Способ получения аденозин-5-монофосфата Советский патент 1983 года по МПК A61K35/60 C07H19/20 

Изобретение относится, к биохимии в частности к способу получения сое динений из природных источников, и может быть использовано в медицин и биохимии, Известен способ получения аденозин-5-монофосфата (Ah5P) из мышц кр ликов, в котором после охлаждения мышц осуществляют экстракцию трихло уксусной кислотой .и. фильтрован11е экстракта, при рН 8 осаждают аденозин-3-фосфат,(АТР) с помощью хлорис того кальция. Монокальциевую соль АТР растворяют и гидролизуют до AMP с помощью предварительно полученног фермента картофельной апиразы.Из гкдролизата AMP осаждают в виде ацетат ртути, который в последующих операциях растворяют в серной кислоте, пропускают сероводо&од. Осадок сульфида ртути отфильтровывают, а из фильтрата после очистки осаждают AMP с помощью ацетона ij . Недостатками данного способа являются использование фермента картофельной апиразы, получение кот рого требует осуществления дополнительной технологии, многостадийность процесса получения AMP, применение ядовитых веществ: трихлоруксусной кислоты, солей ртути и сет роводорода, использование дефицитных источников сырья: мышцы кролико или говяжьего мяса. Известен также способ получения аденозин-5 -монофосфата из мьпцц рыб включающий двухкратную-водную экстракцию, отделение балластных белков фильтрование, сорбцию на смоле, БАК с последующей сорбциейаденозиндифосфата и аденозинмонофосфата на смоле АРО с элюцией соляной кислотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом рЗ , -Однако известный способ не обеспечивает вьвделения целевого продукта достаточной чистоты, поскольку н позволяет получить целевой продукт в чистом виде, а технологический процесс является продолжительным. .Цель изобретения - упрощение спо соба и повышение чистоты целевого продукта. Поставленная цель достигается те что согласно способу получения аденозин-5-монофосфата из мышц рыб включающему экстракцию сырья водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией соляной кислотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом, предваритель но проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а-после элюции соляной кислотой фракцию, содержащую аденозин-S -монофосфат, дополнитель но пропускают через активированный уголь, из которого элюируют целевой продукт раствором под1целоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждёиот целевой продукт охлаждением раствора и после промывания спиртом осадок высушивают. При этом, элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт:вода:аммиакч 25:(22i 24) : (1:3) , Упаривание осуществляют до IS-izO ного содержания целевого продукта, Подкисление проводят 10-15%-ной соляной кислотой до рН 1,75-1,85, Охлаждение .проводят при 1-4° С. Пример, 1 кг мышц рыбы минтай измельчают, обрабатывают 1 л 8%-ной на протяжении часа при помешивании. Отжимают через ткань,. Осадок повторно обрабатывают 1 л дистиллированной воды на п{3отяжении часа. Фильтраты объединяют, фильтруют через бумажную пульпу до прозрачного состояния и пропускают через колонку, с аниони-том ЭДЭ-ЮП с зернением 0,25-0,5 мм со скоростью 0,7 мл/мин/см сечения колонки, затем промывают водой и элюируют аденозин-5-монофосфат (5-AMP) с помощью 0,01 н неб. Кислые фракции, содержащие 5 -AMP, объединяю.т и пропускают через колонку, заполненную дополнительно активированным углем АГ-4 ( размер зерен 0,25-0,5 мм) из расчета, что 1 г угля сорбирует 80 мг , После промывки колонки водой проводят десорбцию 5 -AMP с помощью подщелоченного раствора спирта в соотношении спирт:вода:аммиак 25:24:1. Фракции, содержащие 5-АМР, объединяют, упаривают под вакуумом при С до 15% содержания основного продукта, . Раствор подкисляют 10%-ной НС до рН 1,75, и при охлаждении до С . выпадает в осадок. Осадок дважды промывают этиловым спиртом, высушивают в эксикаторе над прокаленным хлористым кальцием. Выход 100 мг препарата 5-AMP, Пример 2. 1 кг- мышц рыбы .минтай обрабатывают, как и в .приме- . ре 1, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см через анионит ЭДЭ-10П, который предварительно переводят в ацетатную форму прюпусканием 5%-ной СНзСООН. Элюируют 5 -AMP 0,05 н ней. Кислые фракции, содержащие , объеда няют и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГ-4 из расчета, что -1 г угля сорбирует 75 мг 5-АМР. После промывки колонки водой пррводят десорбцию 5-AMP-с помощью подщелоченного раствора спирта в соот- . ношении спирт:вода:аммиак 25.:23:2, Фракции, содержащие 5 -AMP объединяют, упаривают под вакуумом при 48 С до 18% содержания основного продукта. Раствор подкисляют 12%-ной

неб до 1,, 8 f и при охлаждении до +2 С AMP выпадает в осадок, который дважды промывают этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием. Выход 110 мг препарата. .

П р и м е р 3. 1 кг рыбы навага обрабатывают, как в примере 1, и экстракт пропускают через анионит ЭДЭ-10П со скоростью 1 1 п/мин/см сечения колонки, элюируют с помощью 0,1 н НС. Кислые фракции, содержащие объединяют, определяют содержание AMP и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГ-4 из расчета, что 1 г угля сорбирует 70 мг 5 -AMP.После промывки колонки водой проводят десорбцию раст;вором подщелоченного спирта в соот.-«ошении спирт вода:аммиак 25:22:3. Фракции, содержащие 5--AMP, упаривают под вакуумом при 49 С до 20% содержания основного, продукта. Раствор подкисляют 15%-ной НС8 до рН,1,8 и при охлаждении до +1 С AMP выпадает в осадок, который после двойной промывки этиловым спиртом высушивают jg эксикаторе над прокаленг,, ным хлористым кальцием. Выход 120 мг препарата 5 -AMP.

П р и м е р 4. 1 кг мышц рыбы

илвага обрабатывают, как, в приме-ре Г, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см пбперечного сечения колонки через анионит

ЭДЭ-10П, который предварительно пер« :водят в ацетатную форму пропусканием 5%-ной CHgCOOH. Элюируют 5-АМР 0,05. н HGf . Кислые фракции,, содержащие 5-AMP, объединяют, и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГ-4 из.расчета, что 1 г угля сорбирует .75 мг 5-AMP. После „промывки колонки водой прово дят десорбцию с помощью

0 i подщелоченного раствора этилового ; спирта в соотношении 96%-ный этиловый спирт:вода:25%-ный аммиак 25:23:2. .

Фракции, содержащие 5-AMP объеди5няют, упаривают под вакуумом при 48 С до 18% содержания основного продукта. Раствор подкисляют 12%-ной НС8 до рН 1,8, и при охлаждении до +2 С AMP выпадает.в осадок,

0 который дважды промывают 96 этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием. Выход 110 мг препарата AMP.

Предложенный способ обеспечивает

5 упрощение технологического процесса за счет исключения дефицитных реагентов ферментов и смол, а также .сокращения времени проведения технологического процесса, получение

0 высакоочищенного препарата 5 -AMP, который может применяться при лечении хроническойкоронарной недостаточности, атеросклеротическом кардиосклерозе и других заболеваниях.

1.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН-5 - МОНОФОСФАТА из мышц рыб, включающий экстракцию сырья водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией соляной кислот,ой, осаждением и проксяванием целевого продукта спиртом, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения чистоты целевого продукта, предварительно проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а после элюции соляной кислотой фракцию, содержащую адвнозин5 -монофосфат, дополннтильно пропускают через активированный уголь, из которого элюируют Целевой продукт раствором подщелоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывания cnhpTOM осадок высушивают. 2.Способ ПОП.1, отличающийся тем, что элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт I вода: аммиак 25: ( 22-24) :