Среда для дифференциации энтеробактерий Советский патент 1983 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к микробиологическим исследованиям, основанным на применении питательных сред, включая методы контроля,

Известна среда Эндо-с-Агар, пред.назначенная для дифференциации энтеробактерий. Основными компонентами этой среды являются-пептон,, как источник азотистого питания, мясной экстракт/ дифференциругаций комплекс, лактоза-фуксин основной - сульфит натрия и соли (днузамещенный фосфорнокислый натрий и карбонат нат-. рия), обеСПечива кадие определенное згачение рН среды. Она используется для дифференциации эшерихии и других микроорганизмов кишечной группы. Дри этом ферментирующие лактоэу эщер хии образуют на средах темно-красные колонии с характериным металлическим блеском вследствии взаимодействия Образуючдихся в процессе ферментативной реакции альдегидов с фуксином в присутствии сульфита натрия fl .

Недостатком этой среды является наличие в составе дополнительных компонентов для обеспечения достаточной питательной ценности, например мясного экстракта, получаемого ИЗ ценного пищевого продукта.

Наиболее близкой к изобретению по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является среда для дифференциации энтеробактерий {агар Эндо), содержащая источник азотистого питания (пептон )и дрожжевой экстракт, дифференцирующий комплекс лактоза-фуксин OCHOBHOI : - сульфит натрия и соли для -обеспечения буферности среды двузамещенный фосфорнокислый натрий и карбонат натрия), хлорид натрия, агар и воду 2.

Однако пептон представляет собой ферментативный гидролизат кильки, который получают из ценного пищевого продукта, К тому же, он не обеспечивает достаточного азотистого и витаминного питания микроорганизмов, поскольку в состав среды вводится дополнительно дрожжевой экстракт, который содержит набор углеводородов, отрицательно влияющ1 х на проявление дифференциальных свойств среды

Цель изобретения - повышение чувствительности и снижение себестоимости вреды.

Поставленная цель достигается тем что среда для дифференциации энте{хзбактерий, содержащая источник азотистого питания и лактозу, фуксин ОСНОВНОЙ, сульфит натрия,двузамещенный фосфС)рнокислый натрий и карбонат натрия,-,, хлорид натрия,агар,воду дистиллированную, в качестве источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания содержит панкреатический гидролиэат смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока, взятых в соотношении 10:1, с содержани ем аминного азота 2600-2800 мг%, общего азота 57005970 мг% и лактозы 62-65% в сухом гидролизате идиаммонийфосфат при следугацем содержании ингредиентов, г/л диcтиJглиpoвaннoй воды:

Панкреатический

гш ролизат молоч-.

ной сыворотки и

обезжиренного

16,00-20,00

молока 2,30-2,50

Диаммонийфосфат 1,60-1,61

Сульфат натрия 0,30-0,33

Фуксин основной

Двузамещенный

фосфорнокислый

0,46-0,48

натрий 0,01-0.02

Карбонат натрия 3,40-3,60

Хлорил натрия . 9,40-9,60

Агар При данном составе среды питательную основу составляет панкреатически гидролизат молочной сыворотки и обезжиренного молока (ПГСМ-1), являющийся одновременно источником пептонов, витаминов и лактозы. Необходима питательная ценность среды обеспечивается опоелеленным соотношением молочной сыворотки и обезжиренного молока при составлении смеси перед гидролизом - 10:1. Содержание лактоз в ПГСМ-1 обеспечивается нгшичием сыворотки. В зависимости от исходного количества лактозы в сыворотке определяется доза ПГСМ-1 при введении его в среду. Содержание лактозы в сыворотке колеблется в пределах 4,25,6% и зависит от свойств сырья. Этим определена необходимость использования при составлении смеси 10 ч сыворотки. Увеличение содержания сыворотки в составе смеси приводит к снижению содесжания пептонов за счет vмeньшeния количества обезжиренного молока, что снижает ростовые свойства среды. Содержание сыворотки в смеси менее 10 ч создает дефицит углеводного состака и ухудшает дифференциальные свойства среды Колебания содержания лактозы в ПГСМ-1 определяют дозу его в cocTciве среды.

Панкреатический гидролизат получают путем ферментативного гидролиза смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока панкреатином в присутствии хлороформа. В процессе гидролиза происходит расщепление белка до легко усвояемых форм азотистого питания е ктерий. Это сопровождается накоплением аминного азота, которое достигает 2800 мг% в сухой основе. Аминокислотный состав гидролизата: треонин, серин, аспаогин поолин, аланин, валив, цистин и цистатнонин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, /3-аланин, у-аминомаслянная кислота, лизин, 1-метилгистидин, креатинин и глутаминовая кислота. Гидролизат содержит минеральные соли, летучие жирные кислоты (мура вьиную, уксусную, масляную, пропио новую ),. кальций, фосфор, магний и железо, витамины А, Е, В , 2 холив,.РР и С. Таким Образом, панкреатический Гидролизат представляет собой белк во-углеводный продукт, содержащий 2600-2800 мг% аминного азота и 5700-5970 мг% общего азота. Содерж ние сухих веществ 95-96% ; степень расщепления белка 0,467-0,469; содержание лактозы в сухом гидролизате 62-65%. Дополнительное введение в среду диаммонийфосфата обеспечивает яркое окрашивание ферментирующих лактозу колоний эшерихий и усиливае их металлический блеск, что являетс основным дифференциальным признаком среды данного назначения. Пример 1. К 100 г сухого п препарата ПГСМ-1, полученного из смеси сыворотки (с содержанием лактозы 4,2%)и обезжиренного молока в соотногоении 10:1, добавляют 65 г лактозы. Для обеспечения необходи мого количества лактозы в среде в состав вводится 20 г сухого ПГСМ3,4 г хлорида натрия; 0,3 г фуксина основного; 1,6 г сульфита натрия; 0,46 г двузамещенного фосфаТа натрия; 0,01 г карбоната натрия и 9,4 г агара. Данное соотношение компонентов рассчитано на приготовление 1 л среды. Пример 2. В 100 г сухого препарата ПГСМ-1, полученного из сме-си сыворотки (с-/ содержанием лактозы 5,6%) и обезжиренного молоки в соотношении 10:1, содержится 86 г лактозы. Для обеспечения необходимого количества лактозы в среде в состав вводится 16 г сухого ПГСМ-1; 2,5 Г диаммонийфосфата; 3,6 г хлорида натрия; 0,33 гфуксина основного; 0,48 г двузамещенного фосфата натрия; 0,02 г карбоната натрия и 9,6 г .агара. Полученный препарат по питательной ценности обеспечивает интенсивный рост энтеробактерий,. Содержание лактозы в составе ПГСМ-1 обеспечивает дифференциальные свойства среды на уровне агара Эндо, имеющего в составе кристаллическую лактозу в количестве 12,9-13,0 г. В результате сравнительных испытаний выявлено явное преимущество предлагаемой среды, что подтверждается данными, привеДекнЕзМИ в таблице.

7 10495418

Производство предлагаемой диф-ческой лактозы - дефицитного компоференциальной среды взамен извест-нента, используемого при производной позволяет высвободить и напра-стве продуктов детского питания и вить на производство пищевых про-лечебных препаратов, дуктов ежегодно 150 т кильки высоко-Экономический эффект от произго качества глубинного улова, а так-5 водства и использования предлагаеже 20 т высокоочииенной кристалли-мой среды составит 344 100 руб.

СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ, содержащая источник азотистого питания, лактозу, фукси-н основной, сульфит натрия, двузамещенный фосфорнокислый натрий, карбонат натрия, хлорид натрия, агар, воду дистилированную, отличающаяся тем, что, с целью повышения чувствительности среды и снижения ее себестоимости, в качестве источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания среда содержит панкреатический гидролизат смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока, взятых в соотношении 1:1, с содержанием аминного азота 2600-2800 мг%, общего азота 5700-5970 мг% и лактозы 62-65% в сухом гидролизате и.диаммонийфосфат при следующем соотношении ингредиантов, г/л дистиллированной воды: Панкреатический гидролизат молочной сыворотки и обезжиренного . 16,00-20,00 молока 2,30-2,50 ДиаммСНИй фосфат 1,60-1,61 Сульфит натрия 0,30-0,33 Фуксин основной Днузамещенный фосфорнокислый 0,46-0,48 натрий 0,01-0,02 Карбонат натрия 3,40-3,60 Хлорид натрия 9,40-9,60 Агар