Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии.
Известен способ культивирования Escherichia coli, содержащих Н-антиген, путем их выращивания на питательной среде в присутствии стцмулятора флагеллированности .Ij .
Однако Escherichia coli, выращенные известным способом, характеризуются недостаточно высоким содержанием Н-антигена,
Целью изобретения является повышение содержания Н-антигена в культуре Escnerichia coli.
Эта цель достигается тем, что в качестве стимулятора флагеллированности используют глицерин в концентрации 1-5%.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
При мер 1. Плотную питательную среду, приготовленную на основе перевара Хоттингера и содержащую 1,5% агар-агара, растапливают на водяной бане, добавляют стерильно 2% предварительно обработанного автоклавированием глицерина, разливают в бактериологические пробирки по 5 мл и скашивают..На поверхность
скошенной среды засевают подвижные штаммы эшерихий, не подвергавшиеся предварительному пассированию через полужидкий агар в пробирках Крейджи и выращивают при 37° 18-20 ч. Выроспше культуры смывают дистиллированной водой и готовят контрастированные 1%-ным раствором уранилацетата препараты для электронной микoроскопии. Препараты просматривают в электронном микроскопе и сосчитывают в различных участках количество клеток со жгутиками и без жгутиков. В каждом препарате просматривают
5 100-200 бактерисшьных клеток.
- Для сравнения готовят и просматривают в электронном микроскопе препараты культуры Escherichia coli,
0 выращенной на хоттингеровском агаре, в которую добавляют 0,2% глюкозы или без добавок как глицерина, так и глюкозы. Для сравнения также готовят препараты культур Escherichia coli,
5 пропассированных предварительно 5-7 раз через полужидкий атар в пробирках Крейджи и выращенных на хоттингеровском агаре без добавления глицерина или глюкозы.
0
Результаты приведены в таблице.
Пример 2. Испольэуют два штамма, пропасеированные предварительно через полужидкий агар в пробирках Крейджи. Один из них 011:К10;Н10 - характеризуется сительно хорошей флагеллированность при выращивании на плотных средах, а другой - 0151;НЮ - слабой. Оба штамма обладают жгутиковым антигено НЮ, но с несколько различным парциальным составом. Адсорбции этими штаммами подвергают Н-сыворотку к штамму 3-236 обладающему также антигеном Н10 но отличающимся по парциальному составу от Н-антигенов двух вышеуказанных штаммов. Такой подбор штаммов сделан с.целью сравнить уровень остающихся в сыворотке Н-агглютининов, которые не имеют сродства с Н-антигену адсорбента и которые необходимо сохранить в сыворотке.
Готовят 3 варианта плотной среды приготовленной на основе перевара Хоттингера и содержащей 1,5% агарагара; первый с добавлением 2% предварительно обработанного автоклавированием глицерина, второй с добавлением 0,2% глюкозы и третий без добавок глицерина или глюкозы. Среды до 20 мл разливают в чашки Петри и после застывания засеивают сплошным газоном бактерий (на чавжу по 0,25 мл бульйонной культуры,которую растирают по поверхности среды шпателем). После выращивания при
37 в течение 20 ч бактерии смлвают изотоническим раствором хлористого натрия и убивают добавлением 0,5% формалина. Адсорбцию ведут традиционным cnocof oM. В каждом опыте объем адсорбируемой сыворотки (предварительно разведенной 1:25 в случаях адсорбции культурами штамма 0151:НЮ и 1:20 в случае адсорбции культурами штамма ОИ:К10:Н10) составляет 5 мл. Для адсорбции используют количества адсорбента, соотвётствуюц ие урожаю бактерий с двух, трех, четырех и шести чашек при использовании штамма 0,151:410 и с одной, полутора,двух, двух с половиной трех, четырех и пяти чашек при использовании штамма 011:К10:Н10.
Добавление глицерина значительно снижает расход питательной среды для приготовления адсорбента в количестве, достаточном для адсорбции. Титры агглютининов, не имеющих сродства к Н-антигену штамма-адсорбента и сохраняющихся в адсорбированных сыворотках, не зависят от способа выращивания адсорбента.
Введение глицерина в среды с различной питательной основой увеличивает урожай бактерий и выход Н-антигена,
Использование изобретения позволяет улучшить бактериологическую диагностику заболеваний, вызываемых эшерихиями.
Количество обладающих жгутиками клеток , в % к общему числу клеток, просмотренных №в препарате
Среднее 18,5
74,76
Формула изобретения
Способ культивирования Bscherichia coli, содержащих Н-антиген,
87,46
54,23
путем их выращивания на питательной среде в присутствии стимулятора Флагеллированности, отличающий65 с я тем, что, с целью повьш1ения содержащая Н-антиген в культуре Escherichia coli, в качестве стимулятора флагеллированиости используют глицерин в концентрации 1-5%. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе i. Авторское свидетельство СССР №578339, кл. С 12 К 1/04, 1977
