ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЧУМНОГО МИКРОБА ВАКЦИННОГО АНТИБИОТИКО-РЕЗИСТЕНТНОГО ШТАММА EB Р2 Российский патент 2006 года по МПК C12N1/20 C12Q1/10 

Изобретение откосится к области микробиологии, а именно к разработке и созданию питательных сред для глубинного культивирования чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2.

Для глубинного культивирования чумного микроба используют жидкие питательные среды на основе ферментативного гидролизата мяса крупного рогатого скота (Регламент производства (РП) №1386-03 "Вакцина чумная живая сухая", утвержденный начальником НИИМ МО РФ 10.06.2003 г.), ферментативного гидролизата казеина (РП №1386-03 "Вакцина чумная живая сухая", утвержденный начальником НИИМ МО РФ 10.06.2003 г.), кислотного гидролизата казеина (РП №1386-03 "Вакцина чумная живая сухая", утвержденный начальником НИИМ МО РФ 10.06.2003 г.), дрожжевого экстракта (Шеремет О.В. и др. ЖМЭИ - 1987, №6, с. 18-21).

Жидкая питательная среда на основе ферментативного гидролизата мяса крупного рогатого скота - ФГМ КРС (г·л^-1):

перевар Хоттингера - 150,0;

NaCl - 5,0;

KCl - 0,2;

Na₂HPO₄ - 1,0;

содержание аминного азота в среде составляет 120...130 мг%;

концентрация водородных ионов - 7,15 ед. рН.

Жидкая питательная среда на основе ферментативного гидролизата казеина - ФГК (г·л^-1):

ФГК - 150,0;

KH₂PO₄ - 1,7;

К₂HPO₄ - 2,2;

MgSO₄ - 0,6;

Na₂S₂O₃ - 0,6;

содержание аминного азота в среде составляет 138 мг%;

концентрация водородных ионов - 7,2 ед. рН.

К недостаткам данных сред следует отнести низкий уровень результатов по накоплению биомассы чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2.

Кроме того, эти среды сложны в изготовлении и для их получения используют дефицитное и дорогостоящее сырье.

Известна также питательная среда для накопления биомассы чумного микроба при 26...28°С на основе дрожжевого экстракта. В состав этой среды входит питательная основа, гидролизат казеина или гидролизат мяса по Хоттингеру или гидролизат подсолнечного шрота, хлористый натрий и сульфит натрия в разных пропорциях.

К недостаткам данной питательной среды следует отнести: низкие ростовые свойства, обязательное приготовление двух питательных основ.

Наиболее близкой является питательная среда на основе кислотного гидролизата казеина (КГК), успешно применяемая для глубинного культивирования чумного микроба вакцинного штамма ЕВ в технологии приготовления вакцины чумной живой сухой.

Жидкая питательная среда на основе на основе кислотного гидролизата казеина КГК (г·л^-1):

КГК - 150,0;

КН₂PO₄ - 2,2;

К₂HPO₄ - 1,7;

MgSO₄ - 0,6;

Na₂S₂O₃ - 0,6;

содержание аминного азота в среде составляет 130...160 мг%;

концентрация водородных ионов - 7,15 ед. рН.

Общим с заявляемым решением является наличие в данных средах солей калия: калий фосфорно-кислый двузамещенный, калий фосфорно-кислый однозамещенный; магния сульфата, натрия хлорида.

Основным недостатком данной среды является низкий выход биомассы чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2.

Задача изобретения заключается в увеличении выхода биомассы чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2 при глубинном культивировании в жидкой питательной среде.

Поставленная цель достигается благодаря тому, что предлагаемая пропись питательной среды содержит принципиально новую питательную основу: ферментативный гидролизат белков обезжиренного коровьего молока (ФГБОКМ) с содержанием аминного азота 120 мг% при следующем соотношении компонентов, (г·л^-1):

ФГБОКМ - 0,3;

калий фосфорно-кислый однозамещенный - 1,4;

калий фосфорно-кислый двузамещенный - 2,7;

магния сульфат - 1,1;

натрия хлорид - 0,1;

дистиллированная вода - до 1 литра;

концентрация водородных ионов 7,0±0,2 ед. рН.

Увеличение выхода биомассы в 1,5 раза обусловлено наличием в питательной основе сбалансированного состава аминокислот, пептидов, углеводов и минеральных солей.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующим примером.

Приготовление жидкой питательной среды. В варочный котел с 65 литрами дистиллированной воды заливают 15 литров ферментативного гидролизата белков обезжиренного коровьего молока, нагревают его до кипения и отбирают пробу для контроля и корректировки величины аминного азота.

В бульон вводят соли из расчета: натрия хлорид - 0,1; магния сульфат - 1,1; калий фосфорно-кислый двузамещенный - 2,7; калий фосфорно-кислый однозамещенный - 1,4. Смесь перемешивают до полного растворения солей, кипятят 5...10 мин и отбирают пробу для контроля и корректировки величины рН. В случае необходимости величину рН корректируют растворами HCl и NaOH в пределах 7,0±0,2 ед. рН.

Горячую среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр и фасуют в 20 л бутыли по 10 л среды. Бутыли стерилизуют в автоклаве при температуре 120...125°С в течение 30...35 мин.

Таким образом, реализация изобретения позволяет увеличить выход биомассы чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2.

Таблица 1 - сравнительная характеристика выхода биомассы чумного микроба штамма ЕВ Р2 при глубинном культивировании в жидкой питательной среде на аппаратах объемом 0,007 м³ ( n=10)

Исследуемый штаммКонцентрация живых микробных клеток (x±I₉₅) при культивировании на среде...ФГМФГККГКФГБОКМY.pestis ЕВ Р28,0±0,47,8±0,28,25±0,112,2±0,2

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда содержит в качестве питательной основы ферментативный гидролизат белков обезжиренного коровьего молока (ФГБОКМ) с содержанием аминного азота 120 мг%, концентрацией водородных ионов 7,0±0,2 ед. рН, при следующем соотношении компонентов, (г-л^-1): ФГБОКМ - 0,3; калий фосфорно-кислый однозамещенный - 1,4; калий фосфорно-кислый двузамещенный - 2,7; магния сульфат - 1,1; натрия хлорид - 0,1; дистиллированная вода - до 1 литра. Изобретение обеспечивает увеличение выхода биомассы чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2 при глубинном культивировании в жидкой питательной среде за счет сбалансированного состава аминокислот, пептидов, углеводов и минеральных солей. 1 табл.

Питательная среда для глубинного культивирования чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма ЕВ Р2, содержащая питательную основу - ферментативный гидролизат белков обезжиренного молока казеина с содержанием аминного азота 120 мг%, концентрацией водородных ионов 6,8...7,2 ед. рН, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, магния сульфат, натрия хлорид, дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Ферментативный гидролизат белков обезжиренного молока казеина с содержанием аминного азота 120 мг%, концентрацией водородных ионов 6,8...7,2 ед.0,3Калий фосфорнокислый однозамещенный1,4Калий фосфорнокислый двузамещенный2,7Магния сульфат1,1Натрия хлорид0,1Дистиллированная водаОстальное