3-(2-ДИЭТИЛАМИНОЭТИЛТИО)-1,2,4-ТРИАЗИНО [6,5-B]ИНДОЛА ГИДРОХЛОРИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ПОВЫШАЮЩИЙ ФИЗИЧЕСКУЮ ВЫНОСЛИВОСТЬ И УСТОЙЧИВОСТЬ ОРГАНИЗМА К ГИПОКСИИ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/04 A61K31/33 

Изобретение относится к новому соединению, конкретно к 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино[6,5-b] индола гидрохлориду формулы /1/

3-(2-Диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино[6,5-b] индола гидрохлорид является биологически активным соединением. Он может быть использован в качестве противовоспалительного средства. Кроме того, он может быть использован в качестве средства, повышающего физическую выносливость, а также в качестве противогипоксического средства.

Среди нестероидных противовоспалительных средств индольного ряда широкое применение в медицинской практике получил индометацин /1-n-хлорбензоил-n-метокси-3-индолилуксусная кислота/ [1]
Индометацин является активным противовоспалительным препаратом, он оказывает также анальгезирующее и жаропонижающее действие. Однако при применении индометацина возможны побочные явления: головная боль, головокружение, сонливость, зудящие сыпи, бронхоспазм, кровоточивость, гастралгии, тошнота, рвота. Индометацин может оказывать ульцерогенное действие, вызывать изъязвление желудка и кишечника, кровотечение из желудочно-кишечного тракта. Индометацин следует применять с осторожностью у больных с психическими расстройствами. Индометацин применяется в виде капсул и драже, а также в виде свечей, т. к. он нерастворим в воде. Пероральное введение индометацина с целью определения острой токсичности показало, что индометацин в дозе 1000 мг/кг не вызывал гибели животных через 24 ч. Однако при более длительном наблюдении над животными оказалось, что даже значительно меньшие дозы являются токсическими.

DL 50 для крыс при однонедельном пероральном введении составляет 7,5 мг/кг [2] Отмечался перитонит, вызванный утончением или перфорацией тонкой кишки у крыс, погибших от доз 4-8 мг/кг [3]
Известно использование для повышения физической выносливости стимулятора центральной нервной системы фенамина [4] Однако применение этого соединения с подобной целью ограничено побочными эффектами. Для восстановления физической выносливости он малопригоден, а его повторное введение может вызвать целый ряд нежелательных побочных эффектов. Поэтому его чаще используют для профилактики умственного и физического утомления. Кроме того, этот препарат обладает довольно высокой токсичностью и значительной вариабельностью индивидуальных реакций, длительное (даже в течение нескольких дней) использование фенамина практически невозможно.

Вопрос о лекарственной профилактике и терапии гипоксических состояний является актуальным. В связи с широким применением антигипоксантов в медицине (заболевания сердца стенокардия, инфаркт миокарда, острый отек легких, шок, длительные перегрузки и т.д.) проблема изыскания новых препаратов, повышающих устойчивость к гипоксии, представляется особенно актуальной. Ранее как антигипоксант был предложен гутимин [5] Однако гутимин проявляет противогипоксическую активность только в больших дозах (50-100 и более мг/кг) и даже в этих дозах защищает от гипоксической гипоксии не более 40-45 животных. Кроме того, в отличие от гипоксической гипоксии, на моделях гемической и гистотоксической гипоксии активность гутимина мала. Поэтому необходимы более активные антигипоксанты с более широким спектром действия, например, для использования при отравлениях метгемоглобинообразователями.

Целью изобретения является изыскание нового противовоспалительного средства и средства, повышающего физическую выносливость и устойчивость организма к гипоксии, расширяющего арсенал средств воздействия на живой организм.

Настоящая цель достигается свойствами нового соединения -3-/2-диэтиламиноэтилтио/-1,2,4-триазино[6,5-b]-индола гидрохлорида формулы I, обладающего противовоспалительной активностью и повышающего физическую выносливость и устойчивость организма к гипоксии.

Соединение формулы I получают по известному методу получения триазиновых производных индола [6] путем взаимодействия 2,3-дигидро-1,2,4-триазино[6,5-b] индолтиона-3 с гидрохлоридом 2-диэтиламиноэтилхлорида в присутствии избытка щелочи, свободное основание затем обрабатывают хлористым водородом и превращают в гидрохлорид. Аминоалкилирование проводят при комнатной температуре с использованием небольшого избытка 2-диэтиламиноэтилхлорида. Выход сырого продукта реакции 85-90% после одной перекристаллизации 65%
Вещество формулы 1 представляет собой лимонно-желтые кристаллы, т.пл. 243^oС. Трудно растворяется в воде /1,3/, растворяется в метиловом спирте, умеренно в этиловом спирте, не растворяется в бутиловом спирте, легко растворяется в указанных спиртах при нагревании. Вещество устойчиво при хранении, не гигроскопично.

Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии. Для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.

Условия тонкослойной хроматографии. Адсорбент окись алюминия, растворитель для нанесения ацетон, подвижный растворитель бензол-спирт, 7,5: 1 R_f 0,46. Адсорбент силуфол, растворитель для нанесения - метиловой спирт, подвижный растворитель метиловый спирт 3н. водный аммиак, 10:1 R_f 0,46, подвижный растворитель ацетон-уксусная кислота 0,1 н. соляная кислота, 13,6:1, 36: 1, R_f 0,29. Вещество, как в видимом, так и в УФ-свете не содержит примесей, в том числе исходных веществ.

Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования щелочью в водном растворе, а также УФ-спектром.

Пример. Смешивают растворы 50 г /0,247 моль/ 2,3-дигидро-1,2,4-триазино [6,5-b] индолтиона-3 в 570 мл 1 г. едкого натра и 51 г /0,296 моль/ гидрохлорида 2-диэтиламиноэтилхлорида в 30 мл воды и оставляют на 3 ч. Продукт реакции выделяется в виде темного тяжелого масла. Реакционную массу переносят в делительную воронку и экстрагируют хлороформом 3 раза по 130 мл. Хлороформные вытяжки объединяют и сушат над сульфатом натрия, фильтруют, осадок промывают безводным хлороформом /100 мл/, фильтраты объединяют, прибавляют 500 мл безводного хлороформа и насыщают раствор хлористым водородом. Вначале получается густая масса грязно-зеленого цвета, которая при дальнейшем пропускании газа изменяет окраску до оранжевой. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром /2х75 мл/ и сушат в вакууме над фосфорным ангидридом при 20^o С и затем 1 ч при 80^o С. Получают сырой гидрохлорид в виде оранжевого кристаллического порошка, выход 87,2 Вещество очищают перекристаллизацией из водного метилового спирта /CH₃OH:H₂O=9,05:1,10 мл/г/, выход при первой перекристаллизации 74,6 при второй 88,7 промывают метиловым спиртом и эфиром и сушат при 80^o С. Получают гидрохлорид 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино [6,5-b] индола в виде лимонно-желтых игл, т. пл. 243^o С.

Найдено, С 53,20, 53,03; Н 6,05, 5,99; Сl 10,75, 10,69; N 20,35, 20,43; S 9,70, 9,80; М 335. С₁₅H₂₀ClN₅S
Вычислено, С 53,32, Н 5,97; Сl 10,49; N 20,73; S 9,49; М 337,9.

Биологические свойства.

Острая токсичность.

Определение острой токсичности проводилось на белых мышах массой 18-20 г при внутрибрюшинном введении препарата в виде 1-ного водного раствора. В данных условиях опыта DL 50 составляет 245,8 мг/кг± 7,9.

Внутрибpюшинное введение препарата в дозах 10 и 20 мг/кг в течение шести дней не показало каких-либо видимых токсических реакций со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъявления слизистой желудка и кишечника отмечено не было.

Напротив того, у животных, получающих индометацин, наблюдались диспепсические расстройства и изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта. Животные, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг, погибли на 3-4 сутки.

Противовоспалительная активность.

Противовоспалительное действие препарата изучалось на моделях асептического воспаления по методу "ватной гранулемы" животные крысы массой 180--200 г и модели отека легких, вызванного подкожным введением адреналина гидрохлорида животные мыши массой 18-20 г. Данные, полученные при введении препарата, сравнивались с данными контрольной группы животных и с результатами экспериментов при введении индометацина.

При изучении влияния препарата на экссудативные и полиферативные компоненты асептического воспаления по методу "ватной гранулемы" препарат вводился в дозах 5,10 и 20 мг/кг в виде 1%-ного водного раствора с лечебной целью и в дозах 10 и 20 мг/кг с лечебно-профилактической целью.

В первой серии экспериментов препарат вводился в течение трех дней после операции, во второй три дня до операции и три дня после операции. В конце опыта животных забивали, гранулемы взвешивали в свежеотсепарированном виде и в высушенном до постоянной массы.

Изучение активности препарата проводилось в сравнении с индометацином, который вводился внутрибрюшинно в виде раствора на 2,5% раствора натрия карбоната в дозах 1 и 20 мг/кг.

На фиг. 1 приведен график влияния препарата на экссудацию с лечебной целью; на фиг. 2 график влияния препарата на пролиферацию с лечебной целью; на фиг. 3 график влияния на экссудацию с лечебно-профилактической целью; на фиг. 4 график влияния препарата на пролиферацию с лечебно-профилактической целью; на фиг. 5 график влияния препарата на "адреналиновый отек легких".

Результаты экспериментов показали, что препарат в дозах 5,10 и 20 мг/кг значительно снижает образование жидкости и разрастание грануляционной ткани. Препарат, введенный с лечебной целью в дозе 5 и 20 мг/кг, снижает образование жидкости во влажной гранулеме в 2,6 раза, а в дозе 10 мг/кг в 3,2 раза в сравнении с контрольной группой животных /см. фиг. 1/. Препарат обладает активным действием и на пролиферативные компоненты в дозах 5,10 и 20 мг/кг. Препарат снижает разрастание соединительной ткани в дозе 5 мг/кг 2,9 раза, 20 мг/кг 2,8 раза, а в зоне 10 мг/кг 3,1 раза /см. фиг. 2/.

При введении с лечебно-профилактической целью, три дня до операции и три дня после операции, ежедневно, однократно, препарат также обладает выраженным противовоспалительным действием. Образование жидкости снизилось в дозе 10 мг/кг в 1,3 раза, в дозе 2, мг/кг в 1,5 раза /см. фиг. 3/.

Разрастание грануляционной ткани уменьшилось в дозе 10 мг/кг в 1,5 раза, в дозе 2, мг/кг в 1,6 раза /см. фиг. 4/.

Определить же действие индометацина с лечебно-профилактической целью в дозе 20 мг/кг не удалось, так как животные погибали на 3-4 сутки, наступал перитонит, вызванный утончением или перфорацией тонкой кишки.

Изучение препарата на модели "адреналинового отека легких" показало, что препарат в дозах 1, 5, 10 и 20 мг/кг обладает выраженным противовоспалительным действием. Отек легких вызывался подкожным введением 0,05 раствора адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг. О развитии воспалительного процесса делали заключение по величине "коэффициента отека легких", который представляет собой отношение массы легких в граммах к 100 г массы животного. Препарат вводился однократно с профилактической целью за час до введения раствора адреналина гидрохлорида в воде 0,1-ного водного раствора в дозах 1 и 5 мг/кг и 0,25 раствора в дозах 10 и 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Во всех дозах препарат активнее индометацина. В дозе 1 мг/кг препарат увеличивает легочный коэффициент лишь на 2,5 в сравнении с исходным /см. фиг. 5/.

Таким образом, установлено, что препарат обладает выраженным противовоспалительным действием, не уступающим и даже превосходящим по активности широко применяемый индометацин.

Отмечено, что при более длительном введении препарата, в отличие от индометацина, не наблюдается никакого видимого токсического действия на желудочно-кишечный тракт.

Препарат может быть рекомендован для дальнейшего изучения в качестве противовоспалительного средства.

Влияние препарата на физическую выносливость.

При фармакологическом исследовании выявлено, что вещество в разных дозах /20-60-90 мг/кг веса/ повышает длительность плавания мышей при предварительном введении за 1 ч до нагрузки на 86
В опытах на крысах (бег до отказа на третбане/ в дозе 20 мг/кг веса при однократном внутрибрюшинном введении до нагрузки незначительно повышало физическую выносливость через разные промежутки времени, более выражен этот эффект через 1 ч после введения до 45 В той же дозе и при тех же условиях вещество существенно повышало физическую выносливость после истощающих нагрузок в разные сроки через 1 ч животные восстанавливали длительность повторного бега до 100% от исходной, через 2 ч до 115 контроль до 50 через 24 ч до 215 контроль до 90-100
При сравнении изучаемого вещества с фенамином можно отметить, что фенамин практически не оказывал положительного влияния на скорость восстановления физической выносливости после максимальной нагрузки. Это выгодно отличает новое химическое соединение от фенамина.

Таким образом, установлено, что 3 (2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино [6,5-b] индола гидрохлорид повышает физическую выносливость у животных после истощающих нагрузок.

Изучение противогипоксической активности препарата.

Оценка и изучение противогипоксической активности препарата проводилась на трех моделях гипоксии: гипоксической гемической и гистотоксической.

Гипоксическая гипоксия создавалась "подъемом" животных в барокамере с непрерывной приточно-вытяжной вентиляцией на высоту 11000 м. Схема подъема: за первую минуту 5000 м и каждые последующие 1000 м за 1 мин. Наблюдение за животными велось в течение 45 мин с момента достижения высоты.

Гемическая гипоксия моделировалась внутрибрюшинным введением 2 раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг веса тела.

Гистотоксическая или тканевая гипоксия воспроизводилась введением животным цианистого калия внутрибрюшинно в дозе 18 мг/кг веса.

Все опыты проводились на белых мышах-самцах весом 18-21 г. Препарат вводился в виде тонкой суспензии на твине 80 и физиологическом растворе в дозе 12,5, 25,50 и 100 мг/кг за 1 ч до "подъема". Контрольным животным вводился такой же объем физиологического раствора на твине 80. Регистрировали выживаемость животных в на высоте. Полученные данные сравнивали с гутамином, который вводили внутрибрюшинно в дозах 50 и 100 мг/кг также за 1 ч до "подъема".

Результаты опытов приведены в таблице. Обнаружено, что часть контрольных мышей погибает в момент "подъема" на 9-й 10-й км (10-15), остальная часть достигает 11 км и погибает в первые 3-5 мин пребывания на высоте 11000 м (75-80), 10-14 животных опытной группы погибает в течение 5-8 мин на заданной высоте, остальные животные (70-85) выживали при предварительном введении им препарата в дозе 25,50 и 100 мг/кг. Так, введение препарата в дозе 100 мг/кг позволило поддержать жизнь 85 животных, в то время как гутимин в той же дозе повышает устойчивость к гипоксии лишь у 45-50 исследуемых животных. Выявлено статистически достоверное повышение устойчивости к гипоксии в барокамере животных, которым вводили препарат и в меньших дозах. Так, профилактическое введение препарата в дозе 50 мг/кг защищает 70 а в дозе 25 мг/кг 75 исследуемых животных.

Результаты определения противогипоксической активности препарата на модели с нитритом натрия показали, что профилактическое введение препарата в дозе 12,5, 25 и 50 мг/кг защищает от гибели 100 испытуемых животных, в то время как в контроле через 1 ч выжило лишь 10 На вторые сутки контрольные животные все погибли, а опытные выжили. Гутимин при испытании на этой модели в дозе 100 мг/кг защищает только 10 животных. На модели гистотоксической гипоксии обнаружено, что профилактическое введение препарата в дозе 25 мг/кг задерживает развитие судорог у мышей. Так, у контрольных животных в течение 4 мин погибает около 50 мышей, в последующие 30 мин погибают остальные животные. В опытной группе начало судорог зарегистрировали на 30-й минуте. В течение 1 ч погибло 50% через 24 ч еще 10 животных, остальные 40 выживают. Гутимин на этой модели в дозе 100 мг/кг задерживает время наступления судорог до 10 мин и защищает от гибели лишь 10
Таким образом, установлено, что препарат обладает выраженным противогипоксическим действием, превосходящим по активности известный антигипоксант гутимин. Препарат может быть рекомендован для дальнейшего изучения в качестве противогипоксического средства.

3-(2-Диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино[6,5-b]индола гидрохлорид формулы

обладающий противовоспалительной активностью и повышающий физическую выносливость и устойчивость организма к гипоксии.

3-(2-Диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино(6,5-b)индола гидрохлорид формулы

обладающий противовоспалительной активностью и повышающий физическую выносливость и устойчивость организма к гипоксии.