Способ консервирования дрожжей вида @ и @ Советский патент 1984 года по МПК A01N1/02 C12N1/04 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к криоконсервированию дрожжей, которые находят широкое применение в хлебно-пекарно и пивном производстве. Известен способ низкотемпературного консервирования микроорганизмо с помощью защитной средьц содержаще 10-50% глицерина, 5-20% сахарозы и 10% буфера 1, Однако данный способ не обеспечивает высокой жизнеспособности клеток Saccharomyces cervisiae и Saccharomyces telluris TaK как при наличии в защитной среде лимоннокислого натрия и при неконтролируемой скорости охлаждения жизнеспособ ность клеток Saccharomyces cervisiae и Saccharomyces telluris снижается . Известен способ консервирования дрожжей путем криогенного, замораживания в защитной среде, содержащей кукурузный экстракт, дрожжевой экстракт, пептон, телячью сыворотку диметилсулъфоксид и воду.Замораживание в жидком азоте ведут по одноэтапной программе со средней скоростью охлаждения 350 С в минуту 2 Недостатком известного способа консервирования дрожжей является то что одноэтапное охлаждение в жидком азоте со скоростью /-350 С в минуту обеспечивает более низкуто выживае месть дрожжевых клеток, а в состав среды консервирования помимо пе,птона и дрожжевого экстракта входят ещ кукурузный экстракт, телячья сыворотка и диметилсульфоксидэ которые являются малодоступными и дорогими Цель изобретения повьппение /кизне способности криоконсервированных клеток Saccharomyces cervisiae я Saccharomyces telluris У-71 , Поставленная цель достигается тем, что согласно способу консервирования дрожжей Saccharomyces cervisiae и Saccharomyces te11uri yпутем криогенного замораживания в защитной среде, содержащей экстракт пептон и воду, замораживание проводят два этапа,на первом из которых - в ин тервале температур от 15-20 до (-15)-(-20)°С со скоростью 0,020, в минуту, на втором этапе до температуры криогенной жидкости со скоростью 2-3°С в минуту, а защ ная среда дополнительно содержит глюкозу. Способ осуществляю. следующим образом. Клеточную суспензию с концентрацией клеток 10 мл в ростовой среде в объеме 1,5 мл вносят в полиэтиленовые ампулЫэ после ч&го ампулы запаивают и замораживают по двухэтапной программе со скоростью ,2 С в минуту: на пегшом этапе в интервале тамператур от 15-20 до (-15)-(-20)С и на втором этапе со скоростью 2-3°С в минуту в интервале температур от (-15)-(-20) до -196°С. Отогревают образец на водяной бане при 28-30°С. П р и м е р.1. Образцы клеток Saccharomyces cervisiae раса 13 в объеме 1,5 мл в среде (10 г пептона. 5 г дрожжевого экстракта, 20 г глюкозы., воды 1 л) с исходной концентрацией клеток (1 ,68-ьО, Зб7)х10 клеток/мл охлажда от от 2X3 до со скоростью 0,02 С в минуту, и на втором этапе охлаждают от -15 до -196 С со скоростью в минуту. После хра}Нения в жидком азоте в течение одного года образцы отогревают на водяной бане при 28°С. Оценку качества клеток Saccharomyces cervisiae раса 13 проводят по количеству жизнеспособных клеток в образцах, определяемом чашечным методом. Количество жиз неспособны.х клеток Saccharomyces cervisiae раса 13 после хранения в течение одного года составляет (1,6720+ ± О,1349)х10 клеток/мл ,т.е. 99,5% жизнеспособных клеток. П р и м; е р 2. Образцы клеток Saccharomyces telluris Y-7 в объеме 1,5 мл в среде5состоящей из Югпептона, 5 г дрожжевого экстракта, 20 г глюкозы, воды 1 л, с исходной концентрацией клеток (0,6925+0,0213)40® клеток/мл охлаждают со скоростью 0, в минуту в интервале температур от 20 до -15 С и на втором этапе со скоростью ЗС; 3 минуту в интервале 15 до 196°С, ператур от После хранения в жидком азоте в течение одного года образцы отогревают на водяной бане при . Оценку качества клегок Saccharoyces telluris Y-71 проводят по количеству жизнеспособных клеток в образцах, определяемом чашечным метоом. Количество жизнеспособных клеток Saccharomyces telluris Y-71 поел хранения в течение одного года составляет (0,6900 + в,0209)«10 клеток/мл, т.е. 99,8%. Охлаждение по такой программе приводит к повьшению количества жиз неспособных клеток в среднем на 40% Сравнительные данные приведены в таблице. Сравнительные данные о выживаемости дрожжевых клеток, консервированных по известному и предлагаемому способам « 34 Предлагаемый также состав среды консервирования (пептон, дрожжевой экстракт, глюкоза и вода), который является одним из вариантов ростовой среды для дрожжей, позволяет избежать процесса отмывания клеток на подготовительном этапе процесса криоконсер- , вирования, что обеспечивает более надежный режим стерильности.

СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ДРОЖЖЕЙ ВИДА SACCHAROMYCES CERVISIAE и SACCHAROMYCES TELLURIS Y-71 путем криогенного замораживания в защитной среде,; содержащей дрожжевой экстракт, пептон и воду, отлич.ающийся тем, что, х: целью пбвьшения жизнеспособности клеток, замораживание проводят в два этапа, на первом из которых в интервале температур от 15-20 до (-15)-(-20)°С со скоростью 0,020,2°С в 1 мин, на втором этапе - до температуры криогенной жидкости со скоростью 2-3°С в 1 мин, а защитная i среда дополнительно содержит глюкозу. (Л