Способ получения микрокапсулированной липазы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/18 C12N11/02 

Изобретение относится к биохимии а именно к способу получения микрокапсулированной липазы, которая можег найти применение в медицина при заместительной терапии болезней обусловленных дефицитом фермента. Поскольку липаза инактивируется при кислых значениях рН а действие фермента происходит в кишечнкг е где значение рН составляет 7-8 для медицинского применения необходимо иметь препараты липазы, микрокапсулированной в оболочке, которая предохраняла бы липазу от действия желудочного сока, но растворялась в кишечнике, Известен способ получения микрокапсулированной липазы, согласно кот рому путем высаживания полимера из раствора получают микрокапсулы с обо лочкой из этилцеллюлозы tl Однако такая оболочка не растворя ется ни в желудочном соке, ни з кишечнике, поэтому действие фермента может происходить очень мех:у1внно за счет диффузии, 1аиболее близким к предп:агаемог у по тех мческой сущности и достигаемому результату является способ получения микрокапсулированной липазы путем диспергирования ее порошка в растворе ацетилфталилцеллншозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученной эмульсии, гфи этом в качестве органического растворителя используют изопропанол, а в качестве дисперсионной среды - 30%-ный раствор хлорида кальция. Оболочка микрокапсул формируется испарением изопропанола при и пониженном давлении 2. Недостатком известного способа является невысокая стабильность фермента, который при инкубации в желудочном соке СрН 1,2) при 37С в течение 30 мин сохраняет 5-10% первоначальной активности. Цель изобретения повышение стабильности фермента. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения микро капсулированной липазы путем диспергирования ее порошка в растворе ацетилфталилцеллюлозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученной эмульсии 62 используют липазу, предварительно смешанную с водорастворимым высокомолекулярным наполнителем при соотношении 1:0,25-0,75 соответственно. При этом в качестве наполнителя используют желатин или эфиры целлюлс: Ыэ или крахмал, или поливиниловый спирт. Целесообразно с целью упрощения процесса в качестве органического растворителя использовать ацетон. В качестве дисперсионной средь обычно используют жидкий парафин. Способ осуществляют следующим образом. Порошок фермента в соотношении 1 .О ;,25-0,)75 смешивают с водораствори ь м наполнителем, в качестве которого использугот желатинg эфиры цел-люгюзы, крахмал, поливиниловый спирт, растворяют в небольшом количестве во,цы и высушивают. Полученную пластинку измельчают и диспергируют в растворе ацетилфталилцеллюлозы в шдетоне, К полученной суспензии приливают жидкий парафин и растворитель испаряют при комнатной температуре и нормальном давлении. Полученные микрокапсулы отделяют, промывают и сушат, В результате липаза полностью сохраняет свою активность. Обозгочка из ацетилфталилцеллюлозы устойчива к действию желудочного сока и растворима в кишечном соке. Использование для капсулирования смеси липазы с наполнителем приводит к тому, что наполнитель защищает липазу от инактивации в процессе получения микрокапсул, а также от действия кислой среды. При инкубации при 37°С в течение 30 мин липаза, микрокапсулированная с наполнителем, сохраняет 54-65% активности, в то время как липаза, микрокапсулирован,ная без наполнителя сохраняет , а нативнал липаза полностью теряет активность за 20. мин. ){ р и м е р 1 . Липазу и метилцеплкшозу в соотношении :0,25 растворяют в м-п-шмальном количестве дистиллированной воды и высушивают при , Полученную однородную смесь измельчают до частиц диаметром меньше 250 мкм, 2 г.этого порошка диспергируют в 15 мл 13,3%-ного раствора ацетилфталилцеллюлозы в ацетоне. К суспензии .приливают. 30 мл жидкого парафина и систему перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре до полного удаления ацетона и отверждения оболочек микрокапсул. Готовые микрокапсулы отфильтровывают от дисперсионной среды, пром 1вают гексаном и сушат при комнатной температуре в течение 6 ч. Липаза после капсулирования полностью сохраняет свою активность. При инкуба ции микрокапсулированной липазы в желудочном соке при «в течение 20 мин сохраняется 80% первоначальной активности, в течение 30 мин 65%, в то время как нативная липаза в этих условиях полностью теряет активность за 20 мин. Пример 2. Липазу и желатин в соотношении 1:0,5 растворяют в не большом количестве дистиллированной ВОДЬ и далее поступают, как описано в примере 1, Преп&рат сохраняет 98% активности после микрокапсулировани и 55% активности после инкубации в желудочном соке в течение 30 мин. Пример 3. Липазу и поливи.ниловый спирт в соотношении 1:0,75 растворяют в небольшом количестве да1стиллированной воды и далее посту пают, как описано в примере 1. Препарат сохраняет 98% активности посл микрокапсулирования и 65% активности после инкубации в желудочном соке в течение 30 мин. Пример ч. Липазу и раствсри(Ф1й крахмал в соотношении 1:0,25 растворяют в небольгаом количестве дистиллированной во/ты и поо.тупаьот, как описано Б примере . Препарат сохраняет полностью ферментат 1внук) активность после -1икрокапсу.чкрования и 60% активности после инкубации в лселуцочксм сс,ке в течение 30 мин. Пример 5, Липазу и натрийкарбоксиметилцеллюлозу в соотношении :0,4 растворяют в небольшом количестве дистиллировалио воды и далее поступают, как описано в примере 1 . Препарат после микрокаггсулирования сохраняет 99% активности и 57% активности после инкубации в желудочном соке в течение 30 sma. Пример 6 (контрольШ)й ), Микрокапсулирование проводят, используя липазу без наполнителя. 2,0 г липазы диспергируют в 15 мл 13,3%ного раствора ацетилфта-пилцеллюлозы в ацетоне и далее поступают, как описано в примере 1. Пос-пе капсулирования липа: а сохраняет 64,6% активности. После инкубации липаза сохраняет 64,6% активностис После инкубации мнкрокапсулироваьиюй липазы в желудоч}гом соке в течение 20 мин сохраняепся 10% активности, через 30 - 5%.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛИРОВАННОЙ ЛИПАЗЫ путем диспергирования ее порошка в растворе ацетилфтапилцеллюпозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученной эмульсии, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности фермента, используют липазу, предварительно смешанную с водораст воримым высокомолекл лярным наполнителем при соотношении 1:0,25 0,75 соответственно. 2.Способ по п, 1 , о т л и ч а ю щ и и с я тем, что в качестве наполнителя используют желатин или эфиры целлюлозы, или крахмал, или поливиниловый спирт. 3.Способ по п. 1, о т л и ч а rout и и с я тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве органического растворителя используют ацетон. 4.Способ по пп. 1 и 3, отли чающийся тем, что в качестве С дисперсионной среды используют жидкий п ар афин.