Питательная среда для получения спор сибиреязвенного микроба Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается сред для выращивания спор микроорганизмов из рода Bacillus anthracls.

Известна питательная среда Гладстона- Филдса, содержащая: казеиновый трипти- ческий перевар, водный экстракт дрожжей, сернокислое железо, сернокислую магнезию, сернокислый марганец, сернокислый натрий, хлористый кальций, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, агар и дистиллированную воду. Среда Гладстона- Филдса предназначена для получения столбнячного токсина, которая в течение многих лет используется для выращивания спор Bacillus anthracls.

Однако данная среда имеет недостаток: она не обеспечивает необходимый уровень спорообразования (0,4 млрд спор с 1 мл среды).

Целью предлагаемого изобретения является разработка сухой питательной среды для получения спор сибиреязвенного микроба, обеспечивающей высокий уровень спорообразования Bacillus anthracls, Для этого используют в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, из источников углевода-магнит, а из минеральных веществ натрия гидроокись при следующем количественном соотношении, г/л:

Аминопептид3-4 Ферментативный гидролизат

кормовых дрожжей4-6

Маннит1-1,5

Натрий хлористый4-6

Агар15-17

Натрия гидроокись0,1-0,15 Дистиллированная вода до литра

О 00 О Сл) N

Сухую питательную среду готовят следующим образом из расчета на 1 л дистиллированной воды:

Вариант 1. В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, г/л: ами- нопептид-3, ГКД-4, маннит-1, агар- 15, натрий хлористый - 4, натрия гидроокись 0,1.

Вариант 2. В шаровой мельнице

перемешивают сухие компоненты, г/л, ами- нопептид- 3.5, ГКД-5, маннит- 1,25, агар - 16, натрий хлористый - 5, натрия гидроокись - 0,1.

Вариант 3. В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, г/л: ами- нопептид - 4, гидролизат кормовых дрожжей - 6, маннит - 1,5, агар - 17, натрия гидроокись - 0,15, натрий хлористый - 6.

Среду используют следующим образом: 30,85 г сухой питательной среды (вариант 2) разводят в 1 литре дистиллированной воды, автоклавируют, разливают в матрацы по 0,5 л и вновь автоклавируют, Лредварительно перед посевом на матрац производят высев культуры петлей по 5 мл на бульон Хотгин- герз и инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч. При наличии образования роста колоний содержимое пробирки (5 мл) высевают на плотную среду в матрице и покачиванием равномерно распределяют культуру по поверхности. Затем выдерживают в течение 3-х часов при комнатной температуре до впитывания жидкости в плотную среду. По истечении времени матрац помещают в термостат при 37°С, выдерживают 6-10 суток и периодически в течение этого времени производят контроль на образование спор. При наличии округлой (горохообразной) формы процесс образования спор считают завершенным. Смыв спор осуществляют следующим образом. Для этого в матрац вносят 50 мл дистиллированной воды и оставляют на

15-20 мин. После чего шпателем снимают с поверхности среды биомассу и определяют концентрацию спор чашечным методом или в камере Горяева. При этом получают 0,76 млрд спор сибиреязвенного микроба с 1 мл среды.

Дэлее полученную споровую бакмассу используют для получения водорастворимых антигенов споровых форм сибиреяз- венного токсина известным способом.

Сравнительную оценку эффективности предложенной среды проводят с контрольной средой Глэдстона-Филдса.

Результаты спорообразования В. anthracls приведены в таблице.

Предлагаемая среда обеспечивает высокий уровень спорообразования Bacillus anthracls (0,6-0,7 млрд спор с 1 мл среды), удобна в использовании. Формула изобретения

Питательная среда для получения спор сибиреязвенного микроба, содержащая питательную основу, источник углевода, мине- ральные вещества, агар и дистиллированную воду, отличающая- с я тем, что, с целью повышения спорообразования, она содержит в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, из источников углевода - маннит, а из минеральных веществ - хлористый натрий,гидроокись натрия , при следующем количественном соотношении,г/л:

аминопептид ферментативный гидролизат

кормовых дрожжей

маннит

хлористый натрий4-6;

гидроокись натрия0,1-0,15;

агар15-17

дистиллированная водадо 1 л

3-4: 4-6; 1-1,5;

Применение: микробиология, среда для выращивания спор. Сущность изобретения: питательная среда содержит в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, а также маннит, хлористый натрий, гидроокись натрия, агар и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л: аминопептид 3-4, ферментативный гидролизат кормовых дрожжей 4-6, маннит 1-1,5, натрий хлористый 4-6, агар 15-17, натрия гидроокись 0,1-0,15, дистиллированная вода - остальное. Среда обеспечивает высокий уровень спорообразования сибиреязвенного микроба /0,6-0,7 млрд спор/мл/ м удобна в использовании. 1 табл.