Способ определения фунгицида каптана Советский патент 1985 года по МПК C12N1/00 

kvl

ел

ч1

00

1 Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и защиты растег ий, в частности к способам определения пестицидов. Фунгицид каптан (М(трихлормет1-1лтио)-циклогексен-г1дикарбоксимид является одним из препаратов, часто используемых для борьбы с фитопатогelп ьiми микроорганизмами путем обра ;ботки им семян и опрысклвагшя вегетирующих р астeiiHji. Определение остаточпг гх количеств каптааа в различных объектах окружа щей среды и в частях растений имеет большое значение дня выяснения ряда вопросов его применения. Существуют различные способы определения каитана, заключающшся в подхотовке образцов; предваритель ной экстракции каптана органическими растворителя1--а1 и последующем опр делен п-1 каптана метода.1И колориметрии Tj. Способ В1счючает, как уже было ук зано, предварительную экстракцию калгана оргапичс-ским растворителем, что обусловливает вЕ) стоимость апа.. Кроме того, для работы требуется дорогостоящая аппаратура. 1звестен также способ определспии биологически активных пещестн с помощью тест-организмои 2Т. Для этого устанавливают зависимость угнетения развит 1я одноклеточных организмов от концентрации токсическо го вещества. Недостатком этого спос ба является невозможность использования его для определения фунгицида каптана. Целью изобретения является упрощение определения содержании (|jyHгицида. Это достигается тем, что исследуемый материал помещают на поверхность твердо) питатслтию среды, за сея1пюй двухсуточной культурой Saccharomyces cerevisiae, инкубируют в термостате при 25-2/ С в течение 20-28 ч, а aiiajnia проводяу по зонам угпетения роста дроижей вокруг обрг1зцов. Подготовка культуры Saccharomyce cerevisiae. Saccharomyces cerevisia выращивают в пробирках па скоиюнном сусло-агаре в термостате при 2527 С в течение 2 суток и далее хранят при комнатной температуре. Через каждые 20-30 дней производят 4 пересевы культуры. В пред/гагаемом способе используют 2-х суточную культуру. , 71одготовка питательной среды. В работе используют минеральную среду Риде11а след ощего состава, %: сахароза 2,0; (МН,,) SO,, 0,3; MgSO,, О, 07 I NaC,l, 0,05; CaCNOj) 0, KH,PO,, 0,1 KjHPO 0,01; дрожжепо 1 экстракт 0,01; агар-агар 0,8. Среду стерилизуют в автоклаве 20 мин . .при. дазлен1-н-1 1 ати. Подготовка материала к анализу. Семена растений, протравленные фунгьп.идом, отбирают из средней пробы и без стерилизации переносят п чаипси Петри на поверхность среды Ридера, засеянно: культу1 о) Saccliarorayces cerevisiae. Из листьев вы-резают диски дтгаметром 10-20 M-, которые немедленно нак:ьад ;шают на поверхность среды Ридера, слегка прижимая их к агару. Построение стандартно кривой, BeiMia 1П11енип,ы протравливают каитгиюм 1з форме порошка с таким расчетом, чтобы на а;чт;ое зерно прихо/п- лось 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,,0;| 16,0 мкг каптана, и раскладывают в чашки Петри па пове 5хность агаризова1И1ой среды Ридера, засеяпной культурой Saccharomyces cerevisiae. Чашкп выде лсивают при 27 С в течение 24 ч. Затем стро.чт г)афик,. где на оси ординат от1;ладыва ст количество каптана, а на оси абсцпсс величину стер;1льной т.; Аналогично строят стандартную крпвую для определения каптана в листьях и других вегетатгпзиых частях pacTeHijii. В этоь; случае теже возl acTaFjuqie концентрации каптаиа naiioсят на диски фIiJПJTpo 5aльнoйбумаги диаметром 10 мм. Ход анализа. Двухсут()Ч1;ую культуру Saccharomyces cerevisiae в пробирках на скоше1П1ом сусло-агаре c :ывaют стерштьной водой и разводят в 100 мл 1 мп суспензип дролокей, вносят в 250 ьш расплавленно и охлажденной до 40 50 С агаризованной среды Ридера, Среду тщательно перемешивают и разливают по 10 мл ц чашки Петри. После застывания на поверхность среды раскладывают исследуеьшй материал, Чашки и}1кубируют при 25-27 С в течение 20-28 ч. После этого измеряют диаметр стерильных ,зон вокруг иссле дуемого материала. Затем определяют количество каптана с помощью стандартной кривой. П р -и м е р 1. Семена пшеницы непосрздственно после обработки кап танЬм, а также спустя различные сро ки после обработки раскладывают на поверхность агаризованной среды Ридера, засеянной Saccharomycas cerev siae. Через 24 ч инкубации в кажуЧой чашке определяют величину стерильной зоны вокруг семян и определяют количество каптана по стандартной кривой. Результаты показывают, что, как об этом свидетельствуют и другие методы, каптан -сохраняется на семенах более 17 месяцев, однако количество его уменьшается приблизи тельно в 6 раз, что также хорошо согласуется с да1П1ыми других исследователей, полуг1енными с использова нием известных способов. Пример 2. Диски, вырезанны из листьев картофеля, обработанного каптаном, непосредственно после обработки, а также спустя различные сроки после обработки, раскладывают так же, как и в примере 1. Через 24 ч инкубации при 27 С определяют величину стерильной зоны вокруг дисков и определяют количество каптана с помощью стандартнойкривой. Результаты показывают, что кантан удерживается на листьях практически в течение всего вегетационного периода, причем на листьях нижних ярусов его стабильность вдвое выше, чем на верхних, что согласуется с данны ми других исследователей, полученными с использованием известных способов. В молодых, вновь отрастающих листьях каптан не обнаруживается Чувствительность метода составляет 1-2 мкг в пробе. Стандартная ошибка измерений не вьше 10%. Пример 3. Определение каптана на листьях картофеля. В вегетационных опытах растения картофеля опрыскивают водной суспензией препарата каптана из расчета 1,5 кг/га. Спустя определенное время после обработки из листовой пластинки картофеля верхнего н нижнего ярусов пробочником вырезают диски диаметром 10 мм. Диски раскладывают на поверхность агаризованной питательной среды, засеянной S.cerevisiae. Через 20-24 ч измеряют ве/н1чину стерильной зоны вокруг дисков. Концентрацию каптана рассчитывают по стандартной кривой. Результаты измерений и расчеты содержания каптана на листьях представлены в таблице. Из данных таблицы В1ЗДно, что способ позволяет определять ничтожно малые количества каптата в образцах

СПОСОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНГИЦИДА КАПТАНА в биообъектах, включаю- щий воздействие образцов материала, содержащего каптан, на тест-организмы, с последующим анализом, отличающийся тем, что, с целью упрощения определения, исследуемый материал помещают на поверхность твердой питательной среды, засеяннбй двухсуточной культурой Saccharomyces .cerevisiae, инкубируют в термостате при 25-27С в течение 20-28 ч, а . анализ проводят по зонам угнетения ростя дрожжей вокруг образцов.