Способ получения производных дистамицина А или их гидрохлоридов Советский патент 1989 года по МПК C07D207/34 

Изобретение относится к области получения новых производных дистамицина А общей формулы

R2

/N-A-CO

HNI

сн,

ч J-CO- .-NH-CHi-CHj-Cf,

n

и ми,

NH

NH,

где n 3 или 4; A - радикал

когда один из

R, и Rj - водород, а другой - группа -CO-N-Rj, в которой

N0

R - - С,-Сц,-алкил, незамещенный или.замещенный атомом

О1

3152831

лоица, ил и группа -СО-ССН) -R, где m О, а R - азири- динил или оксирчиил А - радикал

с1

СНз

или

r-N V

где R, и R - одинаковые и означают

С,-С -алкил, замещенный галоидом,

или их гидрохлоридов, обладающих про тивоопухолевой и противовирусной активностями.

Целью изобретения является разработка на основе известных методов способа получения новых производных дистамицина А, обладающих ценными фармакологическими свойствами при низкой токсичности.

Пример 1. Р-/l- eтил-4-/l- мeтил-4-/ 1 -мeтил-4- 4-N -метил-N - нитрозоуреидобензол/- -карбоксами- до1пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2- карбоксамидо/пиррол-2-карбоксами- до/пропионамидин, гидрохлорид.

Раствор 0,1 мл триэтиламина в 1мл диметилформамида (ДОФ) прибавляют в течение 5 мин к перемешиваемому раствору 0,41 г N-деформилдистамицина в 2,5 мл ДМФ при комнатной температуре в атмосфере азота. Через 15 мин малы ми порциями прибавляют 0,17 г 4-(N- нитрозо-Н-метилуреидо)бензойной кислоты и 0,16 г дициклогексилкарбоди- имида. Реакционную смесь 2 ч перемешивают и прибавляют 25 мл этилового эфира. Твердый продукт, собранный фильтрованием, очицают колоночной хроматографией на силикагеле смесями этилацетата, метанола и уксусной кислоты, получают 0,175 г целевого сое- динения, т.пл. 205-210°С (с разложением) , из изопропанола.

АналЬгично может быть получен ft-/1-метил-4-/1-метнл-4-/1-метил-4- 4-N -/2-хлорэтш1-Н -нитрозоуреидобензол/- -карбоксамидо -пиррол-2- карбоксиамидо/пиррол-2-карбоксиами- до/пиррол-2-карбоксамидо/пропионами- дин, гидрохлорид, т.пл. 182 С (разложение) .

Пример 2. р)-/l-Neтил-4-/l- мeтил-4-/l -метил-4- 4-N,N-биcr/2- xлopэтил/aминoтиoфeн-2-кapбoкcaмидo пиppoл-2-кapбoкcaмидoУпиppoл-2-кap

0

5

0

5

О .,е 0 45

55

50

64

боксамвдо/пиррол-2-карбоксамидо/про-| пионамидин, гидрохлорид.

Iстадия. Промежуточная 4-N,N- бис-/2-хлорэтил/аминотиофен-2-карбо- новая кислота.

Исходя из 1,74 г метил-4-нитротио- фен-2-карбокснлата получают 0,90 г метил-4-аминотиофен-2-карбоксипата, т.пл. 81-82°С.

Вводят 4 г холодной окиси этилена в растор 0,9 г метил-4-аминотиофен- 2-карбоксилата в 12,5 мл 40%-ной водной уксусной кислоты при 5°С при перемешивании. Смесь выдерживают всю ночь при комнатной температуре в запаянной колбе, затем концентрируют до малого объема и разбавляют 25 мл воды. Прибавляют твердый бикарбонат натрия и смесь экстрагируют этилаце- татом. При выпаривании органического растворителя получают 1,3 г метил- /К,Ы-бис/2-оксизтил/аминотиофен-2- карбоксилата в виде светло-коричневого масла, которое затвердевает при стоянии, т.пл. 68-69°С (из смеси 60:40 этилацетат:гексан).

Растворяют 1,3 г бис-оксиэтилами- нопроизводного в 1,96 мл оксихлорида фосфора и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 45 мин. После выпаривания в вакууме темный остаток обрабатывают 7,75 мл концентрированной соляной кислоты при 100 С в течение 3 ч. Смесь охлаждают, прибавляют 21 мл холодной воды и экстрагируют полученный раствор этилацетатом. После вьтаривания органического растворителя и очистки твердого остатка хроматографией на колонке с силика- гелем, элюируя смесью этилацетата и метанола, получают 0,49 г 4-Ы,М-бис- /2-хлорэтип/аминотиофен-2-карбоновой кислоты, т.пл. 135-137°С (из смеси 60:40 бензол:гексан).

IIстадия. Целевое соединение. Раствор О,1 мл триэтиламина в

0,5 мл Д1-1Ф прибавляют к раствору 0,4 г деформилдистамицина дигидрохло- рида в 4,5 мл ДМФ при комнатной температуре в атмосфере азота.

Смесь обрабатывают 0,23 г 4-N,N- бис-/2-хлорэтил/аминотиофен-2-карбо- новой кислоты и 0,77 г дициклогексил- карбодиимида малыми п 1рцнями. Полученную в результате смесь перемешивают вею ночь, затем фильтруют и выпаривают досуха в вакууме. Твердый ос- таток очищают хроматографией на сили2954

5,15

кагеле, используя в качестве элюента смесь .этилацетата и этанола (9:1 и 8:2 по объему). Получают 0,22 г целевого соединения, т.пл. 199-204°С (после перекристаллизации из изопро- пилового спирта).

Аналогично могут быть получены следующие соединения:

fi -/1 -метип-4-/1 -метил-4-/1 -метип- 4-L4-N, N-бис -/2-хлорэтил/аминоимида« зол-l-мeтил-2-кapбoкcaмIадo пиppoл-2- кapбoкcaмидo/пиppoл-2-кapбoкcaми- . до/пирр6л-2-карбоксамидо/пропи6н амидин,гвдрохлорчц;

P-/I-метил-4-/1-метил-4-/1-метил- ,Ы-бис-/2-хлорэтил/аминоимида- зол-1-метил-2-карбоксамкцо пиррол-2- карб6ксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/- пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин,, гццрохлорид;

1 -метил-4-/1 -метил-4-/ 1-метил- ,N-6ис-/2-хлорэтил/аминотиазол- 2-карбоксамидо пиррол-2-карбоксамидо/ пиррол-2-карбоксамнцо/пиррол-2-кар- боксамнцо/пропионамидин, гидрохлорид

P-/I-метил-4-/1-метил-4-/I-метип- 4-r5-N,N-бис-/2-хлорэтил/аминотназол- 2-карбоксамидо|пиppoл-2-кapбoкcaми- дo/пиppoл-2-кapбoкcaмидo/пиppoл-2- кapбoкcaмнцo/пpoпиoнaмидин,гвдpoxлo- РВД.

Пример 3. р -/1-Метил-4-/1- метнл-4-/ 1 -метил-4- 4-N, N-биc-/2- хлорэтил/аминобензол-1 -карбоксамидо пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-кар- - боксамидо/пиррол-2-карбоксамвдо/про- пионамидин,гнцрохлорид,

Раствор 0,195 г бикарбоната натрия в 3 мл воды прибавляют к охлажденному раствору 0,4 г деформилдис- тамицина в 21 мл этанола. К этой смеси прибавляют по к аплям раствор 0,32 г 4-N,N-бис-/2-хлорэтил/амино- бёнзоилхлорида в 3 мл бензола.. Смесь перемешивают 3 ч при 5 С, а затем 12 ч при комнатной температуре.

После выпаривания в вакууме получают твердый остаток, который хрома- тографируют на колонке с силикагелем, элюируя смесями хлороформа и метанола С9:1 и 7:3 по объему), получают 0,22 г целевого продукта, т.пл, с разложением), из изопропилового спирта и этилового эфира.

Аналогично получают следующие соединения:

Л-/1 -метип-4-/1 -метил-4-/ 1-метил- 4-/1 -метил-4- 4-N, N-бис-/2-хлорэтил/

10

15

20

25

52831

,

,

30

35

40

45

50

55

6. 6

аминобензол-.1-карбоксамидо пиррол-2- карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/- пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-кар- боксамидо/пропионамидин,гццрохлоркц; В-/1 -метип-4-/ 1 -метип-4-/1 -метил-1

4-L3-N,N-бис-/2-хлорэтил/аминобензол- 1-карбоксамидо пиррол-2-карбоксами- до/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2- карбоксамкцо/пропионамкцин,гидрохлорвд;

(-/1 -метил-4-/1-метил-4-/I -метил-. 4- 4-/оксиранкарбонил/аминобензол-1 - карбоксамцдо пиррол-2-карбоксамидо/- пир;рол-2-карбоксймидо/пиррол-2-кар- боксамкцо/пропионамидин,гуадрохлорвд;

-/1 -метил-4-/1 -метил-4-/1 -метил- 4- 3-/оксиранкарбонип/аминобензол-1- карбоксамидо пиррол-2-карбоксамидо/- пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-кар- боксамидо/пропионамидин,хлоргвдрат;

3-/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил- -азиридинкарбонил/аминобензол- 1-карбоксамидб пиррол-2-карбоксами- до/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2- карбоксамидо/пропионамидин,гидрохло

РИД;

(Ь-/ -метил-4-/1 -метил-4-/ 1-метип- -азиридин/карбониламинобензол- 1-карбоксамидо пиррол-2-карбоксами- |до/пиррол-2-карбоксамидоУпиррол-2- карбоксамидо/пропионамидин,гидрохлорид.

В таблице приведены данные in vitro по противоопухолевой активности,, относящиеся к соединениям Ь -/1-мет ил- 4-/1-метил-4-/1-метил-4- 4-N,N-бис- /2-хлорэтил/аминобензол-1 -карбоксами- до пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2- карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/- пропионамидин,гидрохлорвд (код FCE 24517) и -/1-метил-4-/J-метип-4-/1- мeтил-4- 4-N,N-биc-/2-xлopэтнл/aминo- тиофен-2-карбоксамидо пиррол-2-кар- боксамкдо/пиррол-2-карбоксамчцоУпир- рол-2-карбоксамидо/пропионамвдин гид- рохлорчц (код FCE 24690) по сравнению дистамицином А.

Противоопухолевая активность in vitro была оценена с помощью цитоток- сикологического исследования, проводимого на клетках raurine Z 1210 лейкемии, Z-PA11 устойчивых к лейкемии клетках и клетках Р388 лейкемии, а также на клетках HeZa. Клетки происходили из опухолей in vivo)и адаптировались в культуре клеток. Клетки были использованы до десятого пассажа. Цитотоксичность определена путем .

подсчета выжитых -клеток через 4 ч после обработки и 48 ч роста на не содержащей лекарства среде. Для клеток HeZa использован тест по ингиби- рованию колоний. Процент роста клеток На обработанных культурах сравнивается с таковым для контроля. Величины LDgp (дозы, ингибирующие 50% клеточного роста по отношению к контролю) рассчитаны по кривым доза - ответ.

Предлагаемые соединения также показали значительную эффективность при наложении с репродуктивной актив- ностью патогенных вирусов и защиту клеток тканей от вирусных инфекций. Так, они показьгоают активность против ДНК-вирусов таких, как, например,герпес (например, герпес симплекс и герпес зостер, РНК-вирусов таких, как риновирусы и аденовирусы, и против ретровирусов таких, как саркома-вирусы.

Вирусы герпес, коксаки (coxsachie) и респираторно-сенцитиальные были испытаны в жидкой среде по следующей методике. Серийные двукратные разбавления соединений от 200 до 1,5мкг/мл распределены в дубликатах О, 1 мл/лунку в 96 лунках микроплат для культуры ткани. Сразу же добавляются клеточные суспензии (2-10 клеток/мл), зараженные примерно S lO lCLDgQ вирус/клетку в 0,1 мл/лунку. После 3-5 дней инкубации при 37°С в 5%-ном СО культуры клеток оценивают при наблюдении под микроскопом и определяют минимальную ингибируюшую концентрацию, которая определяет уменьшение цито- патического эффекта по сравнению с зараженными контролями.

Формула изобретения

Способ получения производных дис- тамицина А общей формулы

RU

RO

;N-A-COHN-Tj-пМН

1 CO--NH-CH,-CH,-Ct N МН.

Hj

сн.

а

где п А

3 или 4; радикал

когда один из

R, и Rj - водород, а другой группа -CO-N-R,,B которой

I

N0

R Cj-C -алкил, незамещенный или замещенный атомом галоида или группа -CO(CHj)-R4, где m О, а R - азиридинил или оксиранил.

или А - радикал

где R . и R2 - одинаковые и означают С -С(-алкил, замещенный галоидом,

или их гидрохлоридов, отличающийся тем, что соединение общей формулы

NH-CH i-CH.-Ct

NH

н

СН

3

а

где п - имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

RU

{

:М-А-СО-Х

где X - гидроксил или га.чоген;

R , R и А имеют указанные .значения,

с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде гидрохлорида.

Цитотокскчность оценена через 4 ч после

обработки. Питотоксичность оценена через 48 ч после

обработки..

Тест по ннгибнрованйю колоний проводили через 24 ч после обработки.

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения производных дистамицина А и их гидрохлоридов общей ф-лы R₁R₂N - A - C(O)[NH-......-C=CH - N(CH₃) - C - CH C(O)] _N NH - CH₂ - CH₂ - C(NH₂)=NH, где N = 3 или 4

A- @ , когда один из R₁ и R₂ - водород, а другой - а) -C(O) - N(NO) - R₃ при R₃ - C₁-C₄-алкил или C₁-C₄-галоидалкил

б)-C(O)-(CH₂)_M - R₄ при M = 0, R₄ - азиридинил или оксиранил

A- @ , КОгдА R₁=R₂-C₁-C₄-галоидалкил, которые обладают противоопухолевой и противовирусной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых активных и малотоксичных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией замещенной аминокислоты или ее хлорангидрида с соответствующим 4-(N - нитрозо - N -метилуреидом) кислоты с последующим выделением целевого продукта либо в свободном виде, либо в виде гидрохлорида. Новые соединения показывают значительную эффективность при наложении с репродуктивной активностью патогенных вирусов и защиту клеток от вирусных инфекций (в том числе и ДНК-вирусов). 1 табл.