Область изобретения
Настоящее изобретение относится к профилактическому или терапевтическому применениям тройного агониста, обладающего активностями в отношении всех из рецептора глюкагона, рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), и/или его конъюгатов для лечения заболевания легкого.
Предшествующий уровень техники
Легкие являются органом, в основном ответственным за дыхание, и заболевания легкого возникают из-за вредных веществ, вирусов, иммунных нарушений и т.д. Поскольку заболевания легкого приводят к снижению легочной функции и респираторному дискомфорту и т.д., требуется соответствующее лечение в зависимости от причины заболевания.
Примеры легочных заболеваний могут включать интерстициальное заболевание легкого, прогрессирующее фиброзирующее интерстициальное заболевание легкого, идиопатические интерстициальные пневмонии, неспецифическую интерстициальную пневмонию, легочный фиброз, фиброзирующие интерстициальные заболевания легкого, идиопатический легочный фиброз, альвеолит, пневмонию, эмфизему, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легкого, комбинированный легочный фиброз с эмфиземой, астму или респираторное инфекционное заболевание (например, коронавирусное заболевание (COVID-19)). Поскольку эти заболевания легкого связаны друг с другом и, таким образом, появляется комбинация различных симптомов, известно, что необходимо быть осторожным при выборе терапевтического средства. Основной патогенез заболевания легкого включает повреждение легкого, воспалительный ответ и фиброз.
В частности, известно, что при возникновении воспалительной реакции в легких из-за вирусов, микроорганизмов, вредных веществ и т.д., провоспалительные цитокины (например, интерлейкин-1 (IL-1), IL-6, фактор некроза опухоли α (TNF-α)) секретируются альвеолярными макрофагами, притягиваются нейтрофилы и секретируются протеазы и т.д., и, таким образом, эластичность и структура легочной ткани повреждаются из-за секреции протеаз (например эластазы), которая разрушает волокна, составляющие легочную ткань, что приводит к фиброзу легких. Воспаление и фиброз легких предшествует прогрессированию многих заболеваний легкого, и, соответственно, они могут представлять собой фундаментальные механизмы в предупреждении и лечении заболеваний легкого.
Легочный фиброз является типичным примером заболевания легкого, и фиброз является заболеванием, при котором в органе или ткани образуется избыточная волокнистая соединительная ткань. Фиброз относится к состоянию, при котором нормальный контроль невозможен в процессе заживления ран после повреждения ткани различными стрессами (инфекция, химическая стимуляция, облучение и т.д.) в организме человека. Фиброз возникает в различных органах, таких как легкие, сердце, печень и т.д., и является одной из весьма неудовлетворенных областей, так как фундаментального лечения пока не разработано.
Идиопатический легочный фиброз (IPF), представляющий собой легочный фиброз неизвестной этиологии, при котором прогрессирует хроническая фиброзная интерстициальная пневмония неизвестной этиологии, является заболеванием, при котором фиброз прогрессирует из-за непрерывного повреждения альвеолярных эпителиальных клеток, и исследовались способы лечения путем введения пирфенидона и нинтеданиба, но сообщалось о побочных эффектах, таких как снижение аппетита, слабость желудка, побочные эффекты в отношении пищеварительной системы, возможная гепатотоксичность, фоточувствительная сыпь и т.д.
Кроме того, хроническое обструктивное заболевание легкого (COPD), представляющее собой еще один типичный пример заболевания легкого, относится к заболеванию, при котором постепенно возникает нарушение проходимости дыхательных путей, поскольку дыхательные пути сужаются из-за аномального воспалительного ответа в легких, вызванного табаком, загрязнением воздуха или токсичными летучими веществами, которое в общем разделяется на хронический бронхит и эмфизему. В частности, курение, как известно, является основной причиной хронического обструктивного заболевания легкого. Курение действует как сильный раздражитель в легочной ткани, увеличивает продукцию различных провоспалительных факторов, факторов роста, окислительных веществ и хемотактических факторов, и активирует воспалительную сигнальную систему, способствуя миграции множества воспалительных клеток, включая нейтрофилы и макрофаги, для дальнейшего обострения легочного воспаления. Последнее в конечном счете приводит к аномальным изменениям в ткани легкого, таким как утолщение стенки дыхательных путей и легочный фиброз, тем самым снижая легочную функцию. Соответственно, облегчение воспаления легкого рассматривается в качестве одного из способов лечения для предупреждения и лечения хронического обструктивного заболевания легкого.
Еще один типичный пример заболевания легкого представляет собой повреждение легкого, вызванное инфицированием новым коронавирусом (2019-nCoV или SARS-CoV-2) и вызванное ими острое респираторное заболевание (COVID-19). Известно, что легкие представляют собой основные уязвимые органы, поскольку новый коронавирус, передаваемый через дыхательные пути, проникает в клетки через АСЕ2 и TMPRSS2, которые в основном экспрессируются в альвеолярных эпителиальных клетках II типа. Основные симптомы включают лихорадку, кашель и т.д., и здоровые взрослые люди с высокой степенью вероятности со временем восстанавливаются. Тем не менее известно, что когда вирусная инфекция в легких является тяжелой из-за низкого исходного иммунитета, она вызывает серьезный воспалительный ответ с повреждением легкого и способствует фиброзу, который может сопровождаться симптомами, такими как острый респираторный дистресс-синдром (ARDS) и сепсис. В настоящее время для лечения COVID-19 в основном используют лекарственные средства, подавляющие инфекцию и пролиферацию вирусов или контролирующие легочное воспаление. Соответственно, облегчение воспаления легкого и фиброза рассматривают как один из способов лечения для предупреждения и лечения COVID-19.
По сути, так как воспаление легких и фиброз представляют собой главные причины возникновения и развития заболеваний легкого, облегчение воспаления легких и фиброза было изучено в качестве терапевтического механизма при различных заболеваниях легкого.
Между тем, глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1) и глюкозозависимый инсулинотропный полипептид (GIP) являются типичными гормонами желудочно-кишечного тракта и нейрональными гормонами и представляют собой вещества, вовлеченные в контроль уровней глюкозы крови в соответствии с потреблением пищи. Глюкагон представляет собой пептидный гормон, секретируемый поджелудочной железой и вовлеченный в контролирование уровней глюкозы крови наряду с двумя веществами, описанными выше. Осуществляется разработка терапевтических агентов с использованием лекарственных средств, которые могут соответственно или одновременно действовать на рецепторы GLP-1, рецепторы GIP и рецепторы глюкагона (патент США №10370426, патент США №10400020).
Хотя до настоящего времени были проведены различные исследования заболеваний легкого, разработка практических и эффективных терапевтических агентов все еще недостаточна, и соответственно, существует потребность в непрерывной разработке терапевтических агентов.
Раскрытие изобретения
Техническая задача
Задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить фармацевтическую композицию для предупреждения или лечения заболевания легкого, включающую пептид, обладающий активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP, или конъюгат данного пептида длительного действия.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способ предупреждения или лечения заболевания легкого, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей пептид или конъюгат данного пептида длительного действия.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить применение композиции, содержащей пептид или конъюгат данного пептида длительного действия, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения или лечения заболевания легкого.
Техническое решение
В одном из аспектов реализации настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания легкого, включающая пептид, обладающий активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP).
В конкретном воплощении фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания легкого содержит фармацевтически приемлемый эксципиент и пептид, включающий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102, в фармацевтически эффективном количестве.
В фармацевтической композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений пептид находится в форме конъюгата длительного действия, представленного следующей формулой 1:
[Формула]
X-L-F
где в формуле 1 выше:
X представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102;
L представляет собой линкер, включающий повторяющееся звено этиленгликоля;
F представляет собой область Fc иммуноглобулина; и
"-" представляет ковалентную связь между X и L и между L и F.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений С-конец пептида амидирован.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений С-конец пептида амидирован или имеет свободную карбоксильную группу (-СООН).
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений пептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 64, 66, 67, 70, 71, 76, 77, 96, 97 и 100.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений пептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 77 и 96.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений аминокислоты по положениям 16 и 20 от N-конца образуют кольцо друг с другом в пептидной последовательности.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений молекулярная масса по формуле соединения фрагмента повторяющегося звена этиленгликоля в L находится в диапазоне от 1 кДа до 100 кДа.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений F представляет собой область Fc IgG.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений заболевание легкого представляет собой интерстициальное заболевание легкого (ILD), прогрессирующее фиброзирующее интерстициальное заболевание легкого (PF-ILD), идиопатические интерстициальные пневмонии (IIP), неспецифическую интерстициальную пневмонию (NSIP), легочный фиброз, фиброзирующие интерстициальные заболевания легкого (FILD), идиопатический легочный фиброз (IPF), альвеолит, пневмонию, эмфизему, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легкого, комбинированный легочный фиброз с эмфиземой (CPFE), астму или респираторное инфекционное заболевание.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений респираторное инфекционное заболевание представляет собой инфекционное заболевание, вызванное респираторными вирусами, бактериями, микоплазмой или грибками.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений респираторный вирус представляет собой любой вирус, выбранный из группы, состоящей из аденовируса, вируса оспы, вируса простого герпеса, вируса парагриппа, риновируса, вируса ветряной оспы, вируса кори, респираторно-синцитиального вируса, вируса Денге, ВИЧ (вируса иммунодефицита человека), вируса гриппа, коронавируса, вируса, ассоциированного с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS-ассоциированного вируса) и коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV).
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений коронавирус представляет собой SARS-CoV-2.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений фармацевтическая композиция обладает свойствами (1) ингибирования активности макрофагов; и/или (2) уменьшения экспрессии IL-1J3, IL-6, IL-12 или TNF-α после введения.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений фармацевтическая композиция обладает одним или более чем одним из следующих свойств после введения:
(1) подавляет дифференцировку миофибробластов;
(2) уменьшает экспрессию α-гладкомышечного актина (α-SMA), коллагена 1α1 или фибронектина;
(3) подавляет эпителиально-мезенхимальный переход (ЕМТ) альвеолярных эпителиальных клеток; и
(4) уменьшает экспрессию коллагена 1α1 или коллагена 1α3.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений фармацевтическую композицию дополнительно вводят с муколитическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений муколитический агент представляет собой один или более чем один агент, выбранный из группы, состоящей из амброксола, N-ацетилцистеина, N-ацетилина, карбоцистеина, домиодола, фудостеина, бромгексина, эрдостеина, летостина, лизоцима, месна, собрерола, степронина, тиопронина, тилоксапола, карбоцистеина, дорназы альфа, эпразинона, летостеина, нелтенексина и мецистеина.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений пептид и муколитический агент или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, последовательно или в обратном порядке.
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений заболевание легкого представляет собой пневмонию (воспаление легкого) или легочный фиброз, вызванный коронавирусом-19 (COVID-19).
В композиции в соответствии с любым из предыдущих конкретных воплощений F представляет собой димер, состоящий из двух полипептидных цепей, и один конец L связан только с одной из двух полипептидных цепей.
В еще одном аспекте для реализации настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения заболевания легкого, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, пептида или композиции, содержащей пептид.
В еще одном аспекте для реализации настоящего изобретения предложено применение пептида или композиции, содержащей пептид, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения или лечения заболевания легкого.
В еще одном аспекте для реализации настоящего изобретения предложено применение пептида или композиции, содержащей пептид, в предупреждении или лечении заболевания легкого.
Благоприятные эффекты
Тройной агонист или его конъюгат в соответствии с настоящим изобретением обладает активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), и, таким образом, может демонстрировать эффект для предупреждения или лечения заболевания легкого.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 представляет собой диаграмму, подтверждающую изменение уровня экспрессии провоспалительных цитокинов в легочной ткани после введения конъюгата тройного агониста длительного действия in vivo.
Фиг. 2 представляет собой диаграмму, подтверждающую эффект облегчения эмфиземы после введения конъюгата тройного агониста длительного действия in vivo.
Фиг. 3 представляет собой диаграмму, подтверждающую изменение уровня экспрессии маркеров дифференцировки миофибробластов (α-SMA, коллаген 1α1 и фибронектин) в легочных фибробластах (клетки MRC5) после обработки конъюгатом тройного агониста длительного действия.
Фиг. 4 представляет собой диаграмму, подтверждающую изменение уровня экспрессии маркеров эпителиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) (коллаген 1α1 и коллаген 1α3) в эпителиальных клетках легочных альвеол (клетки А549) после обработки конъюгатом тройного агониста длительного действия.
Фиг. 5 представляет собой диаграмму, подтверждающую эффект облегчения фиброза легочной ткани у мышей BLM после введения конъюгата тройного агониста длительного действия in vivo.
Фиг. 6 представляет собой диаграмму, подтверждающую изменение уровня выживаемости мышей BLM после введения конъюгата тройного агониста длительного действия.
Подробное описание изобретения
Далее настоящее изобретение будет описано большее подробно.
При этом каждое из объяснений и типичных воплощений, раскрытых в данном описании изобретения, может быть применимо к каждому другому объяснению и типичному воплощению. То есть, все комбинации различных раскрытых здесь факторов входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, объем настоящего изобретения не должен ограничиваться конкретным описанием, приведенным ниже.
Во всем описании настоящего изобретения используют не только общепринятые однобуквенные и трехбуквенные обозначения встречающихся в природе аминокислот, но также и те трехбуквенные коды, которые обычно допускаются для других аминокислот, таких как α-аминоизомасляная кислота (Aib), Sar (N-метилглицин) и α-метилглутаминовая кислота и т.п. Кроме того, упомянутые здесь аминокислоты имеют следующие сокращения в соответствии с правилами номенклатуры ШРАС-IUB (Международный союз теоретической и прикладной химии - Международный биохимический союз):
В одном из аспектов для реализации настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания легкого, включающая пептид, обладающий активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP).
В одном из воплощений пептид может включать аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102.
В еще одном воплощении фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания легкого может представлять собой фармацевтическую композицию, включающую фармацевтически приемлемый эксципиент и пептид, включающий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102, в фармацевтически эффективном количестве.
В настоящем изобретении "пептид, обладающий активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP", может быть использован взаимозаменяемо с "тройным агонистом".
Такой пептид включает различные вещества, которые обладают значительным уровнем активностей в отношении рецептора глюкагона, рецепторов GLP-1 и GIP (например, различные пептиды).
Не ограничиваясь конкретным образом, тройной агонист, обладающий значительным уровнем активностей в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и GIP, может демонстрировать активности in vitro, которые составляют приблизительно 0,001% или выше, приблизительно 0,01% или выше, приблизительно 0,1% или выше, приблизительно 1% или выше, приблизительно 2% или выше, приблизительно 3% или выше, приблизительно 4% или выше, приблизительно 5% или выше, приблизительно 6% или выше, приблизительно 7% или выше, приблизительно 8% или выше, приблизительно 9% или выше, приблизительно 10% или выше, приблизительно 20% или выше, приблизительно 30% или выше, приблизительно 40% или выше, приблизительно 50% или выше, приблизительно 60% или выше, приблизительно 70% или выше, приблизительно 80% или выше, приблизительно 90% или выше и приблизительно 100% или выше в отношении одного или более чем одного рецептора, в частности двух или более чем двух рецепторов, и более конкретно, всех трех рецепторов среди рецепторов глюкагона, GLP-1 и GIP, относительно природных лигандов соответствующих рецепторов (природный глюкагон, природный GLP-1 и природный GIP), и диапазоны активностей со значительным увеличением включены без ограничения.
В частности, активности в отношении рецепторов могут включать, например, случаи, при которых активности in vitro составляют 0,1% или выше, 1% или выше, 2% или выше, 3% или выше, 4% или выше, 5% или выше, 6% или выше, 7% или выше, 8% или выше, 9% или выше, 10% или выше, 20% или выше, 30% или выше, 40% или выше, 50% или выше, 60% или выше, 70% или выше, 80% или выше, 90% или выше, 100% или выше и приблизительно 200% или выше по сравнению с природными лигандами, но активности не ограничиваются ими.
Использованный здесь термин "приблизительно" относится к диапазону, включающему все из ±0,5, ±0,4, ±0,3, ±0,2, ±0,1 и т.п., и он включает все значения, эквивалентные значениям, которые располагаются непосредственно за термином "приблизительно", или значениям в подобном диапазоне, но не ограничиваются ими.
Способ измерения активности in vitro тройного агониста можно найти в Экспериментальном примере 1 настоящего изобретения, но этот способ не ограничивается им конкретно.
При этом тройной агонист характеризуется тем, что обладает одной или более из описанных ниже активностей с 1) по 3), двумя или более из активностей, в частности, всеми тремя активностями, и, в частности, существенной его активностью:
1) активация рецептора GLP-1; 2) активация рецептора глюкагона; и 3) активация рецептора GIP.
В частности, активация рецепторов может включать, например, случаи, при которых активности in vitro составляют приблизительно 0,1% или выше, приблизительно 1% или выше, приблизительно 2% или выше, приблизительно 3% или выше, приблизительно 4% или выше, приблизительно 5% или выше, приблизительно 6% или выше, приблизительно 7% или выше, приблизительно 8% или выше, приблизительно 9% или выше, приблизительно 10% или выше, приблизительно 20% или выше, приблизительно 30% или выше, приблизительно 40% или выше, приблизительно 50% или выше, приблизительно 60% или выше, приблизительно 70% или выше, приблизительно 80% или выше, приблизительно 90% или выше и приблизительно 100% или выше по сравнению с природными лигандами, но активности не ограничиваются ими.
Кроме того, пептид может представлять собой пептид, который обладает увеличенным периодом полувыведения in vivo по сравнению с любым из природного GLP-1, природного глюкагона и природного GIP, но пептид не ограничивается им конкретно.
Не ограничиваясь конкретным образом, пептид может представлять собой пептид, который не встречается в природе.
Пептид может представлять собой аналог природного глюкагона, но не ограничивается им конкретно. В частности, природный аналог глюкагона включает пептиды, которые обладают по меньшей мере одним отличием аминокислотной последовательности по сравнению с последовательностью природного глюкагона; пептиды, которые модифицированы путем модификации последовательности природного глюкагона; и миметики природного глюкагона.
При этом природный глюкагон может обладать следующей аминокислотной последовательностью, но не ограничивается конкретно ею:
His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (SEQ ID NO: 118).
В частности, пептид может представлять собой аналог природного глюкагона, в котором вариант, выбранный из группы, состоящей из замены, добавления, делеции, модификации и их комбинации, осуществлен в отношении по меньшей мере одной аминокислоты последовательности природного глюкагона, но пептид не ограничен конкретно этим.
Кроме того, замена аминокислоты включает как замену на аминокислоту, так и замену на неприродное соединение.
Кроме того, добавление может быть осуществлено по N-концу и/или С-концу пептида. При этом длина добавляемой аминокислоты не ограничена конкретным образом, но 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более и 11 или более аминокислот могут быть добавлены, и в широком смысле добавление может включать добавление полипептида, но добавление не ограничивается конкретно этим.
Более конкретно, пептид представляет собой пептид, в котором 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более, 11 или более, 12 или более, 13 или более, 14 или более, 15 или более, 16 или более, 17 или более, 18 или более, 19 или более или 20 аминокислот, выбранные из группы, состоящей из аминокислот по положениям 1, 2, 3, 7, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 27, 28 и 29 аминокислотной последовательности природного глюкагона, заменены на другие аминокислоты, и, кроме того, могут представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более, или 11 или более аминокислот независимо или дополнительно добавлены по его С-концу, но пептид не ограничен конкретно этим.
Еще более конкретно, пептид может представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более, 11 или более, 12 или более, 13 или более, 14 или более, 15 или более, 16 или более, 17 или более, 18 или более или 19 аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аминокислот по положениям 1, 2, 3, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 27, 28 и 29 аминокислотной последовательности природного глюкагона, заменены на другие аминокислоты, и кроме того, могут представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более или 11 или более аминокислот независимо или дополнительно добавлены по его С-концу, но пептид не ограничен конкретно этим.
Еще более конкретно, пептид может представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более, 11 или более, 12 или более, 13 или более, 14 или более, 15 или более, 16 или более или 17 аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аминокислот по положениям 1, 2, 3, 10, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 28 и 29 аминокислотной последовательности природного глюкагона, заменены на другие аминокислоты, и кроме того, могут представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более или 11 или более аминокислот независимо или дополнительно добавлены по его С-концу, но пептид не ограничен конкретно этим.
Еще более конкретно, пептид может представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более, 11 или более, 12 или более, 13 или более или 14 аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аминокислот по положениям 1, 2, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 27, 28 и 29 аминокислотной последовательности природного глюкагона, заменены на другие аминокислоты, и кроме того, могут представлять собой пептиды, в которых 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более, 10 или более или 11 или более аминокислот независимо или дополнительно добавлены по его С-концу, но пептид не ограничен конкретно этим.
Аминокислоты, подлежащие введению, могут быть выбраны из группы, состоящей из тирозина, α-метил-глутаминовой кислоты, Aib, метионина, глутаминовой кислоты, гистидина, лизина, лейцина, изолейцина, глутамина, валина, глицина, аланина, цистеина, серина, аланина, аспарагиновой кислоты и аргинина, но подлежащие введению аминокислоты не ограничены конкретно этим.
Например, добавляемая(ые) аминокислотная(ые) последовательность(и) может(гут) представлять собой одну или более чем одну аминокислотную последовательность, происходящую из аминокислотной последовательности природного GLP-1, аминокислотной последовательности природного GIP или аминокислотной последовательности природного эксендина-4.
Такой пептид может включать внутримолекулярный мостик (например, ковалентную перекрестную сшивку или нековалентную перекрестную сшивку) и, в частности, может находиться в форме, включающей кольцо, например, может находиться в форме, где кольцо образовано 16-й аминокислотой и 20-й аминокислотой пептида, но данный пептид конкретно не ограничивается этим.
Не ограничивающий объем изобретения пример кольца может включать лактамный мостик (или лактамное кольцо).
Кроме того, пептид включает все пептиды, которые модифицированы для включения кольца или включения аминокислоты, способной образовать кольцо по целевому положению.
Например, пептид может представлять собой пептид, в котором пара аминокислот по положениям 16 и 20 заменена на глутаминовую кислоту или лизин, которые могут образовать кольцо, но данный пептид не ограничивается этим.
Такое кольцо может быть образовано боковыми цепями аминокислот в пределах пептида; например, кольцо может находиться в форме, где образуется лактамное кольцо между боковой цепью лизина и боковой цепью глутаминовой кислоты, но данное кольцо конкретно не ограничивается этим.
Примеры пептида, полученного путем комбинации этих способов, могут включать пептиды, в которых их аминокислотные последовательности отличаются от аминокислотной последовательности природного глюкагона по меньшей мере одной аминокислотой, а α-углерод на их N-конце аминокислотного остатка удален, при наличии активностей в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP и т.д., но данный пептид не ограничивается этим, и пептид, применимый в настоящем изобретении, может быть получен путем комбинации различных способов получения аналогов.
Кроме того, в отношении пептида в соответствии с настоящим изобретением некоторые из аминокислот могут быть заменены на другие аминокислоты или неприродные соединения, чтобы избежать распознавания расщепляющим ферментом для увеличения периода полувыведения данного пептида in vivo, но данный пептид конкретно не ограничивается этим.
В частности, пептид может представлять собой пептид, в котором период полувыведения in vivo увеличен посредством избегания распознавания расщепляющим ферментом путем замены 2-й аминокислотной последовательности среди аминокислотных последовательностей данного пептида, но любая замена или модификация аминокислот для того, чтобы избежать распознавания расщепляющим ферментом in vivo, включена без ограничения.
Кроме того, такая модификация для получения пептида включает все модификации с использованием аминокислот L-типа или D-типа и/или неприродных аминокислот; и/или модификацию природной последовательности, например модификацию функциональной группы боковой цепи, внутримолекулярное ковалентное связывание (например, образование кольца между боковыми цепями), метилирование, ацилирование, убиквитинирование, фосфорилирование, аминогексанирование, биотинилирование и т.д.
Кроме того, модификация также включает все модификации, где одна или более чем одна аминокислота добавлена по амино- и/или карбокси-концу природного глюкагона.
В качестве аминокислот для замены или добавления можно использовать не только 20 аминокислот, обычно встречающихся в человеческих белках, но также и нетипичные или не встречающиеся в природе аминокислоты. Коммерческие источники нетипичных аминокислот включают Sigma-Aldrich, ChemPep Inc. и Genzyme Pharmaceuticals. Пептиды, в которые включены данные аминокислоты, и типичные пептидные последовательности могут быть синтезированы и приобретены у коммерческих компаний по синтезу пептидов (например, American Peptide Company, Bachem (США) или Anygen (Корея)).
Аминокислотные производные могут быть получены таким же способом, и в качестве одного такого примера можно использовать 4-имидазоуксусную кислоту и т.д.
Кроме того, пептид в соответствии с настоящим изобретением может находиться в форме варианта, где N-конец и/или С-конец и т.д. данного пептида химически модифицирован или защищен органическими группами, или аминокислоты могут быть добавлены к концу данного пептида для его защиты от протеаз in vivo с увеличением его стабильности.
В частности, в случае химически синтезированного пептида, его N- и С-концы являются электрически заряженными. Следовательно, для того чтобы удалить такой заряд, N-конец данного пептида может быть ацетилирован и/или С-конец данного пептида может быть амидирован, но модификация пептида конкретно не ограничивается этим.
Кроме того, пептид в соответствии с настоящим изобретением включает все пептиды в виде самого пептида, его соли (например его фармацевтически приемлемой соли) или его сольвата. Кроме того, данный пептид может находиться в любой фармацевтически приемлемой форме.
Вид соли конкретно не ограничен. Тем не менее данная соль предпочтительно представляет собой соль, которая является безопасной и эффективной формой для субъекта (например млекопитающего), но данная соль конкретно не ограничивается этим.
Термин "фармацевтически приемлемый" относится к веществу, которое может быть эффективно использовано для желательного применения в пределах объема фармако-медицинского решения, не вызывая избыточную токсичность, раздражение, аллергические реакции и т.д.
Использованный здесь термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к соли, полученной из фармацевтически приемлемых неорганических кислот, органических кислот или оснований. Примеры подходящих кислот могут включать соляную кислоту, бромноватую кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, фосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, толуол-пара-сульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту и т.д. Соли, полученные из подходящих оснований, могут включать соли щелочных металлов (например натрия, калия и т.д.); щелочноземельных металлов (например магния); аммония и т.д.
Использованный здесь термин "сольват" относится к комплексу, образованному между пептидом в соответствии с настоящим изобретением или его солью и молекулой растворителя.
В одном из воплощений пептид может включать аминокислотную последовательность, представленную общей формулой I, приведенной ниже:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Gly-Thr-Phe-Xaa7-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Xaa12-Хаа13-Хаа14-Хаа15-Хаа16-Хаа17-Хаа18-Хаа19-Хаа20-Хаа21-Phe-Хаа23-Хаа24-Trp-Leu-Хаа27-Xaa28-Xaa29-Xaa30-R1 (общая формула 1, SEQ ID NO: 103).
В общей формуле 1 выше:
Xaa1 представляет собой гистидин, 4-имидазоацетил или тирозин;
Хаа2 представляет собой глицин, α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа3 представляет собой глутаминовую кислоту или глутамин;
Xaa7 представляет собой треонин или изолейцин;
Хаа10 представляет собой лейцин, тирозин, лизин, цистеин или валин;
Хаа12 представляет собой лизин, серин или изолейцин;
Хаа13 представляет собой глутамин, тирозин, аланин или цистеин;
Хаа14 представляет собой лейцин, метионин или тирозин;
Хаа15 представляет собой цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или лейцин;
Хаа16 представляет собой глицин, глутаминовую кислоту или серин;
Хаа17 представляет собой глутамин, аргинин, изолейцин, глутаминовую кислоту, цистеин или лизин;
Хаа18 представляет собой аланин, глутамин, аргинин или гистидин;
Хаа19 представляет собой аланин, глутамин, цистеин или валин;
Хаа20 представляет собой лизин, глутамин или аргинин;
Хаа21 представляет собой глутаминовую кислоту, глутамин, лейцин, цистеин, или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой изолейцин или валин;
Хаа24 представляет собой аланин, глутамин, цистеин, аспарагин, аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
Хаа27 представляет собой валин, лейцин или лизин;
Хаа28 представляет собой цистеин, лизин, аланин, аспарагин или аспарагиновую кислоту;
Хаа29 представляет собой цистеин, глицин, глутамин, треонин, глутаминовую кислоту или гистидин;
Хаа30 представляет собой цистеин, глицин, лизин или гистидин, или отсутствует; и
R1 представляет собой цистеин, GKKNDWKHNIT (SEQ ID NO: 106), m-SSGAPPPS-n (SEQ ID NO: 107) или m-SSGQPPPS-n (SEQ ID NO: 108), или отсутствует, где:
m представляет собой -Cys-, -Pro- или -Gly-Pro-; и
n представляет собой -Cys-, -Gly-, -Ser- или -His-Gly-, или отсутствует.
Примеры тройного агониста могут представлять собой примеры, которые включают аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-102; аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-11 и SEQ ID NO: 13-102; и примеры, которые (по существу) состоят из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-11 и SEQ ID NO: 13-102, но тройной агонист не ограничивается этим.
В еще одном воплощении тройной агонист может представлять собой тройной агонист, который (по существу) состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 64, 66, 67, 70, 71, 76, 77, 96, 97 и 100, но тройной агонист не ограничивается этим.
В еще одном воплощении тройной агонист может представлять собой тройной агонист, который (по существу) состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 66, 67, 77, 96, 97 и 100, но тройной агонист не ограничивается этим.
В еще одном воплощении тройной агонист может представлять собой тройной агонист, который (по существу) состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 77 и 96, но тройной агонист не ограничивается этим.
Кроме того, хотя в качестве пептида, "состоящего из", предложена конкретная SEQ ID NO:, в настоящем изобретении такое описание не исключает мутацию, которая может возникать при добавлении бессмысленной последовательности выше или ниже аминокислотной последовательности соответствующей SEQ ID NO, или мутацию, которая может возникать в природе, или ее молчащую мутацию до тех пор, пока пептид обладает активностью, идентичной или соответствующей активности пептида, который состоит из аминокислотной последовательности соответствующей SEQ ID NO, и он очевидно относится к объему настоящего изобретения даже тогда, когда пептид обладает такой добавляемой последовательностью или мутацией в ней.
Вышеприведенное может быть применимо в отношении других конкретных воплощений или аспектов настоящего изобретения, но не ограничивается этим.
В частности, в общей формуле 1 выше Хаа14 может представлять собой лейцин или метионин, и Хаа15 может представлять собой цистеин, аспарагиновую кислоту или лейцин.
Примеры такого пептида могут включать пептид, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-11, 14-17 и 21-102; или пептид, который (по существу) состоит из них, но пептид не ограничен конкретно этим.
Пептид может значительно активировать по меньшей мере один из рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP, но пептид не ограничен конкретно этим. В частности, пептид может представлять собой пептид, который значительно активирует рецептор GLP-1, или дополнительно значительно активирует рецептор глюкагона и/или рецептор GIP, но пептид не ограничен конкретно этим.
Более конкретно, пептид может представлять собой пептид,
где в общей формуле 1 выше:
Хаа2 представляет собой глицин, α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа7 представляет собой треонин;
Хаа10 представляет собой тирозин, цистеин или валин;
Хаа12 представляет собой лизин или изолейцин;
Хаа13 представляет собой тирозин, аланин, глутамин или цистеин;
Хаа14 представляет собой лейцин, цистеин или метионин;
Хаа15 представляет собой цистеин, лейцин, глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту;
Хаа17 представляет собой глутамин, аргинин, изолейцин, цистеин, глутаминовую кислоту или лизин;
Хаа18 представляет собой аланин, глутамин, аргинин или гистидин;
Хаа19 представляет собой аланин, глутамин, валин или цистеин;
Хаа20 представляет собой лизин, аргинин или глутамин;
Хаа21 представляет собой глутаминовую кислоту, глутамин, лейцин, цистеин или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой изолейцин или валин;
Хаа24 представляет собой цистеин, аланин, глутамин, аспарагин, глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту; и
Хаа27 представляет собой лейцин или лизин,
но пептид не ограничен конкретно этим.
Более конкретно, пептид может представлять собой пептид,
где в общей формуле 1 выше:
Хаа2 представляет собой глицин, α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа7 представляет собой треонин;
Хаа10 представляет собой тирозин, цистеин или валин;
Хаа12 представляет собой лизин или изолейцин;
Хаа13 представляет собой тирозин, аланин или цистеин;
Хаа14 представляет собой лейцин или метионин;
Хаа15 представляет собой цистеин или аспарагиновую кислоту;
Хаа17 представляет собой глутамин, аргинин, изолейцин, цистеин или лизин;
Хаа18 представляет собой аланин, аргинин или гистидин;
Хаа19 представляет собой аланин, глутамин или цистеин;
Хаа21 представляет собой глутаминовую кислоту, цистеин или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой валин;
Хаа24 представляет собой аланин, глутамин, цистеин, аспарагин или аспарагиновую кислоту; и
Хаа27 представляет собой лейцин или лизин, но пептид не ограничен конкретно этим.
Более конкретно, пептид может представлять собой пептид,
где в общей формуле 1 выше:
Хаа2 представляет собой α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа7 представляет собой треонин;
Хаа10 представляет собой тирозин или цистеин;
Хаа12 представляет собой лизин или изолейцин;
Хаа13 представляет собой тирозин, аланин или цистеин;
Хаа14 представляет собой лейцин или метионин;
Хаа15 представляет собой цистеин или аспарагиновую кислоту;
Хаа16 представляет собой глутаминовую кислоту;
Хаа17 представляет собой аргинин, изолейцин, цистеин или лизин;
Хаа18 представляет собой аланин, аргинин или гистидин;
Хаа19 представляет собой аланин, глутамин или цистеин;
Хаа20 представляет собой лизин или глутамин;
Хаа21 представляет собой глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой валин;
Хаа24 представляет собой глутамин, аспарагин или аспарагиновую кислоту;
Хаа27 представляет собой лейцин; и
Хаа28 представляет собой цистеин, аланин, аспарагин или аспарагиновую кислоту.
Конкретно, пептид может представлять собой пептид,
где в общей формуле 1 выше:
Xaa1 представляет собой гистидин или 4-имидазоацетил;
Хаа2 представляет собой α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа3 представляет собой глутамин;
Хаа7 представляет собой треонин;
Хаа10 представляет собой тирозин;
Xaa12 представляет собой изолейцин;
Хаа13 представляет собой аланин или цистеин;
Хаа14 представляет собой метионин;
Хаа15 представляет собой аспарагиновую кислоту;
Хаа16 представляет собой глутаминовую кислоту;
Хаа17 представляет собой изолейцин или лизин;
Хаа18 представляет собой аланин или гистидин;
Хаа19 представляет собой глутамин или цистеин;
Хаа20 представляет собой лизин;
Хаа21 представляет собой аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой валин;
Хаа24 представляет собой аспарагин;
Хаа27 представляет собой лейцин;
Хаа28 представляет собой аланин или аспарагин;
Хаа29 представляет собой глутамин или треонин; и
Хаа30 представляет собой цистеин или лизин, или отсутствует.
Более конкретно, пептид может представлять собой пептид,
где в общей формуле 1 выше:
Хаа2 представляет собой глицин, α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа3 представляет собой глутамин;
Хаа7 представляет собой треонин;
Хаа10 представляет собой тирозин, цистеин или валин;
Хаа12 представляет собой лизин;
Хаа13 представляет собой тирозин;
Хаа14 представляет собой лейцин;
Хаа15 представляет собой аспарагиновую кислоту;
Хаа16 представляет собой глицин, глутаминовую кислоту или серин;
Хаа17 представляет собой глутамин, аргинин, цистеин, или лизин;
Хаа18 is аланин, аргинин или гистидин;
Хаа19 представляет собой аланин или глутамин;
Хаа20 представляет собой лизин или глутамин;
Хаа21 представляет собой глутаминовую кислоту, цистеин или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой валин;
Хаа24 представляет собой аланин, глутамин или цистеин;
Хаа27 представляет собой лейцин или лизин; и
Хаа29 представляет собой глицин, глутамин, треонин, или гистидин, но пептид не ограничен конкретно этим.
Такой пептид может соответствовать случаю, когда пептид обладает значительными уровнями активации в отношении рецептора GLP-1 и рецептора глюкагона или более высокими уровнями активации по сравнению с уровнями в отношении рецептора GIP; случаю, когда пептид обладает значительными уровнями активации в отношении всех из рецептора GLP-1, рецептора глюкагона и рецептора GIP; или случаю, когда пептид обладает значительными уровнями активации в отношении как рецептора GLP-1, так и рецептора GIP и более высокими уровнями активации по сравнению с уровнями активации в отношении рецептора глюкагона; но эти случаи не ограничены конкретно этим.
Примеры пептида могут включать пептид, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8, 9, 21-37, 39, 42, 43, 49-61, 64-83, 85, 86, 88, 89, 91-93 и 95-102; или пептид, который (по существу) состоит из них, но пептид не ограничен конкретно этим.
В конкретном воплощении пептид может включать аминокислотную последовательность, представленную общей формулой 2 ниже:
Xaa1-Хаа2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Хаа10-Ser-Lys-Хаа13-Хаа14-Хаа15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-Xaa23-Xaa24-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Ser-Ser-Gly-Gln-Pro-Pro-Pro-Ser-Xaa40 (общая формула 2, SEQ ID NO: 104).
В общей формуле 2 выше, пептид может представлять собой пептид, в котором:
Xaa1 представляет собой 4-имидазоацетил, гистидин или тирозин;
Хаа2 представляет собой глицин, α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа10 представляет собой тирозин или цистеин;
Хаа13 представляет собой аланин, глутамин, тирозин или цистеин;
Хаа14 представляет собой лейцин, метионин или тирозин;
Xaa15 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или лейцин;
Хаа16 представляет собой глицин, глутаминовую кислоту или серин;
Хаа17 представляет собой глутамин, аргинин, изолейцин, глутаминовую кислоту, цистеин или лизин;
Xaa18 представляет собой аланин, глутамин, аргинин или гистидин;
Хаа19 представляет собой аланин, глутамин, цистеин или валин;
Хаа20 представляет собой лизин, глутамин или аргинин;
Хаа21 представляет собой цистеин, глутаминовую кислоту, глутамин, лейцин или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой изолейцин или валин;
Хаа24 представляет собой цистеин, аланин, глутамин, аспарагин или глутаминовую кислоту;
Хаа28 представляет собой лизин, цистеин, аспарагин или аспарагиновую кислоту;
Хаа29 представляет собой глицин, глутамин, цистеин или гистидин;
Хаа30 представляет собой цистеин, глицин, лизин или гистидин;
Хаа31 представляет собой пролин или цистеин; и
Хаа40 представляет собой цистеин или отсутствует.
Более конкретно, пептид может представлять собой пептид, где в общей формуле 2:
Хаа13 представляет собой аланин, тирозин или цистеин;
Хаа15 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту,
Хаа17 представляет собой глутамин, аргинин, цистеин или лизин;
Хаа18 представляет собой аланин, аргинин или гистидин;
Хаа21 представляет собой цистеин, глутаминовую кислоту, глутамин или аспарагиновую кислоту;
Хаа23 представляет собой изолейцин или валин;
Хаа24 представляет собой цистеин, глутамин или аспарагин,
Хаа28 представляет собой цистеин, аспарагин или аспарагиновую кислоту;
Хаа29 представляет собой глутамин, цистеин или гистидин; и
Хаа30 представляет собой цистеин, лизин или гистидин.
Примеры пептида могут включать пептид, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 64-77 и 95-102; более конкретно, пептид, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 64-77 и 96-102; или пептид, который (по существу) состоит из них, но пептид не ограничен конкретно этим.
В конкретном воплощении пептид может включать аминокислотную последовательность, представленную общей формулой 3 ниже:
Xaa1-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Xaa13-Leu-Asp-Glu-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Lys-Xaa21-Phe-Val-Xaa24-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Ser-Ser-Gly-Gln-Pro-Pro-Pro-Ser-Xaa40 (общая формула 3, SEQ ID NO: 105).
Пептид может представлять собой пептид, где в общей формуле 3 выше:
Xaa1 представляет собой гистидин или тирозин;
Хаа2 представляет собой α-метил-глутаминовую кислоту или Aib;
Хаа13 представляет собой аланин, тирозин или цистеин;
Хаа17 представляет собой аргинин, цистеин или лизин;
Xaa18 представляет собой аланин или аргинин;
Хаа19 представляет собой аланин или цистеин;
Хаа21 представляет собой глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту;
Хаа24 представляет собой глутамин или аспарагин;
Хаа28 представляет собой цистеин или аспарагиновую кислоту;
Хаа29 представляет собой цистеин, гистидин или глутамин;
Хаа30 представляет собой цистеин или гистидин;
Хаа31 представляет собой пролин или цистеин; и
Хаа40 представляет собой цистеин или отсутствует.
Примеры пептида могут включать пептид, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 64-71, 75-77 и 96-102; или пептид, который (по существу) состоит из них, но пептид не ограничен конкретно этим.
Кроме того, пептид может представлять собой пептид, где в общей формуле 1 выше: R1 представляет собой цистеин, GKKNDWKHNIT (SEQ ID NO: 106), CSSGQPPPS (SEQ ID NO: 109), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 110), GPSSGAPPPSC (SEQ ID NO: 111), PSSGAPPPS (SEQ ID NO: 112), PSSGAPPPSG (SEQ ID NO: 113), PSSGAPPPSHG (SEQ ID NO: 114), PSSGAPPPSS (SEQ ID NO: 115), PSSGQPPPS (SEQ ID NO: 116) или PSSGQPPPSC (SEQ ID NO: 117), или отсутствует, но пептид не ограничен конкретно этим.
Кроме того, пептид в соответствии с настоящим изобретением может быть синтезирован с использованием способа, хорошо известного в данной области техники, в соответствии с его длиной (например, при помощи автоматического пептидного синтезатора), и может быть получен способом генетической инженерии.
В частности, пептид в соответствии с настоящим изобретению может быть получен стандартным способом синтеза, с использованием рекомбинантной экспрессирующейся системы или любым другим способом, известным в данной области техники.
Соответственно, пептид в соответствии с настоящим изобретением может быть синтезирован множеством способов, включая, например, способы, описанные ниже:
(а) способ синтеза пептида посредством твердофазного или жидкофазного метода постадийно или путем сборки фрагментов с последующим выделением и очисткой конечного пептидного продукта; или
(б) способ экспрессии конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид в клетке-хозяине и выделение продукта экспрессии из культуры клеток-хозяев; или
(в) способ осуществления бесклеточной экспрессии in vitro конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид, и выделение продукта экспрессии; или
способ получения фрагментов пептида посредством любой комбинации способов (а), (б) и (в) с последующим получением пептида путем связывания фрагментов пептида и затем выделения пептида.
Кроме того, пептид, обладающий активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP, может находиться в форме конъюгата длительного действия, в котором биосовместимое вещество для увеличения периода полувыведения пептида in vivo связано с пептидом, обладающим активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP. В описании настоящего изобретения биосовместимое вещество может быть использовано взаимозаменяемо с носителем.
В настоящем изобретении конъюгат пептида может демонстрировать увеличенную длительность эффективности по сравнению с пептидом, с которым не связан носитель, и в настоящем изобретении такой конъюгат назван "конъюгатом длительного действия".
Тем не менее, конъюгат может представлять собой конъюгат, который не встречается в природе.
В одном из воплощений настоящего изобретения конъюгат длительного действия может представлять собой конъюгат, который представлен формулой 1 ниже, но конъюгат длительного действия не ограничивается этим.
[Формула 1]
X-L-F,
где в формуле 1 выше:
X представляет собой пептид, включающий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102;
L представляет собой линкер, содержащей повторяющееся звено этиленгликоля; F представляет собой фрагмент Fc иммуноглобулина или его производное; и "-" представляет ковалентную связь между X и L и между L и F.
В вышеприведенном конъюгате F представляет собой вещество, способное увеличивать период полувыведения X (т.е. пептида, обладающего активностями в отношении рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP; и, в частности, пептида, включающего аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102), и он соответствует составу группировки, которая составляет конъюгат в соответствии с настоящим изобретением.
F может представлять собой вещество, которое связано с X посредством ковалентной химической связи или нековалентной химической связи, и F и X могут быть связаны друг с другом через L посредством ковалентной химической связи, нековалентной химической связи или их комбинации.
В частности, L может представлять собой непептидный линкер, например линкер, содержащий повторяющееся звено этиленгликоля.
В настоящем изобретении термин "непептидный линкер" включает биосовместимый полимер, в котором связаны два или более чем два повторяющихся звена. Повторяющиеся звенья связаны друг с другом посредством любой ковалентной связи, которая не является пептидной связью. Непептидный линкер может представлять собой одну структуру, которая составляет группировки конъюгата в соответствии с настоящим изобретением, и он соответствует L в формуле 1, приведенной выше.
В качестве непептидного линкера, который можно использовать в настоящем изобретении, можно использовать без ограничения любой полимер, который обладает устойчивостью к протеазам in vivo. В настоящем изобретении термин "непептидный линкер" можно использовать взаимозаменяемо с непептидным полимером.
Непептидный линкер, хотя и не ограничен конкретно, может представлять собой линкер, содержащий повторяющееся звено этиленгликоля (например полиэтиленгликоль), и, кроме того, эти производные, которые уже известны в данной области техники, и производные, которые могут быть легко получены на технологическом уровне специалистов в данной области техники, включены в объем настоящего изобретения.
Повторяющееся звено непептидного линкера может представлять собой повторяющееся звено этиленгликоля, и, в частности, непептидный линкер может представлять собой линкер, который включает функциональную группу, используемую для получения в конце конъюгата при включении повторяющегося звена этиленгликоля. Конъюгат длительного действия в соответствии с настоящим изобретением может находиться в форме, в которой X и F связаны через функциональную группу, но конъюгат длительного действия не ограничивается этим. В настоящем изобретении непептидный линкер может включать две, три или более чем три функциональные группы, и каждая функциональная группа может быть одинаковой или отличной друг от друга, но непептидный линкер не ограничивается этим.
В частности, линкер может представлять собой полиэтиленгликоль (PEG), представленный формулой 2 ниже, но линкер не ограничивается этим:
где n равен от 10 до 2400, n равен от 10 до 480, или n равен от 50 до 250, но диапазон n не ограничивается этим.
В конъюгате длительного действия выше группировка PEG может включать не только структуру -(CH2CH2O)n-, но также атом кислорода, расположенный между связывающим элементом и структурой -(CH2CH2O)n-, но группировка PEG не ограничивается этим.
Кроме того, в конкретном воплощении конъюгат может иметь структуру, в которой фрагмент иммуноглобулина (F) связан с пептидом (X), содержащим аминокислотную последовательность общей формулы 1, посредством ковалентной связи через линкер, содержащий повторяющееся звено этиленгликоля, но структура конъюгата не ограничивается этим.
Полиэтиленгликоль представляет собой общий термин, включающий все формы гомополимеров этиленгликоля, сополимеров PEG и монометилзамещенных полимеров PEG (mPEG), но полиэтиленгликоль конкретно не ограничивается этим.
Непептидный линкер, используемый в настоящем изобретении, может представлять собой, без ограничения, любой полимер, который включает повторяющееся звено этиленгликоля, обладающее устойчивостью к протеазам in vivo. Молекулярная масса непептидного полимера может находиться в диапазоне от превышающего 0 кДа до приблизительно 100 кДа, от приблизительно 1 кДа до приблизительно 100 кДа, в частности, от приблизительно 1 кДа до приблизительно 20 кДа или от приблизительно 1 кДа до приблизительно 10 кДа, но молекулярная масса непептидного полимера не ограничивается этим. Кроме того, непептидный линкер в соответствии с настоящим изобретением, который связан с полипептидом, соответствующим F, может включать не только один вид полимера, но также и комбинацию разных видов полимеров.
В конкретном воплощении оба конца непептидного линкера могут быть связаны с аминогруппой или тиольной группой F (например, области Fc иммуноглобулина) и аминогруппой или тиольной группой X, соответственно.
В частности, непептидный полимер может включать реакционноспособную группу, которая может быть связана с F (например, областью Fc иммуноглобулина) и X на его обоих его концах, соответственно, и, более конкретно, реакционноспособную группу, которая может быть связана с аминогруппой, расположенной на N-конце лизина, или тиольной группой цистеина X или F (например, областью Fc иммуноглобулина), но непептидный полимер не ограничивается этим.
Кроме того, реакционноспособная группа непептидного полимера, которая может быть связана с F (например, областью Fc иммуноглобулина) и X, может быть выбрана из группы, состоящей из альдегидной группы, малеимидной группы и сукцинимидного производного, но реакционноспособная группа не ограничивается этим.
В приведенном выше, в качестве примера альдегидной группы можно использовать пропиональдегидную группу или бутиральдегидную группу, но альдегидная группа не ограничивается этим.
В приведенном выше, в качестве сукцинимидного производного можно использовать сукцинимидилвалерат, сукцинимидилметилбутаноат, сукцинимидилметилпропионат, сукцинимидилбутаноат, сукцинимидилпропионат, N-гидроксисукцинимид, гидроксисукцинимидил, сукцинимидилкарбоксиметил или сукцинимид ил карбонат, но сукцинимидное производное не ограничивается этим.
Непептидный линкер может быть связан с X и F через эти реакционноспособные группы, но реакционноспособные группы не ограничены конкретно этим.
Кроме того, конечный продукт, полученный посредством восстановительного аминирования при помощи альдегидной связи, является значительно более стабильным, чем продукт, связанный амидной связью. Альдегидная реакционноспособная группа избирательно реагирует с N-концом при низком рН, при этом она может образовывать ковалентную связь с остатком лизина при высоком рН (например, рН 9,0).
Кроме того, реакционноспособные группы по каждому концу непептидного линкера могут быть одинаковыми или отличающимися друг от друга. Например, непептидный линкер может иметь малеимидную реакционноспособную группу по одному концу при наличии альдегидной группы, пропиональдегидной группы или бутиральдегидной группы по другому концу. Тем не менее реакционноспособные группы не ограничены конкретно этим, при условии что F (в частности, область Fc иммуноглобулина) может быть связан с X по каждому концу непептидного линкера.
Например, непептидный линкер может включать в качестве реакционноспособной группы малеимидную группу по одному концу при включении альдегидной группы, пропиональдегидной группы или бутиральдегидной группы по другому концу.
При использовании в качестве непептидного полимера полиэтиленгликоля, имеющего реакционноспособную гидроксильную группу по обоим его концам, конъюгат белка длительного действия в соответствии с настоящим изобретением может быть получен путем активирования гидроксильной группы до различных реакционноспособных групп путем известных химических реакций или путем использования имеющегося в продаже полиэтиленгликоля, имеющего модифицированную реакционноспособную группу.
В конкретном воплощении непептидный полимер может представлять собой полимер, который связан с остатком цистеина X и, более конкретно, с группой -SH цистеина, но непептидный полимер не ограничивается этим.
Например, непептидный полимер может представлять собой полимер, который связан с пептидом, соответствующим X, по положению 10-го остатка цистеина, 13-го остатка цистеина, 15-го остатка цистеина, 17-го остатка цистеина, 19-го остатка цистеина, 21-го остатка цистеина, 24-го остатка цистеина, 28-го остатка цистеина, 29-го остатка цистеина, 30-го остатка цистеина, 31-го остатка цистеина, 40-го остатка цистеина или 41-го остатка цистеина, но непептидный полимер не ограничивается конкретно этим.
В частности, реакционноспособная группа данного непептидного полимера может быть связана с группой -SH остатка цистеина, и все приведенные выше описания могут быть применимы к данной реакционноспособной группе. В случае, когда используют малеимид-PEG-альдегид, малеимидная группа связана с группой -SH в X посредством тиоэфирной связи, и альдегидная группа может быть связана с F (в частности, с группой -NH2 в Fc иммуноглобулина) посредством реакции восстановительного аминирования, но связь не ограничивается этим, и данная связь просто представляет собой одно воплощение.
Кроме того, в приведенном выше конъюгате реакционноспособная группа непептидного полимера может быть связана с -NH2, расположенной на N-конце области Fc иммуноглобулина, но данная связь просто представляет собой одно воплощение.
Тем не менее, F может представлять собой область Fc иммуноглобулина и, более конкретно, область Fc иммуноглобулина может иметь происхождение из IgG, но не ограничиваться конкретно этим.
В настоящем изобретении термин "область Fc иммуноглобулина" относится к области, которая включает фрагменты константной области 2 тяжелой цепи (СН2) и/или константной области 3 тяжелой цепи (СНЗ), за исключением вариабельных областей тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина. Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой структуру, составляющую группировку конъюгата в соответствии с настоящим изобретением. Область Fc иммуноглобулина может быть использована взаимозаменяемо с "Fc-фрагментом иммуноглобулина".
В настоящем изобретении область Fc включает не только природную последовательность, полученную посредством папаинового расщепления иммуноглобулина, но также ее производное (т.е. последовательности, в которых один или более чем один аминокислотный остаток в природной последовательности модифицирован посредством делеции, вставки, неконсервативной или консервативной замены или их комбинации) и, таким образом, отличается от последовательности природной формы.
F может иметь структуру, в которой две полипептидные цепи связаны дисульфидной связью, или структуру, в которой две полипептидные цепи связаны через атом азота только в одной из этих двух цепей, но структура F не ограничивается этим. Связь через атом азота может быть осуществлена с эпсилон-атомом амино или N-концевой аминогруппой лизина посредством восстановительного аминирования.
Реакция восстановительного аминирования относится к реакции, в которой аминная группа или аминогруппа реагента взаимодействует с альдегидом другого реагента (т.е. с функциональной группой, способной к восстановительному аминированию) с получением амина, и затем образуется аминная связь посредством восстановительного аминирования. Реакция восстановительного аминирования представляет собой реакцию органического синтеза, широко известную в данной области техники.
В одном из воплощений F может представлять собой структуру, которая связана через атом азота N-конца пролина, но F не ограничивается этим.
Область Fc иммуноглобулина представляет собой структуру, состоящую из группировки конъюгата формулы 1 в соответствии с настоящим изобретением, и, в частности, может соответствовать F в формуле 1 выше.
Такая область Fc иммуноглобулина может включать шарнирную область в константной области тяжелой цепи, но не ограничивается этим.
В настоящем изобретении область Fc иммуноглобулина может включать конкретную шарнирную последовательность на N-конце.
Использованный здесь термин "шарнирная последовательность" относится к области, которая расположена в тяжелой цепи и образует димер областей Fc иммуноглобулинов через межмолекулярную дисульфидную связь.
В настоящем изобретении шарнирная последовательность может представлять собой модифицированную последовательность, в которой часть шарнирной последовательности, имеющей следующую аминокислотную последовательность, подвергнута делеции, и, таким образом, в данной последовательности имеется только один остаток цистеина, но шарнирная последовательность не ограничивается этим:
Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 119).
Шарнирная последовательность может представлять собой последовательность, в которой 8-й или 11-й остаток цистеина в шарнирной последовательности SEQ ID NO: 119 делетирован, и, таким образом, в данную последовательность включен только один остаток цистеина. Шарнирная последовательность в соответствии с настоящим изобретением может состоять из 3-12 аминокислот, включающих только один остаток цистеина, но шарнирная последовательность не ограничивается этим. Более конкретно, шарнирная последовательность в соответствии с настоящим изобретением может иметь следующие последовательности:
Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 120), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Pro (SEQ ID NO: 121), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser (SEQ ID NO: 122), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro (SEQ ID NO: 123), Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser (SEQ ID NO: 124), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys (SEQ ID NO: 125), Glu-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys (SEQ ID NO: 126), Glu-Ser-Pro-Ser-Cys Pro (SEQ ID NO: 127), Glu-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 128), Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 129), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 130), Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 131), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 132), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys (SEQ ID NO: 133), Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro (SEQ ID NO: 134), Glu-Ser-Lys-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 135), Glu-Ser-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 136), Glu-Pro-Ser-Cys (SEQ ID NO: 137), Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 138).
Более конкретно, шарнирная последовательность может представлять собой последовательность, которая включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 129 (Pro-Ser-Cys-Pro) или SEQ ID NO: 138 (Ser-Cys-Pro), но данная шарнирная последовательность не ограничивается этим.
Область Fc иммуноглобулина в соответствии с настоящим изобретением может находиться в форме, в которой две молекулы Fc-цепи иммуноглобулина образуют димер из-за присутствия шарнирной последовательности, и, кроме того, конъюгат формулы 1 в соответствии с настоящим изобретением может находиться в форме, в которой один конец линкера связан с одной цепью димерных областей Fc иммуноглобулина, но область Fc иммуноглобулина и конъюгат формулы 1 не ограничены этим.
Использованный здесь термин "N-конец" относится к амино-концу белка или полипептида, и он может включать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более аминокислот из самого терминального конца амино-конца или терминального конца. Область Fc иммуноглобулина в соответствии с настоящим изобретением может включать шарнирную последовательность по N-концу, но область Fc иммуноглобулина не ограничивается этим.
Кроме того, область Fc иммуноглобулина в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой удлиненную область Fc, которая включает всю или часть константной области 1 тяжелой цепи (СН1) и/или константной области 1 легкой цепи (CL1), исключая вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулина, при условии что он обладает по существу таким же или улучшенным эффектом по сравнению с его природным типом. Кроме того, область Fc иммуноглобулина в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой область, в которой удалены некоторые довольно длинные аминокислотные последовательности, соответствующие СН2 и/или CH3.
Например, Fc-фрагмент иммуноглобулина в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой 1) домен СН1, домен СН2, домен СН3 и домен СН4; 2) домен СН1 и домен СН2; 3) домен СН1 и домен СН3; 4) домен СН2 и домен СН3; 5) комбинацию одного или двух, или более доменов из домена СН1, домена СН2, домена СН3 и домена СН4, и шарнирной области иммуноглобулина (или части шарнирной области); и 6) димер каждого домена константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи, но данная область Fc иммуноглобулина не ограничивается этим.
Кроме того, в одном из воплощений конъюгата длительного действия в соответствии с настоящим изобретением область Fc иммуноглобулина F представляет собой димер, состоящей из двух полипептидных цепей, в частности, димеры области Fc F и X ковалентно связаны через один и тот же линкер L, содержащий повторяющееся звено этиленгликоля. В одном из конкретных воплощений X ковалентно связан только с одной из двух полипептидных цепей димера области Fc F через линкер L. В более конкретном примере только одна молекула X ковалентно связана через L с одной из двух полипептидных цепей димера области Fc F, с которой связана X. В наиболее конкретном примере F представляет собой гомодимер.
В другом воплощении конъюгата длительного действия согласно настоящему изобретению также возможно, что две молекулы X симметрично связаны с одной областью Fc в димерной форме. В частности, Fc иммуноглобулина и X могут быть связаны друг с другом посредством непептидного линкера, но связь между областью Fc иммуноглобулина и X не ограничена воплощениями, описанными выше.
Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина в соответствии с настоящим изобретением включает природные аминокислотные последовательности, а также их производные последовательности. Производное аминокислотной последовательности означает, что данная последовательность аминокислот отличается от его природной аминокислотной последовательности в виду делеции, добавления, неконсервативной или консервативной замены, или их комбинации в одном или более чем одном аминокислотном остатке в последовательности природных аминокислот.
Например, в качестве подходящих для модификации сайтов можно использовать аминокислотные остатки по положениям 214-238, 297-299, 318-322 или 327-331 в Fc IgG, которые, как известно, являются важными для связывания.
Кроме того, возможны разные типы производных, например, производное, где удален сайт, способный образовывать межмолекулярную дисульфидную связь; производное, где удалены несколько N-концевых аминокислот из природного Fc; производное, где остаток метионина добавлен по N-концу природного Fc и т.д. Кроме того, могут быть удалены сайты связывания комплемента (например сайты связывания Clq) или сайты антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) для устранения эффекторной функции. Технологии получения производных последовательности этих областей Fc иммуноглобулина раскрыты в публикациях международных заявок WO 97/34631, WO 96/32478 и т.д.
Аминокислотные замены в белке или пептиде, которые не изменяют всю активность молекулы, хорошо известны в данной области техники (Н. Neurath, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). Наиболее распространенные замены происходят между аминокислотными остатками Ala/Ser, Val/De, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu и Asp/Gly. В некоторых случаях аминокислоты могут быть модифицированы путем фосфорилирования, сульфатирования, акрилирования, гликозилирования, метилирования, фарнезилирования, ацетилирования, амидирования и т.д.
Производные Fc, описанные выше, могут представлять собой производные, которые демонстрируют такую же биологическую активность, что и область Fc в соответствии с настоящим изобретением, и обладают повышенной структурной стабильностью области Fc в отношении нагревания, рН и т.д.
Кроме того, такая область Fc может быть получена из природного типа, выделенного у человека и животных (например коров, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс, морских свинок и т.д.) или может представлять собой рекомбинанты или их производные, полученные из трансформированных животных клеток или микроорганизмов. В частности, область Fc может быть получена из природного иммуноглобулина путем выделения полноразмерного иммуноглобулина из живого организма человека или животного и обработки выделенного иммуноглобулина протеазой. При обработке полноразмерного иммуноглобулина папаином, он расщепляется на области Fab и Fc, тогда как при обработке пепсином он расщепляется на фрагменты pF'c и F(ab)2. Fc или pF'c могут быть выделены с использованием эксклюзионной хроматографии и т.д. В более конкретном воплощении область Fc может представлять собой область Fc рекомбинантного иммуноглобулина, где область Fc человеческого происхождения получена из микроорганизма.
Кроме того, область Fc иммуноглобулина может находиться в форме природных гликанов, с повышенным или пониженным содержанием гликанов по сравнению с его природным типом, или в дегликозилированной форме. Увеличение, снижение уровня или удаление гликанов Fc иммуноглобулина может быть достигнуто общепринятыми способами, такими как химический способ, ферментативный способ и способ генной инженерии с использованием микроорганизма. В частности, область Fc иммуноглобулина, где из Fc удалены гликаны, демонстрирует значительное уменьшение аффинности связывания в отношении комплемента (Clq) и уменьшение или устранение антителозависимой цитотоксичности или комплементзависимой цитотоксичности, и, таким образом, она не вызывает ненужные иммунные ответы in vivo. В этом отношении область Fc иммуноглобулина в дегликозилированной или агликозилированной форме может быть более подходящей для того, чтобы удовлетворять исходной задачи настоящего изобретения в качестве носителя лекарственного средства.
Используемый здесь термин "дегликозилирование" относится к удалению гликанов из области Fc при помощи фермента, и термин "агликозилирование" относится к негликозилированной области Fc, продуцируемой у прокариот, более конкретно, в Е. coli.
При этом Fc-фрагмент иммуноглобулина может происходить от человека или животных (например коров, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс, морских свинок и т.д.), и, в более конкретном воплощении, он может происходить от человека.
Кроме того, область Fc иммуноглобулина может происходить из IgG, IgA, IgD, IgE, IgM или их комбинации или гибрида. В более конкретном воплощении область Fc иммуноглобулина может происходить из IgG или IgM, которые являются одними из самых многочисленных белков в человеческой крови, и в еще более конкретном воплощении он может происходить из IgG, который, как известно, увеличивает периоды полувыведения лиганд-связывающих белков. В еще более конкретном воплощении область Fc иммуноглобулина может представлять собой область Fc IgG4, и в наиболее конкретном воплощении она может представлять собой агликозилированную область Fc, происходящую из человеческого IgG4, но область Fc иммуноглобулина не ограничивается этим.
Кроме того, в конкретном воплощении Fc-фрагмент иммуноглобулина, представляющий собой Fc-фрагмент человеческого IgG4, может находиться в форме гомодимера, в котором два мономера связаны посредством внутренней дисульфидной связи (межцепочечная форма) между цистеинами, которые представляют собой 3-ю аминокислоту каждого мономера. В частности, каждый мономер гомодимера независимо имеет/или может иметь внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами по положениям 35 и 95; и внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами по положениям 141 и 199 (т.е. две внутренние дисульфидные связи (межцепочечная форма)). В отношении количества аминокислот каждый мономер может состоять из 221 аминокислоты, и аминокислоты, образующие гомодимер, могут состоять в общей сложности из 442 аминокислот, но количество аминокислот не ограничено этим. В частности, Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой фрагмент, в котором два мономера, имеющие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139 (состоящую из 221 аминокислоты), образуют гомодимер посредством внутренней дисульфидной связи между цистеинами, которые представляют собой 3-ю аминокислоту каждого мономера, и в котором мономеры гомодимера независимо образуют внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами по положениям 35 и 95, и внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами по положениям 141 и 199, но Fc-фрагмент иммуноглобулина не ограничивается этим.
Тем не менее используемый здесь термин "комбинация" означает, что полипептиды, кодирующие одноцепочечные области Fc иммуноглобулина одного и того же происхождения, связаны с одноцепочечным полипептидом другого происхождения с образованием димера или мультимера. То есть, можно получить димер или мультимер из двух или более чем двух фрагментов, выбранных из группы, состоящей из Fc-фрагментов IgG Fc, IgA Fc, IgM Fc, IgD Fc и IgE Fc.
Использованный здесь термин "гибрид" означает то, что последовательности, соответствующие двум или более чем двум Fc-фрагментам иммуноглобулина различного происхождения, представлены в одной цепи константной области иммуноглобулина. В настоящем изобретении возможны различные гибридные формы. Например, гибридный домен может состоять из доменов в количестве от одного до четырех, выбранных из группы, состоящей из CHI, СН2, СН3 и СН4 IgG Fc, IgM Fc, IgA Fc, IgE Fc и IgD Fc, и также может включать шарнирную область.
Тем не менее, IgG также можно разделить на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и настоящее изобретение может включать их комбинации или гибриды. Предпочтительными являются подклассы IgG2 и IgG4, и наиболее предпочтительным является Fc-фрагмент IgG4, который редко обладает эффекторными функциями, такими как комплементзависимая цитотоксичность (CDC).
Кроме того, вышеописанный конъюгат может обладать увеличенной продолжительностью эффективности по сравнению с природным GLP-1, GIP или глюкагоном, или X, который не модифицирован F, и такой конъюгат включает не только вышеописанные формы, но также все формы, инкапсулированные в биоразрушаемые наночастицы, но не ограничиваясь этим.
Композиция, содержащая пептид (например, пептид как таковой или в форме конъюгата длительного действия, в которой биосовместимое вещество связано с пептидом), может быть использована для предупреждения или лечения заболевания легкого.
Использованный здесь термин "предупреждение" относится ко всем действиям, которые подавляют или замедляют возникновение заболевания легкого путем введения вышеописанного пептида (например, пептида самого по себе или в форме конъюгата длительного действия, в которой биосовместимое вещество связано с пептидом) или композиции, содержащей пептид, и термин "лечение" относится ко всем действиям, которые облегчают или благоприятно изменяют симптомы заболевания легкого путем введения вышеописанного пептида (например, пептида самого по себе или в форме конъюгата длительного действия, в который биосовместимое вещество связано с пептидом) или композиции, содержащей пептид.
Использованный здесь термин "введение" относится к введению конкретного вещества пациенту любым подходящим способом, и путь введения композиции не ограничен конкретным образом, но может представлять собой любой обычный путь, который обеспечивает доставку композиции к мишени в организме (например, внутрибрюшинное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, внутрикожное введение, пероральное введение, местное введение, интраназальное введение, внутрилегочное введение, ректальное введение и т.д.).
Применение тройного агониста, обладающего активностями в отношении всех из рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP, или его конъюгата длительного действия значительно увеличивает период выведения из системы кровообращения и продолжительность эффективности in vivo, таким образом, существует значительное преимущество, заключающееся в том, что уменьшается частота введения, улучшая качество жизни у хронических пациентов, которые страдают от ежесуточных инъекций, и, соответственно, весьма полезно для лечения заболевания легкого. Кроме того, тройной агонист или его конъюгат длительного действия обладают эффектами, предупреждающими заболевание легкого, такими как отсрочка возникновения периодов рецидивов симптомов заболевания легкого, и/или значительное уменьшение симптомов заболевания легкого, и, таким образом, весьма полезен для предупреждения и/или лечения заболевания легкого.
Использованный здесь термин "заболевание легкого" относится к любому заболеванию, при котором возникают нарушения в тканях или функциях легкого, и, в частности, тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением или его конъюгат длительного действия может подавлять воспаление и фиброзные реакции, и, таким образом, для задачи настоящего изобретения заболевание легкого может включать заболевание, сопровождающееся воспалением легкого и фиброзом, или заболевание, которое возникает вследствие фиброза, например, интерстициальное заболевание легкого (ILD), прогрессирующее фиброзирующее интерстициальное заболевание легкого (PF-ILD), идиопатические интерстициальные пневмонии (ПР), неспецифическую интерстициальную пневмонию (NSIP), легочный фиброз, фиброзирующие интерстициальные заболевания легкого (FILD), идиопатический легочный фиброз (IPF), альвеолит, пневмонию, эмфизему, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легкого, комбинированный легочный фиброз с эмфиземой (CPFE), астму или респираторное инфекционное заболевание и т.д., но не ограничивается этим.
Тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением ингибирует активность макрофагов, представляющий собой основной механизм воспаления легкого, и подавляет дифференцировку фибробластов в миофибробласты и эпителиально-мезенхимальный переход альвеолярных эпителиальных клеток, которые представляют собой основные механизмы легочного фиброза, таким образом, демонстрируя профилактическое или терапевтическое действие в отношении заболевания легкого, но не ограничивается этим.
В частности, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением после введения может (1) ингибировать активность макрофагов; и/или (2) уменьшать экспрессию IL-1p, IL-6, IL-12 или TNF-α, тем самым подавляя воспаление, но не ограничивается этим. Кроме того, без ограничения объема изобретения фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может обладать одним или более чем одним из следующих свойств после введения:
(1) подавляет дифференцировку миофибробластов;
(2) уменьшает экспрессию α-SMA, коллагена 1α1 или фибронектина;
(3) подавляет эпителиально-мезенхимальный переход (ЕМТ) альвеолярных эпителиальных клеток; и
(4) уменьшает экспрессию коллагена 1α1 или коллагена 1α3. Посредством этого фармацевтическая композиция может подавлять фиброз, но не ограничивается этим.
Макрофаги альвеол вовлечены в воспалительный ответ в легких, и нейтрофилы притягиваются провоспалительными цитокинами (IL-1, IL-6, TNF-α), секретируемыми макрофагами, и секретируются протеазы. В частности, секретируется эластаза, которая разрушает эластин, представляющий собой тип волокон, которые составляют легочную ткань и вовлечены в эластичность. Известно, что эластин, который представляет собой эластичную ткань альвеол, повреждается под действием эластазы, и, в конечном итоге, альвеолы также повреждаются, что приводит к фиброзу ткани. Хотя воспаление и фиброз в легких сами по себе представляют собой заболевания легкого, прогрессирование и более глубокое распространение воспаления и фиброза могут приводить к другим заболеваниям легкого, и, таким образом, подавление воспаления и фиброза требуется для предупреждения и лечения заболеваний легкого.
Свойства тройного агониста в соответствии с настоящим изобретением означают действия, подавляющие и облегчающие воспаление и фиброз легкого, что также свидетельствует о профилактическом или терапевтическом эффекте в отношении заболеваний легкого, сопровождающихся воспалением или фиброзом легкого.
Использованный здесь термин хроническое обструктивное заболевание легкого (COPD) относится к заболеванию, которое демонстрирует необратимое нарушение проходимости дыхательных путей, и, как известно, вызывает разрушение легочной паренхимы и фиброз легкого вследствие хронического воспаления и повреждения. Инфильтрация различных воспалительных клеток обнаруживается в дыхательных путях пациентов, страдающих хроническим обструктивным заболеванием легкого, и в частности, известно, что количество макрофагов увеличивается в зависимости от тяжести заболевания, свидетельствуя о том, что воспаление играет важную роль в патогенезе хронического обструктивного заболевания легкого. Когда вдыхают вредные вещества, тогда активируется врожденный иммунитет, и эпителиальные клетки секретируют множество воспалительных медиаторов, которые действуют таким образом, что активируют альвеолярные макрофаги и нейтрофилы, таким образом, контроль воспалительного ответа представляет собой важный фактор в лечении хронического обструктивного заболевания легкого. В общем, хроническое обструктивное заболевание легкого делят на два типа, а именно эмфизему и хронический бронхит, но известно, что эмфизема и хронический бронхит во многих случаях сосуществуют у конкретных пациентов.
Использованный здесь термин хронический бронхит относится к респираторному заболеванию, при котором хроническое воспаление возникает в бронхиолах, приводя к расширению и увеличению слизистых желез в дыхательных путях или повреждению структуры вследствие воспаления. В результате слизистый слой утолщается и движение ресничек уменьшается, что блокирует поток воздуха, таким образом, вызывая затруднение дыхания и т.д.
Использованный здесь термин эмфизема относится к заболеванию, при котором бронхиолы или легкие воспаляются вследствие различных причин, что приводит в результате к секреции протеаз, разрушению основного скелета альвеол, повреждению сосудистой структуры и утрате функции газообмена.
Использованный здесь термин альвеолит относится к заболеванию, при котором альвеолы, который отвечают за кислородный обмен, воспаляются. Когда макрофаги накапливаются в альвеолах из-за плесени, пыли, нефти, толуола, ацетона, химических веществ и т.д., и альвеолярная перегородка утолщается, это может привести к альвеолиту. По мере прогрессирования альвеолита альвеолы разрушаются и уплотняются из-за рубцов, вызывая затруднения дыхания.
Использованный здесь термин астма, в отличие от хронического обструктивного заболевания легкого, представляет собой воспалительное обструктивное заболевание дыхательных путей, которое вызывает затруднения дыхания, вызванные воспалением дыхательных путей, в то же время демонстрируя обратимое поражение. Известно, что дыхательные пути у пациентов, страдающих астмой, выделяют много цитокинов, таких как IL-4, IL-5, IL-13 и т.д., и обнаруживается значительная пролиферация и гипертрофия гладких мышц бронхов. Как и в случае с хроническим обструктивным заболеванием легкого, контроль над воспалительным ответом важен для лечения.
Использованный здесь термин пневмония относится к заболеванию, при котором воспаляется паренхиматозная ткань легкого или альвеолы. Она вызывается бактериальной инфекцией, вирусами, простейшими, грибками, химическими веществами и т.д. и представляет собой заболевание высокого риска, которое может сопровождаться различными осложнениями. Известно, что пневмония возникает тогда, когда иммунный механизм (как правило, альвеолярные макрофаги) органов дыхания против патогенов не функционирует надлежащим образом, или уровень патогенов превышает предел, который может быть защищен нормальным иммунным механизмом. Также известно, что у пациентов с хроническими заболеваниями легкого, такими как астма, хроническое обструктивное заболевание легкого, эмфизема, бронхоэктаз и т.д., чаще развивается пневмония. В настоящем изобретении воспаление легкого или пневмония может включать воспаление легкого или пневмонию, вызванные другими заболеваниями легкого или сопровождающиеся другими заболеваниями легкого.
Использованный здесь термин респираторное инфекционное заболевание относится к респираторному заболеванию, вызванному инфицированием патогенами (вирусами, бактериями, грибками и т.д.). Респираторное инфекционное заболевание может быть классифицировано в зависимости от патогенов, которые вызывают заболевание. Типичные причины респираторных инфекций включают респираторные вирусы, бактерии, микоплазму, грибки и т.д. Так как респираторное инфекционное заболевание, вызванное инфицированием патогенами, сопровождается воспалением, можно ожидать терапевтический эффект посредством облегчения воспаления.
Использованный здесь термин респираторное вирусное инфекционное заболевание относится к респираторному заболеванию, вызванному патогенными вирусными инфекциями, и оно может вызывать тяжелые инфекции нижних дыхательных путей с пневмонией и бронхитом от умеренных инфекций верхних дыхательных путей. Известно, что респираторные вирусные инфекции смертельны для пациентов со сниженной сердечно-дыхательной функцией. При заражении респираторным вирусом воспаляются дыхательные пути, включая легкие, и, если воспаление не подавить в течение длительного периода времени, это приводит к фиброзу, приводящему в результате к более серьезному заболеванию легкого. Поэтому важно лечить респираторные вирусные инфекции, подавляющие воспаление и фиброз.
Респираторные вирусы, которые вызывают респираторные вирусные инфекции, могут представлять собой аденовирус, вирус оспы, вирус простого герпеса, вирус парагриппа, риновирус, вирус ветряной оспы, вирус кори, респираторно-синцитиальный вирус, вирус Денге, ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), вирус гриппа, коронавирус, вирус, ассоцированный с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS-ассоциированный вирус), или коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV), но не ограничиваются этим.
Один из неограничивающих примеров коронавируса может представлять собой SAPvS-CoV-2, и инфицирование SARS-CoV-2 может вызывать коронавирусное заболевание-2019 (COVID-19).
Использованный здесь термин коронавирусное заболевание-2019 (COVID-19) относится к вирусному инфекционному заболеванию, вызванному коронавирусной инфекцией (2019-nCoV или SARS-CoV-2). Хотя явный источник инфекции и путь заражения еще не подтверждены, она привела к глобальной пандемии из-за быстрой передачи. Коронавирус, который представляет собой вирус, способный заражать человека и различных животных, представляет собой РНК-вирус с размером гена от 27 т.п.н. (тысяч пар нуклеотидов) до 32 т.п.н. и, как известно, в основном демонстрирует респираторные симптомы, такие как кашель с лихорадкой, затруднения дыхания, одышку, мокроту и т.д.
В частности, причина того, что коронавирусное заболевание-2019 сопровождает тяжелая пневмония, заключается в том, что коронавирус атакует бронхиальные ресничные эпителиальные клетки или альвеолярные эпителиальные клетки II типа (эпителиальные клетки в альвеолах 2 типа). Эти клетки имеют большое количество рецепторов ферментов, что обеспечивает хорошее прилипание коронавируса. Такие рецепторы, как "АСЕ2", "TMPRSS2" и т.д., повышают способность коронавируса проникать в клетки.
Чужеродные вещества или патогены, проникшие при дыхании, прилипают к слизистой оболочке реснитчатых эпителиальных клеток бронхов. Реснитчатые эпителиальные клетки, как предполагает название, имеют большое количество ресничек, которые выводят патогены, включающие коронавирус, прилипшие к слизистой оболочке, в направлении полости рта и носа. Тем не менее существует предел для выведения большого количества вирусов одновременно только за счет цилиарного движения реснитчатых эпителиальных клеток. Кроме того, курение, пыль, сухая погода, низкие температуры и т.д. снижают цилиарное движение, и также цилиарное движение снижается в сухую и холодную зиму, увеличивая инфекции вирусом гриппа, включая коронавирусное заболевание-19.
Как и другие вирусы, коронавирус захватывает ресурсы и систему клетки-хозяина, энергично размножается и выбрасывается из инфицированной клетки. В этот момент экспоненциально пролиферирующие вирусы выходят и быстро проникают в окружающие здоровые реснитчатые эпителиальные клетки и альвеолярные эпителиальные клетки II типа. Инфицированные клетки секретируют цитокины, которые вызывают сильное воспаление, и превращаются в воспалительные клетки.
Исходная функция альвеолярных эпителиальных клеток II типа заключается в том, чтобы секретировать поверхностно-активные вещества, чтобы поддерживать альвеолы и в то же время улучшать газообмен через альвеолярные эпителиальные клетки I типа. Альвеолярные эпителиальные клетки II типа, атакуемые коронавирусом, переходят в воспалительные клетки и утрачивают свою основную функцию, вызывая воспаление (пневмонию) в легких, и соответственно, возникают вторичные симптомы (лихорадка, кашель, затруднения дыхания и т.д.).
Тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением может подавлять воспалительный ответ путем ингибирования активности макрофагов и/или уменьшения уровня экспрессии провоспалительных цитокинов (IL-1β, IL-6, IL-12 или TNF-α) в легочной ткани. Таким образом, он может демонстрировать профилактическое или терапевтическое действие в отношении заболеваний легкого, вызванных воспалением или сопровождающихся им (например, альвеолит, пневмония, эмфизема, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легкого, астма или респираторное инфекционное заболевание).
Между тем, фиброз представляет собой заболевание, которое образует избыточные волокнистые соединительные ткани в органе или ткани. Фиброз относится к состоянию, при котором нормальный контроль невозможен в процессе заживления ран после повреждения тканей в организме человека воспалительной реакцией, вызванной различными факторами (инфекция, химическая стимуляция, излучение и т.д.). В частности, в легких, когда возникает воспаление легких и сохраняется в течение длительного времени без лечения, ткань не регенерирует, что приводит к утолщенному фиброзу, приводя во многих случаях к серьезному заболеванию легкого. Соответственно, поскольку необходимо подавлять воспаление при лечении фиброза для предотвращения его прогрессирования, в качестве терапевтических средств используют иммуносупрессоры (например, стероиды, цитоксан) и т.д. В настоящем изобретении фиброз может быть использован взаимозаменяемо с фиброзом.
Использованный здесь термин легочный фиброз относится к состоянию, при котором происходит пролиферация волокнистой соединительной ткани в легких, вызывающая деструкцию нормальной структуры легких и уплотнение и разрушение легочных тканей. Существуют паренхиматозные, интерстициальные и смешанные типы, но интерстициальный легочный фиброз является особенно проблематичным, при котором происходит пролиферация фиброзной соединительной ткани вокруг альвеолярной стенки и бронхиол. В общем известно, что трансформирующий фактор роста-р (TGF-β) продуцируется различными клетками, такими как альвеолярные макрофаги, активированные альвеолярные эпителиальные клетки, фибробласты и миофибробласты, индуцируется быстрая пролиферация фибробластов и миграция макрофагов и фибробластов, и стимулируется экспрессия провоспалительных и фиброзных цитокинов, таких как TNF-α, PDGF (фактор роста тромбоцитов), IL-1β и IL-13 стимулируется, дополнительно увеличивая ответ в виде фиброза (Proc Am Thorac Soc, 9(3): 111-116 (2012)). Легочный фиброз в соответствии с настоящим изобретением может включать, без ограничения, легочный фиброз, вызванный или сопровождающийся другими заболеваниями легкого.
Использованный здесь термин комбинированный легочный фиброз с эмфиземой (CPFE) представляет собой типичное заболевание, при котором фиброз сосуществует с эмфиземой.
Использованный здесь термин интерстициальное заболевание легкого (ILD) также известен как диффузное паренхиматозное заболевание легкого (DPLD) и представляет собой общий термин для заболеваний, проявляющих аномальное отложение коллагена, сопровождаемое быстрым увеличением легочного межклеточного компартмента, инфильтрацией провоспалительных клеток и фиброзом. Интерстициальное заболевание легкого классифицируют на профессиональное, связанное с окружающей средой, антропогенное, связанное с соединительной тканью или идиопатическое, в зависимости от его причины.
Использованный здесь термин прогрессирующее фиброзирующее интерстициальное заболевание легкого (PF-ILD) относится к хроническому фиброзирующему интерстициальному заболеванию легкого, демонстрирующему прогрессирующий фенотип, и может включать аутоиммунное интерстициальное заболевание легкого, системное интерстициальное заболевание легкого, ассоциированное со склерозом, интерстициальное заболевание легкого, ассоциированное со смешанным заболеванием соединительной ткани, неспецифическую идиопатическую интерстициальную пневмонию, неклассифицированную идиопатическую интерстициальную пневмонию и т.д., но не ограничивается этим.
Среди интерстициальных заболеваний легкого идиопатическая интерстициальная пневмония (IIP), причина которой не известна, относится к заболеваниям легкого, классифицируемым в соответствии с гистологическими типами, которые проникают в интерстициальную ткань легкого, и типичные их примеры включают неспецифическую интерстициальную пневмонию (NSIP) и идиопатический легочный фиброз (IPF).
Использованный здесь термин идиопатический легочный фиброз (IPF) является наиболее распространенным заболеванием среди идиопатической интерстициальной пневмонии, и его определяют как легочный фиброз, для которого точная причина неизвестна. Известно, что, после того как альвеолярные эпителиальные клетки повреждаются повторяющимися воспалительными реакциями вследствие различных воздействий, образуется фиброз, поскольку раны как правило не лечатся, и легочный фиброз прогрессирует вследствие сложного взаимодействия между генетической предрасположенностью, факторами окружающей среды и инфицированием легких. В частности, пролиферация фибробластов/миофиброблатов в легких вследствие различных факторов, секретируемых поврежденными альвеолярными эпителиальными клетками и инфильтрующимися воспалительными клетками, вызванная этим секреция и накопление коллагена, а также чрезмерное отложение внеклеточного матрикса (ЕСМ) представляют собой патогенетические механизмы данного заболевания.
Поскольку тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением демонстрирует одно или более чем одно свойство: (1) подавления дифференцировки миофибробластов; (2) уменьшения экспрессии α-SMA, коллагена 1α1 или фибронектина; (3) подавления эпителиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) альвеолярных эпителиальных клеток; и (4) уменьшения экспрессии коллагена 1α1 или коллагена 1α3, он может подавлять и облегчать фиброз и может демонстрировать профилактический или терапевтический эффект в отношении заболеваний легкого, вызванных или сопровождающихся фиброзом (например, интерстициального заболевания легкого, прогрессирующего фиброзирующего интерстициального заболевания легкого, идиопатической интерстициальной пневмонии, неспецифической интерстициальной пневмонии, легочного фиброза, интерстициального легочного фиброза, идиопатического легочного фиброза, комбинированного легочного фиброза с эмфиземой).
Тем не менее не только тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением может демонстрировать терапевтическое действие в отношении коронавирусного заболевания-19, известно, что остаточные симптомы легочного фиброза остаются даже после излечения коронавирусного заболевания-19, и тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением демонстрирует действие, заключающееся в облегчении легочного фиброза, и, таким образом, тройной агонист может демонстрировать эффективность в отношении воспаления легкого и/или легочного фиброза, вызванного коронавирусом-19.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть дополнительно введена с муколитическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью, но не ограничивается этим. Для задач настоящего изобретения фармацевтическая композиция предназначена для совместного введения тройного агониста и муколитического агента, и тройной агонист и муколитический агент могут быть введены одновременно, последовательно или в обратном порядке, но не ограничивается этим.
В настоящем изобретении, когда используют термин "совместное введение", понятно, что компоненты вводят одновременно, индивидуально или последовательно. Когда введение осуществляют последовательно или индивидуально, интервал введения второго компонента должен быть установлен таким образом, чтобы благоприятные эффекты совместного введения не утрачивались. Совместное введение тройного агониста и муколитического агента может быть осуществлено следующим образом, но не ограничивается этим:
а) (1) тройной агонист или его конъюгат и (2) муколитический агент или его фармацевтически приемлемую соль вводят в виде смеси; или
б) (1) тройной агонист или его конъюгат и (2) муколитический агент или его фармацевтически приемлемую соль вводят в индивидуальной форме.
Когда тройной агонист и муколитический агент или его фармацевтически приемлемая соль находятся в индивидуальной форме, тройной агонист и муколитический агент или его фармацевтически приемлемая его соль могут быть приготовлены в виде отдельных препаратов и введены одновременно, индивидуально, последовательно или в обратном порядке.
В настоящем изобретении совместное введение не просто относится к одновременному введению, а может пониматься как введение в лекарственной форме, где тройной агонист и муколитический агент или его фармацевтически приемлемая соль могут действовать вместе на индивида таким образом, что каждое вещество может осуществлять функции на уровне, идентичном или выше чем их функции в природе.
В конкретном примере тройной агонист и муколитический агент или его фармацевтически приемлемая соль могут быть смешаны и совместно введены в виде одной композиции; альтернативно, тройной агонист и муколитический агент или его фармацевтически приемлемая соль могут быть приготовлены индивидуально и совместно введены одновременно, последовательно или в обратном порядке, но введение не ограничивается этим. При индивидуальном приготовлении и совместном введении каждая композиция может быть введена различными путями, но не ограничивается этим. В дополнение, но без ограничения, тройной агонист и муколитический агент или его фармацевтически приемлемая соль могут быть приготовлены индивидуально и включены в один набор. Фармацевтически приемлемая соль муколитического агента может включать соль, полученную из фармацевтически приемлемых неорганических кислот, органических кислот или оснований. Примеры подходящих кислот могут включать соляную кислоту, бромистую кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, ортофосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, толуол-иара-сульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту и т.п. Соли, полученные из подходящих оснований, могут включать соли щелочных металлов (например натрия, калия и т.д.); щелочноземельных металлов (например магния); аммония и т.д.
Использованный здесь термин "муколитический агент" относится к лекарственному средству, способствующему секреции, разжижению или удалению мокроты флегмы или слизи из дыхательных путей, в частности, лекарственному средству, которое действует для расщепления слизи в легких для разбавления исключительно секретов дыхательных путей. В настоящем изобретении муколитический агент можно использовать взаимозаменяемо с отхаркивающим средством.
Конкретные примеры муколитического агента в соответствии с настоящим изобретением могут включать любые один или более выбранных из группы, состоящей из амброксола, N-ацетилцистеина, N-ацетилина, карбоцистеина, домиодола, фудостеина, бромгексина, эрдостеина, летостина, лизоцима, месна, собрерола, степронина, тиопронина, тилоксапола, карбоцистеина, дорназы альфа, эпразинона, летостеина, нелтенексина и мецистеина, но муколитический агент не ограничивается этим.
Тем не менее, совместное введение тройного агониста и муколитического агента может демонстрировать терапевтическое действие в отношении респираторных инфекционных заболеваний (например коронавирусного заболевания-19). Поскольку тройной агонист в соответствии с настоящим изобретением демонстрирует действие, облегчающее воспаление легких и легочный фиброз, совместное введение тройного агониста и муколитического агента может демонстрировать эффективность в отношении респираторных инфекционных заболеваний (например коронавирусного заболевания-19 (COVID-19)), или вызванных им воспаления легкого и легочного фиброза.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель может представлять собой такой, который не встречается в природе.
Использованный здесь термин "фармацевтически приемлемый" относится к способности обеспечить достаточное количество для проявления терапевтического эффекта, не вызывая побочные действия, и может быть легко определено специалистами в данной области техники на основе хорошо известных в области медицины факторов, таких как вид заболевания, возраст, масса тела, состояние здоровья, пол, чувствительность пациента к лекарственным средствам, путь введения, способ введения, частота введения, продолжительность лечения, лекарственное(ые) средство(а), подлежащее(ие) смешиванию или одновременному введению и т.д.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением, содержащая пептид, может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый эксципиент. Фармацевтически приемлемый эксципиент может включать, без ограничения, для перорального введения: связывающее вещество, смазывающее вещество, разрыхлитель, солюбилизатор, диспергирующее вещество, стабилизатор, суспендирующий агент, краситель, корригент и т.д.; для инъекций: буферный агент, консервант, обезболивающий агент, солюбилизатор, изотонический агент, стабилизатор и т.д., которые могут быть использованы в комбинации; и для местного введения: основу, эксципиент, смазывающее вещество, консервант и т.д.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена в виде различных лекарственных форм путем объединения с фармацевтически приемлемым эксципиентом, описанным выше. Например, для перорального введения композиция может быть представлена в форме таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.д., и для инъекций композиция может быть приготовлена в виде однодозовых ампул или в виде мультидозовых форм. Композиция также может быть приготовлена в виде растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, композиций длительного высвобождения и т.д.
Тем не менее, примеры подходящих носителей, эксципиентов и разбавителей для композиций могут включать лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральные масла и т.д. Кроме того, композиция может дополнительно содержать наполнитель, антикоагулянт, смазывающее вещество, смачивающий агент, ароматизатор, консервант и т.д.
Кроме того, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена в виде композиции любого типа, выбранной из группы, состоящей из таблеток, пилюль, порошков, гранул, капсул, суспензий, жидких лекарственных форм для приема внутрь, эмульсий, сиропов, стерильных водных растворов, неводных растворов, лиофилизированных композиций и суппозиториев.
Кроме того, композиция может быть приготовлена в виде препарата стандартной лекарственной формы, подходящей для введения в организм пациента, и может конкретно быть приготовлена в виде препарата, подходящего для белковых лекарств, в соответствии с обычным способом в области фармацевтики для введения пероральным или парентеральным путем, включая введение через кожу, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, интрамедуллярный, интратекальный, интравентрикулярный, внутрилегочный, чрескожный, подкожный, внутрибрюшинный, интраназальный, внутрижелудочный, местный, подъязычный, вагинальный или ректальный путь, с использованием способа введения, обычно используемого в данной области техники, но пути введения не ограничиваются ими.
Кроме того, конъюгат можно использовать путем смешивания с различными фармацевтически приемлемыми носителями, такими как физиологический раствор или органические растворители. Для увеличения стабильности или абсорбируемости в качестве фармацевтических лекарственных средств можно использовать углеводы (например глюкозу, сахарозу или декстран), антиоксиданты (например аскорбиновую кислоту или глутатион), хелатообразующие агенты, низкомолекулярные белки или другие стабилизаторы.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения заболевания легкого, включающий введение композиции, содержащей пептид, включающий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 1-102, или его конъюгат длительного действия в фармацевтически эффективном количестве.
Доза и частота введения фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением определяют в зависимости от типа лекарственных средств (т.е. активных ингредиентов) вместе с различными имеющими значение факторами, такими как заболевание, которое лечат, путь введения, возраст пациента, пол и масса тела, тяжесть заболевания и т.д. В частности, композиция в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой композицию, которая содержит тройной агонист или конъюгат длительного действия, содержащий его в фармацевтически эффективном количестве, но композиция не ограничивается этим.
Фраза "содержащая пептид или его конъюгат длительного действия в фармацевтически эффективном количестве" относится к уровню, при котором желаемая фармакологическая активность (например, предупреждение, облегчение или лечение заболевания легкого) может достигаться при помощи тройного агониста или его конъюгата длительного действия, и, кроме того, может относиться к фармацевтически приемлемому уровню, который представляет собой уровень, при котором токсичности или неблагоприятные эффекты не возникают или возникают на незначимом уровне у субъекта, которому их вводят, но уровень не ограничивается этим. Фармацевтически эффективное количество как таковое может быть определено путем всестороннего рассмотрения количества введений, пациента, композиций и т.д.
Не ограничиваясь конкретным образом, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может содержать компоненты (активные ингредиенты) в количестве от 0,01% до 99% масс./об.
Общее эффективное количество композиции в соответствии с настоящим изобретением может быть введено пациенту в виде единой дозы или может быть введено в течение длительного периода времени в виде множества доз в соответствии с протоколом фракционированного лечения. В фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением содержание активных ингредиентов может варьировать в зависимости от тяжести заболевания. В частности, общая суточная доза тройного агониста в соответствии с настоящим изобретением или его конъюгата длительного действия может составлять от приблизительно 0,0001 мг до 500 мг на 1 кг массы тела пациента. Тем не менее, эффективную дозу тройного агониста или его конъюгата определяют в зависимости от различных факторов, включая возраст пациента, массу тела, состояние здоровья, пол, тяжесть заболевания, диету и скорость выведения, а также путь введения и частоту введения фармацевтической композиции. В этой связи специалист в данной области техники может легко определить эффективную дозу, подходящую для конкретного применения композиции в соответствии с настоящим изобретением. Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением не ограничена конкретно типом композиции и путем и способом введения, до тех пор пока она демонстрирует эффекты в соответствии с настоящим изобретением.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением обладает превосходной продолжительностью эффективности и титром in vivo, и, таким образом, количество доз и частота введения фармацевтического препарата в соответствии с настоящим изобретением могут быть значительно уменьшены.
В еще одном аспекте реализации настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения заболевания легкого, включающий введение тройного агониста (пептида) и/или конъюгата тройного агониста длительного действия или содержащей их композиции субъекту, нуждающемуся в этом.
Тройной агонист и/или конъюгат тройного агониста длительного действия или содержащая их композиция, заболевание легкого, предупреждение и лечение являются такими, как описано выше.
В настоящем изобретении субъект относится к субъекту, у которого подозревают заболевание легкого, и субъект, у которого подозревают заболевание легкого, относится к млекопитающим, включающим людей, крыс, крупный рогатый скот и т.д., у которых имеется риск развития заболевания легкого, но любой субъект, которого можно лечить тройным агонистом и/или конъюгатом в соответствии с настоящим изобретением, или содержащей их композицией, включен без ограничения. В частности, субъект может представлять собой субъекта, страдающего воспалением и/или фиброзом легкого, или может представлять собой субъекта, имеющего заболевание легкого, вызванное или сопровождающееся воспалением и/или фиброзом, но не ограничивается этим.
Использованный здесь термин "введение" относится к введению конкретного вещества субъекту любым подходящим способом, и путь введения композиции не ограничен конкретным образом, а может представлять собой любой обычный путь, который обеспечивает доставку композиции к мишени в организме (например, внутрибрюшинное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, внутрикожное введение, пероральное введение, местное введение, интраназальное введение, внутрилегочное введение, ректальное введение и т.д).
Способ в соответствии с настоящим изобретением может включать введение фармацевтической композиции, содержащей тройной агонист или его конъюгат длительного действия, в фармацевтически эффективном количестве. Подходящая общая суточная доза фармацевтической композиции может быть определена в объеме надлежащего клинического мышления практическим врачом, и фармацевтическая композиция может быть введена один или несколько раз в виде дробных доз. Тем не менее, для задачи настоящего изобретения предпочтительно, чтобы конкретная терапевтически эффективная доза фармацевтической композиции для любого конкретного пациента применялась дифференцированно в зависимости от вида и степени достигаемого ответа, конкретных композиций, включающих или нет другие агенты, которые возможно в ней используются, возраста пациента, массы тела, состояния здоровья, пола и диеты, времени введения, пути введения, скорости выведения композиции, длительности лечения, различных факторов, включающих лекарственные средства, используемые в комбинации или одновременно с конкретными композициями, и подобных факторов, хорошо известных в медицинской области.
Без ограничения, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть введена один раз в неделю, один раз в 2 недели или один раз в 4 недели.
Конкретные примеры способа предупреждения или лечения заболевания легкого в соответствии с настоящим изобретением могут включать способ совместного введения тройного агониста (пептида) и/или конъюгата тройного агониста длительного действия или содержащей их композиции и муколитического агента или его фармацевтически приемлемой соли одновременно, последовательно или в обратном порядке, но способ не ограничивается этим. Совместное введение является таким, как описано выше.
В еще одном аспекте реализации настоящего изобретения предложено применение композиции, содержащей тройной агонист или его конъюгат длительного действия, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения или лечения заболевания легкого.
Тройной агонист и/или конъюгат тройного агониста длительного действия или содержащая их композиция, заболевание легкого, предупреждение и лечение являются такими, как описано выше.
В еще одном аспекте реализации настоящего изобретения предложено применение тройного агониста или его конъюгата длительного действия или содержащей их композиции для предупреждения или лечения заболевания легкого.
Тройной агонист и/или конъюгат тройного агониста длительного действия или содержащая их композиция, заболевание легкого, предупреждение и лечение являются такими, как описано выше.
Применение для предупреждения или лечения заболевания легкого в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой применение для совместного введения тройного агониста (пептида) и/или конъюгата тройного агониста длительного действия или содержащей их композиции и муколитического агента или его фармацевтически приемлемой соли, но применение не ограничивается этим. Совместное введение является таким, как описано выше.
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры. Тем не менее эти примеры приведены исключительно для иллюстративных целей, и объем изобретения не ограничен этими примерами.
Пример 1: Получение тройных агонистов
Получали тройные агонисты, демонстрирующие активности в отношении всех из рецептора GLP-1, рецептора GIP и рецептора глюкагона, и их аминокислотные последовательности представлены в Таблице 1 ниже.
В последовательностях, описанных в Таблице 1, аминокислоты, указанные как X, представляют собой аминоизомасляную кислоту (Aib), которая представляет собой неприродную аминокислоту, а подчеркнутые аминокислоты представляют образование кольца между подчеркнутыми аминокислотами. Кроме того, в Таблице 1 СА представляет собой 4-имидазоацетил, a Y представляет собой тирозин.
Пример 2: Получение конъюгатов тройного агониста длительного действия
Для пэгилирования остатка цистеина тройных агонистов (SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 77 и 96) Примера 1 с использованием PEG (10 кДа), имеющего малеимидную группу и альдегидную группу по каждому концу, т.е. малеимид-PEG-альдегид (10 кДа, NOF, Япония), тройные агонисты и малеимид-PEG-альдегид подвергали взаимодействию в мольном соотношении 1:1-3 при концентрации белка от 1 мг/мл до 5 мг/мл при низкой температуре в течение 0,5-3 часов. В частности, данное взаимодействие проводили в среде, в которую добавляли от 20% до 60% изопропанола в 50 мМ Трис-буфере (рН 7,5). По завершении взаимодействия реакционные растворы наносили на SP сефарозу HP (GE Healthcare, США) для очистки тройных агонистов, которые были монопэгилированными по цистеину.
Затем очищенные монопэгилированные тройные агонисты и Fc иммуноглобулина (гомодимер в соответствии с SEQ ID NO: 139) подвергали взаимодействию в мольном соотношении 1:1-5 при концентрации белка от 10 мг/мл до 50 мг/мл при температуре от 4°С до 8°С в течение от 12 до 18 часов. Эту реакцию проводили в среде, в которую добавляли от 10 мМ до 50 мМ цианоборгидрида натрия (восстановитель) и от 10% до 30% изопропанола к 100 мМ калий-фосфатному буферу (рН 6,0). По завершении взаимодействия реакционные растворы наносили на колонку для очистки с бутилсефарозой FF (GE Healthcare, США) и колонку для очистки Source ISO (GE Healthcare, США) для очистки конъюгатов, включающих тройные агонисты и Fc иммуноглобулин. Полученный в результате очищенный конъюгат длительного действия имеет структуру, в которой пептид тройного агониста, полиэтиленгликолевый (PEG) линкер и димер Fc ковалентно связаны в мольном соотношении 1:1:1, и PEG линкер связан только с одной цепью из двух полипептидных цепей димера Fc.
При этом в Fc иммуноглобулина два мономера, имеющие аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 139 (состоящую из 221 аминокислоты), образуют гомодимер посредством дисульфидной связи между цистеинами, которые представляют собой третью аминокислоту каждого мономера, и в котором мономеры гомодимера независимо образуют внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами по положениям 35 и 95 и внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами по положениям 141 и 199.
После получения было показано, что чистота, проанализированная посредством хроматографии с обращенной фазой, эксклюзионной хроматографии и ионообменной хроматографии, составляет 95% или выше.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 21 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 21 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 21", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 22 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 22 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 22", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 42 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 42 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 42", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 43 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 43 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 43", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 50 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 50 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 50", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 77 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 77 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 77", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
В частности, конъюгат, в котором тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 96 и Fc иммуноглобулина связаны посредством линкера PEG, назван как "конъюгат, включающий тройной агонист в соответствии с SEQ ID NO: 96 и Fc иммуноглобулина" или "конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 96", и эти термины могут быть использованы в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
Экспериментальный Пример 1: Измерение активностей тройных агонистов и их конъюгатов длительного действия in vitro
Для измерения активностей тройных агонистов и их конъюгатов длительного действия, полученных в Примерах 1 и 2, использовали способ измерения in vitro клеточных активностей с использованием клеточных линий, каждая из которых трансформирована рецептором GLP-1, рецептором глюкагона (GCG) и рецептором GIP.
Каждая из приведенных выше линий клеток представляет собой линию клеток, в которой гены человеческого рецептора GLP-1, человеческого рецептора GCG и человеческого рецептора GIP трансформированы в клетки яичников китайского хомяка (СНО), соответственно, для экспрессии в них и, таким образом, она подходит для измерения активностей GLP-1, GCG и GIP. Соответственно, активность для каждой части измеряли с использованием соответствующей трансформированной линии клеток.
Для измерения активностей в отношении GLP-1 тройных агонистов и их конъюгатов длительного действия, полученных в Примерах 1 и 2, человеческий GLP-1 подвергали 4-кратному серийному разведению от 50 нМ до 0,000048 нМ, и тройные агонисты и их конъюгаты длительного действия, полученные в Примерах 1 и 2, подвергали 4-кратному серийному разведению от 400 нМ до 0,00038 нМ. Культуральный раствор удаляли из культивируемых клеток СНО, в которых экспрессировался человеческий рецептор GLP-1, и каждое из серийно разведенных веществ добавляли к клеткам СНО в количестве 5 мкл, соответственно, и добавляли туда буферный раствор, содержащий антитело против сАМР, в количестве 5 мкл и культивировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли к ним выявляющую смесь, содержащую буфер для лизиса клеток, в количестве 10 мкл для лизиса клеток, и осуществляли взаимодействие при комнатной температуре в течение 90 минут. После завершения реакции клеточные лизаты вносили в набор LANCE сАМР kit (PerkinElmer, США) для расчета значения ЕС50 (средней эффективной концентрации) по накоплению сАМР, и эти значения сравнивали друг с другом. Относительные титры по сравнению с человеческим GLP-1 представлены в Таблицах 2 и 3 ниже.
Для измерения активностей в отношении GCG тройных агонистов и их конъюгатов длительного действия, полученных в Примерах 1 и 2, человеческий GCG подвергали 4-кратному серийному разведению от 50 нМ до 0,000048 нМ, и тройные агонисты и их конъюгаты длительного действия, полученные в Примерах 1 и 2, подвергали 4-кратному серийному разведению от 400 нМ до 0,00038 нМ. Культуральный раствор удаляли из культивируемых клеток СНО, в которых экспрессировался человеческий рецептор GCG, и каждое из серийно разведенных веществ добавляли к клеткам СНО в количестве 5 мкл, соответственно, и добавляли туда буферный раствор, содержащий антитело против сАМР, в количестве 5 мкл и культивировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли к ним выявляющую смесь, содержащую буфер для лизиса клеток, в количестве 10 мкл для лизиса клеток, и осуществляли взаимодействие при комнатной температуре в течение 90 минут. После завершения реакции клеточные лизаты вносили в набор LANCE cAMP kit (PerkinElmer, США) для расчета значения ЕС50 по накоплению сАМР, и эти значения сравнивали друг с другом. Относительные титры по сравнению с человеческим GCG представлены в Таблицах 2 и 3 ниже.
Для измерения активностей в отношении GIP тройных агонистов и их конъюгатов длительного действия, полученных в Примерах 1 и 2, человеческий GIP подвергали 4-кратному серийному разведению от 50 нМ до 0,000048 нМ, и тройные агонисты и их конъюгаты длительного действия, полученные в Примерах 1 и 2, подвергали 4-кратному серийному разведению от 400 нМ до 0,00038 нМ. Культуральный раствор удаляли из культивируемых клеток СНО, в которых экспрессировался человеческий рецептор GIP, и каждое из серийно разведенных веществ добавляли к клеткам СНО в количестве 5 мкл, соответственно, и добавляли туда буферный раствор, содержащий антитело против сАМР, в количестве 5 мкл и культивировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли к ним выявляющую смесь, содержащую буфер для лизиса клеток, в количестве 10 мкл для лизиса клеток, и осуществляли взаимодействие при комнатной температуре в течение 90 минут. После завершения реакции клеточные лизаты вносили в набор LANCE сАМР kit (PerkinElmer, США) для расчета значения ЕС50 по накоплению сАМР, и эти значения сравнивали друг с другом. Относительные титры по сравнению с человеческим GIP представлены в Таблицах 2 и 3 ниже.
Новые конъюгаты тройных агонистов длительного действия, полученные выше, обладают функцией тройных агонистов, которые могут активировать все из рецепторов GLP-1, рецепторов GIP и рецепторов глюкагона, и, таким образом, эти конъюгаты тройных агонистов длительного действия можно использовать в качестве терапевтического средства для лечения заболевания легкого.
Экспериментальный Пример 2: Подтверждение облегчающего воспаление эффекта конъюгата тройного агониста длительного действия в легком
Проводили подтверждение того, демонстрируют ли конъюгаты тройного агониста длительного действия в соответствии с настоящим изобретением, полученные в вышеприведенных примерах, эффект облегчения воспаления в легком, с использованием мышей с введенной эластазой (ELA).
В частности, мышей C57BL/6 (ORIENT Bio, Busan, Korea), обработанных ELA в количестве 0,2 Ед/мышь, разделяли на контрольную группу, которой вводили эксципиент, группу, которой вводили конъюгат длительного действия в соответствии с SEQ ID NO: 42 (далее, конъюгат тройного агониста длительного действия; 6,5 нмоль/кг, Q2D, подкожно), и группу, которой вводили рофлумиласт, представляющий собой противовоспалительный агент и терапевтический агент для лечения COPD (10 мг/кг, QD, перорально), и повторное введение осуществляли в течение 3 недель. Затем степень изменения экспрессии провоспалительных цитокинов в легочной ткани в соответствии с введением эксципиента, конъюгата тройного агониста длительного действия и рофлумиласта подтверждали при помощи qPCR (количественной полимеразной цепной реакции). Статистической обработкой оценивали эффективность конъюгата тройного агониста длительного действия с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA (*-**р<0,05-0,01).
В результате, после повторного введения конъюгата тройного агониста длительного действия экспрессия IL-1β, IL-6, IL-12 и TNF-α в легочной ткани значительно уменьшалась и оставалась на уровне, равном или больше чем уровень в контрольной группе, которой вводили эксципиент, и в группе, которой вводили рофлумиласт (Фиг. 1).
На основе этих результатов подтверждено, что конъюгат тройного агониста длительного действия в соответствии с настоящим изобретением обладает эффектом подавления и облегчения воспаления в легком.
Экспериментальный Пример 3: Подтверждение терапевтического эффекта конъюгата тройного агониста длительного действия при эмфиземе и хроническом обструктивном заболевании легкого
Авторы настоящего изобретения предприняли попытки подтвердить, может ли конъюгат тройного агониста длительного действия демонстрировать терапевтический эффект in vivo при эмфиземе и хроническом обструктивном заболевании легкого (COPD), которые являются типичными заболеваниями легкого, вызванными воспалением легкого.
Для этого использовали животную модель, в которой вызывали хроническое обструктивное заболевание легкого путем повреждения легочной ткани посредством внутритрахеального введения эластазы. В частности, мышей C57BL/6 (ORIENT Bio, Busan, Korea), обработанных эластазой в количестве 0,2 Ед/мышь, разделяли на контрольную группу, которой вводили эксципиент, группу, которой вводили конъюгат тройного агониста длительного действия (6,5 нмоль/кг, Q2D, подкожно), и группу, которой вводили рофлумиласт (10 мг/кг, QD, перорально), и повторное введение осуществляли в течение 3 недель. После повторного введения в течение 3 недель легочную ткань каждой мыши отбирали путем аутопсии, и степень эмфиземы в легочной ткани оценивали посредством окрашивания Н&Е (гематоксилином и эозином).
В результате, когда конъюгат тройного агониста длительного действия вводили повторно, подтвердили превосходящую эффективность облегчения эмфиземы по сравнению с контрольной группой, которой вводили эксципиент, и группой, которой вводили рофлумиласт, который известен в качестве терапевтического агента при COPD (*-**р<0,05-0,01) (Фиг. 2).
На основе этих результатов подтверждено, что конъюгат тройного агониста длительного действия в соответствии с настоящим изобретением демонстрирует эффект облегчения воспаления и эмфиземы в легочной ткани и обладает превосходной терапевтической эффективностью в отношении хронического обструктивного заболевания легкого.
Экспериментальный Пример 4: Подтверждение эффекта конъюгата тройного агониста длительного действия в отношении облегчения легочного фиброза
Дополнительно к эффекту облегчения воспаления в легочной ткани, подтвержденному в вышеприведенных примерах, были предприняты попытки подтвердить, обладает ли конъюгат тройного агониста длительного действия в соответствии с настоящим изобретением также эффектом облегчения легочного фиброза. Соответственно, линию клеток MRC5, которая представляет собой фибробласты легкого, и линию клеток А549, которая представляет собой альвеолярные эпителиальные клетки, использовали для подтверждения действия в отношении дифференцировки легочных фибробластов в миофибробласты и эпителиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) альвеолярных эпителиальных клеток, которые, как известно, важны в процессе легочного фиброза.
Экспериментальный Пример 4-1: Подтверждение ингибирующего действия в отношении дифференцировки легочных фибробластов в миофибробласты
Сначала клетки MRC5, которые представляют собой легочные фибробласты, разделяли на группу, которую обрабатывали разбавителем, и группу, которую обрабатывали конъюгатом тройного агониста длительного действия, и одновременно обрабатывали TGF-pl для того, чтобы вызвать дифференцировку в миофибробласты. В качестве отрицательной контрольной группы использовали группу, которую не обрабатывали ни TGF-β1, ни конъюгатом тройного агониста длительного действия.
После 48-72 часов одновременной обработки уровни экспрессии α-SMA, коллагена 1α1 и фибронектина, которые представляют собой маркеры дифференцировки фибробластов, в каждой группе подтверждали посредством количественной PCR. Статистической обработкой оценивали эффективность конъюгата тройного агониста длительного действия с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA (*-**р<0,05-0,01).
В результате подтвердили, что при проведении обработки конъюгатом тройного агониста длительного действия вместе с TGF-β1 экспрессия описанных маркеров дифференцировки фибробластов уменьшалась по сравнению с группой, которую обрабатывали эксципиентом (Фиг. 3).
Экспериментальный Пример 4-2: Подтверждение ингибирующего действия в отношении эптелиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) альвеолярных эпителиальных клеток
Затем клетки А549 разделяли на группу, которую обрабатывали эксципиентом, и группу, которую обрабатывали конъюгатом тройного агониста длительного действия, и подвергали предварительной обработке и последующей обработке TGF-β1 и LPS (липополисахариды) последовательно для индуцирования ЕМТ. В качестве отрицательной контрольной группы использовали группу, которую не обрабатывали ни одним из конъюгата тройного агониста длительного действия, TGF-β1 и LPS.
Через 48 часов уровни экспрессии коллагена 1α1 и коллагена 3α1, которые представляют собой маркеры ЕМТ, в каждой группе подтверждали посредством количественной PCR. Статистической обработкой оценивали эффективность конъюгата тройного агониста длительного действия с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA (*-***р<0,05 0,01).
В результате подтвердили, что экспрессия маркеров ЕМТ в альвеолярных эпителиальных клетках значительно уменьшалась при предварительной обработке конъюгатом тройного агониста длительного действия по сравнению с группой обработки эксципиентом (Фиг. 4).
Экспериментальный Пример 4-3: Подтверждение действия in vivo в отношении облегчения фиброза
Для подтверждения эффективности in vivo конъюгата тройного агониста длительного действия, полученного в вышеприведенных примерах, в отношении облегчения легочного фиброза, в частности идиопатического легочного фиброза (IPF), который представляет собой типичный легочный фиброз, использовали мышей, обработанных блеомицином (BLM). Известно, что когда блеомицин вводят интратрахеально, возникает эпителиально-мезенхимальный переход за счет повреждения ДНК альвеолярных эпителиальных клеток, что вызывает идиопатический фиброз. Кроме того, известно, что когда дозу BLM при обработке увеличивают выше определенного уровня, тогда уровень выживаемости у мышей уменьшается вследствие тяжелого поражения легкого, вызванного идиопатическим фиброзом.
Соответственно, проводили подтверждение эффекта конъюгата тройного агониста длительного действия в отношении облегчения легочного фиброза у мышей, обработанных BLM, и, кроме того, подтверждение того, что уровень выживаемости может быть увеличен путем облегчения легочного фиброза.
Мышей IPF, полученных путем обработки мышей C57BL/6 (ORIENT Bio, Busan, Korea) BLM в количестве 1,5 Ед/особь, разделяли на контрольную группу, которую обрабатывали эксципиентом, группу, которой вводили конъюгат тройного агониста длительного действия (3,9 нмоль/кг, Q2D, подкожно), группу, которой вводили пирфенидон (300 мг/кг, QD, перорально), и группу, которой вводили амброксол (45 мг/кг, BID, внутрибрюшинно), повторное введение осуществляли через 2 недели. После 2 недель повторного введения легочную ткань каждой мыши отбирали путем аутопсии, и степень фиброза в легочной ткани оценивали путем трихромного окрашивания по Массону. Статистической обработкой оценивали эффективность конъюгата тройного агониста длительного действия с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA (*-***р<0,05-0,01).
В результате, когда конъюгат тройного агониста длительного действия вводили повторно, смогли подтвердить превосходящую эффективность в отношении уменьшения положительной области трихромного окрашивания по Массону в легочной ткани по сравнению как с контрольной группой, которую обрабатывали эксципиентом, так и группой, которой вводили пирфенидон, известный как терапевтический агент в отношении IPF (*-***р<0,05-0,001). Кроме того, в случае амброксола, известного как отхаркивающее средство, подтвердили такой же уровень эффективности, как и у конъюгата тройного агониста длительного действия (Фиг. 5).
Кроме того, мышей IPF, полученных путем обработки мышей C57BL/6 (ORIENT Bio, Busan, Korea) BLM в количестве 3,0 Ед/особь, разделяли на контрольную группу, которую обрабатывали эксципиентом, группу, которой вводили конъюгат тройного агониста длительного действия (3,9 нмоль/кг, Q2D, подкожно), группу, которой вводили пирфенидон (300 мг/кг, QD, перорально), и группу, которой вводили амброксол (45 мг/кг, BID, внутрибрюшинно), повторное введение осуществляли через 2 недели. Подтверждали зависимость уровня выживаемости от повторного введения.
В результате подтвердили, что когда конъюгат тройного агониста длительного действия вводили повторно, были продемонстрированы превосходящие уровни выживаемости по сравнению с группой, которой вводили эксципиент, группой, которой вводили пирфенидон, и группой, которой вводили амброксол (Фиг. 6).
На основе этих результатов подтвердили, что конъюгат тройного агониста длительного действия обладал терапевтическим эффектом в отношении легочного фиброза или идиопатического легочного фиброза (IPF), тем самым демонстрируя эффективность в отношении улучшения уровня выживаемости.
Подтверждено, что конъюгат тройного агониста длительного действия в соответствии с настоящим изобретением может облегчать легочный фиброз путем подавления дифференцировки легочных фибробластов в миофибробласты и ЕМТ альвеолярных эпителиальных клеток, и также подтверждено, что он может демонстрировать эффективность в отношении предупреждения и лечения легочного фиброза, в частности идиопатического легочного фиброза, путем эффекта облегчения легочного фиброза in vivo.
В общем, вышеприведенные результаты свидетельствуют о том, что конъюгаты тройных агонистов в соответствии с настоящим изобретением, могут эффективно предупреждать или лечить заболевания легкого путем облегчения воспаления легкого и легочного фиброза, означая что они могут быть предложены в качестве новых терапевтических агентов для лечения заболеваний легкого.
Исходя из вышеизложенного специалист в данной области техники, для которого предназначено настоящее изобретение, способен понять, что настоящее изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без модифицирования технических концепций или существенных характеристик настоящего изобретения. В этой связи, раскрытые здесь примеры воплощений приведены исключительно для иллюстративных целей, и их не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Наоборот, подразумевается, что настоящее изобретение охватывает не только примеры воплощений, а также различные альтернативы, модификации, эквиваленты и другие воплощения, которые могут быть включены в сущность и объем настоящего изобретения, определенные в прилагаемой формуле изобретения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> HANMI PHARM. CO., LTD.
<120> ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ КОНЪЮГАТА ТРОЙНОГО АГОНИСТА ДЛИТЕЛЬНОГО
ДЕЙСТВИЯ, ОБЛАДАЮЩЕГО АКТИВНОСТЯМИ В ОТНОШЕНИИ ВСЕХ ИЗ РЕЦЕПТОРОВ
ГЛЮКАГОНА/GLP-1/GIP ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЛЕГКОГО
<130> OPA20201-PCT
<150> KR 10-2020-0004379
<151> 2020-01-13
<160> 139
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 1
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 2
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 2
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 3
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 3
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Gln Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 4
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 4
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gln Gln Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 5
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 5
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gln Gln Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 6
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 6
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 7
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 8
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 8
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 9
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 9
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Cys
20 25 30
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 10
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Gly Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 11
Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Gln Gln Leu Phe Val Gln Trp Leu Lys Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 12
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 12
Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Met Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Val Gln Leu Phe Val Glu Trp Leu Met Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 13
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 13
Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Gln Leu Asp Glu
1 5 10 15
Ile Ala Val Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 14
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 14
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Gln Leu Asp Glu
1 5 10 15
Ile Ala Val Arg Asp Phe Val Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 15
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 15
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 16
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 16
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Ser
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gln Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 17
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 17
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Glu
1 5 10 15
Glu Arg Ala Arg Glu Phe Ile Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 18
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 18
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Ser
1 5 10 15
Glu Arg Ala Arg Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 19
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 19
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Gln Tyr Asp Ser
1 5 10 15
Glu His Gln Arg Asp Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asp Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 20
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<400> 20
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Gln Tyr Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Lys Asp Thr Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
35 40
<210> 21
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 21
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 22
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 22
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 23
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 23
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys
20 25 30
Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr
35 40
<210> 24
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 24
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 25
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 25
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 26
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 26
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 27
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 27
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Cys Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gln Gly Gly Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35 40
<210> 28
<211> 41
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 28
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Gln Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys
20 25 30
Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr
35 40
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 29
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 30
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 30
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Cys
20 25 30
<210> 31
<211> 29
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 31
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Cys Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gln
20 25
<210> 32
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 32
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Cys Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 33
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 33
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys
20 25 30
<210> 34
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 34
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys
20 25 30
<210> 35
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 35
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys
20 25 30
<210> 36
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 36
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Cys Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly
35 40
<210> 37
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 37
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly
35 40
<210> 38
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 38
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ser Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Ser
35 40
<210> 39
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 39
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln His Ala Gln Cys Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Gly Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35 40
<210> 40
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 40
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Cys Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 41
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 41
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 42
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 42
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 43
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 43
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Cys Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 44
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<400> 44
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Gln Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 45
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<400> 45
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Met Asp Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 46
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<400> 46
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln His Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 47
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<400> 47
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 48
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<400> 48
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 49
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 49
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Cys Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys
20 25 30
<210> 50
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 50
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 51
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 51
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 52
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 52
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Cys
20 25 30
<210> 53
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 53
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys
20 25 30
<210> 54
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 54
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asp Trp Leu Leu Ala Glu Cys
20 25 30
<210> 55
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 55
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys
20 25 30
<210> 56
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 56
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys
20 25 30
<210> 57
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 57
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 58
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 58
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys
20 25 30
<210> 59
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 59
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Cys Met Asp Glu
1 5 10 15
Lys His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys
20 25 30
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 60
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Lys His Cys Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys
20 25 30
<210> 61
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 61
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile Ala Cys Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys
20 25 30
<210> 62
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 62
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 63
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 63
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 64
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 64
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 65
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 65
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 66
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 66
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 67
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 67
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 68
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 68
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 69
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 69
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 70
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 70
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 71
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 71
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Cys Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 72
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 72
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 73
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 73
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 74
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 74
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 75
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 75
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 76
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 76
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 77
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 77
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 78
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 78
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Lys Cys
20 25 30
<210> 79
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 79
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys
20 25 30
<210> 80
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 80
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asp Trp Leu Leu Ala Glu Lys Cys
20 25 30
<210> 81
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 81
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 82
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 82
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Cys
20 25 30
<210> 83
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 83
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys
20 25 30
<210> 84
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 84
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asp Trp Leu Leu Ala Glu Cys
20 25 30
<210> 85
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 85
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys
20 25 30
<210> 86
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 86
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys
20 25 30
<210> 87
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 87
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 88
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 88
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys
20 25 30
<210> 89
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 89
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Lys Cys
20 25 30
<210> 90
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 90
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys
20 25 30
<210> 91
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 91
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asp Trp Leu Leu Ala Glu Lys Cys
20 25 30
<210> 92
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 92
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys
20 25 30
<210> 93
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 93
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys
20 25 30
<210> 94
<211> 31
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой 4-имидазоацетил (CA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 94
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys
20 25 30
<210> 95
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 95
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Cys His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 96
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 96
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His Cys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 97
<211> 39
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 97
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Cys His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
35
<210> 98
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 98
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 99
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 99
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 100
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 100
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gln His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 101
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 101
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp Gln His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 102
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тройной агонист
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положениям 16 и 20 образуют кольцо
<400> 102
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp Gln His Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
35 40
<210> 103
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Общая формула 1
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой His (H), 4-имидазоацетил (CA) или Tyr (Y)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой Gly (G), альфа-метил-глутаминовую кислоту
или Aib(2-аминоизомасляную кислоту)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)
<223> Xaa представляет собой Glu (E) или Gln (Q)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa представляет собой Thr (T) или Ile (I)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa представляет собой Leu (L), Tyr (Y), Lys (K), Cys (C) или
Val (V)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)
<223> Xaa представляет собой Lys (K), Ser (S) или Ile (I)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa представляет собой Gln (Q), Tyr (Y), Ala (A) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)
<223> Xaa представляет собой Leu (L), Met (M) или Tyr (Y)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Asp (D), Glu (E) или Leu (L)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)
<223> Xaa представляет собой Gly (G), Glu (E) или Ser (S)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)
<223> Xaa представляет собой Gln (Q), Arg (R), Ile (I), Glu (E), Cys
(C) или Lys (K)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)
<223> Xaa представляет собой Ala (A), Gln (Q), Arg (R) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)
<223> Xaa представляет собой Ala (A), Gln (Q), Cys (C) или Val (V)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)
<223> Xaa представляет собой Lys (K), Gln (Q) или Arg (R)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)
<223> Xaa представляет собой Glu (E), Gln (Q), Leu (L), Cys (C) или
Asp (D)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)
<223> Xaa представляет собой Ile (I) или Val (V)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)
<223> Xaa представляет собой Ala (A), Gln (Q), Cys (C), Asn (N), Asp
(D) или Glu (E)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)
<223> Xaa представляет собой Val (V), Leu (L), Lys (K) или Met (M)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Lys (K), Ala (A), Asn (N) или
Asp (D)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Gly (G), Gln (Q), Thr (T), Glu
(E) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Gly (G), Lys (K) или His (H) или
отсутствует; и Xaa может быть дополнительно связан с R1, где R1
представляет собой Cys (C), GKKNDWKHNIT, m-SSGAPPPS-n или m-
SSGQPPPS-n или отсутствует, и где m представляет собой -Cys-,
-Pro- или -Gly-Pro-, и n представляет собой -Cys-, -Gly-,
-Ser- или -His-Gly-, или отсутствует
<400> 103
Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Xaa Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
<210> 104
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Общая формула 2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой His (H), 4-имидазоацетил (CA) или Tyr (Y)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой Gly (G), альфа-метил-глутаминовую кислоту
или Aib (2-аминоизомасляную кислоту)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa представляет собой Tyr (Y) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa представляет собой Gln (Q), Tyr (Y), Ala (A) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)
<223> Xaa представляет собой Leu (L), Met (M) или Tyr (Y)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)
<223> Xaa представляет собой Asp (D), Glu (E) или Leu (L)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)
<223> Xaa представляет собой Gly (G), Glu (E) или Ser (S)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)
<223> Xaa представляет собой Gln (Q), Arg (R), Ile (I), Glu (E), Cys
(C) или Lys (K)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)
<223> Xaa представляет собой Ala (A), Gln (Q), Arg (R) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)
<223> Xaa представляет собой Ala (A), Gln (Q), Cys (C) или Val (V)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)
<223> Xaa представляет собой Lys (K), Gln (Q) или Arg (R)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)
<223> Xaa представляет собой Glu (E), Gln (Q), Leu (L), Cys (C) или
Asp (D)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)
<223> Xaa представляет собой Ile (I) или Val (V)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)
<223> Xaa представляет собой Ala (A), Gln (Q), Cys (C), Asn (N) или
Glu (E)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Lys (K), Asn (N) или Asp (D)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Gly (G), Gln (Q) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Gly (G), Lys (K) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)
<223> Xaa представляет собой Pro (P) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (40)
<223> Xaa представляет собой Cys (C) или отсутствует
<400> 104
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 105
<211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Общая формула 3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой His (H) или Tyr (Y)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой альфа-метил-глутаминовую кислоту или Aib
(2-аминоизомасляную кислоту)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa представляет собой Tyr (Y), Ala (A) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)
<223> Xaa представляет собой Arg (R), Cys (C) или Lys (K)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)
<223> Xaa представляет собой Ala (A) или Arg (R)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)
<223> Xaa представляет собой Ala (A) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)
<223> Xaa представляет собой Glu (E) или Asp (D)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)
<223> Xaa представляет собой Gln (Q) или Asn (N)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)
<223> Xaa представляет собой Cys (C) или Asp (D)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)
<223> Xaa представляет собой Cys (C), Gln (Q) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)
<223> Xaa представляет собой Cys (C) или His (H)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)
<223> Xaa представляет собой Pro (P) или Cys (C)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (40)
<223> Xaa представляет собой Cys (C) или отсутствует
<400> 105
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Xaa Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Ser
20 25 30
Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 106
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 106
Gly Lys Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr
1 5 10
<210> 107
<211> 8
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 107
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
1 5
<210> 108
<211> 8
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 108
Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 109
Cys Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
1 5
<210> 110
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 110
Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
1 5 10
<210> 111
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 111
Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys
1 5 10
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 112
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
1 5
<210> 113
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 113
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly
1 5 10
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 114
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly
1 5 10
<210> 115
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 115
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Ser
1 5 10
<210> 116
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 116
Pro Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser
1 5
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> R1
<400> 117
Pro Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys
1 5 10
<210> 118
<211> 29
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 118
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 119
<211> 12
<212> PRT
<213> HOMO SAPIENS
<400> 119
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 120
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 121
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Pro
1 5 10
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 122
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser
1 5 10
<210> 123
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 123
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 124
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser
1 5
<210> 125
<211> 8
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 125
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
1 5
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 126
Glu Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
1 5
<210> 127
<211> 6
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 127
Glu Ser Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 128
<211> 5
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 128
Glu Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 129
<211> 4
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 129
Pro Ser Cys Pro
1
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 130
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 131
Lys Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 132
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 132
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 133
<211> 8
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 133
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
1 5
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 134
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 135
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 135
Glu Ser Lys Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 136
<211> 6
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 136
Glu Ser Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 137
<211> 4
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 137
Glu Pro Ser Cys
1
<210> 138
<211> 3
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 138
Ser Cys Pro
1
<210> 139
<211> 221
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 139
Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
20 25 30
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
50 55 60
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
65 70 75 80
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
85 90 95
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
100 105 110
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
115 120 125
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
145 150 155 160
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
165 170 175
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215 220
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Фармацевтическая композиция, содержащая инсулин и глюкагон | 2019 |
|
RU2823246C2 |
| ИММУНОЦИТОКИНЫ НА ОСНОВЕ IL-15 И IL-15Rα ДОМЕНА SUSHI | 2012 |
|
RU2763298C2 |
| ПЕПТИДЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ, НАРУШЕНИЙ ИЛИ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С МУТАНТНЫМ р53 | 2017 |
|
RU2762089C2 |
| Композиция для лечения гиперлипидемии, содержащая производное оксинтомодулина | 2013 |
|
RU2768853C1 |
| СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ РАССТРОЙСТВ | 2014 |
|
RU2763796C2 |
| ПРИМЕНЕНИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ О-АЦЕТИЛИРОВАННОГО ГАНГЛИОЗИДА GD2 ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ | 2017 |
|
RU2771173C2 |
| МОЛЕКУЛЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ADAM9, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2017 |
|
RU2783619C2 |
| АНТИТЕЛА ПРОТИВ БЕЛКА-1 ЗАПРОГРАММИРОВАННОЙ КЛЕТОЧНОЙ СМЕРТИ (PD-1) И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2017 |
|
RU2725950C1 |
| АНТИТЕЛА, НАПРАВЛЕННЫЕ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА 36 (IL-36R) | 2016 |
|
RU2745898C2 |
| ДВОЙНОЙ АГОНИСТ РЕЦЕПТОРОВ ГЛЮКАГОНОПОДОБНОГО ПЕПТИДА-1 И ГЛЮКАГОНА ДЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ | 2021 |
|
RU2799327C1 |
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания легкого. Композиция содержит в качестве активного ингредиента пептид, представляющий собой тройной агонист, обладающий активностями в отношении всех из рецептора глюкагона, рецептора GLP-1 и рецептора GIP. Изобретение обеспечивает возможность предупреждения или лечения заболеваний легкого с увеличенной эффективностью. 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 9 пр.
1. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания легкого, содержащая:
фармацевтически приемлемый эксципиент; и
пептид, включающий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 21, 22, 27, 30, 31, 32, 34, 36, 37, 42, 43, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 83, 86, 91, 93, 96, 97, 98, 99, 100, 101 и 102, в фармацевтически эффективном количестве,
где заболевание легкого представляет собой интерстициальное заболевание легкого (ILD), прогрессирующее фиброзирующее интерстициальное заболевание легкого (PF-ILD), идиопатические интерстициальные пневмонии (IIP), неспецифическую интерстициальную пневмонию (NSIP), легочный фиброз, фиброзирующие интерстициальные заболевания легкого (FILD), идиопатический легочный фиброз (IPF), альвеолит, пневмонию, эмфизему, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легкого, комбинированный легочный фиброз с эмфиземой (CPFE), астму или респираторное инфекционное заболевание.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где пептид находится в форме конъюгата длительного действия, представленного формулой 1 ниже:
[Формула 1]
X–L–F,
где в формуле 1 выше:
X представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 21, 22, 27, 30, 31, 32, 34, 36, 37, 42, 43, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 83, 86, 91, 93, 96, 97, 98, 99, 100, 101 и 102;
L представляет собой линкер, содержащий повторяющееся звено этиленгликоля;
F представляет собой область Fc иммуноглобулина; и
“–” представляет собой ковалентную связь между X и L и между L и F.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, где C-конец пептида амидирован.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, где пептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 64, 66, 67, 70, 71, 76, 77, 96, 97 и 100.
5. Фармацевтическая композиция по п. 4, где пептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 42, 43, 50, 77 и 96.
6. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, где аминокислоты по положениям 16 и 20 от N-конца образуют кольцо друг с другом в пептидной последовательности.
7. Фармацевтическая композиция по п. 2, где молекулярная масса по формуле соединения фрагмента повторяющегося звена этиленгликоля в L находится в диапазоне от 1 кДа до 100 кДа.
8. Фармацевтическая композиция по п. 2, где F представляет собой область Fc IgG.
9. Фармацевтическая композиция по п. 1, где респираторное инфекционное заболевание представляет собой инфекционное заболевание, вызванное респираторными вирусами, бактериями, микоплазмой или грибками.
10. Фармацевтическая композиция по п. 9, где респираторный вирус представляет собой любой вирус, выбранный из группы, состоящей из аденовируса, вируса оспы, вируса простого герпеса, вируса парагриппа, риновируса, вируса ветряной оспы, вируса кори, респираторно-синцитиального вируса, вируса Денге, ВИЧ (вируса иммунодефицита человека), вируса гриппа, коронавируса, вируса, ассоциированного с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS-ассоциированного вируса), и коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV).
11. Фармацевтическая композиция по п. 10, где коронавирус представляет собой SARS-CoV-2.
12. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, где фармацевтическая композиция (1) ингибирует активность макрофагов или (2) уменьшает экспрессию интерлейкина-1β (IL-1β), IL-6, IL-12 или фактора некроза опухоли α (TNF-α) после введения.
13. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, где фармацевтическая композиция обладает одним или более чем одним свойством после введения:
(1) подавляет дифференцировку миофибробластов;
(2) уменьшает экспрессию α-гладкомышечного актина (α-SMA), коллагена 1α1 или фибронектина;
(3) подавляет эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) альвеолярных эпителиальных клеток; и
(4) уменьшает экспрессию коллагена 1α1 или коллагена 1α3.
14. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, где фармацевтический агент дополнительно вводят с муколитическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью.
15. Фармацевтическая композиция по п. 14, где муколитический агент представляет собой один или более чем один агент, выбранный из группы, состоящей из амброксола, N-ацетилцистеина, N-ацетилина, карбоцистеина, домиодола, фудостеина, бромгексина, эрдостеина, летостина, лизоцима, месна, собрерола, степронина, тиопронина, тилоксапола, карбоцистеина, дорназы альфа, эпразинона, летостеина, нелтенексина и мецистеина.
16. Фармацевтическая композиция по п. 14, где пептид и муколитический агент или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, последовательно или в обратном порядке.
17. Фармацевтическая композиция по п. 1, где заболевание легкого представляет собой пневмонию (воспаление легкого) или легочный фиброз, вызванный коронавирусным заболеванием-19 (COVID-19).
18. Фармацевтическая композиция по п. 2, где F представляет собой димер, состоящий из двух полипептидных цепей, и один конец L связан только с одной из двух полипептидных цепей.
| US 2018311315 A1, 01.11.2018 | |||
| IN YOUNG CHOI et al | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| ANTONIOU K.M | |||
| et al | |||
| Interstitial lung disease, Eur Respir Rev, 2014, vol.23, pp.40-54 | |||
| АНДРЕЕВА И.В | |||
| Амброксол в лечении и | |||
