реакция связывания (образование пептидной связи): в реактор добавляли соответствующий раствор Fmoc-защищенных аминокислот (3,0 экв.), затем добавляли DIEA (диизопропилэтиламин) (6,0 экв.), добавляли 5 мл ДМФА в реакционную колонку, продували газообразным азотом и подвергали воздействию HBTU (гексафторфосфат бензотриазолтетраметилуроний) (2,85 экв.) после растворения аминокислоты. Газообразный азот регулировали таким образом, чтобы смола равномерно пузырилась и вступала в реакцию при температуре 25°C в течение 30 минут, в течение которых степень реакции контролировали с помощью нингидринового колориметрического метода, и, когда смола становилась бесцветной и прозрачной, это указывало на успешное связывание. После завершения реакции, была проведена фильтрация для удаления растворителя. В реакционную систему добавляли ДМФА, смолу встряхивали и промывали в течение 1 минуты, что повторяли 6 раз. Описанные выше этапы повторяли и по очереди добавляли соответствующие растворы аминокислот до тех пор, пока синтез пептидной цепи не был завершен. Последнюю аминокислоту связывали с Boc-Tyr(tBu)-OH, и о завершении связывания судили по обнаружению бесцветной и прозрачной смолы с тетрахлорбензохиноном. Lys сайта с модификацией боковой цепи был заменен на Fmoc-Lys(ivdde)-OH. Последовательность добавления аминокислоты при связывании в синтезе основной пептидной последовательности Соединения 10 была следующей: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Ac3c-OH, Fmoc-Pro-OH (2x), Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH (2x), Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH (2x), Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH (2x), Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Lys(ivdde)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH , Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-α-MeF(2F)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Aib-OH, Boc-Tyr(tBu)-OH.
[00133] (4) Удаление защитной группы боковой цепи ivdde из Lys: в реакционную колонку добавляли 3% раствор гидразин гидрата/ДМФА (10 мл) и оставляли для реакции в газообразном азоте на 20 минут, чтобы удалить защитную группу боковой цепи ivdde из модифицированного сайта Lys. Синий цвет смолы, определенный с помощью нингидрина, указывал на полное удаление. После успешного удаления, растворитель удаляли, добавляли ДМФА в систему для промывки в течение 1 минуты и удаляли растворитель, причем промывку проводили 6 раз.
[00134] (5) Модификация боковой цепи Lys: к вышеуказанной смоле добавляли AEEAc (2,0 экв.). Добавляли DIEA (4,00 экв.), а в реакционную колонку добавляли 5 мл ДМФА. Затем продували газообразным азотом и добавляли HBTU (1,9 экв.) после растворения аминокислот. Газообразный азот был отрегулирован таким образом, чтобы смола равномерно пузырилась и вступала в реакцию при температуре 25 °C в течение 1 часа. Смола, определенная с помощью нингидрина, была бесцветной и прозрачной, что указывало на завершение реакции. Реакционный раствор удаляли и промывали 6 раз ДМФА (10 мл), каждый раз по 1 минуте. В реакционную колонку добавляли 20% пиперидина/ДМФА (10 мл) и продували газообразным азотом в течение 20 минут для удаления групп Fmoc. ДМФА (10 мл) добавляли для промывки 6 раз, по 1 минуте каждая, и растворитель удаляли. В соответствии с вышеуказанными этапами, последовательно добавляли AEEAc, Fmoc-Glu(OtBu)-OH и моно-трет-бутиловый эфир С20 для проведения реакции связывания, чтобы завершить модификацию боковой цепи. Наконец, смолу сжимали с помощью MeOH (10 мл), каждый раз по 3 минуты, растворитель откачивали, а смолу выливали и высушивали, готовую к применению.
[00135] (6) Последующая обработка пептидной смолы: в вышеуказанную высушенную пептидную смолу добавляли приготовленный самзочно-охлаждающий реагент (95% TFA: 2,5% Ti: 2,5% H2O) и встряхивали на вибрационном столе в течение 2,5 часов для измельчения смолы. Фильтрование проводили для получения фильтрата, который добавляли к 10-кратному объему ледяного изопропилового эфира льда, центрифугировали и промывали 5 раз изопропиловым эфиром. Неочищенные пептиды получали путем вакуумной сушки в течение 2 часов.
[00136] (7) Очистка неочищенных пептидных соединений:
[00137] Полученный пептидный порошок растворяли в 50% растворе ацетонитрила/Н2О и очищали с применением обращенно-фазовой препаративной колонки C18 (Shimadzu, Inertsil ODS 20x250 мм 5 мкм). Используя 95% буфер A (0,1% TFA/H2O) и 5% буфер B (0,075% TFA/ацетонитрил) в качестве исходного элюента и постепенно увеличивая долю буфера B до 75%, проводили непрерывную очистку в течение 30 минут для элюирования и сбора целевых пептидных компонентов. Очищенное пептидное соединение было проанализировано и подтверждено с помощью аналитического метода ВЭЖХ/МС. Чистота полученного пептидного соединения составила не менее 95%.
Таблица 1. Список синтетических пептидных соединений и их молекулярных масс
молекулярная масса
молекулярная масса
(SEQ ID №:32)
(SEQ ID №:2)
(SEQ ID №:3)
(SEQ ID №:4)
(SEQ ID №:5)
(SEQ ID №:6)
(SEQ ID №:7)
(SEQ ID №:8)
(SEQ ID №:9)
(SEQ ID №:10)
(SEQ ID №:11)
(SEQ ID №:12)
(SEQ ID №:13)
(SEQ ID №:14)
(SEQ ID №:15)
(SEQ ID №:16)
(SEQ ID №:17)
(SEQ ID №:18)
(SEQ ID №:19)
(SEQ ID №:20)
(SEQ ID №:21)
(SEQ ID №:22)
(SEQ ID №:23)
(SEQ ID №:24)
(SEQ ID №:25)
(SEQ ID №:26)
(SEQ ID №:27)
(SEQ ID №:28)
(SEQ ID №:29)
(SEQ ID №:30)
(SEQ ID №:31)
c3c-S-NH2
(SEQ ID №:32)
(SEQ ID №:33)
(SEQ ID №:34)
(SEQ ID №:35)
(SEQ ID №:36)
(SEQ ID №:27)
(SEQ ID №:38)
(SEQ ID №:39)
(SEQ ID №:40)
(SEQ ID №:41)
(SEQ ID №:42)
(SEQ ID №:43)
(SEQ ID №:44)
(SEQ ID №:45)
Пример 2: Испытание на активность пептидных соединений на стабильных трансгенных клетках рецепторов человека GLP-1/GIP/GCG
[00138] Во-первых, клетки HEK-293, стабильно сверхэкспрессирующие рецепторы человека GLP-1 или GCG, и клетки CHO, стабильно сверхэкспрессирующие рецепторы GIP, были сконструированы отдельно. Измеряя уровни ответа на сигнал cAMP вышеупомянутых клеток, определяли агонистическую активность отдельного соединения по отношению к соответствующему рецептору. Внутриклеточное содержание cAMP измеряли с помощью набора реагентов производства компании Cisbio Corp., основанного на технологии HTRF (гомогенной флуоресценции с временным разрешением).
[00149] Замороженные клетки, стабильно сверхэкспрессирующие рецепторы человека GLP-1, GIP или GCG, помещали на водяную баню при постоянной температуре 37 °C для быстрого размораживания и восстановления. Клеточную жидкость переносили в 10 мл HBSS для ресуспендирования и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре. Супернатант отбрасывали, и клетки повторно суспендировали в 1 × HBSS (содержащем 0,1% казеина, 250 мкм IBMX), и плотность клеток доводили до 1,0 × 105/мл.
[00140] В каждую лунку из 384-луночного планшета добавляли по 10 мкл суспензии клеток. Соединение, подлежащее испытанию, растворяли в 1 × буфере PBS для приготовления исходного раствора, который поэтапно разбавляли 3 раза для приготовления в общей сложности 12 растворов соединений с точками концентрации. Используя систему переноса жидкости ECHO, 100 нл приготовленного раствора соединения добавляли к соответствующим суспензиям клеток в 384-луночном планшете, вращали и встряхивали со скоростью 1000 об/мин в течение 1 минуты для равномерного перемешивания, а затем инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После завершения инкубации лекарственного средства, в каждую лунку добавляли по 10 мкл проявляющего реагента и проводили инкубацию в наборе при комнатной температуре в течение 60 минут. Планшет поместили в многофункциональный считыватель ферментов EnVision (PerkinElmer) и получили показание при длине волны 665/615 нм. Для построения кривых "концентрация-эффект" соединения использовали программное обеспечение для вывода данных на графопостроитель GraphPad Prism 5, и произвели расчет значений EC50 (нМ).
[00141] Используя природные человеческие GLP-1 (7-37), GIP и GCG дикого типа в качестве положительных контролей для эффекта активации рецептора испытуемого соединения, для клеток рецептора GLP-1, относительную активность (%) испытуемого соединения оценивали путем вычисления отношения значения EC50 человеческого GLP-1 (7-37) к значению EC50 испытуемого соединения.
[00142] Для клеток рецептора GIP, относительную активность (%) испытуемого соединения оценивали путем вычисления процентного отношения значения EC50 человеческого GIP к значению EC50 испытуемого соединения.
[00143] Для клеток рецептора GCG, относительную активность (%) испытуемого соединения оценивали путем вычисления процентного отношения значения EC50 человеческого GCG к значению EC50 испытуемого соединения.
Таблица 2. Стабильная активность клеток рецепторов человека GLP-1/GIP/GCG по отношению к пептидным соединениям
Rel.A: Относительная активность; NT: Не испытывают, не испытывали; Каждая группа подвергается, по меньшей мере, 3 независимым испытаниям.
[00144] Данные в таблице показывают, что все соединения могут проявлять высокую относительную активность в стабильных клетках рецепторов человека GLP-1/GIP/GCG.
Пример 3: Испытание на функциональную активность пептидных соединений на клетках RIN-m5F островковой опухоли крысы
[00145] Клеточная линия RIN-m5F, полученная из островковой ткани поджелудочной железы крысы, в основном экспрессирует эндогенные рецепторы GLP-1/GIP/GCG, причем рецепторы GLP-1 являются наиболее преобладающими. В этом эксперименте измеряли уровень cAMP, продуцируемого соединением на клетках RIN-m5F.
[00146] Замороженные клетки RIN-m5F помещали на водяную баню при постоянной температуре 37°C для быстрого размораживания и восстановления. Раствор клеток переносили в 10 мл HBSS для ресуспендирования и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре. Супернатант отбрасывали, и клетки повторно суспендировали в 1 × HBSS (содержащем 0,1% казеина, 250 мкм IBMX), и плотность клеток доводили до 1,0 × 105/мл.
[00147] В каждую лунку из 384-луночного планшета добавляли по 10 мкл суспензии клеток. Соединение, подлежащее испытанию, растворяли в 1 × буфере PBS для приготовления исходного раствора, который поэтапно разбавляли 3 раза для приготовления в общей сложности 12 растворов соединений с точками концентрации. Используя систему переноса жидкости ECHO, 100 нл приготовленного раствора соединения добавляли к соответствующим суспензиям клеток в 384-луночном планшете, вращали и встряхивали со скоростью 1000 об/мин в течение 1 минуты для равномерного перемешивания, а затем инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После завершения инкубации лекарственного средства, в каждую лунку добавляли по 10 мкл проявляющего реагента и проводили инкубацию в наборе при комнатной температуре в течение 60 минут. Планшет поместили в многофункциональный считыватель ферментов EnVision (PerkinElmer) и получили показание при длине волны 665/615 нм. Для построения кривых "концентрация-эффект" соединения использовали программное обеспечение для вывода данных на графопостроитель GraphPad Prism 5, и произвели расчет.
Таблица 3. Активность клеток пептидных соединений на клетках RIN-m5F опухоли островков поджелудочной железы крысы
Rel.A: Относительная активность; NT: Не испытывают, не испытывали; Каждая группа подвергалась, по меньшей мере, 3 независимым испытаниям.
[00148] Соединения по настоящей заявке, приведенные в таблице, могут проявлять высокую относительную активность в клетках RIN-m5F опухоли островков поджелудочной железы.
Пример 4: Испытание на функциональную активность пептидных соединений на адипоцитах 3T3-L1
[00148] Прекурсор адипоцитов 3T3-L1 мыши можно индуцировать дифференцироваться в зрелые адипоциты. Клетки 3T3-L1 непосредственно инокулировали при плотности клеток 4×104/мл в 96-луночный планшет и культивировали в среде DMEM, содержащей 10% FCS и 1% P/S, и инкубировали при температуре 37 °C в инкубаторе с 5% CO2. После того, как клетки наполнились и вступили в контакт друг с другом, использовали среду для дифференцировки DMEM, содержащую 20% FBS, 0,5 мм IBMX, 0,4 мкг/мл дексаметазона и 5 мкг/мл инсулина, для индуцирования дифференцировки адипоцитов 3T3-L1. После 5 дней индукции и культивирования, использовали среду DMEM, содержащую 20% FBS, 4 мкг/мл инсулина и 10 мкмоль росиглитазона, для продолжения индукции и культивирования в течение 3 дней. Затем использовали среду DMEM, содержащую 10% FBS, для продолжения культивирования в течение 2-3 дней для индуцирования зрелых адипоцитов 3T3-L1.
[00150] Индуцированная дифференцировка и созревание адипоцитов 3T3-L1, сходных с клетками жировой ткани, может экспрессировать большое количество рецепторов GIP. В этом эксперименте определяли уровень cAMP, продуцируемого соединением на адипоцитах 3T3-L1. Раствор испытуемого соединения разбавляли поэтапно согласно градиенту концентрации 3 раза, чтобы получить в общей сложности 10 серий концентрационных растворов. Растворы добавляли к индуцированным зрелым адипоцитам 3T3-L1 и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После инкубации лекарственного средства, в каждую лунку добавляли по 10 мкл проявляющего реагента из набора и инкубировали при комнатной температуре еще 60 минут. Планшет поместили в многофункциональный считыватель ферментов EnVision (PerkinElmer) для измерения показания при длине волны 665/615 нм. Для построения кривых "концентрация-эффект" соединения использовали программное обеспечение для вывода данных на графопостроитель GraphPad Prism 5, и произвели расчет.
Таблица 4. Активность пептидных соединений мыши на адипоците 3T3-L1
Rel. A: Относительная активность; NT: Не испытывают, не испытывали; Каждая группа подвергалась, по меньшей мере, 3 независимым испытаниям.
[00151] Соединения по настоящей заявке, приведенные в таблице, могут проявлять высокую относительную активность в отношении адипоцитов 3T3-L1.
Пример 5: Испытание на функциональную активность пептидных соединений на первичных клетках печени человека
[00152] В этом эксперименте определяли уровни cAMP, продуцируемого соединениями на первичных клетках печени человека. Первичные клетки печени человека были приобретены у компании Lonza (номер клеточного продукта HUCPG).
[00153] Замороженные первичные клетки печени человека помещали на водяную баню при постоянной температуре 37 °C для быстрого размораживания и восстановления. Раствор клеток переносили в 10 мл HBSS для ресуспендирования и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре. Супернатант отбрасывали, и клетки повторно суспендировали в 1 × HBSS (содержащем 0,1% казеина, 250 мкм IBMX), и плотность клеток доводили до 1,0 × 105/мл.
[00154] В каждую лунку из 384-луночного планшета добавляли по 10 мкл суспензии клеток. Соединение, подлежащее испытанию, растворяли в 1 × буфере PBS для приготовления исходного раствора, который поэтапно разбавляли 3 раза для приготовления в общей сложности 12 растворов соединений с точками концентрации. Используя систему переноса жидкости ECHO, 100 нл приготовленного раствора соединения добавляли к соответствующим суспензиям клеток в 384-луночном планшете, вращали и встряхивали со скоростью 1000 об/мин в течение 1 минуты для равномерного перемешивания, а затем инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После завершения инкубации лекарственного средства, в каждую лунку добавляли по 10 мкл проявляющего реагента и проводили инкубацию в наборе при комнатной температуре в течение 60 минут. Планшет поместили в многофункциональный считыватель ферментов EnVision (PerkinElmer) и получили показание при длине волны 665/615 нм. Для построения кривых "концентрация-эффект" соединения использовали программное обеспечение для вывода данных на графопостроитель GraphPad Prism 5, и произвели расчет.
Таблица 5. Активность пептидных соединений на первичных клетках печени человека
Rel. A: Относительная активность; NT: Не испытывают, не испытывали; Каждая группа подвергалась, по меньшей мере, 3 независимым испытаниям.
[00155] Соединения по настоящей заявке, приведенные в таблице, могут проявлять высокую относительную активность на клетках печени.
Пример 6: Фармакодинамика in vivo
[00156] Мыши с алиментарным ожирением, индуцированным рационом с высоким содержанием жира (DIO), обладают такими характеристиками, как ожирение, повышенный уровень сахара в крови, инсулинорезистентность и нарушения липидного обмена, и все они являются очень значимыми метаболическими синдромами, сходными с человеческим организмом. Изучали влияние соединений по настоящей заявке на массу тела, потребление пищи, уровень сахара в крови и липиды у мышей C57 BL/6J DIO.
[00157] 5-недельных мышей-самцов линии C57 BL/6J (приобретенных у компании Shanghai Slake Experimental Animal Company) выращивали в чистой и свободной от патогенов среде (при температуре 20-24 °C и относительной влажности 30-70%), при циркуляции 12 часов света/12 часов темноты. Их кормили обычным кормом, в клетке содержали по 4 животных, а период адаптации составлял 2 недели. Ожирение у мышей было индуцировано рационом питания с высоким содержанием жиров (60 ккал% калорий из жира). После 16 недель кормления с использованием рациона с высоким содержанием жиров, масса тела мышей DIO достигла 41-55 г, а диапазон уровня глюкозы в крови достиг 8-12 ммоль/л. Мышей DIO случайным образом разделили на группы (n=6/группа) в соответствии с их массой тела и уровнем глюкозы в крови натощак, так что каждая группа животных имела одинаковую среднюю массу тела и уровень глюкозы в крови. После распределения по группам, в каждой клетке выращивали по одному животному в течение одной недели, во время которой каждому из животных подкожно вводили растворитель (1 × PBS, 5 мл/кг) для предварительной адаптации процесса проведения эксперимента.
[00158] После подготовки животных, контрольный носитель или соединения вводили группам животных путем подкожной инъекции, при которой соединения растворяли в 1 × PBS, дозировка составляла 5 мл/кг, а операцию введения начинали в 9:00 утра и проводили один раз в три дня (Q3D) в течение 15 дней. На протяжении всего экспериментального исследования, массу тела животного и потребление пищи ежедневно измеряли перед введением и сравнивали с исходной массой тела и потреблением пищи тем же животным перед введением, чтобы рассчитать процентное изменение массы тела животного (%) и совокупное потребление пищи с целью оценки влияния соединений на изменения массы тела и потребление пищи.
[00159] В конечной точке эксперимента (15-й день), измеряли массу тела мышей, а затем измеряли уровень глюкозы в крови натощак путем взятия крови из кончика хвоста, сломанного без анестезии. После забора крови, животных обезболивали CO2 и подвергали эвтаназии. Затем делали забор крови из сердца и отделяли плазму центрифугированием. Плазму использовали для измерения общего холестерина (TC), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП), триглицеридов (TG) и содержания инсулина в крови. Печень отделяли для гомогенизации, а затем центрифугировали для получения супернатанта для определения содержания триглицеридов в печени.
[00160] Все результаты были выражены как Среднее значение ± SEM (стандартная ошибка среднего значения), и результаты были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 5, затем был использован апостериорный критерий Даннетта для сравнения с группой контрольного носителя. Разница на уровне р < 0,05 считалась статистически значимой.
Таблица 6-1. Влияние соединений на изменения массы тела у мышей DIO
Таблица 6-2. Влияние соединений на изменения массы тела у мышей DIO
[00161] Из результатов, приведенных в Таблицах 6-1 и 6-2, можно видеть, что соединение по настоящей заявке оказывает значительное влияние на снижение массы тела.
Таблица 7-1. Влияние соединений на содержание липидов в крови у мышей DIO
(нмоль/кг)
(мМ)
(мМ)
(мМ)
Таблица 7-2. Влияние соединений на содержание липидов в крови у мышей DIO
[00162] Из результатов, приведенных в Таблицах 7-1 и 7-2, можно видеть, что соединение по настоящей заявке оказывает значительное влияние на снижение содержания липидов в крови.
Таблица 8-1. Влияние соединений 3nM на уровень глюкозы в крови и уровень инсулина у мышей DIO
Таблица 8-2. Влияние соединений 3nM на уровень глюкозы в крови и уровень инсулина у мышей DIO
[00163] Из результатов, приведенных в Таблицах 8-1 и 8-2, можно видеть, что соединение по настоящей заявке оказывает значительный терапевтический эффект на снижение уровня сахара в крови и уровня инсулина в крови.
Таблица 9-1. Влияние соединений 3nM на TG печени мышей DIO
Таблица 9-2. Влияние соединений 3nM на TG печени мышей DIO
[00164] Из результатов, приведенных в Таблицах 9-1 и 9-2, можно видеть, что соединение по настоящей заявке оказывает значительный терапевтический эффект на снижение содержания триглицеридов печени.
Пример 7: Исследование фармакокинетики (PK) соединений на крысах
[00165] Крысам-самцам SD (линии Спрег-Доули) в возрасте 7-9 недель (220-250 г, по 3 крысы на группу) вводили подкожно соединение в дозе 30 нмоль/кг. После введения, кровь забирали через яремную вену во временные точки: 0,25, 2, 4, 8, 12, 16, 24, 48, 96, 120 и 144 часа. Кровь обрабатывали для получения образцов плазмы и анализировали с помощью ЖХ-МС/МС (жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией). Кривая "концентрация в крови-время" была проанализирована с использованием программного обеспечения Phoenix WinNonlin версии 6.3 (некомпартментная модель), и были рассчитаны параметры PK и период полувыведения.
[00166] Параметры PK, рассчитанные с использованием вышеуказанного метода, приведены в Таблице 10.
Таблица 10. Фармакокинетические (PK) параметры соединений у крыс
(нмоль/л)
(ч)
(ч)
(нмоль·ч/л)
[00167] Таблица 10 показывает, что отдельные соединения демонстрируют расширенное фармакокинетическое распределение.
--->
Перечень последовательностей
<110> ЗЕ ЮНАЙТЕД БИО-ТЕХНОЛОДЖИ (ХЭНЦИНЬ) КО., ЛТД.
<120> МУЛЬТИАГОНИСТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> LAPCT210314RU
<160> 45
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 7 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 1
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 2
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппы боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 2
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 3
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 3
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 4
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированные жирной кислотой группы боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 4
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 5
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 5
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 6
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 6
Tyr Xaa His Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Xaa His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 7
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> Xaa в положении 35 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 7
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Xaa Pro Pro Pro Ser
35
<210> 8
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 8
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 9
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 9
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 10
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 10
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 11
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 28 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 11
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 12
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 12
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 13
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 13
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 14
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 14
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 15
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 15
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 16
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированные жирной кислотой группы боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 16
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Xaa His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 17
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 17
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 18
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 18
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Xaa His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 19
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 19
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 20
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 20
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Xaa His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 21
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 21
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 22
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 22
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 23
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 23
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 24
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 24
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Pro Ser
35
<210> 25
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 25
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Pro Ser
35
<210> 26
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 26
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 27
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 27
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 28
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Xaa в положении 30 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 28
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser Xaa Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 29
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Xaa в положении 30 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 29
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Xaa Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 30
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Xaa в положении 30 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 30
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Xaa Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 31
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 31
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Xaa His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 32
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 32
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Phe Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Xaa His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 33
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 33
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 34
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 34
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 35
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированные жирной кислотой группы боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 35
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 36
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 36
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Pro Ser
35
<210> 37
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 37
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Pro Ser
35
<210> 38
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 38
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Pro Ser
35
<210> 39
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 39
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Thr Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Pro Ser
35
<210> 40
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 40
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 41
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 41
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Leu Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 42
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-метилфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 34 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 42
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Leu Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Phe Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 43
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa в положении 6 представляет собой α-Метил-2-фторфенилаланин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Xaa в положении 38 представляет собой Ac3c
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 43
Tyr Xaa Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Ser His Pro Ser
20 25 30
Ser Xaa His Pro Pro Xaa Ser
35
<210> 44
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 44
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 45
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa в положении 2 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Xaa в положении 13 представляет собой α-метиллейцин
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Аминогруппа боковой цепи Lys в положении 17 представляет собой химически
модифицированную жирной кислотой группу боковой цепи
AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Xaa в положении 20 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Xaa в положении 29 представляет собой α-аминоизобутановую кислоту
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Ser в положении 39 необязательно амидирован
<400> 45
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Xaa Ala Phe Ile Glu Tyr Leu Leu Glu Xaa Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СОЕДИНЕНИЯ-АГОНИСТЫ GIP И СПОСОБЫ | 2015 |
|
RU2716985C2 |
| УЛУЧШЕННЫЕ ПЕПТИДНЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ NASH И ДРУГИХ РАССТРОЙСТВ | 2019 |
|
RU2790209C2 |
| Модифицированные аналоги GIP пептида | 2019 |
|
RU2817673C2 |
| КОНСТРУКЦИИ, ИМЕЮЩИЕ SIRP-АЛЬФА ДОМЕН ИЛИ ЕГО ВАРИАНТ | 2016 |
|
RU2740672C2 |
| МУЛЬТИРЕЦЕПТОРНЫЙ АГОНИСТ И ЕГО МЕДИЦИНСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2816492C2 |
| ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ КОНЪЮГАТА ТРОЙНОГО АГОНИСТА ДЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ, ОБЛАДАЮЩЕГО АКТИВНОСТЯМИ В ОТНОШЕНИИ ВСЕХ ИЗ РЕЦЕПТОРОВ ГЛЮКАГОНА /GLP-1/GIP, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЛЕГКОГО | 2020 |
|
RU2829342C1 |
| ПЕПТИДНЫЙ АНАЛОГ АЦИЛИРОВАННОГО ОКСИНТОМОДУЛИНА | 2018 |
|
RU2752787C1 |
| АНТИТЕЛО, СПЕЦИФИЧНО СВЯЗЫВАЮЩЕЕСЯ С ICAM-1, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2789757C2 |
| ПЕПТИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА-23 ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИЕМА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КИШЕЧНИКА | 2015 |
|
RU2736637C2 |
| ДВОЙНОЙ АГОНИСТ РЕЦЕПТОРОВ ГЛЮКАГОНОПОДОБНОГО ПЕПТИДА-1 И ГЛЮКАГОНА ДЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ | 2021 |
|
RU2799327C1 |
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к полипептидному соединению тройного агониста GLP-1/GIP/GCG R, или его соли, или сольвату, а также к композиции, его содержащей. Изобретение эффективно для лечения метаболического синдрома, при приготовлении лекарственных средств для снижения апоптоза β-клеток островков поджелудочной железы, увеличения числа β-клеток островков поджелудочной железы и улучшения функции островковых клеток поджелудочной железы, при приготовлении лекарственных средств для улучшения содержания липидов в крови, уменьшения жировых отложений в печени, ингибирования развития воспаления печени, предотвращения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, при приготовлении лекарственных средств для предотвращения или лечения метаболических нарушений и связанных с ними осложнений, при приготовлении лекарственных средств для лечения дислипидемии и связанных с нею заболеваний, а также нейродегенертивных заболеваний, а также при приготовлении лекарственных средств для лечения заболеваний костей, связанных с эндокринными нарушениями, метаболическими нарушениями, заболеваниями почек. 9 н. и 17 з.п. ф-лы, 10 табл., 7 пр.
1. Полипептидное соединение тройного агониста GLP-1/GIP/GCG R, или его соль, или сольват с общей формулой (I)
Y-Aib-X3-GT-X6-TSDYSI-X13-LDK-X17-AQ-Aib-AFIE-X25-LLE-X29-X30-PSS-X34-X35-PP-X38-S-R1 (I),
отличающееся тем, что
X3 представляет собой Q или H;
X6 представляет собой α MeF или α MeF (2F);
X13 представляет собой α MeL, F, α MeF или L;
X17 представляет собой ψ;
X25 представляет собой Y или F;
X29 представляет собой T, S, G или Aib;
X30 представляет собой G, H, R или Aib;
X34 представляет собой G или Aib;
X35 представляет собой A, Q, Aib или H;
X38 представляет собой Ac3c или P;
R1 представляет собой NH2 или OH, или их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры;
где ψ представляет собой Lys (лизин) с боковыми цепями, модифицированными следующей общей формулой (II):
Y-Z (II), при этом
Y представляет собой (AEEAc или Glu)a-(AEEAc или Glu)b-(AEEAc или Glu)c, при этом a, b и c независимо равны 0 или 1 по отдельности, и в то же время a, b и c не равны нулю, а карбоксильный конец Y соединен с ε-амино боковой цепи Lys; и
Z представляет собой -CO-(CH2)m-R2, m представляет собой целое число от 6 до 24, а R2 выбран из -COOH, при этом соединение общей формулы (I) содержит, по меньшей мере, две специфические аминокислоты в следующих сайтах:
X13 представляет собой F или α MeF;
X25 представляет собой F;
X29 представляет собой T или S;
X30 представляет собой H, R или Aib;
X35 представляет собой Q, Aib или H;
X38 представляет собой Ac3c.
2. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что общая формула (II) представляет собой AEEAc-AEEAc-γGlu-CO(CH2)18COOH.
3. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что соединение выбрано из:
4. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 3, отличающееся тем, что соединение дополнительно выбрано из:
5. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что в отношении способности к активации стабильно трансфицированных клеток рецептора GLP-1, по сравнению с природным GLP-1, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 30%, предпочтительно, по меньшей мере, 60%, более предпочтительно, по меньшей мере, 80%, и еще более предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно способности к активации рецептора GLP-1.
6. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что в отношении способности к активации стабильно трансфицированной клетки рецептора GIP, по сравнению с природным GIP, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 100% и более предпочтительно, по меньшей мере, 150% относительно способности к активации рецептора GIP.
7. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что в отношении способности к активации стабильно трансфицированной клетки рецептора GCG, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 10%, более предпочтительно, по меньшей мере, 30% относительно способности к активации рецептора GCG.
8. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что в отношении репрезентативной клетки RIN-m5F ткани островка поджелудочной железы, по сравнению с природным GLP-1 (7-37), соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 60%, предпочтительно, по меньшей мере, 80%, и более предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно способности к активации клетки RIN-m5F.
9. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что в отношении репрезентативной клетки 3T3-L1 жировой ткани, по сравнению с природным GIP, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 60% и предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно способности к активации клетки 3T3-L1.
10. Полипептидное соединение, или его соль, или сольват по п. 1, отличающееся тем, что в отношении первичных клеток печени человека, представляющих ткань печени, по сравнению с природным GCG, соединение обладает относительной активностью, составляющей, по меньшей мере, 60% и предпочтительно, по меньшей мере, 100% относительно способности к активации клеток печени.
11. Фармацевтическая композиция для лечения метаболического синдрома, содержащая эффективное количество GLP-1/GIP/GCG R, или его соли, или сольвата с общей формулой (I)
Y-Aib-X3-GT-X6-TSDYSI-X13-LDK-X17-AQ-Aib-AFIE-X25-LLE-X29-X30-PSS-X34-X35-PP-X38- S-R1 (I),
отличающаяся тем, что
X3 представляет собой Q или H;
X6 представляет собой α MeF или α MeF (2F);
X13 представляет собой α MeL, F, α MeF или L;
X17 представляет собой ψ;
X25 представляет собой Y или F;
X29 представляет собой T, S, G или Aib;
X30 представляет собой G, H, R или Aib;
X34 представляет собой G или Aib;
X35 представляет собой A, Q, Aib или H;
X38 представляет собой Ac3c или P;
R1 представляет собой NH2 или OH, или их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры;
где ψ представляет собой Lys (лизин) с боковыми цепями, модифицированными следующей общей формулой (II):
Y-Z (II), при этом
Y представляет собой (AEEAc или Glu)a-(AEEAc или Glu)b-(AEEAc или Glu)c, при этом a, b и c независимо равны 0 или 1 по отдельности, и в то же время a, b и c не равны нулю, а карбоксильный конец Y соединен с ε-амино боковой цепи Lys; и
Z представляет собой -CO-(CH2)m-R2, m представляет собой целое число от 6 до 24, а R2 выбран из -COOH, и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, разбавители, носители или вспомогательные вещества, при этом соединение общей формулы (I) содержит, по меньшей мере, две специфические аминокислоты в следующих сайтах:
X13 представляет собой F или α MeF;
X25 представляет собой F;
X29 представляет собой T или S;
X30 представляет собой H, R или Aib;
X35 представляет собой Q, Aib или H;
X38 представляет собой Ac3c.
12. Фармацевтическая композиция по п. 11, отличающаяся тем, что представляет собой инъекцию, лиофилизированный порошок, таблетку, пилюлю, пастилку, мягкую капсулу, твердую капсулу, гранулу, порошок, раствор, суспензию или сироп; и, в качестве альтернативы, лекарственная композиция находится в форме микрокапсулы, микросфер, наночастицы или липосомы.
13. Фармацевтическая композиция по п. 11, отличающаяся тем, что ее используют для перорального введения, ингаляционного введения или парентерального введения, и парентеральное введение выбирают из внутрибрюшинного, внутримышечного, артериального, внутривенного, подкожного или внутрикожного пути введения инъекции.
14. Фармацевтическая композиция по п. 11, отличающаяся тем, что ее вводят с частотой, по меньшей мере, один раз в день, один раз в неделю, один раз в две недели или один раз в месяц.
15. Фармацевтическая композиция по п. 11, отличающаяся тем, что она используется в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтически активным веществом, и терапевтически активное вещество содержит противодиабетический активатор, агонист рецептора GIP, агонист или антагонист рецептора GCG, агонист рецептора GLP-1/GIP, агонист рецептора GLP-1/GCG, агонист рецептора GIP/GCG, FGF-21 и его аналоги, холецистокинин В (CCKB) и его аналоги, PYY (3-36) и его аналоги, лептин и его аналоги, кальцитонин и его аналоги, липидрегулирующие активные лекарственные средства, агонисты или регуляторы PPAR-α, β, δ, активаторы противотромбоцитарной агрегации, ингибиторы PCSK9, ингибиторы липазы, противофиброзные или противоцирротические активаторы или противовоспалительные активаторы.
16. Фармацевтическая композиция по п. 15, отличающаяся тем, что противодиабетический активатор содержит инсулин и его аналоги, бигуаниды, сульфонилмочевины, тиазолидиндионы, ингибиторы α-глюкозидазы, ингибиторы DPP-4, ингибиторы SGLT2, двойные ингибиторы SGLT1/SGLT2, агонисты рецептора GLP-1 или амилин и его аналоги.
17. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для стимулирования секреции инсулина и снижения уровня сахара в крови.
18. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для сдерживания приема пищи, задержки опорожнения желудка, увеличения энергопотребления и снижения массы тела.
19. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для снижения апоптоза β-клеток островков поджелудочной железы, увеличения числа β-клеток островков поджелудочной железы и улучшения функции островковых клеток поджелудочной железы.
20. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для улучшения содержания липидов в крови, уменьшения жировых отложений в печени, ингибирования развития воспаления печени, предотвращения или лечения неалкогольной жировой болезни печени.
21. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для предотвращения или лечения метаболических нарушений и связанных с ними осложнений.
22. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для лечения дислипидемии и связанных с нею заболеваний, а также нейродегенеративных заболеваний.
23. Применение соединения, или его соли, или сольвата по любому из пп. 1-10, или фармацевтической композиции по любому из пп. 11-16 при приготовлении лекарственных средств для лечения заболеваний костей, связанных с эндокринными нарушениями, метаболическими нарушениями, заболеваниями почек.
24. Применение по п. 21, отличающееся тем, что соединение или его соль, или сольват по любому из пп. 1-10, или фармацевтическая композиция по любому из пп. 11-16 используется при приготовлении лекарственных средств для лечения диабета, ожирения или неалкогольной жировой болезни печени.
25. Применение по п. 22, отличающееся тем, что нейродегенеративные заболевания включают болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.
26. Применение по п. 23, отличающееся тем, что заболевания костей включают остеоартрит.
| WO 2019125938 A1, 27.06.2019 | |||
| WO 2020023386 A1, 30.01.2020 | |||
| CN 111040022 A, 21.04.2020 | |||
| CN 112409460 A, 26.02.2021 | |||
| EA 201891360 A1, 28.12.2018 | |||
| WO 2019101035 A1, 31.05.2019. |
