Штамм вируса гриппа А/Киев/3304/84, используемый для приготовления гриппозного диагностикума Советский патент 1989 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 

Физические свойства. Коэффициент седиментации 750S, плавучая плотность 1,21 г/см

Молекулярно-биологическая характеристика. Электрофоретический профиль белков вируса А(Киев)3304/84 сходен (но не идентичен) с профилем белков вируса A(PR)8/34. При электрофорезе

1985 г. Использование диагностикума из штамма А(Киев)3304/84 в сравнении с диагностикумом из штамма A(PR)8/34

при изучении коллективного иммунитета показало, что в группе людей в возрасте 40 лет и старше, антитела в титре 1:20 и выие определяются чаще со штаммом А(Киев)3304/84,тогда как

в 7,5%-ном полиакриламидном геле под- У контрольной группы (до 40 лет), вижность полипептидов М, NP, НА2ана- -родившихся по окончании периода эпидемической циркуляции вирусов гриппа A(HONI), чаще определяются антитела к вирусу A(PR)8/34, в особенности в осенне-зимний период - по завершении кампании вакцинации (таблица). Это свидетельствует о большей специфичности и результативности оценки коллективного иммунитета при использовании штамма А(Киев)3304/84 (HONI) по сравнению с A(PR)8/34.

логична у обоих вирусов, однако в - скорости миграции гликопротеидов NA и HAI существуют минорные отличия.

Специфичность, резистентность к неспецифическим ингибиторам сывороток, стабильность свойств при пассировании. Штамм А(Киев)3304/84 характеризуется специфичностью, документированной в РТГА при взаимодействии с антителами к вирусам гриппа А других подтипов, в том числе A(HCBNI), A(HINI), A(H2N2), A(H3N2) и к вирусу гриппа В. Нейраминидаза вируса гриппа А(Киев)3304/84 относится к подти- пу N1 и является близкородственной нейраминидазе штамма А(РР)8/34, однако отличается от последнего сниженной активностью расщепления овомуци1985 г. Использование диагностикума из штамма А(Киев)3304/84 в сравнении с диагностикумом из штамма A(PR)8/34

У контрольной группы (до 40 лет), родившихся по окончании периода эпидемической циркуляции вирусов гриппа A(HONI), чаще определяются антитела к вирусу A(PR)8/34, в особенности в осенне-зимний период - по завершении кампании вакцинации (таблица). Это свидетельствует о большей специфичности и результативности оценки коллективного иммунитета при использовании штамма А(Киев)3304/84 (HONI) по сравнению с A(PR)8/34.

Таким образом, вирус гриппа А(Киев)3304/84 является специфичным: резистентным к ингибиторам сывороток млекопитающих, обладает широким антигенным спектром, выраженной авид- ноствю к антителам человеческих сывороток, хорошо репродуцируется в куриных эмбрионах с высокими показа

Изобретение относится к медицине , а именно к вакцинно-сывороточному производству, и касается штамма вируса гриппа, используемого для получения гриппозного диагностикума типа 17(HONI). Штамм 17(Киев)3304/84 вируса гриппа депонирован под номером ГКВ № 1979 и характеризуется свойствами, присущими диагностическим штаммам: высокой репродуктивностью, широким антигенным спектром, резистент- ностью к неспецифическим ингибиторам сывороток человека, лошади и морской свинки, высокой авидностью к антителам человеческих сывороток. Использование штамма позволяет повысить качество Оценки коллективного иммунитета к вирусу гриппа с антигенной формулой А(HONI). 1 табл. i (Л с Штамм вируса гриппа Р(Киев)3304/84 выделен из крови больного ребенка на 2-й день от начала заболевания и пассирован 9 раз в аллантонсной полости куриных .эмбрионов. Депонирован под номером ГКВ 1979 я характеризуется следующими признаками. Морфология. Плеоморфные частицы, преимущественно сферической формы, диаметром 80-120 нм, с наружГ1ыми ши- jiaMH гемагглютинина и нейрамииидазы. а 00 ч СП 00

на (15Т-И 180 у освобожденной от су б- 30 телями инфекционной и гемагглютини35

страта NANA соответственно). Штамм А(Киев)3304/84 резистентен к несие- цифическим ингибиторам сывороток лошади и морской свинки. Стабильность биологических свойств штамма доказана при 9-кратном пассировании. Широта антигенного спектра. Штамм А(Киев)3304/84 (HDNI) обладает наибольшей широтой антигенного спектра (ШАС) среди исследованных ви- Q русрв этого подтипа. Средние геометрические титры антител к.гетерологич- ным штаммам подтипа A(HONI), определенные в перекрестной РТГА с гипериммунными сыворотками крыс, при ис- g пользовании штамма А(Киев)3304/84 существенно вьше, чем с другими вирусами этого подтипа.

Репродукционная активность. Инфекционные титры вируса составляют 7,5- 8,5 (IgSMJl 5о/о-гм)титры гемагглюти- нинов - 1:256 - 1:1024 ,в 0,2 мл с 1%-ными эритроцитами кур.

50

рующей активностей .

Пример использования штамма А(Киев)3304/84 для приготовления гриппозного диагностикума.

Маточный материал вируса А(Киев) 3304/84, прошедший контроль на стерильность, специфичность, гемагглюти нйрующую и инфекционную активности, резистентность к неспецифическим ингибиторам, разводят в 10000 раз () на фосфатно-солевом буферном растворе (рН 7,2), содержащем антибиотики (пенициллин - 200 ед./мл, стрептомицин - 100 мкг/мл). 11-ти дневные куриные эмбрионы заражают в аллантоисную полость разведенным вирусом из расчета 0,2 мл на эмбрион, доза заражения составляет 10 ЗИД. Зараженные эмбрионы инкубируют в тер мостате с увлажненным воздухом в течение 48 ч при 36°С, затем охлаждают 16-18 ч при 4°С. Охлажденные эмбрионы стерильно вскрывают и аллантоисную жидкость собирают в бутыли емкостью 0,5 л, маркированные порядковыми номерами (11-13). Полученный ма териал проверяют в реакции гемагглю- тинации (РГА) с %-ными куриными эритроцитами, в пробах из бутьшей

Диагностическая активность. Диагностическая активность вируса в РТГА проверена при изучении коллективного иммунитета у детей и взрослых в период с октября 1984 г. по февраль

5

Q g

50

55

рующей активностей .

Пример использования штамма А(Киев)3304/84 для приготовления гриппозного диагностикума.

Маточный материал вируса А(Киев) 3304/84, прошедший контроль на стерильность, специфичность, гемагглюти- нйрующую и инфекционную активности, резистентность к неспецифическим ингибиторам, разводят в 10000 раз () на фосфатно-солевом буферном растворе (рН 7,2), содержащем антибиотики (пенициллин - 200 ед./мл, стрептомицин - 100 мкг/мл). 11-ти дневные куриные эмбрионы заражают в аллантоисную полость разведенным вирусом из расчета 0,2 мл на эмбрион, доза заражения составляет 10 ЗИД. Зараженные эмбрионы инкубируют в термостате с увлажненным воздухом в течение 48 ч при 36°С, затем охлаждают 16-18 ч при 4°С. Охлажденные эмбрионы стерильно вскрывают и аллантоисную жидкость собирают в бутыли емкостью 0,5 л, маркированные порядковыми номерами (11-13). Полученный материал проверяют в реакции гемагглю- тинации (РГА) с %-ными куриными эритроцитами, в пробах из бутьшей

5I

11-13 гемагглютинирующий титр равен соответственно 1:512, 1:256, 1:1024. Затем вирусный материал контролируют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с прогреть1ми при 56 С в течение 30 мин нормальными сыворотками лошади и морской свинки на чувствительность к неспецифическим ингибиторам. Все пробы вируса (11-13) резистентны к ингибиторам и нейтрализуются специфической антисывороткой до титра 1:1280. Антисыворотки к штаммам вирусов гриппа типа А (HCBlNI, HINT, H2N2, H3N2) и В не ингйбируют гемагглютинирующую активность указанных проб,- .Для инактивации вируса в каждую бутыпь вносят по 10 мл 2%- ного раствора мертиолята и выдерживают бутылки 48 ч при . Полуфабрикат контролируют на наличие инфекционного вируса путем заражения куриных эмбрионов неразведенным материалом и на стерильность. Во всех пробах (11-13) вирус инактивирован. Затем в каждую бутыль, содержащую 400 мл антигена, добавляют 40 мл подогретого на водяной бане 3,5%-ного раствора желатины на 50%-ном растворе сахарозы и тщательно перемешивают

637586

Бутылки 11-13 обозначают как серии диагностикума 1-3, Каждую серию разливают по 2,5 мл во флаконы емкостью 10 мл и подвергают лиофилизации (продолжительность 36 ч, температура нагрева 35 С). Сразу после окончания лиофилизации флаконы перекрывают резиновыми пробками. Готовый диагности10 У (серии 1-3) повторно контролируют на активность в РГА, специфичность и резистентность в РТГА, стерильность. Титр гемагглютининов в готовых сериях диагностикума составляет 1:256,

15 1:128, 1:512.i

Использование вируса А(Киев)3304/84 позволяет более точно по сравнению с вирусами прошлых лет выделения

А()48 и A(PR)8/34 оценивать 20 состояние коллективного иммунитета к вирусам с антигенной формулой A(HONI), способных вызывать спорадические клинические формы заболевания.

25 Формула изобретен.ия

Штамм вируса гриппа А(Киев) 3304/84 -ГКВ № 1979, используемый для приготовления гриппозного диагности- 30 -кума.