Средства для активации роста и повышения титра клубеньковых бактерий Советский патент 1987 года по МПК C12N1/06 

1 1

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для производства препаратов клубеньковых бактерий; используемых в растениеводстве.

Известноприменение дрожжевого автолизата или пекарских дрожжей в качестве средства для активации роста микроорганизмов, в частности, и медленнорастущих клубеньковых бактерий.

Однако в этом случае отмечается недостаточно интенсивный рост медленнорастущих клубеньковых бактерий например, Rhizohum japonicum 646 и Rhizobium japonicum М-3.

Целью изобретения является ускорение роста клубеньковых бактерий сои и повыпгение их титра в питательных средах.

Указанная цель достигается тем, что в качестве средства для активации роста и повьшения титра клубеньковых бактерий используют культуральную жидкость Actinomyces sporoverricosus 7-274.

Культуральную жидкость актиномицета перед внесением в питательные среды стерилизуют при кипячении 4060 мин или в автоклаве при 1 атм 1 ч.

Пример. Проводят выращивание Rhizobium japonicum 646 глубинным методом на среде, в состав ко торой входят, мае. %: Кукурузный

экстракт1,0

Глюкоз а0,5

Меласса0,5

(NHJ S040,05

К,,НР04-ЗН О0,025

,025

MgS047H400,02

Культуральная жидкость Actinomyces sporoverricosus 7-274 ,5 ВодаОстальное

В качестве контроля используют итательную среду с дрожжевым автоизатором, рН сред 6,4-6,5.

Питательную среду разливают по 00 мл в колбы емкостью 750 мл, стеилизуют в автоклаве при 1 атм. в теение 30 мин. Затем в колбы вносят успензию клеток Rhizobium japonicum 46. Выращивание проводят на качал232932

ках в течение 72 ч при температуре 27-28с.

В опытном варианте наблюдается активный рост клубеньковых бактерий. 5 Сроки культивирования сокращаются по сравнению с контролем до 48 ч при высоком выходе биомассы клеток 44,0-57,6 млрд/мл против 9,3 млрд/мл в контроле или в 4,7-6,3 раза вьше to (см. табл. 1).

Количество микробных клеток определяют методом учета колоний при, глубинном высеве на агаризованные t5 питательные среды в разведении 10 и выращивании в термостате при 27 28С.

Пример 2. Проводят выращивание клубеньковых бактерий Rhizobium 20 japonicum 646 и Rhizobium japonicum М-3 на агаризованных средах, для чего в чашки Петри вносят 1 мл суспензии клеток в разведении 10 и заливают теплой агаризованной средой, в состав которой входят, мас.%: Гороховый

отвар5,0

Глюкоза1,0

(NH4)jS040,1

30 К.,НРр4ЗН О0,05

КН2 Р040,05

MgS04-7H,jO0,02

Агар-агар1-,8-2,0

Культураль35 ная жидкость Actinomyces sporoverricosus 2741,5-2,5

Вода-. Остальное

40 Одновременно проводят выращивание клубеньковых бактерий на питательной среде с дрожжевым автолизатом, рН сред 6,4-6,5.

Посев проводят глубиннь1м способом 45 с последующим выращиванием культуры . в термостате при 27-28С.

Использование предлагаемого средства способствует обильному росту колоний, активизирует скорость накоп50 ления биомассы бактерий. Колонии

появляются уже на 3-4 день после по-, сева. Титр клеток штамма 646 в 4,87,2 раза, а штамма М-3 в 11,9-15,5 раза выше, чем на среде без культу55 ральной жидкости актиномицета (см. табл. 2).

На агаризованной среде вырастают компактные колонии клубеньковых бактерий с четкими очертаниями и значительно крупнее, чем в контрольной среде.

Пример 3. Выращивают штамм 646 и штамм М-3 на наполнителе-сор- бенте - гидролизном лигнине из подсолнечной лузги. 20 г наполнителя помещают в колбы Эрленмейера емкостью 100 мл, стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 1 ч трижды. В опытные образцы вносят культуральную жидкость актиномицета из расчета 1,5% к весу лигнина. Лигнин инокулйруют суспензиями клеток чистых культур клубеньковых бактерий в асептических уелоВИЯХ. Затем колбу слегка встряхивают для равномерного распределения микробных клеток в наполнителе. Подращивают клетки в препарате при комН атной температуре (18-20°С) в течение 15 дней. Рост Rhizobium japonicum 646 при глубинном

Прирост клеток клубеньковых бактерий в препарате определяют, как указано в примере 1.

В вариантах с использованием предпредлагаемого средства происходит более активное нарастание клеток бактерий (см. табл. 3).

Таким образом, предлагаемое средство обеспечивает ускорение роста и получение высоких титров клеток медленнорастущих клубеньковых бактерий при глубинном культивировании на вторые сутки (титр 44,0 57,6 млрд/мл)i на агаризованных ередах колонии появляются уже на третьичетвертые, сутки после высева. Количество их увеличивается по сравнению с контролем в 11,9-15,5 раза, в наполнителе-сорбенте через 15 дней .титр клеток,увеличился в 2,3-2,5 раза. Т а б л и ц а 1 культивировании

Применение культурапьной жидкости Actinomyces sporoverricosus в качестве средства для активации роста и повышения титра клубеньковых бактерий.

Контроль (питательная среда с дрожжевым автолизатом)

Питательная среда, содержащая культуральную жидкость Actinomyces sporoverricosus 7-274:

1,5%

2,5%

0,057

11,8

9,3

83,5

57,6 44,0 71,8