Бисульфитное производное (1-фенил-2-метилиндено /1,2- @ / пиррол-4-онил-3)глиоксаля обладающее противовирусной активностью Советский патент 1985 года по МПК C07D227/04 A61K31/403 A61P31/12 

Изобретение относится к новому химическому биологически активном соединению класса производных индено(1,2-в)пиррола, а именно бису фитному производному (1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)пиррол-4-онш1-3)глиоксаля формулы СОСНШЗОзНа обладающему противовирусной актив ностью. Наиболее близким по структуре является соединение формулы О биологической активности это го соединения- сведений нет (1 J. В настоящее время в медицинско практике используется бисульфитно производное флуоренонилглиоксаля формулы COCmoWSQgNa-Hg в качестве лекарственного препара под названием флореналь L2II. Флореналь в опытах in vitro обл дает выраженным противовирусным действием в отношении вируса грипп A(PR)8)34 (HON1), однако в отношении вируса герпеса в клеточной культуре его активность практическ незначительна. Цель изобретения - соединения ряда индено (1,2-в)пиррола, облада щие улучшенными противовирусными свойствами и расширение арсенала средств воздействия на живой организм. Поставленная цель достигается бисульфитным производным (1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)-пиppoл-4-oнил-3)глиoкcaля формулы (1)j кот 282 рое получают.путем декарбэтоксилирования 1 -фенил-2-1 етип-3-карбэтоксииндено(1,2-в)-пиррол-4-она под действием .гидрохлорида пиридина при 200-220°С в атмосфере инертного газа (азота), ацилирования вьщеленного 1-фенил-2-метш1инденоД 1,2-в)пиррол-4-она хлористым ацетилом в среде бензола в присутствии хлористого алюминия при комнатной температуре, окислении полученного 1-фенил-2-метил-З-ацетилиндено(1,2-в)-пиррол-4-она двуокисью селена в среде водного диоксана при кипячении с последующей обработкой образующегося (1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)-пиррол-4-онил-3)глиоксаля водным раствором бисульфита натрия при 70-75°С. Процесс может проходить как с выделением, так и без вьщеления промежуточного соединения У-(1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)-пиppoл-4-oншI-3) глиоксаля . Пример. Получение бисульфитного производного {1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)ПИРРОЛ-4-ОНШ1-3-ГЛИОКсаля (1) (без вьзделения промежуточ ного продукта). 1 Получение 1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)пиррол-4-она. Смесь 3,3 г (0,01 моль) 1-фенил-2-метил-3-карбэтоксииндено(1,2-в)-пиррол-4-она и 3,31 г (0,03 моль) гидрохлорида пиридина перемешивают при 200°С. в течение 1ч в токе азота. Реакционную массу выливают в воду, подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 5, образовавшееся масло экстрагируют хлороформом (3x50 мл). Органический слой промывают водой, растворитель упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 10 мл хлороформа и наносят на колонну (диаметр 30 мм, длина 180 мм) с силикагелем. Элюируют хлороформом. Разделение веществ контролируют хроматографически. Получают 0,6 г (23,2%) 1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)-пиррол-4-она в виде кристаллов бордового цвета, растворимых в хлороформе, бензоле, ацетоне, при нагревании в спирте. Т. пл. 175-176 0 (из метанола). Найдено, %: С 83,74; Н 4,91, N 5,21. Вычислено, %: С 83,37} Н 5,05, 5,39.

Мол. вес 259,310.

,jNO.

2. Получение 1-фенил-2-метил-З-ацетилиндено(1,2-в)-пиррол-4-она.

К раствору 1,3 г (0,005 моль) 1-фенш1-2-метилиндено(1,2-в)-пиррол-4-она в 20 мл бензола при комнатной температуре и при перемешивании порциями прибавляют 1,9 г (О,015 моль) хлористого алюминия. Реакционную массу вьщерживают при комнатной температуре в течение 20 мин, затем медленно прибавляют 1 мл. (0,012 моль) хлористого ацетила. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 1,5 ч и затем при 50-55 с в течение 30 мин. Реакционную массу выливают в воду, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 5. Органический слой отделяют, водньм - экстрагируют бензолом (2 х X 50 мл). Экстракты объединяют, промывают водой, растворит(гль отгоняют.

Получают 1,07 г (62%) 1-фенил-2-метил-3-ацетилиндено(1,2-в)пиррол-4-рна в виде кристаллов оранжевого цвета, растворимых в хлороформе, бензоле, ацетоне и при нагревании в спирте, т. пл. 223-224С (из мет&нола).

Найдено, %: С 79,65; Н 5,20; N 4-,83.

Вычислено, %: С 79,72; Н 5,02; N 4,65.

Мо-л- вес 301,348. К раствору 0,6 г (0,005 моль) двуокиси селена в 5,5 мл смеси, состоящей из 5 мл диоксана и 0,5 мл воды, при 60-65 °С при перемешивании добавляют раствор 1,5 г (0,005 моль) 1-фенил-2-метил-3-ацетилиндено(1,2-в)-пиррол-4-она в 35 мл диоксана. Реакционную массу кипятят 3,5 ч, затем охлаждают, отфильтровывают от селена. Маточник упаривают в вакууме. Остаток содержит (1-фенил-2-метилиндено(1,2-в)пиррол-4-онил-3)глиоксаль. Продукт вьвделен в виде cpиcтaллoв розового цвета, т. пл. 222-224 С (из 60% спирта).

Найдено, %: С 72,12; Н 4,45; N 4,05.

Вычислено, %; С 72,13; Н 4,53; 4,20.

N

Cin Н.

-гоп,, NOjHjO. Мол. вес 350-,35.

Далее остаток растворяют в 15 мл 40%-ного этилового спирта и при 7075°С прибавляют к нему 1,75 мл 40%-ного раствора бисульфита натрия. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и вьздерживают 2 ч, затем приливают 30 мл воды, охлаждают до О минус 5С, выпавший осадок отфильтровывают, сушат.

Получают 0,81 г (40%) бисульфитного производного (1-фенш1-2-метилиндено(1,2-в)пиррол-4-онш1-3)глиоксаля (1) в виде кристаллов красного цвета, растворимых в спирте и при нагревании в воде.

Найдено, %: С 56,98; Н 3,37; N 3,38, S 7,77.

Вычислено, 2

С 57,22; Н 3,36J N 3,34; S 7,64.

, . Мол. вес 419,393.

Исследования биологической активности предлагаемого соединения проводились в лаборатории химиотерапии инфекционных заболеваний ВНИХФИ.

Биологическую активность соединения изучали в опытах с вирусом гриппа A(PR)8)34 (HON1) и вирусом герпеса простого 1 типа штамм 1-С.

В опытах с вирусом гриппа вещество 1 в концентрациях 1000, 100,.10 и 1 мкг/мл соединяли с 1,10 и 100 стопроцентными эмбриональными инфекционными дозами вируса (ЭЙД оо ) .

Смеси выдерживали в течение 1 ч при и вводили в аллантоисную полость 9-дневных куриных эмбрионов, через 48 ч инкубации эмбрионов в термостате при определяли титр вируса гриппа в аллантоисной жидкости с помощью реакции гемагглютинации.

Биологическую активность заявляемого соединения сравнивали в опытах in vitro с активностью известного биологического аналога-флореналя (III).

Результаты сравнительного биоло-гического исследования приведейы в таблице.

Как видно из таблицы, пол5П1енное соединение оказывает выраженное вирулицидное действие в отношении вируса гриппа A(PR)8)34 (HON1).

Далее исследовали действие данного соединения на вирус герпеса простого, выращенного в клеточной культуре ФЭК.

В пробирки с клеточной культурой вводили по 0,4 мл 1, 10 и 100 пятидесятипроцентньрс тканевых цитопатических доз (ТЦДзо) указанного вируса. После часового контакта с клетками культуры при комнатной температуре вирус сливали и вводили по 1 мл вещества 1 в максимально переносимой (2,5 мкг/мл), а также в меньшей (2,1 мкг/мл) концентрации. Через 48 ч инкубации клеточной культуры в термостате при 37 С результаты учитьшали по отсутствию или наличию цитопатического действия (ЦПД) у исследуемого соединения по сравнению с контролем.

Установлено, что предлагаемое соединение (1) инактивирует 10 ТЦДзо

вируса в концентрации 2,5 мкг/мл, в то время как флореналь - в концентрации 5 мкг/нл. Данные исследования свидетельствуют о повышенной эффективности соединения (1) в отношении вируса герпеса простого 1 типа штамм 1-С.

Токсичность соединения (1) изучена на белых нелинейных мышах массой 18-20 г. Вещество вводили per OS в 0,5 мл 1% крахмального геля однократно. Наблюдение за выживаемостью и состоянием животных проводили в течение 14 дней.

Токсичность для мьш1ей при однократном введении составляет для соединения (1) ЛДьо 875 мг/кг, для флореналя - мг/кг.

Таким образом, соединение (1) малотоксично и обладает выраженной противовирусной активностью, превосходящей флореналь по силе действия, в отношении вируса герпеса простого 1 типа штамм 1-С и сопоставимой активностью с флореналем в отношении вируса гриппа А(PR)8)34 (HON1).

Бисульфитное производное