Питательная среда для учета споровых анаэробных микроорганизмов-вредителей молочного производства Советский патент 1984 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к молочной промышленности, и касается питательной среды для выявления анаэробов - вредителей молочного производства. Известна питательная среда для учета спосрбных анаэробных микроорганизмов - вредителей молочного про изводства, содержащая ферментативны гидролизат обезжиренного молока, ук суснокислый натрий, крахмал водорас воримый, цистеин, агар-агар и воду Однако известная среда не обеспе чивает быстрого роста микроорганизмое. Цель изобретения - ускорение рос микроорганизмов. Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для учет споровых анаэробных микроорганизмов вредителей молочного производства, содержащая ферментативный гидролиза обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цистеин и воду, дополнительно содер фосфорнокислый однозамещенный калий бромкрезоловый пурпурный и фуксин кислый, а в качестве ферментативног гидролизата молока - сухой амилоризиновый гидролизат обезжиренного молока при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Сухой аминолоризиновьм гидролизат обезжиренного молока30,0-35,0 Крахмал водорастворимый0,8-1,0 Уксуснокислый натрий 5,0-5,5 Фосфорнокислый одно2,7-3,0 замещенный калий Бромкрезоловый 0,03-0,04 пурпурный 0,045-0,05 Фуксин кислый 0,5-0,6 Цистин До 1 л Питательную среду готовят следующим образом. Обезжиренное молоко подвергают ферментативной обработке амилорезином П 10 X (25-30 ед/г)- при рН 8,0-9,0 в течение 6-8 ч до содержания аминного азота 140-160 мг%. Затем в небольшое количество освет-пен ного гидролизата при рН 10,0-10,5 добавляют 0,5-0,6 г/л среды цистина и объединяют с гидролизатом. В высу шенный гидролизат вводят калий фос-форнокислый од озам чцсиный, бромкрезо.човый пурпурный, фуксии кислый. Цвпт среды фиол(тово-нп1имевый. Пример 1 . fk:pyT 100 п обезжиренного молока с титруемой кислотностью не больик; 20 Т, подогревают до 45 С и устанавлинают рН 9,0. В 1 л подогретой смеси разводят 0,2 кг амилоризина актиипостыо 25 ед/г и переносят в общую массу. Смесь вторично псрсмсм;1 1вают, гидролиз зедут при 32 + 2 С.. .ят хлороформ в количестве 0,5 л. Ферментер герметически закрывают, через каждый час гидролизат п€рег-1ешивак)т. Внешним ггризнаком получения ГотоБого гидролизата и ляется отделение кремового 11лотн(пч) осадка и отстаннание светло-коричневой прозрачной Жидкости. В зто время следят за нарастанием аминного азота. При содержагши аминного азота 140 мг процесс прекращают автоклавиронанием при 121 С в течение 15 мин. Одновременно 1идролизат освобождают от белкового осадка. Прод(;лжите:1ьность гид эолиза 6-8 ч, конечный рИ 7,6. В 0,5 л осветленного гидролизата растворяют 0,5 кг цистина при рН 10,5 и переносят в остальной объем. 1 идролизат упаривают при , до содержания сухих вещест 50%.. Сгущенный гидролизат высуошвают распылительным способом до содержания сухих веществ 96%, Упаковка сухой питательной среды, предназначенной для приготовления 1 л рабочего субстрата, содержит, г сухой амилоризиновый гидролизат 30; крахмал водорастворимый 0,8; натрий уксуснокислый 5 калий фосфорнокислый однозамещенный 2,7; бромкрезоловый пурпурный 0,030; фуксин кислый 0,045. Сухая питательная среда содержит- аминного азота мг%. Среды упаковывают в пакеты из черной полимерной пленки и хранят в течение 18 мес при комнатной температуре и относительной влажности 75%. Для приготовления рабочего субстрата в производственных условиях содержимое упаковки переносят в колбу и доводят дистиллированной водой до 1 л. нагревают до растворения порошка, разливают в пропибрки с поплавками и стерилизуют при в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,2). Биологический контроль среды проводят в сравнении с известной средой. В качестве посевного материала используют штаммы споровых анаэробных микроорганизмов Cf.butyricum b- ; Clf. betyrium Cf. tyrobutyricum 1754, Ci/, tyrobuturicum 1755, молоко сырое, молоко, настоянное на сило се, образцы сыров. Термостатируют посевы при в течение 3 сут. Наличие спор учитывают по разрыву стол бика агара в пробирках с общепринятыми средами, образованию пузырьков газа в поплавках и изменению цвета среды, приготовленной по предлагаемому способу, до желто-розового. Результаты исследований при определении споровых анаэробных микроорганизмов на индикаторной среде можно получить через 48 ч, а на общепринятых питательных субстратах через 72 На индикаторной среде появление газа в пузырьках совпадает с изменением ее цвета. Исследуемая среда более чувствительная к небольшому обсеменению продукта споровыми анаэробными микроорганизмами и выявляет их количества на порядок выше, Пример 2. Отвешивают 30,0 сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета 0,5 г на 1 гидролизата), добавляют крахмал воде растворимый в количестве 0,8 г, натрий уксуснокислый 5,0 г, калий фосфо нокислый однозамещенный 2,7 г, а так же индикаторр :: бромкрезоловый пурпур ный 0,03 г и фуксин кислый 0,045, Су хие компоненты хорошо перемешивают, переносят в колбу и доводят дистилли рованной водой объем до 1 л. Содержа ние колбы нагревают до растворения порошка, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при в течение 15 мин (рИ рабочего субстрат 6,0). Пример 3. Отвешивают 32,5 г сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета 0,55 г на 1 л гидролизата), добавляют крахмал Вычисление титра споровых анаэро Споровые анаэробные микроорганиз водорастворимый в количестве 0,9 г, натрий уксуснокислый 5,26 г, калий фосфорнокислый однозамещенный 2,85 г, а также индикаторы: бромкрезолодый пурпурный 0,035 и фуксин кислый 0,0475 г. Сухие компоненты хорошо перемешивают, переносят в колбу и доводят дистиллированной водой объем до 1 л. Содержимое колбы Н1 1гревают до растворения порошка, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 121°С в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,1). Пример 4. Отвешивают 35 г сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета г на 1 л гидролизата), добавляют крахмал водорастворимый в количестве 1,0, натрий уксуснокислый 5,5 г, калий фосфорнокислый однозамещенный 3,0 г, а также индикаторы: бромкрезоловый пурпурный 0,04 г и фуксин кислый 0,05 г. Сухие компоненты хорошо перемешивают, переносят в колбу и доводят дистиллированной водой объем до 1 л. Содержимое колбы нагревают до растворения порошка, разливают в пропибрки с поплавками и стерилизуют при 121°С в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,2). Для определения наиболее вероятного количества клеток в единице объема, веса исследуемого образца используют таблицу Мак-Креди. Вычисление титра споровых анаэробных бактерий проводят по табл. 1. Результаты анализа приведены в табл, 2. Использование питательной среды позволяет ускорить рост микроорганизмов (с 72 до 48 ч), что, в свою очередь, ускоряет способ индикации анаэробов - вредителей молочного производства. Исключение из состава среды агар-агара и уменьшение расхода цистеина (последний заменен цистином) позволяет удешевить среду. Таблица 1 бактерий ---«- бнаруженные в объеме, мл

Продолжение табл. 1

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УЧЕТА СПОРОВЫХ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ВРЕДИТЕЛЕЙ МОЛОЧНОГО ПРОИЗВОДСТВА, содержащая ферментативный гидролизат обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цистеин и воду, отличающаяся тем, что, с целью ускорения роста микроорганизмов, она дополнительно содержит фосфорнокислый однозамещенный калий, бромкрезоловый пурпурный и фуксин кислый, а в качестве ферментативного гидролизата молока - . сухой1амилоризиновый гидролизат обезжиренного молока при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Сухой амилоризиновый гидролизат обезжирен30- ного молока Крахмал водораствори0,8-1,0 мый . .5,0-5,5 Уксуснокислый натрий . Фосфорнокислый одно2,7-3,0 замещенный калий Бромкрезоловый 0,03-0,04 пурпурный 0,045-0,050 Фуксин кислый 0,5-0,6 Цистин,. До 1 л Вода О ND 00 IS

Количество спор анаэробных микроорганизмов, выявленных на индикаторной и известной средах, вычисленный титр