Способ определения лизиса эритроцитов в иммунологических реакциях Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно, к иммунологии.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим образом,

В иммунологических реакциях в качестве индикатора гемолиза используют антительный эритроцитарный диагностикум из сыворотки против гемоглобина, а степень гемолиза оценивают по интенсивности агглютинации диагностикума.

Пример. Определение гемолитической активности стафилококкового с:-токсина. Последовательные разделения токсина готовят в 0,85%-ном растворе хлористого натрия в обьеме 0,5 мл. Затем добавляют в каждую пробирку 1 каплю (0,025 мл) взвеси 5%-ных нативных бараньих эритроцитов. Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем

центрифугируют при 100 об/мин в течение 20 мин, Дозатором берут по 0,05 мл над- осадка и переносят в лунки планшета для иммунологических реакций. В эти и контрольную лунки вносят по 0,025 мл 0,5%-ной взвеси антительного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину барана. Антительный зригроцитарный диагностикум к гемоглобину барана получен сенсибилизацией фиксированных эритроцитов иммунной сывороткой против гемоглобина при помощи амидола. Гемолитическую активность а-токсина характеризуют наибольшим его разведением, при котором в лунках зарегистрирована отчетливая (на 3-4 креста) агглютинация эритроцитарного диагностикума

П р и м е р 2 Определение неполных антител к Toxoplasma gondii в реакции угнетения связывания комплемента. Реакцию ставят микрометодом в планшетах титратоО

ы

pa Такачи. К последовательным разведениям 0,025 мл исследуемых сывороток больных токсоплазмозом добавляют по 0,025 мл антигена токсоплазм в рабочем разведении, затем добавляют по 0,025 мл компле- мента в рабочей дозе и по 0,025 мл иммунной сыворотки кролика к возбудителю токсоплазмоза в дозе 1-2 сывороточные единицы, которые определяют путем предварительного титрования последней с 2 единицами токсоплазменного антигена. Пробы оставляют при 4°С в течение 18-20 ч. После этого во все лунки вносят 0,5 мл гемолитической системы (1,5%-ная взвесь бараньих эритроцитов, сенсибилизированных коммерческой гемолитической сывороткой).

Через 30 мин контакта при 37°С во все лунки вносят по 0,025 мл 0,5% взвеем эрит- роцитарного диагностикума, Реакцию учи- 1 тывали через 1,5-2 ч. За титр исследуемой сыворотки принимают ее наибольшее разведение, в котором наблюдают агглютина- ц1 ио диагностикума.

При исследовании 9 сыворотках средний титр антител к возбудителю токсоплаз- моза составлял 1:496,8 + 2,0.

ПримерЗ. Точность определения антител при помощи РУСК по известному и предлагаемому способам оценили по варьированию результатов тестирования - ко-

эффициенту варьирования, отражающему воспроизводимость метода, Исследовали одну и ту же пробу сыворотки крови больной токсоплазмозом 30 раз каждым способом.

Таким образом, чувствительность предлагаемого способа определения лизиса эритроцитов существенно выше, чем по известному, в реакциях прямого гемолиза увеличение чувствительности составило в 35 раз и угнетения связывания комплемента - в 28 раз. Точность предлагаемого способа не ниже, чем известного, а высокая специфичность обеспечивает надежность диагностического использования. Это открывает новые возможности определения агентов с небольшой гемолитической активностью и неполных (не связывающих комплемент) антител.

Формула изобретения Способ определения лизиса эритроцитов в иммунологических реакциях путем добавления эритроцитов в опытную пробу с последующей регистрацией гемолиза, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, после добавления эритроцитов в пробу вносят эритроцитар- ный антительный диагностикум к гемоглобину эритроцитов барана, а регистрацию гемолиза проводят по агглютинации диагностикума.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения - повышение чувствительности иммунологических реакций - (например, реакций связывания комплемента и определения гемолиза), сопровождающихся лизисом эритроцитов барана. После проведения исследования в каждую лунку добавляют 0,5%-ную известь антительного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину эритроцитов барана. Специфическую активность в иммунологических реакциях определяют по агглютинации диагностикума. Чувствительность реакции при этом возрастает по сравнению с прототипом в реакции угнетения связывания комплемента в 28 раз, а в реакциях прямого гемолиза в 35 раз.