N-(3,3-ДИФЕНИЛ- 2-ПРОПЕНИЛ)-N- (1-МЕТИЛ-2-ФЕНИЛ)ЭТИЛ-1- β -D-ГЛЮКОПИРАНОЗИЛАМИН, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИДЕПРЕССИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Советский патент 1995 года по МПК C07H5/06 A61K31/35 

Предлагается новое биологически активное химическое соединение N-(3,3-дифенил-2-пропенил)-N-(1-метил-2-фенил)эт-ил-1-β-D-глюкопиранозиламин формулы
CH₂CH C обладающее антидепрессивным действием.

Целью изобретения является новое химическое вещество, обладающее иным, чем структурные аналоги, спектром биологической активности.

П р и м е р. N-(3,3-Дифенил-2-пропенил)-N-(1-метил-2-фенил)этил-1- β-D-глюкопиранозиламин (соединение I).

К 32,7 г (0,1 моль) нагретого на водяной бане N-(1-метил-2-фенил)этил-N-(3,3-дифенил-2-пропенил)амина прибавляют 9 г (0,05 моль) α-D-глюкозы, 3 мл воды и при энергичном перемешивании продолжают нагревание смеси на кипящей водяной бане 1,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры к реакционной массе добавляют 20 мл метилового спирта и выдерживают ее при 0-2^оС. Выпавшие кристаллы отсасывают, фильтр промывают 20 мл холодного этилового спирта, 50 мл абсолютного эфира и высушивают в вакуум-эксикаторе над фосфорным ангидридом. Выход 22,9 г (93,7%), т.пл. 154^оС (метиловый спирт), [α]_D²⁰ +42,2^о (этанол вода, 1:4).

Тонкослойная хроматография на "Силуфоле UV= 254", проявитель пары йода: R_f 0,68 (метиловый спирт вода, 4:1); 0,25 (бутанол уксусная кислота вода, 4: 1:1).

Найдено, С 73,59; Н 6,85; N 2,83.

C₃₀H₃₅NO₅
Вычислено C 73,60; H 7,21; N 2,86
ИК-спектр, ν, см^-1: 3200-3400 (О-Н_{ассоциир}); 1620 (С=С); 950 (С-О-С); 850 [С₁-Н, β-форма]
Тетраацетат: т.пл. 102-103^оС (этиловый спирт), R_f 0,3 (бензол-ацетон, 4: 1).

ПМР-спектр (в четыреххлористом углероде), δ, м.д. 0,7, д (3Н, СН₃-СH); 1,8, с (12Н, 4СН₃СО); 3,7-4,3, м (2Н, СН₂ОАс и 1Н, С₅-Н); 5,0, м (3Н, С_2-4 -Н); 5,4, т (1Н, НС=С), 6,0, д (1Н, С₁-Н, β-форма).

Изучают влияние соединения I и хлорида лития на активность моноаминоксидазы (МАО) мозга крысы (150-180 г) в опытах in vitro и in vivo.

Используют беспородные животные обоего пола: 100 белых крыс и 130 белых мышей.

N-(3,3-Дифенил-2-пропенил)-N-(1-метил -2-фенил)этил-1-β-D-глюкопиранозиламин представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха, растворимое в воде.

В опытах in vitro источником МАО служат 50%-ные гомогенаты мозга крыс. Реакционная смесь содержит 0,2 мл гомогената, 0,18 мл раствора исследуемого вещества, 0,18-0,20 мл раствора субстрата. Объем проб доводят до 1,8 мл калийнатрийфосфатным буфером (0,1 М, рН 7,4). Субстраты: серотонин (5-ОТ), креатининсульфат (5 ˙ 10^-3 М) и норадреналин (НА) гидротартрат (1 ˙ 10^-2 М), добавляют к пробам после 30-минутной преинкубации фермента с исследуемым веществом при комнатной температуре. Инкубацию проб проводят 45 мин при 37^оС в атмосфере кислорода. Реакцию останавливают добавлением 0,2 мл трихлоруксусной кислоты. Белки осаждают центрифугированием (10 мин, 3000 об/мин). Об интенсивности дезаминирования судят по количеству аммиака, определяемого в безбелковой надосадочной жидкости методом изотермической перегонки по Конвею с последующей несслеризацией и фотометрированием.

В опытах in vitro (см.табл.1) соединение 1 и хлорид лития в концентрациях 0,1 и 1 мкмоль/мл пробы усиливают дезаминирование 5-ОТ.

Повышение дозы хлорида лития до 5 мкмоль/мл приводит к исчезновению его активирующего действия. Соединение 1 в этой дозе все еще активирует дезаминирование 5-ОТ. Соединение 1 в концентрации 1 мкмоль/мл тормозит дезаминирование НА на 37% (Р <0,02), а хлорид лития не оказывает достоверного влияния.

В опытах in vivo соединение 1 и хлорид лития вводят крысам в дозах 50-200 мг/кг подкожно за 1 и 3 ч до декапитации. Каждую дозу испытывают на 5-6 крысах. Контрольные животные получают физиологический раствор. Мозг каждого животного гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе с равным объемом 2,5% -ного раствора детергента аркопал. Активность МАО определяют в полученных 50% -ных гомогенатах. Условия инкубации, фиксации проб и определения аммиака те же, что и в опытах in vitro. Содержание белка в гомогенатах определяют по методу Кьельдаля, активность МАО выражают в мкмоль аммиака на 1 мг белка. Результаты опытов обрабатывают статистически по Стьюденту-Фишеру.

В опытах in vitro через 1 ч после введения крысам соединение 1 в дозе 100 мг/кг (1/30 максимально переносимой дозы МПД) повышает дезаминирование 5-ОТ на 51% через 3 ч действие препарата выражается слабо. В дозе 200 мг/кг (1/15 МПД) соединение 1 усиливает дезаминирование 5-ОТ в течение 3 ч (см. табл.2).

Хлорид лития в дозе 100 мг/кг (1/6 МПД) через 1 ч активирует дезаминирование 5-ОТ на 40% через 3 ч действие статистически недостоверно (см. табл. 2). Соединение 1 и хлорид лития в дозах 100-200 мг/кг ингибируют распад НА на 40-42%
Соединение 1, судя по МПД, в 5 раз менее токсично, чем хлорид лития. В дозе. равной 1/15 МПД, соединение 1 активирует дезаминирование 5-ОТ в течение 3 ч. Хлорид лития в дозе 1/12 МПД не оказывает достоверного активирующего действия (см. табл.2), т.е. по широте терапевтического действия соединение 1 превосходит хлорид лития.

Острую токсичность соединения 1 и хлорида лития изучают на белых мышах (18-20 г) при их внутрибрюшинном введении. ЛД₅₀ высчитывают по методу Литчфилда и Уилкоксона.

Для хлорида лития ЛД₅₀ составляет 860 (695-1110) мг/кг, а максимально переносимая доза (МПД 600 мг/кг. МПД соединения 1 3000 мг/кг.

Таким образом, N-(3,3-дифенил-2-пропенил)-N-(1-метил-2-фенил)этил-1- β-D-глюкопиранозиламин обладает избирательным активирующим действием на МАО мозга крыс и по силе и продолжительности действия на дезаминирование 5-ОТ превосходит хлорид лития. Существенным преимуществом соединения 1 является его низкая токсичность.

Биологическую активность N-(3,3-дифенил-2-пропенил)-N-(1-метил-2-фенил)этил-1-β-D-глюкопиранозиламина (соединение 1) и хлорида лития исследуют в опытах на крысах (массой 150-180 г) и мышах (массой 19-21 г) обоего пола при подкожном введении в дозах 100-200 мг/кг. В каждую группу берут по 6-8 крыс или 10 мышей. Угнетение спонтанной двигательной активности крыс оценивают в баллах по Cohen и Nelson.

Наличие каталепсии определяют, используя следующие тесты: удерживание на перекладинах, расположенных на высоте 2 и 9 см, а также на параллельных брусьях, находящихся друг над другом на расстоянии 14 см, в течение 10 с, удерживание неподвижно на вертикальной сетке в течение 20 с, а также на четырех пробках.

О повышении тактильной чувствительности судят по реакции животных на легкое прикосновение к туловищу: по вздрагиванию, двигательному возбуждению, вокализации (взвизгиванию).

Для изучения влияния на групповую фенаминовую токсичность соединение 1 и хлорид лития вводят подкожно мышам в дозах 100-200 мг/кг за 1 ч до внутрибрюшинной инъекцией фенамина (50 мг/кг). Животных группируют по 10 в клетке. Контрольным животным до фенамина вводят физиологический раствор. На каждую дозу используют 20 мышей. Через 24 ч отмечают число животных, погибших в контрольной и подопытных группах. Полученные результаты обрабатывают статистически методом "Х квадрат".

Соединение 1, введенное крысам в дозе 100 мг/кг, вызывает угнетение спонтанной двигательной активности (0,5 балла), каталепсию на перекладинах, расположенных на высоте 3 и 9 см, и сетке у 50% животных и повышение тактильной чувствительности. Все эффекты развиваются через 1 ч после инъекции соединения 1 и наблюдаются в течение 5 ч. По мере повышения дозы соединения 1 интенсивность и продолжительность каталептического действия возрастают. Так, при дозе 200 мг/кг соединение 1 вызывает каталепсию у 75% животных в течение 24 ч.

Хлорид лития, введенный крысам в дозе 50 и 100 мг/кг, вызывает угнетение спонтанной двигательной активности (0,5 балла) и повышение тактильной чувствительности в течение 5 ч. Каталепсия на перекладинах, расположенных на высоте 3 и 9 см, у 40% животных наблюдается только после введения хлорида лития в дозе 100 мг/кг.

Известно, что соли лития тормозят фенаминовую групповую токсичность. В условиях проводимых исследований в группе мышей, получивших физиологический раствор, введение фенамина в дозе 50 мг/кг приводит к гибели 85% животных. Соединение 1, введенное за 1 ч до инъекции фенамина, вызывает значительное понижение процента смертности животных, получивших фенамин.

Влияние соединения 1 и хлорида лития на токсичность фенамина у сгруппированных мышей показано в табл.3.

Таким образом, исследования показали, что соединение 1 и хлорид лития в дозах, повышающих активность моноаминоксидазы in vivo (т.е. увеличивающих количество выделяющегося аммиака), в условиях фармакологических экспериментов вызывают у животных следующие проявления биологической активности: угнетение спонтанной двигательной активности, каталепсию, повышение тактильной чувствительности и уменьшение фенаминовой групповой токсичности.

N-(3,3-Дифенил-2-пропенил)-N-(1-метил-2-фенил)этил-1- β -D-глюкопиранозиламин формулы

обладающий антидепрессивным действием.