ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к области биомедицины, а именно к агонисту, оказывающему агонистическое действие как на рецептор человеческого глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), так и на рецептор человеческого глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), и его применению для лечения метаболических заболеваний, таких как инсулиннезависимый диабет, инсулинозависимый диабет и заболевания, связанные с ожирением.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Диабет представляет собой метаболическое заболевание, которое характеризуется нарушением регуляции метаболизма глюкозы, белков и липидов in vivo из-за недостаточной секреции инсулина in vivo. Диабет преимущественно подразделяется на инсулинозависимый диабет (диабет 1 типа) и инсулиннезависимый диабет (диабет 2 типа) на основании различий в его патофизиологическом механизме. Из этих типов 90-95% больных диабетом во всем мире страдают инсулиннезависимым диабетом. Инсулиннезависимый диабет представляет собой длительное хроническое метаболическое заболевание, вызванное нарушением функции β-клеток поджелудочной железы и длительной инсулинорезистентностью, характеризующееся недостаточными уровнями инсулина in vivo и высокой концентрацией глюкозы в плазме крови. Исследования показали, что инсулиннезависимый диабет связан с множеством сопряженных с высоким риском заболеваний у пациентов и часто приводит к сердечно-сосудистым заболеваниям, почечной недостаточности, слепоте, ампутации и другим заболеваниям.
Одной из основных причин инсулиннезависимого диабета является ожирение. Ожирение определяется как чрезмерное или патологическое накопление жира в организме, которое наносит вред здоровью человека. В соответствии с индексом массы тела (ИМТ) человека ожирение также может быть определено как индекс ИМТ человека, равный 30 кг/м2 или более. Развитие ожирения значительно увеличивает риск сердечно-сосудистых заболеваний, диабета, заболеваний опорно-двигательного аппарата и некоторых видов рака. Кроме того, увеличение индекса массы тела человека также увеличивает риск некоторых неинфекционных заболеваний.
Из-за огромного количества пациентов и, как следствие, значительной нагрузки на экономику, вызванной диабетом и его осложнениями, разработка безопасных и эффективных средств для лечения диабета всегда была одной из приоритетных областей для многих научно-исследовательских организаций и фармацевтических компаний. В настоящее время одобренные противодиабетические средства в основном включают химически синтезированные низкомолекулярные пероральные гипогликемические агенты, такие как бигуаниды, сульфонилы, агенты, повышающие чувствительность к инсулину, α-гликозиды и инъекционные гипогликемические агенты, такие как рекомбинантные инсулины и их производные, полученные путем биосинтеза. Хотя вышеупомянутые средства могут эффективно контролировать уровень глюкозы в плазме крови больных диабетом с клинической точки зрения, долгосрочный прием этих средств часто сопровождается побочными действиями, такими как набор веса, что, в свою очередь, приводит к увеличению риска развития сердечно-сосудистого заболевания и ухудшению соблюдения пациентами режима лечения. Принимая во внимание потенциальную патологическую взаимосвязь между диабетом и ожирением и потенциальный риск осложнений, вызываемых ожирением, во многих отношениях очень важно разработать средства, способные как эффективно контролировать уровень глюкозы в крови, так и надлежащим образом снижать массу тела больных диабетом, например, для эффективного лечения диабета, а также для снижения риска возможных осложнений. Следовательно, это более перспективное направление клинических исследований.
Глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1) представляет собой регуляторный полипептид желудочно-кишечного тракта, содержащий 30 или 31 аминокислотный остаток. Секреция GLP-1 в основном регулируется L-клетками тонкой кишки в ответ на всасывание питательных веществ и колебания уровня глюкозы в крови in vivo. После приема пищи L-клетки тонкой кишки секретируют большое количество GLP-1 для усиления эндокринной функции поджелудочной железы. Полипептид GLP-1 в основном выполняет свои физиологические функции in vivo по контролю уровня глюкозы в крови и снижению аппетита путем активации рецепторов GLP-1, распределенных на поверхности клеточных мембран. Основным механизмом, с помощью которого GLP-1 контролирует уровень глюкозы в крови in vivo, является активация его рецепторов GLP-1, распределенных в β-клетках поджелудочной железы, для стимулирования биосинтеза и секреции инсулина. В то же время, когда уровень глюкозы в крови in vivo высок, полипептид GLP-1 может ингибировать секрецию глюкагона, опорожнение желудка и прием пищи, а также может способствовать деградации глюкозы in vivo за счет специфических эффектов нервной системы. Стоит отметить, что физиологическая функция полипептида GLP-1 по стимулированию секреции инсулина в высокой степени контролируется концентрацией глюкозы в плазме. Следовательно, полипептид GLP-1 не вызывает тяжелой и продолжительной гипогликемии по сравнению с другими терапевтическими средствами для лечения диабета. Кроме того, в литературе сообщалось, что полипептид GLP-1 и его аналоги могут непосредственно способствовать росту, дифференцировке и пролиферации β-клеток у подопытных животных, что указывает на физиологическое действие полипептида GLP-1 и его аналогов по защите островков поджелудочной железы и замедлению прогрессирования диабета, что обеспечивает подавление апоптоза β-клеток. Полипептид GLP-1 также может ингибировать секрецию гастрина и желудочной кислоты, стимулируемую приемом пищи. Такие характеристики означают, что полипептид GLP-1 также играет физиологическую роль в предотвращении пептических язв. Полипептид GLP-1 может также активировать его рецепторы GLP-1, распределенные в центральной нервной системе (головном мозге), для усиления чувства насыщения, уменьшения потребления пищи и достижения физиологического эффекта по поддержанию или снижению массы тела. Следовательно, благодаря обширным механизмам действия и физиологическим функциям полипептида GLP-1 и его аналогов полипептид GLP-1 является идеальным средством для лечения инсулиннезависимого диабета и диабета с ожирением.
Физиологические функции полипептида GLP-1 по контролю уровня глюкозы в крови и снижению массы тела дали надежду на лечение инсулиннезависимого диабета/диабета с ожирением. Однако природный человеческий GLP-1 обладает плохой применимостью в качестве лекарственного средства, поскольку он подвержен деградации под действием дипептидилпептидазы-IV на основе дипептида (DPP-IV) in vivo, так что его период полувыведения в организме человека составляет всего 1-2 минуты. Столкнувшись с такой трудностью, фармацевтическая промышленность создала аналоги GLP-1 длительного действия и их производные путем сайт-направленных аминокислотных мутаций в сайте(ах) рестрикции, модификации жирными кислотами остова полипептида и связывания полипептида GLP-1 с различными белками/полимерами. Аналоги GLP-1 длительного действия, доступные на рынке и широко используемые в клинической практике, включают эксенатид (подкожная инъекция, 2 раза в сутки), лираглутид (подкожная инъекция, 1 раз в сутки), а также дулаглутид и семаглутид (подкожная инъекция, 1 раз в неделю), и т. д.
Клинически побочные действия полипептида GLP-1 и его производных в основном проявляются тошнотой, рвотой и диареей, вызываемыми желудочно-кишечным трактом; кроме того, было обнаружено, что полипептид GLP-1 и его производные также могут вызывать учащенное сердцебиение у субъекта и при определенных обстоятельствах они могут увеличивать риск панкреатита у пациентов. Следовательно, дозировка полипептида GLP-1 и его производных ограничена из-за вызываемых ими побочных действий, поэтому они не могут обеспечить полный контроль уровня глюкозы в крови и потерю массы тела у пациентов при клиническом применении.
И глюкозозависимый инсулинотропный полипептид (GIP), и полипептид GLP-1 относятся к типам инкретина, которые играют ключевую физиологически значимую роль в метаболизме глюкозы в крови in vivo. GIP преимущественно состоит из 42 аминокислотных остатков in vivo и секретируется K-клетками, присутствующими в двенадцатиперстной кишке и прилегающими к тощей кишке, в ответ на уровень глюкозы в плазме. Полипептид GIP оказывает свои физиологические действия путем связывания со своими рецепторами GIP, распределенными в β-клетках поджелудочной железы, жировой ткани и центральной нервной системе. Подобно полипептиду GLP-1, полипептид GIP может стимулировать секрецию инсулина β-клетками поджелудочной железы, тем самым снижая концентрацию глюкозы в плазме, защищая β-клетки поджелудочной железы и контролируя метаболизм глюкозы in vivo. Кроме того, физиологические функции полипептида GIP также включают активацию его рецептора GIP в жировой ткани, тем самым стимулируя метаболизм жиров. Интересно, что интрацеребровентрикулярная инъекция полипептида GIP мышам может снизить потребление пищи и массу тела у подопытных животных, что, по-видимому, указывает на то, что полипептид GIP также выполняет определенные физиологические функции по снижению массы тела. Исследования показали, что инкретиновая функция полипептида GIP у пациентов с инсулиннезависимым диабетом значительно снижена, что приводит к отсутствию или потере инкретиновых эффектов у пациентов. Исследования показали, что ингибирование полипептида GIP, наблюдаемое у этих больных диабетом, будет значительно ослаблено, когда уровень глюкозы в крови вернется к норме.
Следовательно, существует клиническая потребность в способе лечения инсулиннезависимого диабета с помощью полипептида GIP и клиническая потребность в клинически эффективном гипогликемическом средстве для восстановления толерантности пациентов с инсулиннезависимым диабетом к полипептиду GIP, что дополнительно в комбинации с инкретиновым эффектом полипептида GIP обеспечивает более сильный клинический гипогликемический эффект. Таким образом, при сравнении со многими полипептидами-агонистами рецептора GLP-1, известными в данной области техники, целью настоящего изобретения является создание производного аналога GLP-1, которое обладает агонистической активностью в отношении рецептора человеческого GIP и оказывает двойное агонистическое действие на рецептор человеческого GLP-1 и рецептор человеческого GIP. Кроме того, некоторые соединения согласно настоящему изобретению оказывают более сильное действие по снижению уровня глюкозы в крови и потере веса, чем агонисты рецептора GLP-1, известные в этой области. Наконец, некоторые соединения согласно настоящему изобретению обладают чрезвычайно высокой стабильностью в плазме и обладают фармакокинетическими свойствами, которые делают возможным введение людям подкожной инъекции один раз в неделю.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью настоящего изобретения является обеспечение аналога GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли:
X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-X19-X20-Glu-Phe-X23-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-X40
(I),
где:
X1, X2, X10, X12, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X27, X28, X29 и X30 независимо выбраны из любой природной аминокислоты или неприродной аминокислоты, или состоящего из них пептидного фрагмента;
X40 выбран из любой природной аминокислоты или неприродной аминокислоты, или состоящего из них пептидного фрагмента, или X40 отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, характеризующемуся тем, что аналог GLP-1 модифицирован на обоих его концах следующим образом:
R1-X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-X19-X20-Glu-Phe-X23-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-X40-R2
(II),
где:
R1 представляет собой H, алкил, ацетил, формил, бензоил, трифторацетил или pGlu;
R2 представляет собой -NH2 или -OH;
X1, X2, X10, X12, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X27, X28, X29 и X30 независимо выбраны из любой природной аминокислоты или неприродной аминокислоты, или состоящего из них пептидного фрагмента;
X40 выбран из любой природной аминокислоты или неприродной аминокислоты, или состоящего из них пептидного фрагмента, или X40 отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr или His; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib или D-Ala; X10 выбран из аминокислотного остатка Val или Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ser или Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Asp или Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Glu, Gly, Lys или Aib; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu, Ile или Gln; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala, Aib или His; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala, Aib или Gln; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Glu, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Ile или Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Ala, Asn или Gln; X27 выбран из аминокислотного остатка Val, Ile или Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Arg или Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly или Gln; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr или His; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib или D-Ala; X10 выбран из аминокислотного остатка Val или Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ser или Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Asp или Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Glu, Gly, Lys или Aib; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu, Ile или Gln; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala, Aib или His; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala, Aib или Gln; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Glu, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Ile или Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Ala, Asn или Gln; X27 выбран из аминокислотного остатка Val или Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Arg или Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly или Gln; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует; Y1 представляет собой остаток Lys, Orn, Dap, Dab или Cys, в котором боковая цепь связана с заместителем, представленным формулой {[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил}a-(y-Glu)b-CO-(CH2)c-COOH; где a представляет собой целое число от 1 до 3; b представляет собой целое число от 1 до 2; и c представляет собой целое число от 10 до 30.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Asp или Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys или Aib; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala или Gln; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn или Gln; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly или Gln; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует; Y1 представляет собой остаток Lys, Orn, Dap, Dab или Cys, в котором боковая цепь связана с заместителем, представленным формулой {[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил}a-(y-Glu)b-CO-(CH2)c-COOH; где a представляет собой целое число от 1 до 3; b представляет собой целое число от 1 до 2; и c представляет собой целое число от 10 до 30.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из аминокислотного остатка Gln; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из аминокислотного остатка Lys; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X2 выбран из аминокислотного остатка Aib; X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr; X12 выбран из аминокислотного остатка Ile, X15 выбран из аминокислотного остатка Glu; X16 выбран из аминокислотного остатка Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 выбран из аминокислотного остатка Ala; X20 выбран из Y1; X23 выбран из аминокислотного остатка Val; X24 выбран из аминокислотного остатка Asn; X27 выбран из аминокислотного остатка Leu; X28 выбран из аминокислотного остатка Ala; X29 выбран из аминокислотного остатка Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X1 представляет собой аминокислотный остаток Tyr; X2 представляет собой аминокислотный остаток Aib; X10 представляет собой аминокислотный остаток Tyr; X12 представляет собой аминокислотный остаток Ile, X15 представляет собой аминокислотный остаток Glu; X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys; X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile; X18 выбран из аминокислотного остатка Ala или Aib; X19 представляет собой аминокислотный остаток Ala; X20 представляет собой Gln; X23 представляет собой аминокислотный остаток Val; X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn; X27 представляет собой аминокислотный остаток Leu; X28 представляет собой аминокислотный остаток Ala; X29 представляет собой аминокислотный остаток Gly; X30 выбран из аминокислотного остатка Gly, Lys или Y1; X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из X20, X30 и X40 независимо выбран из Y1.
Из них Y1 представляет собой остаток Lys, Orn, Dap, Dab или Cys, в котором боковая цепь связана с заместителем, представленным формулой {[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил}a-(y-Glu)b-CO-(CH2)c-COOH; a представляет собой целое число от 1 до 3; b представляет собой целое число от 1 до 2; и c представляет собой целое число от 10 до 30.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где в определении Y1 a равно 2, b равно 1 или 2, и c равно от 16 до 20.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где в определении Y1 a равно 2, b равно 1 или 2, и c равно 16, 18 или 20.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где X40 выбран из Y1;
Y1 представляет собой остаток Lys, в котором боковая цепь связана с заместителем, представленным формулой {[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил}a-(y-Glu)b-CO-(CH2)c-COOH;
a равно 2;
b равно 1 или 2;
c равно 16 или 18.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где Y1 ковалентно связан с жирной кислотой через аминогруппу боковой цепи Lys посредством образования амидной связи.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где Y1 представляет собой K (-OEG-OEG-yGlu-C18-OH) или K (-OEG -OEG-yGlu-C20-OH), представленный химической формулой, включающей следующую структуру:
или
.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где группа -OEG-OEG-yGlu-C18-OH или -OEG-OEG-yGlu-C20-OH представлена химической формулой, включающей следующую структуру:
или
.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где Y1 ковалентно связан с жирной кислотой через ε-аминогруппу C-концевого Lys посредством амидной связи, и α-аминогруппа C-концевого Lys связана с пептидной цепью.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, характеризующемуся тем, что он выбран из следующих соединений под номерами 1-83:
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к фармацевтической композиции общей формулы (I), содержащей:
1) терапевтическое количество аналога GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и
2) фармацевтически приемлемый эксципиент или фармацевтический носитель.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к применению аналога GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и композиции общей формулы (I) для получения лекарственного средства для лечения инсулиннезависимого диабета, инсулинозависимого диабета или ожирения.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые вводят одновременно, по отдельности или последовательно в комбинации с одним или более реагентами, выбранными из группы, состоящей из метформина, тиазолидиндионов, сульфонилмочевины, ингибиторов дипептидилпептидазы и натрийзависимых переносчиков глюкозы.
Настоящее изобретение также относится к предпочтительному техническому решению, относящемуся к аналогу GLP-1 общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, или композиции общей формулы (I), которые вводят одновременно, по отдельности или последовательно в комбинации с одним или более реагентами, выбранными из группы, состоящей из метформина, тиазолидиндионов, сульфонилмочевины, ингибиторов дипептидилпептидазы и натрийзависимых переносчиков глюкозы.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения предложены полипептидные соединения и их фармацевтически приемлемые соли, как описано выше.
Соединения полипептидного двойного агониста и их производные, предложенные в настоящем изобретении, относятся к амфотерным соединениям, которые могут быть подвергнуты взаимодействию с кислотными или основными соединениями с образованием солей методами, хорошо известными специалистам в данной области техники. Кислота, обычно используемая для образования кислотно-аддитивной соли, представляет собой: соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, иодистоводородную кислоту, серную кислоту, фосфорную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, метансульфоновую кислоту, щавелевую кислоту, п-бромфенилсульфоновую кислоту, угольную кислоту, янтарную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту или уксусную кислоту; соли включают сульфат, пиросульфат, трифторацетат, сульфит, бисульфит, фосфат, гидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, гидрохлорид, бромид, иодид, ацетат, пропионат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капроат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, гамма-гидроксибутират, гликолят, тартрат, мезилат, пропансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, манделат и т. д., предпочтительно трифторацетат. Щелочные вещества также могут образовывать соли с полипептидными соединениями и их производными, предложенными в настоящем изобретении. Эти щелочные вещества включают аммоний, гидроксиды щелочных или щелочноземельных металлов, а также карбонаты и бикарбонаты, обычно гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, карбонат натрия, карбонат калия и т. д.
Фармацевтическая композиция, содержащая соединение полипептидного двойного агониста согласно настоящему изобретению, может применяться для лечения пациентов, нуждающихся в таком лечении, путем парентерального введения. Парентеральное введение может быть выбрано из подкожной инъекции, внутримышечной инъекции или внутривенной инъекции. Соединение полипептидного двойного агониста согласно настоящему изобретению также может быть введено трансдермальным способом, например, трансдермально с помощью пластыря, и может быть выбран ионофорезный пластырь; или введено трансмукозальным способом.
Для полипептидного соединения и его производных, предложенных в настоящем изобретении, используется метод твердофазного синтеза. α-аминогруппу производных аминокислот, используемых в процессе синтеза, защищают Fmoc (флуоренилметоксикарбонил)-группой; и защитная группа, используемая для боковой цепи аминокислоты, для различных функциональных групп может быть выбрана из следующей группы: сульфгидрил боковой цепи цистеина, аминогруппу боковой цепи глутамина и имидазолил боковой цепи гистидина защищают Trt (трифенилметил); и гуанидил боковой цепи аргинина защищают Pbf (2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил); индолил боковой цепи триптофана, аминогруппу боковой цепи лизина защищают Boc (трет-бутоксикарбонил); гидроксил боковой цепи треонина, фенольную группу боковой цепи тирозина и гидроксил боковой цепи серина защищают t-Bu (трет-бутил). В процессе синтеза карбоксильную группу С-концевого аминокислотного остатка полипептида сначала конденсируют на нерастворимой амидной полимерной смоле Ринка ChemMatrix в форме амидной связи, затем защитную группу Fmoc удаляют с α-аминогруппы с использованием раствора N,N-диметилформамида (ДМФА), содержащего 20% пиперидина, а затем твердофазный носитель конденсируют со следующим производным аминокислоты в последовательности в избытке с образованием амидной связи, удлиняя пептидную цепь. Процедуры конденсации → отмывки → снятия защиты → отмывки → следующего этапа конденсации аминокислот повторяют до тех пор, пока не будет достигнута желаемая длина синтезируемой полипептидной цепи, и, наконец, полипептид отщепляют от твердофазного носителя посредством подвергания взаимодействию со смолой смеси трифторуксусная кислота:вода:триизопропилсилан (90:5:5, об.:об.:об.), а затем осаждают замороженным изопропиловым эфиром, в результате чего получают твердый неочищенный продукт производного полипептида. Твердый неочищенный продукт полипептида растворяют в смеси ацетонитрил/вода, содержащей 0,1% трифторуксусной кислоты, очищают и разделяют на колонке для препаративной хроматографии с обращенной фазой C-18, получая чистый продукт полипептида и его производных.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Если не указано иное, термины, используемые в описании и формуле изобретения, имеют следующие значения.
Аминокислотная последовательность в настоящем изобретении включает стандартные однобуквенные или трехбуквенные обозначения для двадцати аминокислот. Если явно не указано иное, предпочтительной конфигурацией всех аминокислотных остатков в настоящем изобретении является L-конфигурация. Кроме того, Aib относится к α-аминоизомасляной кислоте, а D-Ala относится к D-аланину.
Термин «агонист» определен как вещество, которое активирует обсуждаемый тип рецептора.
В контексте настоящего изобретения термин «двойной агонист GLP-1/GIP» относится к веществу или лиганду, которые могут активировать как рецептор GLP-1, так и рецептор GIP. В настоящем изобретении термин «лечение» включает ингибирование, замедление, остановку или реверсию существующих симптомов или прогрессирования или степени тяжести заболевания.
«Природные аминокислоты» относятся к 20 обычным аминокислотам (т. е. аланину (A), цистеину (C), аспарагиновой кислоте (D), глутаминовой кислоте (E), фенилаланину (F), глицину (G), гистидину (H), изолейцину (I), лизину (K), лейцину (L), метионину (M), аспарагину (N), пролину (P), глутамину (Q), аргинину (R), серину (S), треонину (T), валину (V), триптофану (W) и тирозину (Y).
«Неприродная аминокислота» относится к аминокислоте, которая не кодируется естественным образом или не содержится в генетическом коде какого-либо организма. Это могут быть, например, полностью синтетические соединения. Примеры неприродных аминокислот включают, не ограничиваясь перечисленным, гидроксипролин, γ-карбоксиглутаминовую кислоту, O-фосфосерин, азетидинкарбоновую кислоту, 2-аминоадипат, 3-аминоадипат, β-аланин, аминопропионовую кислоту, 2-аминомасляную кислоту, 4-аминомасляную кислоту, 6-аминокапроновую кислоту, 2-аминогептановую кислоту, 2-аминоизомасляную кислоту, 3-аминоизомасляную кислоту, 2-аминопимелиновую кислоту, трет-бутилглицин, 2,4-диаминоизомасляную кислоту (Dap), десмозин, 2,2'-диаминопимелиновую кислоту, 2,3-диаминопропионовую кислоту (Dab), N-этилглицин, N-метилглицин, N-этиласпарагин, гомопролин, гидроксилизин, алло-гидроксилизин, 3-гидроксипролин, 4-гидроксипролин, изодесмозин, алло-изолейцин, N-метилаланин, N-метилглицин, N-метилизолейцин, N-метилпентилглицин, N-метилвалин, нафтилаланин, норвалин, норлейцин, орнитин (Orn), D-орнитин, D-аргинин, п-аминофенилаланиновую кислоту, пентилглицин, пипеколиновую кислоту и тиопролин. Кроме того, также включены природные или неприродные аминокислоты, химически модифицированные по C-концевой карбоксильной группе, N-концевой аминогруппе и/или функциональной группе боковой цепи.
Термин «алкил» относится к насыщенной алифатической алкильной группе, которая представляет собой группу с линейной или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно алкильную группу, содержащую от 1 до 8 атомов углерода, более предпочтительно алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, наиболее предпочтительно алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода. Неограничивающие примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил, н-гептил, 2-метилгексил, 3-метилгексил, 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилпентил, 2,4-диметилпентил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, н-октил, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилгексил, 3,3-диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-этилгексил, 3-этилгексил, 4-этилгексил, 2-метил-2-этилпентил, 2-метил-3-этилпентил, н-нонил, 2-метил-2-этилгексил, 2-метил-3-этилгексил, 2,2-диэтилпентил, н-децил, 3,3-диэтилгексил, 2,2-диэтилгексил и их различные разветвленные изомеры. Более предпочтительными являются низшие алкильные группы, содержащие от 1 до 6 атомов углерода, неограничивающие примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил и т. п. Алкильные группы могут быть замещенными или незамещенными. При замещении заместители могут быть присоединены в любой доступной точке присоединения. Заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, независимо выбранных из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкилокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, карбокси или карбоксилата, предпочтительно в настоящем изобретении представляют собой метил, этил, изопропил, трет-бутил, галогеналкил, дейтерированный алкил, алкоксизамещенный алкил и гидроксизамещенный алкил.
Все из выражений «X выбран из группы, состоящей из A, B или C», «X выбран из группы, состоящей из A, B и C», «X представляет собой A, B или C», «X представляет собой A, B и C» и т. п. имеют одно и то же значение, то есть, что X может представлять собой любой один или более из A, B и C.
«Модификация» аминокислот, описанная в этом патенте, относится к замене, добавлению или удалению аминокислот, включая замену или добавление любой из 20 природных аминокислот.
Термин «природный GLP-1» относится к пептиду, содержащему последовательность человеческого GLP-1 (7-36 или 7-37), а термин «природный GIP» относится к пептиду, содержащему последовательность человеческого GIP (1-42).
Термины «GLP-1» или «GIP», если они не поясняются дополнительно, относятся к природному GLP-1 или природному GIP, соответственно.
«Замена» аминокислоты, описанная в этом патенте, относится к замене аминокислотного остатка другим аминокислотным остатком.
Термин «полиэтиленгликоль» или «ПЭГ» относится к смеси полимера, полученного конденсацией этиленоксида и воды, которая существует в линейной или разветвленной форме и представлена общей формулой H(OCH2CH2)nOH, где n равно не менее 9. Если не указано иное, этот термин включает полимеры полиэтиленгликоля со средней общей молекулярной массой от 5000 до 40000 дальтон.
Термин «полиэтиленгликоль» или «ПЭГ» используется с числовым суффиксом для обозначения его приблизительной средней молекулярной массы. Например, ПЭГ-5000 относится к полиэтиленгликолю, имеющему среднюю молекулярную массу около 5000 дальтон.
Термин «ПЭГилирование» или подобные термины относится к модификации соединения в естественном состоянии путем связывания цепи ПЭГ с пептидом.
Термин «ПЭГилированный пептид» относится к пептиду, в котором цепь ПЭГ ковалентно связана с пептидом.
Термин «жирная кислота» относится к карбоновой кислоте с длинным хвостом (цепью) жирной кислоты, который может быть насыщенным или ненасыщенным; в настоящем изобретении жирная кислота относится к карбоновой кислоте с C4-C30 линейными или разветвленными алифатическими группами.
Общее определение пептидов, описанное в этом патенте, включает пептиды с модифицированным амино- и карбоксильным концом. Например, аминокислотная последовательность, отнесенная к природной аминокислоте, также включает аминокислотную цепь, содержащую концевую карбоновую кислоту, замещенную амидной группой.
Атомы водорода, описанные в настоящем изобретении, могут быть заменены его изотопом дейтерием, и любой атом водорода в примерах соединений согласно настоящему изобретению также может быть заменен атомом дейтерия.
«Необязательный» или «необязательно» означает, что событие или обстоятельство, следующее за этим термином, может, но не обязательно должно, произойти, и описание включает случаи, в которых событие или обстоятельство происходит или не происходит. Например, «гетероциклическая группа, необязательно замещенная алкильной группой» означает, что алкильная группа может (но не обязательно должна) присутствовать, и описание включает случаи, когда гетероциклическая группа замещена алкильной группой, и случаи, когда гетероциклическая группа не замещена алкильной группой.
«Замещенный» относится к одному или более атомам водорода в группе, предпочтительно до 5, более предпочтительно от 1 до 3 атомам водорода, независимо замещенным соответствующим количеством заместителей. Очевидно, что заместители расположены только в возможных химических положениях, и специалисты в данной области техники могут определить (экспериментально или теоретически) возможные или невозможные замены, не прилагая чрезмерных усилий. Например, связь аминогруппы или гидроксильной группы, содержащей свободный атом водорода, с атомом углерода, имеющим ненасыщенную связь (например, олефиновую), может быть нестабильной.
«Фармацевтическая композиция» относится к смеси, содержащей одно или более соединений, описанных в настоящем документе, или их физиологически/фармацевтически приемлемую соль или пролекарство, и другие химические компоненты, такие как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты. Фармацевтическая композиция предназначена для облегчения введения в организм, облегчения абсорбции активного ингредиента и, таким образом, оказания биологического эффекта.
«Фармацевтически приемлемая соль» относится к соли соединения согласно настоящему изобретению, которая является безопасной и эффективной при применении у млекопитающих in vivo и обладает ожидаемой биологической активностью.
Подробное описание частных вариантов осуществления
Для более подробного описания настоящего изобретения в данном описании представлены следующие конкретные варианты осуществления, но техническое решение настоящего изобретения не ограничивается такими вариантами осуществления.
1. Реагенты для экспериментов
2. Оборудование для эксперимента
3. Подробный порядок проведения эксперимента
3.1 Химический синтез соединения полипептидного остова № 1
3.1.1 Сочетание Fmoc-L-Lys(Boc)-OH с амидной смолой Ринка ChemMatrix
Амидную смолу Ринка ChemMatrix (Biotage, 0,1 ммоль) взвешивали и помещали в одноразовую полипропиленовую пробирку для твердофазных реакций полипептидного синтеза; добавляли ДМФА (10 мл) для набухания смолы при продувании азотом в течение 10 минут; удаляли ДМФА в вакууме и добавляли ДМФА (10 мл) для промывки смолы; промывку повторяли дважды; Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (1 ммоль), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4-он (DEPBT) (1 ммоль) и диизопропилэтиламин (DIEA, 2 ммоль) взвешивали и растворяли путем добавления ДМФА (10 мл), а затем нагружали на набухшую амидную смолу Ринка ChemMatrix. Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции смолу дважды поочередно промывали ДМФА и дихлорметаном (ДХМ) и, наконец, трижды промывали ДМФА.
3.1.2 Удаление защитной группы Fmoc с Fmoc-L-Lys(Boc)-амидной смолы Ринка
Пиперидин/ДМФА (20%, 10 мл) добавляли в пробирку для твердофазных реакций, содержащую Fmoc-L-Lys(Boc)-амидную смолу Ринка. Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 10 минут; затем добавляли пиперидин/ДМФА (20%, 10 мл) и встряхивали при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем удаляли. После завершения реакции смолу 4 раза промывали ДМФА (10 мл).
3.1.3 Сочетание последовательностей пептидной цепи
В соответствии с последовательностью пептидной цепи соединения № 1, в направлении от аминоконца к карбоксильному концу (H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys-NH2), количество производных аминокислот и реагентов для конденсации и методы их конденсации были такими же, как те, которые использовались для сочетания Fmoc-L-Lys(Boc)-OH с амидной смолой Ринка ChemMatrix. В процессе синтеза использовали следующие аминокислотные остатки: Fmoc-L-His(Trt)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-L-Thr(tBu)-OH, Fmoc-L-Phe-OH, Fmoc-L-Ser(tBu)-OH, Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-L-Val-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-L-Ala-OH, Fmoc-L-Lys(Boc)-OH, Fmoc-L-Ile-OH, Fmoc-L-Trp(Boc)-OH, Fmoc-L-Leu-OH, Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH и Fmoc-L-Pro-OH. Конденсацию производных аминокислот и снятие Fmoc-защиты повторяли, с получением в конечном итоге связанного со смолой пептида, содержащего полипептидную последовательность соединения № 1.
3.1.4 Отщепление пептидов от смолы
Связанный со смолой пептид, полученный на стадии 3, три раза последовательно промывали ДМФА и ДХМ, а затем сушили в вакууме. Затем добавляли 10 мл свежеприготовленного лизата (трифторуксусная кислота:триизопропилсилан:вода = 90:5:5, об.:об.:об.). Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции проводили фильтрацию, и смолу дважды промывали трифторуксусной кислотой. Фильтрат объединяли, а затем добавляли большое количество замороженного безводного изопропилового эфира для осаждения твердого вещества. После центрифугирования супернатант удаляли и получали неочищенный продукт полипептида соединения № 1.
3.1.5 Очистка неочищенных пептидов с помощью обращённо-фазовой жидкостной хроматографии
Неочищенный пептид растворяли в смешанном растворителе, содержащем 0,1% трифторуксусной кислоты и 20% смеси ацетонитрил/вода, фильтровали через мембрану с порами 0,22 мкм и подвергали выделению с использованием системы обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии WATERS Prep150 LC. Буфер A (0,1% трифторуксусной кислоты, 10% ацетонитрила в воде) и B (0,1% трифторуксусной кислоты, 90% ацетонитрила в воде). Использованная здесь хроматографическая колонка представляла собой хроматографическую колонку с обращенной фазой X-SELECT OBD C-18 (WATERS). Во время процесса очистки длина волны детектирования для хроматографии была установлена на 220 нм, а скорость потока составляла 20 мл/мин. Релевантные фракции продукта собирали и лиофилизировали с получением чистого продукта полипептида соединения № 1 с выходом 20%. Идентификацию чистого продукта полипептида и определение его чистоты осуществляли с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии и жидкостной хроматомасс-спектрометрии. Чистота составила 95,38%, а молекулярная масса соединения составила 4218,4.
3.2 Химический синтез соединений № 2-24, 34-48, 63-73 и 78-80
Полипептидные соединения согласно настоящему изобретению, соответствующие соединениям № 2-24, 34-48, 63-73 и 78-80, были синтезированы в соответствии с порядком проведения эксперимента для соединения 1, и чистота и молекулярная масса соединений были определены с помощью аналитической сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии и жидкостной хроматомасс-спектрометрии. Конкретные данные приведены в таблице 1 ниже:
3.3 Химический синтез соединения № 25, связанного с жирной кислотой
3.3.1 Сочетание Fmoc-L-Lys(Mtt)-OH с амидной смолой Ринка ChemMatrix
Амидную смолу Ринка ChemMatrix (Biotage, 0,1 ммоль) взвешивали и помещали в одноразовую полипропиленовую пробирку для твердофазных реакций полипептидного синтеза, добавляли ДМФА (10 мл) для набухания смолы при продувании азотом в течение 10 минут; удаляли ДМФА в вакууме и добавляли ДМФА (10 мл) для промывки смолы; промывку повторяли дважды; Fmoc-L-Lys(Mtt)-OH (1 ммоль), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4-он (DEPBT) (1 ммоль) и диизопропилэтиламин (DIEA, 2 ммоль) взвешивали и растворяли путем добавления ДМФА (10 мл), а затем нагружали на набухшую амидную смолу Ринка ChemMatrix. Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции смолу дважды поочередно промывали ДМФА и дихлорметаном (ДХМ) и, наконец, трижды промывали ДМФА.
3.3.2 Снятие Fmoc-защиты и удлинение пептидной цепи
Снятие Fmoc-защиты с Fmoc-L-Lys(Mtt)-амидной смолы Ринка ChemMatrix и последующее удлинение пептидной цепи проводили в соответствии с тем же методом синтеза, что и в примере 1, с получением связанного со смолой пептида, содержащего соединение № 25, где Boc-L-Tyr(t-Bu)-OH использовали в качестве N-концевого аминокислотного остатка.
3.3.3 Снятие Mtt-защиты и модификация боковой цепи лизина связанного со смолой пептида
После завершения вышеуказанного удлинения связанного со смолой пептида добавляли смесь гексафторизопропанол/дихлорметан (30%, 10 мл), встряхивали и подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение 45 минут, а затем удаляли. Затем вновь добавляли смесь гексафторизопропанол/дихлорметан (30%, 10 мл), встряхивали и подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение 45 минут, а затем удаляли. После завершения реакции смолу 6 раз промывали ДМФА. Дополнительный цикл сочетания/снятия защиты с использованием стратегии твердофазного синтеза с использованием Fmoc/tBu для удлинения боковой цепи лизина проводили с Fmoc-NH-PEG2-COOH, Fmoc-L-Glu-OtBu и HOOC-(CH2)16-COOt-Bu. При всех реакциях сочетания реакцию проводили при комнатной температуре, и 1 ммоль аминокислотной конструкции, 1 ммоль DEPBT и 2 ммоль DIEA подвергали взаимодействию в ДМФА в течение 4 часов.
3.3.4 Отщепление и очистка продукта
Связанный со смолой пептид, полученный в результате вышеуказанных стадий, дважды последовательно промывали ДМФА и ДХМ, а затем сушили в вакууме. Затем добавляли свежеприготовленный лизат (трифторуксусная кислота:триизопропилсилан:вода = 90:5:5, об.:об.:об.). Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции проводили фильтрацию, и смолу дважды промывали трифторуксусной кислотой. Фильтрат объединяли, а затем добавляли большое количество замороженного безводного изопропилового эфира для осаждения твердого вещества. После центрифугирования супернатант удаляли и получали неочищенный продукт полипептида соединения № 25.
3.3.5 Очистка соединения 25 с помощью обращённо-фазовой жидкостной хроматографии
Неочищенный пептид растворяли в смешанном растворителе, содержащем 0,1% трифторуксусной кислоты и 20% смеси ацетонитрил/вода, фильтровали через мембрану с порами 0,22 мкм и подвергали выделению с использованием системы обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии WATERS Prep150 LC. Буфер A (0,1% трифторуксусной кислоты, 10% ацетонитрила в воде) и B (0,1% трифторуксусной кислоты, 90% ацетонитрила в воде). Использованная здесь хроматографическая колонка представляла собой хроматографическую колонку с обращенной фазой X-SELECT OBD C-18. Во время процесса очистки длина волны детектирования для хроматографии была установлена на 220 нм, а скорость потока составляла 20 мл/мин. Релевантные фракции продукта собирали и лиофилизировали с получением чистого продукта полипептида соединения № 25 с выходом 18%. Чистоту и молекулярную массу чистого продукта полипептида определяли с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии и жидкостной хроматомасс-спектрометрии. Чистота составила 96,23%, а молекулярная масса соединения составила 5008,6.
3.4 Химический синтез соединений № 26-33 и 49-62
Полипептидные соединения согласно настоящему изобретению (соединения № 26-33) были синтезированы в соответствии со схемой эксперимента для соединения 25, и чистота и молекулярная масса соединений были определены с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии и жидкостной хроматомасс-спектрометрии. Конкретные данные приведены в таблице 2 ниже:
3.5 Химический синтез соединения № 74
3.5.1 Сочетание Fmoc-L-Lys(Mtt)-OH с амидной смолой Ринка ChemMatrix
Амидную смолу Ринка ChemMatrix (Biotage, 0,1 ммоль) взвешивали и помещали в одноразовую полипропиленовую пробирку для твердофазных реакций полипептидного синтеза, добавляли ДМФА (10 мл) для набухания смолы при продувании азотом в течение 10 минут; удаляли ДМФА в вакууме и добавляли ДМФА (10 мл) для промывки смолы; промывку повторяли дважды; Fmoc-L-Lys(Mtt)-OH (1 ммоль), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4-он (DEPBT) (1 ммоль) и диизопропилэтиламин (DIEA, 2 ммоль) взвешивали и растворяли путем добавления ДМФА (10 мл), а затем нагружали на набухшую амидную смолу Ринка ChemMatrix. Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции смолу дважды поочередно промывали ДМФА и дихлорметаном (ДХМ) и, наконец, трижды промывали ДМФА.
3.5.2 Снятие Fmoc-защиты и удлинение пептидной цепи
Снятие Fmoc-защиты с Fmoc-L-Lys(Mtt)-амидной смолы Ринка ChemMatrix и последующее удлинение пептидной цепи проводили в соответствии с тем же методом синтеза, что и в примере 1, с получением связанного со смолой пептида, содержащего соединение № 74, где Boc-L-Tyr(t-Bu)-OH использовали в качестве N-концевого аминокислотного остатка.
3.5.3 Снятие Mtt-защиты и модификация боковой цепи лизина связанного со смолой пептида
После завершения вышеуказанного удлинения связанного со смолой пептида добавляли смесь гексафторизопропанол/дихлорметан (30%, 10 мл), встряхивали и подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение 45 минут, а затем удаляли. Затем вновь добавляли смесь гексафторизопропанол/дихлорметан (30%, 10 мл), встряхивали и подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение 45 минут, а затем удаляли. После завершения реакции смолу 6 раз промывали ДМФА. Дополнительный цикл сочетания/снятия защиты с использованием стратегии твердофазного синтеза с использованием Fmoc/tBu для удлинения боковой цепи лизина проводили с Fmoc-NH-PEG2-COOH, Fmoc-L-Glu-OtBu и HOOC-(CH2)18-COOt-Bu. При всех реакциях сочетания реакцию проводили при комнатной температуре, и 1 ммоль аминокислотной конструкции, 1 ммоль DEPBT и 2 ммоль DIEA подвергали взаимодействию в ДМФА в течение 4 часов.
3.5.4 Отщепление и очистка продукта
Связанный со смолой пептид, полученный в результате вышеуказанных стадий, дважды последовательно промывали ДМФА и ДХМ, а затем сушили в вакууме. Затем добавляли свежеприготовленный лизат (трифторуксусная кислота:триизопропилсилан:вода = 90:5:5, об.:об.:об.). Реакцию проводили при встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции проводили фильтрацию, и смолу дважды промывали трифторуксусной кислотой. Фильтрат объединяли, а затем добавляли большое количество замороженного безводного простого изопропилового эфира для осаждения твердого вещества. После центрифугирования супернатант удаляли и получали неочищенный продукт полипептида соединения № 74.
3.5.5 Очистка соединения 74 с помощью обращённо-фазовой жидкостной хроматографии
Неочищенный пептид растворяли в смешанном растворителе, содержащем 0,1% трифторуксусной кислоты и 20% смеси ацетонитрил/вода, фильтровали через мембрану с порами 0,22 мкм и подвергали выделению с использованием системы обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии WATERS Prep150 LC. Буфер A (0,1% трифторуксусной кислоты, 10% ацетонитрила в воде) и B (0,1% трифторуксусной кислоты, 90% ацетонитрила в воде). Использованная здесь хроматографическая колонка представляла собой хроматографическую колонку с обращенной фазой X-SELECT OBD C-18. Во время процесса очистки длина волны детектирования для хроматографии была установлена на 220 нм, а скорость потока составляла 20 мл/мин. Релевантные фракции продукта собирали и лиофилизировали с получением чистого продукта полипептида соединения № 74 с выходом 18%. Чистоту и молекулярную массу чистого продукта полипептида определяли с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии и жидкостной хроматомасс-спектрометрии. Чистота составила 95,14%, а молекулярная масса соединения составила 5020,6.
3.6 Химический синтез соединений № 75-77 и 81-83
Полипептидные соединения согласно настоящему изобретению (соединения № 75-77 и 81-83) были синтезированы в соответствии со схемой эксперимента для соединения 74, и чистота и молекулярная масса соединений были определены с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии и жидкостной хроматомасс-спектрометрии. Конкретные данные приведены в таблице 3 ниже:
Биологическое исследование и оценка
Следующие тестовые примеры приведены для дополнительного описания настоящего изобретения, но не предназначены для ограничения объема изобретения.
1. Реагенты для экспериментов
2. Оборудование для эксперимента
3. Тестовый пример
3.1. Оценка агонистической активности тестируемых соединений в отношении рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1R)
3.1.1 Цель эксперимента:
Целью этого тестового примера является измерение агонистической активности пронумерованных соединений в отношении рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1R).
3.1.2 Методика эксперимента:
Замороженную стабильно трансфицированную клеточную линию CHO-K1/GLP-1R/CRE-luc (CHO - клетка яичника китайского хомячка, CRE - ответный элемент cAMP, luc -люцефераза) извлекали из резервуара с жидким азотом, быстро размораживали на водяной бане при 37°C и ресуспендировали в среде DMEM/F12 (Gibco, кат. № 11330032). После центрифугирования клетки однократно промывали, ресуспендировали в буфере для эксперимента (среда DMEM/F12, содержащая 0,1% казеина (Sigma, кат. № C3400)), и регулировали плотность клеток с помощью буфера для эксперимента. Клетки высевали с плотностью 2500 клеток/5 мкл/лунку в 384-луночный планшет (Sigma, кат. № CLS4514), а затем в каждую лунку добавляли 2,5 мкл рабочего раствора IBMX (Sigma, кат. № I7018), полученного с буферным раствором (конечная концентрация IBMX составляла 0,5 мМ), и 2,5 мкл последовательно разбавленных образцов полипептида, центрифугировали при 1000 об./мин в течение 1 минуты, встряхивали в течение 30 секунд для хорошего перемешивания и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Для определения использовали набор cAMP-Gs Dynamic kit от Cisbio (Cisbio, кат. № 62AM4PEC). cAMP-d2 и антитело к cAMP-Eu3+-криптат разбавляли в 20 раз буфером для лизиса и определения cAMP, соответственно, и хорошо перемешивали. В каждую лунку добавляли 5 мкл разбавленного раствора cAMP-d2, а затем в каждую лунку добавляли 5 мкл разбавленного раствора антитела к cAMP-Eu3+-криптат, встряхивали в течение 30 секунд для хорошего перемешивания и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа в темноте.
3.1.3 Метод обработки экспериментальных данных:
Сигналы HTRF (гомогенной флуоресценции с временным разрешением) считывали с помощью считывающего устройства для микропланшетов Biotek Synergy H1 с длиной волны возбуждения 320 нм и длиной волны испускания 620 и 665 нм. Рассчитывали отношение сигналов (665 нм/620 нм*10000), и осуществляли нелинейную аппроксимацию отношения сигналов к концентрации образца с помощью четырехпараметрического уравнения в GraphPad Prism 6, в результате чего были получены значения EC50. Конкретные данные приведены в таблице 4 ниже.
3.2. Оценка агонистической активности тестируемых соединений в отношении рецептора глюкозозависимого инсулинотропного пептида (GIPR)
3.2.1 Цель эксперимента:
Оценка агонистической активности тестируемых соединений в отношении рецептора глюкозозависимого инсулинотропного пептида (GIPR).
3.2.2 Методика эксперимента:
Клетки CHO-K1 дикого типа собирали, доводили клеточную суспензию до соответствующей плотности, высевали в 6-луночный планшет по 2 мл на лунку и помещали в инкубатор при 37°C, 5% CO2 для прикрепления на ночь. Смесь для трансфекции (плазмида hGIPR, Fugene HD (Promega, кат. № E2311), OptiMEM (Gibco, кат. № 31985070)) хорошо перемешивали, оставляли при комнатной температуре на 15 минут и добавляли в количестве 100 мкл в соответствующую лунку с клетками. После трансфекции клеток CHO-K1 в течение 24 часов hGIPR сверхэкспрессировался на клеточной поверхности. После временной трансфекции клетки в 6-луночном планшете собирали и однократно промывали буфером для эксперимента (среда DMEM/F12 (Gibco, кат. № 11330032), содержащая 0,1% казеина (Sigma, кат. № C3400)), и регулировали плотность клеток с помощью буфера для эксперимента. Клетки высевали с плотностью 5000 клеток/5 мкл/лунку в 384-луночный планшет (Sigma, кат. № CLS4514), а затем в каждую лунку добавляли 2,5 мкл рабочего раствора IBMX (Sigma, кат. № I7018), полученного с буферным раствором (конечная концентрация IBMX составляла 0,5 мМ), и 2,5 мкл последовательно разбавленных образцов полипептида, центрифугировали при 1000 об./мин в течение 1 минуты, встряхивали в течение 30 секунд для хорошего перемешивания и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Для определения использовали набор cAMP-Gs () Dynamic kit от Cisbio (Cisbio, кат. № 62 AM4PEC). cAMP-d2 и антитело к cAMP-Eu3+-криптат разбавляли в 20 раз буфером для лизиса и определения cAMP, соответственно, и хорошо перемешивали. В каждую лунку добавляли 5 мкл разбавленного раствора cAMP-d2, а затем в каждую лунку добавляли 5 мкл разбавленного раствора антитела к cAMP-Eu3+-криптат, встряхивали в течение 30 секунд для хорошего перемешивания и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа в темноте.
3.2.3 Метод обработки экспериментальных данных:
Сигнал HTRF считывали с помощью считывающего устройства для микропланшетов Biotek Synergy H1 с длиной волны возбуждения 320 нм и длиной волны испускания 620 и 665 нм. Рассчитывали отношение сигналов (665 нм/620 нм*10000), и осуществляли нелинейную аппроксимацию отношения сигналов к концентрации образца с помощью четырехпараметрического уравнения в GraphPad Prism 6, в результате чего были получены значения EC50. Конкретные данные приведены в таблице 4 ниже.
Агонистическая активность соединений полипептидного остова в отношении человеческих рецепторов GLP-1R и GIPR.
(EC50, нМ)
(EC50, нМ)
Вывод эксперимента:
Путем конструирования и изучения полипептидного скелета/остова настоящее изобретение наделено сильной агонистической активностью и потенциально может обеспечить лучшее лечение метаболических заболеваний, чем многие двойные агонисты рецепторов GLP-1/GIP, известные в этой области.
Агонистическая активность полипептидных соединений, связанных с жирной кислотой, в отношении человеческих рецепторов GLP-1R и GIPR.
(EC50, нМ)
(EC50, нМ)
Вывод эксперимента:
В изобретении было обнаружено, что изменения активности различных пептидных скелетов после конъюгирования с жирными кислотами не одинаковы, и пептидный скелет согласно настоящему изобретению может по-прежнему сохранять хорошую активность в отношении рецепторов GLP-1 и GIP после модификации путем связывания с жирной кислотой.
3.3 Стабильность полипептидного остова и полипептидного соединения, связанных с жирной кислотой
Стабильность в плазме очень важна для терапевтических полипептидных агентов, потому что полипептидные агенты в большинстве чувствительны к полипептидной гидролазе и протеолитическим ферментам в плазме. Нестабильность полипептидов в плазме влияет на их период полужизни и эффективность.
3.3.1 Цель эксперимента:
Цель этого эксперимента состоит в том, чтобы проверить стабильность пронумерованных соединений в плазме. Чтобы сравнить стабильность пронумерованных соединений с соединениями уровня техники, в этом эксперименте также были протестированы предпочтительные соединения полипептидных остовов 023 (H23) и 024 (H24) и предпочтительное модифицированное соединение 089 (H89), описанные в патентной заявке WO2012/167744.
3.3.2 Методика эксперимента:
Пять микролитров образцов с концентрациями 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 10000 нг/мл добавляли в 45 мкл плазмы крыс SD (Спрег-Доули), определяли содержание соединения с помощью ЖХ-МС (жидкостная масс-спектрометрия) и строили градуировочную кривую. К 45 мкл плазмы крыс SD добавляли 5 мкл раствора полипептида с концентрацией 1 мг/мл. Для каждого тестируемого соединения готовили пять образцов и брали по 1 образцу через 0 мин, 30 мин, 60 мин, 120 мин и 240 мин, соответственно. Содержание остаточных соединений определяли с помощью ЖХ-МС. Содержание в 0 мин использовали в качестве контроля (100%), и рассчитывали относительные содержания остаточного соединения в образце в других временных точках. Метод ЖХ-МС для определения соединений был следующим: готовили 5% раствор ацетонитрила в качестве раствора A и 95% раствор ацетонитрила в качестве раствора B; вводили 15 мкл образцов со скоростью потока 0,6 мл/мин, градиент растворителя соответствовал продолжительности и соотношениям растворителей, приведенным в следующей таблице; содержание соединения определяли с помощью колонки для обнаружения Raptor Biphenyl 2,7 мкм.
3.3.3 Результаты эксперимента:
1) Данные в отношении стабильности полипептидного остова в плазме, полученные с помощью описанных выше методик экспериментов, приведены в таблице 6:
3.3.4 Вывод эксперимента:
С помощью исследования было обнаружено, что соединения согласно настоящему изобретению могут сохранять стабильное содержание в плазме (относительное содержание более 95%), что свидетельствует о том, что соединения согласно настоящему изобретению обладают желаемой применимостью в качестве лекарственного средства и имеют благоприятный потенциал для лечения заболеваний. Стабильность соединений согласно настоящему изобретению в плазме превосходит стабильность соединений H23 и H24 уровня техники.
2) Данные в отношении стабильности в плазме полипептидов, связанных с жирной кислотой, полученные с помощью описанных выше методик экспериментов, приведены в таблице 7:
Вывод эксперимента:
Было обнаружено, что соединение 74 согласно настоящему изобретению более стабильно в плазме во временной точке 4 часа (относительное содержание более 90%), чем соединение 75 и соединение H89 уровня техники.
3.4 Фармакокинетика полипептидов, связанных с жирными кислотами, у мышей
Стабильность в плазме является одним из факторов, влияющих на фармакокинетику полипептидных агентов. На фармакокинетику полипептидных агентов in vivo также влияют такие факторы, как их абсорбция и клиренс в организме.
3.4.1 Цель эксперимента:
Целью этого эксперимента является изучение фармакокинетики in vivo у мышей (в плазме) пронумерованных соединений, вводимых путем однократной внутривенной инъекции мышам Balb/c в качестве подопытных животных.
3.4.2 Методика эксперимента:
Самцы мышей Balb/c массой 18-30 г и возрастом 7-9 недель были приобретены у Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., Ltd. Подготавливали растворы пронумерованных соединений в 20 мМ цитратном буфере (pH равно 7,0), а затем вводили мышам через хвостовую вену в дозе 30 наномоль на килограмм массы тела. Отбирали по 0,2 мл крови во временных точках 0 часов, 0,083 часа, 0,25 часа, 0,5 часа, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 8 часов, 24 часа и 32 часа. Собранную мышиную кровь центрифугировали при 6000 об./мин в течение 6 минут при температуре 4°C для выделения плазмы. Содержание пронумерованного соединения в мышиной плазме определяли с помощью методики эксперимента из тестового примера 3.3.
3.4.3 Результаты эксперимента:
Конкретные данные, полученные с помощью описанной выше методики эксперимента, приведены в таблице 8:
3.4.4 Вывод эксперимента:
С помощью исследования было обнаружено, что соединения согласно настоящему изобретению обладают благоприятными фармакокинетическими характеристиками у мышей, что указывает на их преимущества при лечении заболеваний.
3.5 Фармакокинетика полипептидов, связанных с жирными кислотами, у крыс
3.5.1 Цель эксперимента:
В целях дальнейшего изучения фармакокинетики соединений согласно настоящему изобретению этот эксперимент был предназначен для изучения фармакокинетики in vivo у крыс (в плазме) пронумерованных соединений, вводимых путем однократной подкожной инъекции крысам SD в качестве подопытных животных.
3.5.2 Методика эксперимента:
Самцы мышей SD массой 150-300 г были приобретены у Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., Ltd. Подготавливали растворы пронумерованных соединений в 20 мМ цитратном буфере (pH=7,0), а затем вводили крысам с помощью подкожной инъекции в дозе 50 наномоль на килограмм массы тела. Отбирали по 0,2 мл крови во временных точках 0 часов, 0,5 часа, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 8 часов, 24 часа, 32 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов и 120 часов. Собранную крысиную кровь центрифугировали при 6000 об./мин в течение 6 минут при температуре 4°C для выделения плазмы. Содержание пронумерованного соединения в крысиной плазме определяли с помощью методики эксперимента из тестового примера 3.3.
3.5.3 Результаты эксперимента:
Конкретные данные, полученные с помощью описанной выше методики эксперимента, приведены в таблице 9:
3.5.4 Вывод эксперимента:
С помощью исследования было обнаружено, что соединения согласно настоящему изобретению обладают благоприятными фармакокинетическими характеристиками у мышиных, что указывает на их преимущества при лечении заболеваний.
3.6 Эффективность полипептидов, связанных с жирной кислотой, in vivo
3.6.1 Цель эксперимента:
Проверить влияние подкожного введения пронумерованных соединений на регулирование уровня глюкозы в крови у мышей с пищевым ожирением.
3.6.2 Методика эксперимента:
Мыши C57BL/6 с ожирением, вызванным пищей с высоким содержанием жира (самцы, массой 35-55 г и возрастом 10-12 недель), были приобретены у Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., Ltd. Мышам C57BL/6 с пищевым ожирением с помощью подкожной инъекции вводили пронумерованные соединения (3 наномоль/кг массы тела), а затем мышей не кормили, но предоставляли им свободный доступ к воде. Через 18 часов с помощью внутрибрюшинной инъекции вводили раствор глюкозы концентрацией 0,2 г/мл в дозе 2 г/кг массы тела. Согласно плану эксперимента, брали кровь из хвоста мышей во временных точках 0 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин и 120 мин для измерения уровней глюкозы в крови. В частности, мышь физически фиксировали и обнажали хвост, отрезали кончик хвоста и сжимали до кровотечения. Первую каплю крови сливали, а затем измеряли уровень глюкозы в крови с помощью глюкометра ACCU-CHEK Active (Roche). На основании полученного результата для каждой точки рассчитывали площадь под кривой (AUC) уровня глюкозы в крови.
3.6.3 Результаты эксперимента:
Конкретные данные, полученные с помощью описанной выше методики эксперимента, приведены в таблице 10:
(ммоль/л*ч)
**значимая разница по сравнению с AUC глюкозы в крови соединения 74, P=0,002.
3.6.4 Вывод эксперимента:
В этом эксперименте соединения согласно настоящему изобретению демонстрируют значительное гипогликемическое действие в дозе 3 наномоль/кг массы тела, и AUC глюкозы в крови для группы соединения 74 была снижена более чем на 80% по сравнению с таковой у группы плацебо. AUC глюкозы в крови значительно отличается от таковой у соединения H89 и семаглутида с известной из уровня техники активностью в отношении GLP-1.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ЦЗЯНСУ ХЭНСОХ ФАРМАСЬЮТИКАЛ ГРУП КО., ЛТД.
ШАНХАЙ ХЭНСОХ БИОМЕДИКАЛ КО., ЛТД.
<120> МУЛЬТИРЕЦЕПТОРНЫЙ АГОНИСТ И ЕГО МЕДИЦИНСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 702028CPCT
<140> PCT/CN2020/084247
<141> 2020-04-10
<150> 201910290162.6
<151> 2019-04-11
<150> 201911120906.6
<151> 2019-11-15
<160> 84
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 1
His Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 2
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 2
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 3
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 3
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 4
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 4
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 5
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 5
His Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 6
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 6
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 7
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 7
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 8
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 8
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Glu Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 9
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 9
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 10
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 10
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 11
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 11
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 12
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 12
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Aib
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 13
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 13
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 14
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 14
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 15
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 15
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 16
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 16
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 17
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 17
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Aib Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 18
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 18
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Aib
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 19
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 19
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 20
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 20
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 21
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 21
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 22
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 22
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Aib
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 23
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 23
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 24
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 24
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 25
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 25
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 26
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 26
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 27
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 27
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 28
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 28
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 29
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 29
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 30
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 30
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 31
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 31
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 32
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 32
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 33
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 33
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 34
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 34
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Gln Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 35
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 35
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Gln Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 36
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 36
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 37
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 37
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 38
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 38
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Ile Ala Gln Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 39
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 39
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Aib Gln Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 40
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 40
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 41
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 41
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 42
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 42
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 43
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 43
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 44
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 44
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 45
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 45
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 46
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 46
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 47
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 47
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 48
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 48
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 49
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 49
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 50
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 50
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 51
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 51
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 52
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 52
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 53
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 53
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 54
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 54
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 55
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 55
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 56
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 56
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 57
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 57
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 58
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 58
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 59
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 59
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Aib Ala Lys Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 60
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 60
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 61
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 61
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 62
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 62
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 63
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 63
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 64
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 64
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 65
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 65
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 66
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 66
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 67
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 67
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 68
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 68
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 69
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 69
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 70
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 70
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 71
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 71
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 72
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 72
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 73
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 73
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 74
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 74
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 75
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 75
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 76
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 76
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 77
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 77
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Ile Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 78
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 78
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 79
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 79
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Gln Trp Leu Ile Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 80
<211> 39
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 80
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Ile Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 81
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 81
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 82
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 82
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Gln Trp Leu Ile Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 83
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<400> 83
Tyr Aib Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Ile Ala Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 84
<211> 40
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222>
<223> Аналог GLP-1
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (1)..(1)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Tyr или His
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (2)..(2)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Aib или D-Ala
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (10)..(10)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Val или Tyr.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (12)..(12)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Ser или Ile.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (15)..(15)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Asp или Glu.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (16)..(16)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Glu, Gly, Lys или Aib.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (17)..(17)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Glu, Ile или Gln.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (18)..(18)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Ala, Aib или His.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (19)..(19)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Ala, Aib или Gln.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (20)..(20)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Gln, Glu, Lys или Y1.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (23)..(23)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Ile или Val.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (24)..(24)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Ala, Asn или Gln.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (27)..(27)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Val или Leu.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (28)..(28)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Arg или Ala.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (29)..(29)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Gly или Gln.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (30)..(30)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом,
предпочтительно Gly, Lys или Y1.
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (40)..(40)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой или неприродной
аминокислотой, или состоящим из них пептидным фрагментом, или Xaa
может отсутствовать; предпочтительно Lys, или Y1, или отсутствует.
<400> 84
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<---
Изобретение относится к производным аналога глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и его фармацевтически приемлемым солям, которые обладают двойным агонистическим действием на рецептор человеческого глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и рецептор глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), и может использоваться для лечения инсулиннезависимого диабета, инсулинозависимого диабета, ожирения и других родственных заболеваний. 5 н. и 17 з.п. ф-лы, 10 табл.
1. Аналог GLP-1 (глюкагоноподобный пептид-1) или его форма фармацевтически приемлемой соли, включающий общую формулу (I):
X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-X19-X20-Glu-Phe-X23-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-X40
(I),
где:
X1 выбран из аминокислотного остатка Tyr;
X2 выбран из аминокислотного остатка Aib;
X10 выбран из аминокислотного остатка Tyr;
X12 выбран из аминокислотного остатка Ile,
X15 выбран из аминокислотного остатка Glu;
X16 выбран из аминокислотного остатка Glu, Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu, Ile;
X18 выбран из аминокислотного остатка Ala;
X19 выбран из аминокислотного остатка Ala;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1;
X23 выбран из аминокислотного остатка Ile или Val;
X24 выбран из аминокислотного остатка Ala, Asn или Gln;
X27 выбран из аминокислотного остатка Leu;
X28 выбран из аминокислотного остатка Ala;
X29 выбран из аминокислотного остатка Gly;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует;
Y1 представляет собой остаток Lys, в котором боковая цепь связана с заместителем, представленным формулой {[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил}a-(y-Glu)b-CO-(CH2)c-COOH;
a представляет собой целое число от 1 до 3;
b представляет собой целое число от 1 до 2;
c представляет собой целое число от 10 до 30.
2. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, модифицированный на обоих его концах следующим образом:
R1-X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-X19-X20-Glu-Phe-X23-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-X40-R2
(II),
где:
R1 представляет собой H, алкил, ацетил, формил, бензоил, трифторацетил или pGlu;
R2 представляет собой -NH2 или -OH;
X1, X2, X10, X12, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X27, X28, X29, X30 и X40 являются такими, как определено в п. 1.
3. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 выбран из аминокислотного остатка Glu, Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu, Ile;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln;
X23 выбран из аминокислотного остатка Ile или Val;
X24 выбран из аминокислотного остатка Ala, Asn или Gln;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
4. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 выбран из аминокислотного остатка Glu, Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu, Ile;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1;
X23 выбран из аминокислотного остатка Ile или Val;
X24 выбран из аминокислотного остатка Ala, Asn или Gln;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Y1.
5. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 выбран из аминокислотного остатка Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val;
X24 выбран из аминокислотного остатка Asn или Gln;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
6. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X17 представляет собой аминокислотный остаток Glu;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val,
X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
7. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X17 представляет собой аминокислотный остаток Ile;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val;
X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
8. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile;
X20 выбран из аминокислотного остатка Gln, Lys или Y1;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val,
X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
9. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile;
X20 представляет собой аминокислотный остаток Gln;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val,
X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
10. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile;
X20 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val,
X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
11. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, характеризующийся тем, что:
X16 представляет собой аминокислотный остаток Lys;
X17 выбран из аминокислотного остатка Glu или Ile;
X20 представляет собой Y1;
X23 представляет собой аминокислотный остаток Val,
X24 представляет собой аминокислотный остаток Asn;
X30 выбран из аминокислотного остатка Gly или Y1;
X40 выбран из аминокислотного остатка Lys или Y1 или отсутствует.
12. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где каждый из X20, X30 и X40 независимо выбран из Y1.
13. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 3-12, характеризующийся тем, что в определении Y1 a равно 2, b равно 1 или 2, и c равно от 16 до 20.
14. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 3-12, характеризующийся тем, что в определении Y1 a равно 2, b равно 1 или 2, и c равно 16, 18 или 20.
15. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 3-12, характеризующийся тем, что X40 выбран из Y1;
Y1 представляет собой остаток Lys, в котором боковая цепь связана с заместителем, представленным формулой {[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-ацетил}a-(y-Glu)b-CO-(CH2)c-COOH;
a равно 2;
b равно 1 или 2;
c равно 16 или 18.
16. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 3-15, характеризующийся тем, что Y1 ковалентно связан с жирной кислотой через аминогруппу боковой цепи Lys посредством образования амидной связи.
17. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 3-15, характеризующийся тем, что Y1 представляет собой K (-OEG-OEG-yGlu-C18-OH) или K (-OEG-OEG-yGlu-C20-OH), представленный химической формулой, включающей следующую структуру:
или
18. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 3-17, характеризующийся тем, что Y1 ковалентно связан с жирной кислотой через ε-аминогруппу C-концевого Lys посредством амидной связи.
19. Аналог GLP-1 или его фармацевтически приемлемая соль, где аналог GLP-1 выбран из следующих соединений, пронумерованных ниже:
20. Фармацевтическая композиция для лечения инсулиннезависимого диабета, инсулинозависимого диабета или ожирения, содержащая:
1) терапевтическое количество аналога GLP-1 или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-19 и
2) фармацевтически приемлемый эксципиент или фармацевтический носитель.
21. Применение аналога GLP-1 или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-19 или композиции по п. 20 для получения лекарственного средства для лечения инсулиннезависимого диабета, инсулинозависимого диабета или ожирения.
22. Способ лечения инсулиннезависимого диабета, инсулинозависимого диабета или ожирения, включающий введение аналога GLP-1 или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-19 одновременно, по отдельности или последовательно в комбинации с одним или более реагентами, выбранными из группы, состоящей из метформина, тиазолидиндионов, сульфонилмочевины, ингибиторов дипептидилпептидазы и натрийзависимых переносчиков глюкозы.
| ПРОИЗВОДНОЕ АНАЛОГА GLP-1 ИЛИ ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫЕ СОЛИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2010 |
|
RU2565536C2 |
| WO 2013164483 A1, 07.11.2013 | |||
| WO 2015095684 A1, 25.06.2015 | |||
| Jesper Lau | |||
| et al | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| Способ окисления боковых цепей ароматических углеводородов и их производных в кислоты и альдегиды | 1921 |
|
SU58A1 |
| Способ использования делительного аппарата ровничных (чесальных) машин, предназначенных для мериносовой шерсти, с целью переработки на них грубых шерстей | 1921 |
|
SU18A1 |
