Штамм А (Ленинград) 299/80 вируса гриппа,используемый для приготовления гриппозного диагностикума Советский патент 1986 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 

Изобретение относится к вирусологии, а именно к штамму вируса гриппа, используемому для получения грип позного диагностикума. Известны штаммы вируса гриппа типа А (H3N2) для приготовления гриппозных диагностикумов. Однако известные штаммы антигенно неактуальны в настоящее время. Известен антигенно актуальный штамм вируса гриппа А (Бангкок) (1)79(H3N2), используемый для приготовления гриппозного диагностикума. Но данный штамм ингибиторочувстви телен, что снижает чувствительность диaгнocтиkyмa. Целью изобретения является создание антигенно актуального штамма вируса гриппа типа A(H3N2), обладающего ингибиторорезистентностью и обеспечивающего получение чувствительных гриппозных диагностикумов. Предлагаемый штамм А (Ленинград) 299/80 вируса гриппа выделен от боль ного гриппом в лаборатории ;этиологии гриппа ВНИИгриппа. Штамм прошел клонирование 5 пассажами предельными ра ведениями в присутствии смеси ингиби {торосодержащих сывороток лошади,морс кой свинки, кролика, человека и телят и 3 пассажами в прйсутс;гвии смеси ингибиторосодержащих сывороток людей. Штамм вируса гриппа А (Ленинград) 299/80 депонирован в государственной коллекции вирусов .Института вирусоло гии Им. Д.И. Ивановского за номером ГКВ № 1802. Полученный методом клонирования йнгибиторорезистентный штамм А (Ленинград) 299/80 отличается от осталь ных вирусов гриппа типа А (H3N2) 1979-1980 гг. вьщеления по признаку резистентности к неспецифическим ингибиторам и характериз5ется следующими признаками. Морфологические признаки. Полимор ная структура, типичная для вирусов гриппа. Физические свойства. Коэффициент седиментации 750, плавучая плотность 1,21 г/см .Репродукционная способность. Инфекционньй титр вируса 8,0-9,25 Ig ЭИД5о)о2/ил гемагглютинирующий титр 1:256-1:1024 в 0,2 мл с 1%-ными куриными эритроцитами. Пример. Маточный материал вируса А (Ленинград) 299/80, прошедший контроль на стерильность, специфичность, биологическую активность (гемагглютинирующую, инфекционную), резистентность к неспецифическим ингибиторам, разводят в 100000 раз (10) фосфоратно-буферным раствором (рН7,2) содержащим антибиотики (пенициллин 250 ЕД/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Объем разведенного,вируса 50 мл. Куриные эмбрионы 11-дневного возраста заражают в аллантоисную полость разведенным вирусом из расчета 0,2 мл на эмбрион, доза заражения 10 ЭИДдо. Зараженные эмбрионы инкубируют в термостате с увлажненным воздухом в чение 48 ч при 34 С, охлаждают 18 ч при 4 С. Эмбрионы стерильно вскрывают, всю аллантоисную жидкость собирают в бутьщи емкостью 0,5 л. Бутыли (порядковый номер 7-9) вьщерживают 18 ч при 4 С. Затем проверяют полученный материал в реакции гемагглютинации (РГА) с 1%-ными куриными эритроцитами; в пробах из бутылей 7-9 гемагглютинирующий титр равен 1:512, 1:256, 1:1024. Вирусный материал контролируют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с прогретыми в течение 30 мин при 56°С нормальными сыворотками крыс, лошадей, человека на чувствительность к неспецифическим ингибиторам. Пробы резистентны к ингибиторам и нейтрализуются специфической антисывороткой до титра 1:2560. Антисыворотки к штаммам вирусов гриппа типа В и А (H1N1, H2N2, ) не ингибируют гемагглютини1рующую активность проб. Для инактивации вируса в каждую бутыль вносят по 0,2 мл 37%-ного раствора формалина и 0,5 МП 1%-ного раствора мертио- . лата и вьщерживают 1 сут при комнатной температуре. Полуфабрикат контролируют на стерильность и присутствие инфекционного вируса путем заражения куриных эмбрионов цельным неразведенным материалом . Во всех пробах (7-9) вирус полностью инактивируется. Подготовленные и проконтролированные антигены подвергают лиофилизатхии. Для этого в каждую бутыль, содержащую по 400 мл вирусного антигена, добавляют 40 мл подогретого на водяной бане 3,5%-ного раствора желатины в 5,0%-ном растворе сахарозы. Пробы 7-9 обозначают йак серии диагностикума 1-3. После тщательного перемеимвания каждую серию разливают по флаконам емкостью .10 мл по 3 Mil антигена (по 145 флаконов кавдой серии). Сразу по окончании лиофилйзации (продолжительность 36 ч, температура нагрева ) флакон закрывают резиновой пробкой. Готовый антиген (серии 1-3) повторно контролируют на f 1 88 резистентность к ингибиторам, спехщфичность в РТГА, активность в РГА, стерильность, полноту инактивации инфекционного вируса. Титр гемагглютининов в готовых сериях диагностику-: нов составляет 1:256, 1:512. Использование штамма А (Ленинград) 299/80 вируса гриппа позволит существенно повысить эффективность диагностики гриппа.

Штамм А (Ленинград) 299/80 вируса гриппа, ГКВ 1802 (государственная коллекция вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского), ис:пользуемый для приготовления гриппозного диагностикума.