Способ получения гаммаглобулина Советский патент 1984 года по МПК C07K1/14 A61K35/14 C07K14/78 

Ю

эо

Ii3o6petBHHe относится к медицине а именно к методам профилактики гепатита- А.

Известен способ получения гаммаглобулина путем выделения его из крови человека lj .

Однако этот способ не позволяет получить достаточно специфический иммуноглобулин к вирусу гепатита А.

Целью изобретения является повьше ние специфической активности иммуноглобулина к вирусу гепатита А.

Указанная цель достигается тем, что в способе получения гамма-глобулина путем вьщеления его из крови человека, целевой продукт получают из сыворотки доноров, переболевших гепатитом А, не содержащий ИВ}--антиген, при этом забор крови осуществляют через 4-5 мес. после выздоровления.

Способ выполняется следующим образом.

Гамма-глобулиновая фракция выделяется методом Кона из крови специально отобранных доноров - лиц, переболевших гепатитом А (данное сырье ранее не использовалось) и не имеющих НВд гантигена по данным высокочувствительных методов (РИА, РОПГА).

Гипериммунный человеческий специфический иммуноглобулин с высоким титром антител против вируса гепатита А получен из венозной крови доноров, ранее переболевших этой инфекцией, но не.ранее, чем через 180-200 дней с момента клинического проявления болезни. Сыворотка была свободна от НВл-антигена. Уровень специфических антител против вируса гепатита А 1:1 500, определяемых: радиоиммунным методомПринципиальная схема получения препарата: подбор доноров переболев ших гепатитом А, и лабораторное обслдование их на наличие HBg-антигена (РОПГА, РИА); заготовка плазмы крови для получения препарата и его производство (метод Кона); контроль физико-химических свойств препарата и определение его специфической активности; определение реактогенности и безвредности препарата на добровольцах. Каждый донор, у которого прово дился забор крови для получения высокоиммунного препарата против вируса

гепатита А, поохопил тщательное клинико-лабораторное обследование для определения его состояния здоровья и установления пригодности его сыворотки для конструирования специфическог человеческого иммуноглобулина. Приче сыворотки крови не должны содержать HBg-антиген (маркер гепатита В), а наличие прямого билирубина должно быть нормальным.

Остальные биохимические показатели, при которых функция печени считается восстановленной, не должны превьш1ать верхней границы нормы: содержание сахара в крови не более 120 мг%, уровень общего билирубина 1,1 мг%, тимоловая проба - 2-3 ед, бета-липопротеидов - 10 ед, активность аланинтрансферазы - 0,7 мкмоль с учетом нормальных показателей -крови и мочи. Только такого донора сыворотка крови пригодна для получения иммуноглобулина против вируса гепатита А.

В полуфабрикате до розлива препарата проверяли: рН - потенциометрически, содержание белка - рефрактометрически. В готовом препарате определяли: физические свойства, стерильность, безвредность, пирогенность, наличие белка и HBg-антигена и специфическую активность,-которые проводили общепринятыми методами исследования (паспорт на препарат).

Пример 1. Специфический гамма-глобулин с высоким титром антител против вируса гепатита А был получе следующим образом: Больной С., 18 лет находился в инфекционном стационаре по поводу гепатита А. Диагноз бып поставлен на основании клинико-эпидемиологических и специфических лабораторных исследований. Через 5 мес после выписки из стационара у него была получена кровь в количестве 250 мл для конструирования специфического гамма-глобулина против гепатита А. Специально проведенные лабораторные исследования показали, что в исходном сырье (плазма крови) отсутствовал поверхностный антиген вируса гепатита В - НВ -антиген (РОПГА,РИА),а титр антител к вирусу гепатита А был. равен 1:1 600 (РИА) .

Из данной плазмы крови с помощью стандартного метода Кона при низких температурах была получена гамма- глобулиновая фракция (2 фракция)

311289134

в количестве 4,5. мл 10%-ного раство- Полученный гамма-глобулин, в опытах ра с титром антител против вируса на добровольцах показал себя как гепатита А 1:16 000 (РИА).ареактогенный и безвредный препарат.

Аналитический паспорт на гипериммунньА человеческий специальный иммуноглобулин против вируса renatHTa А:

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАММА-ГЛОБУЖНА путем выделения его из крови человека, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности иммуноглобулина, к вирусу гепатита А, целевой продукт получают из сыворотки доноров, переболевших гепатитом А, не содержащий НВз-антиген, при этом забор крови осуществляют через 4-5 мес после выздоровления. (П

Показатели

Физические свойства (прозначность, цвет)

Величина рН

Электрофоретическая чистота

Стерильность Пирогенность Стабильность Безвредность Токсичность

Количество .содержание белка

Титр специфических антител, против вируса гепатита А, определяе радиоиммунным методом

Наличие HBg-антигена

Таким образом, полученный вперные гипериммунньй человеческий специфический иммуноглобулин против вируса гепатита А согласно проведенным исследованиям отвечает требованиям МРТУ-42.

Убедившись в том, что полученный иммуноглобулин отвечает требованиям МРТУ-42 и свободен от НВ -антигена, изучили впервые его реактогенность и безвредность на добровольцах согласно приказу-МЗ СССР И 616 от 27 августа 1971 г. (20 человек).

Контролем служили 50 лиц, которым по единой методике бьш введен ком- . мерческий нормальный гамма-глобулин.

бесцветный

Не содержит

По возрасту и полу обе группы были идентичны (мужчины, 18-22 лет).

Техника введения гипериммунного человеческого иммуноглобулина и контрольного препарата была следующей.

Перед введением препарата каждую ампулу тщательно просматривали. При наличии , посторонних включений, неразбивающихся хлопьев, сильной мутности препарат не применялся. Препараты после хранения в холодиль нике в течение 120 мин выдерживались при комнатной температуре. Затем ампулы вскрывались, предварительно