Способ получения кристаллического инсулина Советский патент 1983 года по МПК A61K38/28 

1

О)

oi Изобркэтение относится к химико-фарм цевтической промышленности и касается получения лекаретвейных препаратов. Известен способ получения кристаллического инсулина путем сорбции тшсулинсодержащего сырья, очищенного от жиров и пигментов, при рН 2,0-4,0 на сульфокатионите, обработки сорбента уксусноаммонийлым буферным раствором с 1юследующёй десорбцией и кристаллизацией Cl3 Однако способ требует использования fe качестве исходного продукта уже очищенного кристаллического инсулина, выход конечного продукта составляет 40- 52% при содержании проинсулина 1% а технологический -процесс сложен и длителен (84-170 часов) и не дает возможности получить целевой продукт со сниженной антигенное тъю. Цель изобретения - упрощение технологии получения целевого продукта и снижения его антигенностй. Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа получени кристаллического инсулина со сниженной антигенностью, путем сорбции инсулинсодержащего сырья, очищенного от жиров и пигментов при рН 2,0-4,0 на сульфокатионите, обработки сорбента уксусноаммонийным буферным раствором с последующей десорбцией и кристаллизацией, сорбцию проводят на микродиспе сии сульфокатионита с величиной частиц 20-60 мкм, смешанной с инертным силикатным наполнителем с величиной частиц 40-120. мкм при объемном соотнош нии микродисперсии и наполнителя 0,81,2:-1, обработку смеси микродисперсии и наполнителя проводят О,2О-О,ЗО М уксусноаммонийным буферным раствором .при рН 5,2-6,4 и проводят десорбцию 0,02-0,3 М буферным раствором при рН 6,4-7,6. При этом, в качестве .инертного носи теля используют стекло, широкопористое стекло, биЬгласс. Пример. Мерез колонку диамет ром 1.7 см и высотой 14 см, заполненную 30 мл смеси микродисперсли суль- фокатионита КУ-23 20-60 мкм и биогласса 80-100 мкм в объемном соотношеатг 1:1, пропускают-50 мл раствора кристаллического инсулина с концентрацией 10 мг/мл 1гфи ,0. Сорбент промывают 300 мл 0,3 М уксусноаммонийным буферным раствором с ,0. Десорбцию ведут 0,2 М фосфатным буферным раствором с рН 7,2. К собранному элюату в количестве 60 мл добавляют 1,4 г лимонной кислоты, 0,9 мл 5% раствора хлористого цинка и 20 мл ацетона. Раствор охлаждают и проводят кристалш1за1а1Ю, постепенно добавляя 5 N соляную кислоту до ,8. После кристаллизации получают 350 мг кристаллического цинк-инсулина. Биологические испытания показывают, что активность полученного препарата . 25,5 ед/мг. После очистки содержание проинсулина 0,5% и в 2 раза снижено количество аргинининсулина по сравнению с препаратом завода медпрепаратов. Сорбцию и промывку ведут со скоростью 350 мл/ч-см, ,десорбцию - со скоростью 50 мл /ч-смЯ П р и М е р 2. Через колонку диаметром 1,7 см и высотой 14 см, заполненную 30 мл смеси микродисперсии сульфокатионита КУ-23 20-60 мкм и широкопоркстого стекла в объемном соотношении 0,8-1, пропускают 200 мл инсулИнсодержащего раствора с рН 2,0 (общая концентрация белков в растворе 7 кг/мл, около 2О% от общего количества составляют инсулин и его аналоги), полученного после десорбцни с гранулированного сульфокатионит КУ-23 в процессе промышленной очистки инсулина. Сорбент промьтают 250 мл 0,3 М рссусноаммонийным буферным раствором с ,4. Сорбцию и промьтку ведут со скоростью 350 мл/ЧСМ. Десор&шпо ведут со скоростью 50 мл/ч-см 0,02 М раствором ТРИС с ,4 К собранному элюату в количестве 50 мл последовательно добавляют 1,2 г лимонной кислоты, О,4 мл 5% раствора хлористого цинка, 10 мл ацетона. Раствор охлаждают и ведут кристаллизацию, постепенно добавляя 5 N соляную кислоту fio ,8. Выход целевого продукта 180 мг с активностью 2. ед/мг. В препарате имеются лишь примеси дезами- доинсулина. П р и М е р 3, Через колонку диаметром 3,5 см и высотой 30 см, заполненную 250 мл смеси мтгкродисперсив сульфокатионита КУ-23 20-60 мкм и стекла 40-100 мкм в объемном соотношении 1,2-1, пропускают 1ОО мл инсулинсодержащего раствора, полученного в ходе промьш1ленной очистки инсулина йосле десорбции с гранулированного ионита КУ-23. Сорбент промывают 0,2 М уксусноаммонийным буферным раствором с рН.5.2ГСорбшпо к :прош.шку ведут со скоростью 350 мл/ЧСи1..Д€1сорбтпо ведут со скоростью 5О мл/ч-см О.ЗМ раствором уксусно сислого аммоний, с ,6. К собранному эпюату в количестве БОО мл добавл5пот 7,2 г лимонной кислоты, 2,6, мл 5% раствора хлористого цинка и 100 мл адетона. Раствор охлаждают И ведут кристаллизацию, постепенно добавляя 5 N соляную кислоту до ,8 После кристаллизации получено 940 мг к сФаллического шоск-инсулина с активностью, 26 ед/мг. 106 75 Предлагаемий способ позволяет уда- цредлагаемъш спосоо позв«шет проинсулш (не ее р.5%} т шность препаратов 25,5-26,5 ед/г. Способ высокотехнологичен, очистка не превышает 8-10 ч. В способе исключаются стадии осаждения примесных белков при ,0 и 4,4 и осаждение аморфного цинкинсулина и дает возможность очистки любого предварительно-очищенного от жира и пкгментов йнсулинсодёржащего раствора, В способе -аахоцят применение отходы промышлетаого производства сульфокатионита КУ-23 .вьшускаемого в кюбсовом масштабе.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСУЛИНА путем сорбшга инсулинсодержащего сырья, очищен;Ного от жиров к пигментов при рН 2,0- . 4,0 на сугафзкатионите, о(фаботки сорбенг та уксусноаммояийшдм буферным раствором с последующей десорбцией и кристаллизацией, отличающийс я тем, что, с целью упрощения технологии получения целевого продукта и снижения его антиГенности, сорб1гаю проводят на микродисперсин сульфокатионита с величиной : частиц 20-6О мкм, смещанной с инер)т ным силикатным наполнителем с величиной частиц 4О-120 мкм при объемном соотношении микродисперсйи и наполнителя