Способ выращивания дрожжей Советский патент 1984 года по МПК C12N1/16 C12R1/72 C12R1/865 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам выраиш нания дрожжей, и может быть испольI эовано в микробиологической npOMHUiлс-нности. Известен способ выращивания микро организмов путем воздепствия на них И питательную среду повьпиеннь-м гидростатическим давлением, а также давлением с использованием других газов 13. Однако для подачи этого давления используют дорогостоящую аппаратуру, требукчдую высококвалифицированного обслуживающего персонала, что удорожает выпускаемую продукцию. Известен способ выращивания микроорганизмов, включащий обработку культуральной жидкости центрифужным давлением 2. Однако использование центрифужного давления в известном способе позволяет лишь отделить клетки микроорганизмов от культуральной жидкости и не приводит к ускорению роста дрожжей, Наиболее близким к пpeдлaгaeмo ly по технической cyij.HocxH и достигаемо му эффекту является способ выращива НИН дрожжей, предусматривающий приго товление посевного материала с после дующим перенесением его на питательную среду 3 . К недостаткам этого способа относится низкий выход дрожжей. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем что согласно способу выращивания/ дрожжей,,предусматривающему приготов ление посевного материала с последую щим перенесением его на питательную среду, перед перенесением на Питательную среду посевной материал цент рифугируют, а перенесение на питател ную среду осуществляют через 0,01724 ч после центрифугирования. При этом посевной материал центри фугируют в физиологическом растворе с силой соответствующей 1400-2400 , в течение 10-40 мин или в воде - с силой соответствующей 2750-3750 , в течение 30-60 мин. Спопоб осуществляют следующим образом. Посевной материал дрожжи ГассЬаго ту с е г: : р 7 : v i s i а е , Candida а 2. b i с а n : , Clndida ut, ilir; в количестве 0,1-10 Г помещают в 1 л кипяченой и охЯаждеНной до 25-30°С воды или физиологичес кого раствора iO,85%-ный раСтвор хлорида натрия)при 25-30°С и тщатель но Г1ереме11ивают до получения однород ной суспензии. Этой смесью наполняю центрифужные пробирки и включают центрифугу. При этом центрифуге придают обороты, соответствующие 1400-2400 или 2750-3750, используя, номограмму д.пя расчета центробежного ускорения. Центрифугирование ведут 3 течение 10-60 мин. Затем пробирки вынимают из центрифуги, перемешива ют их содержимое и используют по назначению в течение 1 мин-24 ч. Например, смесь переносят в емкости, в которых проводится технологический процесс вырс1щивания микроорганизмов согласно известным способам получения биомассы на соответствующих питательных средах, а также на физиологическом растворе(о,85%-ный раствор хлорида натрия), используют для научных исследований, демонстрации при обучении и др. Определение достоверности способа и демонстрацию воздействия повыитенного центрифужного давления на дрожжи осуществляют по следующей схеме. Берут 0,1 г биомассы дрожжей и заливают 1 л физраствора или воды при 25-30°С. Содержимое сосуда тщательно перемешивают до получения однородной суспензии и разливают в 13 центрифужных пробирок по 50 мл в каждую. Первая пробирка с суспензией дрожжей контрольная, 2 - 13-ая -опытные. Последние помещают в гнезде центрифуги, например, марки ЦЛР-1 и центрифугируют. После центрифугирования осевшую взвесь дрожжей в пробирках тщательно перемешивают до получения однородной суспензии и делают посевы на солодовое сусло. Аналогично поступают в контроле. Перед инкубацией в термостате при как в контроле, так и в суспензии опытных сосудах проводят подсчет количества клеток при помощи электронного счетчика Пикоскель. В период инкубации в термостате через определенные промежутки времени снова проводят подсчет количества микроорганизмов. В табл. 1 и 2 представлено влияние силы центрифужного давления и йремени обработки на выход дрожжей Saccharomyces cerevisiасобработка без воды и рода Candida соответственно. Влияние интервала времени, в течение которого клетки дрожжей переносят на питательную среду, на выход дрожжей представлено в табл.3. Полученные результаты показывают, что обработка дрожжей рода Candida в физиологическом растворе позволяет увеличить выход на 121-293%, а дрожжей рода fac-haromyce:; на 155-335%. Обработка в воде позволяет добиться увеличения выхода на 43231%. Использование параметров обработки за пределами предлагаемых не сопровождается достаточным увеличением выхода дрожжей. Пример. Дрожжи Raccharoпус€ч- cerftvisiae суСупендируют В физиологическом растворе и обрабатывают на центрифуге с силой соответствующей 1750 30 мин с последующим пересевом на солодовое сусло через 4 ч после центрифугирования. Учет количества клеток ведут через 6 ч после начала инкубации в термостате при 30°С, Количество клеток в 1 мл 592-10 , что составляет прирост по отношению к контролю 281%.

П р и м е р 2. Дрожжи рода Condida помещают в пробирки с физиологическим раствором и центрифугируют при температуре окружающей среды 13-15°С 10 мин с силой соответствующей 2000. Затем пробирки вынимают, забирают по 0,1 мл центрифугата и высевают его на среду Сабуро(суслоагар )в чашках Петри. Чашки помещают в термостат При 30°С и термостатируОтносительное

Время центрицентрифужноефугирования(мин ускорение ОЦУ Первая серия опыт 3250 3250 3250 3250 3250 Вторая серия опыто 30 30 30 30 30 2400 2750 3250 3750 4250 Контроль Без центрифугированияобработка в физио ческом расторе Контроль Без центрифугирования20 1400 1750 1800

ют 1-2 сут. Затем подсчитывают количество выросших колоний- в контроле и опыте.

Число колоний 933, в контроле 319.

П р и м е р 3. Центрифугирование Saccharorayces проводят в воде при 2250§- при 13-15С окружающей среды 40 мин. Затем выбирают 0,1 мл центрифугата, который высевают на

0 среду Сабуро в чашки Петри, которые термостатируют при 24 ч. Затем подсчитывают количество выросших колоний 110, в контроле 45.

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет увеличить выход дрожжей на 43-335%.

Таблица 1

количество клеток

в 1 мл питательв процентах ной среды 10 к контролю 164 255 290 351 180 171 218 258 342 169 152 и215243

Продолжение табл. 1

1. СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ДРОЖЖЕЙ, предусматривающий приготовление посевного материала с последующим перенесением его на питательную срод5-, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, перед перенесением на пктагслъную среду посевной материал подвергают центрифугированию, а перенесение на питатетльную среду осуществляют через 0,017-24 ч после центрифугирования. 2.Способ по п. 1, отличающ и и с я тем, что посевной материа;: центрифугируют в физиологическом растворе с силой соответствующей 1400-2400 в течение мин. § 3.Способ по п. 1, отлич а гоад и и с я тем, что посевной материал центрифугируют в воде с силой, соответствующей 2750-3750 , в течение 30-60 мин.

2000

20 2400

20 1750

5

1750

10 1750

20

30 1750 1750

60 Время обработки, 10 20 30 40 мин Выход дрожжей 281 128 148 112 (число колоний) Время обработки, 10 20 30 40 мин Выход дрожжей 933 897 323 342 число КОЛОНИЙ

Ш

108

109

212%

218

191

119

Таблица 2 Конт- 10 20 30 40 Контрольроль254 290 218 170 117 218 Конт- 10 20 30 40 Контрольроль319 289 204 170 197 163

148

215

219 Примечание. 1

Таблица 3

216

216

125

208 Контроль(без центрифугирования) - в скобках указаны проиенты, т.е. увеличение количества клеток в процентах по сравнению с временем 1 мин.Время центрифугирования(10,20 и 30 мин)- в скобках указаны проценты, т.е. на сколько процентов возросло количество клетов по сравнению с соответствующим контролем,указанного в каждом столбике таблицы.