Способ определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов Советский патент 1984 года по МПК A61K39/00 

4:;

сл

со

Изобретение относится к медицине в частности к общей и прикладной ими нологии.

Известен способ определения антител в сыворотке крови путем предварительной адсорбии антител специфическим .антигеном с последующей постановкой реакции гемагглютинации, по снижению титра антител определяют наличие антител в исследуемой сыворотке ij .

Однако способ недостаточно точен для определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов.

Известен способ определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов , включающий добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке с последующим добавлением антисыворотки к иммуноглобулинам определенного класса 2J .

Однако известный способ недоста- точно специфичен,

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа, включающего добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к Исследуемой сыворотке, антигенный эритроцитарный диагностикум добавляют после предварительной обработки исследуемой сыворотки антиглобулиновыми сыворотками-, прогретыми в течение ,15 мин при .

j Способ осуществляется следующим образ ом.

Делают четыре одинаковых ряда последовательных разведений исследуемой сыворотки. Во все лунки первого ряда вносит равный или двойной (3 микротитраторах) объем анти-itfA сыворотки, во все лунки второго ряда - анти-1 сыворотки, в третий ряд - анти-Igri сыворотки и в четвертый - 0,85%-й раствор ЫаС1 (контрольный ряд). После 30-40-мннутной экспозиции во все лунки добавляют эритроцитарный .антигенный диагностикум.. Вносимые антиглобулиновые сыворотки связывают иммуноглобулины соответствующего класса в исследуемой сыворотке. Следовательно, задержку или полное отсутствие агглютинации диагностикума в одном из трех рядов по сравнению с контролем и двумя остальными рядами, содержащими антиглобулиновые сыворотки, указывает на принадлежность определяемых в исследуемой сыворотже антител к иммуноглобулинам именно этого,класса.

Пример. С. помощью предлагаемого способа и реакции Кумбса исследовали сыворотки больных дизентерией (специфичности Зонне) в стадии острого и хронического заболевания.

По предлагаемому способу готовили по четыре одинаковых ряда исследуемых сывороток с разведения 1:10 в объеме 0,025 мл (1 капля) и добавляли по 0,05 мл во все лунки первых рядов предварительно прогретую при в течение 15 мин разведенную 1:10 кроличью сыворотку против иммуноглобулинов класса А1 во все лунки вторых рядов - также обработанную кроличью сыворотку против иммуноглобулинов класса С, во все лунки третьих рядов - против иммуноглобулинов классу М. В четвертые ряды вносили по 2 капли 0,85%-го раствора NaCl; После 40-минутной экспозиции во все лунки разведений исследуемых сывороток добавляли по 1 ,капле (0,025 мл) антигенного эритроцитарного диагностикума Зонне. Учет реакции проводили через 1,5 ч. Полученные результаты отражены в табл. 1 и 2.

По значительному снижению титра РПГА в результате предварительной обработки сыворотки больного ост-. рой дизентерией анти-Ij M сывороткой (в 8 ра:%) или сыворотки хронического больного анти-IgG сывороткой (в 4 раза ) по сравнению с контролем слеследует отнести определяемые антитела в одном случае к Ig-M, а в другом - к , Результаты реакции кумбса при обследовании сыворотки острого больного совпадают с данными предлагаемого способа, а при обследовании сыворотки хронического больного оказались отрицательными.

Предлагаемый способ является чувствительной (результативной) реакцией обнаружения специфических антител определенного класса иммуноглобулинов, что важно в диференциальной диагностике хронического и острого заболевания.

Повышение температуры прогревания антиглобулиновой сыворотки предназначено для повышения специфичности нейтрализации определенного класса антител в исследуемой сыворотке, за счет разрушения инактивации i.t-антител в антисыворотке. Известно, Что неспицифические результаты, в основном связаны с антителат ш .

В табл. 3 приведены данные определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов по предлагаемому способу с использованием прогретых в разных условиях к непрогретых антисывороток.

Как видно, непрогретые или недостаточно прогретые антиглобулиновые сыворотки неспицифически нейтрали5 зуют антитела.и других классов, что

затрудняет трактовку результатов. Только инактивация 1 М-антител в определенных режимах обработки антйглобулиновой сыворотки позволяет четко определять принадлежность антител к определенному классу в исследуемой сыворотке. Дальнейшее повьашение температуры прогревания .(выше ) инактивирует в антиглобулиновой сыворотке антитела всех классов, что делает невозможным осуществление способа.

Таким образом, предлагаемый способ благодаря использованию прогретых антиглобулиновых сывороток позволяет с большой разрешающей способностью .определять принадлежность антител в широком диапазоне разведений исследуемой сыворотки к иммуноглобулинам любого класса, в то время как по известному способу определение антител провоу ят лишь в

разведениях, где отмечены отрицатель ные результаты РПГА (для предот- . вращения спонтанной агглютинации диагностикума). Это обстоятельство значительно снижает диагностические 5 возможности (разрешающую способности известного метоДа, так как в таких разведениях исследуемой сыврротки может оказаться слишком мало антител, присоединившихся к диагностику0му. Кроме того, известный метод поз воляет определять антитела только одного класса (имеющих наибольший титр). По предлагаемому способу возможно определение антител одно5временно нескольких классов Преимуществом предлагаемого способа является также то, что он значительно более прост в исполнении и позволяет получать результаты в 2т

0

2,5 pasa , чем известный,. ,

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ АНТИТЕЛ К КЛАССУ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ, включающий добавление антигенного эритррцитарного диагностику ма к исследуемой сыворотке, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфи1ности, антигенный эритроцитарный диагностикум добавляют после предварительной обработкиисследуе мой сыворотки прогретыми ано гяобуЛИНОВЫМИ СЫВОрОТКс1МИ . 2. Способ по п. 1, о тли ч а ю щ и И с я тем, что антиглобуянновые сялворотки прогревают при в течение 15 мин.

Отри- Отри1:640цатель- цательныйный

Предла

1:40

Гаемый 1:320 1:320 в При м еч а н и

Таблица 1

Отри- Отрицатель-цатеяьный ный

1:120

1:120

1г320 1:120 1:30 л е: разведение исследуемой сыворотки, которое еще содержало антитела Ig-M, адсорбируемые диагностикумом; . -титр РПГА с исследуемой сывороткой после обра ботки антяглобулиновыми сыворотками или 0,85%-м раствором NaCl,

..Таблица 2