Способ получения биомассы энтеробактерий используемой для адсорбций антител Советский патент 1983 года по МПК C12N1/20 

ОС

кэ

4

оо 11зоб1)етение относится к микробиопо гни и может быть .использовано при производстве диагностических антитеяьных препаратов Известен способ получения биомассы энтеробйктерий, используемой для адсорб ции антител, путем выращивания бактерий на плотной питательной среде, содержащей мясную и казеиновую основу, или приготовленной из отходов производства (эритроцитов, фибрина лошади, сгустков крови кроликов, морских свинок и т.п.)l Известен способ получения биомассы энтеробактерий, используемоЙ ч для адсорб ции антител, путем посева бактерий на плотную питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные сопи, приготовленную на основе гидропизатов из отходов производства с добавлением мясного гидролизата Хоттингера и стимулятора роста в виде натрия серноки лого, с последующим инкубированием и сбором полученной биомассы , Однако известные способы не обеспечивают высокого выхода биомассы, поскольку не все щтаммы реагируют на присутствие используемых стимуляторов роста увеличением выхода биомассы. Цель изобретения - повышение выхода Целевого продукта. Поставленная цель достигается тем. что в способе получения биомассы энтеро бактертй, используемой для адсорбции антител, путем посева бактерий на плотную питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные соли и стимулятор роста, с последующим рнкубированием и сбором полученной био Классы, посев осуществляют на среду, соЙержащую в качестве стимулятора роста натрий гипосульфит 4-6 г/л среды, натрий сернокислый кристаллический 8 12 г/л, экстракт кормовых дрожжей 46 г/л, глицерин 15-25 мл/л и анионообМенную смоду АВ-17 4-1О г/л. Пример. Испытывают плотную питательную среду без добавок и с различными комбинациями добавок. Среда приготовлена на основе триптического гидролизата сгустков крови лабораторных животных и содержит 170 мг% аминного азота и 3% агара. Расплавленную среду как без добавок, так и с добавками разливают в матрацы и стерилизуют автоклавированием (112°С, ЗО мин). Матрацы с горячей простерилизованной средой оставляют в горизонтальном положении при комнатнсй температуре для застывания, В качестве добавок используют глицерин (15-25 Mrt), или экстракт кормовых дрожжей (4-6 г), или натрий гипосульфит (4-6 г), натрий сернокислый (8 12 г), глицерин 15-25 мл), аминообменную смолу АВ-17 (4-1О .г) или натрий гипосульфит (4-6 г), натрий сернокислый (8-12 г), экстракт кормовых дрожжей (4-6 г), глицерин (15-25 мл) и анионообменную смолу АВ-17 (4-1О г). Количества добавок указаны из расчета на один литр среды. Все вещества, кроме анионообменной смолы АВ-17, вносят в среду до разлива в матрацы. Смолу вносят отдельно в каждый матрац до стери|лизации. Поверхность застывших сред засева- ют различными сероварами эшерихий (по 2О мл бульонной культуры). Выращивание проводят при 37 С в течение 182О ч. Выросшую культуру смывают раствором натрия хлорид;а (1ОО мл раствора на 1 матрац). Полученные суспензии бактерий одного серовара сливают из разных матрацев вместе перемешивают и опредепяют объем и густоту суспензии по оптической плотности на ФЗК-М в сравнении со стандартами (см. табл. 1). Полученные бактериальные суспензии используют для адсорбции гетерологичес , ких антител из сывороток и рассчитывают расход питательных сред для получения бактериальной массы, достаточной для адсорбции одного литра сьгеоротки.

Как видно из табл. 1, плогнооть полученных взвесей эшерихий всех испытанных разновндносгей наибольшая прв наличии в среде всех пяти яобавок.

. $

Так, например, прирост плотности взве си штамма 014 4 на среде с четырьмя добавками, но без ЭДК (по с|)авнению со средой без Добавки),составляет 8,6 млрД/мл, а прирост плотеости бактериальной взве-

Интенсивность роста эшерихий (млрд/мл) на мясной среде Хотгингера с 3%-ным агаром

си на среде с добавкой экстракта кормовых дрожжей 5,9 млрд/мл.

Пример 2. Испытывают плотную питательную среду на основе мясных гидролизатов Хоттингера и ту же среду с добавками. Состав добавок и методика получения адсорбента аналогичны примеру 1.

В табл.2 приведены данные интенсивности эшерихий на мясной среде Хоттингера я влияния на этот показатель различных добавок Таблица 2

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ДЛЯ. АДСОРБЦИИ АНТИТЕЛ, путем посева бактерий на плотную питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные сопи и стимулятор роста, с последующим инкубироваШ1ем и сбором полученной биомассы, о т- личающийся тем, что, с цепью повышения выхода целевого продукта, посев осуществляют на среду, содержащую в качестве стимулятора роста натрий гипосульфит 4-6 г/л среды, натрий сернокислый кристаллический 8-12 г/п, экстракт кормовых дрожжей 4-6 г/л, глицерин 15-25 мл/л и анионообменную смолу АВ-17 4-1О г/л. СО