Стимулятор роста микроорганизмов Советский патент 1983 года по МПК C12N1/38 

N5

4

1m

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к стимуляторам роста микроорганизмов.

Известны стимуляторы роста микроорганизмов - сложные органические соединения, например хинонполикарбоновые кислоты l .

Целью изобретения является повышение накопления биомассы микроорганизмов при внесении в среду стимулятора роста.

Цель достигается применением, в качестве стимулятора роста 2,3-Диоксибензоилсерина - энтерохелина.

-Энтерохелин относится к биологически активным веществам и известен, как специфический хелатор железа, синтезируемый энтеробактериями.

Выделение энтерохелина проводят следующим образом. Культуральную жидкость подкисляют 12 н. НС1 до рН 1, затем центрифугируют, супернатант переносят в делительную воронку и прибавляют половинный объем этилацетата. Смесь интенсивно встряхивают и -отстаивают до полного разведения водного и этилацетатного слоев. Этилацетатные экстракты упаривают на роторном испарителе при k2°C. Сухой остаток растворяют в небольшом объеме свежего ацетата, дважды промывают 0,1 н. НС1 и повторно упаривают. Препарат энтерохелина высушивают при 60 С под вакуумом в течение ч.

Варианты опыта

Название микроорганизма С. utl1 is Y-766 С. tropical1s

2k2

Рабочий раствор энтерохелина готовят растворением одного моля выделенного соединения в 1%-ным Na-HPO и добавлением одного моля ре50л НлО. После образования энтлрохелинового комплекса раствор фильтруют и вносят в питательную среду для культивирования в количестве 10-100 мкг/мл.

Посевной материал Candida utilis , Candida troplcalis, Pichia ohmeri, E, coli 0111, E. col i (непатогенная), Shigella sonnei выращивают в МПБ в течение 2.0-2i ч и вносят в количестве 0,01 по объему о

Микроорганизмы культивируют в МПБ или синтетической среде следующего состава, г/л: 1,0; КН„РОл 1,5; . 3,0; MgSO 0,1; глюкоза St, микроэлементы, мг/л: N3603 0,056; CuSOA-5Hg 0 0,039; CoCI, 0,050; 0,30а;. (NH) 0,120, вода дистиллированная - до 1 л

Микроорганизмы культивируют в ко нических колбах (250 мл} на качалке при 200 об/мин, или в пробирках, в которые наливают 5 мл среды, или аппарате для непрерывного культивирования с автоматическим поддержанием необходимой температуры, непрерывной подачей стерильного воздуха при заданных оборотах мешалки. Энтеробактерии культивируют при , дрожжи при 28 С. Биомассу определяют на ФЭК-М.

Влияние энтерохелина на рост микроорганизмов показано в таблице.

Накопление биомассы

ед.опт.плотности М1м Среда без железа1,15iO,03095 Контроль : среда с FeSO (20 мкМ)1 ,2010,030100 Энтерохелин 20 мкг/мл1,+010,015117 Энтерохелин мкг/мл1,58±0,017132 Среда без железа0,6110,01587 Контроль0,70±0,018100 Энтерохелин 20 мкг/мл1,1510,03516 Энтерохелин 5 мкг/мл2,17iO,100ЗЮ

Продолжение таблицы

Микроорганизмы, усваивающие железо связывающий комплекс, накапливают на 10-200 биомассы больше, чем в контрольном варианте - среде без добавления энтерохелина. П р им е р. Энтерохелин получают при культивировании Klebsiella pneumonia sp. две 1015 известным способом Полученный стимулятор вносят в среду в количестве А5 .мкг/мл. Выращивают дрожжи С. tropical is в пробирках С 5 МЛ синтетической среды. Пробирки помещают в аппарат для встряхивания и культивируют в течение 2 ч при 28 С. Накопление биомассы составляет ,310 по сравнению с контролем (без добавления стимулятора). Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет увеличить накопление биомассы различных микроорганизмов на 10-200% по сравнению с контролем.