СПОСОБ ТЕРАПИИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СИНДРОМА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АУТОПРОБИОТИКОВ Российский патент 2025 года по МПК A61K35/74 A61P3/00 C12N1/20 

Изобретение относится к области микробиологии и медицины, касается получения аутопробиотического персонифицированного продукта, содержащего индигенные непатогенные энтерококки и может быть использовано для коррекции нарушений углеводного обмена у пациентов с метаболическим синдромом (МС).

Термин метаболический синдром объединяет между собой совокупность модифицируемых факторов риска, которые способствуют прогрессированию сахарного диабета 2 типа (СД2), атеросклероза, неалкогольной жировой болезни печени, а, следовательно, и развитию жизнеугрожающих осложнений данных заболеваний [Мычка В.Б., Жернакова Ю.В., Чазова И.Е. Рекомендации экспертов всероссийского научного общества кардиологов по диагностике и лечению метаболического синдрома (второй пересмотр) //Доктор.ру. - 2010. -№.3. - С. 15-18.]. Данные факторы риска, составляющие МС, включают в себя центральное ожирение, дислипидемию, гипергликемию, инсулинорезистентность и артериальную гипертензию. Абдоминальное ожирение является главным компонентом в структуре МС, так как несет за собой колоссальные риски для здоровья и приводит к развитию сахарного диабета и сердечно-сосудистых заболеваний. В 2016 году во всем мире ожирение было диагностировано у 650 миллионов человек, а избыточная масса тела наблюдалась у 1,9 миллиарда взрослого населения, [World Health Organization. (2018, February 16). Obesity and overweight. Retrieved from: http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/obesity-and-overweight.].

В настоящее время прилагаются серьезные усилия для разработки методов коррекции метаболического синдрома. Современные научные данные указывают, что нарушения, лежащие в основе МС, сопровождаются и во многом обусловлены нарушениями микробиоты желудочно-кишечного тракта [Duncan SH, Lobley GE, Holtrop G, Ince J, Johnstone AM, Louis P, Flint HJ. Human colonic microbiota associated with diet, obesity and weight loss. Int J Obes (Lond) 2008; 32: 1720-1724. / Le Chatelier E. et al. Richness of human gut microbiome correlates with metabolic markers //Nature. - 2013. - T. 500. - №. 7464. - C. 541-546. / Samuel BS, Shaito A, Motoike T, Rey FE, Backhed F, Manchester JK, Hammer RE, Williams SC, Crowley J, Yanagisawa M, et al. Effects of the gut microbiota on host adiposity are modulated by the short-chain fatty-acid binding G protein-coupled receptor, Gpr41. Proc Natl Acad Sci USA. 2008; 105: 16767-16772. / Tolhurst G, Heffron H, Lam YS, Parker HE, Habib AM, Diakogiannaki E, Cameron J, Grosse J, Reimann F, Gribble FM. Short-chain fatty acids stimulate glucagon-like peptide-1 secretion via the G-protein-coupled receptor FFAR2. Diabetes. 2012;61:364-371 / Vijay-Kumar M, Aitken JD, Carvalho FA, Cullender TC, Mwangi S, Srinivasan S, Sitaraman SV, Knight R, Ley RE, Gewirtz AT. Metabolic syndrome and altered gut microbiota in mice lacking Toll-like receptor 5. Science. 2010; 328: 228-231.].

Микробный состав может оказывать влияние на метаболизм хозяина путем модуляции поглощения энергии, перистальтики кишечника, аппетита, метаболизма глюкозы и липидов [de La Serre СВ, Ellis CL, Lee J, Hartman AL, Rutledge JC, Raybould HE. Propensity to high-fat diet-induced obesity in rats is associated with changes in the gut microbiota and gut inflammation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2010; 299: G440-G448]. Доказательства кишечно-ориентированной теории МС появились в 2007 году в результате серии исследований на грызунах и людях, показавших, что длительная диета с высоким содержанием жиров приводит к повышению проницаемости кишечного барьера. [Cani P. D. et al. Metabolic endotoxemia initiates obesity and msulin resistance //Diabetes. - 2007. - T. 56. -№. 7. - C. 1761-1772. / Cam P. D. et al. Oligofructose promotes satiety in rats fed a high-fat diet: involvement of glucagon-like peptide-1 //Obesity research. - 2005. - T. 13. - №. 6. - C. 1000-1007]. Благодаря этому явлению содержимое просвета кишечника, в частности, бактериальный липополисахарид (ЛПС) способен проникать в системный кровоток, вызывать и поддерживать вялотекущее воспаление, которое является причиной метаболической эндотоксемии, которая приводит к прогрессированию атеросклеротического процесса, дестабилизации атеросклеротических бляшек, а следовательно увеличению сердечнососудистого риска [Cani, P.D.; Bibiloni, R.; Knauf, С; Waget, A.; Neyrinck, A.M.; Delzenne, N.M.; Burcelin, R. Changes in gut microbiota control metabolic endotoxemia-induced inflammation in high-fat diet-induced obesity and diabetes in mice. Diabetes 2008, 57, 1470-1481 / Barton GM, Kagan JC. A cell biological view of Toll-like receptor function: regulation through compartmentalization. Nat Rev Immunol.2009; 9: 535-42. doi: 10.1038/nri2587 / Guzzo C, Ayer A, Basta S, et al. IL-27 enhances LPS-induced proinflammatory cytokine production via upregulation of TLR4 expression and signaling in human monocytes. J Immunol. 2012; 188: 864-73. doi: 10.4049/jimmunol.1101912].

Одним из подтверждений данной теории является исследование, в котором было обнаружено, что у пациентов с СД2 грамотрицательных бактерий, являющихся тем самым источником ЛПС, больше, чем грамположительных, по сравнению с лицами без диабета [Pushpanathan P. et al. Gut microbiota in type 2 diabetes individuals and correlation with monocyte chemoattractant proteinl and interferon gamma from patients attending a tertiary care centre in Chennai, India //Indian journal of endocrinology and metabolism. -2016. - T. 20. -№. 4. - C. 523.]. Также, следует отметить, что бактериальное разнообразие при МС обычно снижено - эта особенность повышает риск развития метаболических заболеваний, таких как ожирение, СД2 и воспалительных заболеваний кишечника [Mitreva М. et al. Structure, function and diversity of the healthy human microbiome //Nature. - 2012. - T. 486. - C. 207-214.].

Одна из особенностей кишечной микробиоты у пациентов с ожирением и МС - это увеличение соотношения FirmicuteslBacteriodetes (F/B). Впервые данную особенность описали R.E. Ley и соавторы в 2005 году, обнаружив снижение численности Bacteroidetes пропорциональное увеличению Firmicutes у мышей с ожирением [Ley RE, Backhed F, Turnbaugh P, Lozupone CA, Knight RD, Gordon JI, et al. Obesity alters gut microbial ecology. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:11070 5.]. R. Caspi с соавторами считают, что увеличение доли Firmicutes по сравнению с Bacteroidetes происходит благодаря тому, что тип Firmicutes способен извлекать больше энергии из рациона [R. Caspi, R. Billington, L. Ferrer, H. Foerster, С.A. Fulcher, I.M. Keseler, et al. The MetaCyc database of metabolic pathways and enzymes and the BioCyc collection of pathway/genome databases Nucleic Acids Res, 44 (2016), p.D471-D480].

Помимо изменений в соотношении F/B микробиота кишечника пациентов с МС, характеризуется снижением представленности бактерий с сахаролитической активностью, таких как Bacteroides fragilis, Parabacteroides distasonis, Bacteroides thetaiotaomicron и Ruminococcus flavefaciens [Salyers A.A., West S.E., Vercellotti J.R., Wilkins TD. Fermentation of mucins and plant polysaccharides by anaerobic bacteria from the human colon. Appl Environ Microbiol 1977; 34: 529-33]. Вышеописанные дисбиотические нарушения приводят к снижению способности расщеплять углеводы, что в свою очередь влияет на выработку пропионата и ацетата снижая ее. Незначительный уровень ацетата в кишечнике приводит к уменьшению представленности полезных бактерий, таких как Faecalibacterium prausnitzii и Eubacterium Rectale, которые в результате своей жизнедеятельности потребляют ацетат и продуцируют бутират [Duncan SH, Lobley GE, Holtrop G, Ince J, Johnstone AM, Louis P, Flint HJ. Human colonic microbiota associated with diet, obesity and weight loss. Int J Obes (Lond) 2008; 32: 1720-1724]. В исследованиях, в которых проводили сравнение пациентов с ожирением или СД2 со здоровым контролем была обнаружена отрицательная корреляционная связь между уровнями триглицеридов (ТГ), липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) и разнообразием микробиома кишечника [Le Chatelier Е. et al. Richness of human gut microbiome correlates with metabolic markers //Nature. - 2013. - T. 500. -№. 7464. - C. 541-546.].

В работе по сравнению мышей, получавших свиное сало, с мышами, находящихся на низкокалорийной диете с добавлением полиненасыщенных жирных кислот, было выявлено, что представленность бактерий Akkermansia muciniphila, Lactobacillus spp.и Bifidobacterium spp.была снижена у мышей на диете со свиным салом [Caesar R, Tremaroli V, Kovatcheva-Datchary Р, Cani Patrice D, Backhed F. Crosstalk between Gut Microbiota and Dietary Lipids Aggravates WAT Inflammation through TLR Signaling. Cell Metabolism. 2015;22(4):658-668.]. Wang Z. и соавторы сообщали, что микробном кишечника объясняет 4,5% различий в индексе массы тела (ИМТ), 6,0% в TF и 4% в липопротеинах высокой плотности (ЛГГОП). Кроме того, они выявили, что у субъектов с неблагоприятным липидным профилем (высокий уровень ТГ и низкий уровень ЛПВП) микробном характеризуется низким микробным разнообразием, а также высоким обилием таксонов из рода Actinobacteria и низким из родов Proteobacteria и Bacteroidetes [Wang Z. et al. Gut microbiome and lipid metabolism: from associations to mechanisms //Current opinion in lipidology. -2016. -T. 27. -№. 3. -C. 216-224.].

Одним из направлений профилактики раннего возникновения данных заболеваний может быть поддержание нормального состава микробиоты и коррекция нарушений экосистемы кишечника. На состав микробиоты кишечника оказывает влияние характер привычного рациона человека [Conlon MA, Bird AR. The impact of diet and lifestyle on gut microbiota and human health. Nutrients. 2014 Dec; 7(1): 17-44.].

Во многих научных исследованиях доказана эффективность ряда штаммов пробиотических бактерий при терапии МС. Это происходит за счет непосредственной коррекции нарушений микробиоценоза, влияния на всасывание глюкозы и кровоснабжение слизистой оболочки кишечника, выработку ангиотензина и экспрессию рецепторов в эукариотических клетках, ответственных за формирование МС [Leber 2012 / Santos-Marcos J. A., Perez-Jimenez F., Camargo A. The role of diet and intestinal microbiota in the development of metabolic syndrome //The Journal of nutritional biochemistry. -2019. - T. 70. - C. 1-27./ Tolhurst G, Heffron H, Lam YS, Parker HE, Habib AM, Diakogiannaki E, Cameron J, Grosse J, Reimann F, Gribble FM. Short-chain fatty acids stimulate glucagon-like peptide-1 secretion via the G-protein-coupled receptor FFAR2. Diabetes. 2012; 61: 364-371].

Среди пробиотических пищевых продуктов наиболее распространены такие штаммы как Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei, Lactobacillus salivarius, Bifidobacterium animalis subsp.Lactis и Bifidobacterium bifidum [Fijan S. Microorganisms with claimed probiotic properties: an overview of recent literature. Int J Environ Res Public Health. 2014 May; 11(5): 4745-67. / Pithva S, Ambalam PM, Rajiv B. Potential of Probiotic Lactobacillus Strains as Food Additives. Food Additive; 2012.]. Предыдущие исследования сообщали о связи этих родов бактерий, Lactobacillus и Bifidobacterium, с нормальными показателями метаболических функций организма и нормобиозом кишечника [Hemarajata Р, ersalovic J. Effects of probiotics on gut microbiota: mechanisms of intestinal immunomodulation and neuromodulation. Therap Adv Gastroenterol. 2013 Jan; 6(1): 39-51.].

Основные механизмы, лежащие в основе антагонистических эффектов пробиотиков, заключаются в улучшении барьерной функции кишечника, повышении конкурентной адгезии к слизистой оболочке и эпителию, модификации кишечной микробиоты, регуляции связанной с кишечником лимфоидной иммунной системы. [Fontana L, Bermudez-Brito М, Plaza-Diaz J, Munoz-Quezada S, Gil A. Sources, isolation, characterisation and evaluation of probiotics. Br JNutr. 2013 Jan; 109(S2 Suppl 2):S35-50.].

Альтернативой пробиотикам являются аутопробиотики, которые представляют собой персонифицированный функциональный пищевой продукт (ПФПП), на основе собственного (индигенного) бактериального штамма - представителя нормальной микробиоты толстой кишки пациента. Готовый продукт абсолютно безопасен для пациента, так как отобранный штамм, перед непосредственным получением аутопробиотика, проходит проверку на видовую принадлежность и исключение генетических детерминант патогенности с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Ранее аутопробиотики было рекомендовано использовать при других патологиях. Получены патенты РФ, описывающие принципы использования аутопробиотиков при терапии синдрома раздраженной кишки, болезни Паркинсона, лечения кампилобактериоза и хеликобактерной инфекции [Симаненков В.П., Суворов А.Н., Соловьева О.И., Цапиева А.Н., Шумихина И.А. Способ профилактики постинфекционного синдрома раздраженной кишки. Патент РФ 2553372, 2015, 6 с; Симаненков В.П., Суворов А.Н., Соловьева О.П., Ермоленко Е.И., Цапиева А. Н., Сундукова З.Р. Способ получения персонифицированного аутопро биотического продукта и способ лечения синдрома раздраженной кишки с использованием этого продукта Патент РФ 2546253С1, 2015, 18 с; Ермоленко Е.И., Милюхина И.В., Цапиева А.Н., Алехина Г.Г., Истомина А.С., Грачева Е.В., Котылева М.П., Суворов А.Н. Способ уменьшения выраженности немоторных симптомов у пациентов, страдающих болезнью Паркинсона. Патент РФ 2734718, 2020, 15 с; Ермоленко Е.И., Молостова А.С., Цапиева А.Н., Алехина Г. Г., Карасева А. Б., Гладышев Н.С., Суворов А.Н., Барышникова Н.В. Способ монотерапии гастрита, ассоциированного с инфекцией Helicobacter pylori. Патент РФ 2758246, 2021, 16 с; Ермоленко К.Д., Гончар Н.В., Ермоленко Е.И., Скрипченко Н.В. Способ лечения затяжного течения кишечной инфекции кампилобактериозной этиологии у детей раннего возраста. Патент РФ 2788397, 2023, 12 с]

Ранее Симаненков В.И. и другие [Симаненков В.И. и др. Эффективность и безопасность аутопробиотической терапии у пациентов с сахарным диабетом второго типа //Медицинский алфавит.- 2020. - Т. 1. - №. 30. - С. 48-53] исследовали влияние аутопробиотика Enterococcus faecium и пробиотика Е. faecium L3, который принимали пациенты с ожирением и СД2 по 50 мл два раза в день в течение 14-дневного курса. В своей работе они отмечали хорошую переносимость терапии, уменьшение выраженности метеоризма и увеличение частоты стула, а также на фоне терапии аутопробиотиком - снижение уровня С-реактивного белка, что не отмечалось в группе, принимающей пробиотик.

Другая группа исследователей под руководством Бакулиной Н.В. [Бакулина Н.В. и др. Использование пробиотических и аутопробиотических Enterococcus faecium в лечении пациентов с сахарным диабетом 2-го типа //Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. ИИ Мечникова. - 2022. - Т. 14. - №. 1. - С. 77-88.] использовала ту же схему терапии аутопробиотиком и про биотиком у пациентов с МС и сопутствующим нарушением толерантности к глюкозе и СД2. В данном исследовании наблюдалось схожее влияние на гастроэнтерологические жалобы, также было обнаружено изменение микробиоты кишечника, проявляющееся в снижении общей бактериальной массы, увеличении количественного содержания Lactobacillus spp., уменьшении популяций Bifidobacterium spp.и Bacteroides thetaiotaomicron и не было обнаружено влияния на уровень глюкозы и инсулина.

В рассматриваемых исследованиях не было зарегистрировано снижения массы тела и уровней гликированного гемоглобина и глюкозы.

Следует отметить, что ранее аутопробиотик удавалось выделить не у всех пациентов (около 50%). Отличительной чертой нашего способ является использование не только Е. faecium, но и Е. hirae, что позволяет получать аутопробиотик у большего числа пациентов (около 90%).

Отличием предложенного способа от предыдущих является увеличение продолжительности курса аутопробиотической терапии до 20 дней и использование аутопробиотика у пациентов с преддиабетом - нарушением толерантности к глюкозе (НТГ).

Также в данной работе изучался более долгосрочный эффект аутопробиотика на организм, то есть исследовались микробиота и биохимические параметры спустя не только 14 дней, но и 28 дней после окончания курса терапии персонифицированным функциональным продуктом.

Ранее нами [Алферова Л.С, Ермоленко Е.И., Черникова А.Т., Новикова Н.С., Анопова А.Д., Васюкова Е.А., Цапиева А.Н., Демченко Е.А., Гладышев Н.С., Гладышева Н.П., Симаненкова А.В., Попова П.В., Дмитриев А.В., Каронова Т.Л., Суворов А.Н. Аутопробиотические энтерококки как компонент комплексной терапии метаболического синдрома. Российский журнал персонализированной медицины. 2022; 2(6): 98-114] при использовании аутопробиотических штаммов Е. faecium удалось приготовить ПФПП только для 55,8% пациентов с МС, и все пациенты получали 2 курса терапии с аналогичным эффектом на микробиоту и клинические и лабораторные проявления МС, однако при приеме второго курса часто не наблюдалось дальнейшего улучшения состояния пациента.

Задачей настоящего изобретения явилось упрощение схемы введения ПФПП при терапии МС и оптимизация его получения путем расширения видового состава энтерококков, благодаря чему увеличивается доля пациентов, для которых удается получить ПФПП.

Сущность изобретения состоит в том, из полученного стандартным способом образца фекалий, перед получением которого пациент в течение 10 дней не принимал антибиотики, пробиотические продукты, а также продукты питания, способные изменять микробиоту кишечника, готовят фекальную суспензию на основе фосфатного буфера. Суспензию высевают на селективную среду для энтерококков, содержащую азид натрия и краситель кристаллический фиолетовый, культивируют в течение 24-48 часов при температуре 37°С. Далее проводят идентификацию полученных колоний энтерококков на основании культуральных свойств. Выбирают три типичные колонии сирене-розового цвета со светло-розовым ободком. Материал из колоний высевают на плотную среду MRS и культивируют в течение 24 часов при 37°С.Полученные культуры используют для приготовления мазка, который после фиксации окрашивают по методу Грама, микроскопируют и в случае обнаружения фиолетовых кокков, располагающихся в виде коротких цепочек, бактерии идентифицируют до вида при помощи МАЛДИ-ТОФ масс-спектрометрии и ПЦР. Затем Е. faecium и/или Е. hirae при помощи ПЦР проверяют на отсутствия генов патогенности. Для изготовления функционального пищевого аутопро биотического продукта отбирают бактериальные клоны, относящиеся к видам Enterococcus faecium и/или Enterococcus hirae и не имеющие по результатам ПЦР ни одного из генов патогенности. Для каждого пациента индивидуально получают ПФПП путем посева чистых апатогенных бактериальных клонов энтерококков в 3 пробирки с 10 мл соевого гидролизата. Пробирку с более быстрым ростом культуры используют для получения двух литров индивидуального аутопробиотического пищевого продукта с содержанием Е. faecium и/или Е. hirae не менее 10⁸ КОЕ на 1 мл, который вводят пациенту перорально по 50 мл 2 раза в день курсом 20дней.

Техническим результатом данного изобретения являются: 1) увеличение доли пациентов, у которых возможно выделение аутопробиотических штаммов и получение ПФПП (до 93%); 2) оптимизация терапевтического процесса - 1 курс вместо двух.

Один курс терапии приводит к изменениям микробиоты кишечника (уменьшение представленности Е. faecalis, Streptococcus spp., Bacteroides fragilis), уменьшению ИМТ, массы тела, уровня гликированного гемоглобина и тощаковой глюкозы венозной крови.

Существенным преимуществом предлагаемого метода по сравнению с прототипом [Алферова Л.С, Ермоленко Е.И. и др. Аутопробиотические энтерококки как компонент комплексной терапии метаболического синдрома. Российский ж-л персонализированной медицины. 2022; 2(6): 98-114.] является, возможность использования дополнительного вида энтерококков (Е. hirae) и сокращение продолжительности терапии (один курс вместо двух).

Пример 1. На этапе первичного отбора пациентов в соответствии с критериями включения было подписано информированное согласие о включении в исследование с 63 пациентами (10 мужчин и 53 женщины) в возрасте от 27 до 65 лет. В данном исследовании принимали участие пациенты с диагностированным метаболическим синдромом, согласно критериям национальных рекомендаций по диагностике и лечению МС [Чазова И.Е. и др. Диагностика и лечение метаболического синдрома //Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2007. - Т. 6. - №. 6 S2. - С. 2-26.]. МС у исследуемых пациентов проявлялся в виде основного признака -абдоминального ожирения, а также двух и более дополнительных критериев, которые в основном проявлялись в виде нарушений углеводного и липидного обменов. Группу контроля составили пациенты с ожирением, но отсутствием проявлений нарушений углеводного обмена.

Все пациенты были разделены на группы:

А - (Ауто) получали аутопробиотический продукт двумя курсами в течение 20 дней (всего 23 человека);

Рl - (Плацебо) получали закваску на основе соевого гидролизата двумя курсами в течение 20 дней (всего 14 человек);

К - (Контроль) пациенты с ожирением и без нарушений углеводного обмена, не получали ни аутопробиотик, ни плацебо (всего 26 человек);

Всем пациентам проводили оценку состояния в трех точках: на старте (V1) - до приема аутопробиотика, через 14 дней (V2) и через 28 дней (V3) после приема аутопробиотика.

В основное исследование были включены - антропометрическое исследование (рост, вес, индекс массы тела, окружность талии), биохимический анализ крови (глюкоза, гликированный гемоглобин, липидный профиль, СРБ, АЛТ, ACT), а также исследование микробиоты кишечника с помощью ПЦР-РВ.

У исследуемых пациентов, принимающих аутопробиотик было обнаружено снижение массы тела, окружности талии и индекса массы тела после приема аутопробиотика (табл. 2).

Данные изменения наблюдались и на 14 и на 28 день после окончания приема продукта, следовательно, можно говорить о долговременном влиянии аутопробиотических штаммов Е. faecium или Е. hirae на состояние организма пациента. В-группе плацебо подобных изменений отмечено не было.

На фиг. 1 показана динамика уровней глюкозы сыворотки венозной крови, взятой натощак у участников исследования. У пациентов после курса аутопробиотической терапии наблюдалось снижение уровней глюкозы венозной крови, взятой натощак. Наибольшее снижение уровня глюкозы отмечалось через 14 дней после окончания 1 курса аутопробиотика, через 28 дней уровень глюкозы понемногу увеличивается, но остается ниже уровня, который был в начале терапии. В группе плацебо данных различий не наблюдали.

На фиг. 2 изображена динамика уровней гликированного гемоглобина у участников исследования. После терапии аутопробиотиком у пациентов наблюдалось снижение уровня гликированного гемоглобина. Наибольшее снижение уровня гликированного гемоглобина наблюдалось через 28 дней после окончания курса аутопробиотика. В группе плацебо разницы до после терапии не обнаружено.

При анализе кишечной микробиоты (табл. 3) было выявлено уменьшение представленности Е. faecalis, Bacteroides fragilis и Streptococcus spp.у пациентов, принимающих аутопробиотик.

Таким образом введение аутопробиотических Enterococcus spp.прямо и косвенно (изменения состава кишечного микробиоценоза) может повлиять на течение МС.

Пример 2. Пациент - Л. Возраст - 51 год. Пол - мужской.

На старте исследования у пациента были взяты биообразцы (сыворотка венозной крови, фекалии). В фекальной пробе выделен апатогенный индигенный штамм Е. faecium на основе которого в дальнейшем был изготовлен аутопробиотик. Терапия проводилась по 50 мл × 2 раза в день курсом в течение 20 дней. Через 28 дней курс повторялся. Биообразцы крови и фекалий были собраны на 14 и 28 дней после окончания курса аутопро биотикотерапии. После терапии аутопро биотиком пациент отмечал улучшение общего самочувствия, которое проявлялось (со слов пациента) в улучшение гастроэнтерологических симптомов - снизился метеоризм, нормализовался стул (было 5-7 тип, стал 3-4 тип по Бристольской шкале), дефекации стали ежедневными. У пациента снизился вес, уменьшилась окружность талии, наблюдалось снижение уровня глюкозы и гликированного гемоглобина (табл. 4).

Согласно результатам измерения ИМТ у пациента до вступления в исследование диагностировалась 2 степень ожирения, после терапии аутопробиотиком удалось снизить степень ожирения до 1. Динамику состава микробиоты кишечника оценивали с помощью ПЦР-РВ и представлена в табл. 5.

У пациента после лечения аутопробиотиком увеличилось количественное содержание Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp., снизилась представленность Bacteroides spp., Streptococcus spp ж Escherichia coli.

Таким образом, одного курса монотерапии аутопробиотическим штаммом Е. faecium МС, больному Л. было достаточно не только для позитивных сдвигов в составе микробиоты кишечника, но и для улучшения антропометрических показателей и параметров углеводного обмена.

Пример 3. Пациент - К. Возраст - 60 лет. Пол - женский.

На старте исследования у пациента были взяты биообразцы (сыворотка венозной крови, фекалии). В фекальной пробе выделен апатогенный индигенный штамм Е. hirae на основе которого в дальнейшем был изготовлен аутопробиотик. Терапия проводилась по 50 мл × 2 раза в день курсом в течение 20 дней. Через 28 дней курс повторялся. Биообразцы крови и фекалий были собраны на 14 и 28 дней после окончания курса аутопро биотикотерапии. После терапии аутопробиотиком пациентка отмечала улучшение общего самочувствия, которое проявлялось (со слов пациента) в улучшение гастроэнтерологических симптомов - уменьшилось ощущение вздутия, дефекации стали ежедневными.

У пациентки снизился вес, уменьшилась окружность талии, наблюдалось снижение уровня глюкозы и гликированного гемоглобина (табл. 6).

Следует отметить, что у пациентки уменьшились проявления абдоминального ожирения после терапии аутопробиотиком - уменьшилась окружность талии до верхней границы нормы.

Динамику состава микробиоты кишечника оценивали с помощью ПЦР-РВ, результаты представлены в табл. 7.

У пациентки после лечения аутопробиотиком увеличилось количественное содержание Bifidobacterium spp., снизилась представленность Bacteroides spp., ж Streptococcus spp..

Таким образом, одного курса монотерапии аутопробиотическим штаммом Е. hirae МС, больной К. было достаточно не только для позитивных сдвигов в составе микробиоты кишечника, но и для улучшения антропометрических показателей и параметров углеводного обмена. Предлагаемый способ терапии МС является экономически более выгодным и безопасным.

Изобретение относится к области микробиологии и медицины, касается способа терапии метаболического синдрома путем коррекции состава микробиоты кишечника. Из образца фекалий готовят фекальную суспензию, которую высевают на селективную среду для энтерококков, содержащую азид натрия и краситель кристаллический фиолетовый, культивируют в течение 24-48 ч при температуре 37°C. Затем выбирают три типичные колонии сирене-розового цвета со светло-розовым ободком, высевают их на плотную среду MRS и культивируют в течение 24 ч при 37°C. Полученные культуры используют для приготовления мазка, который после фиксации окрашивают по методу Грама, микроскопируют. В случае обнаружения фиолетовых кокков, располагающихся в виде коротких цепочек, их идентифицируют до вида при помощи МАЛДИ-ТОФ масс-спектрометрии и ПЦР. Затем отбирают бактериальные штаммы Enterococcus faecium и/или Enterococcus hirae, не имеющие генов патогенности по результатам ПЦР, высевают их в стерильную питательную среду на основе соевого гидролизата и используют для изготовления персонифицированного функционального пищевого аутопробиотического продукта в виде закваски. Продукт в виде закваски принимают перорально ежедневно 2 раза в день по 10⁸ колониеобразующих единиц в течение 20 дней. Изобретение обеспечивает: 1) увеличение доли пациентов, у которых возможно выделение аутопробиотических штаммов и получение ПФПП (до 93%); 2) оптимизацию терапевтического процесса - 1 курс вместо двух. Один курс терапии приводит к изменениям микробиоты кишечника (уменьшение представленности E. faecalis, Streptococcus spp., Bacteroides fragilis), уменьшению ИМТ, массы тела, уровня гликированного гемоглобина и тощаковой глюкозы венозной крови. Предлагаемый способ терапии метаболического синдрома является экономически более выгодным и безопасным. 2 ил., 7 табл., 3 пр.

Способ терапии метаболического синдрома путем коррекции состава микробиоты кишечника, заключающийся в том, что из образца фекалий, готовят фекальную суспензию, которую высевают на селективную среду для энтерококков, содержащую азид натрия и краситель кристаллический фиолетовый, культивируют в течение 24-48 часов при температуре 37°C, затем выбирают три типичные колонии сирене-розового цвета со светло-розовым ободком, высевают их на плотную среду MRS и культивируют в течение 24 часов при 37°C, полученные культуры используют для приготовления мазка, который после фиксации окрашивают по методу Грама, микроскопируют и, в случае обнаружения фиолетовых кокков, располагающихся в виде коротких цепочек, их идентифицируют до вида при помощи МАЛДИ-ТОФ масс-спектрометрии и ПЦР, затем отбирают бактериальные штаммы Enterococcus faecium и/или Enterococcus hirae, не имеющие генов патогенности по результатам ПЦР, высевают их в стерильную питательную среду на основе соевого гидролизата и используют для изготовления персонифицированного функционального пищевого аутопробиотического продукта в виде закваски, который принимают перорально ежедневно 2 раза в день по 10⁸ колониеобразующих единиц в течение 20 дней.