СПОСОБ КОНТРОЛЯ СОДЕРЖАНИЯ В ХЛОРЕЛЛЕ Советский патент 1973 года по МПК C12Q3/00 

Изобретение относится к микробиологии.

Известны способы контроля содержания в хлорелле азотсодержащих полисахаридов при выращивании, предусматривающие отбор клеток во время выращивания и последующее наблюдение за их морфологическими изменениями, а также наблюдение за интенсивностью фотосинтеза и естественной люминесценции клеток.

Однако при выращивании хлореллы с целью получения из нее азотсодержащих полисахаридов эти способы неприемлемы, ибо морфологические изменения не находятся в прямой зависимости от максимального накопления азотсодержащих полисахаридов, а интенсивность фотосинтеза не отражает первичных изменений в физиологическом состоянии клеток, приводящих к изменению в накоплении азотсодержащих полисахаридов. Естественная люминесценция указывает на состояние хлореллы, а не на жизнеспособность клеток.

Предлагаемый снособ основан на том, что между коэффициентом поляризации клеток хлореллы и способностью накапливать азотсодержащие полисахариды наблюдается определенная зависимость.

Согласно предлагаемому способу для обеспечения возможности максимального накопления азотсодержащих полисахаридов в оболочке хлореллы измеряют коэффициент поляризации отобранных клеток хлореллы и по калибровочной кривой судят о величине накопленных азотсодержащих полисахаридов. В зависимости от этой величины вводят коррективы в технологический процесс, а именно при падении коэффициента поляризации в суспензию вводят дополнительные порции источников азотистого обмена и углеводородного питания.

Перед измерением коэффициента поляризации клеток хлореллы из них следует удалить минеральные соли путем введения лимонной кислоты с последующим выведением

ее центрифугированием, промывкой и установлением необходимой плотности клеток хлореллы центрифугированием.

Предлагаемый способ обеспечивает объективность и точность контроля.

На чертеже представлена калибровочная кривая зависимости выхода азотсодержащих полисахаридов от коэффициента поляризации. Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Из сосудов для культивирования водорослей отбирают пробу клеток, причем объем суспензии должен быть таким, чтобы можно было получить достаточное количество сырой

массы хлореллы для покрытия платиновых

пластинчатых электродов в измерительной ячейке.

В суспензию вводят лимонную кислоту в количестве достаточном для доведения рН ее до 3,5 и взбалтывают в течение 1 мин. Вслед за этим суспензию центрифугируют в течение 1 мин нри 2500 g. Жидкость декантируют, осадок суспендируют дистиллированной водой до объема 0,5 л и центрифугируют вторично.

Осадок суспендируют бндистиллятом и переносят в центрифужные пробирки, служащие также измерительной ячейкой,. Центрифугирование проводят нрн 3500gr, доводя плотность осадка до постоянного значения, в центрифуге с термоизоляцией.

Затем измерительную ячейку с осадком помещают в ультратермостат, поддерживая температуру с точностью до ±0,1°С на уровне средней температуры выращивания хлореллы.

В термостате ячейку затемняют. Затем измеряют коэффициент поляризации подготовленной пробы клеток хлореллы. Измеряют электрические параметры хлореллы по компенсационной схеме, позволяющей проводить измерения коэффициента поляризации на 10- 12 точках частотного диапазона в пределах 10 мин.

По полученному значению с помощью калибровочной кривой, нриведенной на чертеже, определяют выход азотсодержащих полисахаридов.

При коэффициенте поляризации равном 1,4-2,2 выход азотсодержащих полисахаридов составляет около 1,0%; при коэффициенте поляризации равном 4,0-7,2 выход азотсодержащих полисахаридов составляет 2,1 - 2,6%, т. е. увеличивается в два раза и более.

Изменения коэффициента поляризации отражают изменения состояния хлореллы в первичной обратимой фазе, ноэтому, получив значение этого коэффициента, корректируют технологический процесс, т. е. при необходимости увеличивают приток в питательную среду источников азота и углерода.

Возрастающее при этом значение коэффициента поляризации свидетельствует об увеличении жизнеспособности хлореллы и увеличении выхода азотсодержащих нолисахаридов.

Максимальный выход азотсодержащих полисахаридов соответствует коэффициенту поляризации, лежащему в пределе 9-11.

При дальнейшем увеличении коэффициента поляризации выход азотсодержащих полисахаридов не возрастает.

Предмет |ИЗобретения

1. Способ контроля содержания в хлорелле азотсодержащих полисахаридов в процессе выращивания, предусматривающий отбор живых клеток хлореллы, отличающийся тем, что,

с целью объективности и точности контроля, измеряют коэффициент поляризации отобранных клеток хлореллы и по калибровочной кривой судят о величине накопленных азотсодержащих полисахаридов.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, перед измерением коэффициента поляризации из клеток хлореллы удаляют минеральные соли. 3. Способ по нп. 1 и 2, отличающийся тем,

что удаление минеральных солей из клеток хлореллы осуществляют путем введения в них лимонной кислоты с последующим выведением ее, например, центрифугированием, промывкой и установлением необходимой плотности клеток хлореллы центрифугированием.