Способ индикации антигена Советский патент 1983 года по МПК A61K39/00 

i4

4

vl

с

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности-к серологической диагностике.

Известен способ индикации антигена с помощью реакции торможения пассивной гематлютинации (РТПГА ) с использованием иммунных сывороток и гомологичных антигенных эр 1троцитарных диагностикумов l .

Однако изве стный способ характеризуется недостаточной чувствительностью и не обеспечивает точности определения антигенов, а также еложен в исполнении, так как возникает необходимость строгого предварительного выбора и контроля адекватности минимальной агглютинирующей дозы для каждой иммунной сыворотки.

Цель изобретения - повышение точности (чувствительности и специфичности ) индикации антигена в исследуемом материале.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа путем нейтрализации исследуемого материала набором иммунных сывороток с последующим добавлением диагностикумов, нейтрализацию исследуемого материала осуществляют комплексными сыворотками в разведении 1;50-1:100 а в качестве диагностикума используют комплексный антительный диагностикум.

Способ осуществляется следующим образом..

К последовательным разведениям исследуемой пробы материала .добавляют набор (или комплекс известных иммунных сывороток (в разведении 1:50 или 1:100), смесь выдерживают в течение 30 мин при 18-20°С И затем в нее вносят идентичный по .специфичности иммунным сывороткам антительный (комплексный) эритроцитарный диагностикум. Сущность способа индикации антигена заключается в сочетании однонаправленных (идентичных) по специфичности реагентов (иммунных сывороток и антит-ельных диагностикумов) , а также использования комплексных антительного диагностикума и сыворототк.

Комплексный антительный диагностикум должен содержать антитела к любому из антигенов/ которые могут находиться в исследуемой пробе. Комплексные сыворотки составляют таким образом, чтобы индикация антигенов достаточно большого набора специфичностей могла быть осуществлена в минимальном количестве рядов разведений исследуемой пробы. Сочетание идентичных по сиецифичности реагентов позволяет значитель но повысить чувствительность ре- , акций, основанных на торможении пассивной гемаглютинации, специфичность (за счет взаимного контроля

набора используемых сывороток/, а использование комплексных препаратов позволяет упростить постановку реакции и сократить время получения результатов.

Пример. При лабораторном обследовании на коли -инфекцию проводят поиск антигена ешерихий 6 наиболее распространенных серогрупп в фекалиях больного ребенка

с помощью известного и предлагаемого способов.

По предлагаемому способу готовят 3 одинаковых ряда (вместо Б по известному способуj разведений

исследуемого экстракта фекалий от 1:2 до 1:256 в объеме 0,25 мл. Ко всем разведениям первого ряда добавляют по 0,25 мл смеси сывороток 020, 026, 055. Ко всем разведениям

второго ряда добавляют по 0,25 мл смеси сывороток , 0111 и 0126, Ко всем разведениям третьего ряда добавляют по 0,25 мл смеси сь1вороток 026, 0126 и 0127. Каждая из сывороток в смеси содержится в конечном разведении 1:50 или 1:100. Штативы встряхивают и выдерживают в течение 30 мин при 18-20°С для нейтрализации определяемого антигена. Затем во все лунки трех рядов вносят

по 0,05 мл 2,5%-ного антительного

( например, комплексного, содержащего антитела специфичности 020, 026 055, 011, 0126 и 0127Гэритроцитарного диагностикума. Штативы

.встряхивают и оставляют на 1,5 ч при 18-25°С.

В таблице приведены результаты исследования пробы фекалий.

Результаты реакции по предлагаемому способу учитывают следующим образом. В случае присутствия в исследуемой пробе антигена (в данном примере Е.) во всех рядах разведений пробы с иммунными еыворотками, не содержащими гомоло.гичных антител (в данном примере 026 ), реакция агглютинации после добавления комплексного антительного

эритроцитарного диагностикума положительна в титре, зависящем от количесфва антигена в пробе (в данном примере до 1:64). В рядах, где содержится гомологичная сыворотка

(026),происходит нейтрализация антигена специфическими антителами и после добавления антительного . эритроцитарного диагностикума титр гемагглютинации будет отрицательным. В этом случае результат анализа положительный, т..е. обнаружен антиген (в данном примере E.coEi026 ло разведения 1:64). Если в исследуемой пробе антиген отсутствует, то / во всех рядах отрицательные резульк

таты гемагглютннации, следовательно,.

I результат анализа отрицательный, т.е. антиген не обнаружен. В данном примере, показывающем возможность использования как набора, так и комплекса сывороток, чувствительнЬсть индикации антигена по предлагаемому способу в 8 раз выше, чем по известному. Преимуще.ст вом предлагаемого способа является также возможность проведения анализа в трех (в данном примере) вместо обязательных шести по известному методу, что значительно упрощает проведение анализа. Следует отметить, что при возрастании числа антигенов, подлежащих определению и при массовых обследованиях это преимущество еще более увеличивается. По предлагаемому способу иммунные сыворотки используют в стандартных (1:50 или 1:100) разведениях, а по известному способу требуются два обязательных сложных предварительных этапа - выбор рабочей (4 гемагглютинирующих единицы) дозы каждой сыворотки для каждого диагностикума и кон.троль этой дозы каждым диагностикумом., что усложняет И удлиняет время исследования на 3-3,5.4. Таким образом, предлагаемый способ благодаря сочетанию идентичных по специфичности реагентов (анти- . тельных диагностикумов и набора иммунных сывороток) характеризуется более высокой чувствительностью индикации и специфичностью (за счет взаимного контроля результата при использовании комплекса сывороток) , а также простотой постановки и быстротой получения результата анализа.

СПОСОБ ИНДИКАЦИИ АНТИГЕНА путем нейтрализации исследуемого материала набором иммунных сывороток с последующим добавлением диагностикумов, о тличающийс я тем, что, с целью повышения точности индикации антигена, нейтрализацию исследуемого материала осуществляют комплексными сыворотками в разведении 1:50 - 1:100, а в качестве диагностикума используют один комплексный антительный диагностикум.

020+01H-k 126

020+026+055

026+0126+0127

Антиген

Е обнаружен до разведения исследуемой пробы 1:64