Способ определения дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода Советский патент 1985 года по МПК G01N15/04 

Изобретение относится к исследованиям физико-химических свойств веществ, а именно к определению дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода, и может быть использовано во всех случаях, когда необходимо оценить дисперсность в эмульсиях с размером частиц менее 7 мкм.

Известен седиментационный способ определения дисперсного состава эмульсий Cl2.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ определения дисперсного состава ясировых эмульсий типа масло/вода, включающий помещение пробы в консервирующую среду и оптическое микроскопирование C2J.

Недостатком известного способа является узкий диапазон измерений дисперсного состава. Размер частиц таких жировых эмульсий типа масло/вода различен, но значительно более 1 мкм. Известный способ замедляет движение частиц в консерванте (глицерине) и образец можно фо.тографировать,что позволяет установить размер частиц с минимальным диаметром 1-2 мкм (нижний предел). Однако несмотря на то, что движение частиц эмульсии замедляется, такая фиксация не является жесткой и мелкие частицы продолжают двигаться. Кроме того, способ не обеспечивает никакого контрастирования бесцветных частиц эмульсии, в силу этого определение размеров мелких частиц затруднено. Используя этот способ, также невозможно создать в поле зре ния гикpocкoпa монослой частицэмульсий для изучения их дисперсног состава.

Цель изобретения - расширение / диапазона измерений дисперсного состава.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определен дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода, включающему по мещение пробы эмульсии в консервирзгющую среду и ее оптическое микроскопирование, в качестве консервирзпощей среды используют отмытые эритроциты человека, смешивают их с 20%-ной эмульсией в соотнрщении (3-4) :1, после чего смесь наносят на предметное стекло, окрашивают

Суданом черным Б и определяют дисперсный состав частиц эмульсии сопоставлением их размеров с известным размером эритроцитов.

Установление размеров частиц эмульсии проводят следующим образом

Эмульсию с. 20%-ной концентрацией масляной фазы, размер частиц которо необходимо установить, приливают к отмытым эритроцитам человека. Подготовка отмытых эритроцитов. Берут 2-3 мл консервированной донорской крови любой группы и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин. Плазму удаляют и полученные эритроциты трижды отмьгоают трехкратным объемом 0,9%-ного раствора хлористого натрия. Режим центрифугирования при отмывании также 1500 об/мин, продолжительность 15 мин. 0,35 мл плотного осадка отмытых эритроцитов разбавляют 0,15 м плазмы, полученной при первом центрифугировании крови, и затем добавляют 0,1 мл испытуемой эмульсии. Смесь взбалтьюают и из нее делают мазок на предметном стекле по общепринятой методике. Мазок фиксируют в парах формалина в течение 5 мин, окрашивают в течение 35-40 мин на липиды рабочим раствором судака черного Б. (приготовление рабочего раствора судана черного Б. Смешивают 60 мл 0,3%-ного спиртового раствора краски судана черного Б и 40 мл раствора, приготовленного .следующим образом: 16 г кристаллического фенола растворяют в 30 мл абсолютного спирта и смешивают со 100 мл 0,3%-ногр водного раствора двухзамещенного фосфорнокислого натрия). Мазок промывают в проточной воде в течение 3 мин и проводят докраску по Романовскому в течение .30 мин. (Эта операция не является обязательной. Азур - эозин окрашивает эритроциты в розовый цвет, делает мазок более контрастным,что облегчает его исследование и фотографирование) . Готовый мазок анализируют с помощью оптического микроскопа МБИ-3 под иммерсией с увеличением 1x675. Все частицы эмульсии окрашены в черный цвет и хорошо различимы на фоне бледно-розовых эритроцитов, которые в данном случае служат объектом сравнейия. Таким образом, сосчитав необходимое число частиц на фоне эритроцитов и определив их размер от 1осительно известного размера эритроцита (7 мкм), можно быстро, безСЛОЖНОГО оборудования и достаточно точно определить дисперсионный состав эмульсии. Соотношение

объемов отмытых эритроцитов и жировой эмульсии подобрано опытным путем.

Обоснование интервалов подобранных соотношений приведено в таблице .

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИСПЕРСНОГО СОСТАВА ЖИРОВЫХ ЭМУЛЬСИЙ ТИПА МАСЛО/ВОДА, включающий помещение пробы эмульсии в консервирующую среду и ее оптическое микроскопирование,о тличающийс я тем, что, с целью расширения диапазона измерений дисперсного состава, в качестве консервирующей среды используют отмытые эритроциты человека, смешивают их с 20%-ной эмульсией в соотношении

0,1

Частицы эмульсии полностью закрывают эритроцит, соприкасаясь друг с другом, образуют ложные агломераты

0,1

На некоторых мазках наблюдаются ложные агломераты частиц эмульсии 0,1

Эритроциты располагаются монослоем, не перекрьюают друг друга. Окрашенные частицы эмульсии отчетливо видны на фоне клеток

0,1 0,1 0,1

На некоторых мазках наблюдается перекрьшание границ клеток, что мешает оценке размера частиц

0,1

Эритроциты полностью заполняют поле зрения, перекрьтая друг друга, границы клеток расплывчатыТаким образом, из анализа табличных данных было выбрано оптимальное соотношение: 0,30-0,40 мл эритроцитов к О,1 мл эмульсии. Оптимальное количество жировой эмуль сии определяют из соображений расходования минимального количества образца эмульсии для приготовления мазка. Исходя из этого минимального (0,1 мл) количества эмуль сии, проводили дальнейший подбор соотношения объема эритроцитов к объему эмульсии. Причина выбора эритроцитов чело века в качестве фона, подложки и объекта сравнения вызвана тем, что это очень удобный природньв адсорАнализ невозможен

Анализ не всегда достоверен

Соотношение обеспечивает достижение цели

Анализ не достоверен

Анализ невозможенбент, -который имеет точно установленный размер частиц (диаметр эритроцитов человека 7 мкм) и поэтому может сл жить объектом сравнения, относительно которого расчитьшает- ся размео частиц эмульсииj эритроциты имеют средство к поверхностно активной оболочке эмульсии и поэтому фиксируют на себе ее частицы. Это дает возможность использовать эритроциты в качестве подложки,на которой окрашиваются частицы эмульсии, эритроцитная масса человека доступный для любого медицинского учреждения материал, тем более что для осуществления предлагаемого способа требуется минимальное ее количество. Предлагаемый способ необходим, например, в области медицины при изготовлении жировык эмульсий для внутривенного введения. Одним из важнейших критериев годности таких препаратов является размер частиц дисперсной фазы, который не должен превьшать 1 мкм. Предлагаемый метод позволяет контролировать качество жировых эмульсий при их изготовлеНИИ, в процессе хранения. Кроме тог расширяется диапазон возможностей оптического микроскопирования, так как частицы эмульсии фиксирзпотся, Контрастируются с помощью окрашивания и одновременно определяется их размер в сравнении с размером эритр цита. Использование -предлагаемого спо соба позволяет применять метод оптического микроскопирования для определения дисперсного состава мелкодисперсных жировых Эмульсий, что невозможно при использовании метода, указанного в прототипеj быстро определять дисперсный состав жировой эмульсии (в сравнении с методом электронного микроскопирования) без использования дорогостоящего оборудования; использовать предлагаемый метод в качестве экспресс-метода для определения дисперсности эмульсий в производстве, оценивать размер частиц, сразу, так как объект сравнения - эритроцит находится в одном поле с объектом изучения - частей эмульсии, получать документированный в виде мазка образец эмульсиии, не использую фотографирования .