РЕЖИМ ВВЕДЕНИЯ ДОЗ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, МОДУЛИРУЕМОГО CSF-1R Российский патент 2025 года по МПК A61K31/426 A61K31/4427 A61K31/4439 A61P21/00 A61P35/00 

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте. Указанная копия в формате ASCII, созданная 15 февраля 2021 года, имеет название PAT058798-WO-PCT_SL.txt, и ее размер составляет 87285 байтов.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к области фармацевтики, в частности, к ингибитору CSF-1R, для применения в лечении заболевания, модулируемого CSF-1R. Например, настоящее изобретение относится к ингибитору CSF-1R для применения в лечении рака или нейродегенеративных заболеваний. Настоящее изобретение также относится к ингибитору CSF-1R или фармацевтической комбинации, содержащей ингибитор CSF-1R или его фармацевтически приемлемую соль и молекулу антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении рака; к способу лечения рака, который включает введение ингибитора CSF-1R или комбинации; и к применению ингибитора CSF-1R или комбинации для изготовления лекарственного препарата для лечения рака.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

CSF-1R представляет собой рецептор для M-CSF (макрофагального колониестимулирующего фактора, также называемого CSF-1) и опосредует биологические эффекты этого цитокина. Клонирование рецептора колониестимулирующего фактора-1 (также называемого c-fms) было впервые описано в Roussel et al., Nature 325:549-552 (1987). В этой публикации было показано, что CSF-1R имеет трансформирующий потенциал, зависящий от изменений в С-концевом хвосте белка, включая потерю ингибирующего фосфорилирования тирозина 969, что связывает Cbl и тем самым регулирует подавление рецептора (Lee et al., EMBO 18:3616-28 (1999)).

CSF-1R является рецепторной тирозинкиназой (RTK) и представителем семейства содержащих иммуноглобулиновые (Ig) мотивы RTK, характеризующихся повторяющимися доменами Ig во внеклеточной части рецептора. Внутриклеточный домен протеинтирозинкиназы прерывается уникальным вставным доменом, который также присутствует в других родственных представителях семейства RTK класса III, включающих рецепторы фактора роста тромбоцитов (PDGFR), рецептор фактора роста стволовых клеток (c-Kit) и fms-подобный цитокиновый рецептор (FLT3). Несмотря на структурную гомологию этого семейства рецепторов фактора роста, они имеют различные тканеспецифические функции.

Основными биологическими эффектами передачи сигнала CSF-1R являются дифференцировка, пролиферация, миграция и выживание макрофагов-предшественников и остеокластов из линии дифференцировки моноцитов. Активация CSF-1R опосредуется его лигандом CSF-1. Связывание CSF-1 с CSF-1R индуцирует образование гомодимеров и активацию киназы путем фосфорилирования тирозина. Дальнейшая передача сигнала опосредуется субъединицей p85 PI3K и Grb2, соединяющейся с путями PI3K/AKT и Ras/MAPK соответственно. Эти два важных пути передачи сигнала могут регулировать пролиферацию, выживание и апоптоз. Другие молекулы передачи сигнала, связывающие фосфорилированный внутриклеточный домен CSF-1R, включают STAT1, STAT3, PLCγ и Cbl (см. Bourette & Rohrschneider, Growth Factors 17:155-166 (2000)).

Животные, нокаутные либо по CSF-1 (мышь op/op; см. Pollard et al., Adv Devel Biochem 4:153-193 (1996)), либо по CSF-1R (Dai XM et al., Blood 99(1):111-20 (2002)), имеют остеопетротический, гемопоэтический, тканевой макрофагальный и репродуктивный фенотипы, соответствующие роли CSF-1R в этих типах клеток.

Существует три различных механизма, посредством которых передача сигнала CSF-1R, вероятно, вовлечена в рост и метастазирование опухолей. Первый заключается в том, что экспрессия CSF-лиганда и рецептора была обнаружена в опухолевых клетках, происходящих из женской репродуктивной системы (молочная железа, яичник, эндометрий) (Scholl J., Nat. Can. Inst. 94:120-126 (1994); Kacinsky et al., Mol. Reprod. Dev. 46:71-74 (1997)), и экспрессия была ассоциирована с ростом ксенотрансплантата рака молочной железы, а также с плохим прогнозом у пациентов с раком молочной железы. Две точечные мутации были обнаружены в CSF-1R у приблизительно 10-20% пациентов с острым миелоцитарным лейкозом, хроническим миелоцитарным лейкозом и миелодисплазией в одном исследовании, и было установлено, что одна из мутаций нарушает оборот рецептора (Rigde et al., PNAS 87:1377-1380 (1990)). Мутации также были обнаружены в некоторых случаях гепатоцеллюлярного рака (Yang et al., Hepatobiliary Pancreat Dis Int 3:86-9 (2004)) и идиопатического миелофиброза (Abu Duhier et al., Br J Haematol 120:464-70 (2003)).

Второй механизм основан на блокировании передачи сигнала через M-CSF/CSF-1R в участках метастазирования в кости, что при ингибировании снижает остеокластогенез, резорбцию кости и остеолитические поражения костей. Было установлено, что рак молочной железы, почки и легкого метастазирует в кости и вызывает остеолитическое заболевание кости, приводящее к скелетным осложнениям. Ингибирование активности киназы CSF-1R в остеокластах с помощью низкомолекулярного ингибитора, вероятно, предотвращает эти связанные со скелетом события при метастатическом заболевании.

Третий механизм основан на недавнем наблюдении того, что ассоциированные с опухолью макрофаги (TAM), обнаруженные в солидных опухолях молочной железы, предстательной железы, яичника и при раковых заболеваниях шейки матки, коррелируют с плохим прогнозом (Bingle et al., J Pathol 196(3):254-65 (2002)). Макрофаги рекрутируются в опухоль с помощью M-CSF и других хемокинов. Затем макрофаги через ТАМ могут способствовать прогрессированию опухоли посредством секреции ангиогенных факторов, протеаз и других факторов роста и могут блокироваться ингибированием передачи сигнала CSF-1R. С другой стороны, известно, что макрофаги оказывают туморицидный эффект посредством фагоцитоза и прямой цитотоксичности. Специфическая роль макрофагов в отношении опухоли все еще нуждается в более глубоком изучении, включая потенциальную пространственную и временную зависимость их функции и связь с конкретными типами опухолей.

Раковые заболевания головного мозга и нервной системы являются одними из наиболее трудно поддающихся лечению. Прогноз для пациентов с этими раковыми заболеваниями зависит от типа и расположения опухоли, а также от стадии ее развития. При многих типах рака головного мозга средняя продолжительность жизни после появления симптома может составлять несколько месяцев или год-два. Лечение состоит в основном из хирургического удаления и лучевой терапии; также используется химиотерапия, но диапазон подходящих химиотерапевтических средств ограничен, возможно, потому, что большинство терапевтических средств не проникают через гематоэнцефалический барьер в достаточной степени для лечения опухолей головного мозга. Использование известных химиотерапевтических средств наряду с хирургическим вмешательством и облучением редко увеличивает выживаемость намного больше, чем при использовании только хирургического вмешательства и облучения. Таким образом, для лечения опухолей головного мозга необходимы улучшенные варианты терапии.

Виды глиомы представляют собой распространенный тип опухоли головного мозга. Они возникают из поддерживающей нейрональной ткани, состоящей из глиальных клеток (отсюда и название глиома), которые поддерживают положение и функцию нейронов. Виды глиомы классифицируются в зависимости от типа глиальных клеток, на которые они похожи: астроцитомы (включая виды глиобластомы) напоминают глиальные клетки астроцитов звездчатой формы, виды олигодендроглиомы напоминают глиальные клетки олигодендроциты, а эпендимомы напоминают эпендимальные глиальные клетки, которые выстилают жидкостные полости головного мозга. В некоторых случаях опухоль может содержать смесь этих типов клеток, и тогда ее называют смешанной глиомой.

Типичным лечением раковых заболеваний головного мозга в настоящее время является хирургическое удаление большей части опухолевой ткани, которое может быть проведено с помощью инвазивного хирургического вмешательства или с использованием биопсии или экстрактивных способов. Однако виды глиомы имеют тенденцию распространяться неравномерно, и их очень трудно удалить полностью. В результате рецидив почти всегда возникает вскоре после удаления опухоли. Лучевая терапия и/или химиотерапия могут применяться в комбинации с хирургическим удалением, но они, как правило, обеспечивают лишь незначительное увеличение продолжительности выживания. Например, недавние статистические данные показали, что только около половины пациентов в США с диагнозом глиобластомы остаются в живых через год после постановки диагноза, и только около 25% остаются в живых через два года, даже при лечении с использованием современных стандартных комбинированных способов лечения.

Мультиформная глиобластома (GBM) является наиболее распространенной первичной опухолью головного мозга у взрослых и печально известна своей летальностью и отсутствием реакции на современные подходы лечения. К сожалению, за последние годы не произошло существенного улучшения вариантов лечения, и перспективы выживания пациентов с GBM улучшились минимально. Таким образом, сохраняется острая необходимость в улучшенных способах лечения раковых заболеваний головного мозга, таких как виды глиомы.

Виды глиомы развиваются в сложном тканевом микроокружении, состоящем из множества различных типов клеток в паренхиме головного мозга в дополнение к самим раковым клеткам. Ассоциированные с опухолью макрофаги (TAM) являются одним из основных типов стромальных клеток и часто составляют значительную часть клеток в опухолевых тканях. Их происхождение точно не установлено: эти ТАМ могут происходить либо из микроглии, резидентной популяции макрофагов в головном мозге, либо они могут быть рекрутированы с периферии.

ТАМ могут модулировать возникновение и прогрессирование опухолей тканеспецифическим образом: в некоторых случаях они подавляют развитие рака, но в большинстве исследований на сегодняшний день они усиливают прогрессирование опухоли. Действительно, в приблизительно 80% раковых заболеваний, при которых наблюдается повышенная инфильтрация макрофагами, повышенные уровни ТАМ ассоциируются с более агрессивным заболеванием и плохим прогнозом для пациентов. Несколько исследований показали, что виды глиомы человека также демонстрируют значительное увеличение числа ТАМ, что коррелирует со степенью опухоли на поздней стадии, и ТАМ обычно являются преобладающим типом иммунных клеток в видах глиом. Однако функция ТАМ в глиомагенезе остается плохо изученной, и в настоящее время неизвестно, представляет ли нацеливание на эти клетки пригодную терапевтическую стратегию. На самом деле в литературе сообщалось о противоположных эффектах на рост опухоли, в некоторых случаях даже при использовании аналогичной экспериментальной стратегии для истощения макрофагов в одной и той же модели имплантации ортотопической глиомы. В некоторых исследованиях TNF-α или интегрин β3, продуцируемый ТАМ, был связан с подавлением роста глиомы, в то время как в других сообщениях CCL2 и MT1-MMP были предложены в качестве энхансеров развития и инвазии опухоли.

Ингибирование передачи сигнала CSF-1R представляет собой новый, трансляционно значимый подход, который был использован в некоторых онкологических контекстах, включая ксенотрансплантаты интратибиальных опухолей кости. Однако пока не показана его эффективность при опухолях головного мозга. На некоторые раковые заболевания, не относящиеся к головному мозгу, нацеливают соединения, которые воздействуют на различные типы клеток, ассоциированные с опухолевыми клетками или поддерживающие их, а не нацеливают непосредственно на сами опухолевые клетки. Например, PLX3397, как сообщается, совместно ингибирует три мишени (FMS, Kit и Flt3-ITD) и подавляющим образом модулирует различные типы клеток, включая макрофаги, микроглию, остеокласты и тучные клетки. PLX3397 был протестирован для лечения лимфомы Ходжкина. Однако лимфома Ходжкина хорошо отвечает на различные химиотерапевтические средства, согласно литературе по PLX3397, в то время как опухоли головного мозга гораздо более устойчивы к химиотерапевтическим средствам и не были успешно вылечены. Как показано в данном документе, ингибитор CSF-1R не оказывал прямого эффекта на пролиферацию клеток глиобластомы в культуре, однако, и не снижал количество клеток-макрофагов в опухолях получавших лечение животных. Таким образом, удивительно, что, как также показано в данном документе, ингибитор CSF-1R может эффективно подавлять рост опухолей мозга in vivo, вызывать уменьшение объема опухоли на поздней стадии GBM и даже, по-видимому, уничтожать некоторые глиобластомы.

Белок-1 запрограммированной гибели клеток (PD-1) является представителем-ингибитором из обширного семейства CD28/CTLA4 регуляторов T-клеток (Okazaki et al. Curr. Opin. Immunol. 2002, 14, 391779; Bennett et al. J. Immunol. 2003, 170, 711). Лиганды рецептора CD28 включают группу родственных молекул В7, также известных как "суперсемейство В7" (Coyle et al. Nature Immunol. 2001, 2(3), 203; Sharpe et al. Nature Rev. Immunol. 2002, 2, 116; Collins et al. Genome Biol. 2005, 6, 223.1; Korman et al. Adv. Immunol. 2007, 90, 297). Известно несколько членов суперсемейства В7, в том числе В7.1 (CD80), В7.2 (CD86), индуцируемый костимулирующий лиганд (ICOS-L), лиганд 1 белка запрограммированной гибели клеток (PD-L1; B7-H1), лиганд 2 белка запрограммированной гибели клеток (PD-L2; B7-DC), B7-H3, B7-H4 и B7-H6 (Collins et al. Genome Biol. 2005, 6, 223.1). Другие члены семейства CD28 включают CD28, CTLA-4, ICOS и BTLA. Предполагается, что PD-1 существует в виде мономера, не имеющего неспаренного цистеинового остатка, характерного для других членов семейства CD28. PD-1 экспрессируется на активированных В-клетках, Т-клетках и моноцитах.

PD-L1 является широко распространенным при различных формах рака человека (Dong et al. Nat. Med. 2002, 8, 787). PD-1 известен как иммуноингибирующий белок, который осуществляет отрицательную регуляцию сигналов TCR (Ishida et al. EMBO J. 1992, 11, 3887; Blank et al. Immunol. Immunother. 2006, 56(5), 739). Взаимодействие между PD-1 и PD-L1 может выступать в качестве контрольной точки иммунного ответа, что может приводить, например, к уменьшению количества инфильтрирующих опухоль лимфоцитов, уменьшению пролиферации, опосредованной Т-клеточными рецепторами, и/или ускользанию раковых клеток от иммунного надзора (Dong et al. J. Mol. Med. 2003, 81, 281; Blank et al. Cancer Immunol. Immunother. 2005, 54, 307; Konishi et al. Clin. Cancer Res. 2004, 10, 5094). Иммуносупрессию можно устранить путем ингибирования локального взаимодействия PD-1 с PD-L1 или PD-L2; данный эффект является аддитивным, если также блокируется взаимодействие PD-1 с PD-L2 (Iwai et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 2002, 99:12293-7; Brown et al. J. Immunol. 2003, 170, 1257).

Ингибитор CSF-1R BLZ945 был исследован в качестве отдельного средства и в комбинации со спартализумабом в клиническом исследовании I фазы. В ходе клинического исследования нежелательные явления (АЕ) всех степеней и независимо от связи с исследуемым лечением были зарегистрированы у всех пациентов, получавших лечение одним средством BLZ945, и у всех пациентов, получавших лечение в комбинированном режиме. Наиболее часто регистрируемые АЕ (>10%), предположительно связанные с одним средством BLZ945, включали повышение уровня аспартатаминотрансферазы (AST), тошноту, рвоту, повышение уровня аланинаминотрансферазы (ALT), утомляемость, повышение уровня амилазы, повышение уровня креатинфосфокиназы крови и снижение аппетита. Наиболее часто (> 10%) при комбинированном лечении отмечались такие предполагаемые АЕ, как повышение уровня AST, повышение уровня ALT, зуд, усталость, тошнота, сыпь и рвота. Хотя считается, что повышенные уровни ALT/AST под действием BLZ945 вызваны снижением клиренса этих ферментов вследствие ингибирования клеток Купфера в печени, такие наблюдения обычно рассматриваются как признаки поражения печени. Таким образом, существует неудовлетворенная медицинская потребность в альтернативных режимах введения доз соединений формулы (I), которые позволят обеспечить доставку терапевтически эффективной дозы с минимальными побочными явлениями.

Кроме того, BLZ945 исследуется при боковом амиотрофическом склерозе (ALS). ALS представляет собой смертельное дегенеративное заболевание, характеризующееся прогрессирующей потерей верхних моторных нейронов (UMN) в моторной коре и нижних моторных нейронов (LMN) на спинальном или бульбарном уровне [Rowland LP and Schneider NA, 2001]. Учитывая среднюю выживаемость (3-5 лет), быстрое снижение функциональных показателей и плохой прогноз при естественном течении заболевания, нагрузку ALS для пациентов, членов их семей и лиц, осуществляющих уход, является значительным. Заболеваемость ALS составляет приблизительно 5000/год в США, примерно 16000 пациентов с установленным диагнозом в США и 29000 в ЕС (Logroscino G, and Piccininni M.).

Основу ухода за пациентами с ALS составляет своевременное вмешательство для контроля симптомов, включая применение назогастрального питания, предотвращение аспирации и обеспечение вспомогательной вентиляции легких (обычно с двухуровневым положительным давлением в дыхательных путях) (R.H. Brown and al. 2017). В настоящее время доступные способы лечения приносят ограниченную клиническую пользу пациентам с ALS. Рилузол и эдаравон были одобрены в США, однако остается острая неудовлетворенная медицинская потребность в терапевтических средствах, способных замедлить прогрессирование ALS.

Нейровоспаление играет ключевую роль в ALS (Rodriguez and Mahy 2016). Важным патофизиологическим механизмом при ALS является активация микроглии, которая ассоциирована с дегенерацией моторных нейронов. Последние данные связывают зависимый от рецептора макрофагального колониестимулирующего фактора 1 (CSF-1R) микроглиоз с прогрессированием заболевания ALS (Martinez Muriana et al 2016). Высокоселективный и мощный ингибитор CSF-1R обладает потенциалом для лечения пациентов с ALS путем замедления прогрессирования заболевания за счет нацеливания на клетки микроглии, тем самым отсрочивая необходимость искусственной вентиляции легких, улучшая качество жизни и увеличивая выживаемость пациентов с ALS.

BLZ945 является мощным и селективным ингибитором CSF-1R. В доклинических исследованиях с использованием модели ALS у грызунов BLZ945 продемонстрировал положительное влияние на поддержание нормального прироста массы тела, а также зависимую от дозы задержку связанных с заболеванием нарушений силы захвата и иннервации мышц.

Эта эффективность была ассоциирована с зависимым от дозы истощением микроглии в спинном мозге при вскрытии. У пациентов с ALS недавнее клиническое испытание фазы 2b/3 с применением мазитиниба, ингибитора CSF-1R с незначительной эффективностью и низкой специфичностью, продемонстрировало значительную задержку прогрессирования заболевания. В совокупности эти данные позволяют предположить, что селективное ингибирование CSF-1R с использованием BLZ945 для истощения микроглии может представлять собой терапевтическую стратегию для предупреждения или замедления прогрессирования ALS. Однако повышение уровня ALT/AST при лечении BLZ945 у пациентов с ALS значительно повлияет на режим введения доз, который будет безопасным и эффективным для лечения пациентов с ALS. Таким образом, сохраняется потребность в безопасном и эффективном лечении пациентов с ALS. Поэтому селективное ингибирование CSF-1R для истощения микроглии с помощью специфического режима введения доз, как ожидается, будет представлять собой терапевтическую стратегию для предупреждения или замедления прогрессирования ALS. Такой селективный ингибитор CSF-1R также может применяться совместно с другими интервенционными подходами, например, в комбинации с текущим стандартом лечения рилузолом или эдаравоном, или другими клиническими соединениями для ALS.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение основано на демонстрациях того, что солидные опухоли на поздней стадии можно лечить с помощью ингибитора CSF-1R. Эффективность описанных в данном документе ингибиторов CSF-1R, как полагают, обусловлена их ингибированием определенных активностей TAM, хотя, по-видимому, это не приводит к значительному снижению количества присутствующих TAM, и, вероятно, также является функцией продемонстрированной способности этих соединений эффективно проникать через гематоэнцефалический барьер у субъектов с опухолью головного мозга. Эти способы обеспечивают столь необходимые новые варианты терапии для пациентов с опухолями на поздней стадии, в частности, опухолями головного мозга, особенно видами глиобластомы.

Колониестимулирующий фактор-1 (CSF-1), также называемый макрофагальным колониестимулирующим фактором (M-CSF), передает сигналы через свой рецептор CSF-1R (также известный как c-FMS) для регулирования дифференциации, пролиферации, рекрутирования и выживания макрофагов. Были разработаны низкомолекулярные ингибиторы CSF-1R, которые блокируют фосфорилирование рецептора, конкурируя за связывание АТФ в активном сайте, как и другие ингибиторы рецепторной тирозинкиназы. В настоящем изобретении используется эффективный селективный ингибитор CSF-1R, который проникает через гематоэнцефалический барьер (BBB), для блокирования передачи сигнала CSF-1R в глиоме, как показано на модели глиомагенеза RCAS-PDGF-B-HA/Nestin-Tv-a;Ink4a/Arf^-/- мыши. Эта генетически сконструированная модель глиомы идеально подходит для доклинического тестирования в качестве модели GBM человека, поскольку она повторяет все особенности GBM человека в иммунокомпетентных условиях. Поскольку она близко моделирует GBM человека и, в частности, пронейральную GBM, ожидается, что эффективность в этой модели будет обуславливать эффективность в клинических условиях в отношении видов глиобластомы человека, таких как мультиформная глиобластома и смешанные виды глиом.

Настоящее изобретение может быть осуществлено на практике с использованием любого ингибитора CSF-1R, способного проникать в головной мозг. Некоторыми такими соединениями являются 6-O-замещенные бензоксазольные и бензотиазольные соединения, раскрытые в WO2007/121484, в частности, соединения формул IIa и IIb, описанные по этой ссылке, и соединения, раскрытые в данном документе.

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид:

(I);

или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении модулированного CSF-1R заболевания, такого как рак или нейродегенеративные заболевания, где (I) вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней, дважды за цикл.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию, содержащую (i) ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид [соединение формулы (I)]:

(I);

или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) молекулу антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении рака, где (i) вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней дважды за цикл, а (ii) вводят по меньшей мере один раз за цикл.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фигура 1A. Моделируемые кинетические показатели ALT (и AST), основанные на доклинических данных, предполагает необходимость периода вымывания.

Фигура 2. Модель яванского макака, основанная на доклинических данных, показывает, что переход на введение на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 10 дней может привести к снижению максимального уровня ALT и его возвращению к исходному уровню.

Фигура 3. Предварительные данные эффективности, демонстрирующие сравнение BLZ945 в двух режимах введения доз отдельно и в комбинации с антителом к PD-1.

Фигура 4A. Уровни CSF-1 в плазме крови мыши после лечения с помощью BLZ945 отдельно и в комбинации с антителом к PD-1 при двух разных режимах.

Фигура 4B. Уровни CSF-1 в плазме крови мыши после лечения с помощью BLZ945 отдельно и в комбинации с антителом к PD-1 при двух разных режимах.

Фигура 5A. Иммуномодуляция TAM и Treg после лечения с помощью BLZ945 при введении на протяжении 4 дней/отсутствии введения на протяжении 3 дней (мышиная модель).

Фигура 5B (фигура 4-8B). Иммуномодуляция TAM и Treg после лечения с помощью BLZ945 при введении на протяжении 4 дней/отсутствии введения на протяжении 3 дней (мышиная модель).

Фигура 6. Повышение уровня AST в группах, получавших одну дозу средства (клинические данные).

Фигура 7. Повышение уровня ALT в группах, получавших одну дозу средства (клинические данные).

Фигура 8. Анализ микроглиального истощения после последовательных дней введения дозы BLZ945 в мышиных моделях ALS.

Фигура 1. Анализ микроглиального снижения при нескольких дозах BLZ945.

Фигура 2. Микроглиальное истощение у мышей SOD1^G93A с ALS при введении дозы по схеме b.i.d.

Фигура 11. Микроглиальное истощение у мышей SOD1^G93A с ALS в исследовании эффективности.

Фигура 12. Зависимый от дозы эффект BLZ945 на накопление массы тела.

Фигура 13. Эффект BLZ945 на силу захвата и CMAP.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение может быть осуществлено на практике с использованием ингибитора CSF-1R, способного проникать в головной мозг. Некоторыми такими соединениями являются 6-O-замещенные бензоксазольные и бензотиазольные соединения, раскрытые в WO2007/121484, в частности, соединения формул IIa и IIb, описанные по этой ссылке, и соединения, раскрытые в данном документе.

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид:

(I);

или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении рака, где (I) вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней дважды за цикл.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение CSF-1R для применения в лечении рака, где каждый цикл составляет 28 дней.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение CSF-1R для применения в лечении рака, где соединение формулы (I) вводится дважды в день.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение CSF-1R для применения в лечении рака, где суточная доза соединения формулы (I) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение CSF-1R для применения в лечении рака, где суточная доза составляет 700 мг/день.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение CSF-1R для применения в лечении рака, где рак представляет собой лейкоз, рак предстательной железы, рак почки, рак печени, саркому, рак головного мозга, лимфому, рак яичника, рак легкого, рак шейки матки, рак кожи, рак молочной железы, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC), рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), плоскоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак пищевода, плоскоклеточный рак шейки матки, виды глиомы, глиобластому или меланому.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение CSF-1R для применения в лечении рака, где рак представляет собой глиобластому.

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию, содержащую (i) ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) молекулу антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении рака, где (i) вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней дважды за цикл, а (ii) вводят по меньшей мере один раз за цикл.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где ингибитор CSF-1R формулы (I) вводится только в 3 из 4 дней введения.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где каждый цикл составляет 28 дней.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где (i) вводится дважды в день.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где суточная доза (i) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где суточная доза (i) составляет 1200 мг/день.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где (ii) вводится каждые 4 недели.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где (ii) выбрана из ниволумаба, пембролизумаба, пидилизумаба, спартализумаба или их фармацевтической соли.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где (ii) представляет собой спартализумаб или его фармацевтическую соль.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где (ii) вводится внутривенно в однократной дозе 300-400 мг/день.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где однократная доза (ii) составляет 400 мг/день.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где рак представляет собой лейкоз, рак предстательной железы, рак почки, рак печени, саркому, рак головного мозга, лимфому, рак яичника, рак легкого, рак шейки матки, рак кожи, рак молочной железы, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC), рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), плоскоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак пищевода, плоскоклеточный рак шейки матки, виды глиомы, глиобластому или меланому.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию для применения в лечении рака, где рак представляет собой глиобластому.

Ингибитор CSF-1R, подлежащий комбинированию с молекулой антитела к PD-1 или его фармацевтической солью, представляет собой 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I)

(I),

раскрытые в WO2007/121484 (пример 157).

Таким образом, в настоящем изобретении также предусмотрена фармацевтическая комбинация, содержащая (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) молекулу антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении рака, где соединение формулы (I), а именно 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид, или его фармацевтически приемлемую соль вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней дважды за цикл и молекулу антитела к PD-1 (ii), описанную в данном документе, вводят по меньшей мере один раз за цикл.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид:

(I);

или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, модулируемого CSF-1R, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении периода введения, за которым следует период отсутствия введения, когда ингибитор CSF-1R не вводят, и при этом по меньшей мере одна пара периода введения и периода отсутствия введения составляет цикл.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней введения.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 7 дней введения.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней введения с последующим отсутствием введения на протяжении 10 дней, предпочтительно отсутствием введения на протяжении 7-10 дней, более предпочтительно отсутствием введения на протяжении 10 дней.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней и не вводят на протяжении 10 дней.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 7 дней и не вводят на протяжении 7 дней.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где ингибитор CSF-1R вводят дважды в день.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где суточная доза ингибитора CSF-1R формулы (I) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где суточная доза составляет 300 мг, 600 мг или 1200 мг/день, предпочтительно 1200 мг.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, где нейровоспалительное заболевание представляет собой боковой амиотрофический склероз.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию, содержащую (i) ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) любой из эдаравона или рилузола, для применения в лечении нейровоспалительного заболевания.

Пронумерованные варианты осуществления, относящиеся к применению ингибитора CSF-1R в лечении рака.

Вариант осуществления 1.1. Ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид:

(I);

или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака, где (I) вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней дважды за цикл.

Вариант осуществления 1.2. Соединение CSF-1R по варианту осуществления 1.1 для применения в лечении рака, где каждый цикл составляет 28 дней.

Вариант осуществления 1.3. Соединение CSF-1R по варианту осуществления 1.1 для применения в лечении рака, где соединение формулы (I) вводят дважды в день.

Вариант осуществления 1.4. Соединение CSF-1R по любому из вариантов осуществления 1.1-1.3 для применения в лечении рака, где суточная доза соединения формулы (I) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

Вариант осуществления 1.5. Соединение CSF-1R по варианту осуществления 1.4, где суточная доза составляет 700 мг/день.

Вариант осуществления 1.6. Соединение CSF-1R по любому из вариантов осуществления 1.1-1.5 для применения в лечении рака, где рак представляет собой лейкоз, рак предстательной железы, рак почки, рак печени, саркому, рак головного мозга, лимфому, рак яичника, рак легкого, рак шейки матки, рак кожи, рак молочной железы, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC), рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), плоскоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак пищевода, плоскоклеточный рак шейки матки, виды глиомы, глиобластому или меланому.

Вариант осуществления 1.7. Соединение CSF-1R по варианту осуществления 1.6 для применения в лечении рака, где рак представляет собой глиобластому.

Вариант осуществления 1.8. Фармацевтическая комбинация, содержащая (i) ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) молекулу антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении рака, где (i) вводится на протяжении 4 дней и не вводится на протяжении 10 дней дважды за цикл, а (ii) вводят по меньшей мере один раз за цикл.

Вариант осуществления 1.9. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по варианту осуществления 1.8, где каждый цикл составляет 28 дней.

Вариант осуществления 1.10. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по варианту осуществления 1.8, где (i) вводят дважды в день.

Вариант осуществления 1.11. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по любому из вариантов осуществления 1.8-1.10, где суточная доза (i) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

Вариант осуществления 1.12. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по варианту осуществления 1.11, где суточная доза (i) составляет 1200 мг/день.

Вариант осуществления 1.13. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по варианту осуществления 1.8, где (ii) вводят каждые 4 недели.

Вариант осуществления 1.14. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по любому из вариантов осуществления 1.8-1.13, где (ii) выбрана из ниволумаба, пембролизумаба, пидилизумаба, спартализумаба или их фармацевтической соли.

Вариант осуществления 1.15. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по варианту осуществления 1.14, где (ii) представляет собой спартализумаб или его фармацевтическую соль.

Вариант осуществления 1.16. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по любому из вариантов осуществления 1.8-1.15, где (ii) вводят внутривенно в однократной дозе 300-400 мг/день.

Вариант осуществления 1.17. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по варианту осуществления 1.16, где однократная доза составляет 400 мг/день.

Вариант осуществления 1.18. Фармацевтическая комбинация для применения в лечении рака по вариантам осуществления 1.8-1.17, где рак представляет собой лейкоз, рак предстательной железы, рак почки, рак печени, саркому, рак головного мозга, лимфому, рак яичника, рак легкого, рак шейки матки, рак кожи, рак молочной железы, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC), рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), плоскоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак пищевода, плоскоклеточный рак шейки матки, виды глиомы, глиобластому или меланому.

Вариант осуществления 1.19. Фармацевтическая комбинация по варианту осуществления 1.18 для применения в лечении рака, где рак представляет собой глиобластому.

Вариант осуществления 1.20. Способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение ингибитора CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида:

(I);

или его фармацевтически приемлемой соли, где (I) вводят на протяжении 4 дней и не вводят на протяжении 10 дней дважды за цикл.

Вариант осуществления 1.21. Способ по варианту осуществления 1.20, где каждый цикл составляет 28 дней.

Вариант осуществления 1.22. Способ по варианту осуществления 1.20, где соединение формулы (I) вводят дважды в день.

Вариант осуществления 1.23. Способ по любому из вариантов осуществления 1.20-1.22 для применения в лечении рака, где суточная доза соединения формулы (I) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

Вариант осуществления 1.24. Способ по варианту осуществления 1.23, где суточная доза составляет 700 мг/день.

Вариант осуществления 1.25. Способ по любому из вариантов осуществления 1.20-1.24, где рак представляет собой лейкоз, рак предстательной железы, рак почки, рак печени, саркому, рак головного мозга, лимфому, рак яичника, рак легкого, рак шейки матки, рак кожи, рак молочной железы, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC), рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), плоскоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак пищевода, плоскоклеточный рак шейки матки, виды глиомы, глиобластому или меланому.

Вариант осуществления 1.26. Способ по варианту осуществления 1.25, где рак представляет собой глиобластому.

Пронумерованные варианты осуществления, относящиеся к применению ингибитора CSF-1R в лечении нейровоспалительных заболеваний.

Вариант осуществления 2.1. Ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид:

(I);

или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении нейровоспалительного заболевания, модулируемого CSF-1R, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении периода введения, за которым следует период отсутствия введения, когда ингибитор CSF-1R не вводят, и при этом по меньшей мере одна пара периода введения и периода отсутствия введения составляет цикл.

Вариант осуществления 2.2. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания по варианту осуществления 2.1, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней.

Вариант осуществления 2.3. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания по варианту осуществления 2.1, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 7 дней.

Вариант осуществления 2.4. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания по варианту осуществления 2.1, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней введения с последующим отсутствием введения на протяжении 10 дней, предпочтительно отсутствием введения на протяжении 7-10 дней, более предпочтительно отсутствием введения на протяжении 10 дней.

Вариант осуществления 2.5. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания по варианту осуществления 2.1, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней и не вводят на протяжении 10 дней.

Вариант осуществления 2.6. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания по варианту осуществления 2.1, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 7 дней и не вводят на протяжении 7 дней.

Вариант осуществления 2.7. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вариантов осуществления 2.1-2.6, где ингибитор CSF-1R вводят дважды в день.

Вариант осуществления 2.8. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вариантов осуществления 2.1-2.7, где суточная доза ингибитора CSF-1R формулы (I) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

Вариант осуществления 2.9. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения по варианту осуществления 2.8, где суточная доза составляет 300 мг, 600 мг или 1200 мг/день, предпочтительно 1200 мг.

Вариант осуществления 2.10. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вариантов осуществления 2.1-2.9, где нейровоспалительное заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз или боковой амиотрофический склероз.

Вариант осуществления 2.11. Ингибитор CSF-1R формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вариантов осуществления 2.1-2.9, где нейровоспалительное заболевание представляет собой боковой амиотрофический склероз.

Вариант осуществления 2.12. Фармацевтическая комбинация, содержащая (i) ингибитор CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) любой из эдаравона или рилузола, для применения в лечении по любому из вариантов осуществления 2.1-2.10.

Вариант осуществления 2.13. Способ лечения нейровоспалительного заболевания, модулируемого CSF-1R, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение ингибитора CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида:

(I);

или его фармацевтически приемлемой соли, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении периода введения, за которым следует период отсутствия введения, когда ингибитор CSF-1R не вводят, и при этом по меньшей мере одна пара периода введения и периода отсутствия введения составляет цикл.

Вариант осуществления 2.14. Способ по варианту осуществления 2.13, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней введения.

Вариант осуществления 2.15. Способ по варианту осуществления 2.14, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 7 дней введения.

Вариант осуществления 2.16. Способ по варианту осуществления 2.13, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней введения с последующим отсутствием введения на протяжении 10 дней, предпочтительно отсутствием введения на протяжении 7-10 дней, более предпочтительно отсутствием введения на протяжении 10 дней.

Вариант осуществления 2.17. Способ по варианту осуществления 2.13, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 4 дней и не вводят на протяжении 10 дней.

Вариант осуществления 2.18. Способ по варианту осуществления 2.13, где ингибитор CSF-1R вводят на протяжении 7 дней и не вводят на протяжении 7 дней.

Вариант осуществления 2.19. Способ по любому из вариантов осуществления 2.13-2.18, где ингибитор CSF-1R вводят дважды в день.

Вариант осуществления 2.20. Способ по любому из вариантов осуществления 2.13-2.19, где суточная доза ингибитора CSF-1R формулы (I) составляет 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день.

Вариант осуществления 2.21. Способ по варианту осуществления 2.20, где суточная доза составляет 300 мг/день, 600 мг/день или 1200 мг/день, предпочтительно 1200 мг/день.

Вариант осуществления 2.22. Способ по любому из вариантов осуществления 2.13-2.21, где нейровоспалительное заболевание представляет собой боковой амиотрофический склероз.

В настоящем изобретении термин "фармацевтическая комбинация" относится к нефиксированной комбинации. Термин "нефиксированная комбинация" означает, что оба активных ингредиента, например, соединение формулы (I), а именно 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид, или его фармацевтически приемлемую соль, и молекулу антитела к PD-1 или ее форму фармацевтически приемлемой соли, вводят пациенту в виде отдельных объектов либо одновременно, либо последовательно без конкретных ограничений по времени, где такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме пациента.

Термины "комбинация" или "в комбинации с" не предназначены для обозначения того, что виды терапии или терапевтические средства должны вводиться в одно и то же время и/или быть составлены для совместной доставки, хотя эти способы доставки находятся в пределах объема, описанного в данном документе. Терапевтические средства в комбинации можно вводить одновременно с одним или несколькими дополнительными видами терапии или терапевтическими средствами, до них или после них. Терапевтические средства или протокол терапии можно применять в любом порядке. Как правило, каждое средство будет вводиться в дозе и/или по временному графику, которые определены для данного средства. Также следует понимать, что дополнительное терапевтическое средство, применяемое в данной комбинации, можно вводить совместно или в отдельности в разных композициях. В целом, ожидается, что дополнительные терапевтические средства, применяемые в комбинации, будут применяться при уровнях, которые не превышают уровни, при которых они применяются по отдельности. В некоторых вариантах осуществления уровни, используемые в комбинации, будут ниже уровней при использовании по отдельности.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемые соли, которые можно применять в комбинации с ингибиторами CSF-1R согласно настоящему изобретению, могут представлять собой любое антитело к PD-1, раскрытое в данном документе. Например, молекула антитела к PD-1 может содержать по меньшей мере одну антигенсвязывающую область, например, вариабельную область или ее антигенсвязывающий фрагмент, из антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей. Молекула антитела к PD1 предпочтительно выбрана из ниволумаба (Opdivo), пембролизумаба (Keytruda), пидилизумаба, спартализумаба или их фармацевтической соли. Молекула антитела к PD-1 наиболее предпочтительно представляет собой спартализумаб или его фармацевтическую соль. Молекула антитела к PD-1, обозначенная как спартализумаб, была описана в PCT/CN2016/099494. Более конкретно, ингибитор PDR-001 или его фармацевтически приемлемая соль содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность HCDR1, HCDR2 и HCDR3 BAP049 клона Е, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность LCDR1, LCDR2 и LCDR3 BAP049 клона Е, описанные в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две, три или четыре вариабельные области из антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две, три или четыре вариабельные области из антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну или две вариабельные области легкой цепи из антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, константную область тяжелой цепи IgG4, например, IgG4 человека. IgG4 человека содержит замену в положении 228 согласно нумерации EU (например, замену Ser на Pro). Молекула антитела к PD-1 содержит константную область тяжелой цепи IgG1, например, IgG1 человека. IgG1 человека содержит замену в положении 297 согласно нумерации EU (например, замену Asn на Ala). IgG1 человека также может содержать замену в положении 265 согласно нумерации EU, замену в положении 329 согласно нумерации EU или их обе (например, замену Asp на Ala в положении 265 и/или замену Pro на Ala в положении 329). IgG1 человека также содержит замену в положении 234 согласно нумерации EU, замену в положении 235 согласно нумерации EU или их обе (например, замену Leu на Ala в положении 234 и/или замену Leu на Ala в положении 235). Константная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 3, или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) ей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, константную область легкой каппа-цепи, например, константную область легкой каппа-цепи человека. Константная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 3, или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) ей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль по настоящему изобретению также содержит, например, константную область тяжелой цепи IgG4, например, IgG4 человека, и константную область легкой каппа-цепи, например, константную область легкой каппа-цепи человека, например, константную область тяжелой и легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 3, или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) ей. IgG4 человека содержит замену в положении 228 согласно нумерации EU (например, замену Ser на Pro). Молекула антитела к PD-1 содержит константную область тяжелой цепи IgG1, например, IgG1 человека, и константную область легкой каппа-цепи, например, константную область легкой каппа-цепи человека, например, константную область тяжелой и легкой цепей, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в таблице 3, или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) ей. IgG1 человека также может содержать замену в положении 297 согласно нумерации EU (например, замену Asn на Ala). IgG1 человека содержит замену в положении 265 согласно нумерации EU, замену в положении 329 согласно нумерации EU или их обе (например, замену Asp на Ala в положении 265 и/или замену Pro на Ala в положении 329). IgG1 человека содержит замену в положении 234 согласно нумерации EU, замену в положении 235 согласно нумерации EU или их обе (например, замену Leu на Ala в положении 234 и/или замену Leu на Ala в положении 235).

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению также содержат, например, вариабельный домен и константную область тяжелой цепи, вариабельный домен и константную область легкой цепи или оба, содержащие аминокислотную последовательность BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанную в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей. Молекула антитела к PD-1 необязательно содержит лидерную последовательность тяжелой цепи, легкой цепи или их обеих, как показано в таблице 4; или последовательность, в значительной степени идентичную ей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одну, две или три области, определяющие комплементарность (CDR), из вариабельной области тяжелой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, показанную в таблице 1, или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1. Одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или больше изменений, например, аминокислотных замен или делеций, по сравнению с аминокислотной последовательностью, показанной в таблице 1 или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль по настоящему изобретению содержат, например, по меньшей мере одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, практически идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль содержит, например, по меньшей мере, одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, показанную в таблице 1, или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1. Одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или больше изменений, например, аминокислотных замен или делеций, по сравнению с аминокислотной последовательностью, показанной в таблице 1 или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль включает, например, по меньшей мере одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль содержит, например, по меньшей мере, одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, показанную в таблице 1, или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1. Одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или больше изменений, например, аминокислотных замен или делеций, по сравнению с аминокислотной последовательностью, показанной в таблице 1 или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль содержит замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и/или CDR3 легкой цепи. Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль содержит замену в CDR3 легкой цепи в положении 102 вариабельной области легкой цепи, например, замену цистеина на тирозин или цистеина на сериновый остаток в положении 102 в вариабельной области легкой цепи согласно таблице 1 (например, SEQ ID NO: 54 или 70 в случае с модифицированной последовательностью).

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, показанную в таблице 1, или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1. В одном варианте осуществления одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или больше изменений, например, аминокислотных замен или делеций, по сравнению с аминокислотной последовательностью, показанной в таблице 1 или кодируемой нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, все шесть CDR из антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1, или близкородственные CDR, например, CDR, которые являются идентичными или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен). Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль также может содержать любую описанную в данном документе CDR. Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль содержит замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и/или CDR3 легкой цепи. Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит замену в CDR3 легкой цепи в положении 102 вариабельной области легкой цепи, например, замену цистеина на тирозин или цистеина на сериновый остаток в положении 102 в вариабельной области легкой цепи согласно таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению включает по меньшей мере одну, две или три CDR согласно Kabat et al. (например, по меньшей мере одну, две или три CDR согласно определению Kabat, указанных в таблице 1) из вариабельной области тяжелой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя или тремя CDR согласно Kabat et al., показанными в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению включает, например, по меньшей мере одну, две или три CDR согласно Kabat et al. (например, по меньшей мере одну, две или три CDR согласно определению Kabat, указанных в таблице 1) из вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя или тремя CDR согласно Kabat et al., показанными в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению включает, например, по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR согласно Kabat et al. (например, по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR согласно определению Kabat, указанных в таблице 1) из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью или шестью CDR согласно Kabat et al., показанными в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению включает все шесть CDR согласно Kabat et al. (например, все шесть CDR согласно определению Kabat, указанных в таблице 1) из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению со всеми шестью CDR согласно Kabat et al., показанными в таблице 1. Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению может содержать любую CDR, описанную в данном документе.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две или три гипервариабельные петли согласно Chothia (например, по меньшей мере одну, две или три гипервариабельные петли согласно определению Chothia, указанные в таблице 1) из вариабельной области тяжелой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или по меньшей мере аминокислоты из тех гипервариабельных петель, которые контактируют с PD-1; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя или тремя гипервариабельными петлями согласно Chothia et al., показанными в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две или три гипервариабельные петли согласно Chothia (например, по меньшей мере одну, две или три гипервариабельные петли согласно определению Chothia, указанные в таблице 1) из вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или по меньшей мере аминокислоты из тех гипервариабельных петель, которые контактируют с PD-1; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя или тремя гипервариабельными петлями согласно Chothia et al., показанными в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть гипервариабельных петель (например, по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть гипервариабельных петель согласно определению Chothia, указанных в таблице 1) из вариабельных областей тяжелой и легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или описанные в таблице 1, или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или по меньшей мере аминокислоты из тех гипервариабельных петель, которые контактируют с PD-1; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью или шестью гипервариабельными петлями согласно Chothia et al., показанными в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, все шесть гипервариабельных петель согласно Chothia (например, все шесть гипервариабельных петель согласно определению Chothia, указанных в таблице 1) из антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E; или близкородственные гипервариабельные петли, например, гипервариабельные петли, которые являются идентичными или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен); или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению со всеми шестью гипервариабельными петлями согласно Chothia et al., показанными в таблице 1. Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению может содержать любую гипервариабельную петлю, описанную в данном документе.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит, например, по меньшей мере одну, две или три гипервариабельные петли, которые имеют такие же канонические структуры, как и соответствующая гипервариабельная петля антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E, например, такие же канонические структуры, как и по меньшей мере петля 1 и/или петля 2 вариабельных доменов тяжелой и/или легкой цепи антитела, описанного в данном документе. (См., например, Chothia et al. J. Mol. Biol. 1992, 227, 799; Tomlinson et al. J. Mol. Biol. 1992, 227:776-798 в отношении описаний канонических структур гипервариабельных петель). Эти структуры можно определить путем рассмотрения таблиц, описанных в данных литературных источниках.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению также может содержать, например, комбинацию CDR или гипервариабельных петель, определенных в соответствии с Kabat et al. и Chothia et al., описанных в данном документе в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению включает, например, по меньшей мере одну, две или три CDR или гипервариабельные петли из вариабельной области тяжелой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E, согласно определению Kabat и Chothia (например, по меньшей мере одну, две или три CDR или гипервариабельные петли согласно определению Kabat и Chothia, указанные в таблице 1); или кодируемые нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более идентичную) любой из вышеупомянутых последовательностей; или которые имеют по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен) по сравнению с одной, двумя или тремя CDR или гипервариабельными петлями согласно Kabat и/или Chothia, показанными в таблице 1.

Например, молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению может содержать CDR1 VH согласно Kabat et al. или гипервариабельную петлю 1 VH согласно Chothia et al. или их комбинацию, например, как показано в таблице 1. CDR1 VH согласно комбинации определений CDR по Kabat и Chothia содержит аминокислотную последовательность GYTFTTYWMH (SEQ ID NO: 224) или аминокислотную последовательность, в значительной степени идентичную ей (например, имеющую по меньшей мере одно изменение аминокислоты, но не более двух, трех или четырех изменений (например, замен, делеций или вставок, например, консервативных замен). Молекула антитела к PD-1 может дополнительно содержать, например, CDR 2-3 VH согласно Kabat et al. и CDR 1-3 VL согласно Kabat et al., например, как показано в таблице 1. Соответственно, каркасные области (FW) определяются на основании комбинации CDR, определяемых согласно Kabat et al., и гипервариабельных петель, определяемых согласно Chothia et al. Например, молекула антитела к PD-1 может содержать FW1 VH, определенную на основании гипервариабельной петли 1 VH согласно Chothia et al., и FW2 VH, определенную на основании CDR 1-2 VH согласно Kabat et al., например, как показано в таблице 1. Молекула антитела к PD-1 может дополнительно содержать, например, FW 3-4 VH, определенные на основании CDR 2-3 VH согласно Kabat et al., и FW 1-4 VL, определенные на основании CDR 1-3 VL согласно Kabat et al.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP049 клона B или BAP049 клона E, согласно определениям Kabat и Chothia (например, по меньшей мере одну, две или три CDR согласно определениям Kabat и Chothia, указанные в таблице 1).

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит:

(a) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1 под SEQ ID NO: 4, аминокислотную последовательность VHCDR2 под SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 под SEQ ID NO: 3; и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 под SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 под SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 под SEQ ID NO: 33;

(b) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1; аминокислотную последовательность VHCDR2 под SEQ ID NO: 2 и аминокислотную последовательность VHCDR3 под SEQ ID NO: 3; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 под SEQ ID NO: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 под SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 под SEQ ID NO: 32;

(c) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1 под SEQ ID NO: 224, аминокислотную последовательность VHCDR2 под SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 под SEQ ID NO: 3; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 под SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 под SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 под SEQ ID NO: 33; или

(d) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1 под SEQ ID NO: 224, аминокислотную последовательность VHCDR2 под SEQ ID NO: 2 и аминокислотную последовательность VHCDR3 под SEQ ID NO: 3; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 под SEQ ID NO: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 под SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 под SEQ ID NO: 32.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 224; аминокислотную последовательность VHCDR2 под SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 под SEQ ID NO: 3; и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 под SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 под SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 под SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению может содержать, например, вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 38, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 70.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению может содержать, например, тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 91, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 72.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотные последовательности HCDR1, HCDR2 и HCDR3 из BAP049 клона B или BAP049 клона E, описанные в таблице 1, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотные последовательности LCDR1, LCDR2 и LCDR3 из BAP049 клона B или BAP049 клона E, описанные в таблице 1.

Молекула антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотные последовательности HCDR1, HCDR2 и HCDR3 из BAP049 клона E, описанные в таблице 1, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотные последовательности LCDR1, LCDR2 и LCDR3 из BAP049 клона E, описанные в таблице 1.

Следует понимать, что молекула антитела к PD-1, или молекула, представляющая собой антитело к PD-1, согласно настоящему изобретению может иметь дополнительные консервативные или несущественные аминокислотные замены, которые не производят значительный эффект в отношении их функций.

Термин "молекула антитела" относится к белку, например, цепи иммуноглобулина или ее фрагменту, содержащему по меньшей мере одну последовательность вариабельного домена иммуноглобулина. Термин "молекула антитела" предусматривает, например, моноклональное антитело (в том числе полноразмерное антитело, имеющее Fc-область иммуноглобулина). Молекула антитела содержит полноразмерное антитело или полноразмерную цепь иммуноглобулина или антигенсвязывающий или функциональный фрагмент полноразмерного антитела или полноразмерной цепи иммуноглобулина. Молекула антитела также может являться молекулой полиспецифического антитела, например, она содержит множество последовательностей вариабельных доменов иммуноглобулина, где первая последовательность вариабельного домена иммуноглобулина из множества обладает специфичностью связывания с первым эпитопом, а вторая последовательность вариабельного домена иммуноглобулина из множества обладает специфичностью связывания со вторым эпитопом.

Термин "фармацевтически приемлемые соли" может означать соли, образованные, например, в виде солей присоединения кислоты, предпочтительно с органическими или неорганическими кислотами. Подходящими неорганическими кислотами являются, например, галогенсодержащие кислоты, такие как хлористоводородная кислота. Подходящими органическими кислотами являются, например, карбоновые кислоты или сульфоновые кислоты, такие как фумаровая кислота или метансульфоновая кислота. Для целей выделения или очистки также можно использовать фармацевтически неприемлемые соли, например, пикраты или перхлораты. Для терапевтического применения используются только фармацевтически приемлемые соли или свободные соединения (при необходимости в форме фармацевтических препаратов), и они, таким образом, являются предпочтительными. Любая ссылка на свободное соединение в данном документе должна пониматься как ссылка также на соответствующую соль, если это необходимо и целесообразно. Соли ингибиторов, описанных в данном документе, предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли; подходящие фармацевтически приемлемые соли, образующие противоионы, известны в данной области.

Термин "фармацевтически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений в соответствии с разумным соотношением польза/риск.

Термин "ингибирование" или "ингибитор" предусматривает снижение определенного параметра, например, активности, указанной молекулы, например, ингибитора контрольной точки иммунного ответа, такого как молекула антитела к PD-1. Например, данный термин предусматривает ингибирование активности, например, активности PD-1 или PD-L1, на по меньшей мере 5%, 10%, 20%, 30%, 40% или больше. Таким образом, ингибирование не обязательно должно составлять 100%.

Термин "рак" относится к заболеванию, характеризующемуся быстрым и неконтролируемым ростом аберрантной пролиферации клеток. Раковые клетки могут распространяться локально или через кровоток и лимфатическую систему в другие части организма. Примерами различных раковых заболеваний являются без ограничения лейкоз, рак предстательной железы, рак почки, рак печени, саркома, рак головного мозга, лимфома, рак яичника, рак легкого, рак шейки матки, рак кожи, рак молочной железы, плоскоклеточная карцинома головы и шеи (HNSCC), рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), плоскоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак пищевода, плоскоклеточный рак шейки матки, виды глиомы, глиобластома или меланома. Согласно настоящему изобретению особенно поддающимся лечению болезненным состоянием, подлежащим лечению с помощью вышеуказанной комбинации, является мультиформная глиобластома (GBM).

Термины "опухоль" и "рак" используются в данном документе взаимозаменяемо, например, оба термина охватывают солидные опухоли и опухоли жидких тканей, например, диффузные или циркулирующие опухоли. В одном варианте осуществления термин "рак" или "опухоль" предусматривает злокачественные формы рака и опухоли, а также запущенные формы рака и опухоли.

Термин "лечение" включает, например, терапевтическое введение комбинации ингибитора CSF-1R или его фармацевтически приемлемой соли и молекулы антитела к PD-1 или ее фармацевтически приемлемой соли, описанной в данном документе, теплокровному животному, в частности человеку, нуждающемуся в таком лечении, с целью излечения заболевания или произведения эффекта в отношении регрессии заболевания или в отношении задержки прогрессирования заболевания. Термины "лечить", "осуществление лечения" или "лечение" в отношении любого заболевания или нарушения относятся к уменьшению интенсивности проявлений заболевания или нарушения (например, замедлению, или остановке, или ослаблению развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов), к предупреждению или задержке начала проявления, или развития, или прогрессирования заболевания или нарушения.

Ингибитор CSF-1R (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить на протяжении 4 дней введения и не вводить на протяжении 10 дней дважды за цикл. Ингибитор CSF-1R, раскрытый в данном документе, можно вводить один раз в день или два раза в день с 12-часовым промежутком между двумя последовательными дозами. Партнера по комбинации, (ii) молекулу антитела к PD-1, можно продолжать вводить на протяжении дополнительных циклов до тех пор, пока это имеет клиническое значение.

Партнеров по комбинации, раскрытых в данном документе, вводят в один и тот же день или в разные дни цикла. Термин "цикл" относится к конкретному периоду времени, выраженному в днях или месяцах, который повторяется на регулярной основе. Цикл, как раскрывается в данном документе, более предпочтительно выражают в днях. Например, цикл может составлять без ограничения 28 дней, 30 дней, 60 дней, 90 дней. "Цикл", упоминаемый в настоящем изобретении, наиболее предпочтительно имеет продолжительность 28 дней. Такой цикл может повторяться несколько раз (например, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз и т. д.), причем каждый цикл имеет одну и ту же продолжительность и может повторяться до тех пор, пока это имеет клиническое значение, т. е. темпы роста опухоли по меньшей мере снижаются или контролируются или опухоль уменьшается, а нежелательные явления являются переносимыми.

Ингибитор CSF-1R (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально или внутривенно, наиболее предпочтительно перорально при суточной дозе 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день. Предпочтительно суточная доза составляет 700 мг/день или 1200 мг/день.

Согласно настоящему изобретению (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально, например, в фармацевтической композиции вместе с инертным разбавителем или носителем.

Согласно настоящему изобретению молекулу антитела к PD-1 (ii) или ее фармацевтически приемлемую соль, выбранную из ниволумаба (Opdivo), пембролизумаба (Keytruda), пидилизумаба, спартализумаба или их фармацевтически приемлемой соли, можно применять при лечении рака и вводить каждые две недели или каждые четыре недели в цикле. При лечении рака наиболее предпочтительно применяют молекулу антитела к PD-1 спартализумаб (ii) или ее фармацевтически приемлемую соль, описанную в данном документе. Спартализумаб (ii) наиболее предпочтительно вводят каждые четыре недели. Спартализумаб вводят путем инъекции (например, подкожной или внутривенной) в дозе 300-400 мг/день. Молекулу антитела к PD-1 спартализумаб или ее фармацевтически приемлемую соль предпочтительно вводят внутривенно в разовой дозе 300-400 мг/день. Молекулу антитела к PD-1 спартализумаб (ii) или ее фармацевтически приемлемую соль наиболее предпочтительно вводят в разовой дозе 400 мг/день. Молекулу антитела к PD-1 спартализумаб или ее фармацевтически приемлемую соль наиболее предпочтительно вводят в дозе 400 мг/день каждые четыре недели. Дозу можно вводить в виде однократной дозы или в виде нескольких дробных доз.

В частности, график введения доз может варьировать от 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день ингибитора CSF-1R формулы (I) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли (вводят на протяжении 4 дней и не вводят на протяжении 10 дней дважды за цикл) и от 300 мг/день до 400 мг/день молекулы антитела к PD-1 (ii) или его фармацевтически приемлемой соли каждые две или четыре недели. Например, согласно настоящему изобретению 150 мг/день (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли вводят на протяжении 4 дней и не вводят на протяжении 10 дней дважды за цикл, а молекулу антитела к PD-1 (ii) или ее фармацевтически приемлемую соль вводят один раз каждые 4 недели за цикл при дозе 400 мг/день. Другой пример согласно настоящему изобретению заключается во введении 300 мг/день (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли на протяжении 4 дней введения и отсутствии введения на протяжении 10 дней дважды за цикл и во введении молекулы антитела к PD-1 (ii) или его фармацевтически приемлемой соли один раз каждые 4 недели за цикл при дозе 400 мг/день. Еще один пример согласно настоящему изобретению предусматривает введение 600 мг/день (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли на протяжении 4 дней введения и отсутствие введения на протяжении 10 дней дважды за цикл и введение молекулы антитела к PD-1 (ii) или его фармацевтически приемлемой соли один раз каждые 4 недели за цикл при дозе 400 мг/день.

Молекулы антител можно вводить различными способами, известными из уровня техники, хотя для многих путей терапевтического применения предпочтительным путем/способом введения является внутривенная инъекция или инфузия. Например, молекулы антител можно вводить путем внутривенной инфузии со скоростью более 20 мг/мин., например, 20-40 мг/мин, и, как правило, превышающей или равной 40 мг/мин., чтобы достичь дозы приблизительно 300-400 мг/день. Для внутривенной инъекции или инфузии терапевтические композиции, как правило, должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Композиция может быть составлена в виде раствора, микроэмульсии, дисперсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации антитела. Стерильные растворы для инъекций могут быть получены путем введения активного соединения (т. е. антитела или части антитела) в необходимом количестве в подходящий растворитель с одним ингредиентом или комбинацией ингредиентов в соответствии с необходимостью с последующей стерилизующей фильтрацией. Обычно дисперсии получают путем введения активного соединения в стерильное инертное вещество, которое содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и лиофилизация, которые дают в результате порошок из активного ингредиента и любого дополнительного желаемого ингредиента из их раствора, ранее стерилизованного фильтрацией. Надлежащую текучесть раствора можно поддерживать, например, путем применения покрывающего средства, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем применения поверхностно-активных веществ. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может обеспечиваться включением в композицию средства, которое замедляет всасывание, например, моностеаратных солей и желатина.

Будет понятно, что путь и/или способ введения будут варьироваться в зависимости от желаемых результатов. Например, активное соединение может быть получено с носителем, который будет защищать соединение от быстрого высвобождения, как, например, в составе с контролируемым высвобождением, в том числе имплантатах, трансдермальных пластырях и микроинкапсулированных системах доставки. Можно применять биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы получения таких составов запатентованы или общеизвестны специалистам в данной области (например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978).

Точно так же (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с молекулой антитела к PD-1 (ii) или ее фармацевтически приемлемой солью можно применять для изготовления лекарственного препарата для лечения рака.

Аналогичным образом, в настоящем изобретении также предусмотрен способ лечения рака, включающий введение эффективного количества партнеров по комбинации (например, (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли и молекулы антитела к PD-1 (ii) или ее фармацевтически приемлемой соли) пациенту, нуждающемуся в этом.

Термин "пациент" или "субъект" относится к теплокровному животному. В наиболее предпочтительном варианте осуществления субъектом или пациентом является человек. Это может быть человек, которому поставили диагноз и который нуждается в лечении заболевания или нарушения, раскрытого в данном документе.

При применении для изготовления лекарственного препарата для лечения рака или в способе лечения рака у пациента, нуждающегося в этом, (i) и (ii) можно применять в дозах и при режимах дозирования, объясняемых выше.

Наиболее предпочтительно комбинация содержит ингибитор CSF-1R (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемую соль и молекулу антитела к PD-1 спартализумаб (ii) или его фармацевтически приемлемую соль. Обоих партнеров по комбинации (i) и (ii) можно вводить согласно режиму дозирования, описанному в данном документе. Например, (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить на протяжении 4 дней введения и не вводить на протяжении 10 дней дважды за цикл. Спартализумаб (ii) или его фармацевтически приемлемую соль вводят по меньшей мере один раз за цикл. Например, (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят в этой конкретной комбинации при дозе 100 мг/день, 150 мг/день, 200 мг/день, 300 мг/день, 400 мг/день, 500 мг/день, 600 мг/день, 700 мг/день, 900 мг/день или 1200 мг/день. Предпочтительно доза составляет 700 мг/день или 1200 мг/день. Спартализумаб (ii) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в однократной дозе 300-400 мг/день, наиболее предпочтительно в дозе 400 мг/день.

Аналогичным образом, в настоящем изобретении также предусмотрен способ лечения рака, включающий введение эффективного количества партнеров по комбинации (например, (i) 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли и молекулы антитела к PD-1 (ii) или ее фармацевтически приемлемой соли) пациенту, нуждающемуся в этом.

Термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" партнеров по комбинации согласно настоящему изобретению относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество партнеров по комбинации может варьироваться в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и вес индивидуума. Терапевтически эффективное количество также представляет собой количество, при котором терапевтически благоприятные эффекты превосходят любые токсические или неблагоприятные эффекты комбинации, описанные в данном документе. "Терапевтически эффективная доза" предпочтительно ингибирует поддающийся измерению параметр, например, скорость роста опухоли, на по меньшей мере приблизительно 20%, более предпочтительно на по меньшей мере приблизительно 40%, еще более предпочтительно на по меньшей мере приблизительно 60% и еще более предпочтительно на по меньшей мере приблизительно 80% по сравнению с субъектами, не получающими лечение.

Таблица 1

Аминокислотные и нуклеотидные последовательности молекул гуманизированных антител. Молекулы антител включают в себя BAP049 клона B и BAP049 клона E. Показаны аминокислотные и нуклеотидные последовательности CDR тяжелых и легких цепей, вариабельные области тяжелых и легких цепей, а также тяжелые и легкие цепи.

HC BAP049 клона B SEQ ID NO: 1 (Kabat) HCDR1 TYWMH SEQ ID NO: 2 (Kabat) HCDR2 NIYPGTGGSNFDEKFKN SEQ ID NO: 3 (Kabat) HCDR3 WTTGTGAY SEQ ID NO: 4 (Chothia) HCDR1 GYTFTTY SEQ ID NO: 5 (Chothia) HCDR2 YPGTGG SEQ ID NO: 3 (Chothia) HCDR3 WTTGTGAY SEQ ID NO: 38 VH EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 95 ДНК VH Gaggtgcagctggtgcagtcaggcgccgaagtgaagaagcccggcgagtcactgagaattagctgtaaaggttcaggctacaccttcactacctactggatgcactgggtccgccaggctaccggtcaaggcctcgagtggatgggtaatatctaccccggcaccggcggctctaacttcgacgagaagtttaagaatagagtgactatcaccgccgataagtctactagcaccgcctatatggaactgtctagcctgagatcagaggacaccgccgtctactactgcactaggtggactaccggcacaggcgcctactggggtcaaggcactaccgtgaccgtgtctagc SEQ ID NO: 91 HC EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 96 ДНК HC gaggtgcagctggtgcagtcaggcgccgaagtgaagaagcccggcgagtcactgagaattagctgtaaaggttcaggctacaccttcactacctactggatgcactgggtccgccaggctaccggtcaaggcctcgagtggatgggtaatatctaccccggcaccggcggctctaacttcgacgagaagtttaagaatagagtgactatcaccgccgataagtctactagcaccgcctatatggaactgtctagcctgagatcagaggacaccgccgtctactactgcactaggtggactaccggcacaggcgcctactggggtcaaggcactaccgtgaccgtgtctagcgctagcactaagggcccgtccgtgttccccctggcaccttgtagccggagcactagcgaatccaccgctgccctcggctgcctggtcaaggattacttcccggagcccgtgaccgtgtcctggaacagcggagccctgacctccggagtgcacaccttccccgctgtgctgcagagctccgggctgtactcgctgtcgtcggtggtcacggtgccttcatctagcctgggtaccaagacctacacttgcaacgtggaccacaagccttccaacactaaggtggacaagcgcgtcgaatcgaagtacggcccaccgtgcccgccttgtcccgcgccggagttcctcggcggtccctcggtctttctgttcccaccgaagcccaaggacactttgatgatttcccgcacccctgaagtgacatgcgtggtcgtggacgtgtcacaggaagatccggaggtgcagttcaattggtacgtggatggcgtcgaggtgcacaacgccaaaaccaagccgagggaggagcagttcaactccacttaccgcgtcgtgtccgtgctgacggtgctgcatcaggactggctgaacgggaaggagtacaagtgcaaagtgtccaacaagggacttcctagctcaatcgaaaagaccatctcgaaagccaagggacagccccgggaaccccaagtgtataccctgccaccgagccaggaagaaatgactaagaaccaagtctcattgacttgccttgtgaagggcttctacccatcggatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagccggaaaacaactacaagaccacccctccggtgctggactcagacggatccttcttcctctactcgcggctgaccgtggataagagcagatggcaggagggaaatgtgttcagctgttctgtgatgcatgaagccctgcacaaccactacactcagaagtccctgtccctctccctggga LC BAP049 клона B SEQ ID NO: 10 (Kabat) LCDR1 KSSQSLLDSGNQKNFLT SEQ ID NO: 11 (Kabat) LCDR2 WASTRES SEQ ID NO: 32 (Kabat) LCDR3 QNDYSYPYT SEQ ID NO: 13 (Chothia) LCDR1 SQSLLDSGNQKNF SEQ ID NO: 14 (Chothia) LCDR2 WAS SEQ ID NO: 33 (Chothia) LCDR3 DYSYPY SEQ ID NO: 54 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 97 ДНК VL Gagatcgtcctgactcagtcacccgctaccctgagcctgagccctggcgagcgggctacactgagctgtaaatctagtcagtcactgctggatagcggtaatcagaagaacttcctgacctggtatcagcagaagcccggtaaagcccctaagctgctgatctactgggcctctactagagaatcaggcgtgccctctaggtttagcggtagcggtagtggcaccgacttcaccttcactatctctagcctgcagcccgaggatatcgctacctactactgtcagaacgactatagctacccctacaccttcggtcaaggcactaaggtcgagattaag SEQ ID NO: 56 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 98 ДНК LC Gagatcgtcctgactcagtcacccgctaccctgagcctgagccctggcgagcgggctacactgagctgtaaatctagtcagtcactgctggatagcggtaatcagaagaacttcctgacctggtatcagcagaagcccggtaaagcccctaagctgctgatctactgggcctctactagagaatcaggcgtgccctctaggtttagcggtagcggtagtggcaccgacttcaccttcactatctctagcctgcagcccgaggatatcgctacctactactgtcagaacgactatagctacccctacaccttcggtcaaggcactaaggtcgagattaagcgtacggtggccgctcccagcgtgttcatcttcccccccagcgacgagcagctgaagagcggcaccgccagcgtggtgtgcctgctgaacaacttctacccccgggaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagagcggcaacagccaggagagcgtcaccgagcaggacagcaaggactccacctacagcctgagcagcaccctgaccctgagcaaggccgactacgagaagcataaggtgtacgcctgcgaggtgacccaccagggcctgtccagccccgtgaccaagagcttcaacaggggcgagtgc SEQ ID NO: 92 ДНК HC GAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCTGGCGAGTCCCTGCGGATCTCCTGCAAGGGCTCTGGCTACACCTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCTACCGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCAACATCTATCCTGGCACCGGCGGCTCCAACTTCGACGAGAAGTTCAAGAACAGAGTGACCATCACCGCCGACAAGTCCACCTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGGTGGACAACCGGCACAGGCGCTTATTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACCGTGTCCTCTGCTTCTACCAAGGGGCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCTCCAGAAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGAGCAAGTACGGCCCACCCTGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTTTAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGTAAGGTCTCCAACAAGGGCCTGCCAAGCAGCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGGTCTACACCCTGCCACCCAGCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCAAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCAGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAGGCTGACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGGAGGGCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGC LC BAP049 клона E SEQ ID NO: 10 (Kabat) LCDR1 KSSQSLLDSGNQKNFLT SEQ ID NO: 11 (Kabat) LCDR2 WASTRES SEQ ID NO: 32 (Kabat) LCDR3 QNDYSYPYT SEQ ID NO: 13 (Chothia) LCDR1 SQSLLDSGNQKNF SEQ ID NO: 14 (Chothia) LCDR2 WAS SEQ ID NO: 33 (Chothia) LCDR3 DYSYPY SEQ ID NO: 70 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 106 ДНК VL Gagatcgtcctgactcagtcacccgctaccctgagcctgagccctggcgagcgggctacactgagctgtaaatctagtcagtcactgctggatagcggtaatcagaagaacttcctgacctggtatcagcagaagcccggtcaagcccctagactgctgatctactgggcctctactagagaatcaggcgtgccctctaggtttagcggtagcggtagtggcaccgacttcaccttcactatctctagcctggaagccgaggacgccgctacctactactgtcagaacgactatagctacccctacaccttcggtcaaggcactaaggtcgagattaag SEQ ID NO: 72 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 107 ДНК LC Gagatcgtcctgactcagtcacccgctaccctgagcctgagccctggcgagcgggctacactgagctgtaaatctagtcagtcactgctggatagcggtaatcagaagaacttcctgacctggtatcagcagaagcccggtcaagcccctagactgctgatctactgggcctctactagagaatcaggcgtgccctctaggtttagcggtagcggtagtggcaccgacttcaccttcactatctctagcctggaagccgaggacgccgctacctactactgtcagaacgactatagctacccctacaccttcggtcaaggcactaaggtcgagattaagcgtacggtggccgctcccagcgtgttcatcttcccccccagcgacgagcagctgaagagcggcaccgccagcgtggtgtgcctgctgaacaacttctacccccgggaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagagcggcaacagccaggagagcgtcaccgagcaggacagcaaggactccacctacagcctgagcagcaccctgaccctgagcaaggccgactacgagaagcataaggtgtacgcctgcgaggtgacccaccagggcctgtccagccccgtgaccaagagcttcaacaggggcgagtgc HC BAP049 клона B SEQ ID NO: 133 (Kabat) HCDR1 ACCTACTGGATGCAC SEQ ID NO: 134 (Kabat) HCDR2 AATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAAT SEQ ID NO: 135 (Kabat) HCDR3 TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC SEQ ID NO: 136 (Chothia) HCDR1 GGCTACACCTTCACTACCTAC SEQ ID NO: 137 (Chothia) HCDR2 TACCCCGGCACCGGCGGC SEQ ID NO: 135 (Chothia) HCDR3 TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC LC BAP049 клона B SEQ ID NO: 138 (Kabat) LCDR1 AAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACC SEQ ID NO: 139 (Kabat) LCDR2 TGGGCCTCTACTAGAGAATCA SEQ ID NO: 140 (Kabat) LCDR3 CAGAACGACTATAGCTACCCCTACACC SEQ ID NO: 141 (Chothia) LCDR1 AGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTC SEQ ID NO: 142 (Chothia) LCDR2 TGGGCCTCT SEQ ID NO: 143 (Chothia) LCDR3 GACTATAGCTACCCCTAC HC BAP049 клона E SEQ ID NO: 133 (Kabat) HCDR1 ACCTACTGGATGCAC SEQ ID NO: 134 (Kabat) HCDR2 AATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAAT SEQ ID NO: 135 (Kabat) HCDR3 TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC SEQ ID NO: 136 (Chothia) HCDR1 GGCTACACCTTCACTACCTAC SEQ ID NO: 137 (Chothia) HCDR2 TACCCCGGCACCGGCGGC SEQ ID NO: 135 (Chothia) HCDR3 TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC LC BAP049 клона E SEQ ID NO: 138 (Kabat) LCDR1 AAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACC SEQ ID NO: 139 (Kabat) LCDR2 TGGGCCTCTACTAGAGAATCA SEQ ID NO: 140 (Kabat) LCDR3 CAGAACGACTATAGCTACCCCTACACC SEQ ID NO: 141 (Chothia) LCDR1 AGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTC SEQ ID NO: 142 (Chothia) LCDR2 TGGGCCTCT SEQ ID NO: 143 (Chothia) LCDR3 GACTATAGCTACCCCTAC

Таблица 2

Аминокислотные и нуклеотидные последовательности каркасных областей тяжелых и легких цепей гуманизированных mAb BAP049 клона B и BAP049 клона E

Аминокислотная последовательность Нуклеотидная последовательность VHFW1
(тип a) EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGS (SEQ ID NO: 147) GAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAGGATCTCCTGTAAGGGTTCT (SEQ ID NO: 148)
GAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCTGGCGAGTCCCTGCGGATCTCCTGCAAGGGCTCT (SEQ ID NO: 149)
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCACTGAGAATTAGCTGTAAAGGTTCA (SEQ ID NO: 150) VHFW1
(тип b) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 151) CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCT (SEQ ID NO: 152) VHFW2
(тип a) WVRQATGQGLEWMG
(SEQ ID NO: 153) TGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGT (SEQ ID NO: 154)
TGGGTGCGACAGGCTACCGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGC (SEQ ID NO: 155)
tgggtccgccaggctaccggtcaaggcctcgagtggatgggt (SEQ ID NO: 156) VHFW2
(тип b) WIRQSPSRGLEWLG
(SEQ ID NO: 157) TGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGT (SEQ ID NO: 158)
TGGATCCGGCAGTCCCCCTCTAGGGGCCTGGAATGGCTGGGC (SEQ ID NO: 159) VHFW2
(тип c) WVRQAPGQGLEWMG
(SEQ ID NO: 160) TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGT (SEQ ID NO: 161) VHFW3
(тип a) RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTR (SEQ ID NO: 162) AGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACAAGA (SEQ ID NO: 163)
AGAGTGACCATCACCGCCGACAAGTCCACCTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGG (SEQ ID NO: 164)
AGAGTGACTATCACCGCCGATAAGTCTACTAGCACCGCCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCACTAGG (SEQ ID NO: 165) VHFW3
(тип b) RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (SEQ ID NO: 166) AGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACAAGA (SEQ ID NO: 167)
AGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTACCAGA (SEQ ID NO: 168) VHFW4 WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO: 169) TGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGTCCTCC (SEQ ID NO: 170)
TGGGGCCAGGGCACCACAGTGACCGTGTCCTCT (SEQ ID NO: 171)
TGGGGTCAAGGCACTACCGTGACCGTGTCTAGC (SEQ ID NO: 172)
TGGGGCCAGGGCACAACAGTGACCGTGTCCTCC (SEQ ID NO: 173) VLFW1
(тип a) EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC (SEQ ID NO: 174) GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCACCTGC (SEQ ID NO: 175)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGACTTCCAGTCCGTGACCCCCAAAGAAAAAGTGACCATCACATGC (SEQ ID NO: 176) VLFW1
(тип b) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
(SEQ ID NO: 177) GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGC (SEQ ID NO: 178)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCTACCCTGTCCTGC (SEQ ID NO: 179)
Gagatcgtcctgactcagtcacccgctaccctgagcctgagccctggcgagcgggctacactgagctgt (SEQ ID NO: 180) VLFW1
(тип c) DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC (SEQ ID NO: 181) GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGC (SEQ ID NO: 182) VLFW1
(тип d) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 183) GATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGC (SEQ ID NO: 184) VLFW1
(тип e) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 185) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGC (SEQ ID NO: 186) VLFW2
(тип a) WYQQKPGQAPRLLIY
(SEQ ID NO: 187) TGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTAT (SEQ ID NO: 188)
TGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTAC (SEQ ID NO: 189)
tggtatcagcagaagcccggtcaagcccctagactgctgatctac (SEQ ID NO: 190) VLFW2
(тип b) WYQQKPGKAPKLLIY
(SEQ ID NO: 191) TGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTAT (SEQ ID NO: 192)
tggtatcagcagaagcccggtaaagcccctaagctgctgatctac (SEQ ID NO: 193) VLFW2
(тип c) WYLQKPGQSPQLLIY
(SEQ ID NO: 194) TGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTAT (SEQ ID NO: 195) VLFW3
(тип a) GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 196) GGGGTCCCCTCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCTTTACCATCAGTAGCCTGGAAGCTGAAGATGCTGCAACATATTACTGT (SEQ ID NO: 197)
GGCGTGCCCTCTAGATTCTCCGGCTCCGGCTCTGGCACCGACTTTACCTTCACCATCTCCAGCCTGGAAGCCGAGGACGCCGCCACCTACTACTGC (SEQ ID NO: 198)
GGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGTAGCGGTAGTGGCACCGACTTCACCTTCACTATCTCTAGCCTGGAAGCCGAGGACGCCGCTACCTACTACTGT (SEQ ID NO: 199) VLFW3
(тип b) GIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFC (SEQ ID NO: 200) GGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGT (SEQ ID NO: 201) VLFW3
(тип c) GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC (SEQ ID NO: 202) GGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGT (SEQ ID NO: 203)
GGCGTGCCCTCTAGATTCTCCGGCTCCGGCTCTGGCACCGAGTTTACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTACTACTGC (SEQ ID NO: 204) VLFW3
(тип d) GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC (SEQ ID NO: 205) GGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGT (SEQ ID NO: 206)
ggcgtgccctctaggtttagcggtagcggtagtggcaccgacttcaccttcactatctctagcctgcagcccgaggatatcgctacctactactgt (seq id no: 207) VLFW4 FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 208) TTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 209)
TTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 210)
ttcggtcaaggcactaaggtcgagattaag (SEQ ID NO: 211)

Таблица 3

Аминокислотные последовательности константной области тяжелой цепи IgG человека и легкой каппа-цепи человека

HC Аминокислотная последовательность мутантной константной области IgG4 (S228P) (нумерация EU)
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK (SEQ ID NO: 212) LC Аминокислотная последовательность константной области каппа-цепи человека
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK
SFNRGEC (SEQ ID NO: 213) HC Аминокислотная последовательность мутантной константной области IgG4 (S228P), в которой отсутствует C-концевой лизин (K) (нумерация EU)
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLG (SEQ ID NO: 214) HC IgG1 дикого типа
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 215) HC Аминокислотная последовательность мутантной константной области IgG1 (N297A) (нумерация EU)
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYA STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW
QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 216) HC Аминокислотная последовательность мутантной константной области IgG1 (D265A, P329A) (нумерация EU)
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVAVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LAAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 217) HC Аминокислотная последовательность мутантной константной области IgG1 (L234A, L235A) (нумерация EU)
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 218)

Таблица 4

Аминокислотные последовательности лидерных последовательностей тяжелых и легких цепей гуманизированных mAb BAP049 клона B и BAP049 клона E

BAP049 клона B HC MAWVWTLPFLMAAAQSVQA (SEQ ID NO: 221) LC MSVLTQVLALLLLWLTGTRC (SEQ ID NO: 222) BAP049 клона E HC MAWVWTLPFLMAAAQSVQA (SEQ ID NO: 221) LC MSVLTQVLALLLLWLTGTRC (SEQ ID NO: 222)

Другие иллюстративные антитела к PD-1 для применения в комбинациях, описанных в данном документе

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой ниволумаб (Bristol-Myers Squibb), также известный как MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558 или OPDIVO®. Ниволумаб (клон 5C4) и другие антитела к PD-1 раскрыты в US 8008449 и WO 2006/121168, включенных посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи ниволумаба, например, раскрытые в таблице 5.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой пембролизумаб (Merck & Co), также известный как ламбролизумаб, MK-3475, MK03475, SCH-900475 или KEYTRUDA®. Пембролизумаб и другие антитела к PD-1 раскрыты в Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, US 8354509 и WO 2009/114335, включенных посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи пембролизумаба, например, раскрытые в таблице 5.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой пидилизумаб (CureTech), также известный как CT-011. Пидилизумаб и другие антитела к PD-1 раскрыты в Rosenblatt, J. et al. (2011) J Immunotherapy 34(5): 409-18, US 7695715, US 7332582 и US 8686119, включенных посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи пидилизумаба, например, раскрытые в таблице 5.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой MEDI0680 (Medimmune), также известный как AMP-514. MEDI0680 и другие антитела к PD-1 раскрыты в US 9205148 и WO 2012/145493, включенных посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельного участка тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи MEDI0680.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой REGN2810 (Regeneron). В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи REGN2810.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой PF-06801591 (Pfizer). В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи PF-06801591.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой BGB-A317 или BGB-108 (Beigene). В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи BGB-A317 или BGB-108.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой INCSHR1210 (Incyte), также известный как INCSHR01210 или SHR-1210. В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи INCSHR1210.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой TSR-042 (Tesaro), также известный как ANB011. В одном варианте осуществления антитело к PD-1 содержит одну или несколько последовательностей CDR (или в совокупности все последовательности CDR), последовательность вариабельной области тяжелой цепи или легкой цепи или последовательность тяжелой цепи или легкой цепи TSR-042.

Дополнительные известные антитела к PD-1 включают антитела, описанные, например, в WO 2015/112800, WO 2016/092419, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2014/194302, WO 2014/209804, WO 2015/200119, US 8735553, US 7488802, US 8927697, US 8993731 и US 9102727, включенных посредством ссылки во всей своей полноте.

В одном варианте осуществления антитело к PD-1 представляет собой антитело, которое конкурирует за связывание и/или связывается с тем же эпитопом в PD-1, что и одно из антител к PD-1, описанных в данном документе.

Таблица 5. Аминокислотные последовательности других иллюстративных антител к PD-1

Ниволумаб SEQ ID NO: 36 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 37 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Пембролизумаб SEQ ID NO: 225 HC QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 39 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Пидилизумаб SEQ ID NO: 40 HC QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLQWMGWINTDSGESTYAEEFKGRFVFSLDTSVNTAYLQITSLTAEDTGMYFCVRVGYDALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 41 LC EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWFQQKPGKAPKLWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTSYCLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Комбинированное лечение нейродегенеративных заболеваний, таких как ALS, с помощью BLZ945

На сегодняшний день для лечения ALS одобрены два лекарственных средства - рилузол и эдаравон. Основные печеночные метаболические пути биотрансформации рилузола у людей могут включать прямое глюкуронирование рилузола (с участием изоформы глюкуротрансферазы UGT-HP4) и окисление рилузола до N-гидроксирилузола под действием CYP1A2 и CYP1A1 с последующим быстрым глюкуронированием (Sanderink et al 1997). Кроме того, было показано, что рилузол является субстратом для белка устойчивости к раку молочной железы (BCRP) и P-гликопротеина (P-gp) (Milane et al 2009). Предполагается, что совместное введение рилузола не повлияет на фармакокинетические показатели BLZ945.

Поэтому в одном варианте осуществления рилузол вводят в комбинации с режимами введения доз BLZ945, раскрытыми в данном документе, для лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как ALS, рассеянный склероз (РС) или болезнь Альцгеймера.

При совместном введении эдаравона с BLZ945 не ожидается значительного РК взаимодействия. Эдаравон представляет собой средство внутривенной терапии. Конъюгация глюкуронида является основным путем метаболизма эдаравона, и было установлено, что восемь UGT (UGT1A1, UGT1A6, UGT1A7, UGT1A8, UGT1A9, UGT1A10, UGT2B7 и UGT2B17) способствуют продуцированию значительного количества глюкуронидных метаболитов (Dash et al. 2018). Результаты исследований in vitro показали, что при клинической дозе эдаравон и его метаболиты, как ожидается, не будут потенциально ингибировать ферменты CYP, UGT и переносчики у людей. Ожидается, что на фармакокинетические показатели эдаравона не окажут существенного влияния ингибиторы ферментов CYP, UGT или основных переносчиков.

Поэтому в одном варианте осуществления эдаравон вводят в комбинации с режимами введения доз BLZ945, раскрытыми в данном документе, для лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как ALS, рассеянный склероз (РС) или болезнь Альцгеймера.

Примеры

Пример 1. Многоцентровое открытое исследование фазы I/II безопасности и эффективности BLZ945 в качестве единственного средства и в комбинации со спартализумабом у взрослых пациентов с солидными опухолями на поздней стадии

Цель данного исследования BLZ945, проводимого впервые на человеке (FIH), в качестве единственного средства или в комбинации со спартализумабом, заключалась в определении характеристик безопасности, переносимости, фармакокинетических показателей (РК), фармакодинамических показателей и показателей противоопухолевой активности BLZ945, вводимого перорально в качестве единственного средства или в комбинации со спартализумабом, вводимым внутривенно (i.v.), у взрослых пациентов с солидными опухолями на поздней стадии.

План исследования

Данное исследование является FIH, открытым, многоцентровым исследованием фазы I/II, которое состоит из части фазы I повышения дозы BLZ945 в качестве единственного средства (включая отдельную японскую группу повышения дозы BLZ945 в качестве единственного средства) и в комбинации со спартализумабом. Могут быть оценены альтернативные режимы введения доз BLZ945. BLZ945 подлежит введению перорально, а спартализумаб подлежит введению i.v. каждые четыре недели до тех пор, пока у пациента не возникнет неприемлемая токсичность, прогрессирование заболевания, и/или пока лечение не будет прекращено по усмотрению исследователя или пациента.

Критерии включения (часть повышения дозы при солидных опухолях на поздней стадии)

• Фаза I. Пациенты с запущенными/метастатическими солидными опухолями (включая лимфому), с поддающимся измерению или неподдающимся измерению заболеванием, как определено в Критериях оценки ответа при солидных опухолях (RECIST) версии 1.1 или RANO (глиобластома), у которых наблюдалось прогрессирование, несмотря на стандартную терапию, или которые не переносят стандартную терапию, или для которых не существует стандартной терапии.

• Пациенты должны характеризоваться локализацией заболевания, позволяющей проводить биопсию, и быть кандидатом на биопсию опухоли в соответствии с рекомендациями лечебного учреждения. Пациент должен быть готов к проведению новой биопсии опухоли при скрининге и в ходе лечения. Исключения могут быть рассмотрены для пациентов с глиобластомой после задокументированного обсуждения с компанией Novartis.

• Фаза II. Пациенты с опухолями на поздней стадии/метастатическими опухолями по нижеперечисленным выбранным показаниям, имеющие по меньшей мере одно измеримое поражение, определенное по RECIST v1.1 или критериям оценки ответа в нейроонкологии RANO (глиобластома), или по Руководству по оценке эффективности в исследованиях лимфомы Ходжкина и неходжкинской лимфомы по показанию(-ям) лимфомы.

○ Рак поджелудочной железы на поздней стадии без ответа или с прогрессированием на фоне лечения или после лечения стандартными способами лечения.

○ Тройной негативный рак молочной железы на поздней стадии без ответа на стандартное лечение или с прогрессированием на фоне или после стандартного лечения.

○ Рецидивирующая глиобластома, без ответа или с прогрессированием на фоне лучевой терапии и темозоломида, за исключением пациентов с недавно диагностированной глиобластомой с неметилированным геном O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы (MGMT), которые могли получить только лучевую терапию.

Режим введения доз

Введение дозы BLZ945 оценивают по следующим графикам: введение на протяжении 7 дней/отсутствие введения на протяжении 7 дней (т. e. введение BLZ945 каждый день в течение 7 дней и перерыв на 7 дней), один раз в неделю (Q1W) и введение на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 10 дней (т. e. введение BLZ945 каждый день в течение 4 дней и перерыв на 10 дней). Для каждого из этих графиков можно оценивать введение дозы один раз в день (QD) или два раза в день (BID). При однократном ежедневном приеме пациенты должны принимать дозу приблизительно в одно и то же время утром. При введении дозы два раза в день первую дозу следует принимать утром, а вторую дозу следует принимать приблизительно через 10-12 часов после утренней дозы.

В дни, в которые осуществляется сбор образцов для анализа PK, пациенту следует принять BLZ945 во время визита в клинику после сбора образцов для анализа PK перед введением дозы и перед сбором образцов для анализа PK после введения дозы согласно инструкциям исследовательского персонала. Пациентам следует принимать BLZ945 натощак (т. е. воздерживаться от еды и питья, кроме воды) за по меньшей мере 1 час до или через 2 часа после приема пищи. Каждую дозу следует запивать стаканом воды. Пациентов следует инструктировать о том, чтобы они глотали целые капсулы и не разжевывали или не открывали их.

Таблица 6. Доза и график лечения

Исследуемое средство лечения Фармацевтическая форма и путь введения Доза Частота и/или режим BLZ945 Капсула, перорально (p.o.) 150 мг (начальная доза) Один раз в день или два раза в день либо введение на протяжении 7 дней/отсутствие введения на протяжении 7 дней,
либо введение на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 10 дней, либо Q1W (один раз в неделю) спартализумаб Порошок для получения раствора для i.v. инфузий 400 мг Каждые 4 недели

Все пациенты, получающие лечение либо BLZ945 в качестве единственного средства, либо в комбинации со спартализумабом, начнут исследуемое лечение в день 1 цикла 1. Каждый цикл будет состоять из 28 дней.

Начальная доза BZL945 в качестве единственного средства (SA)

Чтобы оценить безопасность, РК и противоопухолевую активность BLZ945 в диапазоне доз, рекомендуемая начальная доза в данном исследовании составит 150 мг по графику введения на протяжении 7 дней/отсутствия введения на протяжении 7 дней. Введение дозы один раз в неделю (Q1W) или введение дозы на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 10 дней может быть также изучено параллельно, если это будет сочтено целесообразным на основании появляющихся оценок РК и безопасности. При принятии решения о повышении дозы будет использоваться байесовская логистическая регрессионная модель (BLRM) с принципом повышения с контролем передозировки (EWOC), основанная на данных DLT в контексте имеющейся информации о безопасности, РК и PD. Такой дизайн открытого исследования по повышению дозы с использованием BLRM является хорошо зарекомендовавшим себя способом оценки MTD/RP2D у пациентов с онкологическим заболеванием. При адаптивной BLRM будут руководствоваться принципом EWOC для контроля риска DLT у пациентов, которые в будущем должны будут войти в исследование. Использование Байесовских адаптивных моделей ответа для небольших наборов данных было принято Европейским агентством по лекарственным средствам (Guideline on clinical trials in small populations, 13-Feb-2007) и подтверждено многочисленными публикациями (Zacks and Hersh 1998, Neuenschwander et al 2008, Neuenschwander et al 2010), и его разработка и надлежащее использование является одним из аспектов Critical Path Initiative FDA. Начальная доза согласно новому(-ым) графику(-ам) будет равна максимальной дозе или ниже максимальной дозы, которая была ранее протестирована и соответствовала критериям повышения с контролем передозировки (EWOC) по байесовской логистической регрессионной модели (BLRM) по графику введения на протяжении 7 дней/отсутствия введения на протяжении 7 дней.

В японской группе повышение дозы единственного средства BLZ945 будут проводить отдельно от текущего повышения дозы в группе, отличной от японской, при этом начальная доза будет считаться подходящей на основании появляющихся оценок РК и безопасности и будет соответствовать критериям EWOC как BLRM для глобального повышения дозы, так и для специального повышения в Японии.

Если будет сочтено целесообразным, могут быть также изучены графики введения доз дважды в день. Суммарная начальная доза (т. е. утренняя доза плюс вечерняя доза) не будет превышать дозу однократного ежедневного введения, которая была протестирована и показана удовлетворяющей критериям EWOC с использованием байесовской иерархической логистической регрессионной модели (BHLRM) после обсуждения с участвующими исследователями во время телеконференции по повышению дозы.

Начальная доза BZL945 и комбинация со спартализумабом

Для введения безопасной дозы BLZ945 в комбинации со спартализумабом начальная доза BLZ945 будет соответствовать следующим требованиям:

• доза уже была протестирована в группе повышения дозы единственного средства;

• на по меньшей мере один уровень дозы ниже самой высокой исследуемой дозы единственного средства BLZ945, которая удовлетворяет критерию EWOC в рамках соответствующего единственного средства BLRM, считается подходящей на основании появляющихся оценок РК и безопасности и отвечает критериям EWOC на основании BLRM модели комбинации;

• не менее начальной дозы единственного средства (т. е. 150 мг), если при начальной дозе не наблюдается DLT.

В обоих повышениях дозы комбинации спартализумаб будут вводить в фиксированной дозе 400 мг i.v. каждые 4 недели, которая, как было показано, хорошо переносится.

Таблица 7. Уровни предварительных доз (единственное средство BLZ945)

Уровень дозы Предложенная доза BLZ945* Увеличение предыдущей дозы -1** 100 мг -33% 1 150 мг Начальная доза 2 300 мг 100% 3 600 мг 100% 4 900 мг 50%

*Возможно, что дополнительные и/или промежуточные уровни дозы будут добавлены в ходе исследования. Когорты могут быть добавлены при любом уровне дозы ниже MTD, чтобы лучше понять безопасность, PK или PD.

**Уровень дозы -1 представляет собой дозы средства лечения для пациентов, нуждающихся в снижении дозы относительно начального уровня дозы. Для данного исследования не допускается снижение дозы ниже уровня дозы -1.

Таблица 8. Уровни предварительных доз (BLZ945 в комбинации со спартализумабом)

Уровень дозы Предложенная доза BLZ945* Увеличение предыдущей дозы Предложенная доза спартализумаба -1** 100 мг -33% 400 мг 1 150 мг Начальная доза 400 мг 2 300 мг 100% 400 мг 3 600 мг 100% 400 мг 4 900 мг 50% 400 мг

*Возможно, что дополнительные и/или промежуточные уровни дозы будут добавлены в ходе исследования. Когорты могут быть добавлены при любом уровне дозы ниже MTD, чтобы лучше понять безопасность, PK или PD.

**Уровень дозы -1 представляет собой дозы средства лечения для пациентов, нуждающихся в снижении дозы относительно начального уровня дозы. Для данного исследования не допускается снижение дозы ниже уровня дозы -1.

Продолжительность лечения

Пациент может продолжать лечение единственным средством BLZ945 до тех пор, пока у пациента не возникнет неприемлемая токсичность, подтвержденное прогрессирование заболевания согласно irRC (или согласно iRANO для пациентов с глиобластомой) или прогрессирующее (метаболическое) заболевание согласно Руководству по оценке эффективности в исследованиях лимфомы Ходжкина и неходжкинской лимфомы для пациентов с r/r лимфомой, и/или пока лечение не будет прекращено по усмотрению исследователя или пациента.

Пациент может продолжать лечение с помощью BLZ945 в комбинации со спартализумабом до тех пор, пока у пациента не возникнет неприемлемая токсичность, подтвержденное прогрессирование заболевания согласно irRC (или согласно iRANO для пациентов с глиобластомой) или прогрессирующее (метаболическое) заболевание согласно Руководству по оценке эффективности в исследованиях лимфомы Ходжкина и неходжкинской лимфомы для пациентов с r/r лимфомой, и/или пока лечение не будет прекращено по усмотрению исследователя или пациента. В первые 24 недели лечения пациенты не будут выводиться из исследования в связи с прогрессированием заболевания согласно RECIST v1.1 (или согласно RANO для пациентов с глиобластомой или согласно Руководству по оценке эффективности в исследованиях лимфомы Ходжкина и неходжкинской лимфомы для пациентов с r/r лимфомой).

Пример 2. Моделирование и имитация влияния перерыва во введении дозы на АЕ, связанные с ALT

В ходе клинического исследования в примере 1 нежелательные явления (АЕ) всех степеней и независимо от связи с исследуемым лечением были зарегистрированы у всех 68 пациентов (100%), получавших лечение единственным средством BLZ945, и у всех 46 пациентов (100%), получавших лечение в комбинированном режиме. Наиболее часто регистрируемые АЕ (>10%), предположительно связанные с единственным средством BLZ945, включали повышение уровня аспартатаминотрансферазы (AST), тошноту, рвоту, повышение уровня аланинаминотрансферазы (ALT), утомляемость, повышение уровня амилазы, повышение уровня креатинфосфокиназы крови и снижение аппетита. Наиболее часто (>10%) при комбинированном лечении регистрировали такие предполагаемые АЕ, как повышение уровня AST, повышение уровня ALT, зуд, усталость, тошнота, сыпь и рвота. В получавшей единственное средство группе регистрировали три предполагаемых SAE. Этими SAE были повышение уровня AST 3 степени, астения 3 степени и внезапная смерть 4 степени. В получавшей комбинацию группе регистрировали 7 случаев SAE у 4 пациентов, предположительно связанных с исследуемым лечением, включая повышение уровня AST 3 степени, повышение уровня ALT 4 степени, иммуноопосредованный гепатит 4 степени, колит 3 степени, стоматит 2 степени, пирексию 1 степени и макулопапулезную сыпь 2 степени.

Предварительные фармакокинетические показатели (РК) однократной дозы и многократных доз BLZ945 для перорального введения при введении отдельно и в комбинации со спартализумабом были оценены в текущем исследовании CBLZ945X2101. BLZ945 продемонстрировал быструю абсорбцию при всех тестируемых дозах как в качестве единственного средства, так и в комбинации со спартализумабом. Средний конечный период полужизни (T1/2) для BLZ945 варьировал от 16,4 до 26,7 часа и был одинаковым при приеме в виде одной дозы или нескольких доз, при всех дозах и режимах введения доз, а также при приеме отдельно или в комбинации со спартализумабом. Анализ нормализованной дозы Cmax и AUC0-24 ч. показал, что воздействие BLZ945 менее чем пропорционально дозе, начиная с дозы 600 мг, при приеме отдельно или в комбинации со спартализумабом. Анализ индекса накопления (Racc) показал, что введение дозы один раз в день в течение 7 дней или 4 дней вызывало большее накопление в конце периода введения дозы (средний Racc варьировал от 1,54 до 2,20), чем режим Q1W (средний Racc варьировал от 1,07 до 1,24). На основании предварительных данных, полученных на сегодняшний день, спартализумаб, по-видимому, не влияет на РК BLZ945.

Моделирование в отношении ALT у яванских макак, основанное на доклинических данных, предсказало, что перерыв во введении дозы может снизить вероятность повышения уровня ALT (см. фигуры 1 и 2). Кроме того, данные, полученные в клиническом исследовании примера 1 от 5 пациентов, получавших дозу 150 мг, и 5 пациентов, получавших дозу 300 мг, использовали для построения популяционной модели PK-ALT, которая связывает концентрацию лекарственного средства BLZ945 с ALT. С использованием этой модели проводили моделирования для прогнозирования вероятности АЕ, связанных с ALT, 1, 2, 3 и 4 степени. Моделировали три разных режима: введение на протяжении 7 дней/отсутствие введения на протяжении 7 дней при дозе 300 мг (7 дней X 300 мг=общая доза BLZ945 2100 мг) и 2100 мг на протяжении периода 14 дней Q1W (один раз в неделю), а также введение на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 10 дней. Сравнение этих трех режимов привело к выводу о необходимости периода вымывания (перерыва во введении лекарственного средства) для обеспечения восстановления нормального значения исходного уровня ALT, а также о снижении вероятности возникновения таких АЕ при режиме введение на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 10 дней.

Необходимость периода вымывания обусловлена РК, ассоциированными с BLZ945, а не конкретным заболеванием, которое лечат. Фактически, макрофаги, экспрессирующие CSF-1R, особенно клетки Купфера в печени, играют роль в клиренсе ферментов из кровообращения, включая аланинаминотрансферазу (ALT), аспартатаминотрансферазу (AST) и креатинкиназу (СК). Ингибирование CSF-1R индуцирует повышение уровней AST и ALT вследствие истощения CSF1R+ клеток Купфера (классовый эффект соединений, нацеленных на CSF-1R). Таким образом, данный режим введения дозы/отсутствия введения дозы (например, циклы введения дозы на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 10 дней или введения на протяжении 7 дней/отсутствия введения на протяжении 7 дней и т. д.) в целом применим для лечения заболеваний с помощью BLZ945; например, для лечения рака или нейродегенеративных заболеваний, таких как ALS или MS, с помощью BLZ945.

Пример 3. Сингенная мышиная модель с использованием MC38 на мышах C57BL/6N

В другой серии экспериментов с использованием сингенной мышиной модели с использованием MC38 у мышей C57BL/6N сравнивали эффективность двух различных графиков применения BLZ945 (фигура 3), используя еженедельное введение дозы BLZ945 и введение дозы на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 3 дней BLZ945 отдельно и в комбинации с антителом к PD-1. Лечение антителом к PD-1 привело к полному ответу (CR) у 6/10 животных, еженедельное введение BLZ945 в комбинации с антителом к PD-1 привело к 5/10 CR и значительному подавлению роста опухоли по сравнению с получавшими среду-носитель животными, что соответствует % T/C по сравнению с контролем 37% (p=3,90×10^-2) в день 10 и 32% (p=1,57×10^-2) в день 14. Введение BLZ945 по графику введение на протяжении 4 дней/отсутствие введения на протяжении 3 дней в комбинации с антителом к PD-1 привело к 4/10 CR и значительному подавлению роста опухоли в день 10, что соответствует % T/C по сравнению с контролем 28% (p=4,76×10^-2). В день 14 после начала лечения наблюдали тенденцию к подавлению роста опухоли, что соответствовало % T/C по сравнению с контролем 28%.

Дозы 200 мг/кг BLZ945 и 10 мг/кг антитела к PD-1 вводили по указанным графикам, а объемы опухолей измеряли в день 14 после начала исследования. Статистическую значимость рассчитывали с использованием одностороннего ANOVA с апостериорным критерием Даннета для сравнения лечения с контрольной группой.

Для измерения повышения уровня CSF1 в плазме крови в качестве биомаркера ингибирования CSF-1R проводили забор образцов крови на исходном уровне и через 6 часов в указанные дни (фигура 4). Статистически значимое повышение уровня CSF-1 в плазме крови наблюдали только при графике введения BLZ945 на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 3 дней отдельно и в комбинации (фигура 4).

Уровни CSF-1 в плазме крови мыши. A. Изменения уровней CSF-1 с течением времени в различных получавших лечение группах. B. Статистический анализ уровней CSF-1 при введении BLZ945 по сравнению со средой-носителем на протяжении 4 дней/отсутствии введения на протяжении 3 дней и при введении BLZ945 по сравнению со средой-носителем на протяжении 4 дней/отсутствии введения на протяжении 3 дней в комбинации с антителом к PD-1. Статистическую значимость рассчитывали с использованием двухстороннего непарного непараметрического теста Манна-Уитни для сравнения лечения с контрольными группами.

Чтобы получить доступ к динамике ассоциированных с опухолью иммунных клеток, проводили повторное исследование с использованием только графика введения на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 3 дней в качестве единственного средства и в комбинации с антителом к PD-1. Значительное снижение уровня TAM наблюдали через 10 и 14 дней лечения, а также транзиентное снижение уровня Treg в день 10 после начала лечения.

На фигуре 5 показан анализ инфильтрирующих опухоль макрофагов (фиг. 5A) и Treg (фиг. 5B) при лечении с помощью BLZ945 при графике введения на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 3 дней в день 10 (A) и день 14 (B) и в комбинации с антителом к PD-1 с помощью проточной цитометрии. Статистическую значимость рассчитывали с использованием двухстороннего непарного непараметрического теста Манна-Уитни для сравнения лечения с контрольными группами.

Тестирование эффективности повторяли с субоптимальной дозой антитела к PD-1 (5 мг/кг) для тестирования аддитивного эффекта BLZ945, наблюдаемого при введении в комбинации. Интересно, что статистически значимое подавление роста опухоли наблюдали только при графике введения на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 3 дней в комбинации с антителом к PD-1 и ни в одной из групп, получавших введение дозы BLZ945 или антитела к PD-1 в качестве единственного средства.

Пример 4. Повышение уровня AST/ALT в группах, получавших дозу соединения формулы (I) в качестве единственного средства

Сравнение повышения уровня AST и ALT в группах, получавших дозу соединения формулы (I) в качестве единственного средства, проводили для режима введения дозы один раз в неделю (Q1W) и режима введения дозы на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 10 дней в диапазоне дозировок. На фигурах 6 и 7 показаны повышения уровня AST и ALT соответственно. Общие терминологические критерии нежелательных явлений (CTCAE) использовали для оценки уровней AST и ALT. Удивительно, но повышения уровней AST и ALT лучше контролируются при режиме введения доз на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 10 дней по сравнению с режимом введения доз Q1W. Как видно на фигурах 6 и 7, график введения на протяжении 4 дней/отсутствия введения на протяжении 10 дней позволяет уровням ALT/AST восстанавливаться до исходного уровня перед следующей дозой, в то время как доза Q1W показывает всплески выше уровня G2 как для уровней AST, так и для ALT, даже при наименьшей дозе 300 мг.

Пример 5. PK/PD в мышиных моделях ALS

Проводили несколько исследований, чтобы понять соотношения PK/PD для клиренса микроглии в ЦНС у мышей. В первом исследовании (RD-2019-00100) мышей обрабатывали дозой 169 мг/кг BLZ945 один раз в день (qd) в течение от 1 до 5 дней подряд. Кроме того, две получавшие дозу группы получали 169 мг/кг BLZ945 в течение 5 дней подряд, после чего лекарственное средство отменяли на 3 или 7 дней (вымывание). Гистологический анализ показал, что микроглия была истощена в коре головного мозга на приблизительно 50% в день 2 и до приблизительно 90% в день 5 (фигура 8 A). В группах вымывания микроглия почти полностью репопуляризировала головной мозг (~80% от получавших среду-носитель) через 3 дня после удаления лекарственного средства и полностью репопуляризировала ко дню 7. Фармакокинетический анализ проводили на образцах крови и головного мозга, взятых из каждой группы через 3 часа после введения последней дозы в указанный день некропсии. Воздействия на кровь и головной мозг оставались постоянными в течение последовательных дней введения дозы, что указывает на отсутствие накопления при ежедневном введении дозы, а также на соотношение приблизительно 50% воздействия на головной мозг по отношению к крови. После периода вымывания уровни воздействия снизились более чем в 1000 раз (фигура 8B).

Фигура 8. (A) Истощение микроглии в коре головного мозга по оценкам с помощью иммуногистологического окрашивания Iba1/Aif-1 при вскрытии. Срезы анализировали на предмет общего количество клеточных тел микроглии на площадь образца. Значения отображают групповые средние ± SD (n=3). (B) Воздействие BLZ945 в крови и головном мозге через 3 часа после последней дозы в день некропсии. Значения отображают групповые средние (n=3).

В исследовании с последующим наблюдением (RD-2019-00100) мышей обрабатывали с помощью BLZ945 в течение 5 дней подряд с диапазоном доз от 7 до 169 мг/кг. Две самые низкие дозы, 7 мг/кг и 20 мг/кг, были неэффективны для истощения микроглии. Однако зависимый от дозы эффект наблюдали с тремя более высокими дозами (60, 100 и 169 мг/кг) BLZ945, которые показали уменьшения микроглии на 25, 60 и 100% соответственно (фигура 9A). Фармакокинетический анализ показал линейные повышения уровней воздействия как в крови, так и в головном мозге при повышенных дозах. В данном случае соотношение уровней воздействия в головном мозге и крови составляло приблизительно 30% при четырех самых низких дозах и приблизительно 55% при самой высокой дозе (фигура 9B).

Фигура 9. Зависимое от дозы снижение количества клеток микроглии. (А) Мышей лечили в течение 5 дней подряд BLZ945 в указанных дозах. Образцы анализировали гистологически с помощью окрашивания Iba1/Aif-1 и количественно определяли общие клеточные тела микроглии на площадь образца. Данные отображают групповые средние ± SD (n=3). (B) Воздействие BLZ945 в крови и головном мозге после 5 последовательных дней введения нескольких доз. Значения отображают групповые средние ± SD (n=3).

Введение дозы исследовали на мышиной модели SOD1G93A ALS, наиболее часто используемой модели ALS у грызунов (RD-2019-00111). Исследовали введение дозы дважды в день (b.i.d.) после 5 последовательных дней введения дозы. После лечения 50 мг/кг и 80 мг/кг BLZ945 микроглия в коре головного мозга истощалась на приблизительно 25% и 75%. BLZ945, вводимый дозой по схеме b.i.d. при 10 мг/кг, был неэффективен (фигура 10 A). Подобным образом в спинном мозге qPCR анализ нескольких маркеров микроглии показал, что микроглия была истощена дозами 50 мг/кг и 80 мг/кг BLZ945 на приблизительно 55% и 85% соответственно (фигура 10 B). BLZ945, вводимый дозой 10 мг/кг, оказывал небольшой и незначительный эффект снижения некоторых маркеров. Анализ головного мозга и спинного мозга при вскрытии показал, что воздействие лекарственного средства составляло приблизительно 30% в крови через три часа после введения последней дозы (фигура 10C/D).

Фигура 10. Опосредованное BLZ945 истощение микроглии в коре головного мозга, оцененное по иммуногистологическому окрашиванию Iba1/Aif-1 (A) или в спинном мозге по результатам анализа qPCR (B). Значения отображают групповые средние ± SD (n=3). (C и D) Воздействие BLZ945 в крови, головном мозге и спинном мозге ЦНС через 3 часа после последней дозы исследования.

Пример 6. Эффективность с BLZ945 на животных моделях ALS

BLZ945 вводили на протяжении периода 8 недель в мышиной модели ALS (внутренние данные). BLZ945 тестировали на эффективность в предупреждении или замедлении прогрессирования заболевания у мышей SOD1G93A ALS (RD-2019-00092). Данная животная модель демонстрирует слабость задних конечностей и нервно-мышечное нарушение, которое выявляется в возрасте от 8 до 10 недель. У этой модели также нарушена нормальная прибавка массы тела. Эти физиологические нарушения рассматриваются как механистические показания, учитывая, что они лучше всего отражают клинический фенотип заболевания (Turner et al 2013). Животным в возрасте от 8 до 16 недель вводили ежедневные (q.d) дозы BLZ945 в дозах 65 мг/кг, 170 мг/кг или 170 мг/кг, доставляемых с перерывами согласно режиму введения на протяжении 7 дней/отсутствия введения на протяжении 7 дней.

Микроглия была истощена на более чем 90% при высокой дозе (170 мг/кг) BLZ945 и на приблизительно 50% при низкой дозе (65 мг/кг). Получавшая прерывистое введение дозы группа была умерщвлена на день 7 отсутствия введения (т. е. через 7 дней без лекарственного средства) цикла введения дозы и продемонстрировала восстановление микроглии на более чем 50% по сравнению с получавшими высокие дозы животными (фигура 11). Воздействие BLZ945 в крови и ЦНС измеряли через 3 часа после введения дозы в день некропсии (таблица 8). Соотношения воздействия BLZ945 в спинном мозге (по отношению к крови) были одинаковыми в получавших дозы группах и составляли приблизительно 0,4 (таблица 9).

Таблица 9. Воздействие BLZ945 в крови и ткани в получавших дозы группах (через 3 ч после введения дозы)

Группа Концентрация в крови (пмоль/мл) Концентрация в спинном мозге (пмоль/г) Соотношение в спинном мозге/крови BLZ945, 65 мг/кг 29291,6 11799,8 0,42 BLZ945, 170 мг/кг одинак. 66287,8 28358,8 0,42 BLZ945, 170 мг/кг прерыв. 50427,5 18573,5 0,36

Фигура 11. Истощение микроглии в поясничном отделе спинного мозга, оцененное по экспрессии транскрипта Iba1 с помощью qPCR. Образцы собирали при вскрытии в последний день введения дозы восьминедельного исследования. Значения отображают групповые средние ± SD (n=12-15). Данные представлены в виде кратных изменений по сравнению с группой, получавшей обработку средой-носителем SOD1. Статистические анализы проводили с помощью критерия Крускала-Уоллиса с использованием критерия Данна для множественных сравнений.

Контрольные животные дикого типа, не являющиеся носителями трансгена (NCAR), демонстрировали постоянный прирост массы тела (приблизительно 18%) в течение восьминедельного периода исследования, что соответствовало нормальному старению. Однако контрольные животные SOD1^G93A, получавшие обработку средой-носителем, демонстрировали начальную более медленную скорость прироста и, в конечном итоге, плато к середине исследования, совпадающее с началом заболевания (приблизительно 7% прироста к концу исследования). Напротив, животные SOD1G93A, непрерывно получавшие обработку с помощью BLZ945 при 170 мг/кг, демонстрировали постоянный прирост массы с той же скоростью, что и мыши NCAR, на протяжении исследования (фигура 12). В группах, получавших обработку низкими (т. е. 65 мг/кг) и прерывистыми дозами (170 мг/кг введение на протяжении 7 дней/отсутствие введения на протяжении 7 дней) BLZ945, в начале исследования наблюдали показатели, сходные с таковыми у мышей NCAR, но в конечном итоге достигавшие плато в последние недели введения до уровня, промежуточного между получавшими среду-носитель и высокие дозы группами (приблизительно 12%).

Фигура 12. Эффект BLZ945 на изменение массы тела в течение восьминедельного периода исследования. Данные представлены в виде процента изменения массы тела по отношению к первому дню введения дозы. Значения отображают групповые средние (n=12-15). Статистический анализ проводили по линейной модели со смешанными эффектами для повторных измерений. * p < 0,05; ** p < 0,01; **** p < 0,0001.

Силу захвата задних конечностей и суммарные потенциалы действия мышцы (CMAP), оценку нервно-мышечной целостности измеряли как механические показания. При измерениях силы хвата мыши SOD1G93A постоянно теряли мышечную силу после достижения возраста в 8 недель. Мыши, получавшие высокую дозу BLZ945 (170 мг/кг) непрерывно или периодически, сохраняли значительно более высокую силу захвата на протяжении периода исследования. Это было промежуточным по сравнению с обработанными средой-носителем SOD1G93A и контролями NCAR (фигура 13A). Животные, получавшие обработку низкой дозой BLZ945 (65 мг/кг), также демонстрировали значительно более высокую силу захвата по сравнению с получавшими среду-носитель контролями SOD1G93A вплоть до 6-й недели введения дозы. Дальнейшая оценка показала, что получавшие обработку средой-носителем контроли SOD1G93A демонстрировали резкое снижение иннервации передней большеберцовой мышцы (TA), измеренное с помощью CMAP, после 2-й недели исследования (фигура 13B). Однако у животных SOD1G93A, получавших обработку BLZ945, в группах непрерывного или прерывистого введения дозы (т. е. 170 мг/кг) наблюдали значительно сниженное уменьшение CMAP на протяжении периода исследования. Однако CMAP все еще были ниже, чем у животных NCAR, начиная с недели 4 исследования. Животные SOD1G93A, получавшие обработку с помощью BLZ945 при 65 мг/кг, демонстрировали значительно более высокие CMAP, чем необработанные контроли, до недели 6 исследования.

Фигура 13. (A) Эффект BLZ945 на силу захвата в течение восьминедельного периода исследования. Значения отображают групповые средние ± SD (n=12-15). Статистический анализ проводили по линейной модели со смешанными эффектами для повторных измерений. * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0,001. (B) Эффект BLZ945 на CMAP мышц TA в течение восьминедельного периода исследования. Значения отображают групповые средние ± SD (n=12-15). Статистический анализ проводили по линейной модели со смешанными эффектами для повторных измерений. * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0,001.

В целом, поучавшая высокую дозу BLZ945 группа демонстрировала поддержание нормального прироста массы тела по сравнению с обрабатываемыми средой-носителем контролями, в то время как получавшие низкую и прерывистую дозу группы демонстрировали промежуточные эффекты. Кроме того, BLZ945 показал зависимую от дозы задержку связанных с заболеванием нарушений силы хвата и иннервации мышц в группах непрерывного введения дозы, в то время как получавшая прерывистое введение дозы демонстрировала умеренные эффекты, аналогичные получавшей низкую дозу группе. При вскрытии эта эффективность была ассоциирована с зависимым от дозы истощением микроглии из спинного мозга в группах непрерывного приема дозы и частичной репопуляцией микроглии в получавших прерывистую дозу группах (анализ проводили на седьмой день периода отсутствия введения лекарственного средства).

В доклиническом 13-недельном исследовании (номер исследования 1779034) яванских макаков обрабатывали с помощью BLZ945 при 30, 60 и 200 мг/кг/день при ежедневном пероральном введении дозы или при 60 и 200 мг/кг/день при циклах введения на протяжении 7 дней и отсутствия введения на протяжении 7 дней. При любом режиме период введения дозы составлял 91 день, после чего следовал период без лекарственного средства в общем количестве 14 дней. Плазму крови собирали до введения дозы, во время периода введения дозы в разные моменты времени и во время восстановления, а CSF собирали при вскрытии в конце периодов введения дозы и восстановления. Уровень растворимого TREM2, биомаркера микроглиальной активации, измеряли в плазме крови и CSF.

В плазме крови лечение с помощью BLZ945 снижало уровень TREM2 в зависимости от дозы и времени до 40-45% от значения до введения дозы при режиме введения средней непрерывной и высокой непрерывной дозы (суточной дозы). После прекращения введения дозы уровень TREM2 в плазме крови возвращался к исходному уровню в течение 7 дней. При циклическом режиме введения дозы (циклическое введение дозы на протяжении 7 дней и отсутствие введения на протяжении 7 дней) значения TREM2 в плазме крови снижались в конце недель обработки как при средней, так и при высокой дозах, и находились в диапазоне контрольных значений в конце недели отсутствия обработки.

В CSF наблюдали зависимое от дозы снижение уровня растворимого TREM2 у обезьян, получавших обработку с помощью BLZ945 в течение 3 месяцев при режимах непрерывного введения дозы (приблизительно 25-кратное снижение по сравнению с высокой дозой) и, в меньшей степени, введения/отсутствия введения (приблизительно 4,6-кратное снижение по сравнению с высокой дозой). Такое значительное снижение уровня TREM2 в CSF у получавших обработку обезьян указывает на взаимодействие BLZ945 с мишенью, в том числе при режиме введения/отсутствия введения, и отражает его предполагаемую фармакологию. В конце фазы восстановления значения уровня растворимого TREM2 в группах, получавших ежедневную обработку высокой дозой и группах введения высокой дозы/отсутствия введения, возвращались к значениям у неполучавших обработку контролей.

Эти данные свидетельствуют о взаимодействии BLZ945 с мишенью и показывают, что растворимый TREM2 может использоваться для мониторинга фармакологического ответа на BLZ945 у обезьян централизованно в CSF и на периферии в плазме крови.

Пример 7. Прогнозируемая терапевтическая доза

Взаимосвязь PK/PD (концентрация лекарственного средства в плазме крови/микроглии в головном мозге) устанавливали у мышей C57b1/6 и SOD-1. РК BLZ945 у субъектов с ALS прогнозировали на основании предварительных РК данных в исследовании CBLZ945X2101 (предполагается, что фармакокинетические показатели BLZ945 у субъектов с ALS подобны таковым у субъектов с онкологическим заболеванием). Соотношение PK/PD, установленное у мышей, затем применяли к РК у субъектов с ALS, чтобы прогнозировать PD (микроглия в головном мозге) у субъектов с ALS (при условии подобного соотношения PK/PD у человека и мышей). Результаты моделирования PK/PD показывают, что 4 дня лечения выбранной начальной дозой 300 мг BLZ945 один раз в день, по прогнозам, приведут к снижению на 10-12% в микроглии головного мозга. Предполагают, что доза 1200 мг qd приведет к снижению в микроглии головного мозга на 40-78% (таблица 10).

Таблица 10. Наблюдаемые и прогнозируемые предварительные параметры РК BLZ945 в день 4, пределы безопасности и прогнозируемое снижение в микроглии головного мозга после перорального введения 150, 300, 600, 800 и 1200 мг один раз в день

Суточная доза
(мг) PK параметр (день 4)¹⁾ Прогнозируемое снижение в микроглии головного мозга Cmax (нг/мл) AUC0-24 ч. (ч.*нг/мл) 150 6950²⁾ 101500²⁾ ≤ 5 300 13900 203000 10-12 600 24500 378000 35-50 800 22700 413000 35-50 1200 32700 599000 40-78

¹⁾ Предварительные РК параметры из исследования CBLZ945X2101.

²⁾ Расчетные РК параметры на день 4 по РК данным у субъектов с онкологическим заболеванием, предполагающие зависимую от дозы и независимую от времени РК в диапазоне доз 150-300 мг.

Пример 8. Клиническое исследование введения дозы/отсутствия введения дозы для лечения ALS

CBLZ945C12201 представляет собой исследование с использованием многократных возрастающих доз с начальной дозой 300 мг в день в течение четырех дней лечения и максимальной дозой 1200 мг в день в течение четырех дней лечения. Пациенты с ALS будут получать ежедневное лечение с помощью BLZ945 в течение 4 дней. Будут использованы три отдельные когорты ежедневного введения дозы: 300 мг/день, 600 мг/день или 1200 мг/день соответственно. Дополнительные две когорты будут использованы для исследования доз от 300 мг/день до 1200 мг/день.

Как упоминалось выше, тошноту и рвоту обычно наблюдали при однократном введении средства BLZ945 в первом испытании на человеке (CBLZ945X2101). Также наблюдали бессимптомное повышение уровня ферментов в сыворотке крови, включая повышения уровня AST, ALT, CK и щелочной фосфатазы. Бессимптомные повышения уровня ферментов в сыворотке крови также регистрировали в клинических испытаниях моноклональных антител к CSF-1R (FPA008 и эмактузумаб), к лиганду CSF-1 (MCS110) и ингибитора CSF-1R PLX3397 (Rugo et al 2014, Cassier et al 2015, Pognan et al 2019, Zhou et al 2015). График введения доз на протяжении 4 дней введения в клиническом исследовании у пациентов с ALS (CBLZ945C12201) будет использоваться для снижения риска индуцирования повышения уровня ALT, AST и CK у пациентов с ALS. Кроме того, предполагают, что период отсутствия введения в режиме введения доз обеспечивает время для восстановления микроглии, которая истощается в результате ингибирования CSF-1R при введении BLZ945. Также может быть оценена дополнительная когорта для оценки введения на протяжении 7 дней.

Одна рекомендуемая доза BLZ945 в качестве единственного средства для лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как ALS, была определена как 1200 мг q.d. при введении на протяжении 4 дней. Ожидается, что прерывистое введение дозы, достаточное для индуцирования стойкого подавления микроглии, позволит избежать побочных эффектов, вызванных непрерывным введением дозы.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> NOVARTIS AG

<120> Режим введения доз для лечения заболевания, модулируемого CSF-1R

<130> PAT058798-WO-PCT

<140>

<141>

<150> 63/145,780

<151> 2021-02-04

<150> 63/013,151

<151> 2020-04-21

<160> 225

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 1

Thr Tyr Trp Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 2

Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 3

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 3

Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr

1 5

<210> 4

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 4

Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

1 5

<210> 5

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 5

Tyr Pro Gly Thr Gly Gly

1 5

<210> 6

<400> 6

000

<210> 7

<400> 7

000

<210> 8

<400> 8

000

<210> 9

<400> 9

000

<210> 10

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 10

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 11

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 11

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 12

<400> 12

000

<210> 13

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 13

Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe

1 5 10

<210> 14

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 14

Trp Ala Ser

1

<210> 15

<400> 15

000

<210> 16

<400> 16

000

<210> 17

<400> 17

000

<210> 18

<400> 18

000

<210> 19

<400> 19

000

<210> 20

<400> 20

000

<210> 21

<400> 21

000

<210> 22

<400> 22

000

<210> 23

<400> 23

000

<210> 24

<400> 24

000

<210> 25

<400> 25

000

<210> 26

<400> 26

000

<210> 27

<400> 27

000

<210> 28

<400> 28

000

<210> 29

<400> 29

000

<210> 30

<400> 30

000

<210> 31

<400> 31

000

<210> 32

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 32

Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 33

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 33

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr

1 5

<210> 34

<400> 34

000

<210> 35

<400> 35

000

<210> 36

<211> 440

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 36

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser

115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys

180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala

210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

245 250 255

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

325 330 335

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

340 345 350

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 37

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 37

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 38

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 38

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 39

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 39

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 40

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 41

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 41

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 42

<400> 42

000

<210> 43

<400> 43

000

<210> 44

<400> 44

000

<210> 45

<400> 45

000

<210> 46

<400> 46

000

<210> 47

<400> 47

000

<210> 48

<400> 48

000

<210> 49

<400> 49

000

<210> 50

<400> 50

000

<210> 51

<400> 51

000

<210> 52

<400> 52

000

<210> 53

<400> 53

000

<210> 54

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 54

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

35 40 45

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 55

<400> 55

000

<210> 56

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 56

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

35 40 45

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 57

<400> 57

000

<210> 58

<400> 58

000

<210> 59

<400> 59

000

<210> 60

<400> 60

000

<210> 61

<400> 61

000

<210> 62

<400> 62

000

<210> 63

<400> 63

000

<210> 64

<400> 64

000

<210> 65

<400> 65

000

<210> 66

<400> 66

000

<210> 67

<400> 67

000

<210> 68

<400> 68

000

<210> 69

<400> 69

000

<210> 70

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 70

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 71

<400> 71

000

<210> 72

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 72

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 73

<400> 73

000

<210> 74

<400> 74

000

<210> 75

<400> 75

000

<210> 76

<400> 76

000

<210> 77

<400> 77

000

<210> 78

<400> 78

000

<210> 79

<400> 79

000

<210> 80

<400> 80

000

<210> 81

<400> 81

000

<210> 82

<400> 82

000

<210> 83

<400> 83

000

<210> 84

<400> 84

000

<210> 85

<400> 85

000

<210> 86

<400> 86

000

<210> 87

<400> 87

000

<210> 88

<400> 88

000

<210> 89

<400> 89

000

<210> 90

<400> 90

000

<210> 91

<211> 443

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 91

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440

<210> 92

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 92

gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagtc cctgcggatc 60

tcctgcaagg gctctggcta caccttcacc acctactgga tgcactgggt gcgacaggct 120

accggccagg gcctggaatg gatgggcaac atctatcctg gcaccggcgg ctccaacttc 180

gacgagaagt tcaagaacag agtgaccatc accgccgaca agtccacctc caccgcctac 240

atggaactgt cctccctgag atccgaggac accgccgtgt actactgcac ccggtggaca 300

accggcacag gcgcttattg gggccagggc accacagtga ccgtgtcctc tgcttctacc 360

aaggggccca gcgtgttccc cctggccccc tgctccagaa gcaccagcga gagcacagcc 420

gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480

ggagccctga ccagcggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagcag cggcctgtac 540

agcctgagca gcgtggtgac cgtgcccagc agcagcctgg gcaccaagac ctacacctgt 600

aacgtggacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gggtggagag caagtacggc 660

ccaccctgcc ccccctgccc agcccccgag ttcctgggcg gacccagcgt gttcctgttc 720

ccccccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgtgtggtg 780

gtggacgtgt cccaggagga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 840

gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagttta acagcaccta ccgggtggtg 900

tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgtaaggtc 960

tccaacaagg gcctgccaag cagcatcgaa aagaccatca gcaaggccaa gggccagcct 1020

agagagcccc aggtctacac cctgccaccc agccaagagg agatgaccaa gaaccaggtg 1080

tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140

aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccag tgctggacag cgacggcagc 1200

ttcttcctgt acagcaggct gaccgtggac aagtccagat ggcaggaggg caacgtcttt 1260

agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgagcctg 1320

tccctgggc 1329

<210> 93

<400> 93

000

<210> 94

<400> 94

000

<210> 95

<211> 351

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 95

gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60

agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct 120

accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc 180

gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat 240

atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact 300

accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag c 351

<210> 96

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 96

gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60

agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct 120

accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc 180

gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat 240

atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact 300

accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag cgctagcact 360

aagggcccgt ccgtgttccc cctggcacct tgtagccgga gcactagcga atccaccgct 420

gccctcggct gcctggtcaa ggattacttc ccggagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480

ggagccctga cctccggagt gcacaccttc cccgctgtgc tgcagagctc cgggctgtac 540

tcgctgtcgt cggtggtcac ggtgccttca tctagcctgg gtaccaagac ctacacttgc 600

aacgtggacc acaagccttc caacactaag gtggacaagc gcgtcgaatc gaagtacggc 660

ccaccgtgcc cgccttgtcc cgcgccggag ttcctcggcg gtccctcggt ctttctgttc 720

ccaccgaagc ccaaggacac tttgatgatt tcccgcaccc ctgaagtgac atgcgtggtc 780

gtggacgtgt cacaggaaga tccggaggtg cagttcaatt ggtacgtgga tggcgtcgag 840

gtgcacaacg ccaaaaccaa gccgagggag gagcagttca actccactta ccgcgtcgtg 900

tccgtgctga cggtgctgca tcaggactgg ctgaacggga aggagtacaa gtgcaaagtg 960

tccaacaagg gacttcctag ctcaatcgaa aagaccatct cgaaagccaa gggacagccc 1020

cgggaacccc aagtgtatac cctgccaccg agccaggaag aaatgactaa gaaccaagtc 1080

tcattgactt gccttgtgaa gggcttctac ccatcggata tcgccgtgga atgggagtcc 1140

aacggccagc cggaaaacaa ctacaagacc acccctccgg tgctggactc agacggatcc 1200

ttcttcctct actcgcggct gaccgtggat aagagcagat ggcaggaggg aaatgtgttc 1260

agctgttctg tgatgcatga agccctgcac aaccactaca ctcagaagtc cctgtccctc 1320

tccctggga 1329

<210> 97

<211> 339

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 97

gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60

ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120

tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctactgggc ctctactaga 180

gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240

atctctagcc tgcagcccga ggatatcgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300

ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaag 339

<210> 98

<211> 660

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 98

gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60

ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120

tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctactgggc ctctactaga 180

gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240

atctctagcc tgcagcccga ggatatcgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300

ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360

gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420

ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480

cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540

ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600

gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660

<210> 99

<400> 99

000

<210> 100

<400> 100

000

<210> 101

<400> 101

000

<210> 102

<400> 102

000

<210> 103

<400> 103

000

<210> 104

<400> 104

000

<210> 105

<400> 105

000

<210> 106

<211> 339

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 106

gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60

ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120

tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180

gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240

atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300

ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaag 339

<210> 107

<211> 660

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид"

<400> 107

gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60

ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120

tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180

gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240

atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300

ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360

gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420

ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480

cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540

ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600

gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660

<210> 108

<400> 108

000

<210> 109

<400> 109

000

<210> 110

<400> 110

000

<210> 111

<400> 111

000

<210> 112

<400> 112

000

<210> 113

<400> 113

000

<210> 114

<400> 114

000

<210> 115

<400> 115

000

<210> 116

<400> 116

000

<210> 117

<400> 117

000

<210> 118

<400> 118

000

<210> 119

<400> 119

000

<210> 120

<400> 120

000

<210> 121

<400> 121

000

<210> 122

<400> 122

000

<210> 123

<400> 123

000

<210> 124

<400> 124

000

<210> 125

<400> 125

000

<210> 126

<400> 126

000

<210> 127

<400> 127

000

<210> 128

<400> 128

000

<210> 129

<400> 129

000

<210> 130

<400> 130

000

<210> 131

<400> 131

000

<210> 132

<400> 132

000

<210> 133

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 133

acctactgga tgcac 15

<210> 134

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 134

aatatctacc ccggcaccgg cggctctaac ttcgacgaga agtttaagaa t 51

<210> 135

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 135

tggactaccg gcacaggcgc ctac 24

<210> 136

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 136

ggctacacct tcactaccta c 21

<210> 137

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 137

taccccggca ccggcggc 18

<210> 138

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 138

aaatctagtc agtcactgct ggatagcggt aatcagaaga acttcctgac c 51

<210> 139

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 139

tgggcctcta ctagagaatc a 21

<210> 140

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 140

cagaacgact atagctaccc ctacacc 27

<210> 141

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 141

agtcagtcac tgctggatag cggtaatcag aagaacttc 39

<210> 142

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 142

tgggcctct 9

<210> 143

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 143

gactatagct acccctac 18

<210> 144

<400> 144

000

<210> 145

<400> 145

000

<210> 146

<400> 146

000

<210> 147

<211> 25

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 147

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser

20 25

<210> 148

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 148

gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60

tcctgtaagg gttct 75

<210> 149

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 149

gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagtc cctgcggatc 60

tcctgcaagg gctct 75

<210> 150

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 150

gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60

agctgtaaag gttca 75

<210> 151

<211> 25

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 151

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 152

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 152

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttct 75

<210> 153

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 153

Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 154

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 154

tgggtgcgac aggccactgg acaagggctt gagtggatgg gt 42

<210> 155

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 155

tgggtgcgac aggctaccgg ccagggcctg gaatggatgg gc 42

<210> 156

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 156

tgggtccgcc aggctaccgg tcaaggcctc gagtggatgg gt 42

<210> 157

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 157

Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly

1 5 10

<210> 158

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 158

tggatcaggc agtccccatc gagaggcctt gagtggctgg gt 42

<210> 159

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 159

tggatccggc agtccccctc taggggcctg gaatggctgg gc 42

<210> 160

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 160

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 161

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 161

tgggtgcgac aggcccctgg acaagggctt gagtggatgg gt 42

<210> 162

<211> 32

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 162

Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg

20 25 30

<210> 163

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 163

agagtcacga ttaccgcgga caaatccacg agcacagcct acatggagct gagcagcctg 60

agatctgagg acacggccgt gtattactgt acaaga 96

<210> 164

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 164

agagtgacca tcaccgccga caagtccacc tccaccgcct acatggaact gtcctccctg 60

agatccgagg acaccgccgt gtactactgc acccgg 96

<210> 165

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 165

agagtgacta tcaccgccga taagtctact agcaccgcct atatggaact gtctagcctg 60

agatcagagg acaccgccgt ctactactgc actagg 96

<210> 166

<211> 32

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 166

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg

20 25 30

<210> 167

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 167

agattcacca tctccagaga caattccaag aacacgctgt atcttcaaat gaacagcctg 60

agagccgagg acacggccgt gtattactgt acaaga 96

<210> 168

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 168

aggttcacca tctcccggga caactccaag aacaccctgt acctgcagat gaactccctg 60

cgggccgagg acaccgccgt gtactactgt accaga 96

<210> 169

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 169

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 170

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 170

tggggccagg gcaccaccgt gaccgtgtcc tcc 33

<210> 171

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 171

tggggccagg gcaccacagt gaccgtgtcc tct 33

<210> 172

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 172

tggggtcaag gcactaccgt gaccgtgtct agc 33

<210> 173

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 173

tggggccagg gcacaacagt gaccgtgtcc tcc 33

<210> 174

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 174

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 175

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 175

gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60

atcacctgc 69

<210> 176

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 176

gagatcgtgc tgacccagtc ccccgacttc cagtccgtga cccccaaaga aaaagtgacc 60

atcacatgc 69

<210> 177

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 177

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 178

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 178

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgc 69

<210> 179

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 179

gagatcgtgc tgacccagtc ccctgccacc ctgtcactgt ctccaggcga gagagctacc 60

ctgtcctgc 69

<210> 180

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 180

gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60

ctgagctgt 69

<210> 181

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 181

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

20

<210> 182

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 182

gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60

atctcctgc 69

<210> 183

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 183

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys

20

<210> 184

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 184

gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60

atctcctgc 69

<210> 185

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 185

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 186

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 186

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgc 69

<210> 187

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 187

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 188

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 188

tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc aggctcctca tctat 45

<210> 189

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 189

tggtatcagc agaagcccgg ccaggccccc agactgctga tctac 45

<210> 190

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 190

tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctac 45

<210> 191

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 191

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 192

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 192

tggtatcagc agaaaccagg gaaagctcct aagctcctga tctat 45

<210> 193

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 193

tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctac 45

<210> 194

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 194

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 195

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 195

tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctat 45

<210> 196

<211> 32

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 196

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 197

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 197

ggggtcccct cgaggttcag tggcagtgga tctgggacag atttcacctt taccatcagt 60

agcctggaag ctgaagatgc tgcaacatat tactgt 96

<210> 198

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 198

ggcgtgccct ctagattctc cggctccggc tctggcaccg actttacctt caccatctcc 60

agcctggaag ccgaggacgc cgccacctac tactgc 96

<210> 199

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 199

ggcgtgccct ctaggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcacctt cactatctct 60

agcctggaag ccgaggacgc cgctacctac tactgt 96

<210> 200

<211> 32

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 200

Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys

20 25 30

<210> 201

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 201

gggatcccac ctcgattcag tggcagcggg tatggaacag attttaccct cacaattaat 60

aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgt 96

<210> 202

<211> 32

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 202

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 203

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 203

ggggtcccat caaggttcag cggcagtgga tctgggacag aattcactct caccatcagc 60

agcctgcagc ctgatgattt tgcaacttat tactgt 96

<210> 204

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 204

ggcgtgccct ctagattctc cggctccggc tctggcaccg agtttaccct gaccatctcc 60

agcctgcagc ccgacgactt cgccacctac tactgc 96

<210> 205

<211> 32

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 205

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 206

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 206

ggggtcccat caaggttcag tggaagtgga tctgggacag attttacttt caccatcagc 60

agcctgcagc ctgaagatat tgcaacatat tactgt 96

<210> 207

<211> 96

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 207

ggcgtgccct ctaggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcacctt cactatctct 60

agcctgcagc ccgaggatat cgctacctac tactgt 96

<210> 208

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 208

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 209

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 209

ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa 30

<210> 210

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 210

ttcggccagg gcaccaaggt ggaaatcaag 30

<210> 211

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 211

ttcggtcaag gcactaaggt cgagattaag 30

<210> 212

<211> 327

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 212

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 213

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 213

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 214

<211> 326

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 214

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly

325

<210> 215

<211> 330

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 215

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 216

<211> 330

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 216

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 217

<211> 330

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 217

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Ala Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 218

<211> 330

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 218

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 219

<400> 219

000

<210> 220

<400> 220

000

<210> 221

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 221

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Val Gln Ala

<210> 222

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 222

Met Ser Val Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Thr Arg Cys

20

<210> 223

<400> 223

000

<210> 224

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид"

<400> 224

Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 225

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 225

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<---

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности, а именно к способу лечения бокового амиотрофического склероза. Способ лечения бокового амиотрофического склероза у субъекта, включающий введение 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли указанному субъекту в течение периода, составляющего 4 дня, с последующим периодом отсутствия введения, составляющим 10 дней, и в суточной дозе 600 мг/день, 800 мг/день или 1200 мг/день. Использование изобретения обеспечивает снижение вероятности возникновения нежелательных явлений, а именно снижение вероятности повышения уровней AST и ALT. 9 з.п. ф-лы, 13 ил., 10 табл., 8 пр.

1. Способ лечения бокового амиотрофического склероза у субъекта, включающий введение 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамида или его фармацевтически приемлемой соли указанному субъекту в течение периода, составляющего 4 дня, с последующим периодом отсутствия введения, составляющим 10 дней, и в суточной дозе 600 мг/день, 800 мг/день или 1200 мг/день.

2. Способ по п. 1, в котором указанный 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят в течение периода, составляющего 4 дня, с последующим периодом отсутствия введения, составляющим 10 дней, дважды за цикл; и в суточной дозе 600 мг/день, 800 мг/день или 1200 мг/день.

3. Способ по п.1 или 2, в котором 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально.

4. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором указанный 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо [d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят в суточной дозе 600 мг/день.

5. Способ по любому из пп. 1-3, в котором указанный 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят в суточной дозе 800 мг/день.

6. Способ по любому из пп. 1-3, в котором указанный 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят в суточной дозе 1200 мг/день.

7. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором указанный 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо [d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят один раз в день.

8. Способ по любому из пп. 1-4 и 6, в котором указанный 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо [d]тиазол-6-ил)окси)-N- метилпиколинамид вводят два раза в день.

9. Способ по любому из пп. 1-3, в котором 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально один раз в день в течение периода, составляющего 4 дня, с последующим периодом отсутствия введения, составляющим 10 дней, и в суточной дозе 600, 800 или 1200 мг/день.

10. Способ по п. 9, в котором 4-((2-(((1R,2R)-2-гидроксициклогексил)амино)бензо[d]тиазол-6-ил)окси)-N-метилпиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально один раз в день в течение периода, составляющего 4 дня, с последующим периодом отсутствия введения 10 дней и в суточной дозе 800 мг/день.