Способ получения гриппозного диагностикума Советский патент 1990 года по МПК A61K39/145 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской вирусологии, и может быть использовано в вакцион- но-сывороточном деле, я частности в пр-оизводстве гриппозных диагностику- мов.

Целью изобретения является повышение специфичности целевого продукта.

Способ получения диагностикума заключается в том, что вируссодеркаггую аллантоисную жидкость (ВАЖ) инактиви- руют мертиолятом, а затем обрабатывают кислотой до значений рН среды 5,8-6,0.

Лля заражения куриных эмбрионов используют штамм вируса гриппа В /Ленинград/ 90/86 ГКВ 2125, который выделен в Ленинграде п лаборатории этиологии гриппа ВНИИ гриппа Минздрава СССР в январе 1986 года от больного ребенка 8 лет и пассирован 6 раз в аллантоисной полости куриных эмбрионов.

Морфология. Характеризуется морфологической однородностью частиц, имеющих преимущественно бобовидную форму, длиной 200-250 нм, диаметром 100- 120 нм с наружными шипами гемагглю- тинина и нейраминидазы.

Физические свойства. Коэффициент седиментации 750S,плавучая плотность - 1,21 г/см3.

Антигенная характеристика штамма и широта его антигенного спектра. Штамм вируса гриппа В/Ленинград/90-86 по антигенной структуре подобен вирусу гриппа В/ЭннАрбор/1/86. Штамм В/ Ленинград/90/86 характеризуется гаиСЛ

СО Сл

ел

.Ј

00

315

роким антигенным спектром по отношению к антителам к современным вирусам гриппа В. Интенсивность взаимодействия с антителами еще более повышается после модификации гемагглютини на кислотой,

Репродукционная активность. Инфекционные титры вируса составляют 6-9 lg ЭИД5о|о, мл, титры гемагглютининов от 1:64 до 1:512 b 0,2 мл с 1%-ными куриными эритроцитами.

Пример 1. Куриные эмбрионы заражают 102 ЭЙД 50/о,2 мл вируса гриппа В/Ленинград/90/86. Зараженные ку- риные эмбрионы инкубируют в течение 72 ч при 31,510,5°С. Затем эмбрионы охлаждают в течение 16 ч и в стерильных условиях собирают ВАЖ„ Титр ГА полученной ВАЖ составляет

1:128 о К объединенному сбору ВАЖ добавляют раствор мертиолята (20 г/л) до конечной концентрации 0,2 г/л. Инактивацию вируса проводят в течение 72 ч при 6t2°C. Затем стерильный ра- створ органической кислоты добавляют по каплям к постоянно перемешиваемой ВАЖ до рН среды 5,8-5,9 (из расчета мл 0,1 моль/л органической кислоты на 500 мл ВАЖ).Через 30 мин ин- кубации ВАЖ повторно контролируют рН среды с доведением ее до значений 5,8-5,9. Материал осветляют центрифугированием при 700 g в течение 30 мин.

Влияние рН среды аллантоисной жид кости на стабильность гемагглютинина и частоту диагностирования гриппа В.

Пример 2. Полученный жидкий, полуфабрикат диагностикума контролируют на полноту инактивации инфекци- онности вирус а,титр ГА, специфичность,

JQ

15 20

253Q

35

40

3

антигенные свойства. После этого материал лиофилизнруют в присутствии на- полннтеля. В качестве наполнителя используют подогретую до 56°С смесь желатина (36 г/л) и сахарозы (500 г/л) которую добавляют к полуфабрикату в соотношении 1:9. Лиофилизированный препарат диагностикума сохраняет свою гемагглютипирующую активность (титр ГА 1:128) и является специфичным в отличив от диагностикума, полученного по способу прототипу с

Активность диагностикума из вируса В/Ленинград/90/86 в РТГА проверена при обследовании сывороток переболевших ОРЗ людей в эпидемический и межэпидемический периоды 1986-87 гг. Частота диагностирования гриппа В при использовании диагкостикума из вируса В/Ленинград/90/86 выше, чем со штаммом В/Ленинград/369/75(прототип) в среднем на 5,6%.

Использование предлагаемого диагностикума, обладающего более высокой специфической активностью, способствует своевременному проведению противоэпидемических мероприятий.

Формула изобретения

Способ получения гриппозного диагностикума, включающий заражение куриных эмбрионов штаммом вируса гриппа, их инкубацию, получение вируссодер- жащего материала с последующей его обработкой, отличающийся гем, что, с целью повышения специфичности целевого продукта, используют штамм вируса гриппа ГКВ 2125, а обработку проводят путем добавления кислоты до рН 5,8-6,0.

Таблица 1

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для приготовления гриппозных диагностикумов. Целью изобретения является повышение специфичности диагностического препарата. Способ заключается в том, что куриные эмбрионы заражают штаммом вируса гриппа В /Ленинград/ 90/86, после инактивации вируссодержащей аллантоисной жидкости ее обрабатывают кислотой до рН 5,8 - 6,0. Полуфабрикат осветляют центрифугированием и консервируют. 3 табл.

В скобках приведены данные по сохранению гемагглютини- рующей активности вируса гриппа В/Ленинград/90/86 по отношению к исходной ВАЛ (в %).

Числитель - число сероконверсий к вирусу гриппа В/Ленинград /90/86, знаменатель - число исследованных парных сывороток.

Т б л к и 2

Результаты контроля вируса гриппа В/Леиинград/90/86 я диагностшгуж в, полученных в него по предлагаемому способу и способу-прототипу, на специфичность к чувствительность к ингибиторам

О80160 О

О320 640 О

320640 80

В скобках приведены гомологичные титры .

0000 2040«О20

715355438

Таблица 3

Диагностические свойства антигенно актуального вируса гриппа В/Ленинград/90/86 (модифицированного варианта) в сравнении с диагностическим штаммом В/Ленинград/369/75

В/Ленинград/90/86М - вирус гриппа В/Ленинград/90/86

(модифицированный вариант).

ЛДП - лаборатория диагностических препаратов ВНИИ гриппа,

Составитель О.Жакетов Редактор Л.Лежнина Техред М.Дидык

Заказ 67

Тираж 531

ВШ1ШШ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Корректор М.Максимигаинец

Подписное